本發(fā)明屬于黃芪藥物提取技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及利用超聲波技術(shù)生產(chǎn)黃芪總黃酮的工藝。

背景技術(shù)：

黃芪為豆科植物的，味甘，性微溫，歸肺、脾經(jīng)，具有補(bǔ)氣升陽、益味固表、利尿消腫、生津養(yǎng)血、托毒排膿、斂瘡生肌等功效。黃芪總黃酮是黃芪生長過程中形成的次級(jí)代謝產(chǎn)物之一，具有多種生物學(xué)活性；近年來，食品安全和保健性食品備受人們的青睞，黃芪總黃酮也逐漸成為被研究的熱點(diǎn)。黃芪的化學(xué)成分分析表明主要含有黃酮類和皂甙類，而研究表明總黃酮對(duì)人體生理代謝有益的調(diào)節(jié)功能，為其開發(fā)利用展示了廣闊前景。隨著社會(huì)壓力的增加，心腦血管疾病的急劇爆發(fā)，而黃酮有抑制腫瘤，抗炎消腫，降低血脂等功能，因此逐漸被人們所重視和研究。

目前水提法是提取中藥黃酮的傳統(tǒng)方法，水提法方法簡單，操作簡便易行，但是能耗較大，提取方法不穩(wěn)定，提取得到的黃酮純度不高，多含有蛋白質(zhì)、核酸、淀粉等雜質(zhì)。本發(fā)明為了解決上述的水提法提取到的黃芪黃酮得率不高、提取能耗大問題，根據(jù)黃芪總黃酮中大部分有效成分的理化特性及為了節(jié)約成本，引入澄清劑除雜過程和多級(jí)分離吸附作用，有效除去藥物成分中的雜質(zhì)，降低提取過程因需要高溫過程產(chǎn)生的能耗，并使提取技術(shù)工藝流程趨于穩(wěn)定，方法重復(fù)性好。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有藥用甘草提取黃芪總黃酮純度、提取率低等缺點(diǎn)，提供一種利用水提技術(shù)生產(chǎn)黃芪總黃酮的工藝。

本發(fā)明的實(shí)現(xiàn)技術(shù)方案為，一種利用超聲波技術(shù)生產(chǎn)黃芪總黃酮的工藝，以黃芪為原料，其特征在于，該方法步驟包括：

1）粗提液獲?。焊稍稂S芪根原料1kg，清洗、干燥、粉碎后加入9~15倍水，在超聲波功率為200~280w、溫度為60~70℃條件下進(jìn)行提取0.5~1.5h，提取3次，合并提取液靜置得到粗提液；

2）濃縮蒸發(fā)：在步驟1）得到的粗提液中加入加入天然植物提取液澄清劑kbt-ztc，加入量為5~10g/l，靜置20~30min后旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮粗提液，得到浸膏粗品；

3）溶解除雜：在步驟2）得到的浸膏粗品中加入乙醇，攪拌浸膏進(jìn)行溶解，靜置沉淀，離心去除上清液得到沉淀物，沉淀物再加入乙醇進(jìn)行攪拌后靜置，離心收集沉淀物；

4）大孔吸附樹脂柱分離純化：將步驟3）得到的沉淀物上大孔吸附樹脂柱，用乙醇水溶液進(jìn)行洗脫，收集洗脫液并減壓濃縮烘干，得到粗提物ⅰ；

5）硅膠柱分離純化：將步驟4）烘干得到的粗提物ⅰ用乙醇溶解后上硅膠柱，用含甲醇的氯仿溶液進(jìn)行洗脫，收集黃綠色洗脫液并風(fēng)干，得到粗提物ⅱ；

6）用ods開放柱分離純化：將步驟5）得到的粗提物ⅱ用乙醇溶解后上ods開放柱，用乙醇水溶液進(jìn)行洗脫，收集黃綠色洗脫液并減壓濃縮烘干，得到粗提物ⅲ；

7）用中壓柱分離純化：將步驟6）得到的粗提物ⅲ上中壓柱，用乙醇水溶液洗脫，從出峰開始收集洗脫液，至峰下降后停止收集，洗脫液并減壓濃縮烘干，得到粗提物ⅳ；

8）過濾結(jié)晶：將步驟7）得到的粗提物ⅳ用甲醇溶解，用濾膜過濾后緩慢加入水進(jìn)行結(jié)晶，邊加入邊攪拌至出現(xiàn)黃色絮狀物時(shí)停止攪拌，靜置20-50min，濾紙過濾，將留在濾紙上的黃色藥物揮干，收集揮干后的黃色藥物既為黃芪總黃酮。

作為本發(fā)明的進(jìn)一步限定條件，所述的清洗為用清水清洗2~3次；所述的粉碎為黃芪粉碎至50~100目。

作為本發(fā)明的進(jìn)一步限定條件，所述的旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮為將粗提液蒸發(fā)至水比重d為1.0~1.50的浸膏。

作為本發(fā)明的進(jìn)一步限定條件，所述的步驟3）中乙醇的加入量為浸膏的2~5倍體積。

作為本發(fā)明的進(jìn)一步限定條件，所述的天然植物提取液澄清劑kbt-ztc為由科立爾生物科技有限公司生產(chǎn)的澄清劑。

作為本發(fā)明的進(jìn)一步限定，所述的步驟5）中含甲醇的氯仿溶液為含1~5%甲醇的氯仿溶液。

作為本發(fā)明的進(jìn)一步限定，所述的步驟4）、步驟6）、步驟7）中的乙醇水溶液為60~80%的乙醇水溶液。

作為本發(fā)明的進(jìn)一步限定，所述的步驟9）中的濾膜孔徑為0.35~0.5μm。

本發(fā)明取得了以下實(shí)質(zhì)性進(jìn)步和突出效果：

以藥用黃芪開始，經(jīng)過一系列工序提取優(yōu)質(zhì)黃芪總黃酮，在超聲波作用的基礎(chǔ)上，引入植物中藥澄清技術(shù)實(shí)現(xiàn)高品質(zhì)黃芪總黃酮的提取純化，由于微波輻射導(dǎo)致植物細(xì)胞表面出現(xiàn)孔洞和裂紋，胞外溶劑容易進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，溶解更總黃酮，胞內(nèi)總黃酮也容易被釋放出來，有效提高了總黃酮的收率，并且引入的澄清除雜過程能夠高效去除黃芪總黃酮中的蛋白質(zhì)、核酸、淀粉等大分子雜質(zhì)，并結(jié)合大孔吸附樹脂柱、硅膠柱、ods開放柱、中壓柱分離純化技術(shù)，提高黃芪總黃酮中有效成分提取產(chǎn)率，改進(jìn)后的方法黃芪總黃酮提取率為1.3~1.9mg/g以上，得到的黃芪總黃酮可用于獸醫(yī)臨床中對(duì)動(dòng)物免疫調(diào)節(jié)、抗病毒、抗菌方面等藥物預(yù)防治療。

本發(fā)明黃芪總黃酮按照一定的比例拌入動(dòng)物的喂養(yǎng)飼料中，一日三餐中喂養(yǎng)一餐，可以顯著提高動(dòng)物的免疫力，發(fā)病率從最初的32%降低到了20.5%，實(shí)現(xiàn)動(dòng)物的健康飼養(yǎng)，減少抗生素、激素藥物的治療，實(shí)現(xiàn)生態(tài)飼養(yǎng)，提高畜牧養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)價(jià)值。

具體實(shí)施方式

以下結(jié)合實(shí)施例描述本發(fā)明利用微波技術(shù)生產(chǎn)黃芪總黃酮的工藝，這些描述并不是對(duì)本發(fā)明內(nèi)容作進(jìn)一步的限定，以下實(shí)施例中所用到的所有試劑均可通過商業(yè)手段購買。

實(shí)施例1

本實(shí)施例以干燥黃芪為原料，制備方法步驟包括：

1）粗提液獲取：干燥黃芪根原料1kg，清洗、干燥、粉碎后加入12倍水（清洗為用清水清洗3次，粉碎為黃芪粉碎至50目），在超聲波功率為280w、溫度為60℃條件下進(jìn)行提取0.5h，合并提取液靜置放涼，得到粗提液；

2）濃縮蒸發(fā)：在步驟1）得到的粗提液中加入由科立爾生物科技有限公司生產(chǎn)的天然植物提取液澄清劑kbt-ztc，加入量為5g/l，靜置30min后旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮粗提液，至水比重d為1.50的浸膏，得到浸膏粗品；

3）溶解除雜：在步驟2）得到的浸膏粗品中加入乙醇，乙醇的加入量為浸膏的5倍體積，攪拌浸膏進(jìn)行溶解，靜置沉淀，離心去除上清液得到沉淀物，沉淀物再加入乙醇進(jìn)行攪拌后靜置，離心收集沉淀物；

4）大孔吸附樹脂柱分離純化：將步驟3）得到的沉淀物上大孔吸附樹脂柱，用乙醇水溶液進(jìn)行洗脫，收集洗脫液并減壓濃縮烘干，得到粗提物?。?/p>

5）硅膠柱分離純化：將步驟4）烘干得到的粗提物ⅰ用乙醇溶解后上硅膠柱，用含甲醇的氯仿溶液為含15%甲醇的氯仿溶液進(jìn)行洗脫，收集黃綠色洗脫液并風(fēng)干，得到粗提物ⅱ；

6）用ods開放柱分離純化：將步驟5）得到的粗提物ⅱ用乙醇溶解后上ods開放柱，用乙醇水溶液進(jìn)行洗脫，收集黃綠色洗脫液并減壓濃縮烘干，得到粗提物ⅲ；

7）用中壓柱分離純化：將步驟6）得到的粗提物ⅲ上中壓柱，用乙醇水溶液洗脫，從出峰開始收集洗脫液，至峰下降后停止收集，洗脫液并減壓濃縮烘干，得到粗提物ⅳ；

8）f過濾結(jié)晶：將步驟7）得到的粗提物ⅳ用甲醇溶解，用濾膜過濾后緩慢加入水進(jìn)行結(jié)晶，邊加入邊攪拌至出現(xiàn)黃色絮狀物時(shí)停止攪拌，靜置20min，濾紙過濾，將留在濾紙上的黃色藥物揮干，收集揮干后的黃色藥物既為黃芪總黃酮。

步驟4）、步驟6）、步驟7）中的乙醇水溶液為60%的乙醇水溶液，步驟8）中的濾膜孔徑為0.4μm。

本是實(shí)施例黃芪總黃酮的提取率為1.3mg/g。

實(shí)施例2

1）粗提液獲?。焊稍稂S芪根原料1kg，清洗、干燥、粉碎后加入15倍水（清洗為用清水清洗2次，粉碎為黃芪粉碎至100目），在超聲波功率為200w、溫度為70℃條件下進(jìn)行提取1.5h，合并提取液靜置放涼，得到粗提液；

2）濃縮蒸發(fā)：在步驟1）得到的粗提液中加入由科立爾生物科技有限公司生產(chǎn)的天然植物提取液澄清劑kbt-ztc，加入量為10g/l，靜置20min后旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮粗提液，至水比重d為1.0的浸膏，得到浸膏粗品；

3）溶解除雜：在步驟2）得到的浸膏粗品中加入乙醇，乙醇的加入量為浸膏的2倍體積，攪拌浸膏進(jìn)行溶解，靜置沉淀，離心去除上清液得到沉淀物，沉淀物再加入乙醇進(jìn)行攪拌后靜置，離心收集沉淀物；

4）大孔吸附樹脂柱分離純化：將步驟3）得到的沉淀物上大孔吸附樹脂柱，用乙醇水溶液進(jìn)行洗脫，收集洗脫液并減壓濃縮烘干，得到粗提物??；

5）硅膠柱分離純化：將步驟4）烘干得到的粗提物ⅰ用乙醇溶解后上硅膠柱，用含甲醇的氯仿溶液為含1%甲醇的氯仿溶液進(jìn)行洗脫，收集黃綠色洗脫液并風(fēng)干，得到粗提物ⅱ；

6）用ods開放柱分離純化：將步驟5）得到的粗提物ⅱ用乙醇溶解后上ods開放柱，用乙醇水溶液進(jìn)行洗脫，收集黃綠色洗脫液并減壓濃縮烘干，得到粗提物ⅲ；

7）用中壓柱分離純化：將步驟6）得到的粗提物ⅲ上中壓柱，用乙醇水溶液洗脫，從出峰開始收集洗脫液，至峰下降后停止收集，洗脫液并減壓濃縮烘干，得到粗提物ⅳ；

8）f過濾結(jié)晶：將步驟7）得到的粗提物ⅳ用甲醇溶解，用濾膜過濾后緩慢加入水進(jìn)行結(jié)晶，邊加入邊攪拌至出現(xiàn)黃色絮狀物時(shí)停止攪拌，靜置50min，濾紙過濾，將留在濾紙上的黃色藥物揮干，收集揮干后的黃色藥物既為黃芪總黃酮。

步驟4）、步驟6）、步驟7）中的乙醇水溶液為80%的乙醇水溶液。所述的步驟8）中的濾膜孔徑為0.5μm。

本是實(shí)施例黃芪總黃酮的提取率為1.6mg/g。

實(shí)施例3

1）粗提液獲?。焊稍稂S芪根原料1kg，清洗、干燥、粉碎后加入9倍水（清洗為用清水清洗3次，粉碎為黃芪粉碎至75目），在超聲波功率為250w、溫度為65℃條件下進(jìn)行提取1.0h，合并提取液靜置放涼，得到粗提液；

2）濃縮蒸發(fā)：在步驟1）得到的粗提液中加入由科立爾生物科技有限公司生產(chǎn)的天然植物提取液澄清劑kbt-ztc，加入量為7.5g/l，靜置25min后旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮粗提液，至水比重d為1.20的浸膏，得到浸膏粗品；

3）溶解除雜：在步驟2）得到的浸膏粗品中加入乙醇，乙醇的加入量為浸膏的3倍體積，攪拌浸膏進(jìn)行溶解，靜置沉淀，離心去除上清液得到沉淀物，沉淀物再加入乙醇進(jìn)行攪拌后靜置，離心收集沉淀物；

4）大孔吸附樹脂柱分離純化：將步驟3）得到的沉淀物上大孔吸附樹脂柱，用乙醇水溶液進(jìn)行洗脫，收集洗脫液并減壓濃縮烘干，得到粗提物?。?/p>

5）硅膠柱分離純化：將步驟4）烘干得到的粗提物ⅰ用乙醇溶解后上硅膠柱，用含甲醇的氯仿溶液為含3%甲醇的氯仿溶液進(jìn)行洗脫，收集黃綠色洗脫液并風(fēng)干，得到粗提物ⅱ；

6）用ods開放柱分離純化：將步驟5）得到的粗提物ⅱ用乙醇溶解后上ods開放柱，用乙醇水溶液進(jìn)行洗脫，收集黃綠色洗脫液并減壓濃縮烘干，得到粗提物ⅲ；

7）用中壓柱分離純化：將步驟6）得到的粗提物ⅲ上中壓柱，用乙醇水溶液洗脫，從出峰開始收集洗脫液，至峰下降后停止收集，洗脫液并減壓濃縮烘干，得到粗提物ⅳ；

8）f過濾結(jié)晶：將步驟7）得到的粗提物ⅳ用甲醇溶解，用濾膜過濾后緩慢加入水進(jìn)行結(jié)晶，邊加入邊攪拌至出現(xiàn)黃色絮狀物時(shí)停止攪拌，靜置30min，濾紙過濾，將留在濾紙上的黃色藥物揮干，收集揮干后的黃色藥物既為黃芪總黃酮。

步驟4）、步驟6）、步驟7）中的乙醇水溶液為70%的乙醇水溶液。所述的步驟8）中的濾膜孔徑為0.35μm。

本是實(shí)施例黃芪總黃酮的提取率為1.9mg/g。

應(yīng)用實(shí)施例1

黃芪總黃酮按照一定的比例拌入豬的喂養(yǎng)飼料中（1kg的飼料中添加5.0g黃芪總黃酮），一日三餐中喂養(yǎng)一餐，可以顯著提高動(dòng)物的免疫力，發(fā)病率從最初的30%降低到了18.5%，實(shí)現(xiàn)動(dòng)物的健康飼養(yǎng)，減少抗生素、激素藥物的治療，實(shí)現(xiàn)生態(tài)飼養(yǎng)，提高畜牧養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)價(jià)值。

應(yīng)用實(shí)施例2

黃芪總黃酮按照一定的比例拌入牛的喂養(yǎng)飼料中（1kg的飼料中添加6.5g黃芪總黃酮），一日三餐中喂養(yǎng)一餐，可以顯著提高動(dòng)物的免疫力，發(fā)病率從最初的32%降低到了20.5%，實(shí)現(xiàn)動(dòng)物的健康飼養(yǎng)，減少抗生素、激素藥物的治療，實(shí)現(xiàn)生態(tài)飼養(yǎng)，提高畜牧養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)價(jià)值。

本發(fā)明上述實(shí)施例方案僅是對(duì)本發(fā)明的說明而不能限制本發(fā)明，權(quán)利要求中指出了本發(fā)明的范圍，而上述的說明并未指出本發(fā)明的范圍，因此，在與本發(fā)明的權(quán)利要求書相當(dāng)?shù)暮x和范圍內(nèi)的任何改變，都應(yīng)當(dāng)認(rèn)為是包括在權(quán)利要求書的范圍內(nèi)。

本發(fā)明是經(jīng)過多位黃芪總黃酮提取加工人員長期工作經(jīng)驗(yàn)積累，并通過創(chuàng)造性勞動(dòng)創(chuàng)作而出，其在在實(shí)際黃芪總黃酮的提取過程中，該方法可得到黃芪總黃酮提取率為1.3~1.9mg/g，得到的黃芪總黃酮可用于獸醫(yī)臨床中對(duì)動(dòng)物免疫調(diào)節(jié)、抗病毒、抗菌方面等藥物預(yù)防治療。