發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及藥物制劑，所述藥物制劑包含c1酯酶抑制劑(“c1-inh”)，表現(xiàn)出對(duì)于延長(zhǎng)貯存較高的穩(wěn)定性和減小的運(yùn)動(dòng)粘度，用于在治療或預(yù)防與激肽形成相關(guān)的病癥中的改進(jìn)的用途。背景c1-inh，一種分子量為104kda的血漿糖蛋白，屬于絲氨酸蛋白酶抑制劑(絲氨酸蛋白酶抑制蛋白(serpins))的蛋白質(zhì)家族，其通過(guò)抑制絲氨酸蛋白酶的催化活性來(lái)調(diào)節(jié)絲氨酸蛋白酶的活性(bocksc等人，biochemistry1986,25:4292-4301)。c1-inh通過(guò)抑制激活的絲氨酸蛋白酶c1s和c1r來(lái)抑制補(bǔ)體系統(tǒng)的經(jīng)典途徑。此外，由于c1-inh抑制激活的絲氨酸蛋白酶因子xiia(fxiia)、因子xia(fxia)和血漿激肽釋放酶的能力，其是接觸激活系統(tǒng)的主要抑制劑(davisae,clin.immunol.2005,114:3-9；caliezic等，pharmacol.rev.2000,52:91-112)。c1-inh的缺乏導(dǎo)致遺傳性血管性水腫(hae)的臨床表現(xiàn)，其特征在于皮下或粘膜下組織諸如皮膚、喉或內(nèi)臟器官中的急性血管性水腫的發(fā)病(longhursth等人，lancet2012,379:474-481)，所述發(fā)病持續(xù)1至7天并且以無(wú)規(guī)律的間隔發(fā)生。c1-inh血漿含量或其功能活性(通常稱(chēng)為功能性c1-inh的缺陷)上的異常由c1-inh基因中的各種大的和小的突變引起(參見(jiàn)上文)(karnaukhovae,j.hematol.thromb.dis.,2013,1-7)。通常存在兩種類(lèi)型的遺傳性c1-inh缺陷。更普遍的i型hae的特征在于在循環(huán)中c1-inh的低含量(低于正常的35％)和低抑制活性。ii型hae與低功能活性的c1-inh的正常或升高的抗原水平相關(guān)。最近，具有正常c1-inh的hae(也稱(chēng)為iii型hae)已經(jīng)被描述在兩個(gè)子類(lèi)別中：(1)由于因子xii基因中的突變而導(dǎo)致的hae，因此增加的因子xii的活性導(dǎo)致高緩激肽產(chǎn)生，和(2)遺傳因素不明的hae。通過(guò)施用c1-inh可以有效治療hae發(fā)病(longhursth等人，lancet2012,379:474-481；borkk,allergyasthmaclin.immunol.2010,6:15)。此外，已顯示當(dāng)預(yù)防性給予時(shí)，c1-inh的施用可預(yù)防患者的水腫形成。c1-inh目前例如以(cslbehring)、(sanquin)、(shire)、(由pharming生產(chǎn)的重組c1抑制劑)市售。由于其對(duì)補(bǔ)體和接觸激活系統(tǒng)的抑制作用，c1-inh取代恢復(fù)正常的穩(wěn)態(tài)功能，并抑制血管活性肽諸如緩激肽的過(guò)度形成，其介導(dǎo)血管性水腫的形成。據(jù)報(bào)道，c1-inh在腦缺血-再灌注嚙齒動(dòng)物模型中減少缺血-再灌注損傷(desimoni等人，jcerebbloodflowmetab.2003,23:232-9；akita等，2003,neurosurgery52:395-400)。用于治療c1-inh缺乏癥的商購(gòu)可得的c1-inh組合物迄今為止均為大體積制劑，即這些制劑需要通過(guò)靜脈內(nèi)注射施用。鑒于已顯示當(dāng)預(yù)防性給藥時(shí)，c1-inh能預(yù)防遺傳性血管性水腫患者的水腫形成(cicardim等人,expertopin.pharmacother.2007；8:3173-3181)的事實(shí)，存在對(duì)可由受影響患者以規(guī)則間隔容易地自我給藥的制劑的需要。hae的長(zhǎng)期預(yù)防旨在防止血管性水腫發(fā)病或使其數(shù)量和嚴(yán)重程度降至最低程度。然而，目前可用于長(zhǎng)期預(yù)防的藥物在很多情況下不是最佳的。需要多次日劑量的口服抗纖維蛋白溶解藥相對(duì)無(wú)效，并且經(jīng)常伴有顯著的副作用。合成代謝雄激素方便服用，通常在<200mg/天的劑量下有效，但可與嚴(yán)重副作用的重大風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)。目前可用的c1-inh制劑需要靜脈內(nèi)通路，對(duì)患者、醫(yī)療保健提供者或兩者都產(chǎn)生了負(fù)擔(dān)。靜脈內(nèi)通路的維持要求許多患者植入靜脈注射端口，這與感染和血栓形成的風(fēng)險(xiǎn)增加相關(guān)。功能性c1-inh的血漿水平在靜脈內(nèi)施用治療劑量的c1-inh濃縮物后迅速下降，3天內(nèi)接近基線水平。當(dāng)制備蛋白質(zhì)治療劑諸如c1-inh時(shí)，監(jiān)管當(dāng)局強(qiáng)烈建議治療性蛋白質(zhì)產(chǎn)品的制造商盡可能地最小化蛋白質(zhì)多聚化和聚集。此外，為了此類(lèi)治療劑的延長(zhǎng)貯存，蛋白質(zhì)治療劑增加的穩(wěn)定性是高度期望的。增加蛋白質(zhì)穩(wěn)定性的條件也是防止高分子量組分(hmwc)的變性和形成的最佳條件，通過(guò)多聚化和聚集，特別是治療性蛋白質(zhì)的多聚化和聚集。因此，在產(chǎn)品開(kāi)發(fā)中高度期望盡可能早地開(kāi)發(fā)出最小化hmwc形成的策略。這可通過(guò)例如使用適當(dāng)?shù)募?xì)胞基質(zhì)，選擇最小化hmwc形成的制備條件，采用可能的最大程度地除去hmwc的純化方案，選擇容納系統(tǒng)，其最小化蛋白質(zhì)的hmwc形成，尤其是選擇在貯存期間最小化hmwc形成、降解和變性的制劑來(lái)實(shí)現(xiàn)。因此，制劑組分主要基于它們保留通過(guò)防止由于可能導(dǎo)致hmwc形成的疏水相互作用的變性以及通過(guò)防止化學(xué)降解包括平截、氧化和脫酰胺的治療性蛋白質(zhì)的天然構(gòu)象的能力來(lái)選擇(cleland等，crit.rev.ther.drugcarriersyst.1993,10(4):307-377；shire等，j.pharm.sci.2004,93(6):1390-1402；wakankar和borchardt,j.pharm.sci.2006,95(11):2321-2336)。由蛋白質(zhì)hmwc誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答的潛在臨床后果可取決于hmwc中的天然表位的喪失或保存：(a)由人受試者產(chǎn)生的針對(duì)含hmwc的天然蛋白的一些抗體可與單體蛋白以及hmwc結(jié)合，并且可抑制或中和產(chǎn)物活性；(b)針對(duì)變性/降解的并從而聚集的蛋白質(zhì)的其它抗體獨(dú)特地結(jié)合hmwc材料，而不與天然蛋白質(zhì)單體結(jié)合(治療性蛋白質(zhì)產(chǎn)品的工業(yè)免疫原性評(píng)估指南，美國(guó)衛(wèi)生和公眾服務(wù)部，食品和藥品管理局，藥物評(píng)估和研究中心(cder)，生物制品評(píng)估和研究中心(cber)，2014年8月)。在臨床開(kāi)發(fā)期間停止viropharma(現(xiàn)為：shire)對(duì)皮下施用的含c1-inh(333iu/ml)和透明質(zhì)酸酶(rhuph20)的濃縮物的開(kāi)發(fā)：特別是臨床試驗(yàn)的幾乎所有參與者在注射部位遭受不良事件折磨。wo2014/145519公開(kāi)了具有約400或500u/mlc1-inh的c1-inh組合物。建議不要使用檸檬酸鹽或檸檬酸作為皮下施用的緩沖物質(zhì)。所公開(kāi)的制劑僅含有低濃度的特定緩沖物質(zhì)，未添加其它賦形劑。所有公開(kāi)的c1-inh制劑在t0時(shí)具有約67％的單體含量的相對(duì)低的總純度。雖然初始粘度水平在通常設(shè)置用于可注射產(chǎn)品的限度內(nèi)，但需要具有甚至更好的粘度的產(chǎn)品。關(guān)于穩(wěn)定性，wo2014/145519僅公開(kāi)了在40℃下一周后和25℃下兩周后的數(shù)據(jù)，即沒(méi)有顯示長(zhǎng)期穩(wěn)定性數(shù)據(jù)，因此未證實(shí)長(zhǎng)期穩(wěn)定性。在本發(fā)明中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，在wo2014/145519中公開(kāi)的c1-inh制劑的長(zhǎng)期穩(wěn)定性可得到顯著改善?？傊?，存在對(duì)具有已證明的長(zhǎng)期貯存穩(wěn)定性的c1-inh制劑的需要，所述制劑，由于不太容易形成hmwc以及變性和降解，不會(huì)引起嚴(yán)重的藥物相關(guān)不良事件，在注射部位僅引起可接受的治療突發(fā)性不良事件，并具有低粘度。此外，急需以小體積高濃度容易地施用的制劑。另外，希望這樣的制劑可用于患有遺傳性血管性水腫的患者的預(yù)防性治療以及急性治療。概述本發(fā)明提供了包含高濃度的c1-inh并且具有增加的c1-inh穩(wěn)定性的小體積制劑，這使得所述制劑非常適合于延長(zhǎng)貯存。此外，所述制劑表現(xiàn)出減小的粘度，這簡(jiǎn)化了此類(lèi)化合物的皮下和靜脈內(nèi)應(yīng)用，特別地因?yàn)樗鲋苿┛捎苫颊咦陨硎┯?。本發(fā)明還涉及此類(lèi)制劑在與激肽形成相關(guān)的疾病中的急性和/或預(yù)防性治療中的應(yīng)用。具體地，本發(fā)明涉及穩(wěn)定的藥物制劑，其包含(a)濃度為約400iu/ml-2000iu/ml的c1-inh；和(b)具有20-120mosm/l的計(jì)算同滲濃度的檸檬酸鈉或具有60-120mosm/l的計(jì)算同滲濃度的磷酸二氫鈉/磷酸氫二鈉；和(c)除(b)中的物質(zhì)外的一種或多種生理上可接受的鹽，其具有150-600mosm/l的計(jì)算同滲濃度；或一種或多種氨基酸，其選自甘氨酸和/或一種或多種堿性l-氨基酸和/或一種或多種酸性l-氨基酸或其一種/多種鹽，其具有50-500mosm/l的計(jì)算同滲濃度；或除(b)中的物質(zhì)外的一種或多種生理上可接受的鹽，以及一種或多種氨基酸，其選自甘氨酸和/或一種或多種堿性l-氨基酸和/或一種或多種酸性l-氨基酸和/或其一種/多種鹽，該氨基酸具有80-740mosm/l的計(jì)算同滲濃度；其中制劑的總體的計(jì)算同滲濃度為170-800mosm/l。在各種實(shí)施方案中，上述制劑的生理上可接受的鹽是生理上可接受的鈉鹽，優(yōu)選選自氯化鈉、edta二鈉、乙酸鈉、琥珀酸鈉和硫酸鈉。在各種實(shí)施方案中，堿性l-氨基酸是精氨酸、賴(lài)氨酸和/或組氨酸或其一種/多種鹽，優(yōu)選鹽酸鹽。在各種實(shí)施方案中，酸性l-氨基酸是l-谷氨酸和/或l-天冬氨酸或其一種/多種鹽，優(yōu)選鈉鹽。在各種實(shí)施方案中，上文提及的藥物制劑的ph為約6.7至約7.5。在一些實(shí)施方案中，藥物制劑包含(a)約400-625iu/mlc1-inh；(b)約20-120mosm/l檸檬酸鈉；(c)約50-300mosm/l甘氨酸；和(d)約190-400mosm/l氯化鈉，其中所述制劑的總體計(jì)算同滲濃度為260-600mosm/l。在各種實(shí)施方案中，上述制劑中通過(guò)dsf測(cè)量的c1-inh的熔解溫度為約55℃或更高，優(yōu)選約55-60℃。在各種實(shí)施方案中，上述制劑還可包含(a)去垢劑，其選自ps80(聚山梨酯80)和ps20(聚山梨酯20)；和/或(b)防腐劑和/或抗氧化劑，其選自芐醇、甲酚、苯酚、甲硫氨酸和谷胱甘肽。在各種實(shí)施方案中，c1-inh是人c1-inh。在優(yōu)選實(shí)施方案中，人c1-inh來(lái)源于人血漿。在各種實(shí)施方案中，上文提及的制劑包含至少1,200iu、至少1,500iu或至少1,800iu/成品劑型的c1-inh的絕對(duì)量。在各種實(shí)施方案中，上述制劑(a)可通過(guò)用合適的液體重構(gòu)凍干粉末而獲得，或(b)作為液體制劑提供。在所有上述參考實(shí)施方案中，制劑可通過(guò)皮下施用或通過(guò)靜脈內(nèi)施用來(lái)進(jìn)行施用，由此任選地所述制劑可由患者自我施用。在各種實(shí)施方案中，制劑的運(yùn)動(dòng)粘度低于10mm2/s，低于8mm2/s，低于6mm2/s或低于5mm2/s。在各種實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的制劑包含少于10％的高分子量組分(hmwc)，少于8％的hmwc，少于5％的hmwc或少于3％的hmwc。本發(fā)明的另一方面涉及用于以下方面的藥物制劑：-在與激肽形成相關(guān)的病癥，特別是遺傳性血管性水腫(hae)，優(yōu)選haei型、haeii型或haeiii型、繼發(fā)性腦水腫、中樞神經(jīng)系統(tǒng)水腫、低血壓休克或在將血液與人造表面接觸期間或之后的水腫的急性和/或預(yù)防性治療中；-在與缺血-再灌注損傷(iri)相關(guān)的病癥的急性和/或預(yù)防性治療中，特別地其中iri是由手術(shù)干預(yù)，特別是血管手術(shù)、心臟手術(shù)、神經(jīng)手術(shù)、創(chuàng)傷手術(shù)、癌癥手術(shù)、矯形手術(shù)、移植、微創(chuàng)手術(shù)或插入到用于遞送藥理活性物質(zhì)的裝置或用于機(jī)械去除完全或部分阻礙物的裝置；-在視網(wǎng)膜病變的急性和/或預(yù)防性治療中；或-在防止患者中移植組織的排斥中。本發(fā)明的另一方面涉及試劑盒，其包含作為凍干粉末的本發(fā)明的藥物制劑和用于重構(gòu)的各自體積的合適液體。本發(fā)明的另一方面涉及試劑盒，其包含本發(fā)明的藥物制劑和至少一個(gè)注射器和/或一只針。另一方面是指預(yù)先填充本發(fā)明的液體藥物制劑的注射器。詳述定義根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語(yǔ)“c1酯酶抑制劑”或“c1抑制劑”(“c1-inh”)是指蛋白質(zhì)或其片段，所述蛋白質(zhì)或其片段用作絲氨酸蛋白酶抑制劑，并且抑制與補(bǔ)體系統(tǒng)相關(guān)的蛋白酶優(yōu)選蛋白酶c1r和c1s以及masp-1和masp-2、與激肽釋放酶-激肽系統(tǒng)相關(guān)的蛋白酶優(yōu)選血漿激肽釋放酶和因子xiia，以及與凝血系統(tǒng)相關(guān)的蛋白酶優(yōu)選因子xia和因子xiia。另外，c1-inh可用作減少選擇素介導(dǎo)的白細(xì)胞對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的粘附的抗炎分子。如本文所用的c1-inh可以是天然絲氨酸蛋白酶抑制劑或其活性片段，或其可包含重組肽、合成肽、肽模擬物或肽片段，其提供類(lèi)似功能性質(zhì)，諸如蛋白酶c1r和c1s，和/或masp-1和masp-2，和/或血漿激肽釋放酶，和/或因子xiia和/或因子xia的抑制。術(shù)語(yǔ)c1-inh還包括與c1-inh具有相同或類(lèi)似功能的所有天然存在的等位基因、剪接變體和同種型。關(guān)于c1-inh的結(jié)構(gòu)和功能的進(jìn)一步披露，參見(jiàn)us4,915,945、us5,939,389、us6,248,365、us7,053,176和wo2007/073186。c1-inh的一個(gè)“單位”(“u”)等于健康供體的1ml新鮮含檸檬酸鹽血漿中的c1-inh活性。c1-inh也可以以“國(guó)際單位”(“iu”)來(lái)確定。這些單位基于對(duì)于c1-inh濃縮物(08/256)的目前世界衛(wèi)生組織(who)標(biāo)準(zhǔn)，其在國(guó)際合作研究中使用正常的局部人血漿池校準(zhǔn)。一般來(lái)說(shuō)，u和iu是等價(jià)的。本文所用的術(shù)語(yǔ)“遺傳性血管性水腫”(“hae”)涉及由在循環(huán)中c1-inh的低含量和低抑制活性(haei型)引起的或因具有低功能活性的c1-inh的正?；蛏叩目乖降拇嬖?haeii型)而引起的血管性水腫。本文所用的術(shù)語(yǔ)“hae”還涵蓋具有正常c1-inh的hae(也稱(chēng)為haeiii型)，其最近在以下兩個(gè)子類(lèi)別中描述：(1)由于因子xii基因中的突變以及因此導(dǎo)致緩激肽的高產(chǎn)生的因子xii的增加活性而引起的hae，和(2)遺傳因素不明的hae。在患有遺傳性血管性水腫的患者中，水腫發(fā)病可以以各種時(shí)間間隔發(fā)生，包括每日、每周、每月或甚至每年一次。此外，還有其中不發(fā)生水腫的受影響患者。本文所用的術(shù)語(yǔ)“血管性水腫”(“水腫”)涉及組織的腫脹，例如皮膚或粘膜的腫脹。腫脹可發(fā)生在例如臉部、手或足或生殖器上。此外，腫脹可發(fā)生在胃腸道或呼吸道中。其它器官也可受到影響。腫脹通常持續(xù)一到三天。然而，緩解可在數(shù)小時(shí)后發(fā)生，或在數(shù)周后才發(fā)生。術(shù)語(yǔ)“缺血-再灌注損傷”(“iri”)是由缺血或缺氧后將血液返回至組織中(“再灌注”)引起的損傷。對(duì)組織的直接損傷是由于血液流動(dòng)的中斷引起的，主要?dú)w因于對(duì)活組織的氧合損失，如果不逆轉(zhuǎn)，最終導(dǎo)致梗塞。然而，如果損傷被逆轉(zhuǎn)，則缺血組織的再灌注可相反地引起進(jìn)一步的“間接”損害。長(zhǎng)時(shí)間缺血后，單獨(dú)缺氧導(dǎo)致的“直接”損傷是主要機(jī)制。對(duì)于較短持續(xù)時(shí)間的缺血，“間接”再灌注介導(dǎo)的損傷對(duì)造成的損害貢獻(xiàn)越來(lái)越大。本文所用的術(shù)語(yǔ)“視網(wǎng)膜病變”涉及眼睛的急性或持久性損傷。視網(wǎng)膜病變可由糖尿病(導(dǎo)致糖尿病性視網(wǎng)膜病變)、動(dòng)脈高血壓(導(dǎo)致高血壓性視網(wǎng)膜病變)、新生兒早產(chǎn)(導(dǎo)致早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變)、對(duì)電離輻射的暴露(輻射性視網(wǎng)膜病變)、直接陽(yáng)光暴露(日光性視網(wǎng)膜病變)、鐮刀形細(xì)胞病、視網(wǎng)膜血管疾病諸如視網(wǎng)膜靜脈或動(dòng)脈閉塞、創(chuàng)傷，尤其是針對(duì)頭部的，以及其它疾病或病況引起的。許多類(lèi)型的視網(wǎng)膜病變是增殖性的，最常見(jiàn)地由新生血管形成或血管的過(guò)度生長(zhǎng)導(dǎo)致。血管生成、新血管的芽生是特征前兆，其可導(dǎo)致失明或嚴(yán)重視力喪失，特別是如果黃斑變得受影響。在極少數(shù)情況下，視網(wǎng)膜病變是由遺傳性疾病引起的。本文所用的術(shù)語(yǔ)“急性治療”或“治療”涉及顯示急性癥狀的患者的治療。急性治療可從癥狀出現(xiàn)直至癥狀完全緩解進(jìn)行。急性治療可以進(jìn)行一次或數(shù)次，直到達(dá)到期望的治療效果。本文所用的術(shù)語(yǔ)“預(yù)防性治療”或“預(yù)防”或“防止”涉及患者的治療以防止癥狀的出現(xiàn)。預(yù)防性治療可以以數(shù)日、數(shù)周或數(shù)月的規(guī)律間隔進(jìn)行。預(yù)防性治療也可以偶爾進(jìn)行。術(shù)語(yǔ)“約”表示在特定值的可接受的誤差范圍內(nèi)，其部分地取決于測(cè)量系統(tǒng)的限制。本文所用的術(shù)語(yǔ)“hmwc”或“高分子量組分”是指任何自我締合的，即多聚化或聚集的蛋白質(zhì)種類(lèi)，特別是c1-inh的蛋白質(zhì)種類(lèi)，其中單體被定義為最小的功能亞單位?；谝韵挛鍌€(gè)特征對(duì)hmwc進(jìn)一步分類(lèi)：大小、可逆性/解離、構(gòu)象、化學(xué)修飾和形態(tài)學(xué)(narhi等，j.pharm.sci.2012,101(2):493-498)。半個(gè)多世紀(jì)以來(lái)已認(rèn)識(shí)到hmwc特別是多聚體和聚集體引發(fā)針對(duì)治療性蛋白質(zhì)產(chǎn)品的免疫應(yīng)答的潛力(gamble,int.arch.allergyappl.immunol.1966,30(5):446-455)。蛋白質(zhì)hmwc可以引發(fā)或增強(qiáng)免疫應(yīng)答的基本機(jī)制包括，除其它以外，以下方面：b細(xì)胞受體的廣泛交聯(lián)，引起高效的b細(xì)胞活化(dintzis等人，j.immunol.1989,143(4):1239-1244；bachmann等人，science1993,262(5138):1448-1451)；增強(qiáng)抗原攝取、加工和呈現(xiàn)；并觸發(fā)免疫刺激危險(xiǎn)信號(hào)(seong和matzinger，nat.rev.immunol.2004,4(6):469-478)。此類(lèi)機(jī)制可增強(qiáng)t細(xì)胞幫助的募集反應(yīng)，其為產(chǎn)生高親和力、同種型轉(zhuǎn)換的igg抗體所需，由此抗體應(yīng)答最通常地與產(chǎn)物有效性的中和有關(guān)(bachmann和zinkernagel，annu.rev.immunol.1997,15:235-70)。術(shù)語(yǔ)藥物的“成品劑型(fdf)”是一種藥物的劑型，其已經(jīng)歷生產(chǎn)的所有階段，包括在其最終容器中包裝和貼標(biāo)。本發(fā)明的術(shù)語(yǔ)“生理上可接受的鹽”是指制劑中的鹽，其主要用于治療人的醫(yī)學(xué)病況，特別是治療或預(yù)防與激肽形成有關(guān)的疾病。另外，生理上可接受的鹽是指可溶的離子物質(zhì)，即在液體中，優(yōu)選含水狀態(tài)下，生理上可接受的鹽將以其溶解的陽(yáng)離子和陰離子的形式存在，并且在對(duì)人體施用后不會(huì)引起嚴(yán)重的不良副事件。在這個(gè)意義上，制劑或其成品劑型與其它賦形劑一起適于生理學(xué)實(shí)踐。術(shù)語(yǔ)“滲透濃度”或“同滲濃度”是溶質(zhì)濃度的量度，定義為每升(l)溶液的溶質(zhì)的滲透壓摩爾(osm)數(shù)(osmol/l或osm/l)。同滲濃度測(cè)量每單位體積溶液中溶質(zhì)顆粒的滲透壓摩爾數(shù)，而摩爾濃度測(cè)量每單位體積溶液中溶質(zhì)的摩爾數(shù)。同滲濃度可以例如通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法測(cè)量冰點(diǎn)降低來(lái)測(cè)量。例如，在歐洲藥典2.2.35和美國(guó)藥典第785章中描述了通過(guò)凝固點(diǎn)降低測(cè)量溶液的同滲濃度的方法。例如，對(duì)于水，向1千克水中添加的1osmol的溶質(zhì)使冰點(diǎn)降低1.86℃。滲透壓的理論計(jì)算是本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的。簡(jiǎn)言之，計(jì)算溶液的每種組分的產(chǎn)品滲透系數(shù)f、其中分子在水中離解的顆粒數(shù)n以及該組分的摩爾濃度，并將所有組分的結(jié)果相加。因此，可如下計(jì)算溶液的同滲濃度(以osm/l表示)：osm/l＝∑finici指數(shù)表示特定組分的身份，諸如鹽離子；f是該特定組分的滲透系數(shù)；n是其中該特定組分的分子在水中離解的顆粒數(shù)；c是該特定組分的摩爾濃度。摩爾濃度具有輕微的溫度依賴(lài)性；為了本目的，其是指在大氣壓下，在2-35℃，優(yōu)選10-30℃，更優(yōu)選25℃下的濃度。在要求保護(hù)的注射用組合物通常使用的濃度下，假定每種特定組分的滲透系數(shù)為1，給出了用于計(jì)算溶液的同滲濃度的足夠近似值。例如，氯化鈉是在水中離解成兩個(gè)粒子的特定組分；氯化鈉的摩爾滲透壓是其摩爾濃度的兩倍。磷酸二氫鈉/磷酸氫二鈉在適用的ph范圍內(nèi)大致為兩種組分的等摩爾混合物，使得其在水中分別離解成兩個(gè)或三個(gè)粒子；磷酸鹽的同滲濃度是其摩爾濃度的2.5倍。如本文中所用，要求保護(hù)的制劑中的c1-inh的摩爾濃度極低，并且可以在計(jì)算同滲濃度時(shí)被忽略。眾所周知，在測(cè)量的同滲濃度與計(jì)算同滲濃度之間可能存在偏差。特別是在其中存在高度帶電荷的蛋白質(zhì)諸如c1-inh的溶液中，由于donan電位的緣故，該蛋白質(zhì)可能對(duì)所測(cè)量的同滲濃度具有很強(qiáng)的影響。因此，本發(fā)明的術(shù)語(yǔ)“同滲濃度”或“計(jì)算同滲濃度”是指計(jì)算的同滲濃度。術(shù)語(yǔ)“dsf”是指“差示掃描熒光測(cè)定法”，其是熱移位測(cè)定法或熱變性測(cè)定法，所述方法測(cè)量靶蛋白的穩(wěn)定性和在配體與蛋白質(zhì)結(jié)合后蛋白質(zhì)的熔解溫度的隨后增加。低分子量配體的結(jié)合可增加蛋白質(zhì)的熱穩(wěn)定性。通過(guò)在熒光染料如syproorange存在的情況下進(jìn)行熱變性曲線來(lái)測(cè)量該穩(wěn)定性變化。當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)展開(kāi)時(shí)，暴露的疏水表面結(jié)合染料，導(dǎo)致熒光增加。通過(guò)逐漸升高溫度來(lái)展開(kāi)蛋白質(zhì)并測(cè)量每個(gè)點(diǎn)處的熒光，獲得穩(wěn)定性曲線及其中點(diǎn)值(熔解溫度mt)。換句話說(shuō)，在熒光染料存在的情況下，dsf監(jiān)測(cè)蛋白質(zhì)的熱展開(kāi)，并且通過(guò)該染料的熒光的增加測(cè)量蛋白質(zhì)展開(kāi)時(shí)的溫度，所述染料對(duì)暴露為蛋白質(zhì)展開(kāi)部分的蛋白質(zhì)的疏水部分具有親和力。根據(jù)蛋白質(zhì)穩(wěn)定性的提高，熔解溫度的差異可用于評(píng)定緩沖條件、添加劑的等級(jí)。熔解溫度(mt)由展開(kāi)的吉布斯(gibb)自由能(δgu)定義。溫度升高導(dǎo)致折疊的蛋白質(zhì)的部分減少和δgu減少。δgu在折疊和未折疊蛋白質(zhì)比例相等的狀態(tài)下等于零。相應(yīng)的溫度是蛋白質(zhì)的熔解溫度。因此，熔解溫度是評(píng)估蛋白質(zhì)的熱穩(wěn)定性的量度。與現(xiàn)有技術(shù)的c1-inh制劑相比，本發(fā)明的制劑提供了熔解溫度的升高，如可在表2-3中看到的。此類(lèi)制劑的較高的穩(wěn)定性使得它們更適合于更長(zhǎng)的c1-inh貯存。術(shù)語(yǔ)“wfi”是指“注射用水”。該水意在用于制備用于胃腸外施用的藥物，其溶劑是水?？蛇x地，其是指用于溶解或稀釋用于腸胃外施用的物質(zhì)或制備物的水。其通過(guò)蒸餾或純化方法純化，所述純化方法在去除化學(xué)品和微生物中等同于或優(yōu)于蒸餾。運(yùn)動(dòng)粘度(m2/s)是動(dòng)力學(xué)粘度[pa*s＝kg/m·s]與流體密度[kg/m3]之比。本發(fā)明的術(shù)語(yǔ)“檸檬酸鈉”或“檸檬酸鈉鹽”或“檸檬酸三鈉鹽”是指檸檬酸三鈉，即na3c(oh)(coo-)(ch2coo-)2。c1酯酶抑制劑在本發(fā)明的某些實(shí)施方案中，c1-inh是血漿來(lái)源的或重組的c1-inh。在另外的實(shí)施方案中，所述抑制劑與天然存在的人蛋白質(zhì)或其變體相同。在其它實(shí)施方案中，所述抑制劑是人c1-inh。在其它實(shí)施方案中，所述抑制劑是人c1-inh蛋白的重組類(lèi)似物。根據(jù)本發(fā)明，可修飾c1-inh以提高其生物利用度和/或半衰期，以提高其功效和/或降低其潛在的副作用?？稍谥亟M合成期間或以其它方式引入修飾。此類(lèi)修飾的實(shí)例是c1-inh的糖基化、聚乙二醇化和羥乙基淀粉化或所述c1-inh的白蛋白融合物。在一些實(shí)施方案中，c1-inh包含c1-inh與白蛋白特別是人白蛋白之間的融合構(gòu)建體。在一些實(shí)施方案中，白蛋白是重組蛋白質(zhì)。在某些實(shí)施方案中，c1-inh與白蛋白蛋白質(zhì)直接連接或通過(guò)接頭多肽連接。關(guān)于蛋白質(zhì)的糖基化和白蛋白融合的進(jìn)一步公開(kāi)，參見(jiàn)wo01/79271。c1-inh的制備為了本發(fā)明的目的，可根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法制備c1-inh。例如，可通過(guò)從幾個(gè)供體收集血漿來(lái)制備血漿來(lái)源的c1-inh。血漿的供體應(yīng)該是如本領(lǐng)域所定義的健康的。優(yōu)選地，將數(shù)個(gè)(1000個(gè)或更多)健康供體的血漿混合并任選進(jìn)行進(jìn)一步處理。在us4,915,945中公開(kāi)了用于制備用于治療目的的c1-inh的示例性方法?？蛇x地，在其它實(shí)施方案中，使用本領(lǐng)域已知的技術(shù)可從天然組織來(lái)源收集和濃縮c1-inh。重組c1-inh可通過(guò)已知方法來(lái)制備。在某些實(shí)施方案中，c1-inh來(lái)源于人血漿。在另外的實(shí)施方案中，通過(guò)重組表達(dá)制備c1-inh。包含c1-inh的商購(gòu)可得產(chǎn)品是例如血漿來(lái)源的(cslbehring)。根據(jù)a.feussner等(transfusion2014,54:2566-73)制備并將其用于治療遺傳性血管性水腫和先天性缺陷。包含c1-inh的替代性商購(gòu)可得的產(chǎn)品是血漿來(lái)源的(sanquin)、(shire)和重組(pharming)。c1-inh制劑本發(fā)明涉及包含(a)c1-inh的穩(wěn)定的藥物制劑。在具有低粘度的小體積制劑中提供本發(fā)明的這些高度濃縮的制劑。所述制劑耐受性良好，適合于靜脈內(nèi)，特別是皮下施用。所述制劑中的c1-inh的濃度為約400iu/ml至2,000iu/ml，優(yōu)選約400iu/ml至1,200iu/ml，更優(yōu)選約400iu/ml至1000iu/ml，更優(yōu)選約400iu/ml至800iu/ml，更優(yōu)選約400iu/ml至650iu/ml，最優(yōu)選約500iu/ml或其間的任何范圍。所述制劑還包含：(b)具有20-120mosm/l的計(jì)算同滲濃度的檸檬酸鈉或具有60-120mosm/l的計(jì)算同滲濃度的磷酸二氫鈉/磷酸氫二鈉；和(c)除(b)中的物質(zhì)外的一種或多種生理上可接受的鹽，其具有150-600mosm/l的計(jì)算同滲濃度；或一種或多種氨基酸，其選自甘氨酸和/或一種或多種堿性l-氨基酸和/或一種或多種酸性l-氨基酸或其鹽，其具有50-500mosm/l的計(jì)算同滲濃度；或除(b)中的物質(zhì)外的一種或多種生理上可接受的鹽；以及一種或多種氨基酸，其選自甘氨酸和/或一種或多種堿性和/或酸性l-氨基酸或其鹽，其具有80-740mosm/l的計(jì)算同滲濃度，其中制劑的總體計(jì)算同滲濃度為170-800mosm/l。在某些實(shí)施方案中，檸檬酸鈉的計(jì)算同滲濃度為80至120mosm/l，更優(yōu)選大于80mosm/l至120mosm/l?？蛇x地，在其它某些實(shí)施方案中，檸檬酸鈉的計(jì)算同滲濃度為30至80mosm/l，更優(yōu)選40至70mosm/l。在其它某些實(shí)施方案中，磷酸二氫鈉/磷酸氫二鈉的計(jì)算同滲濃度為60-90mosm/l。另外，在某些實(shí)施方案中，除(b)中的物質(zhì)外的一種或多種生理上可接受的鹽的計(jì)算同滲濃度為170-500mosm/l，更優(yōu)選為230-470mosm/l。在其它某些實(shí)施方案中，一種或多種氨基酸的計(jì)算同滲濃度為170-500mosm/l，更優(yōu)選為230-470mosm/l。可選地，除(b)中的物質(zhì)外的一種或多種生理上可接受的鹽和一種或多種氨基酸一起的計(jì)算同滲濃度為150-600mosm/l，甚至更優(yōu)選為230-470mosm/l。在其它實(shí)施方案中，制劑的總體計(jì)算同滲濃度為230-700mosm/l，更優(yōu)選為250-600mosm/l。甚至更優(yōu)選地，同滲濃度為270-330mosm/l，最優(yōu)選為280-330mosm/l或其間的任何范圍。在其它甚至更優(yōu)選的實(shí)施方案中，同滲濃度為400-600mosm/l，最優(yōu)選為450-550mosm/l或其間的任何范圍。在各種實(shí)施方案中，生理上可接受的鹽是堿金屬和/或堿土金屬鹽。在某些實(shí)施方案中，生理上可接受的鹽是鈉、鉀、鎂或鈣鹽，優(yōu)選鈉鹽。在各種實(shí)施方案中，生理上可接受的鹽的堿可以選自但不限于碳酸鹽、硫酸鹽、鹵化物諸如氯化物，以及含羧基的堿如edta、乙酸鹽、琥珀酸鹽、蘋(píng)果酸鹽、馬來(lái)酸鹽和酒石酸鹽。在某些實(shí)施方案中，生理上可接受的鹽的堿是氯化物、硫酸鹽、乙酸鹽或琥珀酸鹽。在某些實(shí)施方案中，生理上可接受的鹽選自nacl、na2so4、醋酸鈉和琥珀酸鈉。在某些實(shí)施方案中，一種或多種堿性l-氨基酸選自l-精氨酸、l-組氨酸、l-賴(lài)氨酸或其鹽，優(yōu)選鹽酸鹽。在一些實(shí)施方案中，一種或多種酸性l-氨基酸選自l-谷氨酸和l-天冬氨酸或其鹽，優(yōu)選其鈉鹽。在某些實(shí)施方案中，藥物制劑僅包含一種類(lèi)型的氨基酸。在某些實(shí)施方案中，藥物制劑不包含組織通透性增強(qiáng)劑，諸如，例如，透明質(zhì)酸酶。在各種實(shí)施方案中，藥物制劑的ph為約6.7至7.5，約6.8至7.4，約6.9至7.3，約7.0至7.2或其間的任何范圍。在最優(yōu)選實(shí)施方案中，制劑的ph為約7.0、約7.1或約7.2。在一些實(shí)施方案中，藥物制劑包含(a)約400-625iu/mlc1-inh；(b)約20-120mosm/l檸檬酸鈉；(c)約50-300mosm/l甘氨酸；和(d)約190-400mosm/l氯化鈉，其中所述制劑的總體計(jì)算同滲濃度為約260-800mosm/l。在優(yōu)選實(shí)施方案中，藥物制劑包含(a)約400-625iu/mlc1-inh；(b)約40-60mosm/l檸檬酸鈉；(c)約100-200mosm/l甘氨酸；和(d)約240-350mosm/l氯化鈉，其中制劑的總體計(jì)算同滲濃度為約380-600mosm/l。在更優(yōu)選實(shí)施方案中，藥物制劑包含(a)約450-550iu/mlc1-inh；(b)約40-60mosm/l檸檬酸鈉；(c)約100-200mosm/l甘氨酸；和(d)約240-350mosm/l氯化鈉，其中所述制劑的總體計(jì)算同滲濃度為380-600mosm/l。在甚至更優(yōu)選的實(shí)施方案中，藥物制劑包含：(a)約490-510iu/mlc1-inh；(b)約40-60mosm/l檸檬酸鈉；(c)約100-200mosm/l甘氨酸；和(d)約240-350mosm/l氯化鈉，其中所述制劑的總體摩爾計(jì)算滲透壓濃度為380-600mosm/l。在一個(gè)實(shí)施方案中，除了c1-inh以外，上述制劑在6.9-7.1的ph下還含有約13mm的檸檬酸鈉鹽、約133mm的甘氨酸和約154mm的nacl。在某些實(shí)施方案中，藥物制劑包含(a)約400-625iu/mlc1-inh；(b)約40-120mosm/l檸檬酸鈉；(c)約200-600mosm/l硫酸鈉，其中所述制劑的總體計(jì)算同滲濃度為約250-720mosm/l。在優(yōu)選實(shí)施方案中，藥物制劑包含(a)約400-625iu/mlc1-inh；(b)約40-80mosm/l檸檬酸鈉；(c)約200-500mosm/l硫酸鈉，其中制劑的總體計(jì)算同滲濃度為約280-580mosm/l。在一些實(shí)施方案中，藥物制劑包含(a)約400-625iu/mlc1-inh；(b)約40-80mosm/l檸檬酸鈉；(c)約200-310mosm/l硫酸鈉，其中所述制劑的總的計(jì)算摩爾滲透壓為約280-350mosm/l。在其它實(shí)施方案中，藥物制劑包含(a)約400-625iu/mlc1-inh；(b)約40-80mosm/l檸檬酸鈉；(c)約400-500mosm/l硫酸鈉，其中制劑的總體計(jì)算同滲濃度為約400-550mosm/l。在具體實(shí)施方案中，藥物制劑在ph7.0、7.1或7.2下包含具有如表1中公開(kāi)的濃度的賦形劑。在各種實(shí)施方案中，所公開(kāi)的制劑中的通過(guò)dsf測(cè)量的c1-inh的熔解溫度為約55℃或更高，約56℃或更高，或約57℃或更高。在某些實(shí)施方案中，通過(guò)dsf測(cè)量的熔解溫度為55-60℃，約56-60℃或約57-60℃。通過(guò)dsf測(cè)量的熔解溫度具有約+/-1℃的測(cè)量余量。在另外的實(shí)施方案中，所提供的制劑包含一種或多種去垢劑和/或一種或多種防腐劑和/或一種或多種抗氧化劑。在某些實(shí)施方案中，藥物制劑可包含ps80(聚山梨酯80)和/或ps20(聚山梨酯20)。在藥物制劑中，ps80和/或ps20可以以約0.5-2mg/ml的濃度存在。在某些實(shí)施方案中，防腐劑和/或抗氧化劑選自芐醇、甲酚、苯酚、甲硫氨酸和谷胱甘肽。在藥物制劑中，防腐劑和/或抗氧化劑可以以約1-5mm的濃度存在。所提供的制劑可包含本領(lǐng)域熟知的另外的藥物載體和賦形劑(參見(jiàn)例如“pharmaceuticalformulationdevelopmentofpeptidesandproteins”，frokjaer等，taylor&francis2000或“handbookofpharmaceuticalexcipients”，第3版，kibbe等，pharmaceuticalpress2000)。在一些實(shí)施方案中，c1-inh是人c1-inh。在某些實(shí)施方案中，人c1-inh來(lái)源于人血漿，或人c1-inh是重組表達(dá)的。優(yōu)選地，c1-inh來(lái)源于人血漿。在一些實(shí)施方案中，制劑包含為約1,000iu/fdf、1,200iu/fdf、約1,500iu/fdf、約1,800iu/fdf、約2,100iu/fdf、約2,400iu/fdf、約2,700iu/fdf或約3,000iu/fdf的絕對(duì)量或之間的任何絕對(duì)量的c1-inh。在優(yōu)選實(shí)施方案中，制劑包含為至少1,200iu/fdf、1,500iu/fdf或至少1,800iu/fdf的絕對(duì)量的c1-inh。在各種實(shí)施方案中，以約0.1-10ml/fdf、約1-5ml/fdf或約3ml/fdf或之間的任何體積的體積提供液體藥物制劑。在優(yōu)選實(shí)施方案中，以每fdf約3ml、每fdf約4ml或每fdf約6ml的體積將制劑以水溶液形式提供。在各種實(shí)施方案中，如制劑制備后立即測(cè)定的制劑的運(yùn)動(dòng)粘度低于10mm2/s，優(yōu)選低于8mm2/s，更優(yōu)選低于6mm2/s，或甚至更優(yōu)選低于5mm2/s。制備后立即意指在制備后一天內(nèi)。運(yùn)動(dòng)粘度的測(cè)定在+20℃下進(jìn)行。優(yōu)選地，例如由schott-gmbh,hofheim,germany使用根據(jù)ubbelohde的毛細(xì)管粘度計(jì)測(cè)量3個(gè)樣品的運(yùn)動(dòng)粘度。為了獲得動(dòng)力學(xué)粘度，運(yùn)動(dòng)粘度必須與可以假定為約1g/cm3的相應(yīng)溶液的質(zhì)量密度相乘(動(dòng)力學(xué)粘度(cp)＝運(yùn)動(dòng)粘度(cst)*密度(kg/m3))。在各種實(shí)施方案中，本發(fā)明的藥物制劑包含少于10％的hmwc，優(yōu)選少于8％的hmwc，更優(yōu)選少于5％的hmwc，甚至更優(yōu)選少于3％的hmwc，如通過(guò)sec-hplc立即測(cè)定的。制備后立即地意指在制備后一天內(nèi)。在某些各種實(shí)施方案中，如上所述測(cè)定的制劑的運(yùn)動(dòng)粘度低于10mm2/s，優(yōu)選低于8mm2/s，更優(yōu)選低于6mm2/s，甚至更優(yōu)選低于5mm2/s，并且制劑包含少于10％，優(yōu)選少于8％，更優(yōu)選少于5％，最優(yōu)選少于3％的hmwc。在一些實(shí)施方案中，提供藥物制劑，由此所述制劑(a)可通過(guò)用合適的液體重構(gòu)凍干粉末而獲得，或(b)作為液體制劑提供。換句話說(shuō)，在各種實(shí)施方案中，藥物制劑的組分存在于適于注射的溶液中，無(wú)需任何進(jìn)一步處理，即制劑以穩(wěn)定的液體制劑提供?？蛇x地，組分以穩(wěn)定的凍干粉末提供，并且在于相應(yīng)體積的合適液體中重構(gòu)構(gòu)凍干粉末后達(dá)到指定的濃度。適用于重構(gòu)的液體包括注射用水(wfi)。優(yōu)選地，適于重構(gòu)的液體是wfi。如本文所用的術(shù)語(yǔ)“穩(wěn)定的制劑”、“穩(wěn)定的凍干粉末”、“穩(wěn)定的凍干制劑”或“穩(wěn)定的液體制劑”是指其中在至少2-8℃，優(yōu)選約25℃下，在一定時(shí)期的貯存后觀察到c1-inh活性的沒(méi)增加顯著降低的藥物制劑。術(shù)語(yǔ)“c1-inh活性沒(méi)顯著降低”意指為原始c1-inh活性的至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％的c1-inh活性。術(shù)語(yǔ)“c1-inh活性”是指c1-inh蛋白在血漿中的抑制活性，以“iu/ml”表示，并且可以例如通過(guò)但不限于顯色測(cè)定來(lái)測(cè)量。在替代實(shí)施方案中，如本文所用的術(shù)語(yǔ)“穩(wěn)定的制劑”、“穩(wěn)定的凍干粉末”、“穩(wěn)定的凍干制劑”或“穩(wěn)定的液體制劑”是指其中在至少2-8℃，優(yōu)選約25℃下，在一定時(shí)期的貯存后觀察到hmwc形成沒(méi)顯著增加的制劑。術(shù)語(yǔ)“hmwc形成沒(méi)顯著增加”意指在某一時(shí)間點(diǎn)，例如在1個(gè)、2個(gè)、3個(gè)、4個(gè)、5個(gè)、6個(gè)、7個(gè)、8個(gè)、9個(gè)、10個(gè)、11個(gè)、12個(gè)、15個(gè)、18個(gè)、21個(gè)或24個(gè)月后，至多20％、15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％的hmwc，即hmwc的百分?jǐn)?shù)被測(cè)定為在該某一時(shí)間點(diǎn)上的制劑中的總蛋白質(zhì)內(nèi)容物中的hmwc的百分?jǐn)?shù)，該值至多為20％、15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％?？梢岳缤ㄟ^(guò)但不限于sechplc(參見(jiàn)例如實(shí)施例3)測(cè)量總蛋白質(zhì)內(nèi)容物中的hmwc水平。在替代實(shí)施方案中，本文所用的術(shù)語(yǔ)“穩(wěn)定的制劑”、“穩(wěn)定的凍干粉末”、“穩(wěn)定的凍干制劑”或“穩(wěn)定的液體制劑”是指其中在至少2-8℃，優(yōu)選約25℃下，在一定時(shí)期的貯存后觀察到片段化的未顯著增加的制劑。術(shù)語(yǔ)“片段化的未顯著增加”是指在某一時(shí)間點(diǎn)，例如，在1、2、3、4、5、6、7、8、9、1011、12、15、18、21或24個(gè)月后，至多20％、15％、14％、13％、12％、11％10％、9％、8％、7％、6％、5％的片段，即片段的百分?jǐn)?shù)被測(cè)定為在該某一時(shí)間點(diǎn)上的總蛋白質(zhì)內(nèi)容物的片段的百分?jǐn)?shù)，并且該值為至多20％、15％、14％、13％、12％、11％10％、9％、8％、7％、6％、5％?？梢岳缤ㄟ^(guò)但不限于sechplc(參見(jiàn)例如實(shí)施例3)測(cè)量總蛋白質(zhì)內(nèi)容物的片段水平。在替代實(shí)施方案中，本文所用的術(shù)語(yǔ)“穩(wěn)定的制劑”、“穩(wěn)定的凍干粉末”、“穩(wěn)定的凍干制劑”或“穩(wěn)定的液體制劑”是指其中通過(guò)dsf測(cè)量的熔解溫度為約55℃或更高、56℃或更高、約57℃或更高。在另外的實(shí)施方案中，通過(guò)dsf測(cè)量的穩(wěn)定的制劑的熔解溫度為約55-60℃、約56-60℃或約57-60℃。通常，由dsf測(cè)量的熔解溫度具有約+/-1℃的測(cè)量差數(shù)。在一系列實(shí)施方案中，本文在凍干時(shí)提供的制劑在25℃的溫度下，穩(wěn)定一定的時(shí)期，即至少1個(gè)、2個(gè)、3個(gè)、4個(gè)、5個(gè)、6個(gè)、7個(gè)、8個(gè)、9個(gè)、10個(gè)、11個(gè)、12個(gè)、13個(gè)、14個(gè)、15個(gè)、16個(gè)、17個(gè)、18個(gè)、19個(gè)、20個(gè)、21個(gè)、22個(gè)、23個(gè)、24個(gè)、25個(gè)、26個(gè)、27個(gè)、28個(gè)、29個(gè)、30個(gè)、31個(gè)、32個(gè)、33個(gè)、34個(gè)、35個(gè)、36個(gè)、37個(gè)、38個(gè)、39個(gè)、40個(gè)、41個(gè)、42個(gè)、43個(gè)、44個(gè)、45個(gè)、46個(gè)、47個(gè)、48個(gè)或更多個(gè)月。在優(yōu)選實(shí)施方案中，凍干制劑將穩(wěn)定至少6個(gè)月(25℃)。在更優(yōu)選實(shí)施方案中，凍干制劑將穩(wěn)定至少12個(gè)月(25℃)。在另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，凍干制劑將穩(wěn)定至少24個(gè)月(25℃)。在另一系列實(shí)施方案中，本文提供的液體制劑在2-8℃的溫度下穩(wěn)定一定的時(shí)期，即穩(wěn)定至少1個(gè)、2個(gè)、3個(gè)、4個(gè)、5個(gè)、6個(gè)、7個(gè)、8個(gè)、9個(gè)、10個(gè)、11個(gè)、12個(gè)、13個(gè)、14個(gè)、15個(gè)、16個(gè)、17個(gè)、18個(gè)、19個(gè)、20個(gè)、21個(gè)、22個(gè)、23個(gè)、24個(gè)、25個(gè)、26個(gè)、27個(gè)、28個(gè)、29個(gè)、30個(gè)、31個(gè)、32個(gè)、33個(gè)、34個(gè)、35個(gè)、36個(gè)、37個(gè)、38個(gè)、39個(gè)、40個(gè)、41個(gè)、42個(gè)、43個(gè)、44個(gè)、45個(gè)、46個(gè)、47個(gè)、48個(gè)或更多個(gè)月。在優(yōu)選實(shí)施方案中，液體制劑將穩(wěn)定至少6個(gè)月(2-8℃)。在更優(yōu)選實(shí)施方案中，液體制劑將穩(wěn)定至少12個(gè)月(2-8℃)。在另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，液體制劑將穩(wěn)定至少24個(gè)月(2-8℃)。在另一系列實(shí)施方案中，本文提供的液體制劑在25℃的溫度下穩(wěn)定一定的時(shí)期，即穩(wěn)定至少1個(gè)、2個(gè)、3個(gè)、4個(gè)、5個(gè)、6個(gè)、7個(gè)、8個(gè)、9個(gè)、10個(gè)、11個(gè)、12個(gè)、13個(gè)、14個(gè)、15個(gè)、16個(gè)、17個(gè)、18個(gè)、19個(gè)、20個(gè)、21個(gè)、22個(gè)、23個(gè)、24個(gè)、25個(gè)、26個(gè)、27個(gè)、28個(gè)、29個(gè)、30個(gè)、31個(gè)、32個(gè)、33個(gè)、34個(gè)、35個(gè)、36個(gè)、37個(gè)、38個(gè)、39個(gè)、40個(gè)、41個(gè)、42個(gè)、43個(gè)、44個(gè)、45個(gè)、46個(gè)、47個(gè)、48個(gè)或更多個(gè)月。在優(yōu)選實(shí)施方案中，液體制劑將穩(wěn)定至少6個(gè)月(25℃)。在更優(yōu)選實(shí)施方案中，液體制劑將穩(wěn)定至少12個(gè)月(25℃)。在某些實(shí)施方案中，所提供的液體制劑在2-8℃下貯存1個(gè)月后保持至少70％，優(yōu)選至少80％，更優(yōu)選至少90％，最優(yōu)選至少95％的c1-inh活性。在某些實(shí)施方案中，所提供的液體制劑在2-8℃下貯存6個(gè)月后保持至少70％，優(yōu)選至少80％，更優(yōu)選至少90％，最優(yōu)選至少95％的c1-inh活性。在某些實(shí)施方案中，所提供的液體制劑在2-8℃下貯存12個(gè)月后保持至少70％，優(yōu)選至少80％，更優(yōu)選至少90％，最優(yōu)選至少95％的c1-inh活性。在某些實(shí)施方案中，所提供的液體制劑在25℃下貯存1個(gè)月后保持至少70％，優(yōu)選至少80％，更優(yōu)選至少90％，最優(yōu)選至少95％的c1-inh活性。在某些實(shí)施方案中，所提供的液體制劑在25℃下貯存6個(gè)月后保持至少70％，優(yōu)選至少80％，更優(yōu)選至少90％，最優(yōu)選至少95％的c1-inh活性。在某些實(shí)施方案中，所提供的液體制劑在25℃下貯存12個(gè)月后保持至少70％，優(yōu)選至少80％，更優(yōu)選至少90％，最優(yōu)選至少95％的c1-inh活性。在某些實(shí)施方案中，所提供的液體制劑在35℃下貯存1個(gè)月后保持至少30％，優(yōu)選至少40％，更優(yōu)選至少50％，最優(yōu)選至少60％的c1-inh活性。在某些實(shí)施方案中，所提供的液體制劑在35℃下貯存6個(gè)月后保持至少30％，優(yōu)選至少40％，更優(yōu)選至少50％，最優(yōu)選至少60％的c1-inh活性。在某些實(shí)施方案中，所提供的液體制劑在35℃下貯存12個(gè)月后保持至少30％，優(yōu)選至少40％，更優(yōu)選至少50％，最優(yōu)選至少60％的c1-inh活性。在某些實(shí)施方案中，所提供的凍干制劑在25℃貯存6個(gè)月后保留至少70％，優(yōu)選至少80％，更優(yōu)選至少90％，最優(yōu)選至少95％的c1-inh活性。在某些實(shí)施方案中，所提供的凍干制劑在25℃保存12個(gè)月后保持至少70％，優(yōu)選至少80％，更優(yōu)選至少90％，最優(yōu)選至少95％的c1-inh活性。在某些實(shí)施方案中，所提供的凍干制劑在25℃下貯存24個(gè)月后保持至少70％，優(yōu)選至少80％，更優(yōu)選至少90％，最優(yōu)選至少95％的c1-inh活性。在某些實(shí)施方案中，所提供的凍干制劑在25℃下貯存48個(gè)月后保持至少70％，優(yōu)選至少80％，更優(yōu)選至少90％，最優(yōu)選至少95％的c1-inh活性。在某些實(shí)施方案中，所提供的凍干制劑在35℃下貯存6個(gè)月后保持至少30％，優(yōu)選至少40％，更優(yōu)選至少50％，最優(yōu)選至少60％的c1-inh活性。在某些實(shí)施方案中，所提供的凍干制劑在35℃下貯存12個(gè)月后保持至少30％，優(yōu)選至少40％，更優(yōu)選至少50％，最優(yōu)選至少60％的c1-inh活性。在某些實(shí)施方案中，所提供的凍干制劑在35℃下貯存24個(gè)月后保持至少30％，優(yōu)選至少40％，更優(yōu)選至少50％，最優(yōu)選至少60％的c1-inh活性。因此，所提供的藥物制劑可用作備用藥物，即患有例如遺傳性血管性水腫的患者可以始終隨身保持這樣的制劑(不需要冷卻)，以便在水腫發(fā)病發(fā)生時(shí)立即進(jìn)行治療。此外，與僅具有低濃度的緩沖賦形劑的濃縮c1-inh制劑相比，所提供的藥物制劑顯示長(zhǎng)期穩(wěn)定性。所提供的藥物制劑適合于皮下以及靜脈內(nèi)施用。通常，對(duì)于患有遺傳性血管性水腫的患者的預(yù)防性治療，皮下施用是優(yōu)選的，并且對(duì)于患有遺傳性血管性水腫的患者的急性治療，靜脈內(nèi)施用是優(yōu)選的。所提供的藥物制劑的靜脈內(nèi)和皮下施用均不會(huì)引起嚴(yán)重的藥物相關(guān)不良副作用事件，而只引起輕微的治療突發(fā)性不良作用。因此，所提供的制劑可用于兩種施用。在另外的實(shí)施方案中，本文所述的藥物制劑適合于動(dòng)脈內(nèi)和/或肌內(nèi)施用。此外，患者可自我施用所提供的藥物制劑?；颊呖墒褂盟峁┑闹苿┻M(jìn)行預(yù)防性治療，另外，相同的制劑可用于在血管性水腫發(fā)病發(fā)生時(shí)進(jìn)行急性治療。因此，患者僅被提供以一種類(lèi)型的制劑，其表示高的患者依從性并且可根據(jù)需要使用。由于這些原因，所提供的配方可實(shí)現(xiàn)高的患者依從性。此外，所提供的制劑在皮下和靜脈內(nèi)注射時(shí)表現(xiàn)出高的局部耐受性；它們耐受性良好，沒(méi)有嚴(yán)重的與藥物相關(guān)不良事件。特別地，所提供的制劑的皮下施用是安全的并且耐受性良好，只有輕度至中度的局部部位反應(yīng)。同樣地，在動(dòng)脈內(nèi)注射和肌注射后實(shí)現(xiàn)高的局部耐受性。此外，在患者中以任何所述劑量施用所述制劑后，不會(huì)發(fā)生血栓形成事件、凝塊形成、血栓栓塞并發(fā)癥。另外，所述制劑的施用不會(huì)增加患者的血栓形成風(fēng)險(xiǎn)。本發(fā)明的藥物制劑確保c1-inh在皮下和靜脈內(nèi)給藥時(shí)的良好生物利用度。皮下施用后，可實(shí)現(xiàn)人受試者中約40-50％(與靜脈內(nèi)施用相比)的c1-inh生物利用度。該皮下生物利用度的原因可部分歸因于在注射部位或在淋巴和血管運(yùn)輸期間的降解或消耗。已知c1-inh可在患有c1-inh缺乏癥的患者中被快速代謝；這與大多數(shù)其中雜合攜帶者具有50％的正常蛋白質(zhì)水平的其它遺傳性血漿蛋白缺乏相反。此外，所提供的制劑的定期皮下施用導(dǎo)致功能性c1-inh活性的劑量依賴(lài)性增加，其中每周兩次3000iu和6000iu劑量獲得高于健康人中的血漿水平的40％的恒定c1-inh活性水平，這將在預(yù)防hae發(fā)病中具有臨床上有意義的作用。在皮下給藥所提供的制劑后，獲得在皮下施用后具有低得多的峰-谷比和更一致的暴露的c1-inh功能活性時(shí)間曲線。在預(yù)防性治療時(shí)，皮下施用的該較低的峰-谷波動(dòng)是特別需要的，因?yàn)榇祟?lèi)血漿水平確保持續(xù)保護(hù)患有遺傳性血管性水腫的患者免受血管性水腫發(fā)病的發(fā)生。在另一方面，提供了試劑盒，其包含本文所述的凍干制劑和相應(yīng)量的適于重構(gòu)的液體。在某些實(shí)施方案中，合適的液體是注射用水，優(yōu)選用于注射的去離子無(wú)菌水。在一些實(shí)施方案中，試劑盒可包含本文所述的藥物制劑和注射器。在某些實(shí)施方案中，注射器適用于皮下注射。在其它實(shí)施方案中，注射器適合靜脈內(nèi)注射。在替代實(shí)施方案中，注射器適用于皮下注射和靜脈內(nèi)注射。在另外的實(shí)施方案中，注射器適用于動(dòng)脈內(nèi)注射和/或肌內(nèi)注射。在一些實(shí)施方案中，試劑盒還可包含適于靜脈內(nèi)注射的針和/或適于皮下注射的針。在另一個(gè)實(shí)施方案中，試劑盒可包含適合于動(dòng)脈內(nèi)注射的針和/或適于肌內(nèi)注射的針。在另一方面，提供了預(yù)填充有本文所述的液體制劑的注射器。在某些實(shí)施方案中，注射器適用于皮下注射。在其它實(shí)施方案中，注射器適合靜脈內(nèi)注射。在替代實(shí)施方案中，注射器適合于皮下注射和靜脈內(nèi)注射。在另外的實(shí)施方案中，注射器適用于動(dòng)脈內(nèi)注射和/或肌內(nèi)注射。方法和用途所提供的制劑可用于治療各種疾病和病況。在一些實(shí)施方案中，所提供的制劑可用于治療和/或預(yù)防與激肽形成相關(guān)的病癥，特別是遺傳性血管性水腫(hae)、繼發(fā)性腦水腫、中樞神經(jīng)系統(tǒng)水腫、低血壓性休克或在使血液與人造表面接觸期間或之后的水腫。還提供了治療或預(yù)防與激肽形成有關(guān)的疾病，特別是遺傳性血管性水腫(hae)、繼發(fā)性腦水腫、中樞神經(jīng)系統(tǒng)水腫、低血壓性休克或在使血液與人造表面接觸期間或之后的水腫的方法，其包括施用藥學(xué)有效劑量的本文所述的任何制劑。在某些實(shí)施方案中，所提供的制劑用于治療和/或預(yù)防遺傳性血管性水腫，特別是haei型、haeii型和/或haeiii型。在某些實(shí)施方案中，提供了治療或預(yù)防患者的遺傳性血管性水腫，特別是haei型、haeii型和/或haeiii型的方法，其包括施用藥學(xué)有效劑量的本文所述的任何制劑。在另外的實(shí)施方案中，所提供的制劑可用于治療和/或預(yù)防缺血-再灌注損傷(iri)，特別地其中iri歸因于手術(shù)干預(yù)，特別是血管手術(shù)、心臟手術(shù)、神經(jīng)手術(shù)、創(chuàng)傷手術(shù)、癌癥手術(shù)、矯形手術(shù)、移植、微創(chuàng)手術(shù)或插入到用于遞送藥理活性物質(zhì)或用于機(jī)械去除完全或部分阻礙物的裝置。還提供了治療或預(yù)防缺血-再灌注損傷(iri)，特別地其中iri歸因于手術(shù)干預(yù)，特別是血管手術(shù)、心臟手術(shù)、神經(jīng)手術(shù)、創(chuàng)傷手術(shù)、癌癥手術(shù)、矯形手術(shù)、移植、微創(chuàng)手術(shù)或插入到用于在患者中遞送藥理活性物質(zhì)或機(jī)械去除完全或部分阻礙物的裝置的方法，所述方法包括施用藥學(xué)有效劑量的本文所述的任何制劑。在一些實(shí)施方案中，所提供的制劑可用于防止患者中的移植組織排斥。移植可以是同種異體移植或異種移植。還提供了防止患者中的移植組織排斥的方法，其包括施用藥學(xué)有效劑量的本文所述的任何制劑。移植可以是同種異體移植或異種移植。在另外的實(shí)施方案中，所提供的制劑可用于治療和/或預(yù)防視網(wǎng)膜病變。還提供了治療或預(yù)防患者的視網(wǎng)膜病變的方法，其包括施用藥學(xué)有效劑量的本文所述的任何制劑。治療和管理在各種實(shí)施方案中，在患有遺傳性血管性水腫和患有急性血管性水腫發(fā)病的患者的治療時(shí)進(jìn)行急性治療。在另外的實(shí)施方案中，進(jìn)行患有遺傳性血管性水腫的患者的預(yù)防性治療以防止水腫的出現(xiàn)?？啥ㄆ谶M(jìn)行患有遺傳性血管性水腫的患者的預(yù)防性治療，也可例如在手術(shù)干預(yù)、牙科治療和其它癥狀觸發(fā)情況諸如其中患者意識(shí)到即將到來(lái)的水腫的情況之前偶爾地進(jìn)行所述預(yù)防性治療。在各種實(shí)施方案中，所提供的制劑可通過(guò)皮下注射施用。在替代實(shí)施方案中，所提供的制劑可通過(guò)靜脈內(nèi)注射施用。制劑可通過(guò)輸注或通過(guò)推注連續(xù)施用。在某些實(shí)施方案中，所提供的制劑可通過(guò)皮下注射和通過(guò)靜脈內(nèi)注射施用。在另外的實(shí)施方案中，患者可自我施用所提供的制劑。在一些實(shí)施方案中，在患者的急性治療期間通過(guò)靜脈內(nèi)注射來(lái)施用所提供的制劑。在其它實(shí)施方案中，在患者的預(yù)防性治療期間通過(guò)皮下注射來(lái)施用所提供的制劑。在另外的實(shí)施方案中，所提供的制劑可經(jīng)由動(dòng)脈內(nèi)注射施用。在另外的實(shí)施方案中，所提供的制劑可經(jīng)由肌內(nèi)注射施用。在另外的實(shí)施方案中，可通過(guò)任何藥學(xué)上合適的施用方式將本文所述的制劑施用于患者。各種遞送系統(tǒng)是已知的，并且可用于通過(guò)任何方便的途徑來(lái)施用組合物。優(yōu)選地，全身性施用本發(fā)明的制劑。對(duì)于全身性使用，根據(jù)常規(guī)方法將本發(fā)明的治療性蛋白質(zhì)配制用于腸胃外(例如靜脈內(nèi)、皮下、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、腦內(nèi)、肺內(nèi)、鼻內(nèi)或經(jīng)皮膚)或腸內(nèi)(例如，口服、經(jīng)陰道或直腸)遞送。一些制劑包括緩釋系統(tǒng)。在一些實(shí)施方案中，所提供的藥物制劑具有高于純水的值(約1mm2/s)但低于10mm2/s，優(yōu)選低于8mm2/s，更優(yōu)選低于6mm2/s，甚至更優(yōu)選低于5mm2/s的制劑的運(yùn)動(dòng)粘度，如在制備后立即測(cè)定的。運(yùn)動(dòng)粘度的測(cè)定在+20℃下進(jìn)行。在某些實(shí)施方案中，所述運(yùn)動(dòng)粘度適用于包含約400-625iu/ml，優(yōu)選約400-600iu/ml，更優(yōu)選約450-550iu/ml的c1-inh的溶液。粘度越低，在某一時(shí)幀內(nèi)遞送指定體積的藥物所需的力越小，這對(duì)于靜脈內(nèi)和皮下應(yīng)用藥物是有利的。當(dāng)患者自我施用c1-inh制劑時(shí)，這是特別有利的。給藥方案在某些實(shí)施方案中，向患者施用為約1,200iu、約1,500iu、約1,600iu、約1,700iu、約1,800iu、約1,900iu、約2,000iu、約2,100iu、約2,200iu、約2,300iu、約2,400iu、約2,500iu、約2,600iu、約2,700iu,約2,800iu、約2,900iu、約3,000iu、約3,500iu、約4,000iu、約4,500iu、約5,000iu、約5,500iu或約6,000iu或其間的任何量的劑量的c1-inh。在優(yōu)選實(shí)施方案中，向患者施用為約1,500iu、約2,000iu、約3,000iu、約4,000iu、約5,000iu或約6,000iu的劑量。在另外的實(shí)施方案中，向患者施用為約10-100iu/kg體重、約20-90iu/kg體重、約20-80iu/kg體重、約30-70iu/kg體重、約40-60iu/kg體重或其間的任何范圍的劑量的c1-inh。在某些實(shí)施方案中，在皮下施用時(shí)，向患者施用為約20-80iu/kg體重、約30至80iu/kg體重、約40-80iu/kg體重、約40-60iu/kg體重、約50-60iu/kg體重或其間的任何范圍的劑量的c1-inh。在某些實(shí)施方案中，在靜脈內(nèi)施用時(shí)，優(yōu)選在急性治療中，向患者施用為約10-60iu/kg體重、約20-40iu/kg體重、約20iu/kg體重或其間的任何范圍的劑量的c1-inh。在某些實(shí)施方案中，目標(biāo)是在預(yù)防性治療中達(dá)到平均c1-inh活性水平。在各種實(shí)施方案中，以1天、2天、3天、4天、5天、6天或7天的間隔，優(yōu)選在預(yù)防性治療中施用一定劑量的c1-inh。在另外的實(shí)施方案中，以每隔1-2天一次的間隔，以每隔2-3天一次的間隔，以每隔3-4天一次的間隔，以每隔4-5天一次的間隔，以每隔5-6天的間隔或每隔6-7天一次的間隔，優(yōu)選在預(yù)防性治療中施用一定劑量的c1-inh。在一些實(shí)施方案中，以每2-3天一次的間隔，優(yōu)選皮下施用一個(gè)、兩個(gè)或更多個(gè)約1,500iuc1-inh制劑的fdf的劑量。在另外的實(shí)施方案中，以每3-4天一次的間隔，優(yōu)選皮下施用一個(gè)、兩個(gè)或更多個(gè)約3,000iuc1-inh制劑的fdf的劑量。在一些實(shí)施方案中，每周1次，優(yōu)選地皮下施用包含約1,500iu、約3,000iu、約4,000iu、約5,000iu或約6,000iu的c1-inh制劑的劑量。在另外的實(shí)施方案中，每周2次，優(yōu)選地皮下施用包含約1,500iu、約3,000iu、約4,000iu、約5,000iu或約6,000iu的c1-inh制劑的劑量。在其它實(shí)施方案中，以每隔2-3天一次的間隔，優(yōu)選皮下施用包含約20-40iuc1-inh/kg體重的劑量的劑量。在另外的實(shí)施方案中，以每隔3-4天一次的間隔，優(yōu)選皮下施用包含約40-60iuc1-inh/kg體重的劑量的劑量。在另外的實(shí)施方案中，每周1次，優(yōu)選皮下施用包含約40-80iuc1-inh/kg體重或約40-60iuc1-inh/kg體重的劑量的劑量。在另外的實(shí)施方案中，每周2次，優(yōu)選皮下施用包含約40-80iuc1-inh/kg體重或約40-60iuc1-inh/kg體重的劑量的劑量。在其它實(shí)施方案中，在急性治療期間向患者施用一個(gè)、兩個(gè)或更多個(gè)約1,500iuc1-inh的fdf，優(yōu)選通過(guò)靜脈內(nèi)施用。在另外的實(shí)施方案中，優(yōu)選通過(guò)靜脈內(nèi)施用，在急性治療期間向患者施用一個(gè)或多個(gè)約3,000iuc1-inh的fdf。在另外的實(shí)施方案中，在急性治療期間向患者施用一個(gè)、兩個(gè)或更多個(gè)約20iuc1-inh/kg體重的劑量，優(yōu)選通過(guò)靜脈內(nèi)施用。在另外的實(shí)施方案中，在急性治療期間，向患者施用一個(gè)或多個(gè)約40iuc1-inh/kg體重的劑量，優(yōu)選通過(guò)靜脈內(nèi)施用。附圖顯示：圖1：在于5℃孵育后，不同c1-inh制劑的c1-inh活性(1a)、相對(duì)c1-inh活性(1b)、通過(guò)sechplc測(cè)量的hmwc水平(1c)和通過(guò)sechplc測(cè)量的片段水平(1d)。圖2：在于25℃孵育后，不同c1-inh制劑的c1-inh活性(2a)、相對(duì)c1-inh活性(3b)、通過(guò)sechplc測(cè)量的hmwc水平(2c)和通過(guò)sechplc測(cè)量的片段水平(2d)。圖3：在于35℃孵育后，不同c1-inh制劑的c1-inh活性(3a)、相對(duì)c1-inh活性(3b)、通過(guò)sechplc測(cè)量的hmwc水平(3c)和通過(guò)sechplc測(cè)量的片段水平(3d)。圖4：c1-inh的平均值：ag血漿水平(線性標(biāo)度)，其顯示與csl06之間的生物等效性。每個(gè)時(shí)間點(diǎn)和組的樣本大小為n＝10，保存csl06組的96小時(shí)值(n＝2)。圖5：研究方案。(a)研究期間的給藥方案和樣品采集，(b)的sccsl06；功能活性以及血漿c1-inh和c4抗原濃度的評(píng)估；功能活性的額外評(píng)估。圖6：csl06的pk結(jié)果。模型化的穩(wěn)態(tài)谷c1-inh功能活性(主要終點(diǎn)；紅色矩形)和觀察到的c1-inh功能活性(黑色三角形)。數(shù)據(jù)點(diǎn)顯示平均值和95％ci。圖7：觀察到的c1-inh功能活性對(duì)比個(gè)體預(yù)測(cè)的c1-inh功能活性的最終群體pk模型。將鑒別線(lineofidentity)(實(shí)線)包括作為參考。圖8：(a)治療劑量的1000iupdc1-inh濃縮物的iv施用后，或(b)1500iu、(b)3000iu或(c)6000iu的csl06的sc施用后模型化的兩周一次的c1-inh功能活性。顯示了中位功能活性(實(shí)線)、第5和第95百分位(陰影區(qū)域)和40％的c1-inh功能活性(虛線)。實(shí)施例實(shí)施例說(shuō)明本發(fā)明，而絕不限制本發(fā)明。實(shí)施例1：c1-inh制劑的產(chǎn)生將基于制備方法(根據(jù)a.feussner等，transfusion2014,54：2566-73)制備的但濃縮至增加的的c1-inh濃度(重構(gòu)后)的c1-inh濃縮物用于制備幾種c1-inh制劑。通過(guò)將凍干的c1-inh濃縮物以約1500iu/ml的濃度溶解在wfi中來(lái)制備不同的c1-inh制劑。用含有所述濃度(表1)的相應(yīng)賦形劑的目標(biāo)制劑緩沖液平衡pd10脫鹽柱(gehealthcare)。然后每個(gè)pd10柱應(yīng)用少量的c1-inh溶液。在柱排阻體積內(nèi)用相應(yīng)的制劑緩沖液洗脫c1-inh。通過(guò)顯色測(cè)定(berichromc1-inhibitor，siemens)測(cè)定c1-inh濃度，并使用相應(yīng)的制劑緩沖液將其調(diào)整至相應(yīng)的濃度。實(shí)施例2：通過(guò)dsf測(cè)定c1-inh的熔解溫度為了通過(guò)dsf測(cè)定c1-inh的熔解溫度，將在各種緩沖液中緩沖的c1-inh濃縮物(基于根據(jù)a.feussner等，transfusion2014,54：2566-73的制備方法制備的)與鹽和/或其它賦形劑的儲(chǔ)備液、水和sypro橙(lifetechnologies)混合以獲得為36iu/ml的c1-inh濃度，緩沖液、鹽和/或其它賦形劑的終濃度是如表2和表3中所列的，原始sypro橙儲(chǔ)備液的稀釋度為1:1000。每個(gè)測(cè)定反應(yīng)的總體積為50μl。由于dsf測(cè)定主要用于優(yōu)化蛋白質(zhì)制劑的賦形劑的類(lèi)型和濃度(而不是該蛋白質(zhì)的濃度)，因此針對(duì)該測(cè)定的效率優(yōu)化了所用的c1-inh濃度。在實(shí)時(shí)循環(huán)儀(appliedbiosystems7500)上于96孔多盤(pán)中進(jìn)行差示掃描熒光測(cè)定法(dsf)。溫度從25℃升至95℃，斜率為1℃/分鐘。在610nm發(fā)射波長(zhǎng)處連續(xù)記錄熒光。使用proteinthermalshift軟件(lifetechnologies)分析數(shù)據(jù)。將c1-inh的熔解溫度測(cè)定為對(duì)比溫度繪制的熒光的一階導(dǎo)數(shù)的最大值。dsf測(cè)得的熔解溫度的結(jié)果示于表2和表3中。結(jié)果數(shù)據(jù)表明，對(duì)于在它們的緩沖液中僅具有低濃度的賦形劑磷酸鹽或檸檬酸鹽的制劑，通過(guò)dsf測(cè)量的熔解溫度要低得多。這同樣適用于其中存在額外的不帶電荷的賦形劑諸如脯氨酸和蔗糖的制劑，盡管此類(lèi)制劑的總體計(jì)算的同滲濃度為約300mosm/l。相反地，具有低濃度的檸檬酸鹽或磷酸鹽并具有額外量的生理上可接受的鹽諸如nacl、硫酸鈉和/或琥珀酸鈉和約300至500mos/l的總體計(jì)算同滲濃度的制劑，具有通過(guò)dsf測(cè)量的55℃或更高的熔解溫度，并且基于這些數(shù)據(jù)(和長(zhǎng)期穩(wěn)定性數(shù)據(jù)，見(jiàn)實(shí)施例3)其顯示出是穩(wěn)定的。實(shí)施例3：在液體貯存時(shí)c1-inh長(zhǎng)期穩(wěn)定性將凍干的c1-inh濃縮物(基于制備方法(根據(jù)a.feussner等，transfusion2014,54：2566-73)制備的)以約1500iu/ml的濃度溶解在wfi中。用目標(biāo)制劑緩沖液平衡pd10脫鹽柱(gehealthcare)。然后每個(gè)pd10柱施用2.5ml的c1-inh1500iu/ml。在柱排阻體積內(nèi)用3.5ml相應(yīng)的制劑緩沖液(參見(jiàn)表3)洗脫c1-inh。通過(guò)顯色測(cè)定(berichromc1-inhibitor，siemens)測(cè)定c1-inh濃度，并使用相應(yīng)的制劑緩沖液將其調(diào)整至500iu/ml。將配制的c1-inh通過(guò)0.2μm過(guò)濾，然后以0.25ml等分試樣分配至0.3ml玻璃小瓶中，然后在無(wú)菌條件下用硅塞子塞住所述小瓶。對(duì)于表3中公開(kāi)的七種不同的c1-inh制劑中的每一種都進(jìn)行該操作。最終將各個(gè)玻璃小瓶轉(zhuǎn)移至5℃、25℃或35℃的回火室。在不同時(shí)間點(diǎn)取出每個(gè)c1-inh制劑的樣品小瓶，并通過(guò)顯色測(cè)定法測(cè)試c1-inh活性，以及在tsk-gelg3000swxl(tosoh)上使用20mmnah2po4、20mmna2hpo4、100mmnacl、ph7.2作為洗脫劑緩沖液，通過(guò)sechplc來(lái)測(cè)試hmwc形成和片段化。結(jié)果結(jié)果示于表4至12和圖1至3中。這些數(shù)據(jù)表明高滲性硫酸鈉制劑(csl43、csl44)是具有最佳的c1-inh活性保存和最低的hmwc形成。添加ps80在長(zhǎng)期貯存中對(duì)hmwc的含量有積極作用，但對(duì)c1-inh活性保存具有負(fù)面影響。等滲硫酸鈉制劑(csl41，csl42)如高滲性氯化鈉/甘氨酸制劑(csl06)具有相似的c1-inh活性保存和相當(dāng)?shù)膆mwc形成。通常，根據(jù)本發(fā)明的制劑基于這些數(shù)據(jù)顯示可接受的長(zhǎng)期穩(wěn)定性。表4：在t0(起始)時(shí)和在t1(92天)、t2(182天)、t3(265天)和t4(365天)于5℃孵育后不同c1-inh制劑的c1-inh活性n.d.＝在該時(shí)間點(diǎn)未測(cè)定表5：在t0(起始)時(shí)和在t1(92天)、t2(182天)、t3(265天)和t4(365天)于5℃孵育后通過(guò)sechplc測(cè)定的不同c1-inh制劑的hmwc水平[占總蛋白質(zhì)的百分比]t0時(shí)t1時(shí)t2時(shí)t3時(shí)t4時(shí)csl062.40n.d.2.52n.d.2,72csl172.262.833.233.12n.d.csl432.33n.d.2.46n.d.2,41csl442.34n.d.2.40n.d.2,45csl412.41n.d.2.58n.d.2,67csl422.43n.d.2.71n.d.2,69csl312.34n.d.2.56n.d.2,44n.d.＝在該時(shí)間點(diǎn)未測(cè)定表6：在t0(起始)時(shí)和在t1(92天)、t2(182天)、t3(265天)和t4(365天)于5℃孵育后通過(guò)sechplc測(cè)定的不同c1-inh制劑的片段水平[占總蛋白質(zhì)的百分比]n.d.＝在該時(shí)間點(diǎn)未測(cè)定表7：在t0(起始)時(shí)和在t1(60天)、t2(120天)、t3(139天)和t4(182天)于25℃孵育后不同c1-inh制劑的c1-inh活性n.d.＝在該時(shí)間點(diǎn)未測(cè)定表8：在t0(起始)時(shí)和在t1(120天)、t2(139天)和t3(182天)于25℃孵育后通過(guò)sechplc測(cè)定的不同c1-inh制劑的hmwc水平[占總蛋白質(zhì)的百分比]t0時(shí)t1時(shí)t2時(shí)t3時(shí)csl062.40n.d.10.6112.50csl172.2611.83n.d.15.60csl432.33n.d.7.018.26csl442.34n.d.6.777.73csl412.41n.d.9.3010.77csl422.43n.d.8.8410.26csl312.34n.d.7.137.99n.d.＝在該時(shí)間點(diǎn)未測(cè)定表9：在t0(起始)時(shí)和在t1(120天)、t2(139天)和t3(182天)于25℃孵育后通過(guò)sechplc測(cè)定的不同c1-inh制劑的片段水平[占總蛋白質(zhì)的百分比]t0時(shí)t1時(shí)t2時(shí)t3時(shí)csl063.20n.d.3.733.79csl173.363.14n.d.3.31csl433.19n.d.3.613.75csl443.20n.d.4.154.20csl413.10n.d.3.753.16csl423.23n.d.4.263.96csl313.26n.d.4.014.07n.d.＝在該時(shí)間點(diǎn)未測(cè)定表10：在t0(起始)時(shí)和在t1(10天)、t2(15天)、t3(21天)、t4(31天)、t5(32天)、t6(60天)、t7(90天)、t8(118天)、t9(139天)、t10(153天)和t11(187天)于35℃孵育后不同c1-inh制劑的c1-inh活性[iu/ml]t0時(shí)t1時(shí)t2時(shí)t3時(shí)t4時(shí)t5時(shí)t6時(shí)t7時(shí)t8時(shí)t9時(shí)t10時(shí)t11時(shí)csl06443n.d.405n.d.n.d.362349n.d.n.d.197n.d.n.d.csl17426418n.d.351376n.d.270205173n.d.120115csl43465n.d.447n.d.n.d.411378n.d.n.d.231n.d.n.d.csl44477n.d.384n.d.n.d.331270n.d.n.d.140n.d.n.d.csl41486n.d.472n.d.n.d.428387n.d.n.d.212n.d.n.d.csl42484n.d.432n.d.n.d.359281n.d.n.d.135n.d.n.d.csl31448n.d.396n.d.n.d.328265n.d.n.d.132n.d.n.d.n.d.＝在該時(shí)間點(diǎn)未測(cè)定表11：在t0(起始)時(shí)和在t1(15天)、t2(32天)、t3(90天)、t4(118天)、t5(139天)、t6(153天)和t7(188天)于35℃孵育后通過(guò)sechplc測(cè)定的不同c1-inh制劑的hmwc水平[總蛋白質(zhì)的百分比]t0時(shí)t1時(shí)t2時(shí)t3時(shí)t4時(shí)t5時(shí)t6時(shí)t7時(shí)csl062.406.6910.27n.d.n.d.22.55n.d.n.d.csl172.26n.d.n.d.25.0228.3n.d.31.332.9csl432.334.847.04n.d.n.d.15.34n.d.n.d.csl442.344.876.77n.d.n.d.11.63n.d.n.d.csl412.415.959.19n.d.n.d.19.93n.d.n.d.csl422.436.189.04n.d.n.d.15.83n.d.n.d.csl312.345.087.03n.d.n.d.12.20n.d.n.d.n.d.＝在該時(shí)間點(diǎn)未測(cè)定表12：在t0(起始)時(shí)和在t1(15天)、t2(32天)、t3(90天)、t4(118天)、t5(139天)、t6(153天)和t7(188天)于35℃孵育后通過(guò)sechplc測(cè)定的不同c1-inh制劑的片段水平[占總蛋白質(zhì)的百分比]t0時(shí)t1時(shí)t2時(shí)t3時(shí)t4時(shí)t5時(shí)t6時(shí)t7時(shí)csl063.193.914.43n.d.n.d.5.65n.d.n.d.csl173.36n.d.n.d.3.233.17n.d.3.313.50csl433.194.194.11n.d.n.d.4.96n.d.n.d.csl443.205.134.13n.d.n.d.5.71n.d.n.d.csl413.124.284.09n.d.n.d.4.76n.d.n.d.csl423.234.724.68n.d.n.d.5.41n.d.n.d.csl313.263.883.93n.d.n.d.5.71n.d.n.d.n.d.＝在該時(shí)間點(diǎn)未測(cè)定實(shí)施例4：c1-inh制劑的粘度的測(cè)定使用根據(jù)a.feussner等(transfusion2014,54:2566-73)制備的商購(gòu)可得的c1-inh產(chǎn)品(重構(gòu)后為50iu/ml)和基于制備方法制備的但被濃縮至增加的c1-inh濃度(重構(gòu)后為500iu/ml)的c1-inh濃縮物，制備具有不同c1-inh濃度和不同的賦形劑濃度的溶液(表13)。樣品1和2含有c1-inh和如表13所示的賦形劑濃度。樣品3是使用通過(guò)透析進(jìn)行的緩沖液交換制備的，并且含有c1-inh和如表13所示的賦形劑濃度。c1-inh濃度通過(guò)顯色測(cè)定法(berichromc1-inhibitor,siemens)來(lái)測(cè)量。表13：3種c1-inh制劑的賦形劑濃度、ph和同滲濃度在樣品制備后(t0，初始地)和在+40℃進(jìn)行1周后(t1)，直接使用根據(jù)ubbelohde(設(shè)備號(hào)908829，毛細(xì)管型號(hào)53620/ii，schott-gmbh,hofheim,germany)基于din51562第2部分的毛細(xì)管粘度計(jì)測(cè)量3個(gè)樣品的運(yùn)動(dòng)粘度，參見(jiàn)表14。為了在+40℃下貯存期間避免任何生物負(fù)荷生長(zhǎng)，通過(guò)調(diào)整至0.05％的疊氮化鈉來(lái)保護(hù)樣品。運(yùn)動(dòng)粘度的測(cè)定在+20℃下進(jìn)行。將毛細(xì)管直徑為0.53mm的毛細(xì)管粘度計(jì)在水浴中回火。將樣品填充至粘度計(jì)中并孵育5分鐘以平衡測(cè)量溫度。根據(jù)粘度計(jì)制造商的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行了兩次測(cè)量，并計(jì)算了平均值。在測(cè)量之前，使用來(lái)自“zentrumfürmessenundkalibrierengmbh”,bitterfeld,germany的校準(zhǔn)溶液驗(yàn)證毛細(xì)管常數(shù)。注意：為了獲得動(dòng)力學(xué)粘度，必須將運(yùn)動(dòng)粘度與可被假定為約1g/cm3的相應(yīng)溶液的質(zhì)量密度相乘(動(dòng)力學(xué)粘度(cp)＝運(yùn)動(dòng)粘度(cst)*密度(kg/m3))。表14：t0(起始)時(shí)和在t1(1周)于40℃孵育后包含不同緩沖液條件的3種c1-inh制劑的運(yùn)動(dòng)粘度結(jié)果具有檸檬酸鈉作為唯一賦形劑的樣品3與制劑1和2相比顯示出明顯更高的粘度。與現(xiàn)有技術(shù)樣品1相比，樣品2(其為根據(jù)本發(fā)明的制劑)的粘度增加是可接受的。樣品3在+40℃下一周后的粘度增加遠(yuǎn)高于樣品2的增加。實(shí)施例5：評(píng)估在兔中靜脈內(nèi)施用后和csl06的生物等效性的藥代動(dòng)力學(xué)研究在本研究中，考慮血漿曲線的藥代動(dòng)力學(xué)形狀，洞察開(kāi)始和變更的潛在變化，進(jìn)行藥代動(dòng)力學(xué)(pk)研究以評(píng)估實(shí)施例1的和csl06的生物等效性。將和csl06各自以200iu/kg的劑量通過(guò)靜脈內(nèi)途徑向10只雌性chinchillabastard(chb)兔施用。將血漿中人c1-inh:ag水平的至96小時(shí)后的最后測(cè)量值的曲線下面積(auc0-96h)用作主要生物等效性參數(shù)。研究另外的pk參數(shù)來(lái)評(píng)估生物等效性：最大血漿濃度(或等效地，體內(nèi)回收)、清除率、平均駐留時(shí)間、最終半衰期、穩(wěn)態(tài)分布體積和最終分布體積。為了測(cè)定pk參數(shù)，在施用前和在施用后5分鐘、30分鐘、1小時(shí)、4小時(shí)、8小時(shí)、24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)和96小時(shí)抽取血漿樣品，并使用elisa系統(tǒng)測(cè)定c1-inh:ag血漿濃度?？捎糜谠u(píng)估兩種產(chǎn)品生物等效性的目標(biāo)變量是auc0-96h，從施用直至96小時(shí)的觀察到的c1-inh:ag血漿濃度時(shí)間曲線下面積。測(cè)定csl06組和組中auc0-96h的幾何平均值，估計(jì)的幾何平均比計(jì)算為109％，雙側(cè)90％置信區(qū)間范圍為100％至118％。因此，在5％的顯著性水平下對(duì)于變量auc0-96h，證明了在80％至125％的范圍內(nèi)的兩個(gè)產(chǎn)品的平均生物等效性(圖4)。同樣地對(duì)于以下其它藥代動(dòng)力參數(shù)證明了csl06和的平均生物等效性：最大血漿濃度(或等效地，體內(nèi)回收)、清除率、平均駐留時(shí)間、最終半衰期，穩(wěn)態(tài)分布體積和最終分布體積。測(cè)定csl06和的清除率的幾何平均值，清除率的幾何平均比值經(jīng)計(jì)算為92％，置信區(qū)間90％為從85％至100％。測(cè)定csl06和的最終半衰期的幾何平均值，最終半衰期的估計(jì)的幾何平均比例經(jīng)計(jì)算為101％，置信區(qū)間90％為從94％至109％。csl06和的最終分布體積的幾何平均值得到最終分布體積的估計(jì)的幾何平均比率為93％，置信區(qū)間90％為從84％至102％?？傊撗芯恐С謈sl06和在兔中單次靜脈推注后的平均生物等效性的斷言。實(shí)施例6：在csl06的一次靜脈內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、皮下或肌內(nèi)注射后新西蘭白兔的局部耐受性研究在本研究中，評(píng)估了csl06(測(cè)試項(xiàng))在一次靜脈內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、皮下或肌內(nèi)注射后在兔中的局部耐受性。兩只雄性和一只雌性的四組新西蘭白兔接受測(cè)試項(xiàng)csl06，在左側(cè)進(jìn)行一次靜脈內(nèi)或動(dòng)脈內(nèi)輸注、皮下或肌內(nèi)注射。以3ml/注射的劑量體積通過(guò)靜脈內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)輸注和皮下注射，以及以0.5ml/注射的劑量體積通過(guò)肌內(nèi)注射，向新西蘭白兔施用一次csl06。在相同的實(shí)驗(yàn)條件下，每只動(dòng)物的右側(cè)用0.9％nacl(對(duì)照項(xiàng))處理。在施用后，將動(dòng)物保持4天的觀察期。每天檢查每只動(dòng)物的死亡率或發(fā)病體征和臨床體征。在施用前第1天和處理后1小時(shí)，第2天，施用結(jié)束后約24小時(shí)，然后在第3天和第4天每天一次評(píng)估皮膚反應(yīng)。在分組前，然后在第1天和第3天記錄一次體重。觀察期完成后，處死動(dòng)物，然后進(jìn)行肉眼尸體剖檢。對(duì)所有動(dòng)物的注射部位進(jìn)行顯微鏡檢查。沒(méi)有記錄到計(jì)劃外的死亡和系統(tǒng)的臨床癥狀。體重不受不依賴(lài)于施用途徑的csl06處理影響。在靜脈內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)和肌內(nèi)注射部位未觀察到csl06相關(guān)的局部反應(yīng)。當(dāng)與對(duì)照部位相比時(shí)，在用csl06處理的皮下注射部位觀察到紅斑和水腫，發(fā)病和/或嚴(yán)重度稍高。在注射部位沒(méi)有觀察到測(cè)試項(xiàng)處理相關(guān)的肉眼可見(jiàn)的死后變化。在顯微鏡下，在靜脈內(nèi)(雄性)、皮下(雌性)和肌內(nèi)(雄性和雌性)左側(cè)注射部位均觀察到歸因于處理的偶發(fā)性發(fā)現(xiàn)，而對(duì)于動(dòng)脈內(nèi)途徑未觀察到差異。這些病變均在正常的反應(yīng)范圍內(nèi)，包括最小至輕微的靜脈周的膠原降解和單核細(xì)胞浸潤(rùn)(靜脈內(nèi)途徑)、膠原降解(皮下途徑)和單核細(xì)胞浸潤(rùn)(肌內(nèi)途徑)。在本研究的實(shí)驗(yàn)條件下，csl06的在兔中單次靜脈內(nèi)或動(dòng)脈內(nèi)輸注或皮下或肌肉內(nèi)注射在臨床上、局部和組織學(xué)上良好地耐受。實(shí)施例7：在比較csl06與的一次皮下注射后新西蘭白兔的局部耐受性研究?jī)芍恍坌院鸵恢淮菩缘娜M新西蘭白兔在左側(cè)通過(guò)皮下注射接受一次測(cè)試項(xiàng)csl06、目前銷(xiāo)售的c1抑制劑產(chǎn)品或安慰劑(不含c1-inh的制劑緩沖液)。在相同的實(shí)驗(yàn)條件下，每只動(dòng)物的右側(cè)用0.9％nacl(對(duì)照物)處理，并用作絕對(duì)對(duì)照部位。使用3ml/注射液的恒定劑量體積。在施用后，將動(dòng)物保持4天的觀察期。每天檢查每只動(dòng)物的死亡率或發(fā)病體征和臨床體征。在施用前第1天和處理后1小時(shí)，第2天，施用結(jié)束后約24小時(shí)，然后在第3天和第4天每天一次，評(píng)估皮膚反應(yīng)。在分組前，然后在第1天和第3天記錄一次體重。觀察期完成后，處死動(dòng)物，進(jìn)行肉眼尸體剖檢。對(duì)所有動(dòng)物的注射部位進(jìn)行顯微鏡檢查。沒(méi)有記錄到非計(jì)劃死亡和指示全身毒性的臨床體征。體重不受測(cè)試項(xiàng)處理影響。在注射nacl0.9％的部位未觀察到反應(yīng)。在注射csl06、或安慰劑的部位未觀察到顯著差異。處理后偶爾觀察到紅斑，有時(shí)持續(xù)至第3天。該反應(yīng)的嚴(yán)重程度通常被認(rèn)為是輕微的。在第4天，注射了測(cè)試項(xiàng)之一的兩只動(dòng)物在注射部位顯示干燥。在處理后在注射csl06或安慰劑的部位也觀察到血腫，并持續(xù)至第4天。在任何注射部位均未觀察到測(cè)試項(xiàng)相關(guān)肉眼可見(jiàn)的死后變化。注射部位的顯微鏡檢查顯示最小的棘皮癥，偶爾與角化過(guò)度或最小血清細(xì)胞痂相關(guān)，以及上真皮中單核炎性細(xì)胞的最小或輕微浸潤(rùn)，其或多或少與異嗜白細(xì)胞相關(guān)。無(wú)論注射部位(0.9％nacl、安慰劑或測(cè)試項(xiàng))具有相似的發(fā)生率和嚴(yán)重度的在大多數(shù)動(dòng)物中觀察到的這些微小變化被認(rèn)為與施用程序相關(guān)。在本研究的實(shí)驗(yàn)條件下，csl06、和安慰劑制劑緩沖液在單次皮下注射后被認(rèn)為是局部良好耐受的。實(shí)施例8：在比較csl43與不含c1-inh的csl43緩沖液的一次皮下注射后新西蘭白兔的局部耐受性研究通過(guò)向每只動(dòng)物的背右側(cè)進(jìn)行皮下注射，3只雌性新西蘭白兔接受了一次測(cè)試項(xiàng)csl43。在相同的實(shí)驗(yàn)條件下，用液體制劑緩沖液(不含c1-inh的csl43緩沖液)處理同一動(dòng)物的背左側(cè)，并將其用作絕對(duì)對(duì)照部位。將恒定劑量體積的5ml推注用于注射。施用后，將動(dòng)物保持72小時(shí)的觀察期?？刂苿?dòng)物目視于它們的身體狀況和臨床體征。在幾個(gè)時(shí)間點(diǎn)拍攝注射部位的照片，并使用記分單。在基線和72小時(shí)時(shí)使用scilvet測(cè)定血液參數(shù)。在尸檢時(shí)采集皮膚活檢組織，并將其存儲(chǔ)在10％福爾馬林溶液中以用于可能的組織學(xué)分析。沒(méi)有觀察到非計(jì)劃死亡和指示全身性毒性的臨床體征。在馬上施用csl43或液體制劑緩沖液后以及在整個(gè)隨后的觀察期間中，在任何處理的動(dòng)物中均未觀察到局部反應(yīng)的體征。在72小時(shí)的觀察期結(jié)束時(shí)，在注射部位進(jìn)行尸體剖檢。此處，在一只動(dòng)物中，在csl43的注射部位下方的皮下組織中觀察到極輕微且小的血腫(0.5cm×1.0cm)，所述血腫被判斷為是程序相關(guān)的。在所有其他動(dòng)物中，沒(méi)有觀察到處理的局部反應(yīng)或任何其它體征。另外，在分析血液參數(shù)時(shí)，在任何動(dòng)物中未觀察到處理相關(guān)的變化。在本研究的實(shí)驗(yàn)條件下，測(cè)試項(xiàng)csl831在兔中的單次皮下注射具有臨床和局部良好的耐受性。在csl43或液體制劑緩沖液注射部位未觀察到顯著差異。實(shí)施例9：研究設(shè)計(jì)進(jìn)行ii期研究以表征對(duì)18個(gè)hae受試者皮下(sc)施用的csl06的藥代動(dòng)力學(xué)、藥效學(xué)和安全性。在多達(dá)30天的篩查期后，治療研究者將受試者依次分配至6個(gè)csl06治療序列之一(圖5a)。在第一次csl06給藥期之前2-7天靜脈內(nèi)(iv)施用單次劑量的berinert20iu/kg。每個(gè)受試者接受3個(gè)可能的csl06劑量(以短暫皮下注射[500iu/ml]每周兩次施用的1500iu、3000iu或6000iu)中的兩個(gè)，持續(xù)兩個(gè)為期四周的治療期，治療期之間的清除期長(zhǎng)達(dá)4周。施用營(yíng)救藥物(ivc1-inh)被允許用于突破疾病發(fā)病。研究人口基于臨床史，并通過(guò)篩選(c1-inh功能活性<50％或c1-inh抗原水平低于實(shí)驗(yàn)室參考范圍)時(shí)的中央實(shí)驗(yàn)室測(cè)試證實(shí)的，患有具有缺乏c1抑制劑(i型)的hae或具有功能失調(diào)的c1抑制劑(ii型)的hae的年齡≥18歲的男性或女性患者有資格進(jìn)行研究。受試者在篩查時(shí)需要體重≥50kg和≤110kg，并已在篩查訪問(wèn)前3個(gè)月內(nèi)經(jīng)歷≤5次hae發(fā)病，其中≤1次在篩查訪問(wèn)前30天內(nèi)發(fā)生。關(guān)鍵排除標(biāo)準(zhǔn)包括目前的c1-inh預(yù)防性治療，篩查30天內(nèi)的雄激素治療和篩查7天內(nèi)的任何hae特異性治療。終點(diǎn)主要終點(diǎn)是基于模型化和模擬的第4周的平均谷c1-inh功能活性。主要選擇模型來(lái)源的而不是觀察到的谷水平來(lái)解釋研究期間的可能的營(yíng)救ivc1-inh使用的混雜性質(zhì)。次要終點(diǎn)是基于觀察數(shù)據(jù)的每個(gè)給藥方案的第四周的谷c1-inh功能活性、c1-inh抗原水平和c4抗原水平的平均值和相對(duì)于基線的平均變化。進(jìn)行治療突發(fā)性不良事件(ae)的不同總結(jié)以評(píng)估安全性。給藥和樣品收集給藥方案和樣品收集如圖5b所示。施用c1-inh的初始單次iv劑量以幫助藥代動(dòng)力學(xué)(pk)模型解釋ivc1-inh營(yíng)救劑量的任何施用，并使得能夠?qū)ccsl06的生物利用度進(jìn)行研究?jī)?nèi)估計(jì)。在每個(gè)給藥期中，在幾個(gè)時(shí)間點(diǎn)評(píng)估c1-inh功能活性、c1-inh血漿濃度和c4抗原水平。在即將進(jìn)行csl06施用時(shí)，另外評(píng)估血漿c1-inh功能活性。pk和pd測(cè)量通過(guò)已驗(yàn)證的顯色測(cè)定法(berichromc1-inhibitor，siemens；參考范圍：標(biāo)準(zhǔn)的70-130％)評(píng)估血漿c1-inh功能活性。通過(guò)比濁法(c4試劑，beckmancoulter；參考范圍：0.1-0.4g/l)評(píng)估血漿c1-inh抗原(c1試劑n-antisera，siemenshealthcarediagnostics；參考范圍：0.18-0.32mg/l)和c4抗原水平。所有測(cè)量在中央實(shí)驗(yàn)室使用已驗(yàn)證的測(cè)定(cslbehringgmbh,marburg,germany)來(lái)進(jìn)行。c4抗原水平被定義為藥效學(xué)(pd)參數(shù)，因?yàn)閏4活性發(fā)生在c1-inh的下游；因此，c1-inh替換將影響c4水平。已顯示在iv血漿來(lái)源的c1-inh(pdc1-inh)施用后，c4抗原的水平隨時(shí)間推移呈緩慢上升趨勢(shì)。pk和pd分析將完整的分析組(18個(gè)接受≥1次劑量的csl06并提供≥1次c1-inh功能測(cè)量的患者)用于主要終點(diǎn)分析以及測(cè)定模型來(lái)源的c1-inh功能活性?；谙惹把芯拷Y(jié)果的pk模型，每個(gè)給藥方案12個(gè)受試者足以提供c1-inh活性的估計(jì)。使用描述性統(tǒng)計(jì)和混合模型總結(jié)每個(gè)處理的數(shù)據(jù)。使用非線性混合效應(yīng)模型(nonmem7.2版)，將sc和ivc1-inh功能活性數(shù)據(jù)一起提供給基于群體的方法。通過(guò)估計(jì)參數(shù)諸如清除率(cl)和分布體積(v)的典型和個(gè)體值以及相關(guān)的個(gè)體間變化性來(lái)評(píng)估csl06的探索性pk特征。還研究了受試者基線特征的影響。用最終種群pk模型估計(jì)藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)諸如cl、v、生物利用度(f)、吸收速率常數(shù)(ka)、半衰期(t1/2)和增量回收(incrementalrecovery)。進(jìn)行藥代動(dòng)力學(xué)模擬，以檢查c1-inh功能活性的穩(wěn)態(tài)谷水平是否取決于體重。對(duì)于<60kg、60-100kg和>100kg的基線體重范圍，通過(guò)檢查在40iu/kg和60iu/kg的劑量以及3000iu和4500iu的固定劑量下的模型預(yù)測(cè)的穩(wěn)態(tài)谷血清c1-inh功能活性的分布來(lái)評(píng)估體重效應(yīng)。對(duì)于觀察到的終點(diǎn)分析，使用描述性統(tǒng)計(jì)總結(jié)了每個(gè)csl06給藥方案的c1-inh功能活性、c1-inh抗原水平和c4抗原水平的第四周谷水平和相對(duì)于基線的谷水平的增加。安全性評(píng)估通過(guò)持續(xù)觀察不良事件和通過(guò)整個(gè)研究的特定時(shí)間進(jìn)行的安全性評(píng)估來(lái)評(píng)估安全性和耐受性。這些評(píng)估包括輸注部位耐受性、實(shí)驗(yàn)室參數(shù)、生命體征、體重、身體檢查和伴隨的藥物使用。還基于關(guān)于使用c1-inh濃縮物的hae患者的血栓栓塞副作用的早期單一案例報(bào)告，進(jìn)行了深靜脈血栓形成的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。結(jié)果研究受試者來(lái)自八個(gè)研究點(diǎn)的22名受試者簽署了知情同意書(shū)。其中，通過(guò)計(jì)算機(jī)生成列表將18名患者被分配給治療，并接受研究藥物。4名受試者簽署了知情同意書(shū)，但未被隨機(jī)分組，其中兩名是因他們不符合納入/排除標(biāo)準(zhǔn)，兩名是因?yàn)楫?dāng)發(fā)現(xiàn)他們合格時(shí)，研究已經(jīng)達(dá)到18名受試者的目標(biāo)。受試者的人口統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)總結(jié)在表15中。皮下csl06后的藥代動(dòng)力學(xué)結(jié)果第四周的平均觀察到的穩(wěn)態(tài)谷c1-inh功能活性隨csl06劑量增加而增加(圖6)；對(duì)于1500iu、3000iu和6000iu劑量，相對(duì)于基線的增加分別為16.4％、33.2％和63.3％。c1-inh抗原水平也隨csl06劑量增加而增加；對(duì)于所述三種給藥方案，第四周的c1-inh抗原的相對(duì)于基線的增加分別為0.02mg/ml、0.05mg/ml和0.14mg/ml。群體藥代動(dòng)力學(xué)模型通過(guò)具有一級(jí)吸收的線性一室藥代動(dòng)力學(xué)模型描述了c1-inh功能活性。檢查模型參數(shù)與以下基線協(xié)變量之間的關(guān)系：年齡、性別、體重、體質(zhì)指數(shù)、理想體重、瘦體質(zhì)、肌酐清除率和c1-inh功能活動(dòng)。對(duì)所鑒定的模型參數(shù)的唯一統(tǒng)計(jì)上顯著的協(xié)變量效應(yīng)是體重對(duì)cl和v的影響，其通過(guò)以下關(guān)系來(lái)描述：其中cli是個(gè)體的清除值，vi是個(gè)體分布體積，wti是受試者i的體重。模型的擬合曲線(圖7)良好表明，模型預(yù)測(cè)與觀察數(shù)據(jù)一致，因?yàn)樗鳇c(diǎn)在鑒別線周?chē)鶆蚍植?。因此，沒(méi)有明顯的系統(tǒng)偏倚性。模型來(lái)源的c1-inh谷水平和藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)主要終點(diǎn)是基于模型化和模擬的第四周的平均谷c1-inh功能水平(圖6)。觀察到平均c1-inh功能活性的劑量依賴(lài)性增加，對(duì)于1500iu、3000iu和6000iu劑量，從基線時(shí)的14.6％分別增加至31.7％、44.3％和80.5％。第四周的模型化穩(wěn)態(tài)谷c1-inh功能活性與觀察到的c1-inh功能活性相似。所述模型還用于推導(dǎo)其它探索性pk參數(shù)，諸如在穩(wěn)態(tài)下從0至給藥間隔結(jié)束的活性-時(shí)間曲線下面積(auc(0-t))、最大血漿c1-inh功能活性水平(cmax)、平均穩(wěn)態(tài)血漿活性(cavg)、增量回收和消除半衰期。表16總結(jié)了iv和scc1-inh施用后功能性c1-inh活性的模型化pk參數(shù)。sccsl06的生物利用度為44％，與ivc1-inh相比具有相似的清除半衰期。由于所使用的csl06劑量不是基于體重的，因此評(píng)估體重、體質(zhì)指數(shù)和理想體重，以測(cè)定其對(duì)中位功能c1-inh水平的影響。不出預(yù)料地，對(duì)于每個(gè)劑量方案發(fā)現(xiàn)體重與穩(wěn)態(tài)谷水平之間存在小的負(fù)相關(guān)關(guān)系。與具有較大體重的患者相比，預(yù)計(jì)施用固定劑量的體重較輕的患者獲得相對(duì)高的功能性c1-inh水平。因此，預(yù)計(jì)根據(jù)體重調(diào)整的給藥將在整個(gè)體重范圍內(nèi)實(shí)現(xiàn)相同的活性水平。藥效學(xué)在每個(gè)劑量方案的第四周也測(cè)量c4抗原水平。c4抗原水平以劑量依賴(lài)性方式增加，并用所有csl06的劑量進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化。對(duì)于csl06的1500iu、3000iu和6000iu劑量分別觀察到11.1mg/dl、14.1mg/dl和18.4mg/dl的c4水平。對(duì)于1500iu、3000iu和6000iu劑量，在第四周c4抗原水平相對(duì)基線分別增加了4.3mg/dl、5.6mg/dl和9.1mg/dl(正常水平為14mg/dl)。當(dāng)將csl06的固定劑量計(jì)算為每體重的劑量時(shí)，平均c4抗原水平隨著劑量/體重的增加而升高；在≤20iu/kg、>20至≤45iu/kg、>45至≤90iu/kg和>90iu/kg的類(lèi)別中，第4周的平均觀察到的c4抗原水平分別為11.3mg/ml、11.7mg/ml、18.0mg/ml和18.2mg/ml。經(jīng)過(guò)4周模型化的每周兩次csl06對(duì)比ivpdc1-inh通過(guò)模擬每周2次1500iu、3000iu和6000iu持續(xù)4周的3種不同sc方案，在事后分析中檢查給藥sccsl06對(duì)比iv1000iupdc1-inh濃縮物對(duì)c1-inh功能活性的影響(圖8)。相較于目前的每周2次注射1000iupdc1-inh濃縮物的標(biāo)準(zhǔn)預(yù)防性治療方案，模擬的c1-inh功能活性時(shí)間曲線顯示sc施用后較低的峰谷比和更一致的暴露。安全性在整個(gè)研究中，沒(méi)有與csl06相關(guān)的嚴(yán)重不良事件(ae)或死亡，或因不良事件而導(dǎo)致的退出。沒(méi)有觀察到血栓栓塞事件。實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測(cè)沒(méi)有發(fā)現(xiàn)任何安全信號(hào)，并且沒(méi)有證據(jù)表明抑制性自身抗體的開(kāi)發(fā)。最常見(jiàn)的治療突發(fā)性不良事件(teae)是報(bào)告為注射部位的像疼痛、腫脹、擦傷和瘙癢的局部部位反應(yīng)。大多數(shù)局部部位反應(yīng)的強(qiáng)度是輕度至中度，并在3天內(nèi)消除。與其它兩個(gè)較低劑量組相比(在1500iu劑量組中為2/12，在3000iu劑量組為1/12)，在6000iu劑量組(12個(gè)受試者中有5個(gè))中有更多的受試者報(bào)告了注射部位的中度腫脹，這可能與注射體積量有關(guān)。其它局部反應(yīng)沒(méi)有明顯的劑量關(guān)系。在研究期間發(fā)生的hae相關(guān)癥狀被報(bào)告為ae。總體而言，在研究過(guò)程中有7名患者報(bào)告了29例hae相關(guān)ae。在這29例hae事件中，有11例是在sccsl06的四周給藥間隔期間報(bào)告的。在1500iu劑量組中，12名患者中有2名分別有兩次和五次hae發(fā)病。在3000iu劑量組中，兩名患者分別有1次和3次發(fā)病。6000iu劑量組中沒(méi)有患者在四周的sc給藥期期間經(jīng)歷任何hae癥狀。當(dāng)前第1頁(yè)12