本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及二巰丙醇的新用途，具體涉及二巰丙醇的藥物組合物及其在生物醫(yī)藥中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：二巰丙醇是一種競爭性解毒劑，臨床常用于重金屬中毒，與重金屬形成絡(luò)合物，進(jìn)而使重金屬排除體外。迄今為止，尚未見二巰丙醇及其藥物組合物與偏頭痛的相關(guān)性報道。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供一種二巰丙醇的藥物組合物，該藥物組合物中含有二巰丙醇和一種結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物，二巰丙醇和該天然產(chǎn)物可以協(xié)同治療偏頭痛。本發(fā)明的上述目的是通過下面的技術(shù)方案得以實現(xiàn)的：一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物(Ⅰ)，一種二巰丙醇的藥物組合物，包括二巰丙醇、如權(quán)利要求1所述的化合物(Ⅰ)和藥學(xué)上可以接受的載體，制備成需要的劑型。進(jìn)一步地，藥學(xué)上可以接受的載體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體或潤滑劑。進(jìn)一步地，所述劑型包括片劑、膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。上述化合物(Ⅰ)的制備方法，包含以下操作步驟：(a)將魚腥草粉碎，用60～70％乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b)步驟(a)中正丁醇萃取物用大孔樹脂除雜，先用10％乙醇洗脫12個柱體積，再用70％乙醇洗脫15個柱體積，收集70％洗脫液，減壓濃縮得70％乙醇洗脫濃縮物；(c)步驟(b)中70％乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為50:1、25:1、15:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個組分；(d)步驟(c)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為10:1、5:1和2:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；(e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為70％的甲醇水溶液等度洗脫，收集7～13個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到化合物(Ⅰ)。進(jìn)一步地，化合物(Ⅰ)的制備方法中，所述大孔樹脂為AB-8型大孔吸附樹脂。上述化合物(Ⅰ)在制備治療偏頭痛的藥物中的應(yīng)用。上述二巰丙醇的藥物組合物在制備治療偏頭痛的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的優(yōu)點：本發(fā)明提供的二巰丙醇的藥物組合物中含有二巰丙醇和一種結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物，二巰丙醇、化合物(Ⅰ)單獨作用時，對偏頭痛具有治療作用；二巰丙醇和化合物(Ⅰ)聯(lián)合作用時，對偏頭痛病的治療效果顯著提高，可以開發(fā)成治療偏頭痛的藥物。具體實施方式下面結(jié)合實施例進(jìn)一步說明本發(fā)明的實質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明保護范圍。實施例1：化合物(Ⅰ)分離制備及結(jié)構(gòu)確證試劑來源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷為分析純，購自上海凌峰化學(xué)試劑有限公司，甲醇，分析純，購自江蘇漢邦化學(xué)試劑有限公司。分離方法：(a)將魚腥草(2kg)粉碎，用65％乙醇熱回流提取(20L×3次)，合并提取液，濃縮至無醇味(4L)，依次用石油醚(4L×3次)、乙酸乙酯(4L×3次)和水飽和的正丁醇(4L×3次)萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b)步驟(a)中正丁醇萃取物用AB-8型大孔樹脂除雜，先用10％乙醇洗脫12個柱體積，再用70％乙醇洗脫15個柱體積，收集70％洗脫液，減壓濃縮得70％乙醇洗脫濃縮物；(c)步驟(b)中70％乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為50:1(8個柱體積)、25:1(8個柱體積)、15:1(8個柱體積)和5:1(10個柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個組分；(d)步驟(c)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為10:1(8個柱體積)、5:1(10個柱體積)和2:1(5個柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；(e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為70％的甲醇水溶液等度洗脫，收集7～13個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到化合物(Ⅰ)(HPLC歸一化純度大于98％)。結(jié)構(gòu)確證：白色無定型粉末，HR-ESI-MS顯示[M+H]+為m/z343.1451，結(jié)合核磁特征可得分子式為C20H22O5，不飽和度為10。核磁共振氫譜數(shù)據(jù)δH(ppm，pyridine-d5，500MHz)：H-1α(1.28，m)，H-1β(2.22，m)，H-2(1.11，m，2H)，H-3α(1.01，dd，J＝2.6，11.2Hz)，H-3β(1.76，dd，J＝2.6，11.2Hz)，H-5β(1.54，d，J＝7.7Hz)，H-6α(3.43，d，J＝7.7Hz)，H-9β(1.61，d，J＝3.9Hz)，H-11α(3.46，d，J＝11.8Hz)，H-11β(2.17，m)，H-13α(2.93，m)，H-14α(1.11，m)，H-14β(2.12，m)，H-17α(6.09，br，s)，H-17β(5.31，br，s)，H-18(1.47，s)，H-19(9.49，s)，H-20(4.57，m)，H-20(4.24，m)；核磁共振碳譜數(shù)據(jù)δC(ppm，pyridine-d5，125MHz)：32.8(CH2，1-C)，18.2(CH2，2-C)，36.1(CH2，3-C)，37.6(C，4-C)，66.1(CH，5-C)，69.8(CH，6-C)，94.1(C，7-C)，55.9(C，8-C)，29.2(CH，9-C)，30.5(C，10-C)，39.1(CH2，11-C)，213.3(C，12-C)，52.4(CH，13-C)，39.1(CH2，14-C)，212.5(C，15-C)，152.6(C，16-C)，117.3(CH2，17-C)，29.8(CH3，18-C)，208.9(CH，19-C)，68.4(CH2，20-C)。紅外光譜表明該化合物含有α,β-不飽和酮羰基結(jié)構(gòu)(1708cm-1和1641cm-1)，進(jìn)一步并通過分析核磁數(shù)據(jù)[δC212.5，152.6，117.3；δH6.09(br，s)，5.31(br，s)]可知存在五元環(huán)外亞甲基共軛羰基結(jié)構(gòu)。在氫譜中可以觀察到一個單峰甲基信號[δH1.47(3H，s，Me-18)]，一個醛基碳信號[δH9.49(1H，s，H-19)]，一個端烯烴質(zhì)子信號[δH6.09(1H，br，s，H-17α)與5.31(1H，br，s，H-17β)]，一個連氧亞甲基質(zhì)子信號[δH4.57(1H，m，H-20)與4.24(1H，m，H-20)]，以及一個連氧次甲基質(zhì)子信號[δH3.43(1H，d，J＝7.7Hz，H-6α)]；在碳譜中顯示該化合物有20個碳信號，包括一個甲基，七個亞甲基(一個連氧碳和一個烯烴碳)，五個次甲基(一個醛基和一個連氧碳)，以及七個季碳(兩個羰基，一個烯烴碳和一個連氧碳)。結(jié)合以上信息可以得出該化合物可能是一個二萜類化合物，通過文獻(xiàn)查閱可以發(fā)現(xiàn)該化合物和已知化合物ent-6α,7α,12β,14α-Tetrahydroxy-19-acetoxy-7β,20-epoxykaur-16-en-15-one具有相似的結(jié)構(gòu)。將二者核磁數(shù)據(jù)進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)該化合物仍然是ent-kauranoid型的化合物。通過對新化合物的氫譜以及碳譜進(jìn)行解析發(fā)現(xiàn)，該化合物與已知化合物的主要區(qū)別在C-12位附近，結(jié)合不飽和度以及碳譜數(shù)據(jù)，可以推斷出該化合物的C-12是一個羰基。在HMBC譜圖中，H-11/C-12，H-9/C-12以及H-13/C-12的相關(guān)性證實了C-12是一個羰基。解析至此，只解析出了10個不飽和度中的9個，因此推測在新化合物中還有一個環(huán)。在碳譜中，C-6以及C-7的化合物位移均發(fā)生較大的變化，H-5/C-6，H-5/C-7之間的相關(guān)性表明在C-6和C-7之間存在著一個三元氧環(huán)。此外，H-5/C-4，H-5/C-18以及H-18/C-5的相關(guān)性表明C-19位是一個醛基。最后，通過H-13/C-14，H-14/C-15之間的相關(guān)性確定C-14是一個亞甲基，結(jié)合該化合物的高分辨質(zhì)譜可以確認(rèn)新化合物在C-14位脫氧。ROESY譜中，H-19/H-20之間的相關(guān)性說明19-醛基為α構(gòu)型，H-6/H-19的相關(guān)性說明H-6也是α構(gòu)型，則C-6和C-7之間的環(huán)氧結(jié)構(gòu)為β構(gòu)型。綜合氫譜、碳譜、HMBC譜和ROESY譜，以及文獻(xiàn)關(guān)于相關(guān)類型核磁數(shù)據(jù)，可基本確定該化合物如下所示，立體構(gòu)型進(jìn)一步通過ECD試驗確定，理論值與實驗值基本一致。該化合物化學(xué)式及碳原子編號如下：實施例2：藥理作用本實施例使用硝酸甘油制備偏頭痛大鼠模型，觀察藥物升高5-羥色胺(5-HT)、降低降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)等方面的抗偏頭痛作用。1、材料與方法1.1動物SD大鼠，雌雄各半，180～220g，清潔級，購于四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物研究所。1.2試劑與樣品二巰丙醇購自中國藥品生物制品檢定所?；衔?Ⅰ)自制，制備方法見實施例1。琥珀酸舒馬普坦片(天津華津制藥廠)。硝酸甘油注射液(鄭州羚銳制藥有限公司)。大鼠降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)試劑盒(北京北免東雅生物技術(shù)研究所)；大鼠5-羥色胺(5-HT)試劑盒；大鼠5-羥基吲哚乙酸(5-HIAA)試劑盒；考馬斯亮藍(lán)試劑盒。1.3儀器電子分析天平(BP211D，賽多利斯)；酶標(biāo)定量測定儀(VarioskanTM，ThermoFisher公司)；高速冷凍離心機(LegendRT+230V，美國ThermoFisher公司)；低溫冰箱；組織勻漿機。1.4大鼠分組及模型制備大鼠隨機分為6組，每組12只，分別為正常對照組、模型對照組、陽性對照組(琥珀酸舒馬普坦組，50mg·kg-1)和二巰丙醇組(80mg·kg-1)、化合物(Ⅰ)組(80mg·kg-1)、二巰丙醇與化合物(Ⅰ)組合物組【40mg·kg-1二巰丙醇+40mg·kg-1化合物(Ⅰ)】。實驗開始前適應(yīng)環(huán)境3d。于造模前預(yù)防ig給藥3d，每天1次，正常對照組與模型對照組大鼠灌胃純化水。造模方法：硝酸甘油ip1次造成大鼠偏頭痛模型，大鼠每天ig給藥1次，連續(xù)3d。于末次給藥后，各組大鼠sc硝酸甘油注射劑(正常對照組注射生理鹽水)10mg·kg-1造模1次，sc定位于額區(qū)、顳區(qū)或右肩部皮下。造模后3min左右，動物出現(xiàn)雙耳發(fā)紅、前肢頻繁撓頭、爬籠次數(shù)增多、煩躁不安等現(xiàn)象。此現(xiàn)象持續(xù)約3h，繼而出現(xiàn)蜷臥，活動減少狀態(tài)，表明偏頭痛動物模型復(fù)制成功。1.55-HT含量測定實驗大鼠造模4h后，10％的水合氯醛(3mL·kg-1)ip麻醉，斷頭取出腦組織，操作時在冰臺上完成，快速取出全腦組織(剔除小腦)，用冰冷的生理鹽水沖洗，除去血跡，濾紙拭干，切取含中縫核、藍(lán)斑的腦干及下丘腦部分，立即投入液氮中固化，備用；測定時用組織勻漿機制備腦組織勻漿液，熒光法測定腦組織中5-HT。1.6CGRP含量測定實驗大鼠造模4h后，10％的水合氯醛(3mL·kg-1)ip麻醉，斷頭取出腦組織，操作時在冰臺上完成，快速取出全腦組織(剔除小腦)，用冰冷的生理鹽水沖洗，除去血跡，濾紙拭干，切取含中縫核、藍(lán)斑的腦干及下丘腦部分，立即投入液氮中固化，備用；測定時用組織勻漿機制備腦組織勻漿液，熒光法測定腦組織中CGRP。1.7統(tǒng)計學(xué)方法實驗數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，應(yīng)用SPSS18.0版統(tǒng)計軟件進(jìn)行單因素方差分析和t檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。2、實驗結(jié)果2.1對偏頭痛模型大鼠腦組織中5-HT含量的影響與正常對照組比，模型對照組大鼠腦組織5-HT含量明顯降低(P＜0.01)；與模型對照組比，二巰丙醇與化合物(Ⅰ)組合物組和陽性對照組腦組織5-HT含量顯著升高(P＜0.01)；與模型對照組比，二巰丙醇組、化合物(Ⅰ)組腦組織5-HT含量升高(P＜0.05)。見表1。2.2對偏頭痛模型大鼠腦組織中CGRP含量的影響與正常對照組比較，模型對照組大鼠腦組織中CGRP含量明顯升高(P＜0.01)。與模型對照組比較，二巰丙醇與化合物(Ⅰ)組合物組和陽性對照組大鼠腦組織中CGRP含量顯著降低(P＜0.01)；與模型對照組比較，二巰丙醇組、化合物(Ⅰ)組腦組織中CGRP含量降低(P＜0.05)。結(jié)果見表1。表1對偏頭痛模型大鼠腦組織中5-HT及CGRP含量的影響組別5-HT/ng·g-1CGRP/pg·g-1正常對照組973.05±67.2467.46±67.4模型對照組720.43±92.1618.33±79.3陽性對照組1328.32±41.2243.62±30.7二巰丙醇組809.26±89.6553.25±69.6化合物(Ⅰ)組819.14±61.5540.04±66.9二巰丙醇與化合物(Ⅰ)組合物組1194.11±33.1483.23±16.2偏頭痛發(fā)病機制復(fù)雜，尚無定論。血管源學(xué)說認(rèn)為5-HT在偏頭痛的發(fā)生中起著重要的作用。三叉神經(jīng)-血管源學(xué)說認(rèn)為，在偏頭痛發(fā)作過程中CGRP和SP是關(guān)鍵性物質(zhì)，中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能紊亂引起CGRP含量升高，進(jìn)而引起三叉神經(jīng)感覺C纖維釋放CGRP，導(dǎo)致神經(jīng)源性炎癥。神經(jīng)源性炎癥期間釋放的神經(jīng)生長因子NGF可激活由絲裂素激活的蛋白激酶(MAPK)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)級聯(lián)途徑，引起偏頭痛發(fā)作。結(jié)果表明，二巰丙醇、化合物(Ⅰ)單獨作用時，對偏頭痛具有治療作用；二巰丙醇和化合物(Ⅰ)聯(lián)合作用時，對偏頭痛病的治療效果顯著提高，可以開發(fā)成治療偏頭痛的藥物。上述實施例的作用在于說明本發(fā)明的實質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明的保護范圍。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實質(zhì)和保護范圍。當(dāng)前第1頁1 2 3