本申請(qǐng)是申請(qǐng)日為2010年12月17日，申請(qǐng)?zhí)枮?01080056763.8、發(fā)明名稱為“脫氧膽酸的純化方法”的發(fā)明專利申請(qǐng)的分案申請(qǐng)。相關(guān)申請(qǐng)案的引用本申請(qǐng)案主張2009年12月18日申請(qǐng)的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)案第61/288,132號(hào)、2010年2月12日申請(qǐng)的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)案第61/303,816號(hào)、2010年5月25日申請(qǐng)的英國(guó)申請(qǐng)案第1008726.0號(hào)和2010年5月26日申請(qǐng)的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)案第61/348,686號(hào)的權(quán)利，所有所述申請(qǐng)案以全文引用的方式并入本文中。本發(fā)明針對(duì)脫氧膽酸和其鹽的合成以及適用于脫氧膽酸合成的中間體。在一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明提供以氫化可的松(hydrocortisone)為起始材料制備脫氧膽酸或其鹽的合成方法。本發(fā)明還針對(duì)例如12-酮基或12-α-羥基類固醇等中間體以及用于其制備的新穎方法。本發(fā)明更進(jìn)一步提供純化的脫氧膽酸組合物和純化方法，其中脫氧膽酸的純度為至少96％。
背景技術(shù)：
：：快速去除體脂是一個(gè)久遠(yuǎn)的理想，且已主張?jiān)S多物質(zhì)來(lái)實(shí)現(xiàn)這類效果，但鮮有成效?！懊浪墀煼?mesotherapy)”或使用用于去除脂肪的可注射劑雖然已自20世紀(jì)50年代就宣稱用于順勢(shì)療法和美容，但仍因安全性和功效問(wèn)題而不能為開(kāi)業(yè)醫(yī)師廣泛接受。美塑療法最初作為利用含有用于治療局部醫(yī)學(xué)和美容病癥的化合物混合物的皮膚注射液的方法在歐洲構(gòu)想出來(lái)。雖然美塑療法傳統(tǒng)上用于疼痛減輕，但其美容應(yīng)用、尤其脂肪和脂肪團(tuán)(cellulite)去除，近來(lái)在美國(guó)已受到關(guān)注。一種所述報(bào)導(dǎo)的在巴西流行且使用磷脂酰膽堿注射液的用于局部脂肪減少的治療已被誤認(rèn)為與美塑療法同義。盡管其吸引之處為聲稱的“溶脂”注射液，但幾乎沒(méi)有這些美容治療的安全性和功效的資料。參看羅坦達(dá)a.m.(rotunda,a.m.)和m.克洛德尼(m.kolodney),皮膚外科學(xué)(dermatologicsurgery)32:,465–480(2006)(“美塑療法和磷脂酰膽堿注射液：歷史闡明和綜述(mesotherapyandphosphatidylcholineinjections：historicalclarificationandreview)”)。近來(lái)公開(kāi)的文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)，膽酸、脫氧膽酸和其鹽在注入活體內(nèi)脂肪沉積處時(shí)具有脂肪去除性質(zhì)。參看wo2005/117900和wo2005/112942以及us2005/0261258、us2005/0267080、us2006/127468和us20060154906，全部以全文引用的方式并入本文中)。注入脂肪組織的脫氧膽酸鹽經(jīng)由細(xì)胞溶解機(jī)理降解脂肪細(xì)胞。因?yàn)樽⑷胫镜拿撗跄懰猁}因暴露于蛋白質(zhì)而快速失活，接著快速返回到腸內(nèi)容物，所以其作用受空間限制。作為賦予臨床安全性的此減弱作用的結(jié)果，脂肪去除療法通常需要4-6療程。此無(wú)需外科手術(shù)的局部脂肪去除不僅有利于與病理學(xué)局部脂肪沉積(例如hiv治療中的醫(yī)學(xué)介入易發(fā)的血脂異常)相關(guān)的治療性處理，而且有利于美容脂肪去除且無(wú)外科手術(shù)(例如吸脂術(shù))所固有的伴隨風(fēng)險(xiǎn)。參看羅坦達(dá)(rotunda)等人,皮膚外科學(xué)(dermatol.surgery)30：1001-1008(2004)(“脫氧膽酸鈉的清潔作用是用于局部脂肪溶解的可注射磷脂酰膽堿調(diào)配物的主要特征(detergenteffectsofsodiumdeoxycholateareamajorfeatureofaninjectablephosphatidylcholineformulationusedforlocalizedfatdissolution)”)和羅坦達(dá)(rotunda)等人,美國(guó)皮膚學(xué)會(huì)雜志(j.am.acad.dermatol.)(2005：973-978)(“用皮下脫氧膽酸鹽注射液治療的脂肪瘤(lipomastreatedwithsubcutaneousdeoxycholateinjections)”)，兩者以全文引用的方式并入本文中。另外，許多重要的類固醇在類固醇的c-環(huán)上具有12-α-羥基取代基。這些化合物包括例如膽汁酸，例如脫氧膽酸、膽酸、石膽酸等。迄今為止，在成本效率基礎(chǔ)上，這些化合物通常從牛和羊來(lái)源回收，牛和羊來(lái)源提供現(xiàn)成的膽汁酸來(lái)源。然而，最近發(fā)現(xiàn)例如朊病毒等病原體會(huì)污染這些來(lái)源，由植物來(lái)源或合成起始材料合成膽汁酸的替代方法已日益變得重要。舉例來(lái)說(shuō)，來(lái)自新西蘭的動(dòng)物的脫氧膽酸是在美國(guó)管理制度下供人類使用的膽汁酸來(lái)源，只要?jiǎng)游锍掷m(xù)保持分離，不然不含可觀察到的病原體。這些嚴(yán)格的條件對(duì)適合的哺乳動(dòng)物源膽汁酸的量施加了限制，且不排除膽汁酸將不含這些病原體的可能性。仍需要由開(kāi)頭可知不含動(dòng)物起源部分(或能夠作用于動(dòng)物(尤其哺乳動(dòng)物)且供人類使用時(shí)，對(duì)人類具有有害影響的病原性部分)和其它例如動(dòng)物或微生物代謝物、毒素(包括細(xì)菌毒素，例如致熱原)等有害試劑的適量例如脫氧膽酸等有效膽汁酸，其在人類中用作藥劑。另外，需要制備不含其它未計(jì)劃的膽汁酸的膽汁酸組合物。就此而論，已知哺乳動(dòng)物源脫氧膽酸受膽酸污染。反過(guò)來(lái)，進(jìn)一步已知膽酸是膽囊結(jié)石形成中的必需組分。因此，正需要提供制備脫氧膽酸的方法，所述方法不導(dǎo)致受其它膽汁酸污染。迄今為止，gb2452358揭示以9α-羥基雄-4-烯-3,17-二酮為起始物合成脫氧膽酸。在所述合成中，中間體3α-羥基-5β-雄-9(11)-烯-17-酮經(jīng)揭示為自9α-羥基雄-4-烯-3,17-二酮衍生而來(lái)。雖然9α-羥基雄-4-烯-3,17-二酮如所述專利中所揭示有效地轉(zhuǎn)化為脫氧膽酸，但由氫化可的松合成脫氧膽酸將特別有用，這是因?yàn)闅浠傻乃煽蓮V泛獲得?？傻乃珊蜌浠傻乃煞謩e具有11-酮基或11-β-羥基而不是脫氧膽酸的12-α-羥基。類固醇主鏈上的11-酮基或11-β-羥基轉(zhuǎn)化成相應(yīng)12-α-羥基或12-酮基并非平凡的，因?yàn)椴粌H必須進(jìn)行轉(zhuǎn)化，而且必須選擇性進(jìn)行轉(zhuǎn)化。國(guó)際專利申請(qǐng)公開(kāi)案第wo2008/157635號(hào)報(bào)導(dǎo)多個(gè)反應(yīng)流程，其中在一個(gè)情況下，3-β-乙酰氧基-11-α-酮基類固醇經(jīng)由在所述類固醇中形成δ-9,11-烯官能團(tuán)，接著用三氧化鉻在12-位進(jìn)行烯丙基氧化而轉(zhuǎn)化為3-β-乙酰氧基-12-α-羥基類固醇。使用三氧化鉻提供適度產(chǎn)率的δ-9,11-烯-12-氧代官能團(tuán)，且此反應(yīng)產(chǎn)生的副產(chǎn)物妨礙所要產(chǎn)物的純化。此外，三氧化鉻具有高毒性、腐蝕性并且致癌。其是六價(jià)鉻，一種環(huán)境危害的主要實(shí)例。在氧化過(guò)程中應(yīng)限制使用三氧化鉻。鑒于以上描述，需要提供使用環(huán)境上相容和毒性較低的氧化劑使11-β-羥基/11-酮基類固醇轉(zhuǎn)化成相應(yīng)δ-9,11-烯、12-α-羥基/12-酮基類固醇的高效合成方法。醫(yī)藥級(jí)化學(xué)品需要一貫可重現(xiàn)的純度。在一些實(shí)施例中，純化方法應(yīng)提供至少95％純度或至少99％純度。然而，純化到至少99％在技術(shù)上具挑戰(zhàn)性。舉例來(lái)說(shuō)，純化方法中所用的溶劑可俘獲產(chǎn)物，由此降低其純度，且其它污染物可由任何純化方法帶出。這一問(wèn)題尤其與脫氧膽酸和其鹽相關(guān)，因?yàn)檫@一產(chǎn)品已揭示用于去除不想要脂肪沉積的美容用途。參看例如美國(guó)專利第7,622,130號(hào)，其以全文引用的方式并入本文中。困為美容手術(shù)完全任意選擇，所以管理機(jī)構(gòu)通常要求較高安全標(biāo)準(zhǔn)。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明提供適用于制備膽汁酸或其鹽的方法和組合物以及純化如此制備的膽汁酸的方法。在一個(gè)實(shí)施例中，提供消除或限制在δ-9,11-烯類固醇的12-位進(jìn)行烯丙基氧化期間所采用的鉻(vi)氧化劑量的氧化方法。氧化反應(yīng)采用提供化合物1、2和3的環(huán)境上相容的共氧化劑混合物：其中pg是羥基保護(hù)基，r是氫、羥基或-opg，r1是膽汁酸的17-側(cè)鏈，所述膽汁酸選自由以下組成的群組：膽酸、脫氧膽酸、?；悄懰岷透拾蹦懰?，其中所述側(cè)鏈的羧基官能團(tuán)任選地經(jīng)c1-c6烷基酯化，且r2是氫，或r1和r2連同其所連接之碳原子一起形成酮基或酮基保護(hù)基；和各r3、r4和r5獨(dú)立地為c1-c3烷基。任選地，在另一步驟中，上述混合物經(jīng)鉻(vi)氧化劑處理以使部分氧化產(chǎn)物在12-位轉(zhuǎn)化成相應(yīng)酮。在此方法中，所采用的鉻(vi)氧化劑量顯著少于采用三氧化鉻作為唯一氧化劑的美國(guó)第12/153,446號(hào)的實(shí)例10中所報(bào)導(dǎo)的量。因此，在一個(gè)實(shí)施例中，提供一種方法，所述方法在δ-9,11-烯類固醇化合物4的12-位實(shí)現(xiàn)烯丙基氧化：形成相應(yīng)12-酮基化合物3：所述方法包含使化合物4與包含堿金屬次氯酸鹽和叔烷基過(guò)氧化氫的共氧化劑混合物在氧化條件下接觸，得到化合物3；其中pg是羥基保護(hù)基，r是氫、羥基或-opg，r1是膽汁酸的17-側(cè)鏈，所述膽汁酸選自由以下組成的群組：膽酸、脫氧膽酸、牛磺膽酸和甘氨膽酸，其中所述側(cè)鏈的羧基官能團(tuán)任選地經(jīng)c1-c6烷基酯化，且r2是氫，或r1和r2連同其所連接之碳原子一起形成酮基或酮基保護(hù)基。在另一實(shí)施例中，化合物4經(jīng)所述共氧化劑混合物氧化得到以下化合物：其中pg是羥基保護(hù)基，r是氫、羥基或-opg，r1是膽汁酸的17-側(cè)鏈，所述膽汁酸選自由以下組成的群組：膽酸、脫氧膽酸、?；悄懰岷透拾蹦懰幔渲兴鰝?cè)鏈的羧基官能團(tuán)任選地經(jīng)c1-c6烷基酯化，且r2是氫，或r1和r2連同其所連接之碳原子一起形成酮基或酮基保護(hù)基；和各r3、r4和r5獨(dú)立地為c1-c3烷基。任選地提供的混合物可用微過(guò)量鉻氧化劑處理以使化合物2和任選的化合物1轉(zhuǎn)化成化合物3，由此提高化合物3的總產(chǎn)率。因此，在這一實(shí)施例中，提供一種方法，所述方法在δ-9,11-烯類固醇化合物4的12-位實(shí)現(xiàn)烯丙基氧化：形成相應(yīng)12-酮基化合物3：所述方法包含使化合物4與包含堿金屬次氯酸鹽和叔烷基過(guò)氧化氫(tbhp)的共氧化劑混合物在氧化條件下接觸，得到化合物1、2和3的混合物；和進(jìn)一步用有效量的鉻(vi)氧化劑氧化所述混合物，得到化合物3，其中pg是羥基保護(hù)基，r是氫、羥基或-opg，r1是膽汁酸的17-側(cè)鏈，所述膽汁酸選自由以下組成的群組：膽酸、脫氧膽酸、?；悄懰岷透拾蹦懰?，其中所述側(cè)鏈的羧基官能團(tuán)任選地經(jīng)c1-c6烷基酯化，且r2是氫，或r1和r2連同其所連接的碳原子一起形成酮基或酮基保護(hù)基。在一個(gè)任選實(shí)施例中，使化合物1、2和3的混合物在經(jīng)鉻(vi)氧化劑氧化之前在氫化條件下反應(yīng)以使δ-9,11-烯氫化。當(dāng)所述任選氫化反應(yīng)在經(jīng)鉻(vi)氧化之前發(fā)生時(shí)，得到式5和6的新穎中間體：其中pg、r、r1、r2、r3、r4和r5如上文所定義。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例中，氫化反應(yīng)在氧化步驟完成之后發(fā)生。在另一實(shí)施例中，本發(fā)明提供一種制備δ-9,11-烯-12-酮基化合物7的方法：其由相應(yīng)δ-9,11-烯化合物8制備：其中pg是羥基保護(hù)基，r1是膽汁酸的17-側(cè)鏈，所述膽汁酸選自由以下組成的群組：膽酸、脫氧膽酸、?；悄懰岷透拾蹦懰幔渲兴鰝?cè)鏈的羧基官能團(tuán)任選地經(jīng)c1-c6烷基酯化，且r2是氫，或r1和r2連同其所連接的碳原子一起形成酮基或酮基保護(hù)基；其中所述方法包含：藉由在存在共氧化劑的情況下與式(r3)(r4)(r5)c-o-oh的叔烷基過(guò)氧化氫反應(yīng)在化合物8的12-位實(shí)現(xiàn)烯丙基氧化，其中各r3、r4和r5獨(dú)立地為c1-c3烷基，首先得到化合物9、10和7的混合物：且任選地其中化合物11b然后進(jìn)一步經(jīng)鉻(vi)氧化劑氧化，得到δ-9,11-烯-12-酮化合物7。在一個(gè)任選實(shí)施例中，使化合物9、10和7的混合物在經(jīng)鉻(vi)氧化劑氧化之前在氫化條件下反應(yīng)以使δ-9,11-烯氫化。當(dāng)所述任選氫化反應(yīng)在經(jīng)鉻(vi)氧化劑氧化之前發(fā)生時(shí)，得到式11a和11b的新穎中間體：其中pg、r1、r2、r3、r4和r5如上文所定義。在另一實(shí)施例中，本發(fā)明提供一種使11-β-羥基類固醇轉(zhuǎn)化成相應(yīng)12-酮基類固醇的方法，其中所述方法包含：a)選擇適當(dāng)保護(hù)的11-β-羥基類固醇；b)使所述11-β-羥基類固醇脫水，在所述類固醇中提供δ-9,11-烯官能團(tuán)；c)通過(guò)在存在共氧化劑的情況下使上述b)的類固醇產(chǎn)物與叔烷基過(guò)氧化氫反應(yīng)在12-位實(shí)現(xiàn)烯丙基氧化；和d)使δ-9,11-烯官能團(tuán)氫化，得到9-α-氫-11-二氫-12-酮基類固醇；和e)任選地用有效量的還原劑使上述d)中產(chǎn)生的9-α-氫-11-二氫-12-酮基類固醇的12-酮基官能團(tuán)還原，得到9-α-氫-11-二氫-12-α-羥基類固醇。在另一實(shí)施例中，本發(fā)明提供一種制備化合物12的方法，其包含在脫水條件下接觸化合物13(其中pg是羥基保護(hù)基)：得到化合物12。在另一實(shí)施例中，本發(fā)明提供一種制備式14化合物的方法，a)使氫化可的松：與至少1摩爾當(dāng)量的氫氣在氫化條件下接觸，得到4,5-二氫氫化可的松-化合物15：b)使化合物15與至少2當(dāng)量還原劑在羰基還原成醇基的條件下接觸，得到化合物16：c)在氧化條件下使化合物16與鄰位醇氧化劑接觸，得到化合物17：d)選擇性保護(hù)化合物17的3-羥基，得到式13化合物：其中pg是羥基保護(hù)基；e)在脫水條件下接觸式13化合物，得到式12化合物；f)和去除羥基保護(hù)基，得到化合物14。在另一實(shí)施例中，本發(fā)明提供一種制備式18化合物的方法：所述方法包含：a)使氫化可的松：與至少1摩爾當(dāng)量的氫氣在氫化條件下接觸，得到4,5-二氫氫化可的松-化合物15：b)在羰基還原成醇基的條件下使化合物15與至少2當(dāng)量還原劑接觸，得到化合物16：c)在氧化條件下使化合物16與鄰位醇氧化劑接觸，得到化合物17：d)選擇性保護(hù)化合物17的3-羥基，得到化合物13：其中pg是羥基保護(hù)基；e)在脫水條件下接觸式13化合物，得到化合物12；和f)和在烯烴形成條件下轉(zhuǎn)化化合物12，形成化合物18；在另一實(shí)施例中，本發(fā)明提供一種制備脫氧膽酸或其鹽的方法，所述方法包含：a)在上述程序后得到化合物18；b)在存在路易斯酸(lewisacid)的情況下使化合物18與丙炔酸烷酯ch≡cc(o)or'或丙烯酸烷酯ch2＝chc(o)or'(其中r'是烷基)反應(yīng)，形成化合物19，其中虛線是單鍵或雙鍵；h)使式19化合物與h2在氫化條件下反應(yīng)，形成化合物20：i)使化合物20與氧化劑反應(yīng)，得到化合物21：j)在氫化條件下使化合物21與h2反應(yīng)，得到化合物22：k)使化合物22與還原劑反應(yīng)，得到化合物23：l)在脫除保護(hù)基和水解條件下接觸化合物23，形成脫氧膽酸或其鹽。在另一實(shí)施例中，本發(fā)明提供一種制備化合物24的方法，所述方法包含：a)在包含氫氣和至少8重量％的50％濕(出于安全性而含水)pd/碳的氫化條件下于選自由丙酮、異丙醇、乙酸乙酯、n,n-二甲基甲酰胺和四氫呋喃組成的群組的溶劑中于維持在高壓下的高壓釜內(nèi)接觸化合物25：得到化合物26：b)在存在硫酸的情況下在除去水的條件下使化合物26脫水，得到化合物27：c)使化合物27與過(guò)量三叔丁氧基氫化鋁鋰在包括-40℃到-45℃溫度的選擇性還原條件下接觸，得到化合物28：d)在威蒂希反應(yīng)條件(wittigreactioncondition)下使化合物28與過(guò)量乙基三芳基鹵化膦接觸，得到化合物29：e)在包括過(guò)量無(wú)水乙酸酐的乙?；瘲l件下保護(hù)化合物29的羥基，得到化合物30：f)在存在過(guò)量二氯化c1-c2烷基鋁的情況下在烷基化條件下使化合物30與過(guò)量丙烯酸甲酯接觸，形成化合物31：g)使化合物31與氫氣和選自鉑和無(wú)水鈀/碳的氫化催化劑于惰性溶劑中在包括維持在高壓下的高壓釜的氫化條件下接觸，得到化合物32；h)在氧化條件下在包括過(guò)量c4-c6叔烷基過(guò)氧化氫作為第一氧化劑和過(guò)量naocl作為共氧化劑的共氧化條件下接觸溶解于惰性溶劑中的化合物32，任選地接著用微過(guò)量的氯鉻酸吡啶鎓進(jìn)一步氧化，得到化合物24：所述化合物用甲醇洗滌。在本發(fā)明的另一實(shí)施例中，提供一種制備脫氧膽酸或其鹽的方法，所述方法包含：a)使化合物24與氫氣和pd/c在包含氫氣和pd/碳的氫化條件下于維持在高壓下的高壓釜中接觸，任選地接著在氧化條件下用氯鉻酸吡啶鎓氧化在氫化反應(yīng)期間形成的任何12-羥基，得到化合物33；b)在還原條件下使化合物33與三叔烷氧基氫化鋁鋰反應(yīng)，得到化合物34：c)使化合物34暴露于脫除保護(hù)基和水解條件，形成脫氧膽酸或其鹽。在另一實(shí)施例中，本發(fā)明提供一種制備化合物26的方法，其通過(guò)使用選自由n,n-二甲基甲酰胺、丙酮、異丙醇、乙酸乙酯和包含多達(dá)5％水的丙酮水溶液組成的群組的溶劑在包含氫氣和10％pd/c的氫化條件下接觸化合物25來(lái)制備：在另一實(shí)施例中，本發(fā)明提供一種制備純度大于96％的脫氧膽酸(dca)或其鹽的方法，所述方法包含：(a)使純度為約95％或小于95％的dca與包含二氯甲烷的溶劑在一定條件下接觸，形成dca溶液；(b)使dca從得自步驟(a)的dca溶液中結(jié)晶，得到含有結(jié)晶dca的溶液；(c)回收純度大于96％的所述結(jié)晶dca。在另一實(shí)施例中，本發(fā)明提供一種制備純度大于96％的脫氧膽酸(dca)的方法，所述方法包含：(a)使純度為約95％或小于95％的dca與包含二氯甲烷和甲醇的溶劑在一定條件下接觸，形成dca溶液；(b)使dca從得自步驟(1)的dca溶液中結(jié)晶，得到含有結(jié)晶dca的溶液；(c)回收結(jié)晶dca和去除足量二氯甲烷以使得所述回收的結(jié)晶dca的純度大于96％。在另一實(shí)施例中，本發(fā)明提供一種合成的脫氧膽酸(dca)或其醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽，其中合成的dca或其醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽的純度為至少99％。在另一實(shí)施例中，本發(fā)明提供一種組合物，其包含純度為至少99％的dca或其醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽和醫(yī)藥學(xué)上可接受的賦形劑。在另一實(shí)施例中，本發(fā)明提供一種用于非外科手術(shù)去除局部脂肪的組合物，所述組合物基本上由純度為至少99％的dca或其醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽組成，其中dca基本上是所述組合物唯一的脂肪去除組分。在另一實(shí)施例中，本發(fā)明提供一種組合物，其包含dca和溶劑，所述溶劑包含含甲醇或不含甲醇的二氯甲烷，其中dca比溶劑的濃度為40:1到約10:1。附圖說(shuō)明圖1提供使用500mhz儀器得到的化合物9的質(zhì)子nmr譜。圖2提供使用125mhz儀器得到的化合物9的13cnmr譜。圖3提供化合物9的質(zhì)譜。具體實(shí)施方式在本發(fā)明中，各種公開(kāi)案、專利和公開(kāi)的專利說(shuō)明書以鑒別引用的方式參考。這些公開(kāi)案、專利和公開(kāi)的專利說(shuō)明書的揭示內(nèi)容以引用的方式并入本說(shuō)明中以更詳細(xì)地描述本發(fā)明所屬
技術(shù)領(lǐng)域：
：的現(xiàn)狀。如本文中所用，某些術(shù)語(yǔ)可具有以下確定的含義。除非上下文另有明確規(guī)定，否則如說(shuō)明書和附加權(quán)利要求書中所用，單數(shù)形式“一”和“所述”包括單數(shù)和復(fù)數(shù)提及物。除非另有指示，否則應(yīng)理解說(shuō)明書和權(quán)利要求書中所用的所有表示成分?jǐn)?shù)量、反應(yīng)條件等的數(shù)字在所有情況下都被術(shù)語(yǔ)“約”修飾。因此，除非相反指示，否則以下說(shuō)明書和隨附權(quán)利要求書中闡述的數(shù)字參數(shù)都是近似值。各數(shù)字參數(shù)至少應(yīng)根據(jù)所報(bào)導(dǎo)的有效數(shù)字的數(shù)目并通過(guò)應(yīng)用普通舍入技術(shù)來(lái)解釋。如本文中所用，術(shù)語(yǔ)“包含”意味著化合物和方法包括所列舉要素，但不排除其它要素?！盎旧嫌?.....組成”當(dāng)用于限定組合物和方法時(shí)意思應(yīng)為排除對(duì)化合物或方法具任何本質(zhì)意義的其它要素?！坝?.....組成”意思應(yīng)為排除所主張化合物和實(shí)質(zhì)性方法步驟的其它成分的不可忽視的要素。由各這些轉(zhuǎn)折語(yǔ)限定的實(shí)施例在本發(fā)明的范圍內(nèi)。因此，希望方法和化合物可包括額外的步驟和組分(包含)，或者包括無(wú)關(guān)緊要的額外步驟和化合物(基本上由......組成)，或者僅意欲所述方法步驟或化合物(由......組成)。術(shù)語(yǔ)“烷基”是指具有1至10個(gè)碳原子或1至6個(gè)碳原子的單價(jià)飽和脂肪族烴基。術(shù)語(yǔ)“低級(jí)烷基”是指具有1-6個(gè)碳原子或1-4個(gè)碳原子的烷基。此術(shù)語(yǔ)包括例如直鏈和分支鏈烴基，例如甲基(ch3-)、乙基(ch3ch2-)、正丙基(ch3ch2ch2-)、異丙基((ch3)2ch-)、正丁基(ch3ch2ch2ch2-)、異丁基((ch3)2chch2-)、仲丁基((ch3)(ch3ch2)ch-)、叔丁基((ch3)3c-)、正戊基(ch3ch2ch2ch2ch2-)和新戊基((ch3)3cch2-)。術(shù)語(yǔ)“叔烷基(t-alkyl/tert-alkyl)”是指式r1r2r3c-的叔烷基，其中各r1、r2和r3獨(dú)立地為1至3個(gè)碳原子的烷基且總共為10個(gè)碳原子。這些基團(tuán)優(yōu)選具有不超過(guò)4-6個(gè)碳原子。術(shù)語(yǔ)“氧化劑”是指在氧化還原反應(yīng)中可接受電子的試劑。以此方式，可向分子中添加氧，或可從分子中去除氫。僅舉例來(lái)說(shuō)，氧化劑包括瓊斯試劑(jonesreagent)、叔丁基過(guò)氧化氫、次氯酸鈉、氯鉻酸吡啶鎓和cro3。在一個(gè)實(shí)例中，氧化劑對(duì)鄰位(1,2)醇具專一性且包括高碘酸鹽化合物。這些氧化劑有時(shí)稱為“鄰位醇氧化劑”。術(shù)語(yǔ)“鉻氧化劑”是指能夠?qū)崿F(xiàn)氧化的鉻vi化合物。在一個(gè)實(shí)施例中，鉻氧化劑能夠?qū)⒉佳趸癁槿?，將仲醇氧化為酮。這些選擇性鉻氧化劑通常與例如吡啶等堿絡(luò)合。一種尤其優(yōu)選的鉻氧化劑是氯鉻酸吡啶鎓。在另一實(shí)施例中，鉻氧化劑能夠?qū)喖谆裂趸癁橐蚁┗伙柡?，從而形成烯丙基酮。在這一實(shí)施例中，優(yōu)選鉻氧化劑包括三氧化鉻和naocl與叔烷基過(guò)氧化氫(例如叔丁基過(guò)氧化氫，tbhp)的共氧化劑混合物。術(shù)語(yǔ)“羥基保護(hù)基”是指能夠保護(hù)化合物的羥基(-oh)并在適合的脫除保護(hù)基條件下釋放羥基的基團(tuán)。常見(jiàn)的這類基團(tuán)包括?；?與羥基的氧原子形成酯)，例如乙?；?、苯甲?；?，和與羥基的氧原子形成醚的基團(tuán)，例如苯甲基和甲氧基甲基，等。羥基保護(hù)基在有機(jī)合成領(lǐng)域中為熟知的。術(shù)語(yǔ)“消除條件”是指例如h2o、hcl或hbr等小分子從包含羥基、氯或溴基團(tuán)等的化合物中失去以形成包含烯基的相應(yīng)化合物的反應(yīng)條件。在一個(gè)實(shí)例中，消除條件包括脫水條件，其中羥基和鄰位氫原子被消除以形成乙烯基(“烯”)基團(tuán)。脫水條件可包括使羥基轉(zhuǎn)化成離去基，例如氯、溴、甲苯磺?；⒓谆酋；?os(o)cl。術(shù)語(yǔ)“ac”是指具有式ch3c(o)-的乙酰基。術(shù)語(yǔ)“酮基”是指基團(tuán)(>c＝o)。術(shù)語(yǔ)“酮基保護(hù)基”是指能夠保護(hù)化合物的酮基并在適合的脫除保護(hù)基條件下釋放酮基的基團(tuán)。常見(jiàn)的這類基團(tuán)包括縮酮和縮羰(基)酯(acylal)。酮基保護(hù)基在有機(jī)合成領(lǐng)域中為熟知的。適合的羥基或酮基保護(hù)基和可采用的其它保護(hù)基和其去除條件描述于例如以下書中：有機(jī)合成中的保護(hù)基(protectivegroupsinorganicsynthesis),第3版,t.w.格林尼(t.w.greene)和p.g.m.烏茲(p.g.m.wuts)編,約翰威利父子公司(johnwiley&sons,inc.),美國(guó)紐約(newyork,n.y.,u.s.a.),1999，且為所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員所熟知，這本書其全文引用的方式并入本文中。術(shù)語(yǔ)“縮酮”是指兩個(gè)-or22基團(tuán)連接于分子中的同一碳原子的基團(tuán)，其中r22表示烷基或兩個(gè)r22基團(tuán)連同其所連接的碳原子和兩個(gè)氧原子一起形成環(huán)結(jié)構(gòu)。兩個(gè)-or22基團(tuán)可相同或不同。術(shù)語(yǔ)“縮羰(基)酯”是指兩個(gè)-o(c＝o)r23基團(tuán)連接于分子中的同一碳原子的基團(tuán)，其中r23表示烷基或兩個(gè)r23基團(tuán)連同其所連接的碳原子和兩個(gè)-o(c＝o)-基團(tuán)一起形成環(huán)結(jié)構(gòu)。兩個(gè)-o(c＝o)r23基團(tuán)可相同或不同。術(shù)語(yǔ)“還原劑”是指可在氧化還原反應(yīng)中供給電子的試劑，從而使得向分子中加氫。適合的還原劑包括氫化鋁鋰、硼氫化鈉、氰基硼氫化鈉等。術(shù)語(yǔ)“乙?；噭笔侵缚上蚍肿拥拇疾糠种刑砑右阴；?ac)基團(tuán)ch3c(o)-的試劑。術(shù)語(yǔ)“酸”是指能夠供給h+的試劑。術(shù)語(yǔ)“路易斯酸”是指電子對(duì)受體。路易斯酸包括有機(jī)金屬試劑，例如鹵化烷基鋁(例如et2alcl和mealcl2)。術(shù)語(yǔ)“氫化條件”是指在一個(gè)或一個(gè)以上雙鍵上引入h2的適合的條件和催化劑。氫化催化劑包括基于鉑族金屬(鉑、鈀、銠和釕)的催化劑，例如pd/c和pto2。術(shù)語(yǔ)“烯化試劑”是指與酮反應(yīng)形成相應(yīng)烯烴的試劑。術(shù)語(yǔ)“烯烴形成條件”是指適于進(jìn)行這類轉(zhuǎn)變的條件。這類試劑的實(shí)例包括威蒂希試劑和威蒂希烯化條件。術(shù)語(yǔ)“回流條件”是指液體沸騰且沸騰液體的蒸氣冷凝并向下返回至下方液體中的條件。術(shù)語(yǔ)“醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽”是指脫氧膽酸的醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽，所述鹽源自所屬領(lǐng)域中熟知的多種有機(jī)和無(wú)機(jī)相對(duì)離子，且僅舉例來(lái)說(shuō)，包括鈉、鉀、鈣、鎂、銨和四烷基銨。如本文中所用的類固醇骨架編號(hào)遵循一般約定：應(yīng)了解，除非另作說(shuō)明，否則骨架僅表示碳原子的位置。兩個(gè)相鄰碳原子之間的一個(gè)或一個(gè)以上鍵可為雙鍵，且一個(gè)或一個(gè)以上碳原子可任選地經(jīng)取代。如本文中所用，術(shù)語(yǔ)“δ-9,11-烯類固醇”或“δ-9,11-烯化合物”是指9與11碳原子之間具有雙鍵的類固醇化合物，可由以下骨架表示：如本文中所用，術(shù)語(yǔ)“11-β-羥基類固醇”或“11-β-羥基化合物”是指11-位碳原子上具有羥基取代基的類固醇化合物，可由以下骨架表示：如本文中所用，術(shù)語(yǔ)“11-酮基類固醇”或“11-酮基化合物”是指11-位碳原子上具有酮基取代基的類固醇化合物，可由以下骨架表示：如本文中所用，術(shù)語(yǔ)“12-酮基類固醇”或“12-酮基化合物”是指12-位碳原子上具有酮基取代基的類固醇化合物，可由以下骨架表示：如本文中所用，術(shù)語(yǔ)“12-α-羥基類固醇”或“12-α-羥基化合物”是指12-位碳原子上具有羥基取代基的類固醇化合物，可由以下骨架表示：術(shù)語(yǔ)“膽汁酸的17-側(cè)鏈”是指17-位碳原子上的取代基。合成方法a.由氫化可的松合成dca在一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明提供化合物14的合成，所述為用于合成脫氧膽酸(dca)或其醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽的中間體。流程1.由氫化可的松合成3α-羥基-5β-雄-9(11)-烯-17-酮(14)其中pg是保護(hù)基。這一方法包含使化合物13(其合成在下文中描述)：其中pg是羥基保護(hù)基，暴露于脫水條件下，得到化合物12和去除羥基保護(hù)基。在一些實(shí)施例中，pg是-c(o)r1，其中r1是低級(jí)烷基。在一些實(shí)施例中，pg是-c(o)ch3。在一個(gè)實(shí)施例中，脫水條件包含使式13化合物的羥基轉(zhuǎn)化成-l，其中-l是離去基，例如-os(o)cl、-oso2r2(其中r2是低級(jí)烷基或苯基或經(jīng)烷基取代的苯基，例如-ch3或-c6h5ch3)或-opx2(其中x是溴或or3，其中r3是低級(jí)烷基)。在一些實(shí)施例中，脫水條件包含亞硫酰氯和吡啶。在一些實(shí)施例中，化合物13利用包含選擇性保護(hù)化合物17的3-羥基的方法來(lái)制備：在一個(gè)實(shí)施例中，保護(hù)基pg是-c(o)-低級(jí)烷基，例如-c(o)ch3。在一些實(shí)施例中，使化合物17暴露于?；瘲l件下，形成35，例如通過(guò)用乙酸酐和有機(jī)堿(例如三乙胺(et3n)、吡啶和/或二甲基氨基吡啶)處理17。在一些實(shí)施例中，化合物17利用包含在氧化條件下使化合物16與鄰位醇氧化劑接觸的方法來(lái)制備。在一些實(shí)施例中，鄰位醇氧化劑是四乙酸鉛(pb(oac)4)或高碘酸鈉(naio4)。在一些實(shí)施例中，化合物16利用包含在羰基還原成醇基的條件下使化合物15與至少2當(dāng)量還原劑接觸的方法來(lái)制備。在一些實(shí)施例中，還原劑包含硼氫化鈉、氰基硼氫化鈉、氫化鋁鋰等。在一些實(shí)施例中，化合物15利用包含在氫化條件下使氫化可的松：與至少1摩爾當(dāng)量氫氣反應(yīng)的方法來(lái)制備。在一些實(shí)施例中，氫化條件包含pd/c作為催化劑。在一些實(shí)施例中，氫化條件包含dmf作為溶劑。在一些實(shí)施例中，制備化合物12的方法包含：a)在氫化條件下使氫化可的松：與至少1摩爾當(dāng)量的氫氣接觸，得到4,5-β-二氫氫化可的松-化合物15：b)在羰基還原成醇基的條件下使化合物15與至少2當(dāng)量還原劑接觸，得到化合物16：c)在氧化條件下使化合物16與鄰位醇氧化劑接觸，得到化合物17：d)選擇性保護(hù)化合物17的3-羥基，得到化合物13：其中pg是羥基保護(hù)基；e)使化合物13經(jīng)受脫水條件，得到化合物12：另一方面，本發(fā)明提供一種制備化合物28的方法，所述方法包含使化合物12暴露于脫除保護(hù)基條件。在一些實(shí)施例中，pg是-c(o)低級(jí)烷基，且脫除保護(hù)基條件包含水解條件。在一些實(shí)施例中，水解條件包含堿金屬氫氧化物或堿金屬烷醇鹽和水。在一些實(shí)施例中，本發(fā)明提供一種制備dca或其鹽的方法，所述方法包含：a-e)如上所述制備化合物12f)在烯烴形成條件下轉(zhuǎn)化化合物12，形成化合物18：g)在存在路易斯酸(lewisacid)的情況下使化合物18與丙炔酸烷酯ch≡cc(o)or或丙烯酸烷酯ch2＝chc(o)or(其中r是烷基)反應(yīng)，形成化合物19，其中虛線是單鍵或雙鍵；h)在氫化條件下使式19化合物與h2反應(yīng)，形成化合物20i)使化合物20與氧化劑反應(yīng)，形成化合物21j)在氫化條件下使化合物21與h2反應(yīng)，形成化合物22k)使化合物22與還原劑反應(yīng)，形成化合物23：l)使化合物23暴露于脫除保護(hù)基和水解條件，形成脫氧膽酸或其鹽。在一個(gè)實(shí)施例中，部分a)的氫化條件包含pd/c催化劑。在一些實(shí)施例中，氫化條件包含溶劑dmf作為溶劑。在一個(gè)實(shí)施例中，部分b)的還原劑是nabh4。在一個(gè)實(shí)施例中，部分c)的鄰位醇氧化劑是naio4。在一個(gè)實(shí)施例中，式13-23化合物的保護(hù)基pg是-c(o)-低級(jí)烷基，例如-c(o)ch3。在一些實(shí)施例中，使化合物17暴露于?；瘲l件下形成35，例如通過(guò)用乙酸酐和有機(jī)堿(例如et3n、吡啶和/或二甲基氨基吡啶)處理17。在一個(gè)實(shí)施例中，步驟e)的脫水條件包含使式13化合物的羥基轉(zhuǎn)化成-l，其中-l是離去基，例如-os(o)cl、-oso2r2(其中r2是低級(jí)烷基或苯基或經(jīng)烷基取代的苯基，例如-ch3、-c6h5ch3)、-opx2(其中x是溴或or3，其中r3是低級(jí)烷基)。在一些實(shí)施例中，脫水條件包含亞硫酰氯和吡啶。在一個(gè)實(shí)施例中，部分f)的烯烴形成條件包含威蒂希試劑，例如ph3pch2ch3+br-。在一個(gè)實(shí)施例中，部分g)的路易斯酸是etalcl2。在一個(gè)實(shí)施例中，部分g)的丙炔酸烷酯是丙炔酸甲酯。在一個(gè)實(shí)施例中，部分g)的丙烯酸烷酯是丙烯酸甲酯。在一個(gè)實(shí)施例中，部分h)的氫化條件包含pto2或pd/c催化劑。在一個(gè)實(shí)施例中，部分i)的氧化劑是cro3。在一個(gè)實(shí)施例中，部分i)的氧化劑包含叔丁基過(guò)氧化氫。在一個(gè)實(shí)施例中，部分i)的氧化劑包含過(guò)量叔丁基過(guò)氧化氫(例如約35當(dāng)量)和過(guò)量次氯酸鈉(例如約7當(dāng)量)，在低溫(例如約0-5℃)下。在另一實(shí)施例中，部分i)的氧化劑包含鈀試劑(例如pd/c)、過(guò)量叔丁基過(guò)氧化氫(例如約5當(dāng)量)和碳酸鉀，在二氯甲烷(dcm)中。在一個(gè)實(shí)施例中，部分j)的氫化條件包含pd/c催化劑。在一個(gè)實(shí)施例中，部分k)的還原劑是lial(otbu)3h。在一個(gè)實(shí)施例中，部分l)的脫除保護(hù)基和水解條件當(dāng)pg是-c(o)ch3時(shí)包含使化合物38與堿金屬氫氧化物、堿金屬烷醇鹽或兩者的混合物反應(yīng)。在一個(gè)實(shí)施例中，堿金屬氫氧化物是lioh或naoh。在一個(gè)實(shí)施例中，脫氧膽酸的鹽可通過(guò)與堿金屬烷醇鹽或氫氧化物反應(yīng)來(lái)制備。脫氧膽酸的鹽包括鈉(na+)、鉀(k+)和鋰(li+)鹽。在一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明提供如實(shí)例3中所示的副產(chǎn)物，其可通過(guò)化學(xué)修飾來(lái)再循環(huán)以用作本文所述方法中的中間體。b.使11-β-羥基/11-酮基類固醇轉(zhuǎn)化成相應(yīng)12-α-羥基/12-酮基類固醇在另一實(shí)施例中，本發(fā)明提供使11-β-羥基/11-酮基類固醇高效轉(zhuǎn)化成相應(yīng)12-α-羥基/12-酮基類固醇的合成方法，所述化合物適用于合成膽汁酸。所述方法優(yōu)選采用例如9-had、可的松或氫化可的松等類固醇，所述類固醇還可利用例如以下文獻(xiàn)中所描述的方法合成制備和轉(zhuǎn)化成化合物4：2010年2月12日申請(qǐng)的名為“脫氧膽酸和其中間體的制備(preparationofdeoxycholicacidandintermediatesthereof,)”美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)案第61/303,816號(hào)，其以全文引用的方式并入本文中。在方法的一個(gè)方面，本發(fā)明針對(duì)一種方法，其使δ-9,11-烯化合物4：轉(zhuǎn)化成相應(yīng)12-酮基化合物3：其中pg是羥基保護(hù)基，r是氫、羥基或-opg，r1是膽汁酸的17-側(cè)鏈，所述膽汁酸選自由以下組成的群組：膽酸、脫氧膽酸、?；悄懰岷透拾蹦懰幔渲兴鰝?cè)鏈的羧基官能團(tuán)任選地經(jīng)c1-c6烷基酯化，且r2是氫，或r1和r2連同其所連接的碳原子一起形成酮基或酮基保護(hù)基，例如縮酮；其中所述方法包含：通過(guò)在存在共氧化劑的情況下與式(r3)(r4)(r5)c-o-oh的叔烷基過(guò)氧化氫反應(yīng)在化合物4的12-位實(shí)現(xiàn)烯丙基氧化，其中各r3、r4和r5獨(dú)立地為c1-c3烷基，首先得到化合物1、2和3的混合物：且其中任選地使化合物1和/或2進(jìn)一步轉(zhuǎn)化，得到δ-9,11-烯-12-酮化合物3。在一些實(shí)施例中，叔烷基過(guò)氧化氫是叔丁基化過(guò)氧化氫。共氧化劑通常是與烷基過(guò)氧化氫協(xié)同工作以在12-位實(shí)現(xiàn)氧化的任何氧化劑，不管氧化提供如上式1、2和3中所示的烯丙基酮基、烯丙基醇還是烯丙基過(guò)氧化物。在一些實(shí)施例中，共氧化劑是次氯酸鈉水溶液(naocl)。在一個(gè)實(shí)施例中，化合物4的12-位的烯丙基氧化利用過(guò)量叔丁基過(guò)氧化氫(例如等于或高于1.5當(dāng)量、等于或高于6當(dāng)量、等于或高于10當(dāng)量或約35當(dāng)量)和過(guò)量次氯酸鈉(例如約7當(dāng)量)在低溫(例如等于或低于22℃、等于或低于10℃和約0-5℃)下實(shí)現(xiàn)。叔丁基過(guò)氧化氫可以濃度為例如約70％的水溶液形式添加。次氯酸鈉可以濃度為例如約2.5％至13％、約5％或10％的水溶液形式添加。在一些實(shí)施例中，烯丙基氧化反應(yīng)在選自由水、乙酸乙酯、己烷、庚烷、甲苯、叔丁醇、二甲氧基丙烷、石油醚和二氯化乙烷或其組合組成的群組的溶劑中實(shí)現(xiàn)。在一些實(shí)施例中，可采用相轉(zhuǎn)移催化劑。使用這些共氧化劑可在不使用毒性鉻vi氧化劑的情況下實(shí)現(xiàn)氧化。在一些實(shí)施例中，共氧化劑是金屬化合物，例如cui。在一些實(shí)施例中，烯丙基氧化反應(yīng)在存在鈀/炭和堿的情況下實(shí)現(xiàn)。在另一實(shí)施例中，利用鈀試劑(例如pd/c、pd(oac)2·binap、pd(ococf3)2或pd(oac)2/木炭)、過(guò)量叔丁基過(guò)氧化氫(例如約5當(dāng)量)和碳酸鉀或磷酸二氫鈉于溶劑(例如dcm)中實(shí)現(xiàn)化合物4的12-位的烯丙基氧化。在一些實(shí)施例中，使化合物1轉(zhuǎn)化成化合物3包含在溶劑(例如dcm)中添加鈀試劑(例如pd/c、pd(oac)2·binap、pd(ococf3)2或pd(oac)2/木炭)、過(guò)量叔丁基過(guò)氧化氫(例如約5當(dāng)量)和碳酸鉀或磷酸二氫鈉。在一些實(shí)施例中，化合物2的氧化包含添加能夠?qū)⒋脊倌軋F(tuán)(-oh)氧化成酮基官能團(tuán)(＝o)的氧化劑，其在所屬領(lǐng)域中為已知的，例如氯鉻酸吡啶鎓(pcc)。當(dāng)如此使用時(shí)，所采用的氯鉻酸吡啶鎓的量顯著小于三氧化鉻[vi]的用量。舉例來(lái)說(shuō)，在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例中，所采用的氯鉻酸吡啶鎓與化合物2的摩爾比為約1至1.5，且優(yōu)選摩爾比為約1.1。此與先前用于實(shí)現(xiàn)氧化反應(yīng)的三氧化鉻的約4倍的量相比為有利的。在一些實(shí)施例中，首先從混合物中分離出化合物1，接著通過(guò)用例如還原劑(例如鋁汞齊)還原或催化氫化反應(yīng)來(lái)轉(zhuǎn)化為化合物2。在方法的另一方面，本發(fā)明針對(duì)一種兩步法，其使化合物1、2和3的混合物：轉(zhuǎn)化成相應(yīng)12-酮基化合物39：其中各pg、r、r1、r2、r3、r4和r5如上文所定義；其中所述方法包含首先在氫化條件下使所述混合物反應(yīng)；和然后在氧化條件下使由此形成的產(chǎn)物反應(yīng)。在一些實(shí)施例中，化合物1、2和3的混合物的氫化反應(yīng)可形成包含化合物5、6和39的化合物的混合物。在一些實(shí)施例中，氫化條件包含氫氣、催化劑和溶劑。在一些實(shí)施例中，催化劑選自由以下組成的群組：基于鉑(pt)、鈀(pd)、銠(rh)和釕(ru)的催化劑，例如pd/c、rhcl(pph3)3和pto2。在一些實(shí)施例中，溶劑是乙酸乙酯(acoet)。在一些實(shí)施例中，氧化條件包含能夠?qū)⒋脊倌軋F(tuán)(-oh)氧化成酮基官能團(tuán)(＝o)的氧化劑，其在所屬領(lǐng)域中為已知的。所屬領(lǐng)域中已知的氧化條件包括(但不限于)科里-基姆氧化(corey-kimoxidation)(使用n-氯丁二酰亞胺和二甲硫)、戴斯-馬丁氧化(dess-martinoxidation)(使用2-碘?；郊姿峄虼魉?馬丁高碘烷)、瓊斯氧化(jonesoxidation)(使用cro3)和斯文氧化(swernoxidation)(使用二甲亞砜和乙二酰氯)。在一些實(shí)施例中，氧化劑是氯鉻酸吡啶鎓(pcc)。其它氧化劑可包括(但不限于)重鉻酸吡啶、過(guò)碳酸鈉、碘?；郊姿?、v2o5、na2cr2o7、cro3、過(guò)碳酸鈉、脲過(guò)氧化氫和過(guò)硫酸氫鉀(oxone)等。當(dāng)r1和r2連同其所連接的碳原子一起形成酮基時(shí)，可利用例如wo2008/157635(以全文引用的方式并入本文中)中所述的方法等所屬領(lǐng)域中已知的方法，使酮基轉(zhuǎn)化為膽汁酸的17-位側(cè)鏈。在方法的一個(gè)方面，所述方法進(jìn)一步包含使化合物39還原，得到化合物40：在一些實(shí)施例中，使化合物39還原得到化合物40包含添加能夠立體選擇性、優(yōu)選立體專一性將酮基官能團(tuán)(＝o)還原為醇官能團(tuán)(-oh)的還原劑，例如三叔丁氧基氫化鋁鋰。在一些實(shí)施例中，r1和r2連同其所連接的碳原子一起形成酮基。在一些實(shí)施例中，r1和r2連同其所連接的碳原子一起形成酮基保護(hù)基，例如：其中n為1、2或3，且波形線表示連接至分子其余部分的連接點(diǎn)。在一些實(shí)施例中，r1是膽汁酸的17-側(cè)鏈，所述膽汁酸選自由以下組成的群組：膽酸、脫氧膽酸、?；悄懰岷透拾蹦懰帷Ｔ谝恍?shí)施例中，所述側(cè)鏈的羧基官能團(tuán)任選地經(jīng)c1-c6烷基酯化，c1-c6烷基例如c1-c4烷基，例如甲基。在一些實(shí)施例中，r1選自由以下組成的群組：其中r6是低級(jí)烷基，且波形線表示連接至類固醇骨架的17-位的連接點(diǎn)。在一些實(shí)施例中，pg是-c(o)r12，其中r12是任選地經(jīng)1至5個(gè)選自由鹵基、-or13組成的群組的取代基取代的低級(jí)烷基；和任選地經(jīng)1至5個(gè)選自由鹵基、低級(jí)烷基和-or13組成的群組的取代基取代的苯基；其中r13是氫或低級(jí)烷基。在一些實(shí)施例中，pg是-c(o)ch3或-c(o)ch2ch3。在一些實(shí)施例中，pg是：在一些實(shí)施例中，pg是-r14，其中r14選自由以下組成的群組：任選地經(jīng)苯基、-or13或乙烯基(-ch＝ch2)取代的低級(jí)烷基；-si(r15)3；雜環(huán)烷基；和任選地經(jīng)1至5個(gè)選自由鹵基、低級(jí)烷基和-or13組成的群組的取代基取代的苯基；其中r13是氫或低級(jí)烷基，且各r15獨(dú)立地選自由低級(jí)烷基和苯基組成的群組。在一些實(shí)施例中，pg選自由以下組成的群組：本發(fā)明方法采用使11-β-羥基類固醇(可利用常規(guī)酮基還原反應(yīng)由相應(yīng)11-酮基類固醇制備)轉(zhuǎn)化，接著脫水，得到δ-9,11-烯類固醇，其利用烷基過(guò)氧化氫氧化成相應(yīng)12-酮基類固醇。與先前已知的使用例如cro3等氧化劑使δ-9,11-烯類固醇轉(zhuǎn)化成12-酮基類固醇的方法相比，這一方法提供出乎意料高的產(chǎn)率。如以下實(shí)例2之表中所示，脫氧膽酸制備期間使用cro3的產(chǎn)率通常為小于50％或小于40％。使用本發(fā)明方法，一致獲得高于60％的出乎意料高的產(chǎn)率。此外，使用naocl(漂白劑)和tbhp顯著比鉻(vi)氧化劑環(huán)境相容。在方法的另一方面，本發(fā)明針對(duì)一種使11-β-羥基類固醇轉(zhuǎn)化成相應(yīng)12-酮基類固醇的方法，其中所述方法包含：a)選擇適當(dāng)保護(hù)的11-β-羥基類固醇；b)使11-β-羥基類固醇脫水，在所述類固醇中得到δ-9,11-烯官能團(tuán)；c)通過(guò)在存在共氧化劑的情況下使上述b)的類固醇產(chǎn)物與烷基氫過(guò)氧化物反應(yīng)在12-位實(shí)現(xiàn)烯丙基氧化；和d)使δ-9,11-烯官能團(tuán)氫化，得到9-α-氫-11-二氫-12-酮基類固醇；和e)任選地用有效量的還原劑使上述d)中產(chǎn)生的9-α-氫-11-二氫-12-酮基類固醇的12-酮基官能團(tuán)還原，得到9-α-氫-11-二氫-12-α-羥基類固醇。在一些實(shí)施例中，烷基過(guò)氧化氫是叔丁基過(guò)氧化氫。共氧化劑可為本文所述的共氧化劑之一。在一些實(shí)施例中，11-β-羥基類固醇通過(guò)用至少化學(xué)計(jì)量量的還原劑使相應(yīng)11-酮基類固醇還原得到11-β-羥基類固醇來(lái)制備。在一些實(shí)施例中，11-β-羥基類固醇是氫化可的松或氫化可的松衍生物，例如經(jīng)保護(hù)的氫化可的松。應(yīng)了解，本文所述方法的個(gè)別步驟可如所描述依次進(jìn)行，但未必依次進(jìn)行。一個(gè)或一個(gè)以上步驟可作為較大流程的一部分進(jìn)行。所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員可輕易地使本文所述化合物的其它部分反應(yīng)，從而制得這些化合物的類似物。c.由化合物25合成化合物24在另一實(shí)施例中，本發(fā)明提供一種制備化合物24的方法，所述方法包含：a)在包含氫氣和至少8重量％的50％濕pd/碳的氫化條件下于選自由丙酮、異丙醇、乙酸乙酯、n,n-二甲基甲酰胺和四氫呋喃組成的群組的溶劑中于維持在高壓下的高壓釜內(nèi)接觸化合物25：得到化合物26：b)在存在硫酸的情況下在除去水的條件下使化合物26脫水，得到化合物27：c)在包括-40℃到-45℃溫度的選擇性還原條件下使化合物27與過(guò)量三叔丁氧基氫化鋁鋰接觸，得到化合物28：d)在威蒂希反應(yīng)條件下使化合物28與過(guò)量乙基三芳基鹵化膦接觸，得到化合物29：e)在包括過(guò)量無(wú)水乙酸酐的乙?；瘲l件下保護(hù)化合物29的羥基，得到化合物30：f)在存在過(guò)量二氯化c1-c2烷基鋁的情況下在烷基化條件下使化合物30與過(guò)量丙烯酸甲酯接觸，形成化合物31：g)在惰性溶劑中在包括維持在高壓下的高壓釜的氫化條件下使化合物31與氫氣和選自鉑和無(wú)水鈀/碳的氫化催化劑接觸，得到化合物32；h)在氧化條件下在包括過(guò)量c4-c6叔烷基過(guò)氧化氫作為第一氧化劑和過(guò)量naocl作為共氧化劑的共氧化條件下接觸溶解于惰性溶劑中的化合物32，任選地接著用微過(guò)量的氯鉻酸吡啶鎓進(jìn)一步氧化，得到化合物24：所述化合物用甲醇洗滌。在一個(gè)替代實(shí)施例中，本發(fā)明提供一種制備化合物31的方法，其通過(guò)在存在路易斯酸的情況下使化合物30與丙烯酸甲酯接觸來(lái)制備。在另一實(shí)施例中，路易斯酸是etalcl2。在另一實(shí)施例中，本發(fā)明提供一種制備化合物26的方法，其通過(guò)在包含氫氣和10％pd/c的氫化條件下接觸化合物25來(lái)制備：其中氫化反應(yīng)在存在n,n-二甲基甲酰胺或丙酮的情況下發(fā)生。在另一實(shí)施例中，氫化反應(yīng)在存在丙酮的情況下發(fā)生。在另一實(shí)施例中，本發(fā)明提供一種制備化合物24的方法，所述方法包含：a)在包含氫氣和至少8重量％的50％濕pd/碳的氫化條件下于選自由丙酮、異丙醇、乙酸乙酯、n,n-二甲基甲酰胺和四氫呋喃組成的群組的溶劑中于維持在高壓下的高壓釜內(nèi)接觸化合物25：得到化合物26：b)在存在硫酸的情況下在除去水的條件下使化合物26脫水，得到化合物27：c)在包括-40℃到-45℃溫度的選擇性還原條件下使化合物27與過(guò)量三叔丁氧基氫化鋁鋰接觸，得到化合物28：d)在威蒂希反應(yīng)條件下使化合物28與過(guò)量乙基三芳基鹵化膦接觸，得到化合物29：e)在包括過(guò)量無(wú)水乙酸酐的乙?；瘲l件下保護(hù)化合物29的羥基，得到化合物30：f)在存在過(guò)量二氯化c1-c2烷基鋁的情況下在烷基化條件下使化合物30與過(guò)量丙烯酸甲酯接觸，形成化合物31：g)在惰性溶劑中在包括維持在高壓下的高壓釜的氫化條件下使化合物31與氫氣和選自由：鉑和無(wú)水鈀/碳組成的群組的氫化催化劑接觸，得到化合物32；h)在氧化條件下在包括過(guò)量c4-c6叔烷基過(guò)氧化氫作為第一氧化劑和過(guò)量naocl作為共氧化劑的共氧化條件下接觸溶解于惰性溶劑中的化合物32，任選地接著用微過(guò)量的氯鉻酸吡啶鎓進(jìn)一步氧化，得到化合物24：i)任選地用甲醇洗滌化合物24。在另一實(shí)施例中，步驟a)包含丙酮作為溶劑；步驟b)包含二氯甲烷作為溶劑；步驟c)包含無(wú)水四氫呋喃作為溶劑，在惰性氛圍下；步驟d)的威蒂希反應(yīng)條件包含于作為溶劑的無(wú)水四氫呋喃中的叔丁醇鉀，在惰性氛圍下；步驟e)包含三乙胺和4-二甲基氨基吡啶；步驟f)的二氯化c1-c2烷基鋁包含于作為溶劑的無(wú)水二氯甲烷中的二氯化乙基鋁，在惰性氛圍下，在0-5℃下；步驟g)的氫化催化劑包含于作為溶劑的乙酸乙酯中的無(wú)水鈀/碳；和步驟h)的c4-c6叔烷基過(guò)氧化氫包含于作為溶劑的水中的叔丁基過(guò)氧化氫，在低于5℃的溫度下。在另一實(shí)施例中，本發(fā)明提供一種制備脫氧膽酸或其鹽的方法，所述方法包含：a)在包含氫氣和pd/碳的氫化條件下使化合物24與氫氣和pd/c接觸，任選地接著在氧化條件下用氯鉻酸吡啶鎓氧化在氫化反應(yīng)期間形成的任何12-羥基，得到化合物33；b)在還原條件下使化合物33與三叔烷氧基氫化鋁鋰反應(yīng)，得到化合物34：c)使化合物34暴露于脫除保護(hù)基和水解條件，形成脫氧膽酸或其鹽?；衔锪硪环矫妫景l(fā)明針對(duì)一種式1或5化合物：其中pg是羥基保護(hù)基；r是氫、羥基或-opg；r1是膽汁酸的17-側(cè)鏈，所述膽汁酸選自由以下組成的群組：膽酸、脫氧膽酸、?；悄懰?，其中所述側(cè)鏈的羧基官能團(tuán)任選地經(jīng)c1-c6烷基或苯甲基酯化，和甘氨膽酸，且r2是氫，或r1和r2連同其所連接的碳原子一起形成酮基或酮基保護(hù)基；和各r3、r4和r5獨(dú)立地為c1-c3烷基。在一些實(shí)施例中，r1選自由以下組成的群組：其中r6是低級(jí)烷基，且波形線表示連接至類固醇骨架的17-位的連接點(diǎn)。在一些實(shí)施例中，r1是膽汁酸的17-側(cè)鏈，所述膽汁酸選自由以下組成的群組：膽酸、脫氧膽酸、?；悄懰岷透拾蹦懰帷Ｔ谝恍?shí)施例中，所述側(cè)鏈的羧基官能團(tuán)任選地經(jīng)c1-c6烷基(例如甲基、乙基或叔丁基)酯化。在一些實(shí)施例中，r1和r2連同其所連接的碳原子一起形成酮基。在一些實(shí)施例中，r1和r2連同其所連接的碳原子一起形成酮基保護(hù)基，例如：其中n為1、2或3，且波形線表示連接至分子其余部分的連接點(diǎn)。在一些實(shí)施例中，式1化合物是化合物41：在一些實(shí)施例中，式1化合物選自由以下組成的群組：化合物42、43、44、45或46：在一些實(shí)施例中，式5化合物是化合物47：在一些實(shí)施例中，式5化合物選自由以下組成的群組：化合物48、49、50、51或52：在一些實(shí)施例中，式6化合物選自由以下組成的群組：化合物48a、49a、50a、51a或52a：d.由化合物53合成dca在另一實(shí)施例中，提供一種制備脫氧膽酸(dca)或其醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽的方法，所述方法包含：(1)使式53化合物與還原劑反應(yīng)形成式54化合物，其中pg是保護(hù)基且r是烷基(2)使式54化合物暴露于脫除保護(hù)基和水解條件，形成脫氧膽酸或其醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽。在一些實(shí)施例中，pg是-c(o)r1，其中r1是低級(jí)烷基。在一些實(shí)施例中，pg是-c(o)ch3。在一些實(shí)施例中，水解條件包含堿金屬氫氧化物、堿金屬烷醇鹽或其混合物。在一些實(shí)施例中，堿金屬氫氧化物是lioh或naoh。在一些實(shí)施例中，式53化合物是式33化合物，其為3α-乙酰氧基-5β-膽烷-12-酮-24-酸甲酯：且式54化合物是式34化合物，其為3α-乙酰氧基-12α-羥基-5β-膽烷-24-酸甲酯：在一些實(shí)施例中，本發(fā)明提供一種制備式26化合物的方法，其為9α-羥基-5β-雄烷-3,17-二酮：所述方法包含在氫化條件下使9α-羥基雄-4-烯-3,17-二酮120與h2反應(yīng)形成9α-羥基-5β-雄烷-3,17-二酮。在一些實(shí)施例中，氫化條件包含溶劑，所述溶劑是dmf、丙酮、乙酸乙酯等。在一些實(shí)施例中，本發(fā)明提供一種制備式27化合物的方法，式27化合物為5β-雄-9(11)-烯-3,17-二酮：所述方法包含使式26化合物與酸反應(yīng)，形成式27化合物。在一些實(shí)施例中，本發(fā)明提供一種制備式29化合物的方法，式29化合物為(z)-3α-羥基-5β-孕-9(11),17(20)-二烯：且所述方法包含在烯烴形成條件下使式28化合物與雙碳烯化試劑反應(yīng)，形成(z)-3α-羥基-5β-孕-9(11),17(20)-二烯。在一些實(shí)施例中，式28化合物通過(guò)使式27化合物與還原劑反應(yīng)形成式28化合物來(lái)制備。在一些實(shí)施例中，本發(fā)明提供一種制備式18化合物的方法：所述方法包含使式29化合物轉(zhuǎn)化成式18化合物，其中pg是保護(hù)基。在一些實(shí)施例中，pg是-c(o)r1，其中r1是低級(jí)烷基。在一些實(shí)施例中，pg是-c(o)ch3。在一些實(shí)施例中，式18化合物是式30化合物，其為(z)-3α-乙酰氧基-5β-孕-9(11),17(20)-二烯：其中所述方法包含使式55化合物暴露于?；瘲l件，形成(z)-3α-乙酰氧基-5β-孕-9(11),17(20)-二烯。在一些實(shí)施例中，本發(fā)明提供一種制備式19化合物的方法：其中r是烷基，pg是保護(hù)基，且虛線是單鍵或雙鍵，所述方法包含在存在路易斯酸的情況下使式18化合物與丙炔酸烷酯ch≡cc(o)or或丙烯酸烷酯ch2＝chc(o)or反應(yīng)，形成式19化合物。在一些實(shí)施例中，pg是-c(o)r1，其中r1是低級(jí)烷基。在一些實(shí)施例中，pg是-c(o)ch3。在一些實(shí)施例中，pg是ch3c(o)，且r是ch3。在一些實(shí)施例中，式19化合物是式31化合物，其為3α-乙酰氧基-5β-膽-9(11),16-二烯-24-酸甲酯：且其中所述方法包含在存在路易斯酸的情況下使式30化合物與ch2chc(o)och3反應(yīng)，形成3α-乙酰氧基-5β-膽-9(11),16-二烯-24-酸甲酯。在一些實(shí)施例中，本發(fā)明提供一種制備式21化合物的方法：其中pg是保護(hù)基，且r是烷基，所述方法包含使式20化合物與氧化劑反應(yīng)形成式21化合物。在一些實(shí)施例中，式20化合物通過(guò)在氫化條件下使式19化合物與h2反應(yīng)形成式20化合物來(lái)制備，其中虛線是單鍵或雙鍵。在一些實(shí)施例中，式21化合物是式24化合物，其為3α-乙酰氧基-5β-膽-9(11)-烯-12-酮-24-酸甲酯：且所述方法包含使式56化合物與氧化劑反應(yīng)形成式24化合物。在一些實(shí)施例中，本發(fā)明提供一種制備式53化合物的方法：其中pg是保護(hù)基，且r是烷基，所述方法包含在氫化條件下使式57化合物與h2反應(yīng)形成式53化合物。在一些實(shí)施例中，pg是-c(o)r1，其中r1是低級(jí)烷基。在一些實(shí)施例中，pg是-c(o)ch3。在一些實(shí)施例中，式53化合物是式33化合物，其為3α-乙酰氧基-5β-膽烷-12-酮-24-酸甲酯：且所述方法包含在氫化條件下使式58化合物與h2反應(yīng)，形成3α-乙酰氧基-5β-膽烷-12-酮-24-酸甲酯。在一些實(shí)施例中，所述方法包含(a)在氫化條件下使式21化合物與h2反應(yīng)形成式53化合物與式59化合物的混合物：(b)使式53化合物與式59化合物的混合物與氧化劑在一定條件下接觸，形成式57化合物與式53化合物的混合物，和(c)在氫化條件下使式57化合物與式53化合物的混合物與h2接觸，形成式53化合物。在一些實(shí)施例中，氧化劑是氯鉻酸吡啶鎓。優(yōu)選實(shí)施例的化合物可由可容易地獲得的起始材料使用以下一般方法和程序制備。應(yīng)了解，除非另有說(shuō)明，否則當(dāng)給定典型或優(yōu)選工藝條件(即反應(yīng)溫度、時(shí)間、反應(yīng)物的摩爾比、溶劑、壓力等)時(shí)，也可使用其它工藝條件。雖然最佳反應(yīng)條件可隨所使用的特定反應(yīng)物或溶劑而變化，但所述條件可由所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員通過(guò)常規(guī)優(yōu)化程序確定。另外，如所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員顯而易見(jiàn)，可能必需常規(guī)保護(hù)基以防止某些官能團(tuán)經(jīng)受不想要的反應(yīng)。適于各種官能團(tuán)的保護(hù)基以及適于保護(hù)特定官能團(tuán)與脫除特定官能團(tuán)保護(hù)基的條件為所屬領(lǐng)域所熟知。舉例來(lái)說(shuō)，若干保護(hù)基描述于t.w.格林尼(t.w.greene)和g.m.烏茲(g.m.wuts),有機(jī)合成中的保護(hù)基(protectinggroupsinorganicsynthesis),第3版,威利公司(wiley),紐約(newyork),1999和其中所引用的參考文獻(xiàn)中。本文所述反應(yīng)的起始材料和試劑一般是已知化合物，或可由已知程序或其明顯變體來(lái)制備。舉例來(lái)說(shuō)，可從以下商品供應(yīng)商處獲得許多起始材料和試劑：例如阿爾德里奇化學(xué)公司(aldrichchemicalco.)(美國(guó)威斯康星州密爾沃基(milwaukee,wisconsin,usa))、巴赫姆(bachem)(美國(guó)加利福尼亞州托蘭斯(torrance,california,usa))、艾馬卡化學(xué)(emka-chem)或西格瑪(sigma)(美國(guó)密蘇里州圣路易斯(st.louis,missouri,usa))。其它可由以下標(biāo)準(zhǔn)參考書中描述的程序或其明顯變體來(lái)制備：例如菲澤(fieser)和菲澤(fieser),有機(jī)合成的試劑(reagentsfororganicsynthesis),第1-15卷(約翰威利父子公司(johnwileyandsons),1991)；羅德(rodd),碳化合物的化學(xué)(chemistryofcarboncompounds),第1-5卷和增刊(愛(ài)思唯爾科學(xué)出版社(elseviersciencepublishers),1989),有機(jī)反應(yīng)(organicreactions),第1-40卷(約翰威利父子公司,1991)；瑪曲(march),先進(jìn)有機(jī)化學(xué)(advancedorganicchemistry),(約翰威利父子公司,第4版)；和拉羅克(larock),綜合有機(jī)轉(zhuǎn)變(comprehensiveorganictransformations)(vch出版社公司(vchpublishersinc.),1989)。舉例來(lái)說(shuō)，氫化可的松可由可的松使用常規(guī)還原技術(shù)制備。優(yōu)選實(shí)施例的各種起始材料、中間體和化合物適當(dāng)時(shí)可使用常規(guī)技術(shù)分離和純化，這些技術(shù)例如沉淀、過(guò)濾、結(jié)晶、蒸發(fā)、蒸餾和色譜。這些化合物的表征可使用常規(guī)方法進(jìn)行，例如利用熔點(diǎn)、質(zhì)譜、核磁共振和各種其它光譜分析。方法學(xué)本發(fā)明的純化方法采用純度為約95％或小于95％且在一些情況下純度為約80％或小于80％的脫氧膽酸(dca)。這些方法使這些dca組合物的純度增加到至少約96％或至少99％。在一方面，本發(fā)明提供一種純化脫氧膽酸(dca)得到純度大于96％或?yàn)橹辽?9％的dca的方法。在一個(gè)實(shí)施例中，所述方法包含：(a)使純度為約95％或小于95％的dca與包含二氯甲烷的溶劑在一定條件下接觸，形成dca溶液；(b)使dca從得自步驟(a)的dca溶液中結(jié)晶，得到含有結(jié)晶dca的溶液；(c)回收結(jié)晶dca和去除足量二氯甲烷以使得回收的結(jié)晶dca的純度大于96％。在一些實(shí)施例中，本發(fā)明提供一種純化脫氧膽酸(dca)得到純度大于96％或?yàn)橹辽?9％的dca的方法。在一個(gè)實(shí)施例中，所述方法包含：(a)使純度為約95％或小于95％的dca與包含二氯甲烷和甲醇的溶劑在一定條件下接觸，形成dca溶液；(b)使dca從得自步驟(a)的dca溶液中結(jié)晶，得到含有結(jié)晶dca的溶液；(c)回收結(jié)晶dca和去除足量二氯甲烷以使得回收的結(jié)晶dca的純度大于96％。在一些實(shí)施例中，重復(fù)任一上述方法。在一個(gè)實(shí)施例中，將純度為約95％或小于95％的dca溶解于二氯甲烷與甲醇的混合物中。必要時(shí)，可通過(guò)加熱溶劑到回流來(lái)促進(jìn)溶解。此外，必要時(shí)，任何不溶解的雜質(zhì)可通過(guò)過(guò)濾去除，通常在高溫下過(guò)濾溶液，例如使用孔徑尺寸為約5μm或小于5μm的過(guò)濾器。本發(fā)明方法的溶劑系統(tǒng)中最初所用的二氯甲烷和甲醇的量最佳由約100:1至約3:1或約50:1至約4:1或約20:1至10:1的二氯甲烷與甲醇的重量比確定。所用dca的量相對(duì)于最初所用溶劑的總量最佳由約40:1至約10:1或約30:1至約15:1或約19:1的溶劑比dca的比率確定。在另一實(shí)施例中，在回流溫度下添加額外的二氯甲烷。額外二氯甲烷的量在并入溶劑系統(tǒng)中的二氯甲烷的最初量的約20至100體積％范圍內(nèi)。在一些實(shí)施例中，額外二氯甲烷的量為所用二氯甲烷最初量的約30-70體積％或約50體積％。溶解和任選過(guò)濾之后，然后通過(guò)在大氣壓力下共沸蒸餾去除實(shí)質(zhì)上所有甲醇，留下主要包含二氯甲烷的溶液。使dca從二氯甲烷中結(jié)晶得到純度為至少96％或至少99％的dca。在一個(gè)實(shí)施例中，dca源自哺乳動(dòng)物來(lái)源，其一般可自市面上購(gòu)得。在另一實(shí)施例中，dca合成得到。制備合成dca的方法在本文中和以u(píng)s2008-0318870a1公開(kāi)的美國(guó)專利申請(qǐng)案第12/035,339號(hào)和以u(píng)s2009-0270642a1公開(kāi)的美國(guó)專利申請(qǐng)案第12/153,446號(hào)中均有描述，所述申請(qǐng)案以全文引用的方式并入本文中。組合物在組合物的一個(gè)方面，本發(fā)明提供一種為合成脫氧膽酸(dca)或其醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽的化合物，其中合成dca或其醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽的純度為至少99％。在組合物的另一方面，本發(fā)明提供一種包含dca和包含二氯甲烷和甲醇的溶劑的溶液，其中溶劑比dca的濃度為40:1至約10:1，且另外其中二氯甲烷比甲醇的比率為約100:1至約3:1。本發(fā)明還提供一種組合物，其包含純度為至少99％的dca或其醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽和可接受的賦形劑。本發(fā)明還提供一種組合物，基本上由純度為至少99％的dca或其醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽組成，其中dca基本上是所述組合物的唯一脂肪去除組分。組合物可包含本發(fā)明dca與至少一種可接受的賦形劑或醫(yī)藥學(xué)上可接受的賦形劑的組合。這些賦形劑可為所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員通?？色@得的任何固體、液體、半固體或在氣霧劑組合物的情況下氣態(tài)賦形劑。固體賦形劑包括淀粉、纖維素、滑石、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明膠、麥芽、稻米、面粉、白堊、硅膠、硬脂酸鎂、硬脂酸鈉、單硬脂酸甘油酯、氯化鈉、脫脂奶粉等。液體和半固體賦形劑可選自甘油、丙二醇、水、乙醇和各種油類，包括石油、植物起源油或合成起源油，例如花生油、大豆油、礦物油、芝麻油等。液體載劑的實(shí)例，尤其對(duì)可注射溶液來(lái)說(shuō)，包括水、生理鹽水、右旋糖水溶液和二元醇。組合物中的dca的濃度可為約0.001至10％、0.01至5％或0.1至2％w/w、w/v或v/v。在一些實(shí)施例中，dca的濃度可為約0.1-5％w/w或約1％w/w。在一些實(shí)施例中，脂肪溶解溶液包含多達(dá)100、50、20、10、5、2、1、0.5、0.2、0.05、0.02或0.01克一種或一種以上清潔劑、膽汁酸和/或膽汁鹽、脫氧膽酸或其鹽或脫氧膽酸鈉。在一些實(shí)施例中，本文中的組合物不包括脂質(zhì)、磷脂或磷脂酰膽堿。在一些實(shí)施例中，本文中的組合物包括至多5％w/w、w/v或v/v脂質(zhì)、磷脂或磷脂酰膽堿。在一些實(shí)施例中，組合物可進(jìn)一步包含選自由以下組成的群組的第二治療劑：抗微生物劑、血管收縮劑、抗血栓形成劑、抗凝血?jiǎng)?、抗抑郁?suds-depressant)、消炎劑、止痛劑、分散劑、抗分散劑、滲透增強(qiáng)劑、類固醇、鎮(zhèn)靜劑、肌肉松弛劑和抗腹瀉劑。在一些實(shí)施例中，溶液處于含有多達(dá)500ml溶液的容器中。這些容器可為注射器或可裝載注射器的容器。使用方法純度優(yōu)選為至少99％的本發(fā)明dca或其醫(yī)藥上可接受的鹽或組合物適用于各種醫(yī)藥或美容應(yīng)用，例如如美國(guó)專利第7,622,130號(hào)和美國(guó)專利申請(qǐng)案第2005-0267080a1號(hào)和第2006-0127468a1號(hào)中所述，所述申請(qǐng)案以全文引用的方式并入本文中。在一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明涉及減少個(gè)體皮下脂肪沉積的方法。這些方法包含向個(gè)體的皮下脂肪沉積局部投與包含以下的組合物的步驟：(i)純度優(yōu)選為至少99％的脂肪溶解有效量的脫氧膽酸或其鹽(例如脫氧膽酸鈉)；(ii)醫(yī)藥、獸醫(yī)或美容賦形劑；且其中dca或其鹽基本上是組合物的唯一脂肪去除組分。在一些實(shí)施例中，脂肪沉積從美容角度來(lái)看無(wú)吸收力，且將其去除可改善個(gè)體外觀。在一些實(shí)施例中，脂肪沉積與選自由以下組成的群組的病狀有關(guān)：肥胖癥、脂肪再分布綜合征、眼瞼脂肪疝出、脂肪瘤、德?tīng)柨鲜喜?dercum'sdisease)、脂質(zhì)營(yíng)養(yǎng)不良、水牛背脂質(zhì)營(yíng)養(yǎng)不良、頸背面脂肪、內(nèi)臟肥胖、乳房增大(breastenlargement)、肥胖過(guò)度、軀干和手臂周圍體脂擴(kuò)散和與脂肪團(tuán)相關(guān)的脂肪沉積。在一些實(shí)施例中，上述方法不包括對(duì)所述個(gè)體進(jìn)行外科手術(shù)。本文所揭示的實(shí)施例的上述和其它方面可結(jié)合以下實(shí)例更透徹地理解。實(shí)例在說(shuō)明書以下和別處的實(shí)例中，以下縮寫具有所指示含義。如果縮寫未定義，那么其具有公認(rèn)的含義。概要：氧和水份敏感材料的所有操作都在氬氣或氮?dú)夥諊掠脴?biāo)準(zhǔn)兩頸火焰干燥燒瓶進(jìn)行。柱色譜使用硅膠(60-120目)進(jìn)行。分析薄層色譜(tlc)在默克基辛格(merckkiesinger)60f254(0.25mm)板上進(jìn)行。色斑通過(guò)uv光(254nm)或裝填硫酸(5％)和對(duì)茴香醛(3％)于乙醇中的溶液來(lái)觀測(cè)。裝置：質(zhì)子和碳-13核磁共振譜(1hnmr和13cnmr)在瓦里安墨丘利-蓋米尼200(varianmercury-gemini200)(1hnmr，200mhz；13cnmr，50mhz)或瓦里安墨丘利-伊諾瓦500(varianmercury-inova500)(1hnmr，500mhz；13cnmr，125mhz)光譜儀上記錄，其中以溶劑共振作為內(nèi)標(biāo)物(1hnmr，chcl3，7.26ppm或dmso，2.5ppm和dmso-h2o，3.33ppm；13cnmr，cdcl3，77.0ppm或dmso，39.5ppm)。1hnmr數(shù)據(jù)如下報(bào)導(dǎo)：化學(xué)位移(δ，ppm)，多重性(s＝單峰，d＝二重峰，t＝三重峰，q＝四重峰，br＝寬峰，m＝多重峰)，耦合常數(shù)(hz)和積分。紅外光譜(ft-ir)在jasco-460+型號(hào)上進(jìn)行。質(zhì)譜由珀金埃爾默api-2000光譜儀(perkinelmerapi-2000spectrometer)使用es+模式獲得。熔點(diǎn)使用lab-india熔點(diǎn)測(cè)量裝置測(cè)定且未校正。hplc色譜使用具pda檢測(cè)器的shimadzu-2010型號(hào)記錄。比旋度采用jasco-1020在589nm下確定且未校正。化學(xué)品：除非另外說(shuō)明，否則市售試劑不經(jīng)純化即使用。乙醚和thf從鈉/二苯甲酮中蒸餾得來(lái)。使用實(shí)驗(yàn)室級(jí)無(wú)水dmf、市售dcm、乙酸乙酯和己烷。實(shí)例1由氫化可的松合成3α-乙酰氧基-5β-雄烷-9,11-烯-17-酮(36)步驟1向氫化可的松(25.0g)于dmf(150ml)中的溶液中添加10％pd/c(1.5g，6-wt％)，且所得漿液在高壓釜(60psi)中在25-35℃下氫化6小時(shí)。在由tlc(30％etoac的dcm溶液)證明起始材料完全消失后，經(jīng)(8g)床過(guò)濾粗反應(yīng)混合物并用dmf(100ml)洗滌。通過(guò)在低于65℃下真空蒸餾完全去除溶劑，得到呈白色固體狀的化合物15(23.0g，91.5％)。步驟2向化合物15(23.0g)于乙醇(350ml)和dcm(350ml)中的溶液中添加硼氫化鈉(2.4g)，且在25-35℃下攪拌所得溶液3小時(shí)。此時(shí)，添加50％丙酮水溶液(200ml)以淬滅過(guò)量試劑，然后添加高碘酸鈉(33.7g)。在25-35℃下攪拌所得溶液16小時(shí)。tlc顯示中間體完全消失(40％etoac的dcm溶液)。向反應(yīng)混合物中添加水(400ml)。分離各相且用dcm(600ml)萃取水層。合并有機(jī)層，然后用飽和鹽水溶液(200ml)洗滌。真空蒸發(fā)溶劑，得到呈白色固體狀的粗化合物16(23.0g)。在30℃下于己烷(200ml)中攪拌粗產(chǎn)物1小時(shí)，過(guò)濾且用己烷(50ml)洗滌，得到呈白色固體狀的化合物16(19.0g，98％)。步驟3在25-35℃下向化合物16(19.3g)于dcm(340ml)中的溶液中添加三乙胺(12.7g)、dmap(0.76g)和乙酸酐(12.9g)。在25-35℃下攪拌2小時(shí)后，tlc分析(60％etoac的己烷溶液)顯示反應(yīng)完全。用飽和碳酸氫鈉溶液(200ml)洗滌反應(yīng)混合物，接著用鹽水溶液(100ml)再次洗滌。經(jīng)na2so4(50g)干燥有機(jī)層并過(guò)濾。通過(guò)真空蒸餾濃縮濾液，得到呈灰白色固體狀的化合物35(18.0g，82％)。步驟4在25-35℃下向化合物35(18.0g)于吡啶(100ml)中的溶液中添加亞硫酰氯(6.0ml)，且在25-35℃下攪拌所得溶液1小時(shí)。此時(shí)，由tlc(30％etoac的己烷溶液)確定反應(yīng)完全。在低于60℃下通過(guò)真空蒸發(fā)去除吡啶。將粗物質(zhì)溶解于水(100ml)與乙酸乙酯(180ml)的混合物中，且分離各相。用乙酸乙酯(180ml)萃取水相，且合并有機(jī)相。用2nhcl(100ml)和飽和鹽水溶液(100ml)洗滌合并的有機(jī)相。經(jīng)無(wú)水na2so4(40g)干燥后，過(guò)濾混合物且通過(guò)真空蒸餾濃縮濾液到干燥，得到呈白色固體狀的化合物36(15.0g，88％)。實(shí)例2(z)-3α-乙酰氧基-5β-孕-9(11),17(20)-二烯(30)：化合物30可利用類似于實(shí)例8中所述的程序，使化合物28轉(zhuǎn)化成化合物30來(lái)制備。由化合物60制備和純化dca的方法和實(shí)例描述于gb2452358和2009年12月18日申請(qǐng)的名為“純化脫氧膽酸的方法(methodsforthepurificationofdeoxycholicacid)”的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)案61/288,132中，兩者以全文引用的方式并入本文中。實(shí)例3dca或其中間體制備期間分離的雜質(zhì)以下化合物在本文所述合成期間作為雜質(zhì)回收：上述化合物具有作為可再循環(huán)進(jìn)入產(chǎn)生化合物18的反應(yīng)流程中的中間體的效用。舉例來(lái)說(shuō)，化合物61和62可通過(guò)常規(guī)方式脫氫，得到4,5-烯化合物，而此可再氫化以在5-位達(dá)成適當(dāng)立體化學(xué)?；衔?3和65的17-酮基可通過(guò)例如縮酮形成等常規(guī)方式來(lái)保護(hù)。化合物63與65的3-羥基然后可氧化形成3-酮基。對(duì)于化合物63，在4,5位處脫氫，接著氫化，將在5-位達(dá)成適當(dāng)立體化學(xué)。對(duì)于化合物63與65，使3-酮基還原，接著將17-酮基脫除保護(hù)基，得到化合物18?；衔?4可在3-羥基處選擇性保護(hù)且然后可氧化17-羥基，接著在3-羥基處脫除保護(hù)基，得到化合物18?？裳趸?,17二-烯丙基化合物66，得到3,17二-酮基化合物，而所述化合物可通過(guò)常規(guī)方式還原，得到3,17-二羥基化合物，例如化合物64。可在3-位氧化化合物67，然后還原，且保護(hù)3-羥基，得到化合物18。類似地，其余化合物可同樣修飾以產(chǎn)生一種或一種以上用于本發(fā)明方法中的中間體。實(shí)例4利用本發(fā)明方法由化合物79合成化合物80在0-5℃下，使用70％叔丁基過(guò)氧化氫((ch3)3c-o-oh)于水(35當(dāng)量)中的溶液和10％次氯酸鈉(naocl)(7.0當(dāng)量；在7小時(shí)持續(xù)時(shí)間中添加)于乙酸乙酯中的溶液氧化化合物79(120.0g)。處理后，用亞硫酸鈉處理有機(jī)層，接著進(jìn)行pcc(1.0當(dāng)量)處理，得到185g殘余物。將殘余物于20％甲醇水溶液(2體積)中進(jìn)行漿液純化，得到75.2g(60.6％產(chǎn)率)純化合物80。使用cro3的由化合物79合成化合物80的比較程序在潔凈且干燥的燒瓶中，分兩個(gè)批次(40g和25g)向化合物79(65g，139mmol)于acoh(975ml)中的溶液中添加cro3(65g，599mmol)。(注意：高度放熱，需要時(shí)用冰水冷卻控制溫度低于50℃)。在30-35℃下加熱所得混合物3小時(shí)。可使用25-35℃的較低溫度。由tlc(30％etoac于己烷中的溶液，nmt2％化合物79)得知反應(yīng)完全后，添加異丙醇(108ml)，且在低于60℃下，在真空蒸發(fā)溶劑之前，攪拌混合物15分鐘。向殘余物材料中添加水(1200ml)和mtbe(650ml)。分離兩相且用mtbe(2×650ml)萃取水層。用水(750ml)和鹽水溶液(332ml)洗滌合并的有機(jī)層。在低于50℃下在真空下完全去除溶劑。向殘余物中添加甲醇(195ml)，且在低于50℃下經(jīng)由真空蒸餾完全去除溶劑。再次添加甲醇(130ml)，且冷卻混合物到10-15℃，在10-15℃下攪拌1小時(shí)，過(guò)濾，且用冷(0-5℃)甲醇(65ml)洗滌濾餅。在熱空氣干燥器中在50-55℃下干燥白色固體直至lod為nmt0.5％，得到化合物80(36g，53.7％產(chǎn)率)。1hnmr(500mhz,cdcl3):δ＝5.71(s,1h),4.71-4.75(m,1h),3.66(s,3h),2.37-2.42(m,3h),2.02-2.31(m,2h),2.0(s,3h),1.67-1.98(m,9h),1.24-1.56(m,9h),1.19(s,3h),1.01-1.02(d,j＝6.5hz,3h),0.90(s,3h)。13cnmr(500mhz,cdcl3):δ＝204.9,174.5,170.4,163.8,123.6,73.7,53.4,53.0,51.3,47.2,41.7,39.8,37.7,35.2,35.0,33.9,31.4,30.5,29.6,27.6,27.3,26.4,26.1,24.1,21.2,19.4,10.6。質(zhì)譜(m/z)＝445.0[m++1],462.0[m++18]。ir＝3437,3045,2946,2870,1729,1680,1252,1168,1020cm-1。m.p.＝137-139℃(來(lái)自etoac/己烷混合物)。[α]d＝+93(c＝1％chcl3溶液)。實(shí)例5下表顯示使用cro3或(ch3)3c-o-oh和naocl作為氧化劑由化合物79制備化合物80的結(jié)果。*純度基于化合物峰面積比總峰面積的比率**純度基于化合物峰面積比已知參考標(biāo)準(zhǔn)物的峰面積的比率實(shí)例6過(guò)氧化物化合物81的鑒別過(guò)濾純化合物80后，收集過(guò)濾母液(富含約30％雜質(zhì)，保留時(shí)間為3.14分鐘)。利用柱色譜分離3.14分鐘雜質(zhì)，得到100mg呈油狀的純產(chǎn)物。nmr和質(zhì)譜數(shù)據(jù)揭露雜質(zhì)是12-叔丁基過(guò)氧基化合物81，提供于圖1-3中。實(shí)例7在室溫下，用pd/c(12wt％)、叔丁基過(guò)氧化氫(5當(dāng)量)和碳酸鉀(0.025當(dāng)量)于二氯甲烷(10份)中處理12-叔丁基過(guò)氧基化合物81(50mg)24小時(shí)，hplc分析揭露仍存在89％未反應(yīng)的化合物12-叔丁基過(guò)氧基化合物81，且僅觀察到11％化合物80。在45-50℃下在氫氣壓力下，使用商業(yè)干燥10％pd/c(25wt％)于乙酸乙酯(25份)中氫化化合物80(10.0g)18小時(shí)，得到約25％烯丙醇，在室溫下用pcc(1.2當(dāng)量)處理烯丙醇2小時(shí)，然后用水和鹽水溶液洗滌。真空蒸餾一半有機(jī)層，然后在45-50℃下在50psi氫氣壓力下使用新鮮pd/c(25wt％)再進(jìn)行氫化18小時(shí)，得到9.5g化合物82(95％產(chǎn)率，hplc-ri純度為87％)。實(shí)例8在以下流程2中，提供一種脫氧膽酸總合成的流程。流程2化合物25轉(zhuǎn)化成化合物26：溶劑的選擇在這一步驟的變體中研究數(shù)種溶劑：使用上述溶劑進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)，且結(jié)果制表如下。當(dāng)使用二氯甲烷、甲醇或乙酸乙酯作為化合物25氫化反應(yīng)溶劑的溶劑時(shí)，觀察到(通過(guò)tlc)起始材料完全消耗。產(chǎn)物分離和由hplc-ri分析后，化合物26的5α-異構(gòu)體與5β-異構(gòu)體以約1:1比率形成。當(dāng)使用丙酮作為化合物25氫化反應(yīng)溶劑時(shí)，觀察到(通過(guò)tlc)起始材料完全消耗。產(chǎn)物分離和由hplc-ri分析后，幾乎僅形成化合物26的5β-異構(gòu)體，且形成少于10％的5α-異構(gòu)體。因此，丙酮在這一步驟中的選擇性大于90％，且產(chǎn)率大于85％。向9α-羥基雄-4-烯-3,17-二酮(150.0g)于丙酮(3600ml)中的溶液中添加10％pd/c(12g，8wt％，50％濕)，且在25-25℃下于高壓釜(50psi)中氫化所得漿液5小時(shí)。在由tlc(30％etoac的dcm溶液)證明起始材料完全消失后，經(jīng)床(20g)過(guò)濾粗反應(yīng)混合物并用二氯甲烷(1500ml)洗滌。真空去除濾液，且獲得呈白色固體狀的粗產(chǎn)物(145.0g)。在0℃下使此粗產(chǎn)物與(145.0g)丙酮(300ml)組合，攪拌1小時(shí)，然后過(guò)濾并用冷丙酮(150ml)洗滌且在50℃下真空干燥。此得到呈白色固體狀的化合物26(129g，85％)。tlc：炭化對(duì)茴香醛。化合物26的rf＝0.48和化合物25的rf＝0.3。洗提劑是含30％etoac的dcm。1hnmr(500mhz,cdcl3):δ＝2.40-2.37(m,1h),2.11-.2.02(m,2h),1.91-1.31(m,19h),0.96(s,3h),0.84(s,3h)。13cnmr(125mhz,cdcl3):δ＝221.0,95.7,80.1,47.0,43.6,38.6,38.5,37.1,35.9,33.41,32.9,32.0,27.9,26.9,21.5,20.2,20.0,12.6。質(zhì)譜(m/z)＝305.0[m++1],322.0[m++18]。ir(kbr)＝3443,2938,1722,1449,1331,1138cm-1。m.p＝213-216℃(丙酮)。[α]d＝+116(c＝1％chcl3溶液)。hplc/ri純度：99.0％?；衔?6轉(zhuǎn)化成化合物27：在5-10℃下在惰性氛圍下，經(jīng)15分鐘向化合物26(121g)于dcm(1815ml)中的溶液中添加硫酸(19.1ml)。使溫度上升到25-35℃，且攪拌混合物2小時(shí)。此時(shí)，確定反應(yīng)完全(tlc，含30％etoac的dcm)。用水(600ml)洗滌混合物，然后用10％nahco3水溶液(600ml)洗滌。依次用水(200ml)和飽和鹽水溶液(200ml)再次洗滌有機(jī)層。然后真空蒸餾溶劑，得到呈灰白色固體狀的化合物27(108.2g，95％)。粗產(chǎn)物不經(jīng)進(jìn)一步純化即用于下一步驟中。tlc：炭化對(duì)茴香醛，化合物27的rf＝0.76和化合物25的rf＝0.44。洗提劑是含30％etoac的dcm。1hnmr(500mhz,cdcl3):δ＝5.61(s,1h),2.57-2.47(m,2h),2.42-2.24(m,4h),2.20-2.05(m,3h),1.99-1.86(m,2h),1.85-1.84(d,j＝6hz1h),1.63-1.57(m,5h),1.40-1.37(d,j＝13.5hz,1h)1.28-1.25(dd,j＝4.0,13.5hz,1h),1.17(s,3h)0.85(s,3h)。13cnmr(125mhz,cdcl3):δ＝221.3,212.8,140.1,118.5,48.5,45.9,44.3,43.5,39.0,38.0,37.3,36.1,35.8,33.3,28.8,26.0,25.5,22.5,13.9。質(zhì)譜(m/z)＝287[m++1],304[m++18]。ir(kbr)＝3450,2913,1737,1707,1413,1403,1207cm-1。m.p.＝143.4-145.9℃(dcm)。[α]d＝+142(c＝1％chcl3溶液)。hplc/ri純度：96.7％?；衔?7轉(zhuǎn)化成化合物30：在-40℃至-45℃下在惰性氛圍下，向化合物27(108.0g)于thf(1080ml)中的溶液中添加三叔丁氧基氫化鋁鋰(700ml)。在-40℃至-45℃下攪拌所得反應(yīng)混合物2小時(shí)。在由tlc(含30％etoac的dcm)證明反應(yīng)完全后，通過(guò)添加2nhcl溶液淬滅反應(yīng)混合物。分離各相且用二氯甲烷(648ml)萃取所得水層。合并有機(jī)部份，且依次用水(648ml)和飽和鹽水溶液(540ml)洗滌。真空蒸發(fā)有機(jī)層，得到化合物28，溶解于thf(540ml)中。在25-35℃下在氮?dú)庀?，?jīng)20分鐘向溴化乙基三苯基膦(417g)于thf(216ml)中的溶液中逐滴添加叔丁醇鉀(1086ml，1mthf溶液)。在相同溫度下再攪拌所得暗紅色反應(yīng)混合物1小時(shí)。在25-35℃下，在30-40分鐘內(nèi)，向上述懸浮液中緩慢添加上述化合物28的溶液。再攪拌反應(yīng)混合物3-5小時(shí)，使得起始材料完全消耗(由tlc證明；含30％etoac的dcm)。用冰水(1.080l)淬滅反應(yīng)混合物。用mtbe(2×540ml)萃取水層，且用飽和鹽水溶液(540ml)洗滌合并的有機(jī)萃取物，真空濃縮有機(jī)層且通過(guò)使用mtbe(2×540ml)純化粗物質(zhì)，過(guò)濾，從濾液中真空蒸餾出25％溶劑。冷卻化合物29的溶液到25℃，在25-35℃下在氮?dú)庀孪蚱渲刑砑尤野?105.2ml)、dmap(4.5g)和乙酸酐(53.5ml)。在25-35℃下攪拌2小時(shí)后，由tlc(含10％etoac的己烷)確定反應(yīng)完全。依次用水(1080ml)和鹽水溶液(324ml)洗滌反應(yīng)混合物。真空濃縮有機(jī)層，得到粗化合物30(225g)，使殘余物在2％甲醇水溶液中再結(jié)晶，得到85g純化合物30(63.5％產(chǎn)率，hplc-ri純度為96％)。tlc：炭化對(duì)茴香醛，化合物30的rf＝0.5和化合物29的rf＝0.15。洗提劑＝含10％etoac的己烷。1hnmr(500mhz,cdcl3):δ＝5.38(s,1h),5.20-5.18(d,j＝6.5hz,1h),4.76-4.72(m,1h),2.40-2.35(m,3h),2.25-2.22(m,1h),2.09-2.03(m,3h),2.01(s,3h),1.98-1.49(m,10h),1.41-1.31(m,2h),1.27-1.16(m,3h),1.07(s,3h),0.79(s,3h)。13cnmr(125mhz,cdcl3):δ＝170.5,150.0,140.4,119.6,114.3,74.7,53.5,42.0,41.7,39.6,38.6,35.6,35.3,33.8,31.9,29.5,27.8,26.7,26.6,25.5,21.3,16.9,13.2質(zhì)譜(m/z)＝342.9[m++1],360[m++18]。ir(chcl3)＝3440,3035,1730,1451,1367,1258,1028cm-1。mp＝93.9-97.8℃。[α]d＝+109(c＝1％chcl3溶液)。hplc/ri純度：96.0％?；衔?0經(jīng)由化合物84轉(zhuǎn)化成化合物32：在0-5℃下在惰性氛圍下，向化合物30(56g)于dcm(560ml)中的溶液中添加丙烯酸甲酯(35.13ml)，攪拌60分鐘，冷卻溶液到0-5℃，經(jīng)60分鐘的時(shí)間添加二氯化乙基鋁(272.9ml；1.8m甲苯溶液)。溫度然后上升到25-35℃，且攪拌混合物約18小時(shí)。此時(shí)，因?yàn)橛蓆lc(含10％etoac的己烷)分析顯示反應(yīng)完全，所以將混合物傾入冰冷水(1120ml)中。分離各相且用dcm(2×255ml)萃取水層。合并有機(jī)層且依次用水(560ml)和鹽水溶液(560ml)洗滌，真空蒸發(fā)有機(jī)層，得到呈油狀的化合物84(66g)。在25-35℃下，向化合物84于乙酸乙酯(550ml)中的溶液中添加pd/c(6.7g)于乙酸乙酯(110ml)中的漿液。在約70psi氫氣壓力下攪拌所得漿液約16小時(shí)。由hplc監(jiān)測(cè)反應(yīng)的進(jìn)展。在床(25g)上過(guò)濾催化劑，且用乙酸乙酯(990ml)洗滌濾餅。真空蒸發(fā)濾液，得到呈固體狀的化合物32(59g，85％)。tlc：炭化對(duì)茴香醛，化合物32的rf＝0.32和化合物84的rf＝0.30。洗提劑＝含10％etoac的己烷。1hnmr(500mhz,cdcl3):δ＝5.31(s,1h),4.73(m,1h),3.66(s,3h),2.37-2.03(m,7h),2.01(s,3h),1.98-1.09(m,18h),1.06(s,3h),0.92-0.91(d,j＝6.0hz,3h),0.59(s,3h)。13cnmr(125mhz,cdcl3):δ＝174.6,170.5,139.8,119.5,74.8,56.0,53.3,51.4,41.9,41.7,40.9,38.5,36.4,35.4,35.2,33.8,31.0,30.9,29.5,28.2,27.8,26.8,26.7,25.2,21.4,17.9,11.5質(zhì)譜(m/z)＝448.2[m++18]。ir(kbr)＝3435,3039,2941,1729,1448,1435,1252,1022cm-1。m.p.＝122.1-123.9℃。[α]d＝+56(c＝1％chcl3溶液)。hplc/ri純度：93.0％?；衔?0經(jīng)由化合物85轉(zhuǎn)化成化合物32：在0℃下在惰性氛圍下向丙炔酸甲酯(13.58ml，153mmol)于dcm(100ml)中的溶液中添加二氯化乙基鋁(104.5ml，192mmol，1.8m甲苯溶液)。攪拌所得溶液15分鐘，然后添加化合物30(22g，64.3mmol)。在0℃下再攪拌20分鐘后，溫度上升到25℃且再保持18小時(shí)。此時(shí)，由tlc確定反應(yīng)完全，且將混合物傾入冷(0℃)水(200ml)中。分離各相且用dcm(150ml)萃取水層。合并有機(jī)層，且依次用水(200ml)和飽和鹽水溶液(100ml)洗滌。然后經(jīng)無(wú)水na2so4(40g)干燥并過(guò)濾。真空濃縮濾液，且通過(guò)在甲醇(280ml)中形成漿液純化所得固體，得到呈白色固體狀的化合物85(17.5g，68％)。tlc：炭化對(duì)茴香醛，85的rf＝0.32和30的rf＝0.5。tlc流動(dòng)相：含10％etoac的己烷。1hnmr(500mhz,cdcl3):δ＝6.92-6.926(q,j＝7.5,15.5hz,1h),5.80-5.83(d,j＝16hz,1h),5.37-5.43(m,2h),4.73-4.75(m,1h),3.73(s,3h),3.02-3.04(t,j＝6.5hz,1h),2.15-2.23(m,3h),2.05-2.08(m,3h),2.01(s,3h),1.48-1.99(m,8h),1.24-1.34(m,2h),1.20-1.21(d,j＝5hz,3h),1.11-1.17(m,1h),1.07(s,3h),0.67(s,3h)。13cnmr(125mhz,cdcl3):δ＝170.5,167.2,155.0,153.7,141.6,124.0,118.8,118.7,74.6,53.9,51.3,45.7,41.7,38.8,37.1,35.5,35.3,34.6,33.7,31.8,29.5,27.7,26.5,26.5,21.3,19.7,15.7。質(zhì)譜(m/z)＝444.0[m++18]。ir(kbr)＝3443,3030,2930,1719,1650,1247,1359,1032,1170cm-1。m.p.＝114-116℃(甲醇)[α]d＝+102(c＝1％chcl3溶液)。elsd純度：99.7％，保留時(shí)間＝19.57(inertsilods3v250×4.6mm，5μm)，acn:含0.1％tfa的水(90:10)。向化合物85(17.5g，41mmol)于etoac(350ml)中的溶液中添加pto2(4.37g)，且所得漿液在帕爾裝置(parrapparatus)(70psi)中氫化14-16小時(shí)。此時(shí)，由tlc確定反應(yīng)完全。經(jīng)小塞過(guò)濾混合物，且真空去除溶劑，得到呈白色固體狀的化合物32(17.0g，96.0％)。上述產(chǎn)物不經(jīng)進(jìn)一步純化即用于下一步驟中。tlc：炭化對(duì)茴香醛，32的rf＝0.32和85的rf＝0.30。tlc流動(dòng)相：含10％-etoac的己烷。1hnmr(500mhz,cdcl3):δ＝5.31(s,1h),4.73(m,1h),3.66(s,3h),2.03-2.37(m,7h),2.01(s,3h),1.09-1.98(m,18h),1.06(s,3h),0.91-0.92(d,j＝6.0hz,3h),0.59(s,3h)。13cnmr(125mhz,cdcl3):δ＝174.6,170.5,139.8,119.5,74.8,56.0,53.3,51.4,41.9,41.7,40.9,38.5,36.4,35.4,35.2,33.8,31.0,30.9,29.5,28.2,27.8,26.8,26.7,25.2,21.4,17.9,11.5質(zhì)譜(m/z)＝448.2[m++18]。ir(kbr)＝3435,3039,2941,1729,1448,1435,1252,1022cm-1。m.p.＝122.1-123.9℃(etoac)。[α]d＝+56(c＝1％chcl3溶液)elsd純度：97.7％；保留時(shí)間＝14.57(zorbaxsbc-18150×4.6mm，5μm，acn：含0.1％tfa的水(90:10)化合物32轉(zhuǎn)化成化合物24：向化合物32(20g)于乙酸乙酯(200ml)中的溶液中添加70％tbhp水溶液(200ml)，冷卻反應(yīng)溶液到0℃，在0-5℃下緩慢添加10％次氯酸鈉持續(xù)約6-7小時(shí)，在相同溫度下攪拌2-3小時(shí)。由tlc(洗提劑＝含20％etoac的己烷)得知化合物32完全消失后，分離有機(jī)層，且用乙酸乙酯(60ml)萃取水層。用水(2×400ml)洗滌合并的有機(jī)層，接著在50-55℃下經(jīng)20％亞硫酸鈉溶液(220ml)處理2小時(shí)，分離兩個(gè)層，在25-30℃下用氯鉻酸吡啶鎓(10.9g)處理有機(jī)層6-8小時(shí)。由tlc(洗提劑＝含20％etoac的己烷)得知烯丙醇完全消失后，依次用熱水(4×500ml)和飽和鹽水溶液(100ml)洗滌有機(jī)層。在45-50℃下真空蒸發(fā)有機(jī)層。通過(guò)在5-10℃下將所得粗物質(zhì)與20％甲醇水溶液(40ml)一起攪拌1小時(shí)來(lái)純化，過(guò)濾；用20％甲醇水溶液(20ml)洗滌濾餅，然后在45-50℃下真空干燥，得到呈淺黃色固體狀的化合物24(13g)。tlc：炭化對(duì)茴香醛，化合物24的rf＝0.28和化合物32的rf＝0.52。洗提劑＝含20％etoac的己烷。1hnmr(500mhz,cdcl3):δ＝5.71(s,1h),4.75-4.71(m,1h),3.66(s,3h),2.42-2.37(m,3h),2.31-2.02(m,2h),2.0(s,3h),1.98-1.67(m,9h),1.56-1.24(m,9h),1.19(s,3h),1.02-1.01(d,j＝6.5hz,3h),0.90(s,3h)。13cnmr(500mhz,cdcl3):δ＝204.9,174.5,170.4,163.8,123.6,73.7,53.4,53.0,51.3,47.2,41.7,39.8,37.7,35.2,35.0,33.9,31.4,30.5,29.6,27.6,27.3,26.4,26.1,24.1,21.2,19.4,10.6。質(zhì)譜(m/z)＝445.0[m++1],462.0[m++18]。ir＝3437,3045,2946,2870,1729,1680,1252,1168,1020cm-1。m.p.＝141-142℃。[α]d＝+102(c＝1％chcl3溶液)。hplc/ri純度：96.2％?；衔?4轉(zhuǎn)化成化合物33：添加使用含無(wú)水10％pd/c(15wt％)的乙酸乙酯(20份)以10.0g規(guī)模對(duì)化合物24進(jìn)行氫化，且施加約50psi氫氣壓力且使溫度上升到70℃。達(dá)到溫度70℃后，觀察到氫氣壓力增加到約60psi，在這些條件下維持60小時(shí)。60小時(shí)后，仍觀察到0.6％化合物24和2.75％烯丙醇，所以再攪拌12小時(shí)(觀察到0.16％烯丙醇和0.05％化合物24)。處理后，反應(yīng)得到9.5g殘余物。在上述條件下對(duì)25g化合物24再進(jìn)行氫化反應(yīng)76小時(shí)，得到24.5g殘余物。方法a向化合物24(2.0g，4.5mmol)于etoac(150ml)中的溶液中添加10％pd/c(900mg)，且在50℃下于帕爾裝置(50psi)中氫化所得漿液16小時(shí)。此時(shí)，由tlc確定反應(yīng)完全。經(jīng)小塞過(guò)濾混合物，且真空去除溶劑，得到呈白色固體狀的化合物33(1.6g，80％產(chǎn)率)。tlc：炭化對(duì)茴香醛，33的rf＝0.36和25的rf＝0.32。tlc流動(dòng)相：含20％-etoac的己烷。1hnmr(500mhz,cdcl3):δ＝4.67-4.71(m,1h),3.66(s,3h),2.45-2.50(t,j＝15hz,2h),2.22-2.40(m,1h),2.01(s,3h),1.69-1.96(m,9h),1.55(s,4h),1.25-1.50(m,8h),1.07-1.19(m,2h),1.01(s,6h),0.84-0.85(d,j＝7.0hz,3h)。13cnmr(125mhz,cdcl3):δ＝214.4,174.5,170.4,73.6,58.5,57.4,51.3,46.4,43.9,41.2,38.0,35.6,35.5,35.2,34.8,32.0,31.2,30.4,27.4,26.8,26.2,25.9,24.2,22.6,21.2,18.5,11.6質(zhì)譜(m/z)＝447.0[m++1],464.0[m++18]。ir(kbr)＝3445,2953,2868,1731,1698,1257,1029cm-1。m.p.＝142.2-144.4℃(etoac/己烷混合物)。[α]d＝+92(c＝1％chcl3溶液)。elsd純度：96.6％；保留時(shí)間＝9.93(inertsilods3v,250×4.6mm，5μm，acn:含0.1％tfa的水(90:10)方法b向化合物24(36g，81mmol)于etoac(720ml)中的溶液中添加10％pd/c(9g于180ml乙酸乙酯中)漿液，且在45-50℃下用氫氣(50psi)處理所得漿液16小時(shí)。(可使用總計(jì)1080ml溶劑)。此時(shí)，由hplc(化合物24為nmt1％)確定反應(yīng)完全。經(jīng)(10g)過(guò)濾混合物且用乙酸乙酯(900ml)洗滌。在低于50℃下經(jīng)由真空蒸餾濃縮濾液到其體積的50％。當(dāng)由hplc(烯丙醇含量為nmt1％)得知反應(yīng)完全時(shí)，在25-35℃下向濃溶液中添加氯鉻酸吡啶鎓(20.8g)，且在25-35℃下攪拌混合物2小時(shí)。如果化合物24含量大于5％，那么可進(jìn)行以下過(guò)程。經(jīng)(10g)過(guò)濾反應(yīng)物質(zhì)且用乙酸乙酯(360ml)洗滌。依次用水(3×460ml)和飽和鹽水(360ml)洗滌濾液。經(jīng)硫酸鈉(180g)干燥有機(jī)相，過(guò)濾且用乙酸乙酯(180ml)洗滌。在低于50℃下經(jīng)由真空蒸餾將體積濃縮50％。轉(zhuǎn)移溶液至潔凈且干燥的高壓釜中。添加10％鈀/碳(9g于180ml乙酸乙酯中)漿液。用氫氣加壓到50psi，且在45-50℃下攪拌反應(yīng)混合物16小時(shí)。由hplc得知化合物24完全消耗(化合物24的含量為nmt1％)后，經(jīng)(10g)過(guò)濾反應(yīng)混合物且用乙酸乙酯(900ml)洗滌濾餅。在低于50℃下經(jīng)由真空蒸餾濃縮溶劑到干燥。添加甲醇(150ml)且在低于50℃下經(jīng)由真空蒸餾濃縮到干燥。向殘余物中添加甲醇(72ml)，且在10-15℃下攪拌混合物15-20分鐘，過(guò)濾且用甲醇(36ml)洗滌濾餅。在熱空氣干燥器中在45-50℃下干燥白色固體8小時(shí)直至lod為nmt1％，得到化合物33(30g，83.1％產(chǎn)率)?；衔?3轉(zhuǎn)化成化合物34：方法a在周圍溫度下，向化合物33(2.5g，5.6mmol)于thf(25ml)中的溶液中逐滴添加三叔丁氧基氫化鋁鋰(1m，22.4ml，22.4mmol)的thf溶液。再攪拌4-5小時(shí)后，由tlc確定反應(yīng)完全。通過(guò)添加hcl水溶液(1m，10ml)淬滅反應(yīng)，且用etoac(30ml)稀釋混合物。分離各相，且依次用水(15ml)和飽和鹽水溶液(10ml)洗滌有機(jī)相。然后經(jīng)無(wú)水na2so4(3g)干燥有機(jī)相并過(guò)濾。真空濃縮濾液且由柱色譜[29mm(w)×500mm(l)，60-120目二氧化硅，50g]以etoac/己烷(2:8)洗提[5ml部份，由用炭化對(duì)茴香醛的tlc監(jiān)測(cè)]來(lái)純化所得固體。合并含有產(chǎn)物的部份且真空濃縮，得到呈白色固體狀的化合物34(2.3g，91％)。tlc：炭化對(duì)茴香醛，34的rf＝0.45和33的rf＝0.55。tlc流動(dòng)相：含30％-etoac的己烷。1hnmr(500mhz,cdcl3):δ＝4.68-4.73(m,1h),3.98(s,1h),3.66(s,3h),2.34-2.40(m,1h),2.21-2.26(m,1h),2.01(s,3h),1.75-1.89(m,6h),1.39-1.68(m,16h),1.00-1.38(m,3h),0.96-0.97(d,j＝5.5hz,3h),0.93(s,3h),0.68(s,3h)。13cnmr(125mhz,cdcl3):δ＝174.5,170.5,74.1,72.9,51.3,48.1,47.2,46.4,41.7,35.8,34.9,34.7,34.0,33.5,32.0,30.9,30.8,28.6,27.3,26.8,26.3,25.9,23.4,22.9,21.3,17.2,12.6質(zhì)譜(m/z)＝449.0[m++1],466.0[m++18]。ir(kbr)＝3621,2938,2866,1742,1730,1262,1162,1041cm-1。m.p＝104.2-107.7℃(etoac)。[α]d＝+56(c＝1％chcl3溶液)。elsd純度：97.0％：保留時(shí)間＝12.75(inertsilods3v,250×4.6mm，5μm，acn:水(60:40)方法b在0-5℃下，經(jīng)1小時(shí)向化合物33(30.0g，67mmol)于無(wú)水thf(300ml)中的溶液中添加三叔丁氧基氫化鋁鋰(1m，107.6ml，107.6mmol)的thf溶液。在5-10℃下再攪拌4小時(shí)后，由hplc(化合物33為nmt1％)確定反應(yīng)完全。冷卻反應(yīng)到0-5℃，且通過(guò)添加4nhcl(473ml)淬滅。分離各相。用dcm(2×225ml)萃取水層，且依次用水(300ml)和飽和鹽水溶液(300ml)洗滌合并的有機(jī)相。然后在低于50℃下通過(guò)真空蒸餾濃縮有機(jī)相到干燥。向殘余物中添加甲醇(150ml)且在低于50℃下通過(guò)真空蒸餾濃縮到干燥。然后向殘余物中添加水(450ml)，且攪拌混合物15-20分鐘，過(guò)濾且用水(240ml)洗滌濾餅。在熱空氣干燥器中在35-40℃下干燥白色固體6小時(shí)，得到化合物34(30g，99.6％)。化合物34轉(zhuǎn)化成粗dca：方法a向化合物34(500mg，1.11mmol)于thf(8ml)和meoh(8ml)中的溶液中添加lioh(187mg，4.4mmol)于h2o(2.0ml)中的溶液。在50℃下攪拌所得混合物3-4小時(shí)。由tlc得知起始材料完全消失后，真空濃縮反應(yīng)混合物。合并水(10ml)與3nhcl(1ml)的混合物且冷卻到0℃，然后添加至粗產(chǎn)物中。在0℃下攪拌1小時(shí)后，過(guò)濾沉淀的固體，然后用水(10ml)和己烷(20ml)洗滌。在室溫下真空干燥，得到呈白色固體狀的脫氧膽酸(dca，400mg，91％產(chǎn)率)。tlc：炭化對(duì)茴香醛，dca的rf＝0.32和2.1a的rf＝0.82。tlc流動(dòng)相：含10％-甲醇的dcm。1hnmr(500mhz,dmso):δ＝11.92(s,1h),4.44(s,1h),4.19(s,1h),3.77(s,1h),3.35-3.36(m,1h),2.19-2.21(m,1h),2.08-2.10(m,1h),1.73-1.80(m,4h),1.43-1.63(m,6h),1.15-1.35(m,12h),0.98-1.05(m,2h),0.89-0.90(d,j＝6.0hz,3h),0.83(s,3h),0.58(s,3h)。13cnmr(125mhz,dmso):δ＝174.8,71.0,69.9,47.4,46.1,46.0,41.6,36.3,35.6,35.1,34.9,33.8,32.9,30.8,30.7,30.2,28.6,27.1,27.0,26.1,23.5,23.0,16.9,12.4。質(zhì)譜(m/z)＝393[m+,+1]。ir＝3363,2933,2863,1694,1453,1372,1042cm-1。m.p.＝171.4-173.6℃(乙醇)；174-176℃(阿法埃莎(alfaaesar))和171-174℃(阿爾德里奇(aldrich))[α]d＝+47(c＝1％etoh溶液)+54°(c＝2％乙醇溶液)[阿法埃莎(alfaaesar)]elsd純度：99.7％:保留時(shí)間＝5.25(inertsilods3v，250×4.6mm，5μm，acn:含0.1％tfa的水(90:10)。方法b在0-5℃下，向化合物34(30g，67mmol)于thf(120ml)和meoh(120ml)中的溶液中添加naoh(40g，270mmol)于h2o(54ml)中的20％溶液。在25-35℃下攪拌所得混合物4小時(shí)。由hplc得知反應(yīng)完全(化合物34和中間體為nmt0.5％)后，在低于50℃下經(jīng)由真空蒸餾去除溶劑。將殘余物溶解于水(300ml)中且用dcm(2×150ml)洗滌。用2nhcl(約173ml)調(diào)節(jié)水層的ph值為1-2。過(guò)濾固體，用水(3l)徹底洗滌，且利用熱空氣干燥器在70-75℃下干燥直至水分含量少于2％，得到呈白色固體狀的脫氧膽酸(dca，26g，99％產(chǎn)率)。實(shí)例9脫氧膽酸(dca)純化1.溶劑選擇研究?jī)蓚€(gè)溶劑系統(tǒng)以進(jìn)一步純化dca：·含10％己烷的etoac·dcm已進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)且實(shí)驗(yàn)結(jié)果制表如下。*將欲純化的dca溶解于甲醇與dcm的混合物中，然后通過(guò)共沸蒸餾去除甲醇。溶解粗dca所需的甲醇量取決于其開(kāi)始時(shí)的純度。典型的粗物質(zhì)為約75％純，且可在回流下每克使用約20毫升10％甲醇-dca(以體積計(jì))溶解。在更純的dca下，甲醇的百分比必須增至15％。通過(guò)在產(chǎn)物溶解于甲醇與dcm的混合物中之后使產(chǎn)物從dcm中結(jié)晶且經(jīng)由常壓蒸餾共沸去除甲醇達(dá)成有效純化。2.溶劑數(shù)量已使用不同溶劑體積進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，且實(shí)驗(yàn)結(jié)果制表如下。編號(hào)批料規(guī)模(g)溶劑數(shù)量輸出(g)純度(hplc)14.025體積3.0由ri檢測(cè)到的hplc純度為99.3％25.015體積3.56由ri檢測(cè)到的hplc純度為99.3％35.020體積3.4由ri檢測(cè)到的hplc純度為99.3％410015體積70由ri檢測(cè)到的hplc純度為99.3％54715體積44由ri檢測(cè)到的hplc純度為99.5％在所有溶劑含量下都獲得極佳回收率和產(chǎn)物質(zhì)量。3.分離溫度通過(guò)改變分離溫度進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)且結(jié)果制表如下：編號(hào)批料規(guī)模(g)溫度(℃)輸出(g)注釋15.010-153.0由ri檢測(cè)到的hplc純度為99.0％。210025-3070由ri檢測(cè)到的hplc純度為99.3％。34725-3044由ri檢測(cè)到的hplc純度為99.5％。與10-15℃相比，當(dāng)在25-30℃下進(jìn)行分離時(shí)獲得較高質(zhì)量的產(chǎn)物。100g規(guī)模的dca的純化這一步驟的最終純化程序如下：編號(hào)原材料數(shù)量單位分子量摩爾數(shù)摩爾比1粗dca100g3920.2551.02二氯甲烷5.0l--50v3甲醇250ml--2.5v4naoh12.23g400.30581.252nhcl204ml--2.04v6脫礦物質(zhì)(d.m.)水10l--100v將粗dca(110g)在回流溫度下溶解于含10％甲醇的dcm(2.5l)中。在回流溫度下向這一澄清溶液中添加2.5l二氯甲烷，然后在大氣壓(反應(yīng)物質(zhì)上清液的gc分析揭露存在約3％甲醇)下蒸餾約3.0l溶劑。冷卻反應(yīng)漿液到20-25℃，然后攪拌3-4小時(shí)。過(guò)濾混合物，且用dcm(300ml)洗滌固體。在熱空氣烘箱中在50-55℃下干燥產(chǎn)物6-8小時(shí)。向水(1.0l)中添加上述干燥的dca，然后添加10％氫氧化鈉溶液(122ml)，得到澄清溶液。經(jīng)5μ濾紙過(guò)濾這一溶液。用水(2.0l)稀釋濾液，且用2nhcl溶液(204ml)調(diào)節(jié)ph值至1-2。攪拌沉淀的固體1小時(shí)，過(guò)濾且再用水(7.0l)洗滌固體。在熱空氣烘箱中在70-75℃下干燥16-20小時(shí)后，獲得呈白色固體狀的純化的dca(約66g，由hplcri檢測(cè)純度大于99％)。tlc：炭化對(duì)茴香醛，dca的rf＝0.32和化合物34的rf＝0.82。洗提劑＝含10％甲醇的dcm。1hnmr(500mhz,dmso):δ＝11.92(s,1h),4.44(s,1h),4.19(s,1h),3.77(s,1h),3.36-3.35(m,1h),2.21-2.19(m,1h),2.10-2.08(m,1h),1.80-1.73(m,4h),1.63-1.43(m,6h),1.35-1.15(m,12h),1.05-0.98(m,2h),0.90-0.89(d,j＝6.0hz,3h),0.83(s,3h),0.58(s,3h)。13cnmr(125mhz,dmso):δ＝174.8,71.0,69.9,47.4,46.1,46.0,41.6,36.3,35.6,35.1,34.9,33.8,32.9,30.8,30.7,30.2,28.6,27.1,27.0,26.1,23.5,23.0,16.9,12.4。質(zhì)譜(m/z)＝393[m+,+1]。ir＝3363,2933,2863,1694,1453,1372,1042,cm-1。m.p.＝171.4-173.6℃(乙醇)；174-176℃(阿法埃莎(alfaaesar))和171-174℃(阿爾德里奇(aldrich))。脫氧膽酸(dca)的再結(jié)晶將上述獲自方法b的dca(26g)裝入潔凈且干燥的燒瓶。添加甲醇(65ml)和dcm(585ml)。加熱混合物到回流，獲得澄清溶液。向溶液中裝入dcm(650ml)，且在大氣壓下蒸餾溶劑直至收集到780ml溶劑。由gc分析混合物以確定溶劑組成。如果甲醇含量大于2％，那么添加dcm(200ml)且在大氣壓下蒸餾直至收集到200ml餾份。(由gc檢查甲醇含量)。經(jīng)1-2小時(shí)冷卻反應(yīng)混合物到20-25℃，且在此溫度下攪拌3-4小時(shí)。過(guò)濾產(chǎn)物，且用dcm(81ml)洗滌，在熱空氣干燥器中在50-55℃下干燥8小時(shí)。由hplc確定純度。如果單一最大雜質(zhì)大于0.1％，那么重復(fù)上述過(guò)程。將上述干燥的材料裝入潔凈的燒瓶中。依次添加水(190ml)和10％naoh水溶液(3.18g于31.8ml水中)。經(jīng)5μ濾紙過(guò)濾溶液，且再用水(380ml)稀釋濾液。用2nhcl(53ml)調(diào)節(jié)ph值為1-2。過(guò)濾所得固體，用水(1.9l)徹底洗滌，且在熱空氣干燥器中在70-75℃下干燥直至水分含量低于1％，得到呈白色固體狀的dca(17g，回收％：65)。實(shí)例10由化合物33合成dca和純化dca的替代方法步驟1a-氫化3α-乙酰氧基-12-氧代--5β-膽-9(11)-烯-24-酸甲酯(24)向含24(300.0g，0.7mol)的etoac(7.5l，25體積)中添加干的pd/c(75.0g，25wt％)。加熱反應(yīng)混合物到45℃-50℃，且加壓到50psih2。21小時(shí)后的hplc分析指示剩余<1.0％曲線下面積(auc)的24；形成4.6％auc的烯丙醇雜質(zhì)86和11.1％auc的87。冷卻反應(yīng)混合物到30-35℃，經(jīng)(300g)過(guò)濾，且用etoac(7.5l)洗滌以去除催化劑。濃縮所得濾液至約6l，且不經(jīng)進(jìn)一步操作即進(jìn)行下一步(由hplc得知，為67.8％auc，5.5％auc的烯丙醇雜質(zhì)86和13.0％auc的87)。步驟1b/c-氧化烯丙醇86和87，且使24再氫化為3α-乙酰氧基-12-氧代-5β-膽烷-24-酸甲酯(33)步驟1b-pcc氧化烯丙醇86和87在20℃-25℃下，向上述33溶液中添加pcc(149.1g，1.03當(dāng)量)于etoac(1.5l)中的漿液。允許反應(yīng)繼續(xù)進(jìn)行3.5小時(shí)，其中hplc分析顯示剩余<1％auc的烯丙醇86和<1％auc的87。經(jīng)(300g)過(guò)濾反應(yīng)混合物，且用etoac(3.0l)洗滌。用去離子(di)水(2×3.6l)和鹽水(3.6l)洗滌etoac濾液，經(jīng)(300g)過(guò)濾，且用etoac(3.0l)洗滌。濃縮所得濾液到約7.5l，且不經(jīng)進(jìn)一步操作即進(jìn)行下一步(由hplc得知，為77.7％auc，含有5.3％auc的24)。步驟1c-使24再氫化為33向上述含有24的粗33溶液中添加粉末狀活性碳darco(60g，20wt％)。加熱所得漿液到45℃-50℃持續(xù)4小時(shí)，冷卻到30℃-35℃并經(jīng)過(guò)濾。用etoac(7.5l)洗滌濾餅，濃縮到約7.5l，且添加到干的pd/c(60.0g，20wt％)中。加熱反應(yīng)混合物到45℃-50℃，且加壓到50psih2維持6小時(shí)。hplc分析指示剩余<1.0％auc的24；形成1.1％auc的86雜質(zhì)和<1.0％auc的87。認(rèn)為反應(yīng)完全且冷卻到30℃-35℃，經(jīng)過(guò)濾且用etoac(7.5l)洗滌。濃縮etoac濾液到約5體積且用meoh(2×4.5l)共沸回到約5體積。用去離子水(2.4l)稀釋所得漿液且維持在20-25℃下。過(guò)濾漿液，用去離子水(2×600ml)洗滌且在40℃-50℃下真空干燥，得到266g(88％)33(由hplc得知，為66.2％auc)。步驟2-合成34冷卻33(245g，0.5mol)于thf(2.5l)中的溶液到0-5℃，且添加1mli(t-buo)3alh的溶液(822.9ml，1.5當(dāng)量)，同時(shí)維持溫度低于5℃。在5-10℃下攪拌反應(yīng)混合物22小時(shí)。在2-4小時(shí)內(nèi)反應(yīng)完全。hplc分析指示反應(yīng)完全，<1％的33剩余。用4mhcl(3.7l)淬滅反應(yīng)，同時(shí)維持溫度低于20℃。用ch2cl2(2×2.5l)萃取反應(yīng)混合物，且用去離子水(2×2.5l)洗滌合并的有機(jī)相。濃縮ch2cl2相，得到300g(122％)34(由hplc可知為73.5％auc)。1hnmr分析指示剩余9.7wt％的thf和0.8wt％的ch2cl2。步驟3-合成dca在0℃-5℃下，向34(245g，0.5mol)于meoh(980ml)和thf(475ml)中的溶液中添加naoh(87.6g，4當(dāng)量)于去離子水(438.6ml)中的溶液。使反應(yīng)混合物升溫到20-25℃。hplc分析顯示，1小時(shí)后反應(yīng)完全，剩余<0.5％的34和<0.5％的水解中間體。用去離子水(2.5l)稀釋反應(yīng)且濃縮到約10體積。用ch2cl2(2×1.3l)洗滌水溶液且使用2mhcl(1.6l)調(diào)節(jié)至ph1.7-2.0。白色漿液形成且在20℃-25℃下攪拌1小時(shí)。過(guò)濾漿液，用去離子水(7×1l)洗滌且真空干燥，得到195g(91％)dca(由hplc得知，為82.2％auc)。步驟4-dca的純化加熱以上所獲得的dca(190g，0.48mol)于meoh(475ml)和ch2cl2(4275ml)中的溶液到35℃-40℃。從混合物中蒸餾出meoh/ch2cl2，同時(shí)添加ch2cl2(4740ml)以匹配蒸餾速率。由1hnmr分析溶劑組成指示相對(duì)于ch2cl2剩余4.5mol％meoh。冷卻漿液到20℃-25℃且保持16小時(shí)。通過(guò)過(guò)濾分離固體，用ch2cl2(600ml)洗滌，且真空干燥，得到104g(55％)dca(由hplc-rid得知為>99％auc，且由hplc-cad得知為98.7％auc)。通過(guò)加熱dca(103g，0.3mol)于meoh(359ml)和ch2cl2(1751ml)中的混合物到35℃-40℃，重復(fù)再結(jié)晶。從混合物中蒸餾出meoh/ch2cl2，同時(shí)添加ch2cl2(3760ml)以匹配蒸餾速率。由1hnmr分析溶劑組成指示相對(duì)于ch2cl2剩余4.7mol％meoh。使?jié){液冷卻到20℃-25℃。1小時(shí)后，通過(guò)過(guò)濾分離固體，用ch2cl2(309ml)洗滌且真空干燥，得到82g(79％)dca(由hplc-rid得知為>99％auc且由hplc-cad得知為99.3％auc)。為評(píng)估額外純化和再處理的作用，在正常最終水分離步驟之前使產(chǎn)物第三次再結(jié)晶。加熱存于meoh(240ml)和ch2cl2(1400ml)中dca的上述樣品(80g，0.2mol)到35℃-40℃。從混合物中蒸餾出meoh/ch2cl2，同時(shí)添加ch2cl2(2000ml)，匹配蒸餾速率。由1hnmr分析溶劑組成指示相對(duì)于ch2cl2剩余6.7mol％meoh。使?jié){液冷卻到20℃-25℃。1小時(shí)后，通過(guò)過(guò)濾分離固體，用ch2cl2(240ml)洗滌且真空干燥，得到72g(89％)dca(由hplc-cad得知為99.7％auc)。將樣品于去離子水(840ml)中形成漿液，且用naoh(14.0g)于去離子水(140ml)中的溶液稀釋。經(jīng)過(guò)濾所得溶液且用去離子水(1.4l)洗滌。用2mhcl(約300ml)調(diào)節(jié)濾液到ph1.6，產(chǎn)生白色沉淀，將其在20℃-25℃下保持1小時(shí)。通過(guò)過(guò)濾分離產(chǎn)物，用去離子水(9.0l)洗滌且真空干燥，得到63g(87％)dca(由hplc-cad得知為99.7％auc)。實(shí)例11脫氧膽酸關(guān)鍵起始材料化合物24的制造方法已經(jīng)修改并且適用于大規(guī)模生產(chǎn)。制造方法是安全、經(jīng)濟(jì)、環(huán)境友好的且產(chǎn)生一致地符合規(guī)格的高質(zhì)量最終產(chǎn)物。制造方法涉及：·關(guān)鍵起始材料(即3α-乙酰氧基-12-氧代-5β-膽-9(11)-烯-24-酸甲酯)化合物24的制備。關(guān)鍵起始材料由9-α-羥基雄-4-烯-3,17-二酮(9-had)分八個(gè)化學(xué)步驟制備。因?yàn)橐恍┲虚g體未分離，所以這一部分方法對(duì)應(yīng)于階段-i至階段-v。所有中間體的結(jié)構(gòu)配置與nmr和質(zhì)譜數(shù)據(jù)一致。最終方法的詳細(xì)程序以及各步驟產(chǎn)物的光譜數(shù)據(jù)提供于方法章節(jié)中。雜質(zhì)以及其狀態(tài)(分離的、已鑒別、未觀察到等)的列表、原材料清單和關(guān)鍵方法參數(shù)的說(shuō)明全部提供于報(bào)告的最后章節(jié)中?；诜椒ㄐ薷暮脱菔九镜慕Y(jié)果，制造方法適于其預(yù)定目的。流程1-以9α-羥基雄烯二酮為起始材料的合成流程最終方法的修改·所提出方法步驟的初始運(yùn)行的缺點(diǎn)雖然dca的制備方法在初始運(yùn)行時(shí)經(jīng)由所提出途徑工作十分順利且我們能夠制備多克數(shù)量的相當(dāng)高純度的合成dca，但缺點(diǎn)在于關(guān)鍵起始材料純度、產(chǎn)率和威蒂希階段柱色譜在工廠規(guī)模上不可行，通過(guò)使用于甲醇水溶液中的結(jié)晶化方法可成功避免這些事項(xiàng)，烯丙基氧化反應(yīng)還提高化合物24的良好產(chǎn)率和純度，初始實(shí)驗(yàn)程序和各步驟結(jié)果如下。對(duì)新穎方法修改的各步驟進(jìn)行了修改。本章節(jié)描述這些修改研究。嘗試合并步驟以使處理和分離減至最少，從而提高效率。所得方法具有總計(jì)八個(gè)階段–五個(gè)步驟涉及制備控制性起始材料(關(guān)鍵起始材料，化合物24)，且三個(gè)步驟涉及其轉(zhuǎn)化成dca。還有一個(gè)額外的最終純化階段。步驟1的修改研究產(chǎn)物的化學(xué)名稱：9α-羥基-5β-雄烷-3,17-二酮合成流程：步驟1的修改計(jì)劃·溶劑的選擇·溶劑數(shù)量·反應(yīng)時(shí)間·催化劑數(shù)量溶劑的選擇這一步驟的修改中研究以下溶劑：·n,n-二甲基甲酰胺(dmf)·丙酮·丙酮水溶液·二氯甲烷(dcm)·甲醇(meoh)·乙醇(etoh)·異丙醇(ipa)·正丁醇·四氫呋喃(thf)·甲基叔丁基醚(mtbe)·1,4-二噁烷·乙酸乙酯(etoac)已使用上述溶劑進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)，且結(jié)果制表如下。注釋:當(dāng)使用二氯甲烷、甲醇或乙酸乙酯作為25氫化反應(yīng)中的溶劑時(shí)，觀察到(通過(guò)tlc)起始材料完全消耗。產(chǎn)物分離并且由hplc-ri分析后，化合物26的5α-異構(gòu)體與5β-異構(gòu)體以約1:1比率形成。當(dāng)使用丙酮作為25氫化反應(yīng)中的溶劑時(shí)，觀察到(通過(guò)tlc)起始材料完全消耗。產(chǎn)物分離并且由hplc-ri分析后，觀察到幾乎僅形成化合物26的5β-異構(gòu)體，且形成少于10％的5α-異構(gòu)體。結(jié)論：基于以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果，選擇丙酮作為優(yōu)選溶劑，在這一挑戰(zhàn)性步驟中的選擇性大于90％，且產(chǎn)率大于85％。溶劑數(shù)量已用不同體積的丙酮進(jìn)行反應(yīng)以確定優(yōu)選的溶劑數(shù)量。已進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)且結(jié)果制表如下：注釋:·產(chǎn)物的產(chǎn)率和質(zhì)量在所有濃度下類似?！ぎa(chǎn)物的質(zhì)量利用hplc(ri檢測(cè))、nmr和mass監(jiān)測(cè)。結(jié)論：因?yàn)楫a(chǎn)率和產(chǎn)品質(zhì)量在所有濃度下基本上相同，所以選擇24ml/g，因?yàn)榇藢⒆罹呱a(chǎn)力，體積較小，此外起始材料不可溶。反應(yīng)時(shí)間已進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)以確定最適合的反應(yīng)時(shí)間，且結(jié)果制表如下。樣品編號(hào)輸入時(shí)間輸出注釋110g5hr8.63g25完全消耗210g12hr8.32g25完全消耗30.3g3hr-25未完全消耗450g5hr43.3g25完全消耗結(jié)論：基于實(shí)驗(yàn)結(jié)果，反應(yīng)時(shí)間設(shè)定為4-5小時(shí)(在25-35℃下)。催化劑數(shù)量為修改pd/c數(shù)量，已進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)且實(shí)驗(yàn)結(jié)果制表如下。各情況下所用的催化劑都是50％濕的鈀/碳。注釋:當(dāng)用7wt％催化劑進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)，即使在5小時(shí)的反應(yīng)時(shí)間后，反應(yīng)亦不完全。結(jié)論：應(yīng)使用至少8重量％的催化劑以可靠地實(shí)現(xiàn)起始材料的完全消耗。步驟1的最終修改的方法：這一步驟的最終修改的方法如下：原材料輸入詳情：樣品編號(hào)原材料數(shù)量單位分子量摩爾數(shù)摩爾比19α-羥基雄-4-烯-3,17-二酮150.0g3020.4961.0210％pd/c(50％濕)12.0g--8wt％3丙酮4050ml--27.0v4二氯甲烷1500ml--15v5celite20g---實(shí)驗(yàn)程序：向9α-羥基雄-4-烯-3,17-二酮(150.0g)于丙酮(3600ml)中的溶液中添加10％pd/c(12g，8wt％，50％濕)，且在25-25℃下在高壓釜(50psi)中氫化所得漿液5小時(shí)。在由tlc(30％etoac的dcm溶液)證明起始材料完全消失后，經(jīng)床(20g)過(guò)濾粗反應(yīng)混合物并用二氯甲烷(1500ml)洗滌。真空去除濾液，且獲得呈白色固體狀的粗產(chǎn)物(145.0g)。在0℃下使此粗產(chǎn)物與(145.0g)丙酮(300ml)組合，攪拌1小時(shí)，然后過(guò)濾并用冷丙酮(150ml)洗滌且在50℃下真空干燥。此得到呈白色固體狀的化合物26(129g，85％)。tlc：炭化對(duì)茴香醛。化合物26的rf＝0.48和化合物25的rf＝0.3。洗提劑是含30％etoac的dcm。1hnmr(500mhz,cdcl3):δ＝2.40-2.37(m,1h),2.11-.2.02(m,2h),1.91-1.31(m,19h),0.96(s,3h),0.84(s,3h)。13cnmr(125mhz,cdcl3):δ＝221.0,95.7,80.1,47.0,43.6,38.6,38.5,37.1,35.9,33.41,32.9,32.0,27.9,26.9,21.5,20.2,20.0,12.6。質(zhì)譜(m/z)＝305.0[m++1],322.0[m++18]。ir(kbr)＝3443,2938,1722,1449,1331,1138cm-1。m.p＝213-216℃(丙酮)。[α]d＝+116(c＝1％chcl3溶液)。hplc/ri純度：99.0％。步驟2的修改研究產(chǎn)物的化學(xué)名稱：5β-雄-9(11)-烯-3,17-二酮合成流程：步驟2的修改計(jì)劃·試劑的選擇試劑的選擇已進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)且結(jié)果制表如下。結(jié)論：選擇硫酸作為用于消除的優(yōu)選試劑，在酸性樹(shù)脂中，反應(yīng)不完全。步驟2的最終修改的方法：這一步驟的最終修改的方法如下：參考實(shí)驗(yàn)編號(hào)：bda-09-008-ii-02樣品編號(hào)原材料數(shù)量單位分子量摩爾數(shù)摩爾比1化合物26121g3040.39791.02硫酸19.1ml980.35790.93二氯甲烷1815ml--15v4水800ml--6.6v5碳酸氫鈉600ml--5.0v6鹽水溶液200ml--1.65v實(shí)驗(yàn)程序：在5-10℃下在惰性氛圍下，經(jīng)15分鐘向化合物26(121g)于dcm(1815ml)中的溶液中添加硫酸(19.1ml)。使溫度上升到25-35℃，且攪拌混合物2小時(shí)。此時(shí)，確定反應(yīng)完全(tlc，含30％etoac的dcm)。用水(600ml)洗滌混合物，然后用10％nahco3水溶液(600ml)洗滌。依次用水(200ml)和飽和鹽水溶液(200ml)再次洗滌有機(jī)層。然后真空蒸餾溶劑，得到呈灰白色固體狀的化合物27(108.2g，95％)。粗產(chǎn)物不經(jīng)進(jìn)一步純化即用于下一步驟中。tlc：炭化對(duì)茴香醛，化合物27的rf＝0.76和化合物25的rf＝0.44。洗提劑是含30％etoac的dcm。1hnmr(500mhz,cdcl3):δ＝5.61(s,1h),2.57-2.47(m,2h),2.42-2.24(m,4h),2.20-2.05(m,3h),1.99-1.86(m,2h),1.85-1.84(d,j＝6hz1h),1.63-1.57(m,5h),1.40-1.37(d,j＝13.5hz,1h)1.28-1.25(dd,j＝4.0,13.5hz,1h),1.17(s,3h)0.85(s,3h)。13cnmr(125mhz,cdcl3):δ＝221.3,212.8,140.1,118.5,48.5,45.9,44.3,43.5,39.0,38.0,37.3,36.1,35.8,33.3,28.8,26.0,25.5,22.5,13.9。質(zhì)譜(m/z)＝287[m++1],304[m++18]。ir(kbr)＝3450,2913,1737,1707,1413,1403,1207cm-1。m.p.＝143.4-145.9℃(dcm)。[α]d＝+142(c＝1％chcl3溶液)。hplc/ri純度：96.7％。步驟3的修改研究產(chǎn)物的化學(xué)名稱：(z)-3α-乙酰氧基-5β-孕-9(11),17(20)-二烯(化合物30)：合成流程：步驟3的最終修改的方法：這一步驟的最終修改的程序如下：步驟3的修改計(jì)劃·溶劑數(shù)量溶劑數(shù)量為評(píng)估m(xù)tbe溶劑數(shù)量，已進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)且結(jié)果制表如下。結(jié)論：這一反應(yīng)在每克基質(zhì)12毫升溶劑下同樣執(zhí)行順利。因?yàn)樵?2毫升/克下產(chǎn)量更大，所以選擇此作為優(yōu)選量。純化溶劑選擇:關(guān)于這一最終純化，研究數(shù)個(gè)溶劑系統(tǒng)。其為：·甲醇·甲醇水溶液·乙醇·異丙醇·丙酮已進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)且實(shí)驗(yàn)結(jié)果制表如下。結(jié)論：通過(guò)使產(chǎn)物從2％甲醇水溶液中結(jié)晶達(dá)成極有效純化、純度和產(chǎn)率。溶劑數(shù)量已使用不同溶劑體積進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，且實(shí)驗(yàn)結(jié)果制表如下。結(jié)論：在所有溶劑含量下都可見(jiàn)極佳回收率和產(chǎn)物質(zhì)量，所以選擇4體積，因?yàn)榇俗罹呱a(chǎn)力。分離溫度通過(guò)改變分離溫度進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)且結(jié)果制表如下：結(jié)論：在15-20℃下分離產(chǎn)物，得到良好質(zhì)量和產(chǎn)率。步驟3的最終修改的方法：這一步驟的最終修改的程序如下：實(shí)驗(yàn)程序：在-40℃至-45℃下在惰性氛圍下，向化合物27(108.0g)于thf(1080ml)中的溶液中添加三叔丁氧基氫化鋁鋰(700ml)。在-40℃至-45℃下攪拌所得反應(yīng)混合物2小時(shí)。在由tlc(含30％etoac的dcm)證明反應(yīng)完全后，通過(guò)添加2nhcl溶液淬滅反應(yīng)混合物。分離各相且用二氯甲烷(648ml)萃取所得水層。合并有機(jī)部份，且依次用水(648ml)和飽和鹽水溶液(540ml)洗滌。真空蒸發(fā)有機(jī)層，得到化合物28，溶解于thf(540ml)中。在25-35℃下在氮?dú)庀?，?jīng)20分鐘向溴化乙基三苯基膦(417g)于thf(216ml)中的溶液中逐滴添加叔丁醇鉀(1086ml，1mthf溶液)。在相同溫度下再攪拌所得暗紅色反應(yīng)混合物1小時(shí)。在25-35℃下，在30-40分鐘內(nèi)，向上述懸浮液中緩慢添加上述化合物28的溶液。再攪拌反應(yīng)混合物3-5小時(shí)，使得起始材料完全消耗(由tlc證明；含30％etoac的dcm)。用冰水(1.080l)淬滅反應(yīng)混合物。用mtbe(2×540ml)萃取水層，且用飽和鹽水溶液(540ml)洗滌合并的有機(jī)萃取物，真空濃縮有機(jī)層且通過(guò)使用mtbe(2×540ml)純化粗物質(zhì)，過(guò)濾，自濾液中真空蒸餾出25％溶劑。冷卻化合物29的溶液到25℃，在25-35℃下在氮?dú)庀孪蚱渲刑砑尤野?105.2ml)、dmap(4.5g)和乙酸酐(53.5ml)。在25-35℃下攪拌2小時(shí)后，由tlc(含10％etoac的己烷)確定反應(yīng)完全。依次用水(1080ml)和鹽水溶液(324ml)洗滌反應(yīng)混合物。真空濃縮有機(jī)層，得到粗化合物30(225g)，使殘余物在2％甲醇水溶液中再結(jié)晶，得到85g純化合物30(63.5％產(chǎn)率，hplc-ri純度為96％)。tlc：炭化對(duì)茴香醛，化合物30的rf＝0.5，且化合物29的rf＝0.15。洗提劑＝含10％etoac的己烷。1hnmr(500mhz,cdcl3):δ＝5.38(s,1h),5.20-5.18(d,j＝6.5hz,1h),4.76-4.72(m,1h),2.40-2.35(m,3h),2.25-2.22(m,1h),2.09-2.03(m,3h),2.01(s,3h),1.98-1.49(m,10h),1.41-1.31(m,2h),1.27-1.16(m,3h),1.07(s,3h),0.79(s,3h)。13cnmr(125mhz,cdcl3):δ＝170.5,150.0,140.4,119.6,114.3,74.7,53.5,42.0,41.7,39.6,38.6,35.6,35.3,33.8,31.9,29.5,27.8,26.7,26.6,25.5,21.3,16.9,13.2質(zhì)譜(m/z)＝342.9[m++1],360[m++18]。ir(chcl3)＝3440,3035,1730,1451,1367,1258,1028cm-1。mp＝93.9-97.8℃。[α]d＝+109(c＝1％chcl3溶液)。hplc/ri純度：96.0％。步驟4的修改研究產(chǎn)物的化學(xué)名稱：3α-乙酰氧基-5β-膽-9(11),16-二烯-24-酸甲酯(化合物84)。合成流程：步驟6的修改計(jì)劃·路易斯酸的選擇·路易斯酸數(shù)量·催化劑選擇·催化劑數(shù)量路易斯酸的選擇為在這一步驟中檢查作為催化劑的替代性路易斯酸，已進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)且結(jié)果制表如下：路易斯酸數(shù)量：發(fā)現(xiàn)二氯化乙基鋁對(duì)這一步驟有效。我們研究了二氯化乙基鋁的摩爾比且結(jié)果制表如下：結(jié)論：在3.0當(dāng)量二氯化乙基鋁下，反應(yīng)執(zhí)行順利。催化劑選擇在這一步驟中，最初已使用氧化鉑作為催化劑。鈀/碳價(jià)格比較低廉，而且還是典型的氫化催化劑，所以也對(duì)其進(jìn)行研究。已進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)且結(jié)果制表如下：結(jié)論：50％濕鈀/碳在小規(guī)模上在乙酸乙酯介質(zhì)中執(zhí)行，使用商業(yè)干鈀催化劑。步驟4的最終修改方法：這一步驟的最終修改程序如下：樣品編號(hào)原材料數(shù)量單位分子量摩爾數(shù)摩爾比1化合物3056g3420.1631.02二氯甲烷1120ml--20v3丙烯酸甲酯35.13ml860.3892.384二氯化乙基鋁(1.8m甲苯溶液)272.9ml-0.4913.05水1680ml--30v6鹽水溶液560ml--10v7甲醇336ml--6.0v8乙酸乙酯1650ml--29.5v910％鈀/碳6.7g--12wt％10celite25g---實(shí)驗(yàn)程序：在0-5℃下在惰性氛圍下，向化合物30(56g)于dcm(560ml)中的溶液中添加丙烯酸甲酯(35.13ml)，攪拌60分鐘，冷卻溶液到0-5℃，經(jīng)60分鐘的時(shí)間添加二氯化乙基鋁(272.9ml；1.8m甲苯溶液)。然后使溫度上升到25-35℃，且攪拌混合物約18小時(shí)。此時(shí)，因?yàn)橛蓆lc(含10％etoac的己烷)分析顯示反應(yīng)完全，所以將混合物傾入冰冷水(1120ml)中。分離各相且用dcm(2×255ml)萃取水層。合并有機(jī)層且依次用水(560ml)和鹽水溶液(560ml)洗滌，真空蒸發(fā)有機(jī)層，得到呈油狀的化合物84(66g)。在25-35℃下，向化合物84于乙酸乙酯(550ml)中的溶液中添加pd/c(6.7g)于乙酸乙酯(110ml)中的漿液。在約70psi氫氣壓力下攪拌所得漿液約16小時(shí)。由hplc監(jiān)測(cè)反應(yīng)的進(jìn)展。在床(25g)上過(guò)濾催化劑，且用乙酸乙酯(990ml)洗滌濾餅。真空蒸發(fā)濾液，得到呈固體狀的化合物32(59g，85％)。tlc：炭化對(duì)茴香醛，化合物32的rf＝0.32和化合物84的rf＝0.30。洗提劑＝含10％etoac的己烷。1hnmr(500mhz,cdcl3):δ＝5.31(s,1h),4.73(m,1h),3.66(s,3h),2.37-2.03(m,7h),2.01(s,3h),1.98-1.09(m,18h),1.06(s,3h),0.92-0.91(d,j＝6.0hz,3h),0.59(s,3h)。13cnmr(125mhz,cdcl3):δ＝174.6,170.5,139.8,119.5,74.8,56.0,53.3,51.4,41.9,41.7,40.9,38.5,36.4,35.4,35.2,33.8,31.0,30.9,29.5,28.2,27.8,26.8,26.7,25.2,21.4,17.9,11.5質(zhì)譜(m/z)＝448.2[m++18]。ir(kbr)＝3435,3039,2941,1729,1448,1435,1252,1022cm-1。m.p.＝122.1-123.9℃。[α]d＝+56(c＝1％chcl3溶液)。hplc/ri純度：93.0％。步驟5的修改研究產(chǎn)物的化學(xué)名稱：3α-乙酰氧基-12-氧代-5β-膽-9(11)-烯-24-酸甲酯(化合物24)合成流程：步驟8的修改計(jì)劃·試劑的選擇·試劑化學(xué)計(jì)量·溶劑選擇·溶劑數(shù)量·反應(yīng)溫度·反應(yīng)時(shí)間·產(chǎn)物分離溶劑·產(chǎn)物再結(jié)晶試劑選擇用多種替代性氧化劑試驗(yàn)反應(yīng)。已進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)且結(jié)果制表如下?！ぷ⒔猓篸dht：二溴二甲基乙內(nèi)酰脲，dmp：二甲基吡唑，dmb：3,3-二甲基1-丁烯·tbhp-叔丁基過(guò)氧化氫還試驗(yàn)數(shù)個(gè)其他試劑，例如cro3/tbhp、naclo2/tbhp等。結(jié)論：關(guān)于tbhp/naocl，應(yīng)注意除三氧化鉻以外的替代性氧化劑并不能執(zhí)行順利。因此，選擇tbhp/naocl作為氧化劑。溶劑選擇在這一步驟運(yùn)行期間，使用乙酸作為溶劑。選擇以下溶劑作為替代物，且比較結(jié)果。·二氯甲烷·乙酸乙酯·水·已在不同氧化條件下試驗(yàn)眾多其它溶劑。一些其它溶劑是acn、丙酮和acoh，但可并入其它溶劑。已進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)且結(jié)果制表如下。結(jié)論：與dcm相比，當(dāng)使用etoac作為溶劑時(shí)，結(jié)果更佳。因此，選擇乙酸乙酯作為優(yōu)選溶劑。溶劑數(shù)量在這一步驟初始運(yùn)行中，使用20體積的乙酸乙酯。進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)以查看是否可使用較少的溶劑。結(jié)果制表如下。結(jié)論：選擇10體積溶劑作為優(yōu)選量。試劑化學(xué)計(jì)量用較少當(dāng)量的tbhp進(jìn)行這一步驟的初始運(yùn)行。已進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)以修改這一試劑的這一量，且結(jié)果制表如下。結(jié)論：在34當(dāng)量試劑下，反應(yīng)完全，但在使用較少量的兩個(gè)實(shí)驗(yàn)中，反應(yīng)不完全。因此，選擇34當(dāng)量作為優(yōu)選量。試劑化學(xué)計(jì)量用較少當(dāng)量的naocl進(jìn)行這一步驟的初始運(yùn)行。已進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)以修改這一試劑的這一量，且結(jié)果制表如下。結(jié)論：在7.0當(dāng)量試劑下，反應(yīng)完全，但在使用較少量的兩個(gè)實(shí)驗(yàn)中，反應(yīng)不完全。因此，選擇7.0當(dāng)量作為優(yōu)選量。反應(yīng)溫度為修改反應(yīng)溫度，已進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)且結(jié)果制表如下。結(jié)論：反應(yīng)在0℃與5℃之間的所有溫度下執(zhí)行，所以選擇0-10℃的范圍，因?yàn)轭A(yù)期反應(yīng)在較低溫度下更具選擇性，且觀察到產(chǎn)率較高。反應(yīng)時(shí)間在初始運(yùn)行期間，在0-5℃下進(jìn)行反應(yīng)(24小時(shí))。為確定是否修改反應(yīng)時(shí)間，進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)且結(jié)果制表如下。結(jié)論：反應(yīng)似乎在0-5℃下在8小時(shí)內(nèi)完成，所以選擇此作為優(yōu)選反應(yīng)時(shí)間。產(chǎn)物分離溶劑選擇:關(guān)于這一最終純化，研究?jī)蓚€(gè)溶劑系統(tǒng)。其為：·甲醇·甲醇水溶液已進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)且實(shí)驗(yàn)結(jié)果制表如下。結(jié)論：通過(guò)從20％甲醇水溶液中分離產(chǎn)物達(dá)成極有效純化、純度和產(chǎn)率?；蛘?，使用利用硅膠和梯度溶劑系統(tǒng)(etoac/己烷)的柱純化。純化溶劑選擇:關(guān)于這一最終純化，研究?jī)蓚€(gè)溶劑系統(tǒng)。其為：·甲醇·甲醇水溶液已進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)且實(shí)驗(yàn)結(jié)果制表如下。結(jié)論：通過(guò)使產(chǎn)物從13％甲醇水溶液中再結(jié)晶達(dá)成極有效純化、純度和產(chǎn)率?；蛘撸褂美霉枘z和梯度溶劑系統(tǒng)(etoac/己烷)的柱純化。步驟8的最終修改的方法：這一步驟的最終修改的程序如下。樣品編號(hào)原材料數(shù)量單位分子量摩爾數(shù)摩爾比1化合物3220.0g4300.0461.0210％次氯酸鈉220ml74.50.3227.0370％tbhp水溶液200ml901.5634.04乙酸乙酯300ml--15v5氯鉻酸吡啶鎓10.9g215.50.0561.16甲醇140ml--7.0v7水2000ml--100v8鹽水溶液100ml--5.0v實(shí)驗(yàn)程序：向化合物32(20g)于乙酸乙酯(200ml)中的溶液中添加70％tbhp水溶液(200ml)，冷卻反應(yīng)溶液到0℃，在0-5℃下緩慢添加10％次氯酸鈉持續(xù)約6-7小時(shí)，在相同溫度下攪拌2-3小時(shí)。由tlc(洗提劑＝含20％etoac的己烷)得知化合物32完全消失后，分離有機(jī)層，且用乙酸乙酯(60ml)萃取水層。用水(2×400ml)洗滌合并的有機(jī)層，接著在50-55℃下經(jīng)20％亞硫酸鈉溶液(220ml)處理2小時(shí)，分離兩個(gè)層，在25-30℃下用氯鉻酸吡啶鎓(10.9g)處理有機(jī)層6-8小時(shí)。由tlc(洗提劑＝含20％etoac的己烷)得知烯丙醇完全消失后，依次用熱水(4×500ml)和飽和鹽水溶液(100ml)洗滌有機(jī)層。在45-50℃下真空蒸發(fā)有機(jī)層。通過(guò)在5-10℃下將所得粗物質(zhì)與20％甲醇水溶液(40ml)一起攪拌1小時(shí)來(lái)純化，過(guò)濾；用20％甲醇水溶液(20ml)洗滌濾餅，然后在45-50℃下真空干燥。濃縮有機(jī)層且吸收于二氧化硅(1.5當(dāng)量)上。分別用7當(dāng)量二氧化硅制備硅膠(己烷)柱且將所得含有產(chǎn)物的混合物加載于柱上。然后用己烷/etoac梯度混合物洗提產(chǎn)物，得到含有化合物24的柱部份。對(duì)各部份進(jìn)行取樣且測(cè)試純度。合并所有具所要純度的部份且真空濃縮。然后從己烷中沉淀所得混合物，然后在45-50℃下真空干燥，得到呈淺黃色固體狀的化合物24(13g)。tlc：炭化對(duì)茴香醛，化合物24的rf＝0.28和化合物32的rf＝0.52。洗提劑＝含20％etoac的己烷。1hnmr(500mhz,cdcl3):δ＝5.71(s,1h),4.75-4.71(m,1h),3.66(s,3h),2.42-2.37(m,3h),2.31-2.02(m,2h),2.0(s,3h),1.98-1.67(m,9h),1.56-1.24(m,9h),1.19(s,3h),1.02-1.01(d,j＝6.5hz,3h),0.90(s,3h)。13cnmr(500mhz,cdcl3):δ＝204.9,174.5,170.4,163.8,123.6,73.7,53.4,53.0,51.3,47.2,41.7,39.8,37.7,35.2,35.0,33.9,31.4,30.5,29.6,27.6,27.3,26.4,26.1,24.1,21.2,19.4,10.6。質(zhì)譜(m/z)＝445.0[m++1],462.0[m++18]。ir＝3437,3045,2946,2870,1729,1680,1252,1168,1020cm-1。m.p.＝141-142℃。[α]d＝+102(c＝1％chcl3溶液)。hplc/ri純度：96.2％。流程3-由25最終合成概述階段-i：9α-羥基-5β-雄烷-3,17-二酮階段-ii：5β-雄-9(11)-烯3,17-二酮階段-iii：(z)-3α-乙酰氧基-5β-孕-9(11),17(20)-二烯階段-iv：3α-乙酰氧基-5β-膽-9(11)-烯-24-酸甲酯階段-v：3α-乙酰氧基-12-氧代-5β-膽-9(11)-烯-24-酸甲酯階段-i：9α-羥基5β-雄烷-3,17-二酮原材料：樣品編號(hào)原材料數(shù)量單位分子量摩爾數(shù)摩爾比19α-羥基雄烯二酮(9-had)100.0g302.40.3301.0210％pd/c(濕)8.0g--8.0wt％3丙酮3000ml--30.0v4二氯甲烷1200ml--12.0v5celite20g---實(shí)驗(yàn)程序：01.向潔凈且干燥的高壓釜中裝入丙酮(2200ml)。02.在同一高壓釜中裝入9-had(100g)。03.在25℃(室溫)下攪拌反應(yīng)混合物且添加pd/c(8.0g)于丙酮(200ml)中的漿液。04.用氮?dú)舛栊曰?，用氫氣加壓?0psi。05.在25-35℃(室溫)和60psi下攪拌反應(yīng)混合物4-5小時(shí)。06.由hplc(含30％etoac的dcm；25為nmt0.5％)驗(yàn)證完全。07.用二氯甲烷(300ml)稀釋反應(yīng)混合物。08.經(jīng)床(20g)過(guò)濾且用二氯甲烷(900ml)洗滌09.在低于45℃下經(jīng)由真空蒸餾所有溶劑濃縮濾液。10.裝入丙酮(300ml)且在低于65℃下在真空下完全去除溶劑。11.裝入丙酮(200ml)且冷卻到0-5℃。12.在0-5℃下維持所得漿液2小時(shí)，然后過(guò)濾。13.用冷(0-10℃)丙酮(100ml)洗滌濕濾餅。14.在熱空氣烘箱中于45-50℃下干燥所得白色固體直至lod為nmt1％。濕重：105g干重：86g產(chǎn)率：85.4％lod<1.0％熔化范圍：218-219.7℃sor：+126.4(c＝1％chcl3溶液)。hplc/ri純度：99.0％。注解：氫化反應(yīng)的替代方法。原材料：編號(hào)原材料數(shù)量單位分子量摩爾數(shù)摩爾比19α-羥基雄烯二酮(9-had)100.0g3020.3311.0210％pd/c(干)7.0g--7.0wt％3n,n-二甲基甲酰胺700ml--7.0v4二氯甲烷1200ml--12.0v5丙酮600ml--6.0v6celite20g---實(shí)驗(yàn)程序：15.向潔凈且干燥的高壓釜中裝入dmf(500ml)。16.在同一高壓釜中裝入9-had(100g)。17.在25℃(室溫)下攪拌反應(yīng)混合物且添加pd/c(7.0g)于dmf(200ml)中的漿液。18.用氮?dú)舛栊曰螅脷錃饧訅旱?0psi。19.在25-35℃(室溫)和60psi下攪拌反應(yīng)混合物3小時(shí)。.20.由tlc(含30％etoac的dcm；25為nmt2％)驗(yàn)證完全。21.用二氯甲烷(300ml)稀釋反應(yīng)混合物。22.經(jīng)床(20g)過(guò)濾且用二氯甲烷(900ml)洗滌23.在低于65℃下經(jīng)由真空蒸餾所有溶劑濃縮濾液。24.裝入丙酮(300ml)且在低于65℃下在真空下完全去除溶劑。25.裝入丙酮(200ml)且冷卻到0-5℃。26.在0-5℃下維持所得漿液2小時(shí)，然后過(guò)濾。27.用冷(0-10℃)丙酮(100ml)洗滌濕濾餅。28.在熱空氣烘箱中于45-50℃下干燥所得白色固體直至lod為nmt1％。濕重：105g干重：88g產(chǎn)率：87.4％lod<1.0％熔化范圍：218-219.7℃sor：+126.4(c＝1％chcl3溶液)階段-ii：5β-雄-9(11)-烯-3,17-二酮原材料：樣品編號(hào)原材料數(shù)量單位分子量摩爾數(shù)摩爾比1階段-i產(chǎn)物85.0g3040.2791.02硫酸13.5ml980.2510.93二氯甲烷1530ml--18.0v4己烷340ml--4v5水1700ml--20.0v6碳酸氫鈉425ml--5.0v7飽和鹽水溶液425ml--5.0v實(shí)驗(yàn)程序：01.向潔凈且干燥的燒瓶中裝入二氯甲烷(1275ml)和階段-i產(chǎn)物。02.冷卻混合物到10℃，然后在10-15℃下經(jīng)15分鐘緩慢添加硫酸(13.5ml)。03.使反應(yīng)溶液溫度上升到25-35℃且在25-35℃下攪拌2小時(shí)。04.由tlc(含30％etoac的dcm；階段-i產(chǎn)物為nmt1％)驗(yàn)證完全。05.用水(300ml)洗滌反應(yīng)混合物。06.用dcm(2×212ml)反萃取水層，然后合并有機(jī)層。07.用飽和碳酸氫鈉溶液(425ml)洗滌有機(jī)層。08.依次用水(550ml)和鹽水溶液(425ml)洗滌有機(jī)層。07.在低于45℃下在真空下完全蒸餾出溶劑。08.添加己烷(340ml)且在低于50℃下在真空下完全蒸餾出溶劑。09.添加水(616ml)，在室溫下攪拌15分鐘，然后過(guò)濾且用水(255ml)洗滌濾餅。10.在熱空氣干燥器中于55-60℃下干燥白色固體直至水分含量為nmt0.5％。濕重：約190g。干重：76g產(chǎn)率：95％水分<0.5％熔化范圍：148.5-150.1℃sor：+144.4(c＝1％chcl3溶液)。hplc/ri純度：96.0％。階段-iii：(z)-3α-乙酰氧基-5β-孕-9(11),17(20)-二烯(化合物30)原材料：實(shí)驗(yàn)程序：01.在氮?dú)庀孪驖崈羟腋稍锏臒恐醒b入無(wú)水thf(760ml)和階段-ii產(chǎn)物(76g)。02.冷卻到-35℃至-45℃，然后在-35℃至-45℃下經(jīng)1小時(shí)添加三叔丁氧基氫化鋁鋰的溶液。03.在-35℃至-45℃下攪拌所得反應(yīng)混合物2-3小時(shí)。04.由hplc(含30％etoac的dcm；階段-ii產(chǎn)物為nmt3％)監(jiān)測(cè)反應(yīng)。05.向反應(yīng)混合物中添加2nhcl溶液(474ml)，維持溫度<0℃。06.分離各層且用二氯甲烷(2×380ml)反萃取水層兩次。07.依次用水(380ml)和鹽水溶液(380ml)洗滌合并的有機(jī)層。08.在低于60℃下通過(guò)常壓蒸餾完全去除溶劑。09.檢查殘余物的水含量。如果其≥0.5％，那么添加dcm(156ml)且在低于60℃下再次在大氣壓下蒸餾。10.將殘余物溶解于無(wú)水thf(380ml)中，且在氮?dú)夥諊卤３秩芤?。此為階段iiia產(chǎn)物。11.在氮?dú)庀孪驖崈羟腋稍锏臒恐醒b入溴化乙基三苯基膦(295g)和無(wú)水thf(250ml)。12.經(jīng)10分鐘添加叔丁醇鉀的溶液(1mthf溶液，769ml)，然后在25-35℃下攪拌所得紅色溶液1小時(shí)。13.經(jīng)1/2小時(shí)添加步驟10的thf溶液，然后在25-35℃下再攪拌3小時(shí)。14.由tlc(含30％etoac的dcm；階段-iiia產(chǎn)物為nmt1％)驗(yàn)證完全。15.在25-35℃下向反應(yīng)混合物中添加冰水(780ml)(放熱5-8℃)。16.分離各層且用mtbe(2×380ml)反萃取水相。17.合并有機(jī)層且依次用水(380ml)和鹽水(380ml)洗滌。18.在真空和低于50℃下完全蒸餾出溶劑。19.添加mtbe(264ml)且在低于50℃下在真空下完全蒸餾出。20.再添加mtbe(380ml)且在25-35℃下攪拌2小時(shí)。21.過(guò)濾不想要的鹽，用mtbe(380ml)對(duì)其進(jìn)行洗滌且合并濾液。22.在真空和低于50℃下完全蒸餾出溶劑。23.添加新鮮mtbe(380ml)，然后在真空下完全蒸餾出。24.再添加mtbe(380ml)且在25-35℃下攪拌2小時(shí)。25.過(guò)濾不想要的鹽，用mtbe(380ml)對(duì)其進(jìn)行洗滌且合并濾液，在真空下蒸餾直至20％，添加新鮮mtbe(180ml)。26.向潔凈且干燥的燒瓶中裝入濾液(760ml)階段-iiib產(chǎn)物。27.裝入dmap(3.2g)。28.添加三乙胺(73.8ml)。29.在25-35℃下經(jīng)15分鐘緩慢添加乙酸酐(37.58ml)。30.在25-35℃下攪拌反應(yīng)混合物2-3小時(shí)。31.由tlc(含10％etoac的己烷；階段-iiib產(chǎn)物為nmt1％)驗(yàn)證完全。32.用水(760ml)洗滌反應(yīng)混合物，然后用mtbe(380ml)萃取水層，用飽和鹽水溶液(380ml)洗滌合并的有機(jī)層。33.在低于50℃下通過(guò)完全常壓蒸餾濃縮有機(jī)層。34.裝入甲醇(152ml)且在低于50℃下在真空下完全去除溶劑。35.裝入2％甲醇水溶液(304ml)且加熱到60-65℃。36.在60-65℃下維持所得澄清溶液1小時(shí)，然后緩慢冷卻到15-20℃，在相同溫度下維持2小時(shí)，然后過(guò)濾。37.用冷(10-15℃)2％甲醇水溶液(76ml)洗滌濕濾餅。38.在熱空氣烘箱中于45-50℃下干燥所得白色固體直至lod為nmt1％。濕重：約70g。干重：55g產(chǎn)率：63％水分<0.5％hplc/ri純度：95.0％。階段-iv：3α-乙酰氧基-5β-膽-9(11)-烯-24-酸甲酯原材料：實(shí)驗(yàn)程序：01.裝入二氯甲烷(1000ml)和階段-iii產(chǎn)物(102g)，冷卻反應(yīng)物質(zhì)到0℃。02.在0-5℃下經(jīng)1/2小時(shí)添加丙烯酸甲酯(61ml)。03.在0-5℃下攪拌1小時(shí)，然后在0-5℃下經(jīng)1小時(shí)添加二氯化乙基鋁的溶液(1.8m，甲苯溶液，496ml)。(注意：此試劑與水劇烈反應(yīng))。04.在0-5℃下攪拌1/2小時(shí)，且使溫度上升到25-35℃并攪拌16小時(shí)。05.由tlc(含10％etoac的己烷；階段-iii產(chǎn)物為nmt5％)驗(yàn)證完全。06.在10-15分鐘內(nèi)將反應(yīng)物質(zhì)緩慢傾倒于冰水(2000ml)中并分離各相。07.用dcm(500ml)萃取水層。08.合并有機(jī)相，且依次用水(1000ml)和飽和碳酸氫鹽溶液(1000ml)和鹽水溶液(1000ml)洗滌。09.在低于50℃下真空濃縮有機(jī)相到干燥。此為階段iva產(chǎn)物。10.將殘余物溶解于己烷(1000ml)中，穿過(guò)二氧化硅床布氏漏斗(buchnorfunnel)，用含10％乙酸乙酯的己烷(3000ml)洗滌床。11.在低于50℃下真空收集總濾液到干燥。此為階段iva產(chǎn)物。12.卸載燒瓶后，用含40％甲醇的乙酸乙酯(800ml)清洗，且保存此清洗液以用于下一步驟。13.向干燥的高壓釜中裝入存于上述含40％甲醇的乙酸乙酯清洗液(200ml)中的階段iva產(chǎn)物。14.裝入10％鈀/碳(12g于200ml乙酸乙酯中)漿液。15.用氫氣(70psi)加壓，且在25-35℃下攪拌混合物16小時(shí)。16.由hplc(階段iva產(chǎn)物為nmt1％)驗(yàn)證完全。17.經(jīng)(30g)過(guò)濾反應(yīng)混合物且用乙酸乙酯(1000ml)洗滌濾餅。18.在低于60℃下經(jīng)由真空蒸餾濃縮濾液到干燥。19.添加甲醇(200ml)且在低于60℃下經(jīng)由真空蒸餾濃縮到干燥。20.添加3％甲醇水溶液(300ml)，在0-5℃下攪拌15分鐘，過(guò)濾且用3％甲醇水溶液(100ml)洗滌濾餅。21.在熱空氣干燥器中于50-55℃下干燥白色固體直至水分含量為nmt0.5％。濕重：約80g干重：60g產(chǎn)率：85％水分<0.5％熔化范圍：131.7-133.1℃sor：+57.4(c＝1％chcl3溶液)。hplc/ri純度：93.0％。階段-v：3α-乙酰氧基-12-氧代-5β-膽-9(11)-烯-24-酸甲酯原材料：樣品編號(hào)原材料數(shù)量單位分子量摩爾數(shù)摩爾比1iv階段產(chǎn)物60g4300.1391.0270％tbhp水溶液610ml99.995.0634.0310％次氯酸鈉660ml74.51.0367.04氯鉻酸吡啶鎓32.8g2150.16361.15乙酸乙酯900ml--15v620％甲醇水溶液批次1和2210ml--3.5v720％亞硫酸鈉600ml--10v8甲醇批次1240ml--4.0v9水6000ml--100v10飽和鹽水溶液300ml--5.0v11甲醇批次2383ml--6.4v12水57ml--0.95v1313％甲醇水溶液40ml--0.66v實(shí)驗(yàn)程序：01.向潔凈且干燥的燒瓶中裝入乙酸乙酯(600ml)和階段-iv產(chǎn)物(60g)。02.在25-35℃下攪拌10分鐘。03.在25-35℃下添加70％tbhp水溶液(610ml)，然后在0-5℃下冷卻。04.在0-5℃下經(jīng)7小時(shí)添加10％次氯酸鈉(660ml)。05.在0-5℃下攪拌反應(yīng)混合物3小時(shí)。06.由hplc-ri(含20％etoac的己烷；階段iv產(chǎn)物為nmt1％)驗(yàn)證完全。07.分離有機(jī)層，用乙酸乙酯(300ml)萃取水層。08.用水(2×600ml)洗滌合并的有機(jī)層。09.裝入乙酸乙酯層和20％亞硫酸鈉水溶液(600ml)，在55℃下維持2小時(shí)。10.分離有機(jī)層，用水(2×600ml)洗滌。11.向r.b.燒瓶中裝入有機(jī)層，在25-30℃下裝入pcc(32.8g)。12.在25-30℃下攪拌反應(yīng)混合物6-8小時(shí)。13.由hplc-ri(含20％etoac的己烷；烯丙醇為nmt2％)驗(yàn)證完全。14.裝入脫礦物質(zhì)水(1200ml)且攪拌15分鐘，分離有機(jī)層。15.用脫礦物質(zhì)水(3×600ml)和鹽水溶液(300ml)洗滌有機(jī)層。16.在低于50℃下在真空蒸餾下完全去除溶劑。17.添加甲醇(240ml)且在低于50℃下經(jīng)由真空蒸餾完全去除溶劑。18.添加20％甲醇水溶液(180ml)，然后冷卻到0-5℃。19.在0-5℃下攪拌2小時(shí)，過(guò)濾且用冷(0-5℃)20％甲醇水溶液(30ml)洗滌濾餅。20.在熱空氣干燥器中于50-55℃下干燥固體8小時(shí)，粗重量為約38g。21.向新鮮且干燥的rbf中裝入粗38g階段-v材料22.裝入甲醇383ml。23.使反應(yīng)物質(zhì)回流，得到澄清溶液。24.在回流下逐滴添加脫礦物質(zhì)水57ml，且繼續(xù)回流30分鐘(觀察到固體沉淀)。25.緩慢冷卻反應(yīng)物質(zhì)到20-25℃，然后冷卻到10-15℃，且攪拌1小時(shí)。26.過(guò)濾，吸干且用13％甲醇水溶液(40ml)洗滌。27.在熱空氣烘箱中于60-65℃下干燥化合物直至lod：<0.5％。濕重：38g。干重：32g。產(chǎn)率：51.6％。熔化范圍：142-143.1℃。sor：+102.4(c＝1％丙酮溶液)。hplc/ri純度：94.0％。05.原材料和溶劑清單以下原材料和溶劑的清單是基于上述方法的詳情。06.關(guān)鍵參數(shù)在方法修改期間，鑒別以下步驟作為關(guān)鍵參數(shù)，其可顯示對(duì)質(zhì)量或產(chǎn)率的顯著影響。階段iii操作：在-40℃至-45℃下，在氮?dú)夥諊孪蚧衔镏刑砑尤宥⊙趸鶜浠X鋰溶液。解釋：對(duì)還原劑三叔丁氧基氫化鋁鋰的化學(xué)計(jì)量的控制對(duì)這一步驟的有利結(jié)果至關(guān)重要。如果使用太少還原劑，那么反應(yīng)將不完全。如果使用太多，那么將形成更多副產(chǎn)物化合物83。因?yàn)檫€原劑易濕，所以對(duì)化學(xué)計(jì)量的控制更具挑戰(zhàn)性。因此，重要的是使用無(wú)水溶劑和在氮?dú)夥諊逻M(jìn)行反應(yīng)。如果反應(yīng)受水分污染，那么將淬滅一部分三叔丁氧基氫化鋁鋰。操作：在25-35℃下，在氮?dú)夥諊孪蚧衔镏刑砑邮宥〈尖浫芤?。解釋：此反?yīng)需要強(qiáng)堿。叔丁醇鉀是足夠強(qiáng)的堿且執(zhí)行順利。如果暴露于水，那么堿被淬滅且改為形成氫氧化鉀，而氫氧化鉀不為足以引起所要反應(yīng)的強(qiáng)堿。為此，重要的是使用無(wú)水溶劑且在氮?dú)夥諊逻M(jìn)行此反應(yīng)。階段iv操作：在0至5℃下，在氮?dú)夥諊绿砑佣然一X溶液。解釋：二氯化乙基鋁對(duì)此反應(yīng)來(lái)說(shuō)是獨(dú)特良好的催化劑。雖然已試驗(yàn)其它價(jià)格比較低廉的催化劑，但反應(yīng)在這些催化劑下執(zhí)行不順利。水將與二氯化乙基鋁反應(yīng)且破壞其催化此反應(yīng)的能力。為此，重要的是此反應(yīng)使用無(wú)水溶劑和氮?dú)夥諊Ｈ绻磻?yīng)暴露于即使少量的水，那么反應(yīng)也不能執(zhí)行。階段v操作：次氯酸鈉的添加應(yīng)需要6-7小時(shí)，溫度必須控制在低于5℃。說(shuō)明：高于5℃的溫度在此反應(yīng)中產(chǎn)生較差的結(jié)果，且在次氯酸鈉添加期間溫度可能上升超過(guò)此極限。因此，重要的是以足夠緩慢以便仍能對(duì)溫度和時(shí)間進(jìn)行充分控制的速率添加次氯酸鈉。此在大規(guī)模上可證明為甚至更大的問(wèn)題。07.清潔程序已對(duì)脫氧膽酸中間體進(jìn)行研究以建立清潔程序。推斷，脫氧膽酸中間體易溶于二氯甲烷中，接著易溶于水和甲醇中。08.dca-中間體中的雜質(zhì)：在工藝過(guò)程開(kāi)發(fā)過(guò)程期間，分離并鑒別了許多雜質(zhì)，或在一些情況下單獨(dú)地合成可凝雜質(zhì)。這些化合物以及就各化合物所獲得的數(shù)據(jù)的清單列于下表中。實(shí)例12如流程2中所示由化合物24合成脫氧膽酸的制造方法適用于大規(guī)模生產(chǎn)。制造方法是安全、經(jīng)濟(jì)、環(huán)境友好的且產(chǎn)生一致地符合規(guī)格的高質(zhì)量最終產(chǎn)物?；衔?3的制備化合物33在40克規(guī)模上形成。依次向10.0g(25wt％)干的10％鈀/碳(pd/c)中添加化合物24(40.0g，90.0mmol，由hplc得知為98.2％auc)和600ml乙酸乙酯(etoac)。使反應(yīng)混合物加壓到60psi氫氣(h2)，且在70℃下反應(yīng)。13小時(shí)后的hplc分析指示由hplc得知<1％auc的化合物24剩余，形成<1％auc的烯丙醇和形成14.5％auc的化合物2434的非對(duì)映異構(gòu)體。認(rèn)為反應(yīng)完全，冷卻到30-35℃，且經(jīng)celite過(guò)濾。用etoac(400ml)洗滌celite濾餅，且濃縮所得濾液到約25體積，且不經(jīng)進(jìn)一步操作即用于下一步。使用上述化合物33于etoac(25體積)中的樣品進(jìn)行pcc氧化。向化合物33(90.0mmol)于etoac(25體積)中的樣品中添加pcc(19.4g，1.0當(dāng)量，阿爾德里奇(aldrich)批號(hào)s37874-058)。將反應(yīng)混合物在20-25℃下維持25小時(shí)。hplc分析指示化合物34的非對(duì)映異構(gòu)體為1.1％auc。認(rèn)為反應(yīng)混合物完全，用去離子水(400ml)稀釋并經(jīng)celite過(guò)濾。用etoac(2×200ml)洗滌濾餅。用去離子水(2×400ml)洗滌所得濾液，且經(jīng)darcokb-g(8.0g)處理。加熱混合物到45-50℃后維持4小時(shí)，然后冷卻到20-25℃。經(jīng)celite過(guò)濾漿液且用etoac(2×200ml)洗滌濾餅。濃縮etoac濾液到約5體積且用meoh(2×600ml)共沸回到約5體積。利用1hnmr分析所得漿液，指示6.4mol％etoac剩余。用去離子水(320ml)稀釋漿液且維持在20-25℃下1小時(shí)。過(guò)濾漿液，用去離子水(2×200ml)洗滌且在35℃-45℃下真空干燥，得到27.4g(68％)化合物33(由hplc得知，為97.9％auc，含有0.8％auc的化合物34的非對(duì)映異構(gòu)體)。kf分析指示水為0.02wt％。低于預(yù)期產(chǎn)率很可能歸因于沉淀期間存在的高含量etoac?；衔?4的制備將上述化合物33的樣品的10克部分用于在以下分離條件下實(shí)施的化合物34的形成。在4-6℃下，向化合物33(10.0g，22.4mmol)于60ml四氫呋喃(thf)中的溶液中添加33.6ml(1.5當(dāng)量，阿爾德里奇批號(hào)00419th)1m三叔丁氧基氫化鋁鋰(li(t-buo)3alh)的thf溶液，維持溫度低于6℃。18小時(shí)后的hplc分析指示<1％auc的化合物33剩余，并且形成5.5％auc的化合物34的非對(duì)映異構(gòu)體。認(rèn)為反應(yīng)完全，且用4mhcl(150ml)淬滅，維持溫度低于20℃。用庚烷(2×100ml)萃取反應(yīng)混合物。用1mhcl(100ml)和去離子水(2×100ml)洗滌合并的有機(jī)相。蒸餾澄清溶液減至約10體積，且用庚烷(2×100ml)共沸減至約10體積。觀察到一些積垢，且用庚烷(100ml)和mtbe(2.5ml)稀釋樣品。然后在70-75℃下加熱樣品以溶解且當(dāng)固體沉淀時(shí)，經(jīng)1小時(shí)的時(shí)間逐步冷卻降至約52℃。將稀漿液在52℃下保持1小時(shí)，48℃保持1小時(shí)和42℃保持1小時(shí)，之后切斷熱且緩慢冷卻漿液至20-25℃過(guò)夜。過(guò)濾漿液，用庚烷(2×25ml)洗滌且在35℃-45℃下真空干燥，得到6.8g(68％)呈白色固體狀的化合物34(96.0％auc，含有2.8％auc的化合物34的非對(duì)映異構(gòu)體)。過(guò)濾后在燒瓶中觀察到一些積垢。將固體溶解于ch2cl2中，且濃縮，得到1.3g(13％)化合物34(96.5％auc，含有1.9％auc的化合物34的非對(duì)映異構(gòu)體)。濃縮母液和洗滌液，得到1.6g(16％)化合物34。由于沉淀所得低于預(yù)期產(chǎn)率，所以使用100％庚烷代替1.25％mtbe/庚烷重復(fù)所述程序。用庚烷(200ml)稀釋化合物34的樣品(10g，22.4mmol，由hplc得知為93.4％auc)，且在80-85℃下加熱以溶解。當(dāng)固體沉淀時(shí)，經(jīng)1小時(shí)的時(shí)間緩慢冷卻溶液到約65℃。將稀漿液保持在65℃下1小時(shí)，且以5℃增量經(jīng)2小時(shí)的時(shí)間冷卻到30℃。在30℃下過(guò)濾漿液，用庚烷(2×25ml)洗滌且在35-45℃下真空干燥，得到7.5g(75％回收率)呈白色固體狀的化合物34(95.7％auc，含有0.1％auc的化合物34的非對(duì)映異構(gòu)體)。過(guò)濾后在燒瓶中觀察到一些積垢。對(duì)反應(yīng)器清洗液和母液進(jìn)行hplc分析粗dca的制備用2-methf(2×340ml)洗滌粗dca水溶液的樣品(340ml)。利用hplc分析水相，指示0.1％auc的rrt＝1.12的不明雜質(zhì)。用2-methf(340ml)稀釋水相且使用4mhcl(60ml)調(diào)節(jié)至ph＝1.7-2.0。分離各相且用去離子水(2×400ml)洗滌2-methf相。濃縮2-methf相到約5體積且用庚烷(3×320ml)共沸回到約5體積。利用1hnmr分析5體積漿液，指示相對(duì)于庚烷，2.0mol％2-methf剩余。用庚烷(320ml)稀釋漿液且在20-25℃下保持1小時(shí)。過(guò)濾漿液，用庚烷(2×150ml)洗滌且在35-45℃下真空干燥，得到24.2g(96％)粗dca(95.7％auc，含有0.4％auc的粗dca的非對(duì)映異構(gòu)體、1.8％auc的rrt＝0.5的不明雜質(zhì)和0.04％auc的rrt＝1.12的不明雜質(zhì)，)dca的制備在2.0g下嘗試粗dca的一系列漿液純化以評(píng)估純度和回收率。用25體積的meoh/ch2cl2(參看表1)稀釋粗dca的樣品(2.0g，5.1mmol)，且將所得漿液在特定溫度(參看表1)下保持1小時(shí)。使?jié){液冷卻到特定溫度(參看表1)并過(guò)濾。用ch2cl2(2×3體積)洗滌濾餅且在35-40℃下真空干燥過(guò)夜，得到dca(參看表1)。結(jié)果概述于下表1中。表1：dca的結(jié)果條目1-3的結(jié)果指示，在20-25℃下用1mol％meoh進(jìn)行漿液純化得到較佳回收率和與在35-37℃下用2mol％meoh進(jìn)行漿液純化的類似的結(jié)果。利用1hnmr分析dca的樣品，指示干燥后存在<1wt％的ch2cl2。當(dāng)前第1頁(yè)12當(dāng)前第1頁(yè)12