本發(fā)明屬于植物天然產(chǎn)物提取領(lǐng)域，具體涉及制備東革阿里植物有效成分及組合應(yīng)用的方法。
背景介紹
東革阿里(eurycomalongifolia)為苦木科東革阿里屬植物，野生灌木，生長(zhǎng)于赤道附近原始熱帶雨林潮濕砂質(zhì)土壤中，在馬來(lái)西亞、印度尼西亞、越南等東南亞國(guó)家分布較廣?，F(xiàn)代研究表明，東革阿里具有很高的藥用價(jià)值。東革阿里植物根據(jù)各種不同處理方式獲得的組分分別具有抗癌活性，抗瘧活性，改善性功能等作用。除此之外，其在降血糖、抗菌、治療痛風(fēng)、骨質(zhì)疏松等方面也有一定的效果。從東革阿里不同部位中分離出來(lái)的化學(xué)成分以含苦木素骨架的二萜類與鐵屎米酮類生物堿為主，如eurycomaoside，eurycolactone，eurycomalactone，eurycomanone(寬纓酮)和pasakbumin-b。此外，還含有聯(lián)苯木質(zhì)素、角鯊烯衍生物、活性多糖、糖肽和多種氨基酸。目前，經(jīng)過(guò)我們的研究發(fā)現(xiàn)，印尼引進(jìn)的東革阿里采用本方法提取獲得的有效成分組合具有增強(qiáng)性功能、提高生育率、提神抗疲勞、增強(qiáng)免疫力、增加體能、緩解痛風(fēng)的作用。
東革阿里植物直接作為飲片使用的情況較為普遍，但是東革阿里沖泡存在口感苦澀、藥效作用低和藥物利用率低等方面的問(wèn)題。因此，研究東革阿里有效成分含量高，制備工藝可靠、藥用效果明確、口感良好的產(chǎn)品就變得十分重要。研究資料顯示，東革阿里提取主要采用溶劑回流提取或高溫水提取過(guò)程，如專利cn104757424a采用煎煮法提??；專利us20070224300a1采用沸水提??；“東革阿里對(duì)運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練大鼠睪酮含量、物質(zhì)代謝及抗運(yùn)動(dòng)疲勞能力的影響”文章采用沸水制備；“東革阿里化學(xué)成分的分離與鑒定”文章采用水回流提取。專利cn103408564a將東革阿里以有機(jī)溶劑提??；“東革阿里提取物抗疲勞作用的實(shí)驗(yàn)研究”文章使用醇提取工藝。以上兩種方式雖然提取產(chǎn)物量相對(duì)較多，但是沸水提取和有機(jī)溶劑提取方式會(huì)使植物當(dāng)中的多種活性成分分解或變性，降低了藥物作用效果，同時(shí)能源消耗多，環(huán)保難度高，溶劑成本大，提取過(guò)程危害性強(qiáng)。
多方面的研究結(jié)果表明，東革阿里植物確實(shí)具有明顯的增強(qiáng)性功能、提高生育率、提神抗疲勞、增強(qiáng)免疫力、增強(qiáng)體能、緩解痛風(fēng)的作用，以各種不同方式獲得的提取物普遍具有一定的增強(qiáng)活力效果，但其中的化學(xué)單一組分始終沒(méi)有完全確認(rèn)。綜合多方面的文章報(bào)道和自身研究數(shù)據(jù)，我們發(fā)現(xiàn)以寬纓酮為代表的苦木素類物質(zhì)和以活性多糖、糖肽和氨基酸類為 主的水溶性生物活性成分是其中的主要有效成分。我們根據(jù)研究和實(shí)踐證實(shí)，這兩部分有效成分共同使用具有一定的協(xié)同增效作用。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明提供具有增強(qiáng)性功能、提高生育率、提神抗疲勞、增強(qiáng)免疫力、增加體能、緩解痛風(fēng)的東革阿里有效成分組合制備方法。本方法不僅使用超聲水溶液提取有效成分而且選用大孔樹(shù)脂進(jìn)行吸附分離和膜分離，保留了東革阿里植物中有效成分的生物活性并選擇性地將其富集。
本發(fā)明提及的東革阿里有效成分其制備方法如下：
具有增強(qiáng)性功能、提高生育率、提神抗疲勞、增強(qiáng)免疫力、增強(qiáng)體能、緩解痛風(fēng)的東革阿里有效成分組合制備方法，將東革阿里粉碎后與水溶液混合，經(jīng)過(guò)連續(xù)逆流超聲水提取處理，獲得東革阿里水提取液；
a.水提取液過(guò)濾離心去除沉淀后直接經(jīng)過(guò)大孔樹(shù)脂吸附，吸附后樹(shù)脂柱經(jīng)洗脫液洗脫并收集目標(biāo)組分，乙醇沉淀去除雜質(zhì)，濃縮干燥，獲得東革阿里有效成分組a；
b.水提取液經(jīng)大孔樹(shù)脂吸附后的流出液，采用濾膜分級(jí)分離，收集目標(biāo)組分，減壓濃縮、冷凍干燥或噴霧干燥，獲得東革阿里有效成分組b；
c.按照一定比例，混合東革阿里有效成分組a和b，制成東革阿里有效成分組合。
具體為東革阿里與水溶液的質(zhì)量體積比為1∶1～30，混合物連續(xù)超聲提取5min～5h，超聲提取溫度為10～70℃。東革阿里超聲水提取液過(guò)濾離心后，上清液用大孔樹(shù)脂富集，樹(shù)脂類型優(yōu)選hp-20、d101、dm130、ab-8。吸附后大孔樹(shù)脂柱采用乙醇、乙酸乙酯、水中的一種或幾種溶劑混合梯度洗脫。收集含有苦木素類目標(biāo)成分(寬纓酮)的洗脫液，減壓濃縮，無(wú)水乙醇沉淀2次去除雜質(zhì)，最終制得東革阿里有效成分組a。大孔樹(shù)脂吸附后的流出液經(jīng)，采用膜過(guò)濾方法，分離東革阿里水溶活性多糖、糖肽和氨基酸等組分，噴霧或冷凍干燥，獲得東革阿里有效成分組b。東革阿里有效成分組a與東革阿里有效成分組b按照比例混合，形成東革阿里有效成分組合。本方法制得的東革阿里有效成分組合中多種成分共存，特征物質(zhì)苦木素類成分含量在1～50％，多種活性多糖、糖肽、氨基酸等營(yíng)養(yǎng)成分含量在1～20％。本發(fā)明制備的東革阿里有效成分組合具有增強(qiáng)性功能、提高生育率、提神抗疲勞、增強(qiáng)免疫力、增強(qiáng)體能、緩解痛風(fēng)的作用。
采用本發(fā)明新的工藝技術(shù)首先控制提取溫度在10～70℃之間，輔助超聲提取方法，能夠保留兩類物質(zhì)組分的活性。制備的東革阿里有效成分組合工藝流程簡(jiǎn)便、生產(chǎn)過(guò)程安全、環(huán)保，有效成分提取率、產(chǎn)率均高，適合大規(guī)模生產(chǎn)。其次提出將東革阿里不同部位有效成分 混合使用的方法制備東革阿里有效成分組合，增強(qiáng)整體的藥物作用效果。生產(chǎn)的東革阿里有效成分組合經(jīng)過(guò)多方面實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，具有增強(qiáng)性功能、提高生育率、提神抗疲勞、增強(qiáng)免疫力、增強(qiáng)體能、緩解痛風(fēng)的作用，可以應(yīng)用于男性非器質(zhì)性性功能下降、精神壓力大、容易疲勞等人群以及更年期綜合癥的老年人。
具體實(shí)施方式
在下面的具體實(shí)施方案中進(jìn)一步說(shuō)明了本發(fā)明，這并不限制本發(fā)明的范圍。在不脫離本發(fā)明上述技術(shù)思想情況下，根據(jù)本領(lǐng)域普通技術(shù)知識(shí)和慣用手段，做出各種替換和變更，均應(yīng)包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
1.制備方法
取東革阿里根100.0克粉碎，加入蒸餾水2l浸泡，水溫控制在50℃。利用超聲提取設(shè)備，將粉碎的東革阿里與水混合并進(jìn)行連續(xù)超聲提取2小時(shí)，再經(jīng)過(guò)過(guò)濾、離心，獲得東革阿里水提取液。東革阿里的水提取液直接使用d101樹(shù)脂循環(huán)吸附至飽和，用乙醇水溶液對(duì)吸附柱進(jìn)行洗脫，收集苦木素類目標(biāo)成分，獲得乙醇水洗脫液，減壓濃縮，獲得東革阿里粗品4.4克。東革阿里粗品用無(wú)水乙醇溶解，抽濾去除產(chǎn)生的沉淀，得到東革阿里有效成分乙醇溶液，減壓濃縮，進(jìn)一步獲得東革阿里有效成分組a。大孔樹(shù)脂吸附后流出液體采用膜設(shè)備過(guò)濾，經(jīng)過(guò)微濾膜、超濾膜、納濾膜等分離，收集納濾膜和超濾膜截留成分，分離其中的活性多糖、糖肽和氨基酸，最終獲得1.2g東革阿里有效成分組b。按照2∶1的比例混合東革阿里有效成分組a和b，制備成東革阿里有效成分組合。
2.小鼠急性毒性實(shí)驗(yàn)
將東革阿里有效成分組合按照腹腔注射給藥方式給予icr小鼠，實(shí)驗(yàn)獲得近似致死劑量、最大無(wú)毒性劑量。雄性小鼠近似致死劑量范圍為100.0-120.0mg/kg，最大無(wú)毒性劑量為80mg/kg；雌性小鼠近似致死劑量范圍為180.0-225.0mg/kg，最大無(wú)毒性劑量為80mg/kg。對(duì)死亡動(dòng)物進(jìn)行解剖，肉眼觀察主要內(nèi)臟器官未見(jiàn)異常病理變化。
將東革阿里有效成分組合按照灌胃給藥方式給予icr小鼠，結(jié)果表明給藥500mg/kg，小鼠未發(fā)現(xiàn)毒性表現(xiàn)。