本發(fā)明屬于獸用藥品，更具體的說是一種增強(qiáng)仔豬免疫力、調(diào)節(jié)仔豬體內(nèi)有益菌生長、促進(jìn)仔豬生長發(fā)育的一種益生菌-多糖復(fù)合制劑及其制備方法。

背景技術(shù)：

益生菌與中藥分別單獨(dú)作為綠色飼料添加劑已在我國廣泛使用。益生菌不僅具有調(diào)節(jié)動(dòng)物自身微生態(tài)平衡，增加體內(nèi)有益菌群數(shù)量，抑制或殺滅有害菌，增強(qiáng)機(jī)體免疫力，保護(hù)生態(tài)環(huán)境等作用，而且還具有促進(jìn)動(dòng)物消化，提高生產(chǎn)性能，增強(qiáng)機(jī)體免疫和抗病力，改善環(huán)境污染等作用。中藥含有多種營養(yǎng)成分和生物活性物質(zhì)，不僅能夠增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能，提高營養(yǎng)物質(zhì)的消化利用率，而且具有抗菌、抗病毒、副作用小和無殘留等特點(diǎn)。但在臨床實(shí)踐中，益生菌由于對不良環(huán)境抗性差、在腸道中定殖困難，以及產(chǎn)品中活菌含量偏低等因素而影響了產(chǎn)品的效果；中藥則由于藥效發(fā)揮緩慢、某些有效成分不易被吸收、可能會抑制有益菌生長等問題而限制了其在實(shí)踐中的推廣。

研究表明：益生菌和中藥之間存在一定的協(xié)同作用，一方面益生菌可促進(jìn)中草藥的吸收和利用，許多中草藥本身并不是有效的藥物，而是作為藥物的前體，經(jīng)口服后，吸收前與消化道內(nèi)消化酶接觸，然后經(jīng)消化道下部的微生物菌群加工、改造之后才能被腸道選擇性吸收；另一方面中藥化學(xué)成分復(fù)雜，其中含有的生物堿、甙類、揮發(fā)油和鞣質(zhì)等具有治療作用，能為益生菌的增殖掃除障礙；油脂、樹脂、糖類、蛋白質(zhì)和色素等主要起營養(yǎng)作用，有的甚至本身就是益生菌細(xì)胞的組成成分，可以促進(jìn)益生菌增殖。

李冰、王林雨等人研究表明：黃芪作為免疫增強(qiáng)劑和抗病毒藥，在畜牧業(yè)臨床具有良好的使用效果。劉陽、李樹棚等人研究證明了中藥黃芪有效成分對益生菌具有促生作用，黃芪多糖益生菌合生元能夠明顯增強(qiáng)雛雞免疫功能。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明將復(fù)合益生菌(豬源乳桿菌微膠囊，枯草芽孢桿菌菌粉和酵母菌粉)與以植物多糖為代表的黃芪多糖和以真菌多糖為代表的香菇多糖按一定比例混 合復(fù)配，提取純天然、無藥殘、無污染、無耐藥性、無毒副作用的綠色獸用藥品-益生菌多糖復(fù)合生物制劑。

本發(fā)明的主要原理和技術(shù)方案：一種益生菌多糖復(fù)合制劑制備方法，在現(xiàn)代分子免疫學(xué)和中醫(yī)學(xué)相結(jié)合的基礎(chǔ)上，采用現(xiàn)代生物技術(shù)，制備益生菌制劑，后與黃芪多糖、香菇多糖按一定比例混合制取。制備方法包括以下步驟：

(1)復(fù)合益生菌制備。

①制備豬源乳酸桿菌膠囊。

將培養(yǎng)20h的豬源乳桿菌液在4000r/min離心20min后取菌泥；以海藻酸鈉為包被壁材，以氯化鈣為固化液，兩者分別在121℃滅菌20min；將冷卻好壁材溶液與菌液在雙向恒溫磁力攪拌器上混合30分鐘均勻后，用注射器注入氯化鈣溶液，經(jīng)350r/min低速離心10min收集微膠囊顆粒，洗滌3次后取出少量樣品測定包埋效率和包埋產(chǎn)率；其余產(chǎn)品置于-20℃預(yù)凍2h，然后進(jìn)行冷凍干燥處理。

包埋效率/％＝(1-微膠囊表面活菌數(shù)/產(chǎn)品中活菌數(shù))×100％

微膠囊表面活菌數(shù)測定：直接用生理鹽水洗滌微膠囊表層菌體，進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)。

產(chǎn)品中活菌數(shù)的測定：將產(chǎn)品溶于0.1mol/l磷酸鹽緩沖液(ph＝7.0)的破壁材料中，待完全溶解后進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)。

包埋產(chǎn)率/％＝產(chǎn)品中活菌數(shù)/加入的活菌數(shù)×100％。

②枯草芽孢桿菌與蠟樣芽孢桿桿菌菌粉的制備

將培養(yǎng)18h的枯草芽孢桿菌種子液、蠟樣芽孢桿菌種子液分別以4％(體積分?jǐn)?shù))接種于40l液體發(fā)酵培養(yǎng)基，于50l發(fā)酵罐中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為：加入1.5％(體積分?jǐn)?shù))消泡劑，轉(zhuǎn)速為350r/min，通氣量為10l/min，初始ph7.0，溫度35℃；每隔2h取樣1次，測定樣品中的產(chǎn)芽孢率，當(dāng)產(chǎn)芽孢率達(dá)到90％以上時(shí)即可停止發(fā)酵；將獲得的發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行噴霧干燥，噴霧干燥器的進(jìn)口溫度設(shè)置為146℃，出口溫度設(shè)置為110℃；噴霧干燥結(jié)束后測量產(chǎn)品質(zhì)量，并利用稀釋平板法測定單位質(zhì)量產(chǎn)品中的活菌數(shù)(cfu/g)。

③復(fù)合益生菌產(chǎn)品的復(fù)配

將乳酸桿菌微膠囊、枯草芽孢桿菌菌粉和蠟樣芽孢桿菌菌粉按照質(zhì)量比3∶1∶1比例與適量碳酸鈣進(jìn)行混合，保證產(chǎn)品中的總細(xì)菌數(shù)約等于6×10¹⁰cfu/g。

(2)復(fù)合多糖制備

①黃芪多糖的提取。將黃芪根利用超微粉碎機(jī)粉碎，過300目篩絹網(wǎng)制備成黃芪粉，加入5-8倍的蒸餾水中，在80℃-90℃溫度下浸取1-3h，過濾得浸取液，浸取液放置室溫后，在適當(dāng)?shù)乃俣葦嚢柘?，浸?倍體積的95％酒精中，黃芪多糖沉淀出來，用95％酒精洗滌，干燥，得出黃芪多糖粗品。

②香菇多糖提取。將香菇粉碎后根據(jù)①的步驟進(jìn)行提取、純化。

③復(fù)合多糖產(chǎn)品配制。將黃芪多糖和香菇多糖根按照質(zhì)量比1∶1比例混合。

(3)益生菌多糖復(fù)合制劑配制

將復(fù)合益生菌產(chǎn)品與復(fù)合多糖按照質(zhì)量比3∶1比例混合，得到益生菌-多糖復(fù)合制劑。

本發(fā)明中對乳酸桿菌膠囊化鑒于乳酸菌多為厭氧菌或者兼性厭氧菌，在生長過程中，不形成芽孢，抗性較差，多數(shù)耐酸性差，對乳酸桿菌進(jìn)行微膠囊化包被后，可提高乳酸桿菌的抗逆性。

本發(fā)明的復(fù)合制劑使用方法：在預(yù)防方面，可在新生仔豬出生后的24小時(shí)內(nèi)，初乳前灌服本品1.0-1.5克，對于弱、體重較輕、明顯病態(tài)的仔豬可以灌服1.5-2.5克/頭，可以提高仔豬母源抗體水平、健康水平和仔豬的消化能力；在仔豬預(yù)混料中添加本制劑0.3-0.4％，可以明顯提高仔豬免疫力，促進(jìn)仔豬生長，降低料肉比，減少各類疾病的發(fā)生；在仔豬免疫口蹄疫、豬瘟、高致病性豬藍(lán)耳病等疫病前3-5天口服本品2.5-3克/頭，連用3天，可以明顯提高仔豬免疫抗體水平；治療仔豬發(fā)生腸道腹瀉，可在1-2周齡內(nèi)內(nèi)服2-2.5克/頭·次，3-4周齡2.5-4.5克/頭·次，5周齡以上仔豬5-8克/頭·次，每日均3次，可以混合料中飼喂，也可溶于涼開水中灌服，根據(jù)獸醫(yī)要求增減藥量。本品稀釋后應(yīng)盡快服用，不可高溫加熱使用，密閉、陰涼處保存，保存期12-18個(gè)月。

經(jīng)使用本發(fā)明復(fù)合制劑大量實(shí)踐證明，仔豬初乳前使用本制劑，可使1-2周齡幼畜成活率提高到96％以上；本品作為仔豬預(yù)混料添加劑可使幼畜哺乳期 縮短至25-28天，使斷奶仔豬體重增加15-25％，斷奶仔豬成活率提高到90％以上；仔豬免疫前使用本制劑，免疫后30天，檢測口蹄疫、豬瘟、高致病性豬藍(lán)耳病平均抗體水平，其合格率提高15％-20％。本制劑對仔豬腸道腹瀉的治愈率可達(dá)到85％以上。另外，懷孕母豬使用本制劑可明顯提高仔豬的母源抗體水平和健康水平。

本發(fā)明的主要優(yōu)點(diǎn)和效果：

1、本發(fā)明的復(fù)合制劑可直接供仔豬服用，益生菌制劑以及多糖制劑都經(jīng)過提取純化后純度非常高，便于精確的計(jì)算仔豬使用量；益生菌制劑可以增加體內(nèi)有益菌數(shù)量，抑制或者殺滅有害菌，促進(jìn)動(dòng)物消化提高生產(chǎn)性能，增強(qiáng)機(jī)體免疫力，克服了傳統(tǒng)抗生素以及化學(xué)合成藥抗微生物藥的耐藥性；多糖的抗病毒作用，可以抵抗各類病毒對動(dòng)物機(jī)體的侵襲，避免了抗病毒化學(xué)藥品等違禁約品在畜牧業(yè)生產(chǎn)中的使用，

2、本發(fā)明通過大量臨床試驗(yàn)，篩選研究了益生菌制劑、多糖制劑的有效組分及最佳組方，將中草藥防治、微生態(tài)防治與增強(qiáng)仔豬機(jī)體免疫力有機(jī)結(jié)合在一起，首先益生菌制劑可以促進(jìn)黃芪和香菇復(fù)合多糖的吸收和利用；多糖復(fù)合制劑作為免疫增效劑和抗病毒藥對益生菌具有促生作用；在本發(fā)明復(fù)方制劑中，益生菌和復(fù)合多糖復(fù)合制劑可以產(chǎn)生復(fù)雜的組合效應(yīng)，明顯的增強(qiáng)仔豬免疫功能，提高仔豬生產(chǎn)性能，并克服了前兩者各自的缺點(diǎn)和弊端。

3、本發(fā)明的益生菌-多糖符合制劑在現(xiàn)代分子免疫學(xué)和中醫(yī)學(xué)相結(jié)合的基礎(chǔ)上，采用現(xiàn)代生物技術(shù)和高新理化加工技術(shù)，精制而成的一種集免疫增效、中藥防治及微生態(tài)學(xué)一體的純天然、無藥殘、無污染、無耐藥性、無副作用的新型綠色獸藥制劑。

附圖說明

圖1為生產(chǎn)乳酸桿菌微膠囊流程圖；

圖2為生產(chǎn)枯草芽孢桿菌菌粉流程圖；

圖3為生產(chǎn)蠟樣芽孢桿菌菌粉流程圖；

圖4為生產(chǎn)黃芪多糖流程圖；

圖5為生產(chǎn)香菇多糖流程圖。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明。

實(shí)施例1：本實(shí)例是將發(fā)明組方應(yīng)用于新生仔豬。

(一)本實(shí)例的復(fù)合制劑配方：

乳酸桿菌微膠囊600克

枯草芽孢桿菌菌粉200克

蠟樣芽孢桿菌菌粉200克

黃芪多糖粗品160克

香菇多糖粗品160克

(二)制備流程如下：

1.按照圖1流程生產(chǎn)乳酸桿菌微膠囊；

2.按照圖2流程生產(chǎn)枯草芽孢桿菌菌粉；

3.按照圖3流程生產(chǎn)蠟樣芽孢桿菌菌粉；

4.按照圖4流程生產(chǎn)黃芪多糖粗品；

5.按照圖5流程生產(chǎn)香菇多糖粗品。

6.按(一)中取各自質(zhì)量混合均勻。

(三)益生菌-多糖復(fù)合制劑的使用效果

1.作用與用途

本制劑應(yīng)用于初生仔豬可以提高仔豬母源抗體水平、健康水平和仔豬的消化能力。

2.用法用量

每頭初生仔豬使用1.0-1.5克，對于弱、體重較輕、明顯病態(tài)的仔豬可以灌服1.5-2.5克/頭，每克用5-8毫升涼開水或勝利鹽水稀釋，搖勻，仔豬出生后吃奶前立即灌服。

3.防治效果

①使用本制劑新生仔豬7日齡口蹄疫、高致病性豬藍(lán)耳病、豬瘟母源抗體保護(hù)水平比對照組高8％-11％。詳見下表

注：使用本制劑與空白對照組，母豬飼養(yǎng)環(huán)境，免疫狀況、營養(yǎng)水平完全一致；使用本制劑與空白對照組仔豬飼養(yǎng)環(huán)境、營養(yǎng)水平完全一致；使用本制劑與空白對照組三類疫病抗體檢測方法完全一致。