對相關(guān)申請的引用

本申請要求2015年12月23日提交的澳大利亞專利申請?zhí)?014905243的優(yōu)先權(quán)，其全部內(nèi)容通過引用并入。

公開領(lǐng)域

本公開涉及用于治療或預(yù)防具有升高的左心室收縮末期容積(lvesv)的受試者的心力衰竭的方法。

背景技術(shù)：

由于心肌梗死(mi)所致的心力衰竭仍然是發(fā)達(dá)國家中的死亡率和發(fā)病率的主要原因之一。已經(jīng)公布了美國醫(yī)療保險(xiǎn)記錄的最近更新，其評估了牽涉>65歲的患者中350,509例急性mi住院的數(shù)據(jù)，所述患者在其事件后活著出院(schuster等人(2004)physiolheartcircaphysiol.,287(2):525-32)。在指數(shù)事件后的第一年內(nèi)，25.9％的mi患者死亡，50.5％重新住院。在mi后的一個月中，死亡的可能性比普通醫(yī)療保險(xiǎn)年齡人群中高21倍，并且住院的可能性高12倍。

具有mi后的較大梗死和更多的梗死后lv功能障礙的患者處于經(jīng)歷中長期心臟事件和死亡的顯著升高的風(fēng)險(xiǎn)。具體來說，在梗死后期前壁梗死、較大的梗死、和更多的lv功能障礙處于經(jīng)歷中長期心臟事件和死亡的顯著升高的風(fēng)險(xiǎn)(eitel等人(2010)jamcollcardiol.,55:2470-9)。

本領(lǐng)域中強(qiáng)烈需要用于預(yù)防和治療心力衰竭的新的且有效的方法，特別是避免對心臟移植物(其中器官的可用性罕見)的需要的治療方法。特別是下述系統(tǒng)，其允許在不呈現(xiàn)與全身麻醉和開放心臟手術(shù)有關(guān)的風(fēng)險(xiǎn)和潛在并發(fā)癥的情況下逆轉(zhuǎn)心臟組織損傷或者修復(fù)心臟組織缺陷。

公開內(nèi)容

出乎意料地，用間充質(zhì)譜系前體細(xì)胞進(jìn)行的臨床前心臟研究已經(jīng)證明了在最大量的心肌損傷的背景中產(chǎn)生最佳結(jié)果。這產(chǎn)生了下述的可能性：來自受損心肌的信號對于根本的生物化學(xué)/生理學(xué)紊亂和間充質(zhì)譜系前體細(xì)胞之間的組織水平上的“串?dāng)_(cross-talk)”是必需的，以使間充質(zhì)譜系前體細(xì)胞釋放其“有效負(fù)載”，即旁分泌因子。此觀察已經(jīng)得到研究支持，所述研究證明了在將細(xì)胞注射到健康心肌組織中時沒有顯著的間充質(zhì)譜系前體細(xì)胞介導(dǎo)的效應(yīng)。

本公開基于下述觀察：具有由于顯著的左心室收縮異常(即收縮功能障礙)所致的晚期慢性心力衰竭的患者中間充質(zhì)前體細(xì)胞(mpc)的心肌施用增強(qiáng)mpc的效力信號。特別地，本公開基于下述發(fā)現(xiàn)，即具有中等嚴(yán)重左心室收縮損傷的受試者良好響應(yīng)mpc的經(jīng)心內(nèi)膜遞送，并且具有由于左心室收縮功能異常所致的慢性心力衰竭的患者中基線左心室收縮異常的幅度越大，mpc相關(guān)心臟保護(hù)效果的益處越大。

更特別地，發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了使用心力衰竭受試者中的基線左心室收縮末期容積(lvesv)截止值鑒定了有主要不良心臟事件(mace)的高風(fēng)險(xiǎn)的晚期心力衰竭的受試者群體，并且鑒定了最佳響應(yīng)mpc施用的受試者群體。

本公開提供了用于治療或預(yù)防受試者的心力衰竭的方法，其包括向受試者施用間充質(zhì)譜系前體細(xì)胞或干細(xì)胞的群體和/或其后代和/或自其衍生的可溶性因子，所述受試者具有大于70ml的升高的左心室收縮末期容積(lvesv)。

在一個實(shí)例中，升高的lvesv是由于急性心肌梗死。在另一個實(shí)例中，升高的lvesv是由于慢性充血性心力衰竭。

在另一個實(shí)例中，方法包括以下步驟：

i)選擇具有大于70ml的升高的lvesv的受試者，并且

ii)向所述受試者施用間充質(zhì)譜系前體細(xì)胞或干細(xì)胞的群體和/或其后代和/或自其衍生的可溶性因子。

在另一個實(shí)例中，方法包括以下步驟：

i)診斷具有心力衰竭的受試者；

ii)選擇具有大于70ml的升高的lvesv的診斷受試者的群組；并且

iii)向受試者施用間充質(zhì)譜系干細(xì)胞或前體細(xì)胞的群體和/或其后代和/或自其衍生的可溶性因子。

在一個實(shí)例中，lvesv大于80ml、大于90ml、大于100ml、大于100ml、大于110ml、大于120ml或大于130ml。在另一個實(shí)例中，lvesv大于80ml/m²、大于90ml/m²、大于100ml/m²、大于110ml/m²、大于120ml/m或大于130ml/m²。

在一個實(shí)例中，通過基于導(dǎo)管的系統(tǒng)向所述受試者施用所述細(xì)胞和/或其后代和/或可溶性因子。在另外的實(shí)例中，使用插入受試者的靜脈系統(tǒng)中的導(dǎo)管在組織損傷處或附近向受試者的心肌施用所述細(xì)胞和/或其后代和/或可溶性因子。在另一個實(shí)例中，可以全身施用所述細(xì)胞和/或其后代和/或可溶性因子。可以在鑒定需要治療的心肌區(qū)域后進(jìn)行細(xì)胞和/或其后代和/或可溶性因子的遞送。

在另外的實(shí)例中，通過經(jīng)心內(nèi)膜注射、冠狀動脈內(nèi)輸注或經(jīng)心外膜注射向所述受試者施用所述細(xì)胞和/或其后代和/或可溶性因子。

在另外的實(shí)例中，受試者的特征為具有小于或等于約35％的左心室射血分?jǐn)?shù)(lvef)。在另一個實(shí)例中，受試者具有小于約35％、小于約30％、小于約25％、或小于約20％的lvef。

在一個實(shí)例中，心力衰竭是由于高血壓、心肌病(缺血性或非缺血性)、心肌炎、肥胖癥或糖尿病。在另外的實(shí)例中，在診斷心力衰竭后向受試者施用間充質(zhì)譜系干細(xì)胞或前體細(xì)胞和/或其后代和/或自其衍生的可溶性因子。

在一個實(shí)例中，受試者具有急性心肌病。在另外的實(shí)例中，受試者具有缺血性心肌病。在另外的實(shí)例中，受試者具有非缺血性心肌病。在另外的實(shí)例中，受試者具有擴(kuò)張性或充血性心肌病。在另外的實(shí)例中，受試者具有限制型心肌病。

在另一個實(shí)例中，在急性心肌梗死后向受試者施用間充質(zhì)譜系干細(xì)胞或前體細(xì)胞和/或其后代和/或自其衍生的可溶性因子。在另外的實(shí)例中，在診斷心力衰竭后約1-7天向受試者施用間充質(zhì)譜系干細(xì)胞或前體細(xì)胞和/或其后代和/或自其衍生的可溶性因子。在另外的實(shí)例中，在心肌梗死后約1-7天向受試者施用間充質(zhì)譜系干細(xì)胞或前體細(xì)胞和/或其后代和/或自其衍生的可溶性因子。在另外的實(shí)例中，在診斷心力衰竭后，或在心肌梗死后約3-5天向受試者施用間充質(zhì)譜系干細(xì)胞或前體細(xì)胞和/或其后代和/或自其衍生的可溶性因子。

在另一個實(shí)例中，受試者具有約5％-30％，或約10％-20％左心室的梗死大小。

用于診斷心力衰竭的方法會是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟悉的。實(shí)例包括受試者的身體檢查、心電圖、胸部x-射線、通過血液測試測定bnp和/或肌鈣蛋白水平、超聲心動圖顯象、多普勒超聲、霍爾特監(jiān)護(hù)儀(holstermonitor)、核子心臟掃描、心導(dǎo)管插入術(shù)、應(yīng)激測試或心臟磁共振成像(心臟mri)。

根據(jù)本公開的用于選擇具有大于70ml的升高的lvesv的受試者的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟悉的。例如，可以通過本領(lǐng)域中已知的設(shè)備測量受試者的lvesv，包括但不限于二維超聲心動圖顯象、磁共振斷層攝影術(shù)、心臟計(jì)算機(jī)斷層攝影術(shù)(ct)或雙平面左心室電影造影術(shù)。另外，本領(lǐng)域技術(shù)人員會熟悉術(shù)語“升高的lvesv”的界限和邊界，如該術(shù)語在本領(lǐng)域中理解以及如本文中其它地方描述。

可以對接受用于心力衰竭和/或其癥狀的藥物或其它治療的受試者進(jìn)行根據(jù)本公開的間充質(zhì)譜系干細(xì)胞或前體細(xì)胞和/或其后代的施用。或者，它可以對未接受用于心力衰竭的其它藥物或治療的受試者進(jìn)行。在一些實(shí)例中，對先前已經(jīng)經(jīng)歷冠狀動脈旁路移植(cabg)或左心室輔助裝置(lvad)植入的受試者進(jìn)行根據(jù)本公開的間充質(zhì)譜系干細(xì)胞或前體細(xì)胞和/或其后代的施用。受試者經(jīng)歷的cabg或lvad植入方案可以伴隨或可以不伴隨根據(jù)本公開的間充質(zhì)譜系干細(xì)胞或前體細(xì)胞和/或其后代的同時施用。在一些實(shí)例中，對正在經(jīng)歷cabg或lvad植入的個體進(jìn)行根據(jù)本公開的間充質(zhì)譜系干細(xì)胞或前體細(xì)胞和/或其后代的施用。在其它實(shí)例中，對尚未接受和/或不會接受用于治療受損/缺陷的心臟組織的任何療法的受試者進(jìn)行根據(jù)本公開的間充質(zhì)譜系干細(xì)胞或前體細(xì)胞和/或其后代的施用。

本公開還提供了用于治療或預(yù)防具有大于70ml的升高的lvesv的心臟中的心力衰竭的方法，其包括向心臟施用間充質(zhì)譜系干細(xì)胞或前體細(xì)胞的群體和/或其后代和/或自其衍生的可溶性因子。

在一個實(shí)例中，lvesv大于80ml、大于90ml、大于100ml、大于100ml、大于110ml或大于120ml。在另一個實(shí)例中，lvesv大于80ml/m²、大于90ml/m²、大于100ml/m²、大于110ml/m²或大于120ml/m²。

在另一個實(shí)例中，本公開提供了用于降低具有大于70ml的lvesv的心臟中的升高的左心室收縮末期容積(lvesv)的方法，其包括向心臟施用間充質(zhì)譜系干細(xì)胞或前體細(xì)胞的群體和/或其后代和/或自其衍生的可溶性因子。

在一個實(shí)例中，lvesv大于80ml、大于90ml、大于100ml、大于100ml、大于110ml或大于120ml。在另一個實(shí)例中，lvesv大于80ml/m²、大于90ml/m²、大于100ml/m²、大于110ml/m²或大于120ml/m²。

在另一個實(shí)例中，與尚未施用間充質(zhì)譜系干細(xì)胞或前體細(xì)胞和/或其后代和/或自其衍生的可溶性因子的相同心臟相比，lvesv的降低是至少20％、至少15％、至少10％、至少5％、或至少2％。

在另一個實(shí)例中，在施用間充質(zhì)譜系干細(xì)胞或前體細(xì)胞和/或其后代和/或自其衍生的可溶性因子后約6個月、約12個月、約24個月、或約36個月時測量lvesv。

在一個實(shí)例中，通過基于導(dǎo)管的系統(tǒng)向心臟施用所述細(xì)胞和/或其后代和/或可溶性因子。在另外的實(shí)例中，在組織損傷位置處或附近向心肌施用細(xì)胞和/或其后代和/或可溶性因子。可以在鑒定需要治療的心肌的區(qū)域后進(jìn)行細(xì)胞和/或其后代和/或可溶性因子的遞送。

在另外的實(shí)例中，通過經(jīng)心內(nèi)膜注射、冠狀動脈內(nèi)輸注或經(jīng)心外膜注射向心臟施用所述細(xì)胞和/或其后代和/或可溶性因子。

在另外的實(shí)例中，心臟的特征進(jìn)一步為具有小于約55％的左心室射血分?jǐn)?shù)(lvef)。在另外的實(shí)例中，心臟的特征進(jìn)一步為具有小于或等于約35％的左心室射血分?jǐn)?shù)(lvef)。在另一個實(shí)例中，心臟具有小于約35％、小于約30％、小于約25％或小于約20％的lvef。

在一個實(shí)例中，升高的lvesv是由于急性心肌梗死。在另外的實(shí)例中，升高的lvesv是由于慢性充血性心力衰竭。

在另外的實(shí)例中，在診斷心力衰竭后向心臟施用間充質(zhì)譜系干細(xì)胞或前體細(xì)胞和/或其后代和/或自其衍生的可溶性因子。在另一個實(shí)例中，在急性心肌梗死后向心臟施用間充質(zhì)譜系干細(xì)胞或前體細(xì)胞和/或其后代和/或自其衍生的可溶性因子。在另外的實(shí)例中，在診斷心力衰竭后約1-7天向心臟施用間充質(zhì)譜系干細(xì)胞或前體細(xì)胞和/或其后代和/或自其衍生的可溶性因子。在另外的實(shí)例中，在急性心肌梗死后約1-7天向心臟施用間充質(zhì)譜系干細(xì)胞或前體細(xì)胞和/或其后代和/或自其衍生的可溶性因子。在另外的實(shí)例中，在診斷心力衰竭后或在心肌梗死后約3-5天向心臟施用間充質(zhì)譜系干細(xì)胞或前體細(xì)胞和/或其后代和/或自其衍生的可溶性因子。

在另一個實(shí)例中，心臟具有約10％-35％、或約11–34％、約12–33％、約13–32％、約14–31％、約15–30％、約16–29％或約17–28％左心室的左心室梗死大小。

在一些實(shí)施方案中，本公開的方法還包括向心臟或向受試者施用針對stro-1⁺細(xì)胞富集的間充質(zhì)譜系干細(xì)胞或前體細(xì)胞的群體和/或其后代和/或自其衍生的可溶性因子。在另一個實(shí)例中，本公開的方法包括向心臟或向受試者施用針對stro-1^亮細(xì)胞富集的間充質(zhì)譜系干細(xì)胞或前體細(xì)胞的群體和/或其后代和/或自其衍生的可溶性因子。

在另一個實(shí)例中，間充質(zhì)譜系干細(xì)胞或前體細(xì)胞的群體表達(dá)組織非特異性堿性磷酸酶(tnap)，和/或后代細(xì)胞和/或可溶性因子衍生自表達(dá)tnap的間充質(zhì)譜系細(xì)胞。在另一個實(shí)例中，間充質(zhì)譜系干細(xì)胞或前體細(xì)胞的群體以至少0.1μg/10⁶個細(xì)胞的量表達(dá)血管生成素-1(ang1)和/或后代細(xì)胞和/或可溶性因子衍生自以至少0.1μg/10⁶個細(xì)胞的量表達(dá)ang1的間充質(zhì)譜系前體細(xì)胞。在另一個實(shí)例中，間充質(zhì)譜系干細(xì)胞或前體細(xì)胞的群體以至少0.5μg/10⁶個細(xì)胞的量表達(dá)ang1。在另一個實(shí)例中，間充質(zhì)譜系干細(xì)胞或前體細(xì)胞的群體以至少1μg/10⁶個細(xì)胞的量表達(dá)ang1。在另一個實(shí)例中，間充質(zhì)譜系干細(xì)胞或前體細(xì)胞的群體以小于約0.05μg/10⁶個細(xì)胞的量表達(dá)血管內(nèi)皮生長因子(vegf)和/或后代細(xì)胞和/或可溶性因子衍生自以小于約0.05μg/10⁶個細(xì)胞和/或后代細(xì)胞的量表達(dá)vegf的間充質(zhì)譜系前體細(xì)胞。在另一個實(shí)例中，間充質(zhì)譜系干細(xì)胞或前體細(xì)胞的群體以小于約0.03μg/10⁶個細(xì)胞的量表達(dá)vegf。在另一個實(shí)例中，間充質(zhì)譜系干細(xì)胞或前體細(xì)胞的群體以至少約2:1的比率表達(dá)ang1:vegf和/或后代細(xì)胞和/或可溶性因子衍生自以至少約2:1的比率表達(dá)ang1:vegf的間充質(zhì)譜系干細(xì)胞或前體細(xì)胞。在另一個實(shí)例中，間充質(zhì)譜系干細(xì)胞或前體細(xì)胞的群體以至少約10:1的比率表達(dá)ang1:vegf。在另一個實(shí)例中，間充質(zhì)譜系干細(xì)胞或前體細(xì)胞的群體以至少約20:1的比率表達(dá)ang1:vegf。在另一個實(shí)例中，間充質(zhì)譜系干細(xì)胞或前體細(xì)胞的群體以至少約30:1的比率表達(dá)ang1:vegf。

在一個實(shí)例中，以治療有效量向心臟或受試者施用間充質(zhì)譜系干細(xì)胞或前體細(xì)胞的群體和/或其后代。

在一個實(shí)例中，以多劑向心臟或受試者施用所述間充質(zhì)譜系干細(xì)胞或前體細(xì)胞的群體和/或其后代。在另外的實(shí)例中，本公開的方法包括施用1x10⁶至8x10⁸個細(xì)胞。在另一個實(shí)例中，本公開的方法包括施用約1.5x10⁸個細(xì)胞。

在一個實(shí)例中，以組合物形式施用間充質(zhì)譜系干細(xì)胞或前體細(xì)胞和/或其后代細(xì)胞和/或自其衍生的可溶性因子，所述組合物包含間充質(zhì)譜系干細(xì)胞或前體細(xì)胞和/或其后代細(xì)胞和/或自其衍生的可溶性因子和藥學(xué)上可接受載體和/或賦形劑。在另外的實(shí)例中，在施用前和/或在獲得所述可溶性因子前已經(jīng)培養(yǎng)擴(kuò)增了間充質(zhì)譜系干細(xì)胞或前體細(xì)胞的群體和/或其后代。

本公開還提供了間充質(zhì)譜系干細(xì)胞或前體細(xì)胞的群體和/或其后代和/或自其衍生的可溶性因子或本文中所述的組合物用于治療具有大于70ml的升高的lvesv的受試者的心力衰竭的用途。

本公開還提供了間充質(zhì)譜系干細(xì)胞或前體細(xì)胞的群體和/或其后代和/或自其衍生的可溶性因子或本文中所述的組合物用于治療具有大于70ml的升高的lvesv的心臟的用途。

在根據(jù)本文中所述的任何用途的一個實(shí)例中，升高的lvesv是由于急性心肌梗死。在根據(jù)本文中所述的任何用途的另一個實(shí)例中，升高的lvesv是由于慢性充血性心力衰竭。

本公開還提供了間充質(zhì)譜系干細(xì)胞或前體細(xì)胞的群體和/或其后代和/或自其衍生的可溶性因子，其用在制造用于治療具有大于70ml的升高的左心室收縮末期容積(lvesv)的受試者的心力衰竭的藥物中。

本公開還提供了間充質(zhì)譜系干細(xì)胞或前體細(xì)胞的群體和/或其后代和/或自其衍生的可溶性因子，其用在制造用于治療具有大于70ml的升高的左心室收縮末期容積(lvesv)的心臟的藥物中。

本公開還提供了間充質(zhì)譜系干細(xì)胞或前體細(xì)胞的群體和/或其后代和/或自其衍生的可溶性因子或本文中所述的組合物，其用于治療具有大于70ml的升高的lvesv的受試者的心力衰竭。

本公開還提供了間充質(zhì)譜系干細(xì)胞或前體細(xì)胞的群體和/或其后代和/或自其衍生的可溶性因子或本文中所述的組合物，其用于治療具有大于70ml的升高的左心室收縮末期容積(lvesv)的心臟。

在另一個實(shí)例中，本公開提供了間充質(zhì)譜系干細(xì)胞或前體細(xì)胞的群體和/或其后代和/或自其衍生的可溶性因子或本文中所述的組合物用于降低具有大于70ml的升高的lvesv的心臟中的左心室收縮末期容積(lvesv)的用途。

在另一個實(shí)例中，本公開提供了間充質(zhì)譜系干細(xì)胞或前體細(xì)胞的群體和/或其后代和/或自其衍生的可溶性因子或本文中所述的組合物，用于降低具有大于70ml的升高的lvesv的心臟中的左心室收縮末期容積(lvesv)。

在根據(jù)本文中所述的任何群體或用途的一個實(shí)例中，lvesv大于80ml、大于90ml、大于100ml、大于110ml或大于120ml。在另一個實(shí)例中，lvesv大于80ml/m²、大于90ml/m²、大于100ml/m²、大于110ml/m²、或大于120ml/m²。

在根據(jù)本文中所述的任何方法或用途的另外的實(shí)例中，間充質(zhì)譜系前體細(xì)胞的群體和/或其后代是分離的或純化的。

在另外的實(shí)例中，間充質(zhì)譜系干細(xì)胞或前體細(xì)胞的群體和/或其后代衍生自供體受試者。供體受試者可以是接受細(xì)胞、和/或其后代和/或自其衍生的可溶性因子施用的相同受試者，在該情況下細(xì)胞是自體的。在另一個實(shí)例中，供體受試者是接受細(xì)胞、和/或其后代和/或自其衍生的可溶性因子施用的不同受試者，在該情況中細(xì)胞是同種異體的。

在另外的實(shí)例中，受試者具有小于約55％的左心室射血分?jǐn)?shù)(lvef)。在根據(jù)本文中所述的任何用途的另一個實(shí)例中，受試者具有小于或等于約35％的lvef。在另一個實(shí)例中，受試者具有小于約35％、小于約30％、小于約25％或小于約20％的lvef。

在根據(jù)本文中所述的任何用途的另一個實(shí)例中，心臟具有約5％-30％，或約10％-20％的左心室梗死大小。在根據(jù)本文中所述的任何用途的另一個實(shí)例中，受試者具有約5％-30％，或約10％-20％的左心室梗死大小。

在另一個實(shí)例中，本公開提供了間充質(zhì)干細(xì)胞或譜系前體細(xì)胞的群體和/或其后代和/或自其衍生的可溶性因子，其用在制造用于降低具有大于70ml的升高的lvesv的心臟中的左心室收縮末期容積(lvesv)的藥物中。

本公開還提供了試劑盒，其包括間充質(zhì)譜系干細(xì)胞或前體細(xì)胞的群體和/或其后代和/或自其衍生的可溶性因子或本文中所述的組合物和用于施用所述細(xì)胞、和/或其后代和/或可溶性因子的遞送裝置。在一個實(shí)例中，遞送裝置是導(dǎo)管。

在另一個實(shí)例中，根據(jù)本公開的受試者是哺乳動物。在另外的實(shí)例中，受試者是人，包括青少年或小兒。在具體的實(shí)例中，受試者大于或等于18歲。

在另外的實(shí)例中，受試者在施用間充質(zhì)譜系干細(xì)胞或前體細(xì)胞的群體和/或其后代和/或自其衍生的可溶性因子前12個月內(nèi)已經(jīng)具有心力衰竭事件。

在另外的實(shí)例中，受試者分類為紐約心臟學(xué)會(nyha)ii、iii或iv類。ii類定義為輕度，其中受試者經(jīng)歷中等身體活動期間疲勞和呼吸短促。ii類定義為中等，其中患者即使在輕度身體活動期間經(jīng)歷呼吸短促。iv類或末期定位為嚴(yán)重，其中患者即使在休息時也是精疲力竭的。

在另外的實(shí)例中，受試者具有降低的基線6分鐘步行測試(6mwt)，意味著受試者在6分鐘時段內(nèi)穿行的距離相對于非心力衰竭受試者降低。

在另一個實(shí)例中，受試者具有大于150ml左室舒張末期容積(lveds)。在另一個實(shí)例中，受試者具有大于170ml的lvesv。

在另一個實(shí)例中，還對受試者同時施用常規(guī)的心力衰竭藥物。在另外的實(shí)例中，心力衰竭藥物包括但不限于下列一種或多種：β阻斷劑、ace抑制劑或血管緊張素受體阻斷劑。

在另一個實(shí)例中，受試者具有較高的主要不良心臟事件(mace)率。在另外的實(shí)例中，受試者在36個月內(nèi)具有>50％心力衰竭-mace(hf-mace)率。在另一個實(shí)例中，受試者在36個月內(nèi)具有>60％hf-mace率、或>65％hf-mace率、或>70％hf-mace率。

附圖說明

圖1顯示基于左心室(lv)容積在心臟重塑中mpc的劑量依賴性效果。

圖2顯示用1.5億個mpc處理后36個月通過kaplan-meier曲線得到的hf-mac。

圖3-1顯示根據(jù)小于或等于100ml或大于100ml的lvesv分層的施用了安慰劑(對照)和間充質(zhì)前體細(xì)胞(mpc)的受試者(1.5億個細(xì)胞)中的基線左心室收縮末期容積(lvesv)值。

圖3-2顯示根據(jù)小于或等于100ml或大于100ml的lvesv分層的施用了安慰劑(對照)和mpc的受試者(1.5億個細(xì)胞)中的6個月時lvesv值的變化。

圖4-1顯示根據(jù)小于或等于100ml或大于100ml的lvesv分層的施用了安慰劑(對照)和mpc的受試者(1.5億個細(xì)胞)中的基線左心室收縮末期容積(lvedv)值。

圖4-2顯示根據(jù)小于或等于100ml或大于100ml的lvesv分層的施用了安慰劑(對照)和mpc的受試者(1.5億個細(xì)胞)中的6個月時lvedv值的變化。

圖5-1顯示根據(jù)小于或等于100ml或大于100ml的lvesv分層的施用了安慰劑(對照)和mpc的受試者(1.5億個細(xì)胞)中的基線左心室射血分?jǐn)?shù)(lvef)值。

圖5-2顯示根據(jù)小于或等于100ml或大于100ml的lvesv分層的施用了安慰劑(對照)和mpc的受試者(1.5億個細(xì)胞)中的6個月時lvef值的變化。

圖6顯示根據(jù)大于70ml的lvesv分層的施用了安慰劑(對照)和mpc的受試者(1.5億個細(xì)胞)中的6個月時lvesv值的變化。

圖7顯示根據(jù)大于80ml的lvesv分層的施用了安慰劑(對照)和mpc的受試者(1.5億個細(xì)胞)中的6個月時lvesv值的變化。

圖8顯示根據(jù)大于90ml的lvesv分層的施用了安慰劑(對照)和mpc的受試者(1.5億個細(xì)胞)中的6個月時lvesv值的變化。

圖9顯示根據(jù)大于100ml的lvesv分層的施用了安慰劑(對照)和mpc的受試者(1.5億個細(xì)胞)中的6個月時lvesv值的變化。

圖10顯示根據(jù)大于110ml的lvesv分層的施用了安慰劑(對照)和mpc的受試者(1.5億個細(xì)胞)中的6個月時lvesv值的變化。

圖11顯示根據(jù)大于120ml的lvesv分層的施用了安慰劑(對照)和mpc的受試者(1.5億個細(xì)胞)中的6個月時lvesv值的變化。

圖12顯示具有l(wèi)vesv>100ml的患者中治療后36個月時mf-macekaplan-meier曲線。

具體實(shí)施方式

在整個本說明書中，除非另有明確說明或上下文另有要求，否則提及單個步驟、物質(zhì)組成、步驟組或物質(zhì)組成組應(yīng)當(dāng)理解為涵蓋那些步驟、物質(zhì)組成、步驟組或物質(zhì)組成組的一個和多個(即一個或多個)。

本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解，除了具體描述的那些之外，本文所述的公開內(nèi)容易于進(jìn)行變化和修改。應(yīng)當(dāng)理解，本公開包括所有這些變化和修改。本公開還包括在本說明書中單獨(dú)或共同地引用或指出的所有步驟、特征、組合物和化合物，以及任何和所有組合或所述步驟或特征中的任何兩種或更多種。

本公開的范圍不限于本文所述的具體實(shí)施方案，所述具體實(shí)施方案僅意圖為了舉例的目的。如本文所述，功能上等同的產(chǎn)品、組合物和方法顯然在本公開的范圍內(nèi)。

除非另有明確說明，否則本文公開的任何實(shí)例應(yīng)當(dāng)視為作必要的修正適用于任何其它實(shí)例。

除非另有特別限定，本文使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語應(yīng)被視為具有與本領(lǐng)域(例如，在細(xì)胞培養(yǎng)、分子遺傳學(xué)、干細(xì)胞分化、免疫學(xué)、免疫組織化學(xué)、蛋白質(zhì)化學(xué)和生物化學(xué)中)普通技術(shù)人員通常理解的相同的含義。

除非另有說明，本公開中使用的外科技術(shù)是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的標(biāo)準(zhǔn)程序。

獲得和富集間充質(zhì)譜系干細(xì)胞或前體細(xì)胞群體的方法是本領(lǐng)域已知的。例如，可以通過使用流式細(xì)胞術(shù)和細(xì)胞分選程序，基于使用在間充質(zhì)譜系干細(xì)胞或前體細(xì)胞上表達(dá)的細(xì)胞表面標(biāo)志物來獲得間充質(zhì)譜系干細(xì)胞或前體細(xì)胞的富集群體。

本文引用或提到的所有文件以及本文引用的文件中引用或提到的所有文件，連同本文提及的任何產(chǎn)品的任何制造商的說明書、說明、產(chǎn)品規(guī)格和產(chǎn)品表，或通過引用并入本文的任何文件在此通過引用完整并入本文。

選擇的定義

術(shù)語“和/或”，例如“x和/或y”應(yīng)理解為“x和y”或“x或y”，并且應(yīng)當(dāng)視為提供對這兩種含義或任一含義的明確支持。

如本文所用，除非另有說明，術(shù)語“約”是指指定值的+/-10％，更優(yōu)選+/-5％。

在整個說明書中，詞語“包括/包含”或變型將理解為暗示包括所述元素、整數(shù)或步驟，或元素、整數(shù)或步驟的組，但是不排除任何其它元素、整數(shù)或步驟，或元素、整數(shù)或步驟的組。

如本文中所用，單數(shù)形式“一個”、“一種”和“該/所述”包括單數(shù)和復(fù)數(shù)提及物，除非上下文另有指示。

如本文中所用，術(shù)語“心力衰竭”可以與術(shù)語“充血性心力衰竭(chf)”互換使用，并且是指心臟由于例如心肌功能失常、心肌衰弱(稱為“心肌病”)和其它心肌相關(guān)原因而不能將足夠的血液泵送到身體的其它器官的狀況。除了其它效應(yīng)外，充血性心力衰竭的特征在于左心室(lv)室擴(kuò)張、lv收縮力降低和循環(huán)兒茶酚胺水平升高。在另一個實(shí)例中，由于缺血和其它再灌注以及其它非缺血因素而發(fā)生心力衰竭。心力衰竭包括但不限于單獨(dú)或共同的以下癥狀或體征：心臟再灌注損傷、補(bǔ)償性肥大、人末期心力衰竭、高血壓性心肌病、左心室高血壓、左心室或右心室擴(kuò)張、左心室或右心室衰竭、適應(yīng)不良性肥大，心肌結(jié)構(gòu)紊亂(凋亡和心肌細(xì)胞的喪失)和心肌功能障礙(收縮和/或松弛的損失)和壓力超負(fù)荷的心臟。

所謂“分離的”或“純化的”是指已經(jīng)與其自然環(huán)境的至少一些成分分離的細(xì)胞。該術(shù)語包括細(xì)胞與其天然環(huán)境的粗略的物理分離(例如從供體去除)。術(shù)語“分離的”包括通過例如解離來改變細(xì)胞與其直接相鄰的細(xì)胞的關(guān)系。術(shù)語“分離的”不是指組織切片中的細(xì)胞。當(dāng)用于指細(xì)胞群體時，術(shù)語“分離的”包括由本公開的分離的細(xì)胞的增殖引起的細(xì)胞群。

如本文中所用，術(shù)語“左心室高血壓(lvh)”是其中心肌通過變大響應(yīng)增加的循環(huán)阻力的狀況。然而，隨著時間的推移，肥大的心肌的纖維變厚并縮短，因此不太能松弛。高血壓使心肌更努力運(yùn)行。所產(chǎn)生的肥大是心臟的肌肉纖維增厚或縮短的產(chǎn)物。在這些狀況下，心臟松弛和經(jīng)歷正常的收縮和松弛周期變得更加困難。膠原中出現(xiàn)心肌變化，導(dǎo)致僵硬度增加。此過程的結(jié)果是不太能滿足正常循環(huán)的輸出需求的心臟。

如本文中所用，術(shù)語“左心室擴(kuò)張”是指左心室擴(kuò)大，其可以增加從心室噴射的血液的體積，暫時改善心輸出量。然而，心室的尺寸增加也導(dǎo)致了招致的血液左心室容積百分比(稱為射血分?jǐn)?shù))降低，并具有顯著的生理學(xué)意義。左心室擴(kuò)張是心肌梗死后心臟功能障礙和充血性心力衰竭的公認(rèn)前兆和體征。類似地，右心室擴(kuò)張是指右心室擴(kuò)大和相關(guān)的體征或病癥。

如本文中所用，術(shù)語“左心室衰竭”是指心臟左側(cè)不能有效泵送血的病癥。這導(dǎo)致血液進(jìn)入肺的逆流、壓力和/或充血。指示左心室衰竭的體征包括橫向位移心尖搏動。可以聽到奔馬律作為增加血流量或增加心臟內(nèi)壓力的標(biāo)志。

如本文所用，術(shù)語“心肌病”是指心臟肌肉(心肌)變得發(fā)炎和擴(kuò)大的病狀。幾種不同類型的心肌病在本領(lǐng)域中是已知的，包括其中心肌被拉伸并變薄的擴(kuò)張型心肌病，其中心肌細(xì)胞擴(kuò)大并導(dǎo)致心臟壁增厚的肥大性心肌病，以及其中心臟由于異常組織(例如疤痕組織)變硬和僵硬的限制型心肌病。

如本文中所用，術(shù)語“心肌梗死”也被理解為指心臟病發(fā)作。當(dāng)血液停止正常流動到心臟的一部分，并且心臟肌肉由于其未接受足夠的氧氣而受損傷時，發(fā)生心臟病發(fā)作。這可以在將血液供應(yīng)給心臟的冠狀動脈之一發(fā)生阻塞時發(fā)生。

如本文中所用，術(shù)語“左心室收縮末期容積”(lvesv)是指在收縮結(jié)束，或心縮期，和填充(filing)開始或心舒期的左心室中的血液容積。它指心臟周期中的任何點(diǎn)時的心室中的最低血液容積。男性的正常值的范圍通常為22-58ml，對于女性為19-49ml。作解釋，lvesv值在本文中是指基線lvesv值，即在向受試者施用間充質(zhì)譜系前體細(xì)胞或干細(xì)胞和/或其后代和/或自其衍生的可溶性因子前確定的lvesv值。

本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解術(shù)語“升高的lvesv”。通常，應(yīng)理解為意指高于對于男性或女性的正常lvesv范圍的數(shù)值。在一個實(shí)例中，升高的lvesv將理解為意指大于70ml的值。在另一個實(shí)例中，它理解為意指大于100ml的lvesv值。

如本文中所用，術(shù)語“左心室收縮末期容積指數(shù)”(lvesvi)是指指數(shù)化的左心室收縮末期容積。該值通常表示為ml/m²。術(shù)語lvesv和lvesvi可以在本文中互換使用。

如本文中所用，術(shù)語“左心室射血分?jǐn)?shù)”(lvef)是指心臟每次收縮泵送多好。射血分?jǐn)?shù)(ef)通常以百分比表示，即每次收縮時離開心臟的血液百分比。正常lvef范圍為55-70％。65％的lvef例如意味著每次心跳泵送出來左心室中的血液總量的65％。由于左心室是心臟的主要泵送室，ef通常僅在左心室(lv)中測量。55％以上的lvef認(rèn)為是正常的。50％以下的lvef認(rèn)為是降低的。專家在其關(guān)于50％和55％之間的ef的意見上有變化，并且有些認(rèn)為這是一個邊界范圍。

如本文中所用，術(shù)語“左心室舒張末期容積”(lvedv)是指在收縮結(jié)束，或心縮期，和填充開始或心舒期的右心室中的血液容積。它指心臟周期中的任何點(diǎn)時的心室中的最低血液容積。通常，正常健康受試者的lvedv是約120ml。作解釋，lvedv值在本文中是指基線lvedv值，即在向受試者施用間充質(zhì)譜系前體細(xì)胞和/或其后代和/或自其衍生的可溶性因子前確定的lvedv值。

如本文所用，術(shù)語“治療(treating)”、“治療(treat)”或“治療(treatment)”包括施用間充質(zhì)譜系干細(xì)胞或前體細(xì)胞的群體和/或其后代和/或自其衍生的可溶性因子，從而減少或消除心力衰竭至少一種癥狀。在一個具體實(shí)例中，相比于基線值(即施用間充質(zhì)譜系干細(xì)胞或前體細(xì)胞的群體和/或其后代和/或自其衍生的可溶性因子前)，治療將lvesv值降低至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、或至少50％。

如本文所用，術(shù)語“預(yù)防(prevent)”或“預(yù)防(preventing)”包括施用間充質(zhì)譜系干細(xì)胞或前體細(xì)胞的群體和/或其后代和/或自其衍生的可溶性因子，從而停止或阻礙心力衰竭的至少一種癥狀的發(fā)展。

如本文所用，術(shù)語“受試者”是指哺乳動物，包括但不限于鼠、大鼠、猿、人、家畜和農(nóng)場動物。

間充質(zhì)譜系前體細(xì)胞

如本文所用，術(shù)語“間充質(zhì)譜系前體細(xì)胞或干細(xì)胞”是指具有自我更新的能力，同時維持多能性和分化成間充質(zhì)來源(例如成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、基質(zhì)細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和肌腱)，或非中胚層來源(例如肝細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞和上皮細(xì)胞)的多種細(xì)胞類型的能力的未分化的多能細(xì)胞。為了避免疑問，“間充質(zhì)譜系前體細(xì)胞”是指可以分化成間質(zhì)細(xì)胞如骨、軟骨、肌肉和脂肪細(xì)胞以及纖維結(jié)締組織的細(xì)胞。

術(shù)語“間充質(zhì)譜系前體細(xì)胞或干細(xì)胞”包括親本細(xì)胞及其未分化后代二者。該術(shù)語還包括間充質(zhì)前體細(xì)胞、多能基質(zhì)細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞(msc)、血管周圍間充質(zhì)前體細(xì)胞及其未分化后代。

間充質(zhì)譜系前體細(xì)胞或干細(xì)胞可以是自體的、異種的、同系的或同基因的。自體細(xì)胞從將接受它們再植入的同一個體分離。從相同物種的供體分離同種異體細(xì)胞。從另一物種的供體分離異種細(xì)胞。從遺傳相同的生物體(如雙胞胎、克隆、或高度近交的研究動物模型)分離同系的或同基因的細(xì)胞。

間充質(zhì)譜系前體細(xì)胞或干細(xì)胞主要駐留于骨髓中，但也顯示存在于多種宿主組織中，包括例如臍帶血和臍帶、成人外周血、脂肪組織、小梁骨和牙髓。

在一個實(shí)例中，間充質(zhì)譜系前體細(xì)胞是stro-1+間充質(zhì)前體細(xì)胞(mpc)。如本文所用，短語“stro-1+多能細(xì)胞”應(yīng)當(dāng)視為指能夠形成多能細(xì)胞集落的stro-1+和/或tnap+祖細(xì)胞。

stro-1+多能細(xì)胞是在骨髓、血液、牙髓細(xì)胞、脂肪組織、皮膚、脾臟、胰腺、腦、腎、肝臟、心臟、視網(wǎng)膜、腦、毛囊、腸、肺、淋巴結(jié)、胸腺、骨、韌帶、肌腱、骨骼肌、真皮和骨膜中發(fā)現(xiàn)；并且能夠分化成種系，如中胚層和/或內(nèi)胚層和/或外胚層的細(xì)胞。因此，stro-1+多能細(xì)胞能夠分化成大量的細(xì)胞類型，包括但不限于脂肪組織、骨組織、軟骨組織、彈性組織、肌肉組織和纖維結(jié)締組織。這些細(xì)胞進(jìn)入的具體譜系定向和分化途徑取決于機(jī)構(gòu)影響和/或內(nèi)源性生物活性因子，如生長因子、細(xì)胞因子和/或由宿主組織建立的局部微環(huán)境條件的各種影響。

間充質(zhì)譜系前體細(xì)胞或干細(xì)胞可以從宿主組織中分離，并通過選擇stro-1+細(xì)胞進(jìn)行富集。例如，來自受試者的骨髓抽吸物可以用針對stro-1或tnap的抗體進(jìn)一步處理，以使得能夠選擇間充質(zhì)譜系前體細(xì)胞或干細(xì)胞。在一個實(shí)例中，間充質(zhì)譜系前體細(xì)胞或干細(xì)胞可以通過使用(simmons&torok-storb,1991)中描述的stro-1抗體來富集。

術(shù)語“富集”或其變型在本文中用于描述當(dāng)與未處理的細(xì)胞群體(例如，其天然環(huán)境中的細(xì)胞)相比，一種特定細(xì)胞類型的比例或多種特定細(xì)胞類型的比例增加的細(xì)胞群體。在一個實(shí)例中，針對stro-1+細(xì)胞富集的群體包含至少約0.1％或0.5％或1％或2％或5％或10％或15％或20％或25％或30％或50％或75％stro-1+細(xì)胞。在這方面，術(shù)語“針對stro-1+細(xì)胞富集的細(xì)胞群體”應(yīng)當(dāng)視為提供對術(shù)語“包含x％stro-1+細(xì)胞的細(xì)胞群體”的明確支持，其中x％是如本文所述的百分比。在一些實(shí)例中，stro-1+細(xì)胞可以形成克隆形成集落，例如，cfu-f(成纖維細(xì)胞)或其子集(例如50％或60％或70％或70％或90％或95％)可以具有這種活性。

在一個實(shí)例中，以可選擇形式從包含stro-1+細(xì)胞的細(xì)胞制備物富集細(xì)胞群體。在這方面，術(shù)語“可選擇形式”將理解為意味著細(xì)胞表達(dá)允許stro-1+細(xì)胞選擇的標(biāo)志物(例如，細(xì)胞表面標(biāo)志物)。標(biāo)志物可以是stro-1，但不需要如此。例如，如本文中描述和/或示例，表達(dá)stro-2和/或stro-3(tnap)和/或stro-4和/或vcam-1和/或cd146和/或3g5的細(xì)胞(例如間充質(zhì)前體細(xì)胞)也表達(dá)stro-1(并且可以是stro-1亮)。因此，細(xì)胞是stro-1+的指示并不意味著僅通過stro-1表達(dá)來選擇細(xì)胞。在一個實(shí)例中，基于至少stro-3表達(dá)來選擇細(xì)胞，例如它們是stro-3+(tnap+)。

提及細(xì)胞或其群體的選擇不一定需要從特定組織來源進(jìn)行選擇。如本文所述，可以從極其多種來源中選擇或分離或富集stro-1+細(xì)胞。也就是說，在一些實(shí)例中，這些術(shù)語提供了對從包含stro-1+細(xì)胞(例如間充質(zhì)前體細(xì)胞)的組織或血管化組織或包含周細(xì)胞(例如，stro-1+周細(xì)胞)的組織或任何一種或多種的本文所述的組織選擇的支持。

在一個實(shí)例中，本公開中使用的細(xì)胞表達(dá)單獨(dú)或共同選自由以下組成的組的一種或多種標(biāo)志物：tnap+、vcam-1+、thy-1+、stro-2+、stro-4+(hsp-90β)、cd45+、cd146+、3g5+或其任何組合。

“單獨(dú)地”是指本公開單獨(dú)涵蓋所述標(biāo)志物或標(biāo)志物組，并且盡管單獨(dú)的標(biāo)志物或標(biāo)志物組可以不在本文中單獨(dú)列出，但是所附權(quán)利要求書可以彼此分開且可分地定義此類標(biāo)志物或標(biāo)志物組。

“共同地”是指本公開涵蓋所述標(biāo)志物或標(biāo)志物組的任何數(shù)量或組合，并且盡管標(biāo)志物或標(biāo)志物組的這種數(shù)目或組合可能在本文中沒有明確列出，但是所附權(quán)利要求書可以與標(biāo)志物或標(biāo)志物組的任何其它組合分開且可分地定義此類組合或亞組合。

在一個實(shí)例中，stro-1+細(xì)胞是stro-1^亮(同義詞stro-1^bri)。在另一個實(shí)例中，相對于stro-1^暗或stro-1^中間細(xì)胞優(yōu)先富集stro-1^bri細(xì)胞。

在另一個實(shí)例中，stro-1^bri細(xì)胞另外是tnap+、vcam-1+、thy-1+、stro-2+、stro-4+(hsp-90β)和/或cd146+中的一種或多種。例如，細(xì)胞針對一種或多種前述標(biāo)志物進(jìn)行選擇和/或顯示以表達(dá)一種或多種前述標(biāo)志物。在這方面，顯示表達(dá)標(biāo)志物的細(xì)胞不需要明確測試，而是可以測試先前富集或分離的細(xì)胞，隨后使用，分離或富集的細(xì)胞可以合理地假定也表達(dá)相同的標(biāo)志物。

在一個實(shí)例中，間充質(zhì)前體細(xì)胞(mpc)是如wo2004/85630中定義的血管周圍間充質(zhì)前體細(xì)胞，其特征在于存在血管周圍標(biāo)志物3g5。例如，mpc表達(dá)血管周圍細(xì)胞的標(biāo)志物，例如細(xì)胞是stro-1+或stro-1^bri和/或3g5+。在一個實(shí)例中，細(xì)胞是或先前是或是從血管化組織或器官或其部分分離的細(xì)胞或者是該細(xì)胞的后代。

對于給定的標(biāo)志物稱為“陽性”的細(xì)胞可以根據(jù)標(biāo)志物存在于細(xì)胞表面上的程度而表達(dá)低(lo或暗)或高(亮，bri)水平的所述標(biāo)志物的，其中該術(shù)語與細(xì)胞分選過程中使用的熒光強(qiáng)度或其它標(biāo)志物有關(guān)。在被分類的特定細(xì)胞群體上使用的標(biāo)志物的上下文中將理解lo(或暗或暗淡)和bri的區(qū)別。對于給定的標(biāo)志物稱為“陰性”的細(xì)胞不一定完全不存在于該細(xì)胞中。該術(shù)語意味著標(biāo)志物由該細(xì)胞以相對非常低的水平表達(dá)，并且它在可檢測標(biāo)記時產(chǎn)生非常低的信號或在背景水平，例如使用同種型對照抗體檢測的水平以上檢測不到。

如本文所用，術(shù)語“亮”或“bri”是指在被可檢測地標(biāo)記時產(chǎn)生相對較高信號的細(xì)胞表面上的標(biāo)志物。雖然不希望被理論限制，但是提出“亮”細(xì)胞比樣品中的其它細(xì)胞表達(dá)更多的靶標(biāo)志物蛋白(例如由stro-1識別的抗原)。例如，如通過熒光激活細(xì)胞分選(facs)分析確定，當(dāng)用fitc綴合的stro-1抗體標(biāo)記時，與非亮細(xì)胞(stro-1暗淡/暗)相比，stro-1^bri細(xì)胞產(chǎn)生更大的熒光信號。在一個實(shí)例中，“亮”細(xì)胞構(gòu)成起始樣品中包含的最亮標(biāo)記的骨髓單核細(xì)胞的至少約0.1％。在其它實(shí)例中，“亮”細(xì)胞構(gòu)成起始樣品中包含的最明亮標(biāo)記的骨髓單核細(xì)胞的至少約0.5％、至少約1％、至少約1.5％或至少約2％。在一個實(shí)例中，stro-1亮細(xì)胞相對于“背景”，即stro-1^-的細(xì)胞，具有stro-1表面表達(dá)的高2個對數(shù)量級的表達(dá)。相比之下，stro-1暗淡和/或stro-1中間細(xì)胞比“背景”具有stro-1表面表達(dá)的高小于2個對數(shù)量級的表達(dá)，通常為約1個對數(shù)或更小。

如本文所用，術(shù)語“tnap”意在涵蓋組織非特異性堿性磷酸酶的所有同種型。例如，該術(shù)語包括肝同種型(lap)、骨同種型(bap)和腎同種型(kap)。在一個實(shí)例中，tnap是bap。在一個實(shí)例中，如本文所用，tnap是指可以結(jié)合stro-3抗體的分子，所述stro-3抗體由在2005年12月19日根據(jù)布達(dá)佩斯條約的規(guī)定在保藏登錄號pta-7282下保藏于atcc的雜交瘤細(xì)胞系產(chǎn)生。

此外，在一個實(shí)例中，stro-1+細(xì)胞能夠產(chǎn)生克隆形成cfu-f。

在一個實(shí)例中，相當(dāng)大比例的stro-1+細(xì)胞能夠分化為至少兩個不同的種系?？梢远ㄏ騭tro-1+細(xì)胞的譜系的非限制性實(shí)例包括骨前體細(xì)胞；肝細(xì)胞祖細(xì)胞，其對于膽管上皮細(xì)胞和肝細(xì)胞是多能性的；神經(jīng)受限細(xì)胞，其可以產(chǎn)生進(jìn)展為少突膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞前體；進(jìn)展為神經(jīng)元的神經(jīng)元前體；心肌和心肌細(xì)胞的前體、葡萄糖反應(yīng)性胰島素分泌胰腺β細(xì)胞系。其它譜系包括但不限于成牙本質(zhì)細(xì)胞、產(chǎn)生牙本質(zhì)的細(xì)胞和軟骨細(xì)胞，以及以下的前體細(xì)胞：視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、皮膚細(xì)胞如角質(zhì)形成細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、毛囊細(xì)胞、腎管上皮細(xì)胞、平滑和骨骼肌細(xì)胞、睪丸祖細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、腱、韌帶、軟骨、脂肪細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、骨髓基質(zhì)、心肌、平滑肌、骨骼肌、周細(xì)胞、血管、上皮、膠質(zhì)細(xì)胞、神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞。

在本公開的一個實(shí)例中，間充質(zhì)譜系前體細(xì)胞或干細(xì)胞是間充質(zhì)干細(xì)胞(msc)。msc可以是同質(zhì)的組合物，或者可以是富含msc的混合細(xì)胞群體。可以通過培養(yǎng)貼壁的骨髓或骨膜細(xì)胞獲得同質(zhì)msc組合物，并且可以通過用獨(dú)特的單克隆抗體鑒定的特異性細(xì)胞表面標(biāo)志物鑒定msc。用于獲得富集msc的細(xì)胞群的方法描述于例如美國專利no.5,486,359中。msc的替代來源包括但不限于血液、皮膚、臍帶血、肌肉、脂肪、骨骼和軟骨膜。

在另一個實(shí)例中，間充質(zhì)譜系前體細(xì)胞或干細(xì)胞是cd29+、cd54+、cd73+、cd90+、cd102+、cd105+、cd106+、cd166+、mhc1+msc(例如remestemcel-l)。

分離或富集的間充質(zhì)譜系前體細(xì)胞或干細(xì)胞可以通過培養(yǎng)進(jìn)行體外擴(kuò)增。分離或富集間充質(zhì)譜系前體細(xì)胞或干細(xì)胞可以冷凍保存，解凍，隨后通過培養(yǎng)進(jìn)行體外擴(kuò)增。

在一個實(shí)例中，將分離或富集的間充質(zhì)譜系前體細(xì)胞或干細(xì)胞以50,000個活細(xì)胞/cm²接種在培養(yǎng)基(無血清或血清補(bǔ)充)，例如補(bǔ)充有5％胎牛血清(fbs)和谷氨酰胺的α最小必需培養(yǎng)基(αmem)中，并使其在37℃，20％o2下貼壁到培養(yǎng)容器過夜。隨后根據(jù)需要更換和/或改變培養(yǎng)基，并將細(xì)胞在37℃，5％o2下再培養(yǎng)68至72小時。

如本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解的，培養(yǎng)的間充質(zhì)譜系前體細(xì)胞或干細(xì)胞與體內(nèi)細(xì)胞表型不同。例如，在一個實(shí)施方案中，它們表達(dá)一種或多種以下標(biāo)志物：cd44、ng2、dc146和cd140b。培養(yǎng)的間充質(zhì)譜系前體細(xì)胞或干細(xì)胞在與體內(nèi)細(xì)胞在生物學(xué)上不同，與體內(nèi)大部分非循環(huán)(靜止)細(xì)胞相比，具有較高的增殖速率。

也可以在向受試者施用前冷凍保存間充質(zhì)譜系前體細(xì)胞或干細(xì)胞。

細(xì)胞的修飾

在一個實(shí)例中，本公開的間充質(zhì)譜系前體細(xì)胞或干細(xì)胞可以經(jīng)遺傳修飾或遺傳未修飾，并且以至少0.1μg/10⁶個細(xì)胞的量表達(dá)ang1。然而，在多個實(shí)例中，設(shè)想本公開的間充質(zhì)干細(xì)胞或前體細(xì)胞可以以至少0.2μg/10⁶個細(xì)胞、0.3μg/10⁶個細(xì)胞、0.4μg/10⁶個細(xì)胞、0.5μg/10⁶個細(xì)胞、0.6μg/10⁶個細(xì)胞、0.7μg/10⁶個細(xì)胞、0.8μg/10⁶個細(xì)胞、0.9μg/10⁶個細(xì)胞、1μg/10⁶個細(xì)胞、1.1μg/10⁶個細(xì)胞、1.2μg/10⁶個細(xì)胞、1.3μg/10⁶個細(xì)胞、1.4μg/10⁶個細(xì)胞、1.5μg/10⁶個細(xì)胞的量表達(dá)ang1。

在一個實(shí)例中，本公開的間充質(zhì)譜系前體細(xì)胞或干細(xì)胞是遺傳未修飾的，并且以至少0.1μg/10⁶個細(xì)胞的量表達(dá)ang1。然而，在本實(shí)例的多個實(shí)施方案中，設(shè)想間充質(zhì)譜系前體細(xì)胞或干細(xì)胞可以以至少0.2μg/10⁶個細(xì)胞、0.3μg/10⁶個細(xì)胞、0.4μg/10⁶個細(xì)胞、0.5μg/10⁶個細(xì)胞、0.6μg/10⁶個細(xì)胞、0.7μg/10⁶個細(xì)胞、0.8μg/10⁶個細(xì)胞、0.9μg/10⁶個細(xì)胞、1μg/10⁶個細(xì)胞、1.1μg/10⁶個細(xì)胞、1.2μg/10⁶個細(xì)胞、1.3μg/10⁶個細(xì)胞、1.4μg/10⁶個細(xì)胞、1.5μg/10⁶個細(xì)胞的量表達(dá)ang1。

在另一個方面，本公開的間充質(zhì)譜系前體細(xì)胞或干細(xì)胞以小于約0.05μg/10⁶個細(xì)胞的量表達(dá)vegf。然而，在多個實(shí)施方案中，設(shè)想本公開的間充質(zhì)譜系干細(xì)胞或前體細(xì)胞可以以小于約0.05μg/10⁶個細(xì)胞、0.04μg/10⁶個細(xì)胞、0.03μg/10⁶個細(xì)胞、0.02μg/10⁶個細(xì)胞、0.01μg/10⁶個細(xì)胞、0.009μg/10⁶個細(xì)胞、0.008μg/10⁶個細(xì)胞、0.007μg/10⁶個細(xì)胞、0.006μg/10⁶個細(xì)胞、0.005μg/10⁶個細(xì)胞、0.004μg/10⁶個細(xì)胞、0.003μg/10⁶個細(xì)胞、0.002μg/10⁶個細(xì)胞、0.001μg/10⁶個細(xì)胞的量表達(dá)vegf。

在一個實(shí)例中，本公開的間充質(zhì)譜系前體細(xì)胞或干細(xì)胞是遺傳未修飾的，并且以小于約0.05μg/10⁶個細(xì)胞的量表達(dá)vegf。然而，在本實(shí)例的多個實(shí)施方案中，設(shè)想本公開的間充質(zhì)譜系前體細(xì)胞或干細(xì)胞可以以小于約0.05μg/10⁶個細(xì)胞、0.04μg/10⁶個細(xì)胞、0.03μg/10⁶個細(xì)胞、0.02μg/10⁶個細(xì)胞、0.01μg/10⁶個細(xì)胞、0.009μg/10⁶個細(xì)胞、0.008μg/10⁶個細(xì)胞、0.007μg/10⁶個細(xì)胞、0.006μg/10⁶個細(xì)胞、0.005μg/10⁶個細(xì)胞、0.004μg/10⁶個細(xì)胞、0.003μg/10⁶個細(xì)胞、0.002μg/10⁶個細(xì)胞、0.001μ/10⁶個細(xì)胞的量表達(dá)vegf。

間充質(zhì)譜系前體細(xì)胞或干細(xì)胞的組合物或培養(yǎng)物中表達(dá)的細(xì)胞ang1和/或vegf的量可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法測定。此類方法包括但不限于定量測定，如定量elisa測定，例如或熒光連接免疫吸附測定(flisa)、western印跡、競爭測定、放射免疫測定、側(cè)流免疫測定、穿流免疫測定、電化學(xué)發(fā)光測定、基于濁度的測定(nephelometric-basedassay)、基于濁度的測定(turbidometric-basedassay)、基于熒光激活細(xì)胞分選(facs)的測定(用于檢測培養(yǎng)間充質(zhì)譜系前體細(xì)胞或干細(xì)胞的培養(yǎng)基中的ang-1或vegf)、表面等離子共振(spr或biacore)。

然而，應(yīng)當(dāng)理解，本公開的范圍不限于用于確定在本公開的間充質(zhì)譜系前體細(xì)胞或干細(xì)胞中表達(dá)的ang1或vegf的量或水平的任何具體方法。

在一個實(shí)例中，通過elisa測定來確定由間充質(zhì)譜系前體細(xì)胞或干細(xì)胞的組合物或培養(yǎng)物表達(dá)的ang1或vegf的水平。在此類測定中，將來自間充質(zhì)譜系前體細(xì)胞或干細(xì)胞的培養(yǎng)物的細(xì)胞裂解物添加到elisa板的孔中。該孔可以用針對ang1或vegf的一抗(單克隆抗體或多克隆抗體)包被。然后，將孔清洗，然后與針對一抗的二抗(單克隆抗體或多克隆抗體)接觸。例如，將二抗與適當(dāng)?shù)拿妇Y合，如辣根過氧化物酶?？梢苑跤?，然后在孵育期后清洗。然后，使孔與合適于與二抗綴合的酶的底物接觸，所述底物如一種或多種色原體?？梢允褂玫纳w包括但不限于過氧化氫和四甲基聯(lián)苯胺。在添加底物之后，將孔孵育適當(dāng)?shù)臅r間段。孵育完成后，向孔中添加“停止”溶液，以便停止酶與底物的反應(yīng)。然后測量樣品的光密度(od)。樣品的光密度與含有已知量的ang1或vegf的樣品的光密度相關(guān)，以確定由正在測試的間充質(zhì)譜系前體細(xì)胞或干細(xì)胞的培養(yǎng)物表達(dá)的ang1或vegf的量。

在另一個方面，本公開的間充質(zhì)譜系前體細(xì)胞或干細(xì)胞以至少約2:1的比率表達(dá)ang1:vegf。然而，在多個實(shí)施方案中，設(shè)想本公開的間充質(zhì)譜系前體細(xì)胞或干細(xì)胞可以以至少約10:1、15:1、20:1、21:1、22:1、23:1、24:1、25:1、26:1、27:1、28:1、29:1、30:1、31:1、32:1的比率表達(dá)ang1:vegf。

在一個實(shí)例中，本公開的間充質(zhì)譜系前體細(xì)胞或干細(xì)胞是遺傳未修飾的，并且以至少約2:1的比率表達(dá)ang1:vegf。然而，在多個實(shí)施方案中，設(shè)想本公開的間充質(zhì)譜系前體細(xì)胞或干細(xì)胞可以以至少約10:1、15:1、20:1、21:1、22:1、23:1、24:1、25:1、26:1、27:1、28:1、29:1、30:1、31:1、32:1的比率表達(dá)ang1:vegf。

用于測定ang1:vegf表達(dá)比率的方法對于本領(lǐng)域技術(shù)人員將是顯而易見的。在確定ang1和vegf表達(dá)比率的方法的實(shí)例中，通過如上所述的定量elisa來定量ang1和vegf表達(dá)水平。在此類實(shí)例中，在定量ang1和vegf的水平之后，基于ang1和vegf的定量水平的比率可以表示為：(ang1的水平/vegf的水平)＝ang1:vegf比率。

本公開的間充質(zhì)譜系前體細(xì)胞或干細(xì)胞可以以如下的方式改變，使得在施用時，細(xì)胞的裂解被抑制?？乖母淖兛梢哉T導(dǎo)免疫學(xué)的非響應(yīng)性或耐受性，從而防止最終造成正常免疫應(yīng)答中的外源細(xì)胞排斥的免疫應(yīng)答的效應(yīng)階段(例如細(xì)胞毒性t細(xì)胞產(chǎn)生，抗體產(chǎn)生等)的誘導(dǎo)?？梢愿淖円詫?shí)現(xiàn)該目標(biāo)的抗原包括例如mhci類抗原、mhcii類抗原、lfa-3和icam-1。

在另一個實(shí)例中，間充質(zhì)譜系前體細(xì)胞或干細(xì)胞可以經(jīng)遺傳修飾以表達(dá)供應(yīng)給接受移植的受試者的基因產(chǎn)物?？梢酝ㄟ^遺傳修飾的間充質(zhì)譜系前體細(xì)胞遞送到受試者的基因產(chǎn)物的實(shí)例包括可以預(yù)防未來心臟病癥的基因產(chǎn)物，例如促進(jìn)血管侵入心肌的生長因子(例如血管內(nèi)皮生長因子(vegf)、成纖維細(xì)胞生長因子(fgf)、轉(zhuǎn)化生長因子β(tgf-β)和血管緊張素)。

間充質(zhì)譜系前體細(xì)胞或干細(xì)胞也可以經(jīng)遺傳修飾以表達(dá)對條紋骨骼肌細(xì)胞的分化和/或維持重要的蛋白質(zhì)。示例性蛋白質(zhì)包括生長因子(tgf-β，胰島素樣生長因子1(igf-1)，fgf)，肌原性因子(例如，myod、成肌素、肌原性因子5(myf5)、肌原性調(diào)節(jié)因子(mrf)、轉(zhuǎn)錄因子(例如gata-4)、細(xì)胞因子(例如心肌營養(yǎng)蛋白-1)、神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白家族的成員(例如神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白1、2和3)和同源盒基因(例如csx、tinman和nkx家族)。

心力衰竭

當(dāng)心臟不能充分泵送以維持血液流動來滿足身體的需要時，心力衰竭發(fā)生。心力衰竭的一個原因是心肌梗死(mi)。當(dāng)血液停止正常流動到心臟的一部分時，發(fā)生mi。缺乏供血導(dǎo)致稱為梗死或梗死形成的局部心肌壞死區(qū)域。梗死的心臟不能充分泵送以維持血液流動來滿足身體的需要，導(dǎo)致心力衰竭。在mi后，啟動一系列補(bǔ)償機(jī)制，用于緩解心輸出量的下降，并協(xié)助維持足夠的血壓來灌注重要的器官。因此，心力衰竭患者可能長時間不進(jìn)展。然而，補(bǔ)償機(jī)制最終無法補(bǔ)償受損心臟，導(dǎo)致心輸出量逐漸下降，稱為“進(jìn)行性心力衰竭”。

通過整合呈現(xiàn)疾病和身體檢查的歷史與心電圖發(fā)現(xiàn)和心臟標(biāo)志物產(chǎn)生mi的診斷?？梢赃M(jìn)行冠狀動脈血管造影，其允許在心臟血管上顯現(xiàn)狹窄或阻塞。根據(jù)2000年修訂的who標(biāo)準(zhǔn)(alpertjs,thygesenk,antmane,bassandjp.(2000)."myocardialinfarctionredefined--aconsensusdocumentofthejointeuropeansocietyofcardiology/americancollegeofcardiologycommitteefortheredefinitionofmyocardialinfarction".jamcollcardiol36(3):959–69)，心臟肌鈣蛋白升高伴有典型癥狀、病理性q波、st升高或抑制或冠狀動脈干預(yù)是mi的診斷。

70多年來，12導(dǎo)聯(lián)心電圖(ecg)仍然是確定mi的存在和位置的標(biāo)準(zhǔn)。它是普遍可用的、非侵入的、便宜的且可易于重復(fù)的。通過計(jì)算機(jī)模擬設(shè)計(jì)的定量selvesterqrs評分系統(tǒng)(selvesterrh等人(1985)archinternmed145(10):1877-1881)利用ecg上的信息來估計(jì)mi大小。selvester評分系統(tǒng)是基于標(biāo)準(zhǔn)12導(dǎo)聯(lián)心電圖中q-和r-波持續(xù)時間和r/q和r/s振幅比的觀察的50個標(biāo)準(zhǔn)的31點(diǎn)qrs評分系統(tǒng)。用于確定梗死大小的方法，包括但不限于qrs評分是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的。

還可以測量心臟標(biāo)志物以確定mi的發(fā)生。此類標(biāo)志物包括肌鈣蛋白t和i、肌酸酐激酶、肌紅蛋白水平、利尿鈉肽(例如b型利尿鈉肽)、c-反應(yīng)蛋白(crp)，紅細(xì)胞沉降率(esr)，心臟型脂肪酸結(jié)合蛋白以及和肽素(copeptin)、中間區(qū)域性房前利尿鈉肽原、st2，c-末端內(nèi)皮素原1和中間區(qū)域性腎上腺髓質(zhì)素原。

肌鈣蛋白是當(dāng)發(fā)生不可逆的心肌損傷時從肌細(xì)胞釋放的蛋白質(zhì)。它對心臟組織高度特異性，并準(zhǔn)確診斷具有缺血性疼痛或反映缺血的ecg變化的病史的心肌梗死。心臟肌鈣蛋白水平依賴梗死大小，因此為梗死后預(yù)后提供指示。

本公開的方法涉及進(jìn)行性心力衰竭的心輸出量特征的逐漸下降的治療。

因此，在本公開的上下文中，“治療(treat和treatment)”是指治療性治療和預(yù)防性或防范性措施。

在一個實(shí)例中，治療減少心臟衰竭相關(guān)主要不良心臟事件(hf-mace)的幾率或風(fēng)險(xiǎn)，所述hf-mace被定義為心臟相關(guān)死亡或復(fù)蘇的心臟死亡或非致命失代償性心力衰竭事件的復(fù)合。在一個實(shí)例中，hf-mace的風(fēng)險(xiǎn)幾率在至少6個月、至少12個月、至少24個月、至少36個月內(nèi)減少。

在本公開的背景下，設(shè)想術(shù)語慢性心力衰竭，充血性心力衰竭，充血性心力衰竭可以與“進(jìn)行性心力衰竭”互換使用。

心肌梗死誘發(fā)性心力衰竭

眾所周知，患者預(yù)后(progmosis)和心臟功能與梗死的左心室(lv)的量有關(guān)。

術(shù)語“心肌梗死誘發(fā)性心力衰竭”是指心肌梗死(mi)是心力衰竭的原因的受試者子集。設(shè)想本公開的方法可用于治療mi受試者的特定群體中的進(jìn)行性心力衰竭。

特別地，mi受試者的群體是那些具有大于70ml的lvesv的群體。在其它實(shí)例中，lvesv大于80ml、大于90ml、大于100ml、大于110ml或大于120ml。在一個實(shí)例中，受試者具有近端左前降支(lad)動脈病變。在本公開的上下文中，術(shù)語“動脈病變”涵蓋阻塞性病變，其阻塞心臟的lad；或先前阻塞已經(jīng)例如通過經(jīng)皮冠狀動脈介入(pci)，也稱為血管成形術(shù)治療的lad的動脈病變。

mi可導(dǎo)致持續(xù)性左心室功能障礙。左心室功能障礙的特征在于心肌收縮力的降低。當(dāng)心肌收縮力在整個左心室內(nèi)降低時產(chǎn)生左心室射血分?jǐn)?shù)(lvef)的降低。因此，lvef提供了一種確定左心室功能障礙的方式。lvef可以通過本領(lǐng)域已知的多種方法測量，例如但不限于二維超聲心動圖顯象(ecg)、磁共振斷層攝影術(shù)、心臟計(jì)算機(jī)斷層攝影術(shù)(ct)、放射性核素血管造影術(shù)、門控心肌灌注單光子發(fā)射計(jì)算機(jī)斷層攝影術(shù)(spect)、門控心肌灌注正電子發(fā)射斷層攝影術(shù)(pet)或雙平面左心室電影造影。

lvef可以使用以下公式測量：lvef＝中風(fēng)體積(edv-esv)/edv。lvef變化5-10％可能代表lvef的真正下降。

在一個實(shí)例中，lvef小于約55％的受試者具有左心室功能障礙。在其它實(shí)例中，lvef低于約54％、53％、52％、51％、50％、49％、48％、47％、46％的受試者具有左心室功能障礙。在另一個實(shí)例中，lvef小于約45％的受試者具有左心室功能障礙。在其它實(shí)例中，lvef小于約44％、43％、42％、41％的受試者具有左心室功能障礙。在另一個實(shí)例中，lvef小于約40％的受試者具有左心室功能障礙。在其它實(shí)例中，lvef小于約39％、38％、37％、36％、35％、34％、33％、32％、31％、30％的受試者具有左心室功能障礙。

在本公開的上下文中，術(shù)語“持續(xù)性左心室功能障礙”用于定義在一段時間或一系列測量中持續(xù)的左心室功能障礙。例如，“持續(xù)性左心室功能障礙”可以包括mi后約1至約14天之間或更長持續(xù)的左心室功能障礙。例如，持續(xù)性左心室功能障礙可以包括mi后約1至約10之間、約1至約9之間、約2至約8之間、約2至約7天之間的左心室功能障礙。在另一個實(shí)例中，“持續(xù)性左心室功能障礙”可以包括在約1至10次或更多次測量中持續(xù)的左心室功能障礙。

mi后心肌壞死的大小或量臨床上稱為梗死大小。設(shè)想本公開的方法涉及治療具有大梗死大小的mi受試者。例如，使用本公開的方法治療的受試者具有大于約10-35％左心室的梗死大小。在其它實(shí)例中，受試者具有大于約11-34％、約12-33％、約13-32％、約14-31％、約15-30％、約16-29％、約17-28％左心室的梗死大小。在另一個實(shí)例中，受試者具有大于約18.5％左心室的梗死大小。在其它實(shí)例中，受試者具有約19-27％、約20-26％、約21-25％、約22-24％、約23％左心室的梗死大小。

可以通過本領(lǐng)域已知的多種方法來測量梗死大小。這些方法的實(shí)例包括使用血清標(biāo)志物如肌酸激酶(ck)、ck-mb、肌鈣蛋白i和腦利鈉肽肌鈣蛋白。

在一個實(shí)例中，用本公開的方法治療的受試者具有至少約2x正常上限(ulm)的肌鈣蛋白水平。

在另一個實(shí)例中，受試者具有至少約3x、約4x、約5x、約6xulm的肌鈣蛋白水平。

在一個實(shí)例中，用本公開的方法治療的受試者具有至少約2x正常上限(ulm)的肌酸激酶-mb水平。

在另一個實(shí)例中，受試者具有至少約3x、約4x、約5x、約6xulm的肌酸激酶-mb水平。

測量梗死大小的其它實(shí)例包括sestamibi單光子發(fā)射計(jì)算機(jī)斷層掃描(spect)心肌灌注成像、磁共振成像。在一個實(shí)例中，使用cmri測量梗死大小。幾種心臟磁共振成像(cmri)技術(shù)可用于診斷梗死大小。最準(zhǔn)確和最有效的技術(shù)之一是延遲增強(qiáng)心臟磁共振成像(de-cmr)技術(shù)。在一個實(shí)例中，cmri包括延遲增強(qiáng)心臟磁共振成像(de-cmr)。

當(dāng)使用de-cmr的適當(dāng)設(shè)置時，正常的心肌顯示為黑色或無效，而非活區(qū)域表現(xiàn)為明亮或過度增強(qiáng)。因此，在一個實(shí)例中，梗死大小可以通過明亮和超增強(qiáng)區(qū)域的視覺評估來確定。確定梗死大小的其它實(shí)例是本領(lǐng)域已知的(sievers等人(2007),circulation,115,236-244；kim等人(2000),nengljmed,343,1445-1453)。簡而言之，在17段模型上用每個區(qū)段的5點(diǎn)量表對超增強(qiáng)進(jìn)行評分(0＝無過度增強(qiáng)，1＝1％至25％，2＝26％至50％，3＝51％至75％，4＝76％至100％)。完全包含在超增強(qiáng)的心肌內(nèi)的黑色區(qū)域被解釋為微血管損傷(無回流)的區(qū)域，并被包括在梗死的一部分中。通過對區(qū)域評分進(jìn)行求和將梗死大小計(jì)算為lv心肌的百分比，每個區(qū)域通過超增強(qiáng)范圍中點(diǎn)加權(quán)(即1＝13％，2＝38％，3＝63％，4＝88％)，并除以17。在另一個實(shí)例中，梗死大小可以通過在短軸圖像堆棧上的超增強(qiáng)區(qū)域的測面積法來量化。

在一個實(shí)例中，在mi后約1天和40天之間測量梗死大小。

在其它實(shí)例中，在mi后約1至40天之間、約2至35天之間、約3至30天之間、約4至25天之間、約5至20天之間、約6至15天之間、約6至15天之間測量梗死大小。

在一個實(shí)例中，可以在mi后約30天測量梗死大小。

在本公開的上下文中，“梗死大小”是指左心室梗死大小。換句話說，左心室梗死大小是指梗死的左心室的量。

設(shè)想本公開的方法可以用于治療具有心臟衰竭的各種階段或分類的心肌梗死受試者的進(jìn)行性心力衰竭。

在一個實(shí)例中，心力衰竭分期是基于美國心臟病學(xué)會(acc)和美國心臟協(xié)會(aha)分期標(biāo)準(zhǔn)。在另一個具體的實(shí)例中，受試者根據(jù)acc或aha標(biāo)準(zhǔn)具有a、b、c或d期心力衰竭。在另一個實(shí)例中，受試者具有b或c期心力衰竭。

在另一個實(shí)例中，心力衰竭分類是基于紐約心臟協(xié)會(nyha)分類量表。在另一個具體的實(shí)例中，受試者具有i、ii、iii或iv類心力衰竭。在另一個實(shí)例中，受試者具有ii或iii期心力衰竭。

基于導(dǎo)管的遞送系統(tǒng)

任何基于導(dǎo)管的遞送系統(tǒng)可以用于實(shí)施本公開的方法，所述遞送系統(tǒng)允許將間充質(zhì)譜系前體細(xì)胞或干細(xì)胞和/或其后代和/或由其衍生的可溶性因子或包含其的組合物注射到受試者的心肌或心臟組織損傷區(qū)域附近的位置。在某些實(shí)例中，將導(dǎo)管經(jīng)皮引入(例如，進(jìn)入股動脈或另一血管)，并通過血管系統(tǒng)引導(dǎo)到受試者的心肌，在心肌中它用于經(jīng)由從導(dǎo)管末端擠出的針遞送間充質(zhì)譜系前體細(xì)胞或干細(xì)胞和/或其后代和/或由其衍生的可溶性因子，或包含其的組合物。在其它實(shí)例中，導(dǎo)管通過最小的手術(shù)切口(例如，限制性胸廓切開術(shù)，其涉及肋骨之間的切口)到達(dá)心臟。

已經(jīng)設(shè)計(jì)了若干導(dǎo)管，以便精確地將藥劑遞送到心臟內(nèi)的受損區(qū)域，例如梗死區(qū)域(參見例如美國專利號6,102,926；6,120,520；6,251,104；6,309,370；6,432,119和6,485,481，每篇的全部內(nèi)容通過引用并入本文)。導(dǎo)管可以通過向下傳導(dǎo)具有容納腔的可導(dǎo)向或可導(dǎo)引的導(dǎo)管(參見例如美國專利號5,030,204)或通過固定構(gòu)造導(dǎo)向?qū)Ч?參見例如，美國專利號5,104,393)引導(dǎo)到指定位置?；蛘?，導(dǎo)管可以通過可偏轉(zhuǎn)的探針(參見例如wo93/04724)或可偏轉(zhuǎn)的導(dǎo)絲(例如參見美國專利號5,060,660)行進(jìn)到心臟內(nèi)的期望位置。

導(dǎo)管可以耦合到心臟定位系統(tǒng)，其允許確定損壞/缺陷區(qū)的位置和程度(如上所述)。一旦鑒定了需要治療的區(qū)域，則可以拉出轉(zhuǎn)向引導(dǎo)件，在注射部位留下針頭。部分或全部間充質(zhì)譜系前體細(xì)胞或干細(xì)胞和/或其后代和/或其衍生的可溶性因子向下傳送至導(dǎo)管的內(nèi)腔并注射入心肌。當(dāng)已經(jīng)進(jìn)行了所有注射時從受試者縮回導(dǎo)管。

在將導(dǎo)管引導(dǎo)到受試者的心臟中時，針元件可以通常在鞘內(nèi)縮回，以避免損傷靜脈系統(tǒng)和/或心肌。在注射時，針從導(dǎo)管的尖端擠出。在注射期間，針向成人心肌壁中伸出小于10mm、小于7.5mm或小于5mm。取決于注射部位，可以改變最大長度。對于嬰兒和兒童，伸出深度相應(yīng)地較小，如通過實(shí)際或估計(jì)的壁厚所確定。用于移植細(xì)胞的針規(guī)格可以是例如25至30。

在一個實(shí)例中，用于將間充質(zhì)譜系前體細(xì)胞或干細(xì)胞和/或其后代和/或由其衍生的可溶性因子遞送至心肌的導(dǎo)管被配置為包括用于定位穿透深度和針插入的位置的反饋傳感器。反饋傳感器的使用提供了準(zhǔn)確靶向注射位置的優(yōu)點(diǎn)。用于遞送細(xì)胞組合物的靶位置可以變化。例如，最佳治療可以需要在沒有兩次注射穿透相同部位的損傷/缺陷區(qū)域內(nèi)進(jìn)行多次小的注射?；蛘撸形恢每梢栽谶B續(xù)的細(xì)胞施用程序中保持相同。

可用于本公開的合適的導(dǎo)管是noga^tm注射導(dǎo)管系統(tǒng)(biosensewebster,inc.)。該導(dǎo)管是具有可偏轉(zhuǎn)尖端和設(shè)計(jì)成將藥劑注射到心肌中的注射針的多電極經(jīng)皮導(dǎo)管。注射導(dǎo)管的尖端配備有biosense位置傳感器和可伸縮的中空的27號針，用于流體遞送。注射部位在心臟圖上實(shí)時指示，允許精確分配注射。獲得局部電信號以最小化導(dǎo)管尖端創(chuàng)傷。

本公開的組合物

在本公開的一個實(shí)例中，間充質(zhì)譜系前體細(xì)胞或干細(xì)胞和/或其后代和/或由其衍生的可溶性因子以組合物的形式施用。在一個實(shí)例中，這種組合物包含藥學(xué)上可接受的載體和/或賦形劑。

術(shù)語“載體”和“賦形劑”是指本領(lǐng)域常規(guī)用于促進(jìn)活性化合物的儲存、施用和/或生物活性的物質(zhì)組合物(參見例如remington'spharmaceuticalsciences,第16版,macpublishingcompany(1980))。載體也可以減少活性化合物的任何不期望的副作用。合適的載體例如是穩(wěn)定的，例如不能與載體中的其它成分反應(yīng)。在一個實(shí)例中，載體在用于治療的劑量和濃度下不會在接受者中產(chǎn)生顯著的局部或全身不利反應(yīng)。

用于本公開的合適的載體包括常規(guī)使用的那些，例如水、鹽水、右旋糖水溶液、乳糖、林格氏溶液、緩沖溶液、透明質(zhì)酸和二醇是示例性液體載體，特別是(當(dāng)?shù)葟垥r)用于溶液。合適的藥物載體和賦形劑包括淀粉、纖維素、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明膠、麥芽、米、面粉、白堊、硅膠、硬脂酸鎂、硬脂酸鈉、單硬脂酸甘油酯、氯化鈉、甘油、丙二醇、水、乙醇，等。

在另一個實(shí)例中，載體是培養(yǎng)基組合物，例如其中培養(yǎng)或懸浮細(xì)胞。例如，此類培養(yǎng)基組合物不誘導(dǎo)其施用的受試者產(chǎn)生任何不利影響。

示例性載體和賦形劑不會不利地影響細(xì)胞的存活力和/或細(xì)胞減少、預(yù)防或延遲代謝綜合征和/或肥胖癥的能力。

在一個實(shí)例中，載體或賦形劑提供緩沖活性以將細(xì)胞和/或可溶性因子維持在合適的ph，從而發(fā)揮生物活性，例如載體或賦形劑是磷酸鹽緩沖鹽水(pbs)。pbs代表有吸引力的載體或賦形劑，因?yàn)樗c細(xì)胞和因子最小程度地相互作用并允許細(xì)胞和因子的快速釋放，在這種情況下，本公開的組合物可以作為液體生產(chǎn)以供例如通過注射直接應(yīng)用于血液或應(yīng)用入組織或組織周圍或附近的區(qū)域。

也可以將間充質(zhì)譜系前體細(xì)胞或干細(xì)胞和/或其后代和/或自其衍生的可溶性因子摻入或嵌入受體相容并且降解成對接受者無害的產(chǎn)物的支架內(nèi)。這些支架為要移植到接受者受試者的細(xì)胞提供支持和保護(hù)。天然和/或合成的可生物降解的支架是這種支架的實(shí)例。

在本公開的實(shí)踐中可以成功使用多種不同的支架。示例性支架包括但不限于生物的、可降解的支架。天然可生物降解支架包括膠原、纖連蛋白和層粘連蛋白支架。用于細(xì)胞移植支架的合適的合成材料應(yīng)該能夠支持廣泛的細(xì)胞生長和細(xì)胞功能。這種支架也可以是可再吸收的。合適的支架包括聚乙醇酸支架(例如，如vacanti等人j.ped.surg.23:3-91988；cima等人biotechnol.bioeng.38:1451991；vacanti等人plast.reconstr.surg.88:753-91991所述)；或合成聚合物如聚酐、聚原酸酯和聚乳酸。

在另一個實(shí)例中，間充質(zhì)譜系前體細(xì)胞或干細(xì)胞和/或其后代和/或自其衍生的可溶性因子可以在凝膠支架(如來自upjohncompany的gelfoam)中施用。

本文所述的組合物可以單獨(dú)施用或作為與其它細(xì)胞的混合物施用。不同類型的細(xì)胞可以在施用前立即或不久與本公開的組合物混合，或者它們可以在施用前一起共培養(yǎng)一段時間。

在一個實(shí)例中，組合物包含有效量或治療或預(yù)防有效量的間充質(zhì)譜系前體細(xì)胞或干細(xì)胞和/或其后代和/或自其衍生的可溶性因子。例如，組合物包含約1x10⁵個干細(xì)胞至約1x10⁹個干細(xì)胞或約1.25x10³個干細(xì)胞至約1.25x10⁷個干細(xì)胞/kg(80kg受試者)。要施用的細(xì)胞的確切量取決于多種因素，包括受試者的年齡、體重和性別以及所治療的病癥的程度和嚴(yán)重程度。

示例性的劑量包括至少約1.2x10⁸至約8x10¹⁰個細(xì)胞，如約1.3x10⁸至約8x10⁹個細(xì)胞、例如約1.4x10⁸至約8x10⁸個細(xì)胞、例如約1.5x10⁸至約7.2x10⁸個細(xì)胞、約1.6x10⁸至約6.4x10⁸個細(xì)胞、如約1.7x10⁸至約5.6x10⁸個細(xì)胞、例如約1.8x10⁸至約4.8x10⁸個細(xì)胞、例如約1.9x10⁸至約4x10⁸個細(xì)胞、約2.0x10⁸至約3.2x10⁸個細(xì)胞、約2.1x10⁸至約2.4x10⁸個細(xì)胞。例如，劑量可以包括至少約2.0x10⁸個細(xì)胞。例如，劑量可以包括至少約1.5x10⁸個細(xì)胞。

換言之，示例性的劑量包括至少約1.5x10⁶個細(xì)胞/kg。例如，劑量可以包括約1.5x10⁶至約1x10⁹個細(xì)胞/kg、如約1.6x10⁶至約1x10⁸個細(xì)胞/kg、如約1.8x10⁶至約1x10⁷個細(xì)胞/kg、例如約1.9x10⁶至約9x10⁶個細(xì)胞/kg、約2.0x10⁶至約8x10⁶個細(xì)胞/kg、如約2.1x10⁶至約7x10⁶個細(xì)胞/kg、例如約2.3x10⁶至約6x10⁶個細(xì)胞/kg、例如約2.4x10⁶至約5x10⁶個細(xì)胞/kg、例如約2.5x10⁶至約4x10⁶個細(xì)胞/kg、例如約2.6x10⁶至約3x10⁶個細(xì)胞/kg。例如，劑量可以包括至少約2.5x10⁶個細(xì)胞/kg。

在一個實(shí)例中，間充質(zhì)譜系前體細(xì)胞或干細(xì)胞組成組合物的細(xì)胞群體的至少約5％、至少約10％、至少約15％、至少約20％、至少約25％、至少約30％、至少約35％、至少約40％、至少約45％、至少約50％、至少約55％、至少約60％、至少約65％、至少約70％、至少約75％、至少約80％、至少約85％、至少約90％、至少約95％、至少約99％。

可以冷凍保存本公開的組合物。間充質(zhì)譜系前體細(xì)胞或干細(xì)胞的冷凍保存可以使用本領(lǐng)域已知的慢速冷卻方法或“快速”冷凍方案進(jìn)行。優(yōu)選地，與未冷凍的細(xì)胞相比，冷凍保存的方法維持類似的表型、細(xì)胞表面標(biāo)志物和冷凍保存的細(xì)胞的生長速率。

冷凍保存的組合物可以包含冷凍保存溶液。冷凍保存溶液的ph通常為6.5至8，優(yōu)選7.4。

靜脈注射溶液(cyropreservationsolution)可以包括無菌、非致熱原性等張溶液，例如plasmalytea^tm。100ml的plasmalytea^tm含有526mg氯化鈉，usp(nacl)；502mg葡萄糖酸鈉(c6h11nao7)；368mg三水合乙酸鈉，usp(c2h3nao2·3h2o)；37mg氯化鉀，usp(kcl)；和30mg氯化鎂，usp(mgcl2·6h2o)。它不含抗菌劑。用氫氧化鈉調(diào)節(jié)ph。ph為7.4(6.5至8.0)。

冷凍保存溶液可以包括profreeze^tm。冷凍保存溶液可以另外或可選地包括培養(yǎng)基，例如αmem。

為了便于冷凍，通常將冷凍保護(hù)劑，如例如二甲基亞砜(dmso)添加到冷凍保存溶液。理想地，冷凍保護(hù)劑應(yīng)對細(xì)胞和患者無毒、非抗原性、化學(xué)惰性，解凍后提供高存活率，并且允許在不清洗的情況下移植。然而，最常用的冷凍保護(hù)劑dmso表現(xiàn)出一些細(xì)胞毒性。羥乙基淀粉(hes)可用作替代物或與dmso組合以降低冷凍保存溶液的細(xì)胞毒性。

冷凍保存溶液可以包含dmso、羥乙基淀粉、人血清組分和其它蛋白質(zhì)填充劑中的一種或多種。在一個實(shí)例中，冷凍保存的溶液包含約5％人血清白蛋白(hsa)和約10％dmso。冷凍保存溶液還可以包含甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮(pvp)和海藻糖中的一種或多種。

在一個實(shí)施方案中，將細(xì)胞懸浮于42.5％profreeze^tm/50％αmem/7.5％dmso中，并在受控速率冷凍機(jī)中冷卻。

可以解凍冷凍保存的組合物并直接施用于受試者，或添加到另一種溶液(例如包含ha)中?；蛘?，可以解凍冷凍保存的組合物，并且在施用前將間充質(zhì)質(zhì)系系前體或干細(xì)胞重懸于替代載體中。

在一個實(shí)例中，可以在mi后約1至約10天施用本文所述的組合物。

在其它實(shí)例中，可以在mi后約1至9天、約1至8天、約2至7天、約2至6天、約3至5天施用本文所述的組合物。例如，可以在pci后約5天施用本文所述的組合物。

在一個實(shí)例中，可以在皮冠狀動脈干預(yù)(pci)后約1至約10天施用本文所述的細(xì)胞組合物。

在其它實(shí)例中，可以在pci后約1至9天、約1至8天、約2至7天、約2至6天、約3至5天施用本文所述的組合物。例如，可以在pci后約5天施用本文所述的組合物。

在一個實(shí)例中，本文所述的組合物可以以單次劑量施用。

在一些實(shí)例中，可以以多劑施用本文中所述的組合物。例如，至少2，至少3，至少4，至少5，至少6，至少7，至少8，至少9，至少10劑。

在一個實(shí)例中，可以在施用前培養(yǎng)擴(kuò)增間充質(zhì)譜系前體細(xì)胞或干細(xì)胞。細(xì)胞培養(yǎng)的各種方法是本領(lǐng)域已知的。

在一個實(shí)例中，在施用前在無血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)擴(kuò)增間充質(zhì)譜系前體細(xì)胞或干細(xì)胞。

在一些實(shí)例中，細(xì)胞被包含在室內(nèi)，所述室不允許細(xì)胞離開受試者的循環(huán)，然而，允許細(xì)胞分泌的因子進(jìn)入循環(huán)。以這種方式，可以通過允許細(xì)胞將因子分泌到受試者的循環(huán)中而將可溶性因子施用于受試者。這樣的室可以同樣植入受試者的部位，以增加可溶性因子的局部水平，例如植入在心臟中或附近。

可以全身施用間充質(zhì)譜系前體細(xì)胞或干細(xì)胞和/或其后代和/或由細(xì)胞衍生的可溶性因子，如例如通過靜脈內(nèi)、動脈內(nèi)或腹腔內(nèi)施用。也可以通過肌肉內(nèi)或心臟內(nèi)施用來施用間充質(zhì)譜系前體細(xì)胞或干細(xì)胞和/或其后代和/或自其衍生的可溶性因子。

在一個實(shí)例中，將間充質(zhì)譜系前體細(xì)胞或干細(xì)胞和/或其后代和/或由細(xì)胞衍生的可溶性因子直接施用到心肌中。例如，可以將間充質(zhì)譜系前體細(xì)胞或干細(xì)胞和/或其后代和/或由細(xì)胞衍生的可溶性因子直接施用到左心室的心肌中。

在一個實(shí)例中，通過心臟內(nèi)膜導(dǎo)管如j&jmyostar^tm注射導(dǎo)管施用間充質(zhì)譜系前體細(xì)胞或干細(xì)胞和/或其后代和/或由細(xì)胞衍生的可溶性因子。

在一個實(shí)例中，將間充質(zhì)譜系前體細(xì)胞或干細(xì)胞和/或其后代和/或由細(xì)胞衍生的可溶性因子施用于有活力的心肌。

在一個實(shí)例中，將間充質(zhì)譜系前體細(xì)胞或干細(xì)胞和/或其后代和/或由細(xì)胞衍生的可溶性因子施用于冬眠心肌。

本領(lǐng)域技術(shù)人員將能夠使用本領(lǐng)域已知的方法鑒定有活力的心肌和/或冬眠心肌。例如，可以使用諸如nogastar^tm映射導(dǎo)管系統(tǒng)的映射導(dǎo)管系統(tǒng)來鑒定有活力的心肌和/或冬眠心肌。

在另一個實(shí)例中，通過冠狀動脈內(nèi)輸注施用間充質(zhì)譜系前體細(xì)胞或干細(xì)胞和/或其后代和/或由細(xì)胞衍生的可溶性因子。例如，可以將間充質(zhì)譜系前體細(xì)胞或干細(xì)胞和/或其后代和/或由細(xì)胞衍生的可溶性因子施用于左前降支(lad)動脈。

在一個實(shí)例中，通過pci在lad血運(yùn)重建后立即將間充質(zhì)譜系前體細(xì)胞或干細(xì)胞和/或其后代和/或由細(xì)胞衍生的可溶性因子施用到lad動脈中。

6分鐘步行測試(6mwt)

6分鐘步行測試(6mwt)于1963年開發(fā)(balkeb等人(1963)repcivaeromedresinstus53:1-8)，以評估慢性呼吸系統(tǒng)疾病和心力衰竭中的運(yùn)動耐力。測試測量受試者在總共6分鐘內(nèi)在堅(jiān)硬、平坦的表面上行走的距離。目標(biāo)是在六分鐘內(nèi)盡可能地步行。允許受試者自行踱步，并且當(dāng)他們沿著標(biāo)記人行道來回行走時根據(jù)需要休息。

本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解，在不脫離本公開的廣泛的總體范圍的情況下，可以對上述實(shí)施方案進(jìn)行許多變化和/或修改。因此，本實(shí)施方案在所有方面都認(rèn)為是說明性的而不是限制性的。

以下具體實(shí)施例將被解釋為僅僅是說明性的，而不是以任何方式限制本公開的其余部分。沒有進(jìn)一步的闡述，認(rèn)為本領(lǐng)域技術(shù)人員可以基于本文的描述，最大程度地利用本發(fā)明。

實(shí)施例

實(shí)施例1：研究設(shè)計(jì)

進(jìn)行了一項(xiàng)研究，以評估由于缺血性或非缺血性病因?qū)W的左心室收縮功能異常所致的心力衰竭受試者中3種增加劑量(2500、7500萬或1.5億個細(xì)胞)的間充質(zhì)前體細(xì)胞(mpc)的安全性和可耐受性。次要目標(biāo)是通過多個參數(shù)來觀察功效，并鑒定mpc治療的最佳有效劑量和最佳目標(biāo)群體。

心力衰竭受試者年齡為>18歲；由缺血性或非缺血性心肌病引起的心力衰竭，通過在放射性核素心室造影術(shù)、二維超聲心動圖顯象或核磁共振成像上檢測的射血分?jǐn)?shù)(ef)<30％顯示的lv收縮功能障礙；和超聲心動圖確定lv舒張末期直徑>3.2cm/m2或>6cm；呼吸困難或休息或最小限度盡力時疲勞的癥狀(紐約心臟協(xié)會(nyha)ii類或iii類)>2個月；在篩查前12個月內(nèi)需要靜脈利尿或血管擴(kuò)張劑治療的至少一次住院或兩次門診訪視；以及最佳藥物治療，包括利尿劑、β阻斷劑和血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ace)抑制劑或血管緊張素受體阻斷劑(arb))，除非不耐受或禁忌。

在前90天內(nèi)，根據(jù)急性心肌梗死排除受試者，血清鉀<4.0或>5.5meq/l，地高辛水平>1.2ng/ml，鎂水平<1.0meq/l，血清肌酸酐>2.0mg/dl和血清膽紅素>3.0mg/dl。

根據(jù)在導(dǎo)管插入實(shí)驗(yàn)室中的心內(nèi)膜心肌導(dǎo)管或編寫的模擬注射(對照組)，將受試者隨機(jī)化為2500萬、7500萬或1.5億個mpc的注射。使用j&jmyostar^tm注射導(dǎo)管和nogastar^tm映射導(dǎo)管系統(tǒng)將mpc施用于左心室(約15-20次注射0.2ml/注射)，所述系統(tǒng)基于電壓鑒定活力/冬眠心肌，理論上使健康但有風(fēng)險(xiǎn)的組織的靶向更容易。該導(dǎo)管具有該應(yīng)用的最大安全性概況，并且已經(jīng)在多次試驗(yàn)的超過1,000名患者中使用。功能效力的測量涉及左心室收縮末期容積或lvesv、左心室舒張末期容積或lvedv、測量以及左心室射血分?jǐn)?shù)或lvef。進(jìn)行了與心力衰竭相關(guān)的主要不良心臟事件或hf-mace的第一次事件前時間的另外的分析。hf-mace被定義為心臟相關(guān)死亡或復(fù)蘇心臟死亡或非致命失代償心力衰竭事件的復(fù)合。

慢性心力衰竭患者中mpc的心內(nèi)膜心肌注射是可行和安全的。不利事件的發(fā)生率在所有組中相似，并且在接受mpc的任何患者中沒有臨床顯著的免疫應(yīng)答。

1.5億細(xì)胞劑量顯示對左心室重塑和功能能力的最大影響和對于減少長期hf-mace的閾值益處(圖1)。

更具體地，在lvesv和lvedv兩者之間存在劑量相關(guān)的效果，其中與治療后6個月時lv重塑的對照(lvesv和lvedv兩者p<0.02)和治療后12個月時通過6分鐘步行測試(6mtw:p＝0.062)測量的功能鍛煉能力相比，1.5億個細(xì)胞劑量限制最大的效果。p值是概率，數(shù)值范圍從0至1，這指示研究結(jié)果在治療組和對照組之間不同的可能性。p值越低，僅偶然看到結(jié)果越難。p值低于0.05通常稱為統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。

事后進(jìn)行潛在hf-mace的獨(dú)立的盲判定。在36個月的隨訪內(nèi)，與對照組相比，1.5億細(xì)胞劑量與不含hf-mace事件的剩余部分的顯著更大的可能性相關(guān)(通過kaplan-meier得到的0％對33％hf-mace，根據(jù)對數(shù)秩檢驗(yàn)得到p＝0.026)。就此測量而言，2500和7500萬劑量與對照組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。在這些結(jié)果的基礎(chǔ)上，認(rèn)為治療益處的最佳劑量是1.5億mpc劑量(圖2)。

實(shí)施例2：mpc施用對心臟功能的參數(shù)的治療益處(意圖治療分析)

為了鑒定1.5億mpc劑量的最合適的目標(biāo)群體，本發(fā)明人評估了對mpc療法的最佳響應(yīng)者是否在具有或多或少晚期心力衰竭的組中。進(jìn)一步的事后分析以盲目的方式進(jìn)行，將對照組或1.5億mpc治療的患者分層為具有小于或大于100ml的基線lvesv的患者，作為顯著的心肌收縮異常和晚期心力衰竭的替代。選擇100mllvesv閾值，因?yàn)樗湓诟哂谡vesv的超過3個標(biāo)準(zhǔn)差。

下表1顯示了所有受試者(即具有任何值的lvef的受試者)對在意圖治療群體中具有l(wèi)vesv>100的受試者的比較的分析。意圖治療分析是一個統(tǒng)計(jì)概念。根據(jù)fisher等人(fisherld,dixondo,hersonj,frankowskirk,hearronms,peaceke.intentiontotreatinclinicaltrials.于:peaceke編statisticalissuesindrugresearchanddevelopment.newyork:marceldekker；1990.第331–50頁(1990))，itt分析包括他們被隨機(jī)化分配的組中的所有隨機(jī)化患者，無論其是否遵守入選標(biāo)準(zhǔn)，無論其實(shí)際接受的治療，以及無論隨后從治療中退出或偏離方案。換言之，itt分析包括根據(jù)隨機(jī)化治療分配隨機(jī)化的每個受試者。它忽略不順從、方案偏差、撤藥以及隨機(jī)化后發(fā)生的任何事情。itt分析通過接受在實(shí)際臨床實(shí)踐中可能發(fā)生不順從和方案偏差來避免源自除去非順從者的干預(yù)的功效的過于樂觀的評估。

表1全部受試者與lvesv>100ml的受試者(itt，或意圖治療)的比較

此分析表明，通過聚焦于具有實(shí)質(zhì)性基線lv收縮異常和晚期心力衰竭(lvesv大于100ml)的目標(biāo)群體明顯放大1.5萬劑量對lv重塑的參數(shù)的治療益處。

實(shí)施例3：mpc施用對lvesv的治療益處

對共計(jì)30名受試者(心力衰竭和非心力衰竭受試者的混合)評估基線lvesv水平。在表2中顯示受試者的分布。受試者分類為安慰劑組或mpc細(xì)胞組(其施用1.5x10⁸個間充質(zhì)前體細(xì)胞(mpc))。使用j&jmyostar注射導(dǎo)管和基于電壓鑒定活力/冬眠心肌的nogastar映射導(dǎo)管系統(tǒng)注射入左心室(約15-20次注射0.2ml/注射)。受試者基于他們的左心室收縮末期容積(lvesv)值<100ml或>100ml分層。

表2根據(jù)基線lvesv值的受試者分層

在對研究評估的30名受試者中，18名受試者具有基線lvesv值>100ml。將七(7)名受試者分配到安慰劑，并且將11名分配到mpc。

圖3-1顯示了受試者組的基線lvesv值。根據(jù)小于或等于(≤)100ml的lvesv分層的受試者具有平均基線lvesv值為81ml。根據(jù)其大于(>)100ml的lvesv值分層的受試者具有平均基線值136ml。

在施用安慰劑或1.5x10⁸個間充質(zhì)前體細(xì)胞(mpc)后6個月時間點(diǎn)對受試者進(jìn)行重新評估。對于基于lvesv值分層的受試者確定主要不良心臟事件(mace)率。在圖3-2中顯示結(jié)果，表示基線和6個月時間點(diǎn)之間lvesv值的變化。施用了安慰劑組(對照)和mpc的受試者之間的lvesv值的變化是統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的。

表3顯示了以數(shù)字和百分比數(shù)值表示的心力衰竭mace率(hf-mace)。

表3根據(jù)基線lvesv值分層的受試者中的lvesv值的變化

基線lvesv值≤100ml的受試者在6個月評估期未形成主要不良心臟事件，這與受試者是否施用安慰劑或1.5x10⁸個間充質(zhì)前體細(xì)胞(mpc)無關(guān)。hf-mace只發(fā)生在安慰劑受試者(對照)中，所述安慰劑受試者具有較大的基線心臟功能障礙的證據(jù)，如通過lvesv>100ml評估。相比之下，施用了mpc的具有如通過lvesv>100ml評估的基線心臟功能障礙的受試者無一形成hf-mace。

表2中的數(shù)據(jù)表明，用安慰劑治療的心臟衰竭受試者將經(jīng)歷高mace率(即6個月時期時71％)。特別地，高mace率僅在具有基線lvesv值>100ml的受試者中觀察到。

數(shù)據(jù)顯示，基線lvesv值>100ml的心力衰竭受試者從mpc的施用中獲得最佳治療益處。換言之，疾病進(jìn)展風(fēng)險(xiǎn)最高的受試者從mpc的施用中獲得最大的益處。

實(shí)施例4：mpc施用對lvedv和lvef的治療益處

還在已經(jīng)根據(jù)lvesv值小于或等于(≤)100ml或>100ml分層的受試者中評估左心室舒張末期容積(lvedv)。

圖4-1顯示了受試者的基線lvedv值?；€lvesv≤100ml的受試者的平均基線lvedv為128ml。基線lvesv值>100ml的受試者的平均基線lvedv值為198ml。

受試者分布按照表1。

圖4-2顯示了根據(jù)基線lvesv≤100ml和基線lvesv>100ml分層的受試者之間施用安慰劑(對照)或mpc后6個月的lvedv值的變化。該圖顯示，mace率最高的心力衰竭受試者達(dá)到來自mpc施用的治療益處，如lvedv值的改善證明。根據(jù)lvesv值≤100ml或>100ml分層的受試者之間的差異是統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的。

也在按照lvesv值分層的受試者中評估左心室射血分?jǐn)?shù)(lvef)值。圖5-1顯示了受試者的基線lvef值。基線lvesv≤100ml的受試者具有35-40％的平均基線lvef?；€lvesv值>100ml的受試者的平均基線lvef值為約32％。

受試者分布按照表1。

圖5-2顯示了根據(jù)基線lvesv≤100ml和基線lvesv>100ml分層的受試者之間施用安慰劑(對照)或mpc后6個月時lvef值的變化。該圖顯示了具有最高的mace率的心力衰竭受試者達(dá)到來自mpc施用的治療益處，如通過lvef值的改善所證明的。根據(jù)lvesv值≤100ml或>100ml分層的受試者之間的差異是統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的。

實(shí)施例5：疾病嚴(yán)重性和mpc對lvesv的治療益處之間的關(guān)聯(lián)

在70ml和120ml之間基線lvesv的每十分位數(shù)間的進(jìn)一步靈敏度分析證實(shí)了在使用大于100ml的lvesv的分層中看到的發(fā)現(xiàn)。

圖6至圖11顯示了在施用安慰劑(對照)或mpc(1.5x10⁸個間充質(zhì)前體細(xì)胞)后6個月評價(jià)的受試者lvesv的變化。lvesv的降低與心力衰竭的水平(如通過基線lvesv的測量確定)相關(guān)。將受試者根據(jù)lvesv分層，如下表4所示。

表4lvesv的變化

實(shí)施例6：lvesv>100ml的患者中的hf-mace。

在對照組和接受1.5億個mpc的受試者中治療后36個月檢查hf-mace。在36個月隨訪內(nèi)的所有hf-mace事件都僅僅發(fā)生在具有晚期心力衰竭的對照組中(圖12)。

與所有對照中的11％相比，這些快速進(jìn)展者的按年計(jì)算的hf-mace率為24％。

更具體地，在18名基線lvesv>100ml的ii/iii類chf患者中，5/7(71％)安慰劑處理者對0/111.5億個mpc治療者在36個月內(nèi)經(jīng)歷了一次或多次hf-mace事件(p＝0.0007)。

因此，在晚期心力衰竭和高進(jìn)展率的那些患者中，1.5億mpc劑量對整體hf-mace的影響顯著放大，并且這可以代表mpc療法的最佳目標(biāo)患者群體。

評述

本文中顯示的數(shù)據(jù)表明，由于左心室收縮功能障礙引起的慢性心力衰竭受試者的基線左心室收縮異常的量級越大，在6個月隨訪期內(nèi)觀察到的mpc相關(guān)心臟保護(hù)效果越有益。數(shù)據(jù)進(jìn)一步表明，通過用mpc治療可以有益地改變與晚期慢性心力衰竭有關(guān)的進(jìn)行性不利天然病史。不希望受理論束縛，發(fā)現(xiàn)支持旁分泌串?dāng)_假設(shè)，其中組織水平的生物化學(xué)/生理紊亂產(chǎn)生促進(jìn)mpc釋放有益的旁分泌介質(zhì)的局部環(huán)境。因此，在具有最高疾病進(jìn)展風(fēng)險(xiǎn)的受試者，即基線lvesv>70ml的受試者中觀察到通過在心力衰竭受試者中施用mpc所獲得的最佳效果。

基線lvesv>70ml鑒定了經(jīng)歷高h(yuǎn)f-mace的慢性心力衰竭和左心室收縮功能異常受試者的快速進(jìn)展的亞組。

在基線lvesv>70ml、>80ml、>90ml、>100ml、>110ml或>120ml的受試者中，用高劑量(1.5億)mpc的治療導(dǎo)致比對照受試者中的所見更大的心臟重塑變量和hf-mace的改善。

本文呈現(xiàn)的結(jié)果鑒定了細(xì)胞療法的心臟保護(hù)益處的最佳目標(biāo)群體，并且促進(jìn)具有由于左心室收縮功能異常所致的心力衰竭的受試者的試驗(yàn)設(shè)計(jì)的改進(jìn)。

對于lvesv和lvedv體積顯著惡化以及l(fā)vef損失，具有晚期心力衰竭(基線lvesv>100ml)的對照患者是6個月內(nèi)最快的進(jìn)展者。在6個月的隨訪期內(nèi)，1.5億mpc劑量對具有實(shí)質(zhì)性基線lv收縮異常的ii/iii類患者(即具有基線lvesv>100ml的那些患者)中的lvesv(p<0.02)、lvedv(p<0.03)和lvef(p<0.05)具有顯著的心臟保護(hù)作用。

在6個月的隨訪期內(nèi)，1.5億mpc劑量對具有實(shí)質(zhì)性基線lv收縮異常的ii/iii類患者(即具有基線lvesv>100ml的那些患者)中的lvesv(p<0.02)、lvedv(p<0.03)和lvef(p<0.05)具有顯著的心臟保護(hù)作用。