本發(fā)明涉及一種可有效促進(jìn)鈣吸收的益生菌發(fā)酵補(bǔ)鈣制劑及其制備方法，屬于功能食品技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

鈣是人體含量最豐富、不可或缺的無機(jī)元素。 人體中的鈣99％沉積在骨骼和牙齒中，促進(jìn)其生長發(fā)育，維持其形態(tài)與硬度。 l％存在于血液和軟組織細(xì)胞中，如鈣離子對血液凝固有重要作用，缺鈣時(shí)血凝發(fā)生障礙，人體會(huì)出現(xiàn)各種出血癥狀；鈣離子對神經(jīng)、肌肉的興奮和神經(jīng)沖動(dòng)的傳導(dǎo)有重要作用，缺鈣時(shí)人體會(huì)出現(xiàn)神經(jīng)傳導(dǎo)阻滯和肌張力異常等癥狀；鈣離子對細(xì)胞的粘著、細(xì)胞膜功能的維持有重要作用，缺鈣時(shí)則不能保證細(xì)胞膜順利地把營養(yǎng)物質(zhì)“泵”到細(xì)胞內(nèi)；鈣離子對人體內(nèi)的酶反應(yīng)有激活作用，鈣缺乏即會(huì)影響正常的生理代謝過程。

目前我國城市居民平均每日鈣攝入量只有４００毫克左右，距中國營養(yǎng)學(xué)會(huì)制定的推薦攝入量８００毫克至１０００毫克相差甚遠(yuǎn)，９０％左右人群鈣攝入量嚴(yán)重不足，出現(xiàn)這種現(xiàn)象的因素很多，如膳食結(jié)構(gòu)不合理，蔬菜中的草酸、膳食纖維也會(huì)阻止鈣質(zhì)的吸收；不良的飲食習(xí)慣，吸煙、喝酒、常喝碳酸飲料（這些都能造成人體酸性化，使人體中的鈣流失；而碳酸飲料中還含有磷酸，能造成體內(nèi)鈣磷比例失調(diào)，直接阻止鈣的吸收。），常喝濃茶（茶水中的茶堿能阻止人體對鈣的吸收），常喝咖啡（咖啡因能促使體內(nèi)鈣的流失和尿鈣排出增多），高鹽攝食（使尿鈣排出增多而大量流失）；特殊的生理病理需求，更年期的婦女（雌激素水平突然減少，骨鈣被溶解，脫離骨骼的速度就會(huì)加快），糖尿病會(huì)引起骨質(zhì)疏松（糖尿病患者血液中的胰島素水平很低，而胰島素可刺激骨膠原蛋白的形成，幫助骨骼留住鈣質(zhì)和重建）。

因此，增加人們的鈣的攝入和吸收，刻不容緩?，F(xiàn)有鈣產(chǎn)品主要分為無機(jī)鈣和有機(jī)鈣，無機(jī)鈣包括碳酸鈣、氯化鈣、磷酸鈣等，其優(yōu)點(diǎn)是含鈣量高，缺點(diǎn)是其吸收要靠胃酸的參與，對胃有刺激作用；有機(jī)鈣包括檸檬酸鈣、乳酸鈣、葡萄酸鈣、醋酸鈣、膠原蛋白絡(luò)合鈣等，其含鈣低，但吸收好。另外，含鈣產(chǎn)品中往往添加一些促吸收因子，如維生素D、大豆異黃酮、酪蛋白磷酸肽、水蘇糖、益生元、雙歧因子等。

現(xiàn)有與補(bǔ)鈣相關(guān)的專利雖多，但存在的問題亦很多。有的專利產(chǎn)品中所用原料含不同動(dòng)物的骨骼，因?yàn)橹亟饘俚扔卸疚镔|(zhì)易沉積于動(dòng)物骨骼中，人若長期服用，易造成二次中毒，如：公布號 CN104397359（一種氨基酸螯合鈣組合物及其制備方法）、CN1181244（一種保健口服液）、CN100534329（一種鈣營養(yǎng)強(qiáng)化劑及其生產(chǎn)工藝）、CN103330128（一種促進(jìn)女性補(bǔ)鈣及吸收的生食谷疏營養(yǎng)米粉及其生產(chǎn)工藝）、CN103340413（一種骨外壁乳酸菌發(fā)酵骨鈣粉的制備方法）等。

有的專利產(chǎn)品則盲目的加入鈣、鐵、鋅等礦物元素，以求同補(bǔ)或相互促進(jìn)吸收，但研究發(fā)現(xiàn)鈣、鐵、鋅等元素在吸收過程中相互競爭抑制，彼此干擾，不宜同時(shí)補(bǔ)充，如：公布號CN104522657（一種補(bǔ)充多種礦物質(zhì)的保健食品）、CN1568798（易吸收自動(dòng)調(diào)節(jié)強(qiáng)化骨鈣藥食兼用鈣營養(yǎng)素產(chǎn)品及制造方法）、CN101513259（一種補(bǔ)鈣產(chǎn)品）等。

有的專利產(chǎn)品是將無機(jī)鈣或有機(jī)鈣與能促進(jìn)鈣吸收的物質(zhì)進(jìn)行調(diào)配，促進(jìn)吸收的物質(zhì)主要為維生素D、酪蛋白磷酸肽、大豆異黃酮、益生元、益生菌等，但其產(chǎn)品是將各種原料進(jìn)行簡單的配比、混合，口感、功效往往不盡人意，亦有許多適用人群的限制，如：公布號CN1209047（大豆異黃酮飲料的加工方法）是將乳酸鈣與大豆異黃酮調(diào)配；CN101322835（一種復(fù)合型補(bǔ)鈣制劑）由碳酸鈣、鹽酸氨基葡萄糖、酪蛋白磷酸肽、大豆異黃酮調(diào)配；CN102302116（一種補(bǔ)鈣、鎖鈣保健食品及其制備方法）由鈣、初乳堿性蛋白、硫酸軟骨素、D-氨基葡萄糖、維生素D、酪蛋白磷酸肽組成；CN102630946（一種適用于女性的珍珠大豆鈣軟膠囊及其制備方法）由大豆提取物、碳酸鈣、珍珠粉組成；CN103750310（一種補(bǔ)鈣、促進(jìn)鈣吸收的植物鈣及其制備方法）由無水葡萄糖、乳粉、白砂糖、麥芽糊精、檸檬酸鈣、聚葡萄糖、低聚半乳糖、氧化鎂、酪蛋白磷酸肽、山藥、黃瓜籽混合制成；CN105166938（一種酪蛋白骨元鈣復(fù)合益生菌制劑）由低聚半乳糖、酪蛋白磷酸肽、骨元鈣、益生菌混合制成；CN105055458（防治骨質(zhì)疏松的益生菌制劑及其制備方法）由納豆芽孢桿菌菌粉、釀酒酵母菌菌粉、碳酸鈣組成。

另外專利CN104211826（一種低聚果糖鈣及含有低聚果糖鈣的口服液）、CN104223067（一種菊粉鈣及含有菊粉鈣的口服液）是將低聚果糖或菊粉依次進(jìn)行堿化、醚化后，與鈣離子螯合制得，為化工合成的產(chǎn)品，不宜被人們所接受。

現(xiàn)有專利中也有通過添加益生菌菌粉來促進(jìn)鈣吸收，而益生菌要想發(fā)揮作用，必須能定殖于人體腸道內(nèi)，大多數(shù)菌體很難有效定殖，勢必影響鈣的吸收效果。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

為了解決現(xiàn)有鈣產(chǎn)品有副作用、安全隱患、功效價(jià)值有限等缺點(diǎn)，本發(fā)明提供了一種益生菌發(fā)酵補(bǔ)鈣制劑，所述制劑由精選黃豆生芽處理，經(jīng)膠體磨磨碎，添加一定量的水，高壓提取后經(jīng)酶解處理，添加葡萄糖、蛋白胨、碳酸鈣，滅菌后經(jīng)多株益生菌發(fā)酵，離心取離心液，添加甜味劑、益生元，滅菌即得到益生菌發(fā)酵補(bǔ)鈣制劑。

所述制劑中精選黃豆在益生菌發(fā)酵補(bǔ)鈣制劑中的重量g/體積ml百分比為2~6%。

所述葡萄糖的加入量為重量g/體積ml百分比4~10%，蛋白胨的加入量為重量g/體積ml百分比0.1~0.5%，碳酸鈣的加入量為重量g/體積ml百分比1~5%。

所述益生菌為雙歧桿菌和乳桿菌。

所述雙歧桿菌選自兩歧雙歧桿菌、短雙歧桿菌、青春雙歧桿菌或嬰兒雙歧桿菌；所述乳桿菌選自干酪乳桿菌、鼠李糖乳桿菌、羅伊氏乳桿菌或植物乳桿菌。

所述甜味劑為塔格糖，益生元為低聚果糖漿。

所述塔格糖的加入量為重量g/體積ml百分比3%；所述低聚果糖漿含量規(guī)格為G 55L，加入量為重量g/體積ml比0.1~0.7%。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種益生菌發(fā)酵補(bǔ)鈣制劑的制備方法，包括以下步驟：

（1）提?。壕x干黃豆，生芽處理，向豆芽中加入適量水，經(jīng)膠體磨磨碎，115℃高壓提取60分鐘；

（2）酶解：待溫度降至45±2℃時(shí)，維持恒溫，用氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至8.0，加入胰酶，當(dāng)pH降至7.5時(shí)，加入中性蛋白酶，當(dāng)pH降至7.0時(shí)，結(jié)束酶解，按比例加入葡萄糖、蛋白胨、碳酸鈣，115℃高壓滅菌60分鐘，得無菌酶解液；

（3）接種、發(fā)酵：當(dāng)無菌酶解液溫度降至39±2℃時(shí)，于無菌條件下接種預(yù)培養(yǎng)的體積百分比為1%的一種雙歧桿菌菌液和體積百分比各為0.5%的兩種乳桿菌菌液，37℃培養(yǎng)48~72小時(shí)，當(dāng)pH值降至4.2時(shí)，降低發(fā)酵溫度至28℃，繼續(xù)發(fā)酵至pH值降至4.0，結(jié)束發(fā)酵，即得益生菌發(fā)酵液；

（4）離心、滅活：將步驟（3）得到的益生菌發(fā)酵液過管式離心機(jī)過濾、離心，得益生菌發(fā)酵液離心液；向益生菌發(fā)酵液離心液中加入甜味劑、益生元，攪勻溶解，定容，121℃滅菌30分鐘，無菌灌裝，即得益生菌發(fā)酵補(bǔ)鈣制劑。

上述制備方法中，在步驟（1）中所述生芽處理是指將精選黃豆在水中室溫浸泡5~10小時(shí)，于28℃培育，當(dāng)芽長2~4厘米時(shí)，結(jié)束發(fā)芽。

上述制備方法中，在步驟（2）中所述的胰酶、中性蛋白酶均為市售；其中胰酶用量為干黃豆重量的1%，中性蛋白酶用量為干黃豆重量的0.1%。

通過上述制備方法制備的補(bǔ)鈣制劑，以元素鈣計(jì)算含量約為6~10mg/ml，總異黃酮苷原的含量為0.09~0.15mg/ml。（見實(shí)驗(yàn)例1）

可將本發(fā)明的益生菌發(fā)酵補(bǔ)鈣制劑，按照已知的常規(guī)方法，添加一種或多種具有相同、相似或不同生物學(xué)活性，并對基本活性成分表現(xiàn)有輔助或協(xié)同作用，但彼此又互不拮抗的天然或合成的其他功能成份或其混合物，如維生素D、大豆異黃酮、酪蛋白磷酸肽、水蘇糖、益生元、雙歧因子等促鈣吸收劑，配制成適于口服的合劑、乳劑等。

也可將本發(fā)明的益生菌發(fā)酵補(bǔ)鈣制劑通過適當(dāng)?shù)母稍锓椒ǎ频霉腆w粉末，添加一種或多種具有相同、相似或不同生物學(xué)活性，并對基本活性成分表現(xiàn)有輔助或協(xié)同作用，但彼此又互不拮抗的天然或合成的其他功能成份或混合物，如維生素D、大豆異黃酮、酪蛋白磷酸肽、水蘇糖、益生元、雙歧因子等促鈣吸收劑，配制成適于口服的膠囊、片劑、顆粒劑等劑型。

本發(fā)明的有益效果：

1、本發(fā)明將黃豆進(jìn)行發(fā)芽處理，發(fā)芽黃豆的異黃酮含量比未發(fā)芽黃豆增加約4倍；以黃豆芽磨碎后作為益生菌發(fā)酵培養(yǎng)基，帶原料渣進(jìn)行發(fā)酵，將異黃酮轉(zhuǎn)化為異黃酮苷原，直接被人體吸收，將更加有效的促進(jìn)鈣的吸收。

2、本發(fā)明利用現(xiàn)代酶解技術(shù)，將黃豆經(jīng)發(fā)芽磨碎高壓提取后，進(jìn)行酶解，使豆芽中的高分子物質(zhì)分解為小分子物質(zhì)，一方面易于人體吸收，另一方面可使制劑的狀態(tài)穩(wěn)定。

3、本發(fā)明利用益生菌乳桿菌發(fā)酵將無機(jī)碳酸鈣轉(zhuǎn)化為有機(jī)乳酸鈣，更易于人體對鈣的吸收，安全、無副作用。

4、本發(fā)明模擬人體腸道環(huán)境，利用多株益生菌共生發(fā)酵技術(shù)，體外發(fā)酵代謝，次級代謝產(chǎn)物直接作用于人體腸道，有效解決了益生菌難于定殖腸道發(fā)揮作用的弊端，起到調(diào)節(jié)腸道環(huán)境，促進(jìn)鈣吸收。

5、本發(fā)明所選甜味劑為塔格糖，其甜度為蔗糖的92%，熱量為蔗糖的1/3，還具有降血糖的功效，既滿足了甜度的要求，又可被對血糖有嚴(yán)格控制的特殊人群飲用，使得本補(bǔ)鈣制劑適用人群更加廣泛。

6、本發(fā)明未添加任何添加劑和防腐劑，經(jīng)高溫滅菌、無菌灌裝，保質(zhì)期長，是安全、綠色、環(huán)保的有機(jī)健康補(bǔ)鈣制劑。

具體實(shí)施方式

以下通過具體實(shí)施方式的描述對本發(fā)明作進(jìn)一步說明，但這并非是對本發(fā)明的限制，本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)本發(fā)明的基本思想，可以做出各種修改或改進(jìn)，但是只要不脫離本發(fā)明的基本思想，均在本發(fā)明的范圍之內(nèi)，實(shí)施例中所述物料，均符合相應(yīng)國家標(biāo)準(zhǔn)。

實(shí)施例1：益生菌發(fā)酵補(bǔ)鈣制劑A的制備

具體制備方法如下：

（1）提?。壕x干黃豆2kg，生芽處理，向豆芽中加入100L水，經(jīng)膠體磨磨碎，115℃高壓提取60分鐘；

（2）酶解：待溫度降至45±2℃時(shí)，維持恒溫，用氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至8.0，加入胰酶20g，當(dāng)pH降至7.5時(shí)，加入中性蛋白酶2g，當(dāng)pH降至7.0時(shí)，結(jié)束酶解，加入葡萄糖10%（重量g/體積ml），蛋白胨0.2%（重量g/體積ml），碳酸鈣2%（重量g/體積ml），115℃高壓滅菌60分鐘，得無菌酶解液；

（3）接種、發(fā)酵：當(dāng)無菌酶解液溫度降至39±2℃時(shí)，于無菌條件下接種預(yù)培養(yǎng)的短雙歧桿菌（AS 1.2213）菌液1%（體積百分比）、鼠李糖乳桿菌（AS 1.22）菌液0.5%（體積百分比）、植物乳桿菌（AS 1.19）菌液0.5%（體積百分比），37℃培養(yǎng)60小時(shí)，pH值降至4.2，降低發(fā)酵溫度至28℃，繼續(xù)發(fā)酵至pH值降至4.0，結(jié)束發(fā)酵，即得益生菌發(fā)酵液；

（4）離心、滅活：將步驟（3）得到的益生菌發(fā)酵液過管式離心機(jī)過濾、離心，得益生菌發(fā)酵液離心液；向益生菌發(fā)酵液離心液中加入塔格糖3%（重量g/體積ml）、低聚果糖0.2%（重量g/體積ml），攪勻溶解，定容，121℃滅菌30分鐘，無菌灌裝，即得益生菌發(fā)酵補(bǔ)鈣制劑A。

實(shí)施例2：益生菌發(fā)酵補(bǔ)鈣制劑B的制備

具體制備方法如下：

（1）提?。壕x干黃豆4kg，生芽處理，向豆芽中加入100L水，經(jīng)膠體磨磨碎，115℃高壓提取60分鐘；

（2）酶解：待溫度降至45±2℃時(shí)，維持恒溫，用氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至8.0，加入胰酶40g，當(dāng)pH降至7.5時(shí)，加入中性蛋白酶4g，當(dāng)pH降至7.0時(shí)，結(jié)束酶解，加入葡萄糖8%（重量g/體積ml），蛋白胨0.4%（重量g/體積ml），碳酸鈣3%（重量g/體積ml），115℃高壓滅菌60分鐘，得無菌酶解液；

（3）接種、發(fā)酵：當(dāng)無菌酶解液溫度降至39±2℃時(shí)，于無菌條件下接種預(yù)培養(yǎng)的青春雙歧桿菌（AS 1.2190）菌液1%（體積百分比）、植物乳桿菌（AS 1.19）菌液0.5%（體積百分比）、干酪乳桿菌（CGMCC1.2884）菌液0.5%（體積百分比），37℃培養(yǎng)48小時(shí)，pH值降至4.2，降低發(fā)酵溫度至28℃，繼續(xù)發(fā)酵至pH值降至4.0，結(jié)束發(fā)酵，即得益生菌發(fā)酵液；

（4）離心、滅活：將步驟（3）得到的益生菌發(fā)酵液過管式離心機(jī)過濾、離心，得益生菌發(fā)酵液離心液；向益生菌發(fā)酵液離心液中加入塔格糖3%（重量g/體積ml）、低聚果糖0.4%（重量g/體積ml），攪勻溶解，定容，121℃滅菌30分鐘，無菌灌裝，即得益生菌發(fā)酵補(bǔ)鈣制劑B。

實(shí)施例3：益生菌發(fā)酵補(bǔ)鈣制劑C的制備

具體制備方法如下：

（1）提?。壕x干黃豆6kg，生芽處理，向豆芽中加入100L水，經(jīng)膠體磨磨碎，115℃高壓提取60分鐘；

（2）酶解：待溫度降至45±2℃時(shí)，維持恒溫，用氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至8.0，加入胰酶60g，當(dāng)pH降至7.5時(shí)，加入中性蛋白酶6g，當(dāng)pH降至7.0時(shí)，結(jié)束酶解，加入葡萄糖6%（重量g/體積ml），蛋白胨0.5%（重量g/體積ml），碳酸鈣4%（重量g/體積ml），115℃高壓滅菌60分鐘，得無菌酶解液；

（3）接種、發(fā)酵：當(dāng)無菌酶解液溫度降至39±2℃時(shí)，于無菌條件下接種預(yù)培養(yǎng)的短雙歧桿菌（AS 1.2213）菌液1%（體積百分比）、干酪乳桿菌（CGMCC1.2884）菌液0.5%（體積百分比）、鼠李糖乳桿菌（AS 1.22）菌液0.5%（體積百分比），37℃培養(yǎng)72小時(shí)，pH值降至4.2，降低發(fā)酵溫度至28℃，繼續(xù)發(fā)酵至pH值降至4.0，結(jié)束發(fā)酵，即得益生菌發(fā)酵液；

（4）離心、滅活：將步驟（3）得到的益生菌發(fā)酵液過管式離心機(jī)過濾、離心，得益生菌發(fā)酵液離心液；向益生菌發(fā)酵液離心液中加入塔格糖3%（重量g/體積ml）、低聚果糖0.6%（重量g/體積ml），攪勻溶解，定容，121℃滅菌30分鐘，無菌灌裝，即得益生菌發(fā)酵補(bǔ)鈣制劑C。

實(shí)驗(yàn)例1：

本實(shí)驗(yàn)例旨在通過對本發(fā)明的益生菌發(fā)酵補(bǔ)鈣制劑進(jìn)行功效成分含量測定，以確定本發(fā)明補(bǔ)鈣制劑的人體使用量。

1. 元素鈣含量測定

本實(shí)驗(yàn)參照GB 25555-2010 L-乳酸鈣標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行，略有改進(jìn)，原理為在堿性條件下，樣品消耗絡(luò)合劑乙二胺四乙酸二鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定液的體積計(jì)算元素鈣含量，用鈣試劑羧酸鈉指示劑的顏色變化判斷滴定的終點(diǎn)。具體操作如下：

1.1 試劑和材料

氫氧化鈉溶液：100g/L；

鹽酸溶液：1+4；

乙二胺四乙酸二鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定液：c=0.05mol/L；

鈣試劑羧酸鈉指示劑：稱取0.1g鈣試劑羧酸鈉鹽，加10g在約110℃干燥過的氯化鈉研磨，混勻。

1.2 實(shí)驗(yàn)步驟

量取樣品7ml，加入已加有2ml鹽酸溶液的50ml水中，邊攪拌邊滴加15ml乙二胺四乙酸二鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定液，再加5ml氫氧化鈉溶液和0.1g鈣試劑羧酸鈉指示劑，用乙二胺四乙酸二鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定液滴定至溶液呈藍(lán)色為終點(diǎn)。

1.3結(jié)果計(jì)算

元素鈣的重量mg/體積ml百分比為w%：

w%=(V₁*cM/1000*V₂)*100%

注：V₁：樣品消耗乙二胺四乙酸二鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定液的體積（單位ml）；

V₂：樣品體積（單位ml）；

c：乙二胺四乙酸二鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定液摩爾濃度（單位mol/L）；

M：元素鈣的摩爾質(zhì)量（單位g/mol）。

1.4結(jié)果

由表1可知：三個(gè)實(shí)施例制劑A、B、C中元素鈣的含量（mg/ml）分別為9.81、8.56、6.38，其含量范圍約為6~10mg/ml，根據(jù)中國營養(yǎng)學(xué)會(huì)制定的推薦攝入量８００毫克至１０００毫克，可確定本品的飲用量為100ml/天，便可滿足人體鈣的需求量。

表1 益生菌發(fā)酵補(bǔ)鈣制劑A、B、C元素鈣的含量

2 總異黃酮苷原含量測定

本實(shí)驗(yàn)參照GB/T 23788-2009（保健食品中大豆異黃酮的測定方法-高效液相色譜法）標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行，以大豆素、大豆黃素、染料木素為標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行總異黃酮苷原含量測定，以未發(fā)酵與實(shí)施例1-3相同濃度的黃豆提取液分別作為對照組A、對照組B和對照組C。

2.1方法

采用HPLC法進(jìn)行測定，色譜條件為C18柱（250mm×4.6mm，5um）；柱溫：30℃；流動(dòng)相A：乙腈；流動(dòng)相B：磷酸水溶液（pH3.0）；流速：1.0ml/min；測定波長：260nm；進(jìn)樣量：10ul。

2.2 結(jié)果

由表2可知：三個(gè)實(shí)施例制劑A、B、C中總異黃酮苷原的含量（mg/ml）分別為0.09、0.12、0.15，其含量范圍約為0.09~0.15mg/ml，而對照組異黃酮苷原的含量均為0，表明益生菌可將大豆異黃酮轉(zhuǎn)化為異黃酮苷原，直接被人體吸收，提高了促進(jìn)鈣吸收的效率。

表2 益生菌發(fā)酵補(bǔ)鈣制劑A、B、C總異黃酮苷原的含量

實(shí)驗(yàn)例2：

本實(shí)驗(yàn)例旨在通過測定本發(fā)明的黃豆經(jīng)發(fā)芽、酶解處理前后的總可溶性小分子物質(zhì)的變化，來說明本發(fā)明可將高分子物質(zhì)轉(zhuǎn)化為易于人體吸收的小分子物質(zhì)。

本實(shí)驗(yàn)參照GB 22494-2008 大豆肽粉標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行，略有改進(jìn)，其原理為高分子蛋白質(zhì)在酸性條件下易被沉淀，相對分子質(zhì)量較小的蛋白質(zhì)水解物可溶于酸性溶液（包括肽和游離氨基酸），經(jīng)酸化后，去除沉淀，比較樣品處理前后總可溶性含氮物質(zhì)的多少，以確定變化情況。

1 方法

取相同重量的干黃豆，一組進(jìn)行發(fā)芽，膠體磨破碎，高溫提取，酶解處理；一組膠體磨破碎，高溫提??；取相同體積的處理液，加入適量15%三氯乙酸，混勻并靜置5min，離心去除沉淀，濾液備用，按GB 22494-2008中B.4.1.2~B.4.1.4操作步驟進(jìn)行，測定計(jì)算總可溶性含氮物質(zhì)。

2 結(jié)果

由表3可知，處理前小分子的可溶性肽和游離氨基酸的總量為2.1mg/g(干黃豆)，處理后含量為20.2mg/g(干黃豆)，是未處理組的約10倍，說明本發(fā)明可將高分子物質(zhì)轉(zhuǎn)化為易于人體吸收的小分子物質(zhì)。

表 3 黃豆經(jīng)發(fā)芽、酶解處理前后總可溶性含氮物質(zhì)含量