專(zhuān)利名稱(chēng)：一種肺炎鏈球菌多糖溶液中脫氧膽酸鈉的測(cè)定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于測(cè)試分析領(lǐng)域，具體為一種利用色譜測(cè)定脫氧膽酸鈉的方法。
背景技術(shù)：
肺炎鏈球菌是誘發(fā)細(xì)菌性肺炎、腦膜炎、中耳炎等疾病的重要病原菌。據(jù)2005年WHO估計(jì)，每年有160萬(wàn)人死于肺炎鏈球菌感染，其 中70萬(wàn) 100萬(wàn)是5歲以下兒童。盡管適當(dāng)?shù)目咕委熆梢杂行е委煼窝祖溓蚓膊?，但肺炎鏈球菌在發(fā)展中國(guó)家仍有很高的病死率。此外隨著細(xì)菌耐藥性的上升增加了治療困難，因此通過(guò)接種安全有效的疫苗是預(yù)防和控制肺炎鏈球菌疾病的最理想措施。在肺炎鏈球菌多糖的生產(chǎn)發(fā)酵工藝中，通常采用脫氧膽酸鈉作為殺菌劑，脫氧膽酸鈉具有毒性，且有著強(qiáng)烈刺激性，若不能有效去除造成殘留量過(guò)高會(huì)對(duì)人體產(chǎn)生毒副作用，因此準(zhǔn)確測(cè)定肺炎鏈球菌多糖原液中脫氧膽酸鈉的殘留量對(duì)疫苗生產(chǎn)有著重要影響，對(duì)疫苗產(chǎn)品質(zhì)量控制具有重要的意義。目前，國(guó)內(nèi)黃百芬等人在《LC一MS/ MS測(cè)定裂解流感疫苗中的去氧膽酸殘留量》一文中介紹了一種利用液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)，采用多反應(yīng)監(jiān)測(cè)定量測(cè)定流感裂解疫苗去氧膽酸的含量，但此方法步驟較多，且對(duì)儀器設(shè)備有較高要求，此外裂解流感疫苗屬病毒類(lèi)疫苗，與肺炎鏈球菌多糖疫苗有本質(zhì)區(qū)別，性質(zhì)差異較大，因此如何對(duì)肺炎鏈球菌多糖原液中的脫氧膽酸鈉進(jìn)行測(cè)定仍是一個(gè)技術(shù)難點(diǎn)。目前，國(guó)內(nèi)外尚無(wú)文獻(xiàn)報(bào)道肺炎鏈球菌多糖原液及肺炎多糖疫苗中脫氧膽酸鈉殘留量的測(cè)定方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明是在本領(lǐng)域當(dāng)前技術(shù)背景下，針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，研究出一種肺炎鏈球菌多糖溶液中脫氧膽酸鈉的測(cè)定方法。實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的的技術(shù)方案為—種肺炎鏈球菌多糖溶液中脫氧膽酸鈉的測(cè)定方法，包括步驟I)測(cè)定待檢肺炎鏈球菌多糖溶液中的糖濃度，標(biāo)記為Ctl ；2)制取脫氧膽酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液作為樣1，其脫氧膽酸鈉的濃度標(biāo)記為C1 ；3)取待檢的肺炎鏈球菌多糖溶液，作為樣2 ；4)樣I、樣2分別上樣于高效凝膠色譜柱，上樣后進(jìn)行洗脫，紀(jì)錄色譜圖洗脫峰開(kāi)始對(duì)應(yīng)時(shí)間標(biāo)記為h，峰結(jié)束對(duì)應(yīng)時(shí)間標(biāo)記為t2 ；5)對(duì)樣I色譜圖進(jìn)行積分，積分窗口為從峰開(kāi)始對(duì)應(yīng)時(shí)間h到峰結(jié)束對(duì)應(yīng)時(shí)間t2，得到樣I對(duì)應(yīng)的峰面積為S1;6)對(duì)樣2色譜圖進(jìn)行積分，積分窗口為從峰開(kāi)始對(duì)應(yīng)時(shí)間h到峰結(jié)束對(duì)應(yīng)時(shí)間t2，得到樣2對(duì)應(yīng)的峰面積為S2 ；7)根據(jù)公式(I):C2= (S2^-S1) XC1(I)
計(jì)算樣2中脫氧膽酸鈉的濃度；8)根據(jù)公式(2):F= (C2+ C0) X100%(2)計(jì)算樣2中脫氧膽酸鈉的百分含量。標(biāo)準(zhǔn)溶液是用基準(zhǔn)物質(zhì)配制的已知濃度的溶液，其濃度可按需確定。其中，所述步驟4)中的高效凝膠色譜柱為ODS-C18色譜柱。其是根據(jù)樣品分子大 小不同進(jìn)行分離，脫氧膽酸鈉與肺炎多糖分子大小間存在差異，可被有效分離。ODS是英文octadecyl silane的縮寫(xiě)，即填料是十八(烷)基硅烷，適合分析弱極性物質(zhì)里極性更弱的物質(zhì)。其中，所述步驟4)中洗脫的流動(dòng)相為乙腈-水溶液，乙腈-水溶液的質(zhì)量比例為1:05-1. 5。其中,所述步驟4)中樣I和樣2的上樣體積為20-100 μ I。優(yōu)選地，步驟4)中樣I和樣2的上樣體積為30-60 μ I。其中，所述步驟4)中樣I和樣2的洗脫流速為O. 8-1. 5ml/min.其中，所述步驟4)中記錄色譜圖是在檢測(cè)波長(zhǎng)為200_220nm下記錄。其中，所述肺炎鏈球菌為下組中的一種肺炎鏈球菌I型、肺炎鏈球菌2型、肺炎鏈球菌3型、肺炎鏈球菌4型、肺炎鏈球菌5型、肺炎鏈球菌6B型、肺炎鏈球菌7F型、肺炎鏈球菌8型、肺炎鏈球菌9N型、肺炎鏈球菌9V型、肺炎鏈球菌IOA型、肺炎鏈球菌IlA型、肺炎鏈球菌12F型、肺炎鏈球菌14型、肺炎鏈球菌15B型、肺炎鏈球菌17F型、肺炎鏈球菌18C型、肺炎鏈球菌19A型、肺炎鏈球菌19F型、肺炎鏈球菌20型、肺炎鏈球菌22F型、肺炎鏈球菌23F型、肺炎鏈球菌33F型。本發(fā)明的有益效果為根據(jù)脫氧膽酸鈉與肺炎多糖分子間大小存在差異，利用二者在凝膠層析時(shí)的保留時(shí)間不同，采用高效液相色譜法將脫氧膽酸鈉與肺炎鏈球菌多糖分離，利用已知濃度的脫氧膽酸鈉作為標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照，從而準(zhǔn)確測(cè)定肺炎鏈球菌多糖原液中脫氧膽酸鈉含量。本發(fā)明提供了一種準(zhǔn)確、重復(fù)性好、快速、便捷的肺炎鏈球菌多糖原液中脫氧膽酸鈉的測(cè)定方法，建立了評(píng)價(jià)肺炎鏈球菌多糖原液質(zhì)量的新方法。
具體實(shí)施例方式以下實(shí)施例用于說(shuō)明本發(fā)明，但不應(yīng)用來(lái)限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例中，使用的高效凝膠過(guò)濾色譜柱ODS-C18 (4·6·ιΧ250πιπι，5μπι)，購(gòu)自安捷倫科技有限公司。實(shí)施例I測(cè)定待檢I型肺炎球菌多糖的糖濃度，為19. 2mg/ml (C0);精密制取100 μ g/ml(C1)脫氧膽酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液作為樣I ;取待檢的I型肺炎鏈球菌多糖溶液，作為樣2 ；樣I、樣2分別上樣于乙腈-水(50 50)充分平衡的高效凝膠色譜柱，上樣體積為50 μ 1，洗脫流速為l.Oml/min，于波長(zhǎng)210nm紀(jì)錄色譜圖洗脫峰開(kāi)始對(duì)應(yīng)時(shí)間為14. 892min，峰結(jié)束對(duì)應(yīng)時(shí)間為15. 917min ；對(duì)樣I色譜圖進(jìn)行積分，調(diào)節(jié)積分窗口為從峰開(kāi)始對(duì)應(yīng)時(shí)間14. 892min到峰結(jié)束對(duì)應(yīng)時(shí)間15. 917，得到樣I對(duì)應(yīng)的峰面積為17862 (S1);對(duì)樣2色譜圖進(jìn)行積分，調(diào)節(jié)積分窗口為從峰開(kāi)始對(duì)應(yīng)時(shí)間14. 892min到峰結(jié)束對(duì)應(yīng)時(shí)間15. 917min，得到樣2對(duì)應(yīng)的峰面積為 1265 (S2)；根據(jù)公式(I)計(jì)算I型肺炎鏈球菌多糖脫氧膽酸鈉的濃度C2= (S2+ S1) XC1= (1265 + 17862) X 100=7. 08 μ g/ml根據(jù)公式(2)計(jì)算I型肺炎鏈球菌多糖脫氧膽酸鈉的百分含量F= (C2^-C0) X 100%= (7. 08/19200) X 100%=0. 037%對(duì)樣品I連續(xù)進(jìn)樣5次，分別計(jì)算峰面積，5次測(cè)定的峰面積變異系數(shù)CV=O. 93% ；對(duì)樣品2連續(xù)進(jìn)樣5次，分別計(jì)算峰面積，5次測(cè)定的峰面積變異系數(shù)CV=L 46%。 實(shí)施例2測(cè)定待檢2型肺炎球菌多糖的多糖濃度，為20. 2mg/ml (C。);精密制取100 μ g/ml(C1)脫氧膽酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液作為樣I ;取待檢的2型肺炎鏈球菌多糖溶液，作為樣2 ；樣I、樣2分別上樣于乙腈-水(50 50)充分平衡的高效凝膠色譜柱，上樣體積為50 μ 1，洗脫流速為l.Oml/min，于波長(zhǎng)210nm記錄色譜圖洗脫峰開(kāi)始對(duì)應(yīng)時(shí)間為14. 815min,峰結(jié)束對(duì)應(yīng)時(shí)間為15. 903min ；對(duì)樣I色譜圖進(jìn)行積分，調(diào)節(jié)積分窗口為從峰開(kāi)始對(duì)應(yīng)時(shí)間14. 815min到峰結(jié)束對(duì)應(yīng)時(shí)間15. 903，得到樣I對(duì)應(yīng)的峰面積為17891 (S1);對(duì)樣2色譜圖進(jìn)行積分，調(diào)節(jié)積分窗口為從峰開(kāi)始對(duì)應(yīng)時(shí)間14. 815min到峰結(jié)束對(duì)應(yīng)時(shí)間15. 903min，得到樣2對(duì)應(yīng)的峰面積為 1415 (S2)；則2型肺炎鏈球菌多糖脫氧膽酸鈉的濃度C2= (S2^S1) XC1=(1415 + 17891) X 100=7. 91 μ g/ml ；2型肺炎鏈球菌多糖脫氧膽酸鈉的百分含量F= (C2^C0) X 100%=(7.91/20200) X100%=0. 039%。對(duì)樣品I連續(xù)進(jìn)樣5次，分別計(jì)算峰面積，5次測(cè)定的峰面積變異系數(shù)CV=L 04% ；對(duì)樣品2連續(xù)進(jìn)樣5次，分別計(jì)算峰面積，5次測(cè)定的峰面積變異系數(shù)CV=L 15%。實(shí)施例3測(cè)定待檢3型肺炎球菌多糖的多糖濃度，為19. 9mg/ml (Ctl);精密制取100 μ g/ml(C1)脫氧膽酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液作為樣I ;取待檢的3型肺炎鏈球菌多糖溶液，作為樣2 ；樣I、樣2分別上樣于乙腈-水(50 50)充分平衡的高效凝膠色譜柱，上樣體積為50 μ 1，洗脫流速為l.Oml/min，于波長(zhǎng)210nm記錄色譜圖洗脫峰開(kāi)始對(duì)應(yīng)時(shí)間為14. 826min,峰結(jié)束對(duì)應(yīng)時(shí)間為15. 919min ；對(duì)樣I色譜圖進(jìn)行積分，調(diào)節(jié)積分窗口為從峰開(kāi)始對(duì)應(yīng)時(shí)間14. 826min到峰結(jié)束對(duì)應(yīng)時(shí)間15. 919，得到樣I對(duì)應(yīng)的峰面積為17902 ;對(duì)樣2色譜圖進(jìn)行積分，調(diào)節(jié)積分窗口為從峰開(kāi)始對(duì)應(yīng)時(shí)間14. 826min到峰結(jié)束對(duì)應(yīng)時(shí)間15. 919min，得到樣2對(duì)應(yīng)的峰面積為953 ；根據(jù)公式計(jì)算3型肺炎鏈球菌多糖脫氧膽酸鈉的濃度C2= (S2^S1) XC1=(953 + 17902) X 100=5. 32 μ g/ml ；3型肺炎鏈球菌多糖脫氧膽酸鈉的百分含量F= (C2^C0) X 100%=(5.32/19900) X100%=0. 027%。
實(shí)施例4測(cè)定待檢4型肺炎球菌多糖的多糖濃度，為19. 2mg/ml (C。);精密制取100 μ g/ml(C1)脫氧膽酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液作為樣I ;取待檢的4型肺炎鏈球菌多糖溶液，作為樣2 ；樣I、樣2分別上樣于乙腈-水(50 50)充分平衡的高效凝膠色譜柱，上樣體積為50 μ 1，洗脫流速為l.Oml/min，于波長(zhǎng)210nm記錄色譜圖洗脫峰開(kāi)始對(duì)應(yīng)時(shí)間為14. 817min,峰結(jié)束對(duì)應(yīng)時(shí)間為15. 912min。對(duì)樣I色譜圖進(jìn)行積分，調(diào)節(jié)積分窗口為從峰開(kāi)始對(duì)應(yīng)時(shí)間14. 817min到峰結(jié)束對(duì)應(yīng)時(shí)間15. 912，得到樣I對(duì)應(yīng)的峰面積為17957 ;對(duì)樣2色譜圖進(jìn)行積分，調(diào)節(jié)積分窗口為從峰開(kāi)始對(duì)應(yīng)時(shí)間14. 817min到峰結(jié)束對(duì)應(yīng)時(shí)間15. 912min，得到樣2對(duì)應(yīng)的峰面積為1039 ；
根據(jù)公式(I)計(jì)算4型肺炎鏈球菌多糖脫氧膽酸鈉的濃度C2= (S2^S1) XC1=(1039 + 17957) X 100=5. 79 μ g/ml ；根據(jù)公式(2)計(jì)算4型肺炎鏈球菌多糖脫氧膽酸鈉的百分含量F=(C2^Ctl)X 100%=(5.79/19200) X100%=0. 030%。實(shí)施例5測(cè)定待檢5型肺炎球菌多糖的多糖濃度，為19. 7mg/ml (C。);精密制取100 μ g/ml(C1)脫氧膽酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液作為樣I ;取待檢的5型肺炎鏈球菌多糖溶液，作為樣2 ；樣I、樣2分別上樣于乙腈-水(50 50)充分平衡的高效凝膠色譜柱，上樣體積為50 μ 1，洗脫流速為l.Oml/min，于波長(zhǎng)210nm記錄色譜圖洗脫峰開(kāi)始對(duì)應(yīng)時(shí)間為14. 825min,峰結(jié)束對(duì)應(yīng)時(shí)間為15. 921min ；對(duì)樣I色譜圖進(jìn)行積分，調(diào)節(jié)積分窗口為從峰開(kāi)始對(duì)應(yīng)時(shí)間14. 825min到峰結(jié)束對(duì)應(yīng)時(shí)間15. 921，得到樣I對(duì)應(yīng)的峰面積為18034 ;對(duì)樣2色譜圖進(jìn)行積分，調(diào)節(jié)積分窗口為從峰開(kāi)始對(duì)應(yīng)時(shí)間14. 825min到峰結(jié)束對(duì)應(yīng)時(shí)間15. 921min，得到樣2對(duì)應(yīng)的峰面積為1278 ；根據(jù)公式計(jì)算5型肺炎鏈球菌多糖脫氧膽酸鈉的濃度C2= (SfS1) XC1=(1278 + 18034) X 100=7. 09 μ g/ml ；根據(jù)公式計(jì)算5型肺炎鏈球菌多糖脫氧膽酸鈉的百分含量F = (C2-C0) X 100%=(7.09/19700) X100%=0. 036%。實(shí)施例6測(cè)定待檢6B型肺炎球菌多糖的多糖濃度，為18. 3mg/ml (C0);精密制取100 μ g/ml (C1)脫氧膽酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液作為樣I ;取待檢的6B型肺炎鏈球菌多糖溶液，作為樣2 ；樣I、樣2分別上樣于乙腈-水(50 50)充分平衡的高效凝膠色譜柱，上樣體積為50 μ 1，洗脫流速為l.Oml/min，于波長(zhǎng)210nm記錄色譜圖洗脫峰開(kāi)始對(duì)應(yīng)時(shí)間為14. 816min,峰結(jié)束對(duì)應(yīng)時(shí)間為15. 929min ；對(duì)樣I色譜圖進(jìn)行積分，調(diào)節(jié)積分窗口為從峰開(kāi)始對(duì)應(yīng)時(shí)間14. 816min到峰結(jié)束對(duì)應(yīng)時(shí)間15. 929，得到樣I對(duì)應(yīng)的峰面積為17986 ;對(duì)樣2色譜圖進(jìn)行積分，調(diào)節(jié)積分窗口為從峰開(kāi)始對(duì)應(yīng)時(shí)間14. 816min到峰結(jié)束對(duì)應(yīng)時(shí)間15. 929min，得到樣2對(duì)應(yīng)的峰面積為1097 ；根據(jù)公式計(jì)算
6B型肺炎鏈球菌多糖脫氧膽酸鈉的濃度C2= (S2^S1) XC1=(1097 + 17986) X 100=6. 10 μ g/ml ；根據(jù)公式計(jì)算

6B型肺炎鏈球菌多糖脫氧膽酸鈉的百分含量F= (C2^C0) X 100%=(6. 10/18300) X100%=0. 033%。實(shí)施例7測(cè)定待檢7F型肺炎球菌多糖的多糖濃度，為18. 9mg/ml (C0);精密制取100 μ g/ml (C1)脫氧膽酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液作為樣I ;取待檢的7F型肺炎鏈球菌多糖溶液，作為樣2 ；樣I、樣2分別上樣于乙腈-水(50 50)充分平衡的高效凝膠色譜柱，上樣體積為50 μ 1，洗脫流速為l.Oml/min，于波長(zhǎng)210nm記錄色譜圖洗脫峰開(kāi)始對(duì)應(yīng)時(shí)間為14. 829min,峰結(jié)束對(duì)應(yīng)時(shí)間為15. 932min ；對(duì)樣I色譜圖進(jìn)行積分，調(diào)節(jié)積分窗口為從峰開(kāi)始對(duì)應(yīng)時(shí)間14. 829min到峰結(jié)束對(duì)應(yīng)時(shí)間15. 932，得到樣I對(duì)應(yīng)的峰面積為17971 ;對(duì)樣2色譜圖進(jìn)行積分，調(diào)節(jié)積分窗口為從峰開(kāi)始對(duì)應(yīng)時(shí)間14. 829min到峰結(jié)束對(duì)應(yīng)時(shí)間15. 932min，得到樣2對(duì)應(yīng)的峰面積為932 ；根據(jù)公式7F型肺炎鏈球菌多糖脫氧膽酸鈉的濃度C2= (S2^S1) XC1=(932 + 17971) X 100=5. 19 μ g/ml ；根據(jù)公式7F型肺炎鏈球菌多糖脫氧膽酸鈉的百分含量F= (C2^C0) X 100%=(5. 19/18900) X100%=0. 027%。實(shí)施例8測(cè)定待檢8型肺炎球菌多糖的多糖濃度，為19. lmg/ml (Ctl);精密制取100 μ g/ml(C1)脫氧膽酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液作為樣I ;取待檢的8型肺炎鏈球菌多糖溶液，作為樣2 ；樣I、樣2分別上樣于乙腈-水(50 50)充分平衡的高效凝膠色譜柱，上樣體積為50 μ 1，洗脫流速為l.Oml/min，于波長(zhǎng)200nm記錄色譜圖洗脫峰開(kāi)始對(duì)應(yīng)時(shí)間為14. 815min，峰結(jié)束對(duì)應(yīng)時(shí)間為15. 927min ；對(duì)樣I色譜圖進(jìn)行積分，調(diào)節(jié)積分窗口為從峰開(kāi)始對(duì)應(yīng)時(shí)間14. 815min到峰結(jié)束對(duì)應(yīng)時(shí)間15. 927，得到樣I對(duì)應(yīng)的峰面積為18012 ;對(duì)樣2色譜圖進(jìn)行積分，調(diào)節(jié)積分窗口為從峰開(kāi)始對(duì)應(yīng)時(shí)間14. 815min到峰結(jié)束對(duì)應(yīng)時(shí)間15. 927min，得到樣2對(duì)應(yīng)的峰面積為1015 ；根據(jù)公式計(jì)算8型肺炎鏈球菌多糖脫氧膽酸鈉的濃度C2= (SfS1) XC1=(1015 + 18012) X 100=5. 64 μ g/ml ；8型肺炎鏈球菌多糖脫氧膽酸鈉的百分含量F= (C2^C0) X 100%=(5.64/19100) X100%=0. 030%。本實(shí)施例的樣品共取樣5次，5次檢測(cè)的8型肺炎鏈球菌多糖脫氧膽酸鈉的濃度平均偏差為I. 0%。實(shí)施例9測(cè)定待檢9N型肺炎球菌多糖的多糖濃度，為19. 2mg/ml (C0);精密制取100 μ g/ml (C1)脫氧膽酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液作為樣I ;取待檢的9N型肺炎鏈球菌多糖溶液，作為樣2 ；樣I、樣2分別上樣于乙腈-水(50 50)充分平衡的高效凝膠色譜柱，上樣體積為50 μ 1，洗脫流速為l.Oml/min，于波長(zhǎng)220nm記錄色譜圖洗脫峰開(kāi)始對(duì)應(yīng)時(shí)間為14. 815min,峰結(jié)束對(duì)應(yīng)時(shí)間為15. 918min ；對(duì)樣I色譜圖進(jìn)行積分，調(diào)節(jié)積分窗口為從峰開(kāi)始對(duì)應(yīng)時(shí)間14. 815min到峰結(jié)束對(duì)應(yīng)時(shí)間15. 918，得到樣I對(duì)應(yīng)的峰面積為17927 ;對(duì)樣2色譜圖進(jìn)行積分，調(diào)節(jié)積分窗口為從峰開(kāi)始對(duì)應(yīng)時(shí)間14. 815min到峰結(jié)束對(duì)應(yīng)時(shí)間15. 918min，得到樣2對(duì)應(yīng)的峰面積為981 ；根據(jù)公式計(jì)算9N型肺炎鏈球菌多糖脫氧膽酸鈉的濃度C2= (S2^S1) XC1=(981 + 17927) X 100=5. 47 μ g/ml ；根據(jù)公式計(jì)算9N型肺炎鏈球菌多糖脫氧膽酸鈉的百分含量F= (C2-C0) X 100%=(5.47/19200) X100%=0. 028%。實(shí)施例10測(cè)定待檢9V型肺炎球菌多糖的多糖濃度，為19. 5mg/ml (C0);精密制取100 μ g/ml (C1)脫氧膽酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液作為樣I ;取待檢的9V型肺炎鏈球菌多糖溶液，作為樣2 ；樣I、樣2分別上樣于乙腈-水(50 50)充分平衡的高效凝膠色譜柱，上樣體積為50 μ 1，洗脫流速為l.Oml/min，于波長(zhǎng)210nm記錄色譜圖洗脫峰開(kāi)始對(duì)應(yīng)時(shí)間為14. 827min,峰結(jié)束對(duì)應(yīng)時(shí)間為15. 931min ；對(duì)樣I色譜圖進(jìn)行積分，調(diào)節(jié)積分窗口為從峰開(kāi)始對(duì)應(yīng)時(shí)間14. 827min到峰結(jié)束對(duì)應(yīng)時(shí)間15. 931，得到樣I對(duì)應(yīng)的峰面積為17956 ;對(duì)樣2色譜圖進(jìn)行積分，調(diào)節(jié)積分窗口為從峰開(kāi)始對(duì)應(yīng)時(shí)間14. 827min到峰結(jié)束對(duì)應(yīng)時(shí)間15. 931min，得到樣2對(duì)應(yīng)的峰面積為872 ；根據(jù)公式
9V型肺炎鏈球菌多糖脫氧膽酸鈉的濃度C2= (S2^S1) XC1=(872 + 17956) X 100=4. 86 μ g/ml ；根據(jù)公式9V型肺炎鏈球菌多糖脫氧膽酸鈉的百分含量F= (C2^C0) X 100%=(4. 86/19500) X100%=0. 025%。實(shí)施例11測(cè)定待檢IOA型肺炎球菌多糖的多糖濃度，為17. 9mg/ml (Ctl);精密制取100 μ g/ml (C1)脫氧膽酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液作為樣I ;取待檢的IOA型肺炎鏈球菌多糖溶液，作為樣2 ；樣I、樣2分別上樣于乙腈-水(50 50)充分平衡的高效凝膠色譜柱，上樣體積為50 μ 1，洗脫流速為l.Oml/min，于波長(zhǎng)210nm記錄色譜圖洗脫峰開(kāi)始對(duì)應(yīng)時(shí)間為14. 823min,峰結(jié)束對(duì)應(yīng)時(shí)間為15. 926min ；對(duì)樣I色譜圖進(jìn)行積分，調(diào)節(jié)積分窗口為從峰開(kāi)始對(duì)應(yīng)時(shí)間14. 823min到峰結(jié)束對(duì)應(yīng)時(shí)間15. 926，得到樣I對(duì)應(yīng)的峰面積為17998 ;對(duì)樣2色譜圖進(jìn)行積分，調(diào)節(jié)積分窗口為從峰開(kāi)始對(duì)應(yīng)時(shí)間14. 823min到峰結(jié)束對(duì)應(yīng)時(shí)間15. 926min，得到樣2對(duì)應(yīng)的峰面積為1103 ；根據(jù)公式計(jì)算IOA型肺炎鏈球菌多糖脫氧膽酸鈉的濃度(2= (S2^S1) XC1=(1103 + 17998) X 100=6. 13 μ g/ml ；根據(jù)公式計(jì)算IOA型肺炎鏈球菌多糖脫氧膽酸鈉的百分含量F= (C2-C0)X 100%=(6.13/17900) X100%=0. 034%。實(shí)施例12測(cè)定待檢IlA型肺炎球菌多糖的多糖濃度，為18. 6mg/ml (C。);精密制取100 μ g/ml (C1)脫氧膽酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液作為樣I ;取待檢的IlA型肺炎鏈球菌多糖溶液，作為樣2 ；樣I、樣2分別上樣于乙腈-水(50 50)充分平衡的高效凝膠色譜柱，上樣體積為50 μ 1，洗脫流速為l.Oml/min，于波長(zhǎng)210nm記錄色譜圖洗脫峰開(kāi)始對(duì)應(yīng)時(shí)間為14. 857min,峰結(jié)束對(duì)應(yīng)時(shí)間為15. 963min ；對(duì)樣I色譜圖進(jìn)行積分，調(diào)節(jié)積分窗口為從峰開(kāi)始對(duì)應(yīng)時(shí)間14. 857min到峰結(jié)束對(duì)應(yīng)時(shí)間15. 963，得到樣I對(duì)應(yīng)的峰面積為18124 ;對(duì)樣2色譜圖進(jìn)行積分，調(diào)節(jié)積分窗口為從峰開(kāi)始對(duì)應(yīng)時(shí)間14. 857min到峰結(jié)束對(duì)應(yīng)時(shí)間15. 963min，得到樣2對(duì)應(yīng)的峰面積為945 ； 根據(jù)公式IlA型肺炎鏈球菌多糖脫氧膽酸鈉的濃度C2= (S2^S1) XC1=(945 + 18124) X 100=5. 21 μ g/ml ；根據(jù)公式IlA型肺炎鏈球菌多糖脫氧膽酸鈉的百分含量F= (C2^C0) X 100%=(5.21/18600) X100%=0. 028%。實(shí)施例13測(cè)定待檢12F型肺炎球菌多糖的多糖濃度，為19.8mg/ml (C。);精密制取100 μ g/ml (C1)脫氧膽酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液作為樣I ;取待檢的12F型肺炎鏈球菌多糖溶液，作為樣2 ；樣I、樣2分別上樣于乙腈-水(50 50)充分平衡的高效凝膠色譜柱，上樣體積為50 μ 1，洗脫流速為l.Oml/min，于波長(zhǎng)210nm記錄色譜圖洗脫峰開(kāi)始對(duì)應(yīng)時(shí)間為14. 862min,峰結(jié)束對(duì)應(yīng)時(shí)間為15. 977min ；對(duì)樣I色譜圖進(jìn)行積分，調(diào)節(jié)積分窗口為從峰開(kāi)始對(duì)應(yīng)時(shí)間14. 862min到峰結(jié)束對(duì)應(yīng)時(shí)間15. 977，得到樣I對(duì)應(yīng)的峰面積為18035 ;對(duì)樣2色譜圖進(jìn)行積分，調(diào)節(jié)積分窗口為從峰開(kāi)始對(duì)應(yīng)時(shí)間14. 862min到峰結(jié)束對(duì)應(yīng)時(shí)間15. 977min，得到樣2對(duì)應(yīng)的峰面積為815 ；根據(jù)公式計(jì)算12F型肺炎鏈球菌多糖脫氧膽酸鈉的濃度(2= (S2^S1) XC1=(815 + 18035) X 100=4. 52 μ g/ml ；12F型肺炎鏈球菌多糖脫氧膽酸鈉的百分含量F= (C2^C0) X 100%=(4. 52/19800) X100%=0. 023%。實(shí)施例14測(cè)定待檢14型肺炎球菌多糖的多糖濃度，為19. lmg/ml (C0);精密制取100 μ g/ml (C1)脫氧膽酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液作為樣I ;取待檢的14型肺炎鏈球菌多糖溶液，作為樣2 ；樣I、樣2分別上樣于乙腈-水(50 50)充分平衡的高效凝膠色譜柱，上樣體積為50 μ 1，洗脫流速為l.Oml/min，于波長(zhǎng)210nm記錄色譜圖洗脫峰開(kāi)始對(duì)應(yīng)時(shí)間為14. 855min,峰結(jié)束對(duì)應(yīng)時(shí)間為15. 968min ；
對(duì)樣I色譜圖進(jìn)行積分，調(diào)節(jié)積分窗口為從峰開(kāi)始對(duì)應(yīng)時(shí)間14. 855min到峰結(jié)束對(duì)應(yīng)時(shí)間15. 968，得到樣I對(duì)應(yīng)的峰面積為18116 ;對(duì)樣2色譜圖進(jìn)行積分，調(diào)節(jié)積分窗口為從峰開(kāi)始對(duì)應(yīng)時(shí)間14. 855min到峰結(jié)束對(duì)應(yīng)時(shí)間15. 968min，得到樣2對(duì)應(yīng)的峰面積為1017 ；根據(jù)公式14型肺炎鏈球菌多糖脫氧膽酸鈉的濃度C2= (S2^S1) XC1=(1017 + 18116) X 100=5. 61 μ g/ml ；根據(jù)公式14型肺炎鏈球菌多糖脫氧膽酸鈉的百分含量F= (C2^C0) X 100%=(5.61/19100) X100%=0. 029%。實(shí)施例15測(cè)定待檢15B型肺炎球菌多糖的多糖濃度，為20. 3mg/ml (Ctl);精密制取100 μ g/ml (C1)脫氧膽酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液作為樣I ;取待檢的15B型肺炎鏈球菌多糖溶液，作為樣2 ；樣I、樣2分別上樣于乙腈-水(50 50)充分平衡的高效凝膠色譜柱，上樣體積為50 μ 1，洗脫流速為l.Oml/min，于波長(zhǎng)210nm記錄色譜圖洗脫峰開(kāi)始對(duì)應(yīng)時(shí)間為14. 873min,峰結(jié)束對(duì)應(yīng)時(shí)間為15. 991min ；
對(duì)樣I色譜圖進(jìn)行積分，調(diào)節(jié)積分窗口為從峰開(kāi)始對(duì)應(yīng)時(shí)間14. 873min到峰結(jié)束對(duì)應(yīng)時(shí)間15. 991，得到樣I對(duì)應(yīng)的峰面積為17976 ;對(duì)樣2色譜圖進(jìn)行積分，調(diào)節(jié)積分窗口為從峰開(kāi)始對(duì)應(yīng)時(shí)間14. 873min到峰結(jié)束對(duì)應(yīng)時(shí)間15. 991min，得到樣2對(duì)應(yīng)的峰面積為1139 ；根據(jù)公式15B型肺炎鏈球菌多糖脫氧膽酸鈉的濃度C2= (S2^S1) XC1=(1139 + 17976) X 100=6. 34 μ g/ml ；根據(jù)公式15B型肺炎鏈球菌多糖脫氧膽酸鈉的百分含量F= (C2^C0) X 100%=(6.34/20300) X100%=0. 031%。實(shí)施例16測(cè)定待檢17F型肺炎球菌多糖的多糖濃度，為19. 4mg/ml (Ctl);精密制取100 μ g/ml (C1)脫氧膽酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液作為樣I ;取待檢的17F型肺炎鏈球菌多糖溶液，作為樣2 ；樣I、樣2分別上樣于乙腈-水(50 50)充分平衡的高效凝膠色譜柱，上樣體積為50 μ 1，洗脫流速為l.Oml/min，于波長(zhǎng)210nm記錄色譜圖洗脫峰開(kāi)始對(duì)應(yīng)時(shí)間為14. 715min，峰結(jié)束對(duì)應(yīng)時(shí)間為15. 830min ；對(duì)樣I色譜圖進(jìn)行積分，調(diào)節(jié)積分窗口為從峰開(kāi)始對(duì)應(yīng)時(shí)間14. 715min到峰結(jié)束對(duì)應(yīng)時(shí)間15. 830，得到樣I對(duì)應(yīng)的峰面積為18112 ;對(duì)樣2色譜圖進(jìn)行積分，調(diào)節(jié)積分窗口為從峰開(kāi)始對(duì)應(yīng)時(shí)間14. 715min到峰結(jié)束對(duì)應(yīng)時(shí)間15. 830min，得到樣2對(duì)應(yīng)的峰面積為829 ；根據(jù)公式17F型肺炎鏈球菌多糖脫氧膽酸鈉的濃度C2= (S2^S1) XC1=(829 + 18112) X 100=4. 58 μ g/ml ；
根據(jù)公式17F型肺炎鏈球菌多糖脫氧膽酸鈉的百分含量F= (C2^C0) X 100%=(4. 58/19400) X100%=0. 024%。實(shí)施例17測(cè)定待檢18C型肺炎球菌多糖的多糖濃度，為18. 6mg/ml (Ctl);精密制取100 μ g/ml (C1)脫氧膽酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液作為樣I ;取待檢的18C型肺炎鏈球菌多糖溶液，作為樣2 ；樣I、樣2分別上樣于乙腈-水(50 50)充分平衡的高效凝膠色譜柱，上樣體積為50 μ 1，洗脫流速為l.Oml/min，于波長(zhǎng)210nm記錄色譜圖洗脫峰開(kāi)始對(duì)應(yīng)時(shí)間為14. 623min，峰結(jié)束對(duì)應(yīng)時(shí)間為15. 772min ；
對(duì)樣I色譜圖進(jìn)行積分，調(diào)節(jié)積分窗口為從峰開(kāi)始對(duì)應(yīng)時(shí)間14. 623min到峰結(jié)束對(duì)應(yīng)時(shí)間15. 772，得到樣I對(duì)應(yīng)的峰面積為18025 ;對(duì)樣2色譜圖進(jìn)行積分，調(diào)節(jié)積分窗口為從峰開(kāi)始對(duì)應(yīng)時(shí)間14. 623min到峰結(jié)束對(duì)應(yīng)時(shí)間15. 772min，得到樣2對(duì)應(yīng)的峰面積為971 ；根據(jù)公式計(jì)算18C型肺炎鏈球菌多糖脫氧膽酸鈉的濃度(2= (S2^S1) XC1=(971 + 18025) X 100=5. 39 μ g/ml ；18C型肺炎鏈球菌多糖脫氧膽酸鈉的百分含量F= (C2^C0) X 100%=(5.39/18600) X100%=0. 029%。實(shí)施例18測(cè)定待檢19A型肺炎球菌多糖的多糖濃度，為18. 2mg/ml (C。);精密制取100 μ g/ml (C1)脫氧膽酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液作為樣I ;取待檢的19A型肺炎鏈球菌多糖溶液，作為樣2 ；樣I、樣2分別上樣于乙腈-水(50 50)充分平衡的高效凝膠色譜柱，上樣體積為50 μ 1，洗脫流速為l.Oml/min，于波長(zhǎng)210nm記錄色譜圖洗脫峰開(kāi)始對(duì)應(yīng)時(shí)間為14. 713min，峰結(jié)束對(duì)應(yīng)時(shí)間為15. 836min ；對(duì)樣I色譜圖進(jìn)行積分，調(diào)節(jié)積分窗口為從峰開(kāi)始對(duì)應(yīng)時(shí)間14. 713min到峰結(jié)束對(duì)應(yīng)時(shí)間15. 836，得到樣I對(duì)應(yīng)的峰面積為17964 ;對(duì)樣2色譜圖進(jìn)行積分，調(diào)節(jié)積分窗口為從峰開(kāi)始對(duì)應(yīng)時(shí)間14. 713min到峰結(jié)束對(duì)應(yīng)時(shí)間15. 836min，得到樣2對(duì)應(yīng)的峰面積為1205 ；根據(jù)公式計(jì)算19A型肺炎鏈球菌多糖脫氧膽酸鈉的濃度(2= (S2^S1) XC1=(1205 + 17964) X 100=6. 71 μ g/ml ；19A型肺炎鏈球菌多糖脫氧膽酸鈉的百分含量F= (C2^C0) X 100%=(6.71/18200) X100%=0. 037%。實(shí)施例19測(cè)定待檢19F型肺炎球菌多糖的多糖濃度，為18. 9mg/ml (C。);精密制取100 μ g/ml (C1)脫氧膽酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液作為樣I ;取待檢的19F型肺炎鏈球菌多糖溶液，作為樣2 ；樣I、樣2分別上樣于乙腈-水(50 50)充分平衡的高效凝膠色譜柱，上樣體積為50 μ 1，洗脫流速為l.Oml/min，于波長(zhǎng)210nm記錄色譜圖洗脫峰開(kāi)始對(duì)應(yīng)時(shí)間為14. 755min，峰結(jié)束對(duì)應(yīng)時(shí)間為15. 871min ；對(duì)樣I色譜圖進(jìn)行積分，調(diào)節(jié)積分窗口為從峰開(kāi)始對(duì)應(yīng)時(shí)間14. 755min到峰結(jié)束對(duì)應(yīng)時(shí)間15. 871，得到樣I對(duì)應(yīng)的峰面積為17893 ;對(duì)樣2色譜圖進(jìn)行積分，調(diào)節(jié)積分窗口為從峰開(kāi)始對(duì)應(yīng)時(shí)間14. 755min到峰結(jié)束對(duì)應(yīng)時(shí)間15. 871min，得到樣2對(duì)應(yīng)的峰面積為997 ；根據(jù)公式計(jì)算19F型肺炎鏈球菌多糖脫氧膽酸鈉的濃度(2= (S2^S1) XC1=(997 + 17893) X 100=5. 57 μ g/ml ；19F型肺炎鏈球菌多糖脫氧膽酸鈉的百分含量F= (C2^C0) X 100%=(5.57/18900) X100%=0. 029%。實(shí)施例20測(cè)定待檢20型肺炎球菌多糖的多糖濃度，為19. 7mg/ml (C0);精密制取100 μ g/ml (C1)脫氧膽酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液作為樣I ;取待檢的20型肺炎鏈球菌多糖溶液，作為樣2 ；樣I、樣2分別上樣于乙腈-水(50 50)充分平衡的高效凝膠色譜柱，上樣體積為50 μ 1，洗脫流速為l.Oml/min，于波長(zhǎng)210nm記錄色譜圖洗脫峰開(kāi)始對(duì)應(yīng)時(shí)間為14. 793min，峰結(jié)束對(duì)應(yīng)時(shí)間為15. 902min ；對(duì)樣I色譜圖進(jìn)行積分，調(diào)節(jié)積分窗口為從峰開(kāi)始對(duì)應(yīng)時(shí)間14. 793min到峰結(jié)束對(duì)應(yīng)時(shí)間15. 902，得到樣I對(duì)應(yīng)的峰面積為18006 ;對(duì)樣2色譜圖進(jìn)行積分，調(diào)節(jié)積分窗口 為從峰開(kāi)始對(duì)應(yīng)時(shí)間14. 793min到峰結(jié)束對(duì)應(yīng)時(shí)間15. 902min，得到樣2對(duì)應(yīng)的峰面積為1062 ；根據(jù)公式計(jì)算20型肺炎鏈球菌多糖脫氧膽酸鈉的濃度C2= (S2^S1) XC1=(1062 + 18006) X 100=5. 90 μ g/ml ；20型肺炎鏈球菌多糖脫氧膽酸鈉的百分含量F= (C2^C0) X 100%=(5.90/19700) X100%=0. 030%。實(shí)施例21測(cè)定待檢22F型肺炎球菌多糖的多糖濃度，為19. 3mg/ml (C。);精密制取100 μ g/ml (C1)脫氧膽酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液作為樣I ;取待檢的22F型肺炎鏈球菌多糖溶液，作為樣2 ；樣I、樣2分別上樣于乙腈-水(50 50)充分平衡的高效凝膠色譜柱，上樣體積為50 μ 1，洗脫流速為l.Oml/min，于波長(zhǎng)210nm記錄色譜圖洗脫峰開(kāi)始對(duì)應(yīng)時(shí)間為14. 749min,峰結(jié)束對(duì)應(yīng)時(shí)間為15. 862min ；對(duì)樣I色譜圖進(jìn)行積分，調(diào)節(jié)積分窗口為從峰開(kāi)始對(duì)應(yīng)時(shí)間14. 749min到峰結(jié)束對(duì)應(yīng)時(shí)間15. 862，得到樣I對(duì)應(yīng)的峰面積為18041 ;對(duì)樣2色譜圖進(jìn)行積分，調(diào)節(jié)積分窗口為從峰開(kāi)始對(duì)應(yīng)時(shí)間14. 749min到峰結(jié)束對(duì)應(yīng)時(shí)間15. 862min，得到樣2對(duì)應(yīng)的峰面積為817 ；根據(jù)公式計(jì)算22F型肺炎鏈球菌多糖脫氧膽酸鈉的濃度(2= (S2^S1) XC1=(817 + 18041) X 100=4. 53 μ g/ml ；22F型肺炎鏈球菌多糖脫氧膽酸鈉的百分含量F= (C2^C0) X 100%=(4. 53/19300) X100%=0. 023%。實(shí)施例22測(cè)定待檢23F型肺炎球菌多糖的多糖濃度，為18. 7mg/ml (C。);精密制取100 μ g/ml (C1)脫氧膽酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液作為樣I ;取待檢的23F型肺炎鏈球菌多糖溶液，作為樣2 ；樣I、樣2分別上樣于乙腈-水(50 50)充分平衡的高效凝膠色譜柱，上樣體積為50 μ 1，洗脫流速為l.Oml/min，于波長(zhǎng)200nm記錄色譜圖洗脫峰開(kāi)始對(duì)應(yīng)時(shí)間為14. 761min，峰結(jié)束對(duì)應(yīng)時(shí)間為15. 879min ；對(duì)樣I色譜圖進(jìn)行積分，調(diào)節(jié)積分窗口為從峰開(kāi)始對(duì)應(yīng)時(shí)間14. 761min到峰結(jié)束對(duì)應(yīng)時(shí)間15. 879，得到樣I對(duì)應(yīng)的峰面積為17981 ;對(duì)樣2色譜圖進(jìn)行積分，調(diào)節(jié)積分窗口為從峰開(kāi)始對(duì)應(yīng)時(shí)間14. 761min到峰結(jié)束對(duì)應(yīng)時(shí)間15. 879min，得到樣2對(duì)應(yīng)的峰面積為736 ；根據(jù)公式計(jì)算23F型肺炎鏈球菌多糖脫氧膽酸鈉的濃度(2= (S2^S1) XC1=(736 + 17981) X 100=4. 09 μ g/ml ；23F型肺炎鏈球菌多糖脫氧膽酸鈉的百分含量F= (C2^C0) X 100%=(4. 09/18700) X100%=0. 022%。實(shí)施例23
測(cè)定待檢33F型肺炎球菌多糖的多糖濃度，為19. lmg/ml (Ctl);精密制取100 μ g/ml (C1)脫氧膽酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液作為樣I ;取待檢的33F型肺炎鏈球菌多糖溶液，作為樣2 ；樣I、樣2分別上樣于乙腈-水(50 50)充分平衡的高效凝膠色譜柱，上樣體積為50 μ 1，洗脫流速為l.Oml/min，于波長(zhǎng)220nm記錄色譜圖洗脫峰開(kāi)始對(duì)應(yīng)時(shí)間為14. 815min,峰結(jié)束對(duì)應(yīng)時(shí)間為15. 930min ；對(duì)樣I色譜圖進(jìn)行積分，調(diào)節(jié)積分窗口為從峰開(kāi)始對(duì)應(yīng)時(shí)間14. 815min到峰結(jié)束對(duì)應(yīng)時(shí)間15. 930，得到樣I對(duì)應(yīng)的峰面積為17927 ;對(duì)樣2色譜圖進(jìn)行積分，調(diào)節(jié)積分窗口為從峰開(kāi)始對(duì)應(yīng)時(shí)間14. 815min到峰結(jié)束對(duì)應(yīng)時(shí)間15. 930min，得到樣2對(duì)應(yīng)的峰面積為843 ；根據(jù)公式計(jì)算33F型肺炎鏈球菌多糖脫氧膽酸鈉的濃度(2= (S2^S1) XC1=(843 + 17927) X 100=4. 70 μ g/ml ；33F型肺炎鏈球菌多糖脫氧膽酸鈉的百分含量F= (C2^C0) X 100%=(4. 70/19100) X100%=0. 025%。
權(quán)利要求
1.一種肺炎鏈球菌多糖溶液中脫氧膽酸鈉含量的測(cè)定方法，包括步驟 1)測(cè)定待檢肺炎鏈球菌多糖溶液中的糖濃度，標(biāo)記為Ctl； 2)制取脫氧膽酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液作為樣1，其脫氧膽酸鈉的濃度標(biāo)記為C1； 3)取待檢的肺炎鏈球菌多糖溶液，作為樣2； 4)樣I、樣2分別上樣于高效凝膠色譜柱，上樣后進(jìn)行洗脫，記錄色譜圖洗脫峰開(kāi)始所對(duì)應(yīng)時(shí)間標(biāo)記為h，洗脫峰結(jié)束所對(duì)應(yīng)時(shí)間標(biāo)記為t2 ； 5)對(duì)樣I色譜圖進(jìn)行積分，積分窗口為從h到t2，得到樣I對(duì)應(yīng)的峰面積為S1； 6)對(duì)樣2色譜圖進(jìn)行積分，積分窗口為從h到t2，得到樣2對(duì)應(yīng)的峰面積為S2； 7)根據(jù)公式C2=(S2-S1) XC1計(jì)算樣2中脫氧膽酸鈉的濃度； 8)根據(jù)公式F=(C2-C0) X 100%計(jì)算樣2中脫氧膽酸鈉的百分含量。
2.如權(quán)利要求I所述的測(cè)定方法，其特征在于，所述步驟4)中的高效凝膠色譜柱為ODS-C18色譜柱。
3.如權(quán)利要求I所述的測(cè)定方法，其特征在于，步驟4)中洗脫的流動(dòng)相為乙腈-水溶液。
4.如權(quán)利要求3所述的測(cè)定方法，其特征在于，所述乙腈-水質(zhì)量比例為1:05-1.5。
5.如權(quán)利要求I所述的測(cè)定方法，其特征在于，所述步驟4)中樣I和樣2的上樣體積為 20-100 μ I。
6.如權(quán)利要求I所述的測(cè)定方法，其特征在于，所述步驟4)中樣I和樣2的洗脫流速為 O. 8-1. 5ml/min。
7.如權(quán)利要求I所述的測(cè)定方法，其特征在于，所述步驟4)中記錄色譜圖是在檢測(cè)波長(zhǎng)為200-220nm下記錄。
8.如權(quán)利要求I所述的測(cè)定方法，其特征在于，所述肺炎鏈球菌為下組中的一種肺炎鏈球菌I型、肺炎鏈球菌2型、肺炎鏈球菌3型、肺炎鏈球菌4型、肺炎鏈球菌5型、肺炎鏈球菌6B型、肺炎鏈球菌7F型、肺炎鏈球菌8型、肺炎鏈球菌9N型、肺炎鏈球菌9V型、肺炎鏈球菌IOA型、肺炎鏈球菌IlA型、肺炎鏈球菌12F型、肺炎鏈球菌14型、肺炎鏈球菌15B型、肺炎鏈球菌17F型、肺炎鏈球菌18C型、肺炎鏈球菌19A型、肺炎鏈球菌19F型、肺炎鏈球菌20型、肺炎鏈球菌22F型、肺炎鏈球菌23F型、肺炎鏈球菌33F型。
全文摘要
本發(fā)明提供一種肺炎鏈球菌多糖溶液中脫氧膽酸鈉含量的測(cè)定方法，包括步驟1)測(cè)定待檢肺炎鏈球菌多糖溶液中的糖濃度，標(biāo)記為C0；2)制取脫氧膽酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液作為樣1，其脫氧膽酸鈉的濃度標(biāo)記為C1；3)取待檢的肺炎鏈球菌多糖溶液，作為樣2；4)樣1、樣2分別上樣于高效凝膠色譜柱，5)對(duì)色譜圖進(jìn)行積分，6)根據(jù)公式計(jì)算樣2中脫氧膽酸鈉的濃度。本發(fā)明提供了一種準(zhǔn)確、重復(fù)性好、快速、便捷的肺炎鏈球菌多糖原液中脫氧膽酸鈉的測(cè)定方法，建立了評(píng)價(jià)肺炎鏈球菌多糖原液質(zhì)量的新方法。
文檔編號(hào)G01N30/02GK102830185SQ20121031411
公開(kāi)日2012年12月19日 申請(qǐng)日期2012年8月29日 優(yōu)先權(quán)日2012年8月29日
發(fā)明者王婷婷, 魏文進(jìn), 韓菲, 何佳琦 申請(qǐng)人:北京民海生物科技有限公司