對相關(guān)申請的交叉引用

基于37cfr§1.53(b)提交的本非臨時申請要求于2014年12月3日提交的美國臨時申請62/087127基于35usc§119(e)的權(quán)益，其通過引用整體并入本申請。

本申請涉及新穎的季銨化合物，其可用作抗體-藥物綴合物(adc)的連接基。本申請也涉及含有季銨連接基的adc。本申請也涉及在人類中治療疾病的方法。

背景技術(shù)：

使用單克隆抗體(mab)將抗癌藥物直接遞送至腫瘤細胞近年來已引起了大量關(guān)注。兩種新的抗體-藥物綴合物已被fda批準用于治療癌癥。(brentuximabvedotin)是指明用于治療復發(fā)性或難治性霍奇金淋巴瘤和全身性間變性大細胞淋巴瘤(alcl)的受cd30引導的抗體-藥物綴合物(adc)。(ado-trastuzumabemtansine)是新的被批準用于her2陽性晚期(轉(zhuǎn)移性)乳腺癌患者的療法。為了在adc中同時獲得強效的抗腫瘤活性和可接受的治療指數(shù)，可對設(shè)計的幾個方面進行優(yōu)化。具體地，已知連接基的化學結(jié)構(gòu)可對adc的效力和安全性都有顯著的影響(ducry&stump,bioconjugatechem,2010,21,5-13)。選擇恰當?shù)倪B接基對將藥物合適地遞送至癌細胞的預期細胞隔室有影響。傳統(tǒng)上，對含有叔胺或吡啶官能團的綴合藥物(有時也稱為毒素)的選擇已主要受限于如何將這些藥物連接至分子中的其它官能團。因此，期望開發(fā)通過形成季鹽來連接含有胺或吡啶的毒素的方法。本申請?zhí)峁┎煌愋偷暮屑钧}的可在腫瘤細胞中裂解的adc。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本申請涉及由式(i)表示的抗體-藥物綴合物：

ab—(l—d)p

ab是抗體；

p是1-8；

l—d是由下式表示的化學部分：

—str—(pep)—sp—d

str是與ab共價連接的伸展基單元；

pep是連接基；

d是由下式表示的抗腫瘤劑：

其中r²⁰和r³⁰各自獨立為c1-c6烷基，且

r¹⁰是非氫取代基；或

r³⁰是c1-c6烷基，且r¹⁰和r²⁰與n一起形成取代的c3-c7雜環(huán)烷基環(huán)；或

r³⁰不存在，且r¹⁰和r²⁰與n一起形成取代的雜芳基環(huán)；

sp—d是下式的間隔基部分：

本申請也涉及治療癌癥的方法、式(i)的抗體-藥物綴合物在療法中的用途及式(i)的抗體-藥物綴合物在制備用于治療癌癥的藥物中的用途。本申請也涉及制備式(i)的抗體-藥物綴合物的方法。

附圖說明

圖1顯示了多種cd22adc在具有wsu-dlcl2人彌漫性大b細胞淋巴瘤的scid小鼠中的效力比較。cd22adc1-2和adc2-2與媒介物組相比都對腫瘤生長顯示出劑量依賴性抑制，且adc1-2顯示出比adc2-2更強的抗腫瘤活性。非結(jié)合對照napi2badc對腫瘤生長具有最小的影響。

具體實施方式

本申請涉及式(i)的抗體-綴合物。

在一個實施方案中，d是具有ic50為10nm或更低的效能的抗腫瘤部分。

在一個實施方案中，pep是肽基部分。

在一個實施方案中，pep是val-cit部分。

在一個實施方案中，pep是phe-lys部分。

在一個實施方案中，pep是val-ala部分。

在一個實施方案中，pep是選自以下的非肽化學部分：：

w是-nh-雜環(huán)烷基-或雜環(huán)烷基；

y是雜芳基、芳基、-c(o)c1-c6亞烷基、c2-c6烯基、c1-c6亞烷基或-c1-c6亞烷基-nh-；

每個r¹獨立為c1-c10烷基、c2-c10烯基、(c1-c10烷基)nhc(nh)nh2或(c1-c10烷基)nhc(o)nh2；

r³和r²各自獨立為h、c1-c10烷基、c2-c10烯基、芳基烷基或雜芳基烷基，或r³和r²一起可形成c3-c7環(huán)烷基；

r⁴和r⁵各自獨立為c1-c10烷基、c2-c10烯基、芳基烷基、雜芳基烷基、(c1-c10烷基)och2-，或r⁴和r⁵可形成c3-c7環(huán)烷基環(huán)；且

p是1-8的整數(shù)。

本申請也涉及式(i)的抗體-綴合物，其由下式表示：

ab—(l—d)p

其中ab是抗體；l—d是由下式表示的化學部分：

r¹是c1-c6烷基、c2-c6烯基、(c1-c6烷基)nhc(nh)nh2或(c1-c6烷基)nhc(o)nh2；且

r³和r²各自獨立為h、c1-c10烷基。

本申請也涉及式(i)的抗體-綴合物，其由下式表示：

ab—(l—d)p

其中ab是抗體；l—d是下式的化學部分：

r¹是c1-c6烷基、(c1-c6烷基)nhc(nh)nh2或(c1-c6烷基)nhc(o)nh2；且

r⁴和r⁵一起形成c3-c7環(huán)烷基環(huán)。

本申請也涉及式(i)的抗體-綴合物，其由下式表示：

ab—(l—d)p

其中ab是抗體；

l—d是由下式表示的化學部分：

且

r¹是c1-c6烷基、(c1-c6烷基)nhc(nh)nh2或(c1-c6烷基)nhc(o)nh2。

本申請也涉及由下式表示的式(i)的抗體-綴合物：

其中

str是由下式表示的化學部分：

其中r⁶選自c1-c10亞烷基和c1-c10亞烷基-c(o)n(r^a)-c2-c6亞烷基，其中每個亞烷基可被選自以下的1-5個取代基取代：鹵素、三氟甲基、二氟甲基、氨基、烷基氨基、氰基、磺?；?、磺酰胺基團、亞砜基團、羥基、烷氧基、酯基團、羧酸基團、烷基硫基芳基、c3-c8環(huán)烷基、c4-c7雜環(huán)烷基、雜芳基烷基和雜芳基；

每個r^a獨立為h或c1-c6烷基；且

p是1、2、3或4。

本申請也涉及由下式表示的式(i)的抗體-綴合物：

其中

str是由下式表示的化學部分：

其中r⁶選自c1-c10亞烷基和c1-c10亞烷基-c(o)n(r^a)-c2-c6亞烷基，其中每個亞烷基可被選自以下的1-5個取代基取代：鹵素、三氟甲基、二氟甲基、氨基、烷基氨基、氰基、磺?；?、磺酰胺基團、亞砜基團、羥基、烷氧基、酯基團、羧酸基團、烷基硫基芳基、c3-c8環(huán)烷基、c4-c7雜環(huán)烷基、雜芳基烷基和雜芳基；

每個r^a獨立為h或c1-c6烷基；且

p是1、2、3或4。

本申請也涉及由下式表示的式(i)的抗體-綴合物：

其中

str是由下式表示的化學部分：

其中r⁶選自c1-c10亞烷基和c1-c10亞烷基-c(o)n(r^a)-c2-c6亞烷基，其中每個亞烷基可被選自以下的1-5個取代基取代：鹵素、三氟甲基、二氟甲基、氨基、烷基氨基、氰基、磺?；?、磺酰胺基團、亞砜基團、羥基、烷氧基、酯基團、羧酸基團、烷基硫基芳基、c3-c8環(huán)烷基、c4-c7雜環(huán)烷基、雜芳基烷基和雜芳基；

每個r^a獨立為h或c1-c6烷基；且

p是1、2、3或4。

本申請也涉及由下式表示的式(i)(a1)的抗體-綴合物：

其中

r¹是c1-c6烷基-nh2、(c1-c6烷基)nhc(nh)nh2或(c1-c6烷基)nhc(o)nh2；且

p是1、2、3或4。

本申請也涉及由下式表示的式(i)(b1)的抗體-綴合物：

其中

p是1、2、3或4；

r¹是c1-c6烷基-nh2、(c1-c6烷基)nhc(nh)nh2或(c1-c6烷基)nhc(o)nh2；且

r⁴和r⁵各自獨立為c1-c6烷基，其中所述烷基是未取代的，或r⁴和r⁵可形成c3-c7環(huán)烷基環(huán)。

本申請也涉及由下式表示的式(i)(c1)的抗體-綴合物：

其中

r¹是c1-c6烷基-nh2、(c1-c6烷基)nhc(nh)nh2或(c1-c6烷基)nhc(o)nh2；且

p是1、2、3或4。

在一個實施方案中，ab—(l—d)p是式(ii)的化學部分：

在一個實施方案中，ab—(l—d)p是式(iii)：

本申請也涉及式(i)、(i)(a1)、(i)(a2)的抗體-綴合物，其中y是雜芳基、芳基或烯基；且r⁶是c1-c10亞烷基。

本申請也涉及式(i)、(i)(a1)、(i)(a2)的抗體-綴合物，其中y是

本申請也涉及上述抗體-綴合物中的任何一種，其中y是

本申請也涉及上述抗體-綴合物中的任何一種，其中y是

本申請也涉及上述抗體-綴合物中的任何一種，其中

str是由下式表示的化學部分：

其中r⁶選自c1-c10亞烷基、c2-c10烯基、c3-c8環(huán)烷基、(c1-c8亞烷基)o-和c1-c10亞烷基-c(o)n(r^a)-c2-c6亞烷基，其中每個亞烷基可被選自以下的1-5個取代基取代：鹵素、三氟甲基、二氟甲基、氨基、烷基氨基、氰基、磺?；⒒酋０坊鶊F、亞砜基團、羥基、烷氧基、酯基團、羧酸基團、烷基硫基芳基、c3-c8環(huán)烷基、c4-c7雜環(huán)烷基、雜芳基烷基和雜芳基；且

每個r^a獨立為h或c1-c6烷基。

本申請也涉及上述抗體-綴合物中的任何一種，其中str具有下式：

其中r⁷選自c1-c10亞烷基、c2-c10烯基、(c1-c10亞烷基)o-、n(r^c)-(c2-c6亞烷基)-n(r^c)和n(r^c)-(c2-c6亞烷基)；且

每個r^c獨立為h或c1-c6烷基。

本申請也涉及上述抗體-綴合物中的任何一種，其中

str是由下式表示的化學部分：

且

r⁶是c1-c6亞烷基。

連接基-藥物

本申請也涉及式l—d的化合物，其由下式表示：

—str—(pep)—sp—d

str是與ab共價連接的伸展基單元；

pep是連接基；

d是由下式表示的抗腫瘤抗生素藥物：

其中r²⁰和r³⁰各自獨立為c1-c6烷基，且

r¹⁰是非氫取代基；或

r³⁰是c1-c6烷基，且r¹⁰和r²⁰與n一起形成取代的c3-c7雜環(huán)烷基環(huán)；或

r³⁰不存在，且r¹⁰和r²⁰與n一起形成取代的雜芳基環(huán)；且

sp—d是下式的化學部分：

本申請也涉及下式的非肽化合物：

其中

str是可與抗體共價連接的伸展基單元；

y是雜芳基、芳基、-c(o)c2-c6烯基、c2-c6烯基或-c2-c6烯基-nh-；

r¹是c1-c10烷基、(c1-c10烷基)nhc(nh)nh2或(c1-c10烷基)nhc(o)nh2；

r³和r²各自獨立為h、c1-c10烷基、芳基烷基或雜芳基烷基，或r³和r²一起可形成c3-c7環(huán)烷基；且

d是藥物。

本申請也涉及由下式表示的非肽化合物：

其中r6是c1-c10亞烷基。

本申請也涉及由下式表示的非肽化合物：

本申請也涉及下式的非肽化合物：

其中

str是可與抗體共價連接的伸展基單元；

r¹是c1-c10烷基、(c1-c10烷基)nhc(nh)nh2或(c1-c10烷基)nhc(o)nh2；且

r⁴和r⁵各自獨立為c1-c10烷基、芳基烷基、雜芳基烷基、(c1-c10烷基)och2-，或r⁴和r⁵可形成c3-c7環(huán)烷基環(huán)。

本申請也涉及由下式表示的非肽化合物：

其中r6是c1-c10亞烷基；且r⁴和r⁵一起形成c3-c7環(huán)烷基環(huán)。

本申請也涉及由下式表示的非肽化合物：

本申請也涉及下式的化合物：

其中het是任選取代的雜芳基。

本申請也涉及下式的化合物：

其中q是0-5；且r¹¹是no2或cn。

本申請也涉及下式的化合物：

本申請也涉及下式的化合物：

本申請也涉及上述式(i)(a1)(ld)、(i)(a2)(ld)、(i)(a3)(ld)、(i)(b1)(ld)、(i)(b2)(ld)、(i)(b3)(ld)、(ii)(a1)(ld)或(iii)(a1)(ld)的化合物中的任何一種，其中str具有下式：

其中r⁶選自c1-c10亞烷基、c3-c8環(huán)烷基、o-(c1-c8亞烷基)和c1-c10亞烷基-c(o)n(r^a)-c2-c6亞烷基，其中每個亞烷基可被選自以下的1-5個取代基取代：鹵素、三氟甲基、二氟甲基、氨基、烷基氨基、氰基、磺?；⒒酋０坊鶊F、亞砜基團、羥基、烷氧基、酯基團、羧酸基團、烷基硫基芳基、c3-c8環(huán)烷基、c4-c7雜環(huán)烷基和雜芳基；

每個r^a獨立為h或c1-c6烷基；

sp是—ar—r^b—，其中ar是芳基或雜芳基；且

r^b是(c1-c10亞烷基)o-。

本申請也涉及式(i)(a1)(ld)、(i)(a2)(ld)、(i)(a3)(ld)、(i)(b1)(ld)、(i)(b2)(ld)、(i)(b3)(ld)、(ii)(a1)(ld)、(ii)(a2)(ld)、(ii)(a3)(ld)和(iv)(a1)(ld)的化合物，其中r6是c1-c10亞烷基；

sp是—ar—r^b—，其中ar是芳基；且

r^b是c1-c6亞烷基。

本申請也涉及式(i)(a1)(ld)、(i)(a2)(ld)、(i)(a3)(ld)、(i)(b1)(ld)、(i)(b2)(ld)、(i)(b3)(ld)、(ii)(a1)(ld)或(iii)(a1)(ld)的任何化合物，其中r6是-(ch2)q是1-10。

本申請也涉及式(i)(a1)(ld)、(i)(a2)(ld)、(i)(a3)(ld)、(i)(b1)(ld)、(i)(b2)(ld)、(i)(b3)(ld)、(ii)(a1)(ld)、(ii)(a2)(ld)、(ii)(a3)(ld)和(iv)(a1)(ld)的化合物，其中

str是由下式表示的化學部分：

其中r⁶選自c1-c10亞烷基、c2-c10烯基、c3-c8環(huán)烷基、(c1-c8亞烷基)o-和c1-c10亞烷基-c(o)n(r^a)-c2-c6亞烷基，其中每個亞烷基可被選自以下的1-5個取代基取代：鹵素、三氟甲基、二氟甲基、氨基、烷基氨基、氰基、磺?；?、磺酰胺基團、亞砜基團、羥基、烷氧基、酯基團、羧酸基團、烷基硫基芳基、c3-c8環(huán)烷基、c4-c7雜環(huán)烷基、雜芳基烷基和雜芳基；且

每個r^a獨立為h或c1-c6烷基。

本申請也涉及式(i)(a1)(ld)、(i)(a2)(ld)、(i)(a3)(ld)、(i)(b1)(ld)、(i)(b2)(ld)、(i)(b3)(ld)、(ii)(a1)(ld)、(ii)(a2)(ld)、(ii)(a3)(ld)和(iv)(a1)(ld)的化合物，其中str具有下式：

其中r⁷選自c1-c10亞烷基、c2-c10烯基、(c1-c10亞烷基)o-、n(r^c)-(c2-c6亞烷基)-n(r^c)和n(r^c)-(c2-c6亞烷基)；且

每個r^c獨立為h或c1-c6烷基。

本申請也涉及非肽化合物，其中r6是c1-c10亞烷基。

本申請也涉及上述抗體-藥物綴合物中的任何一種，其中p是1。

本申請也涉及上述抗體-藥物綴合物中的任何一種，其中p是2。

本申請也涉及上述抗體-藥物綴合物中的任何一種，其中所述抗體結(jié)合至選自以下的多肽中的一種或多種：

cll1；bmpr1b；e16；steap1；0772p；mpf；napi2b；sema5b；pscahlg；etbr；msg783；steap2；trpm4；cripto；cd21；cd79b；fcrh2；her2；nca；mdp；il20rα；短小蛋白聚糖；ephb2r；aslg659；psca；geda；baff-r；cd22；cd79a；cxcr5；hla-dob；p2x5；cd72；ly64；fcrh1；irta2；tenb2；pmel17；tmeff1；gdnf-ra1；ly6e；tmem46；ly6g6d；lgr5；ret；ly6k；gpr19；gpr54；asphd1；酪氨酸酶；tmem118；gpr172a；muc16；和cd33。

本申請也涉及在有此需要的人類中治療疾病的方法，其包括向所述人類施用有效量的上述實施方案中的任何一個的抗體-藥物綴合物。

本申請也涉及藥物組合物，其包含上述實施方案中的任何一個的抗體-藥物綴合物及其藥用載體。

本申請也涉及上述抗體-藥物綴合物中的任何一種，其中所述抗體結(jié)合至選自以下的多肽中的一種或多種：

cll1；steap1；napi2b；steap2；trpm4；cripto；cd21；cd79b；fcrh2；her2；cd22；cd79a；cd72；ly64；ly6e；muc16；和cd33。

本申請也涉及上述抗體-藥物綴合物中的任何一種，其中所述抗體結(jié)合至cd33。

本申請也涉及上述抗體-藥物綴合物中的任何一種，其中所述抗體結(jié)合至cd33，且所述抗cd33抗體包含含有seqidno:11的氨基酸序列的hvr-l1、含有seqidno:12的氨基酸序列的hvr-l2、含有seqidno:13的氨基酸序列的hvr-l3、含有seqidno:14的氨基酸序列的hvr-h1、含有seqidno:15的氨基酸序列的hvr-h2和含有seqidno:16的氨基酸序列的hvr-h3。

本申請也涉及上述抗體-藥物綴合物中的任何一種，其中所述抗體結(jié)合至cd33，且所述抗cd33抗體包含含有seqidno:17的氨基酸序列的vl結(jié)構(gòu)域和含有seqidno:18的氨基酸序列的vh結(jié)構(gòu)域。

在一些實施方案中，所述抗體-藥物綴合物的抗體結(jié)合cd33。在一些實施方案中，所述抗體-藥物綴合物的抗體包含(a)含有seqidno:22的氨基酸序列的hvr-h1；(b)含有seqidno:23的氨基酸序列的hvr-h2；(c)含有seqidno:24的氨基酸序列的hvr-h3；(d)含有seqidno:19的氨基酸序列的hvr-l1；(e)含有seqidno:20的氨基酸序列的hvr-l2；和(f)含有選自seqidno:21的氨基酸序列的hvr-l3。

在一些實施方案中，所述抗體包含上述實施方案中的任何一個的vh和上述實施方案中的任何一個的vl。在一個實施方案中，所述抗體包含seqidno:25和seqidno:26中相應的vl和vh序列，包括那些序列的翻譯后修飾。

本申請也涉及上述抗體-藥物綴合物中的任何一種，其中所述抗體結(jié)合至napi2b。

本申請也涉及上述抗體-藥物綴合物中的任何一種，其中所述抗體結(jié)合至napi2b，且所述napi2b抗體包含含有seqidno:1的氨基酸序列的hvr-l1、含有seqidno:2的氨基酸序列的hvr-l2、含有seqidno:3的氨基酸序列的hvr-l3、含有seqidno:4的氨基酸序列的hvr-h1、含有seqidno:5的氨基酸序列的hvr-h2和含有seqidno:6的氨基酸序列的hvr-h3。

本申請也涉及上述抗體-藥物綴合物中的任何一種，其中所述抗體結(jié)合至napi2b，且所述napi2b抗體包含含有seqidno:7的氨基酸序列的vl結(jié)構(gòu)域和含有seqidno:8的氨基酸序列的vh結(jié)構(gòu)域。

本申請也涉及上述抗體-藥物綴合物中的任何一種，其中所述抗體結(jié)合至napi2b，且所述napi2b抗體包含seqidno:9的氨基酸序列和seqidno:10的氨基酸序列。

本申請也涉及上述抗體-藥物綴合物中的任何一種，其中所述抗體結(jié)合至napi2b。

本申請也涉及上述抗體-藥物綴合物中的任何一種，其中所述抗體結(jié)合至cd-22，且所述抗cd-22抗體包含含有seqidno:41的氨基酸序列的hvr-l1、含有seqidno:42的氨基酸序列的hvr-l2、含有seqidno:43的氨基酸序列的hvr-l3、含有seqidno:44的氨基酸序列的hvr-h1、含有seqidno:45的氨基酸序列的hvr-h2和含有seqidno:46的氨基酸序列的hvr-h3。

本申請也涉及上述抗體-藥物綴合物中的任何一種，其中所述抗體結(jié)合至cd-22，且所述cd-22抗體包含含有seqidno:47的氨基酸序列的vl結(jié)構(gòu)域和含有seqidno:48的氨基酸序列的vh結(jié)構(gòu)域。

本申請也涉及上述抗體-藥物綴合物中的任何一種，其中所述抗體結(jié)合至cd-22，且所述cd-22抗體包含seqidno:49的氨基酸序列和seqidno:50的氨基酸序列。

定義

除非另有說明，否則本申請使用的以下術(shù)語和短語意在具有以下含義。當本申請使用商品名稱時，申請人意在獨立包括商品名稱產(chǎn)品制劑、通用名稱藥物和商品名稱產(chǎn)品的活性藥物成分。

本申請使用的術(shù)語“肽模擬物”或pm是指非肽化學部分。肽是氨基酸單體通過肽(酰胺)鍵(即當一個氨基酸的羧基與另一個氨基酸的氨基反應時形成的共價化學鍵)連接的短鏈。最短的肽是由通過一個肽鍵連接的2個氨基酸構(gòu)成的二肽，然后是三肽、四肽等。季胺化學部分包括非氨基酸化學部分。季胺化學部分也可包括被一個或多個非氨基酸化學單元隔開的一個或多個氨基酸。季胺化學部分在其化學結(jié)構(gòu)的任何部分中都不含有通過肽鍵連接的兩個或更多個相鄰的氨基酸。

本申請使用的術(shù)語“氨基酸”是指甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸、賴氨酸、精氨酸、組氨酸、色氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺或瓜氨酸。

本申請中的術(shù)語“抗體”以最廣泛的含義使用且具體涵蓋單克隆抗體、多克隆抗體、二聚體、多聚體、多特異性抗體(例如雙特異性抗體)和抗體片段，只要它們顯示出所需要的生物活性(miller等人(2003)jour.ofimmunology170:4854-4861)?？贵w可為鼠類、人類、人源化、嵌合或衍生自其它物種?？贵w是免疫系統(tǒng)產(chǎn)生的能夠識別和結(jié)合至特異性抗原的蛋白質(zhì)。(janeway,c.,travers,p.,walport,m.,shlomchik(2001)immunobiology,第5版,garlandpublishing,newyork)。靶抗原通常具有多個被多種抗體上的cdr識別的結(jié)合位點(也稱為表位)。特異性結(jié)合至不同表位的每種抗體具有不同的結(jié)構(gòu)。因此，一種抗原可具有多于一種的相應抗體?？贵w包括全長免疫球蛋白分子或全長免疫球蛋白分子的免疫活性部分即含有免疫特異性結(jié)合具體靶標的抗原或其部分的抗原結(jié)合位點的分子，上述靶標包括但不限于不限于癌細胞或產(chǎn)生與自身免疫疾病相關(guān)的自身免疫抗體的細胞。本申請公開的免疫球蛋白可為任何類型(例如igg、ige、igm、igd和iga)、免疫球蛋白分子的類別(例如igg1、igg2、igg3、igg4、iga1和iga2)或亞類。免疫球蛋白可衍生自任何物種。然而，在一個方面，免疫球蛋白是人類、鼠類或兔源性的。

本申請使用的術(shù)語“抗體片段”包含全長抗體的一部分，通常為其抗原結(jié)合區(qū)或可變區(qū)。抗體片段的實例包括fab、fab’、f(ab’)2和fv片段；雙體；線性抗體；微抗體(olafsen等人(2004)proteineng.design&sel.17(4):315-323)、由fab表達文庫產(chǎn)生的片段、抗個體基因型(抗id)抗體、cdr(互補決定區(qū))和上述任何一種的免疫特異性結(jié)合至癌細胞抗原、病毒抗原或微生物抗原的表位結(jié)合片段、單鏈抗體分子；和由抗體片段形成的多特異性抗體。

本申請使用的術(shù)語“單克隆抗體”是指由基本上同質(zhì)的抗體群獲得的抗體，即構(gòu)成所述群的各個抗體是相同的，除可能天然存在的可按很少量存在的突變外。單克隆抗體針對單一抗原位點是高度特異性的。另外，與包含針對不同決定簇(表位)的不同抗體的多克隆抗體制劑不同的是，每種單克隆抗體針對抗原上的單一決定簇。除其特異性外，單克隆抗體由于其可在未被其它抗體污染的情況下合成而是有利的。修飾詞“單克隆”表示抗體由基本上同質(zhì)的抗體群獲得的特征且不被解釋為抗體需要通過任何具體方法產(chǎn)生。例如，根據(jù)本申請使用的單克隆抗體可通過首次在kohler等人(1975)nature,256:495中描述的雜交瘤方法制備或可通過重組dna方法制備(參見例如us4816567；us5807715)。單克隆抗體也可使用例如在clackson等人(1991)nature,352:624-628；marks等人(1991)j.mol.biol.,222:581-597中描述的技術(shù)由噬菌體抗體文庫分離。

本申請中的單克隆抗體具體包括“嵌合”抗體及上述抗體的片段，其中重鏈和/或輕鏈的一部分與衍生自具體物種或?qū)儆诰唧w抗體類別或亞類的抗體中的相應序列相同或同源，而鏈的其余部分與衍生自另一個物種或?qū)儆诹硪粋€抗體類別或亞類的抗體中的相應序列相同或同源，只要它們顯示出所需要的生物活性(us4816567；和morrison等人(1984)proc.natl.acad.sci.usa,81:6851-6855)。本申請關(guān)注的嵌合抗體包括“靈長類化”抗體，其包含衍生自非人類靈長類動物(例如舊世界猴、猿等)的可變域抗原結(jié)合序列和人類恒定區(qū)序列。

本申請使用的術(shù)語“完整抗體”是包含vl和vh結(jié)構(gòu)域及輕鏈恒定域(cl)和重鏈恒定域ch1、ch2和ch3的抗體。恒定域可為天然序列恒定域(例如人天然序列恒定域)或其氨基酸序列變體。完整抗體可具有一種或多種“效應子功能”，其是指可歸因于抗體的fc恒定區(qū)(天然序列fc區(qū)或氨基酸序列變體fc區(qū))的那些生物活性。抗體效應子功能的實例包括c1q結(jié)合；補體依賴性細胞毒性；fc受體結(jié)合；由細胞介導的抗體依賴性細胞毒性(adcc)；吞噬；及細胞表面受體例如b細胞受體和bcr的下調(diào)。

本申請使用的術(shù)語“fc區(qū)”是指免疫球蛋白重鏈的含有恒定區(qū)的至少一部分的c末端區(qū)。所述術(shù)語包括天然序列fc區(qū)和變體fc區(qū)。在一個實施方案中，人igg重鏈fc區(qū)由cys226或由pro230延伸到重鏈的羧基末端。然而，fc區(qū)的c末端賴氨酸(lys447)可存在或可不存在。除非本申請另有說明，否則fc區(qū)或恒定區(qū)中的氨基酸殘基的編號符合在kabat等人,sequencesofproteinsofimmunologicalinterest,第5版,publichealthservice,nationalinstitutesofhealth,bethesda,md,1991中描述的eu編號系統(tǒng)(也稱為eu索引)。

本申請使用的術(shù)語“框架”或“fr”是指除高變區(qū)(hvr)殘基外的可變域殘基?？勺冇虻膄r通常由四個fr結(jié)構(gòu)域即fr1、fr2、fr3和fr4構(gòu)成。因此，hvr和fr序列通常在vh(或vl)中按以下順序出現(xiàn)：fr1-h1(l1)-fr2-h2(l2)-fr3-h3(l3)-fr4。完整抗體取決于其重鏈的恒定域的氨基酸序列而可歸屬于不同的“類別”。完整免疫球蛋白抗體有五種主要類別即iga、igd、ige、igg和igm，且其中幾種可進一步分為“亞類”(同工型)，例如igg1、igg2、igg3、igg4、iga和iga2。與不同類別的抗體對應的重鏈恒定域分別稱為α、δ、ε、γ和μ。不同類別的免疫球蛋白的亞基結(jié)構(gòu)和三維構(gòu)型是已知的。ig形式包括鉸鏈修飾或無鉸鏈形式(roux等人(1998)j.immunol.161:4083-4090；lund等人(2000)eur.j.biochem.267:7246-7256；us2005/0048572；us2004/0229310)。

本申請使用的術(shù)語“人抗體”是指以下抗體，其具有與由人類或人類細胞產(chǎn)生的抗體的氨基酸序列對應的氨基酸序列或由使用人抗體庫或其它人抗體編碼序列的非人類來源衍生。關(guān)于人抗體的該定義具體排除了包含非人類抗原結(jié)合殘基的人源化抗體。

本申請使用的術(shù)語“人共有框架”是指以下框架，其代表了在對人免疫球蛋白vl或vh框架序列進行的選擇中最常出現(xiàn)的氨基酸殘基。通常，從可變域序列的亞組中對人免疫球蛋白vl或vh序列進行選擇。通常，序列的亞組是kabat等人,sequencesofproteinsofimmunologicalinterest,第5版,nihpublication91-3242,bethesdamd(1991),第1-3卷中的亞組。在一個實施方案中，對于vl，亞組是上述kabat等人中的亞組κi。在一個實施方案中，對于vh，亞組是上述kabat等人中的亞組iii。

本申請使用的術(shù)語“人源化抗體”是指包含來自非人類hvr的氨基酸殘基和來自人fr的氨基酸殘基的嵌合抗體。在某些實施方案中，人源化抗體將包含基本上所有可變域(至少一個且通常兩個)，其中所有或基本上所有hvr(例如cdr)對應于非人類抗體的那些hvr，且所有或基本上所有fr對應于人抗體的那些fr。人源化抗體任選可包含衍生自人抗體的抗體恒定區(qū)的至少一部分?？贵w例如非人類抗體的“人源化形式”是指已進行人源化的抗體。

本申請使用的術(shù)語“高變區(qū)”或“hvr”是指抗體可變域的每個以下區(qū)域，其在序列中是高度可變的和/或形成結(jié)構(gòu)上限定的環(huán)(“高變環(huán)”)。通常，天然四鏈抗體包含六個hvr；vh中有三個(h1、h2、h3)，且vl中有三個(l1、l2、l3)。hvr通常包含來自高變環(huán)和/或來自“互補決定區(qū)”(cdr)的氨基酸殘基，后者具有最高的序列變異性和/或參與抗原識別。示例性高變環(huán)出現(xiàn)在氨基酸殘基26-32(l1)、50-52(l2)、91-96(l3)、26-32(h1)、53-55(h2)和96-101(h3)處。(chothia和lesk,j.mol.biol.196:901-917(1987)。示例性cdr(cdr-l1、cdr-l2、cdr-l3、cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3)出現(xiàn)在l1的氨基酸殘基24-34、l2的氨基酸殘基50-56、l3的氨基酸殘基89-97、h1的氨基酸殘基31-35b、h2的氨基酸殘基50-65和h3的氨基酸殘基95-102處。(kabat等人,sequencesofproteinsofimmunologicalinterest,第5版,publichealthservice,nationalinstitutesofhealth,bethesda,md(1991)。除vh中的cdr1外，cdr通常包含形成高變環(huán)的氨基酸殘基。cdr也包含“特異性決定殘基”或“sdr”，其為接觸抗原的殘基。sdr包含在稱為短縮cdr或a-cdr的cdr的區(qū)域中。示例性a-cdr(a-cdr-l1、a-cdr-l2、a-cdr-l3、a-cdr-h1、a-cdr-h2和a-cdr-h3)出現(xiàn)在l1的氨基酸殘基31-34、l2的氨基酸殘基50-55、l3的氨基酸殘基89-96、h1的氨基酸殘基31-35b、h2的氨基酸殘基50-58和h3的氨基酸殘基95-102處。(參見almagro和fransson,front.biosci.13:1619-1633(2008)。除非另有說明，否則本申請根據(jù)上述kabat等人對可變域中的hvr殘基和其它殘基(例如fr殘基)進行編號。

本申請使用的術(shù)語“可變區(qū)”或“可變域”是指抗體重鏈或輕鏈的參與抗體與抗原結(jié)合的結(jié)構(gòu)域。天然抗體的重鏈和輕鏈(分別為vh和vl)的可變域通常具有相似的結(jié)構(gòu)，其中每個結(jié)構(gòu)域包含四個保守框架區(qū)(fr)和三個高變區(qū)(hvr)。(參見例如kindt等人,kubyimmunology,第6版,w.h.freemanandco.,第91頁(2007)。單個vh或vl結(jié)構(gòu)域可足以賦予抗原結(jié)合特異性。另外，結(jié)合具體抗原的抗體可使用來自結(jié)合所述抗原的抗體的vh或vl結(jié)構(gòu)域來分離以分別篩選互補的vl或vh結(jié)構(gòu)域的文庫。參見例如portolano等人,j.immunol.150:880-887(1993)；clarkson等人,nature352:624-628(1991)。

本申請使用的術(shù)語“載體”是指以下核酸分子，其能夠使與其連接的另一種核酸得以傳播。所述術(shù)語包括作為自身復制核酸結(jié)構(gòu)的載體及引入到其已被引入的宿主細胞的基因組中的載體。某些載體能夠引導與它們可操作地連接的核酸的表達。上述載體在本申請中稱為“表達載體”。

本申請使用的術(shù)語“游離的半胱氨酸”是指已被工程化成親本抗體的具有硫醇官能團(-sh)的且不配對為分子內(nèi)或分子間二硫鍵的半胱氨酸殘基。

本申請使用的術(shù)語“連接基”、“連接基單元”或“連接”是指包含以下原子鏈的化學部分，所述原子鏈將藥物部分共價連接至抗體。在各個實施方案中，連接基是被指定為l的二價基團。

本申請使用的術(shù)語“藥物部分”是指抑制或阻止細胞功能和/或引起細胞死亡或破壞的物質(zhì)。細胞毒劑包括但不限于放射性同位素(例如at²¹¹、i¹³¹、i¹²⁵、y⁹⁰、re¹⁸⁶、re¹⁸⁸、sm¹⁵³、bi²¹²、p³²、pb²¹²和lu的放射性同位素)；化學治療劑或藥物(例如甲氨蝶呤、阿霉素、長春花生物堿(長春新堿、長春堿、依托泊苷)、多柔比星、美法侖、絲裂霉素c、苯丁酸氮芥、柔紅霉素或其它嵌入劑)；生長抑制劑；酶及其片段，例如溶核酶；及下述各種抗腫瘤劑或抗癌劑。

除非在權(quán)利要求中另有定義，否則本申請使用的術(shù)語“?；笔侵富鶊F-c(o)r’，其中r’是各自如本申請所定義的烷基、c3-c6環(huán)烷基或雜環(huán)基。

除非在權(quán)利要求中另有定義，否則本申請使用的術(shù)語“烷氧基”是指基團-or’，其中r’是如上定義的c1-c4烷基或c3-c6環(huán)烷基?！巴檠趸钡膶嵗籽趸?、乙氧基、異丙氧基、丙氧基、丁氧基、叔丁氧基、異丁氧基、環(huán)丙氧基和環(huán)丁氧基及其鹵化形式例如氟甲氧基和二氟甲氧基。

除非在權(quán)利要求中另有定義，否則本申請使用的術(shù)語“烷基”是指具有1-12個(c1-c12)碳原子的直鏈或支鏈的單價或二價的烴鏈基團，其可為未取代的或以多個取代度被取代，例如包括在本申請中的一個、二個、三個、四個、五個或六個。取代基的實例選自鹵素、三氟甲基、二氟甲基、氨基、烷基氨基、氰基、磺?；⒒酋０坊鶊F、亞砜基團、羥基、烷氧基、酯基團、羧酸基團和烷基硫基。本申請使用的“烷基”的實例包括但不限于甲基(me、-ch3)、乙基(et、-ch2ch3)、1-丙基(n-pr、正丙基、-ch2ch2ch3)、2-丙基(i-pr、異丙基、-ch(ch3)2)、1-丁基(n-bu、正丁基、-ch2ch2ch2ch3)、2-甲基-1-丙基(i-bu、異丁基、-ch2ch(ch3)2)、2-丁基(s-bu、仲丁基、-ch(ch3)ch2ch3)、2-甲基-2-丙基(t-bu、叔丁基、-c(ch3)3)、1-戊基(正戊基、-ch2ch2ch2ch2ch3)、2-戊基(-ch(ch3)ch2ch2ch3)、3-戊基(-ch(ch2ch3)2)、2-甲基-2-丁基(-c(ch3)2ch2ch3)、3-甲基-2-丁基(-ch(ch3)ch(ch3)2)、3-甲基-1-丁基(-ch2ch2ch(ch3)2)、2-甲基-1-丁基(-ch2ch(ch3)ch2ch3)、1-己基(-ch2ch2ch2ch2ch2ch3)、2-己基(-ch(ch3)ch2ch2ch2ch3)、3-己基(-ch(ch2ch3)(ch2ch2ch3))、2-甲基-2-戊基(-c(ch3)2ch2ch2ch3)、3-甲基-2-戊基(-ch(ch3)ch(ch3)ch2ch3)、4-甲基-2-戊基(-ch(ch3)ch2ch(ch3)2)、3-甲基-3-戊基(-c(ch3)(ch2ch3)2)、2-甲基-3-戊基(-ch(ch2ch3)ch(ch3)2)、2,3-二甲基-2-丁基(-c(ch3)2ch(ch3)2)、3,3-二甲基-2-丁基(-ch(ch3)c(ch3)3及其二價(“亞烷基”)和取代形式。取代的烷基的實例包括但不限于羥基甲基、二氟甲基和三氟甲基。

除非在權(quán)利要求中另有定義，否則本申請使用的術(shù)語“烯基”是指任何長度為2-8個碳原子(c2-c10)的具有至少一個不飽和位點即碳-碳sp²雙鍵的直鏈或支鏈的一價或二價的烴鏈基團，其中烯基可任選獨立被一個或多個以上在關(guān)于“烷基”的定義中描述的取代基取代且包括具有“順式”和“反式”取向或“e”和“z”取向的基團。烯基的實例包括但不限于乙烯基(-ch＝ch2)、丙-1-烯基(-ch＝chch3)、丙-2-烯基(-ch2ch＝ch2)、2-甲基丙-1-烯基、丁-1-烯基、丁-2-烯基、丁-3-烯基、丁-1,3-二烯基、2-甲基丁-1,3-二烯基、己-1-烯基、己-2-烯基、己-3-烯基、己-4-烯基、己-1,3-二烯基及其二價(“亞烯基”)和取代形式。

除非在權(quán)利要求中另有定義，否則本申請使用的術(shù)語“炔基”是指任何長度為2-8個碳原子(c2-c10)的具有至少一個不飽和位點即碳-碳sp叁鍵的直鏈或支鏈的一價或二價的烴基，其中炔基可任選獨立被一個或多個以上在關(guān)于烷基的定義中描述的取代基取代，炔基的實例包括但不限于乙炔基(-c≡ch)、丙-1-炔基(-c≡cch3)、丙-2-炔基(炔丙基，-ch2c≡ch)、丁-1-炔基、丁-2-炔基和丁-3-炔基及其二價(“亞炔基”)和取代形式。

除非在權(quán)利要求中另有定義，否則本申請使用的術(shù)語“烷基氨基”是指基團-nr’r”，其中r’是h、c1-c6烷基或c3-c6環(huán)烷基，且r”是c1-c6烷基或c3-c6環(huán)烷基，烷基氨基的實例包括但不限于甲基氨基、二甲基氨基、乙基氨基、二乙基氨基、丙基氨基和環(huán)丙基氨基。

除非在權(quán)利要求中另有定義，否則本申請使用的術(shù)語“酰胺”是指基團-c(o)nr’r”，其中r’和r”各自獨立為h、c1-c6烷基或c3-c6環(huán)烷基；酰胺的實例包括但不限于-c(o)nh2、-c(o)nhch3和-c(o)n(ch3)2。

除非在權(quán)利要求中另有定義，否則本申請使用的術(shù)語“芳基”是指芳烴環(huán)系。環(huán)系可為單環(huán)或稠合多環(huán)(例如二環(huán)、三環(huán)等)和取代或未取代的。在各個實施方案中，單環(huán)芳基環(huán)是c5-c10或c5-c7或c5-c6，其中這些碳數(shù)是指形成環(huán)系的碳原子的數(shù)目。c6環(huán)系即苯基環(huán)是一種芳基。在各個實施方案中，多環(huán)是二環(huán)芳基，其中二環(huán)芳基的實例包括c8-c12或c9-c10。具有10個碳原子的萘基環(huán)是多環(huán)芳基。用于芳基的取代基的實例描述在以下關(guān)于“任選取代”的定義中。

除非在權(quán)利要求中另有定義，否則本申請使用的術(shù)語“氰基”是指基團-cn。

除非在權(quán)利要求中另有定義，否則本申請使用的“環(huán)烷基”是指非芳族的取代或未取代的飽和或部分不飽和的烴環(huán)基團。取代基的實例描述在關(guān)于“任選取代”的定義中。在一個實例中，環(huán)烷基具有3-12個碳原子(c3-c12)。在其它實例中，環(huán)烷基是c3-c8、c3-c10或c5-c10。在其它實例中，作為單環(huán)的環(huán)烷基是c3-c8、c3-c6或c5-c6。在另一個實例中，作為二環(huán)的環(huán)烷基是c7-c12。在另一個實例中，作為螺環(huán)系統(tǒng)的環(huán)烷基是c5-c12。單環(huán)環(huán)烷基的實例包括環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、1-環(huán)戊-1-烯基、1-環(huán)戊-2-烯基、1-環(huán)戊-3-烯基、環(huán)己基、全氘代環(huán)己基、1-環(huán)己-1-烯基、1-環(huán)己-2-烯基、1-環(huán)己-3-烯基、環(huán)己二烯基、環(huán)庚基、環(huán)辛基、環(huán)壬基、環(huán)癸基、環(huán)十一烷基和環(huán)十二烷基。具有7-12個環(huán)原子的二環(huán)環(huán)烷基的示例性排列包括但不限于[4,4]、[4,5]、[5,5]、[5,6]或[6,6]環(huán)系。示例性橋接二環(huán)環(huán)烷基包括但不限于二環(huán)[2.2.1]庚烷、二環(huán)[2.2.2]辛烷和二環(huán)[3.2.2]壬烷。螺環(huán)環(huán)烷基的實例包括螺[2.2]戊烷、螺[2.3]己烷、螺[2.4]庚烷、螺[2.5]辛烷和螺[4.5]癸烷。

除非在權(quán)利要求中另有定義，否則本申請使用的術(shù)語“酯”是指基團-c(o)or’，其中r’是c1-c6烷基或c3-c6環(huán)烷基。

除非在權(quán)利要求中另有定義，否則本申請使用的術(shù)語“雜環(huán)”、“雜環(huán)烷基”或“雜環(huán)基”是指含有2-12個環(huán)碳原子和1-3個環(huán)雜原子的未取代和取代的單環(huán)或多環(huán)的非芳族的環(huán)系。多環(huán)環(huán)系可為稠合二環(huán)或三環(huán)、螺環(huán)或橋接的。雜原子的實例包括n、o和s，包括n-氧化物、硫氧化物和二氧化物。在一個實施方案中，環(huán)為3-8元且完全飽和或具有一個或多個不飽和度。在本定義中包括多個取代度。取代基的實例如下定義?！半s環(huán)”基團的實例包括但不限于四氫呋喃基、吡喃基、1,4-二噁烷基、1,3-二噁烷基、氧雜環(huán)戊烷基、氧雜環(huán)丁烷基、2-氧雜-6-氮雜螺[3.3]庚-6-基、哌啶基、吡咯烷基、嗎啉基、氮雜環(huán)丁烷基、哌嗪基、吡咯烷酮基、哌嗪酮基、吡唑烷基、咪唑啉基、咪唑烷基及其各種互變異構(gòu)體。

除非在權(quán)利要求中另有定義，否則本申請使用的術(shù)語“雜芳基”是指含有1-9個碳和至少一個雜原子的芳族環(huán)系。雜原子的實例包括n、o和s。雜芳基可為單環(huán)或多環(huán)和取代或未取代的。單環(huán)雜芳基可在環(huán)中具有2-6個環(huán)碳原子和1-3個環(huán)雜原子，而多環(huán)雜芳基可含有3-9個環(huán)碳原子和1-5個環(huán)雜原子。多環(huán)雜芳基環(huán)可含有稠合、螺環(huán)或橋接的環(huán)結(jié)合方式，例如二環(huán)雜芳基是一種多環(huán)雜芳基。二環(huán)雜芳基環(huán)可含有8-12個成員原子。單環(huán)雜芳基環(huán)可含有5-8個成員原子(碳和雜原子)。示例性雜芳基包括但不限于苯并呋喃基、苯并噻吩基、呋喃基、咪唑基、吲哚基、氮雜吲哚基、氮雜苯并咪唑基、苯并噁唑基、苯并噻唑基、苯并噻二唑基、苯并三唑基、苯并咪唑基、四嗪基、四唑基、異噻唑基、噁唑基、異噁唑基、吡嗪基、吡唑基、噠嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、喹啉基、喹唑啉基、喹喔啉基、三嗪基、三唑基、噻唑基和噻吩基。用于雜芳基的取代基的實例描述在以下關(guān)于“任選取代”的定義中。

除非在權(quán)利要求中另有定義，否則本申請使用的術(shù)語“芳基烷基”是指基團(芳基)c1-c3烷基。

除非在權(quán)利要求中另有定義，否則本申請使用的術(shù)語“脲”是指基團-nr’c(o)nr”，其中r’和r”各自獨立為h、c1-c6烷基或c3-c6環(huán)烷基。

除非在權(quán)利要求中另有定義，否則本申請使用的術(shù)語“任選”是指隨后描述的事件可發(fā)生或可不發(fā)生且包括發(fā)生的事件和不發(fā)生的事件。

除非另有定義，否則本申請使用的短語“任選取代”、“取代”或其變體是指任選被一個或多個例如一個、兩個或三個取代基取代，包括多個取代度。所述短語不應被解釋為對本申請描述和描繪的取代的重復。示例性任選取代基包括酰基、c1-c6烷基、磺?；?、氨基、磺酰胺基團、亞砜基團、烷氧基、氰基、鹵素、脲基團、酯基團、羧酸基團、酰胺基團、羥基、氧代和硝基。

除非在權(quán)利要求中另有定義，否則本申請使用的術(shù)語“治療”是指緩解所述病癥，消除或減少所述病癥的一種或多種癥狀，減緩或消除所述病癥的進展。

除非在權(quán)利要求中另有定義，否則本申請使用的術(shù)語“有效量”是指藥物或藥劑的以下量，其將引起組織、系統(tǒng)、動物或人類的生物或醫(yī)藥響應，而這是例如研究人員或臨床醫(yī)生所尋求的。

除非在權(quán)利要求中另有定義，否則本申請使用的術(shù)語“治療有效量”是指以下任何量，其與未接受上述量的相應受試者相比實現(xiàn)對疾病、病癥或副作用的治療或降低疾病或病癥的進展速率。所述術(shù)語在其范圍內(nèi)也包括可有效增強正常生理功能的量。為了在療法中使用，治療有效量的式i的化合物及其鹽可按原料化學品形式施用。另外，活性成分可按藥物組合物形式提供。

本申請也涉及實驗部分中的任何一個實施例。

本申請使用的術(shù)語“藥用鹽”是指抗體-藥物綴合物(adc)或連接基-藥物部分的藥用有機或無機鹽。示例性鹽包括但不限于硫酸鹽、檸檬酸鹽、乙酸鹽、草酸鹽、氯化物、溴化物、碘化物、硝酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸鹽、酸式磷酸鹽、異煙酸鹽、乳酸鹽、水楊酸鹽、酸式檸檬酸鹽、酒石酸鹽、油酸鹽、鞣酸鹽、泛酸鹽、酒石酸氫鹽、抗壞血酸鹽、琥珀酸鹽、馬來酸鹽、龍膽酸鹽、富馬酸鹽、葡糖酸鹽、葡糖醛酸鹽、糖酸鹽、甲酸鹽、苯甲酸鹽、谷氨酸鹽、甲磺酸鹽、乙磺酸鹽、苯磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽和雙羥萘酸鹽(即1,1’-亞甲基-二(2-羥基-3-萘甲酸鹽))。藥用鹽可包含另一種分子例如乙酸根離子、琥珀酸根離子或其它抗衡離子。抗衡離子可為使母體化合物上的電荷得以穩(wěn)定的任何有機或無機部分。另外，藥用鹽在其結(jié)構(gòu)中可具有多于一個荷電原子。當多個荷電原子是藥用鹽的一部分時，可具有多個抗衡離子。因此，藥用鹽可具有一個或多個荷電原子和/或一個或多個抗衡離子。

非藥用的其它鹽可用于制備本申請化合物，且這些鹽應被認為構(gòu)成本申請另一個方面。這些鹽例如草酸鹽或三氟乙酸鹽雖然本身不是藥用的，但是可用于制備可用作獲得本申請化合物及其藥用鹽的中間體的鹽。

本申請化合物可按固體或液體形式存在。在固體狀態(tài)下，其可按結(jié)晶或非結(jié)晶形式存在或按其混合物形式存在。技術(shù)人員將認識到的是，對于結(jié)晶或非結(jié)晶化合物來說，可形成藥用溶劑化物。在結(jié)晶溶劑化物中，溶劑分子在結(jié)晶過程中進到晶格中。溶劑化物可涉及非水溶劑例如但不限于乙醇、異丙醇、dmso、乙酸、乙醇胺或乙酸乙酯或可涉及水作為進到晶格中的溶劑。其中水是進到晶格中的溶劑的溶劑化物通常稱為“水合物”。水合物包括化學計量的水合物及含有可變量的水的組合物。本申請包括所有上述溶劑化物。

技術(shù)人員還將認識到的是，以結(jié)晶形式存在的包括其各種溶劑化物在內(nèi)的本申請某些化合物可顯示出多態(tài)性(即以不同結(jié)晶結(jié)構(gòu)出現(xiàn)的能力)。這些不同的結(jié)晶形式通常稱為“多晶型物”。本申請包括所有上述多晶型物。多晶型物具有相同的化學組成，但是在結(jié)晶固態(tài)的堆積、幾何排列和其它描述性性質(zhì)方面是不同的。因此，多晶型物可具有不同的物理性質(zhì)，例如形狀、密度、硬度、可變形性、穩(wěn)定性和溶解性。多晶型物通常顯示出不同的熔點、ir光譜和x射線粉末衍射圖，其可用于鑒定。技術(shù)人員將認識到的是，不同的多晶型物可例如通過改變或調(diào)節(jié)用于制備化合物的反應條件或試劑來產(chǎn)生。例如，溫度、壓力或溶劑的變化可導致多晶型物。另外，一種多晶型物可在某些條件下自發(fā)地轉(zhuǎn)化成另一種多晶型物。

本申請化合物或其鹽可按立體異構(gòu)形式存在(例如其含有一個或多個不對稱碳原子)。單獨的立體異構(gòu)體(對映異構(gòu)體和非對映異構(gòu)體)及其混合物包括在本申請范圍內(nèi)。類似地，應理解的是，式(i)的化合物或鹽可按與式(i)所示不同的互變異構(gòu)形式存在，且這些也包括在本申請范圍內(nèi)。應理解的是，本申請包括上述具體組的所有組合和子集。本申請范圍包括立體異構(gòu)體的混合物及純化的對映異構(gòu)體或富含對映異構(gòu)體/非對映異構(gòu)體的混合物。應理解的是，本申請包括上述具體組的所有組合和子集。

本申請也包括本申請化合物的同位素標記形式，其中一個或多個原子被替代為原子質(zhì)量或質(zhì)量數(shù)與通常在自然界中發(fā)現(xiàn)的原子質(zhì)量或質(zhì)量數(shù)不同的原子。可引入到本申請化合物及其藥用鹽中的同位素的實例包括氫、碳、氮、氧、磷、硫、氟、碘和氯的同位素，例如²h、³h、¹¹c、¹³c、¹⁴c、¹⁵n、¹⁷o、¹⁸o、³¹p、³²p、³⁵s、¹⁸f、³⁶cl、¹²³i和¹²⁵i。

含有上述同位素和/或其它原子的其它同位素的本申請化合物和所述化合物的藥用鹽在本申請范圍內(nèi)。經(jīng)同位素標記的本申請化合物例如引入有放射性同位素例如³h、¹⁴c的那些本申請化合物可用于藥物和/或底物組織分布測定。氚即³h和碳-14即¹⁴c同位素由于其易于制備和檢測而經(jīng)常使用。¹¹c和¹⁸f同位素可用于pet(正電子發(fā)射斷層掃描術(shù))，且¹²⁵i同位素可用于spect(單光子發(fā)射計算機斷層掃描術(shù))，都可用于腦成像。另外，用較重的同位素例如氘即²h進行的替代可提供由于較大的代謝穩(wěn)定性而帶來的某些治療優(yōu)點例如增加的體內(nèi)半衰期或降低的劑量需求且因此在一些情況下可為優(yōu)選的。經(jīng)同位素標記的本申請式i的化合物和以下化合物通?？扇缦轮苽洌和ㄟ^用容易獲得的經(jīng)同位素標記的試劑替代未經(jīng)同位素標記的試劑來進行在以下方案和/或?qū)嵤├泄_的方法。

adc的藥物組合物

本申請治療性抗體-藥物綴合物(adc)的藥物制劑通常用藥用胃腸外媒介物制備成用于胃腸外給藥即推注、靜脈內(nèi)注射、腫瘤內(nèi)注射且呈單位劑量注射用形式。具有所需純度的抗體-藥物綴合物(adc)任選與藥用稀釋劑、載體、賦形劑或穩(wěn)定劑(remington’spharmaceuticalsciences(1980)第16版,osol,a.編輯)混合成凍干制劑或水性溶液劑形式。

半胱氨酸工程化抗體

本申請化合物包括抗體-藥物綴合物，其包含半胱氨酸工程化抗體，其中野生型或親本抗體的一個或多個氨基酸被半胱氨酸置換。任何形式的抗體可如此工程化即突變。例如，可對親本fab抗體片段進行工程化以形成半胱氨酸工程化fab，其在本申請中稱為“thiofab”。類似地，可對親本單克隆抗體進行工程化以形成“thiomab”。應注意的是，單位點突變在thiofab中產(chǎn)生一個工程化半胱氨酸殘基，而單位點突變在thiomab中由于igg抗體的二聚體性質(zhì)而產(chǎn)生兩個工程化半胱氨酸殘基。針對新引入的工程化半胱氨酸巰基的反應性對具有所置換(“工程化”)的半胱氨酸(cys)殘基的突變體進行評估。巰基反應性值是范圍為0至1.0的相對數(shù)值且可針對任何半胱氨酸工程化抗體進行測量。本申請半胱氨酸工程化抗體的巰基反應性值為0.6至1.0、0.7至1.0或0.8至1.0。為了通過致突變來制備半胱氨酸工程化抗體，通過本領(lǐng)域已知的多種方法來制備對起始多肽的氨基酸序列變體進行編碼的dna。這些方法包括但不限于通過對先前制備的編碼多肽的dna進行由位點引導(或由寡核苷酸介導)的致突變、pcr致突變和盒式致突變來制備。重組抗體的變體也可通過限制性片段操作或通過用合成的寡核苷酸進行重疊延伸pcr來構(gòu)建。致突變引物編碼半胱氨酸密碼子置換。標準致突變技術(shù)可用于產(chǎn)生編碼上述突變型半胱氨酸工程化抗體的dna。一般指導可參見sambrook等人,molecularcloning,alaboratorymanual,coldspringharborlaboratorypress,coldspringharbor,n.y.,1989；和ausubel等人,currentprotocolsinmolecularbiology,greenepublishingandwiley-interscience,newyork,n.y.,1993。

可將半胱氨酸工程化在抗體的反應性位點且不形成鏈內(nèi)或分子間二硫鍵(junutula等人,2008bnaturebiotech.,26(8):925-932；dornan等人(2009)blood114(13):2721-2729；us7521541；us7723485；wo2009/052249，shen等人(2012)naturebiotech.,30(2):184-191；junutula等人(2008)jourofimmun.methods332:41-52)。工程化半胱氨酸巰基可與具有巰基反應性親電基團例如馬來酰亞胺或α-鹵代酰胺的本申請連接基試劑或連接基-藥物中間體反應以形成具有半胱氨酸工程化抗體(thiomabs)和藥物(d)部分的adc。因此，可設(shè)計、控制和知曉藥物部分的位置?？煽刂扑幬镓撦d，這是因為工程化半胱氨酸巰基通常以高收率與巰基反應性連接基試劑或連接基-藥物中間體反應。通過在重鏈或輕鏈上的一個位點進行置換對抗體進行工程化以引入半胱氨酸而在對稱抗體上得到兩個新的半胱氨酸?？蓪崿F(xiàn)近2的藥物負載，且綴合產(chǎn)物adc具有近同質(zhì)性。

本申請半胱氨酸工程化抗體優(yōu)選保留對其野生型親本抗體對應物的抗原結(jié)合能力。因此，半胱氨酸工程化抗體能夠與抗原優(yōu)選特異性結(jié)合。上述抗原包括例如腫瘤相關(guān)抗原(taa)、細胞表面受體蛋白和其它細胞表面分子、跨膜蛋白、信號傳導蛋白、細胞存活調(diào)節(jié)因子、細胞增殖調(diào)節(jié)因子、與組織發(fā)育或分化相關(guān)(例如已知或懷疑在功能上促進組織發(fā)育或分化)的分子、淋巴因子、細胞因子、參與細胞周期調(diào)節(jié)的分子、涉及血管發(fā)生的分子和與血管發(fā)生相關(guān)(例如已知或懷疑在功能上促進血管發(fā)生)的分子。腫瘤相關(guān)抗原可為簇分化因子(即cd蛋白)。半胱氨酸工程化抗體能夠結(jié)合的抗原可為上述類別之一的子集的成員，其中所述類別的其它子集包括具有獨特特征(就所關(guān)注的抗原而言)的其它分子/抗原。

制備半胱氨酸工程化抗體以通過對鏈內(nèi)二硫化物基團進行還原和再氧化而與連接基-藥物中間體綴合。

腫瘤相關(guān)抗原

可在治療癌癥中用于本申請抗體-藥物綴合物的抗體(包括但不限于半胱氨酸工程化抗體)包括但不限于針對細胞表面受體和腫瘤相關(guān)抗原(taa)的抗體。某些腫瘤相關(guān)抗原是本領(lǐng)域已知的且可使用本領(lǐng)域已知的方法和信息來制備以用于產(chǎn)生抗體。為了發(fā)現(xiàn)用于癌癥診斷和治療的有效細胞靶標，研究人員已試圖鑒定與一種或多種正常非癌細胞相比在一種或多種具體類型的癌細胞的表面上特異性表達的跨膜腫瘤相關(guān)多肽或其它腫瘤相關(guān)多肽。通常，與非癌細胞的表面相比，上述腫瘤相關(guān)多肽在癌細胞的表面上較豐富地表達。對上述腫瘤相關(guān)細胞表面抗原多肽的鑒定已能夠通過基于抗體的療法較特異性地靶向于癌細胞以進行破壞。

腫瘤相關(guān)抗原taa的實例包括但不限于下列那些。為了方便起見，以下列出了與這些抗原相關(guān)的都是本領(lǐng)域已知的信息且遵循nationalcenterforbiotechnologyinformation(ncbi)的核酸和蛋白質(zhì)序列鑒定協(xié)約包括名稱、替代名稱、genbank登錄號和主要參考文獻。與下列taa對應的核酸和蛋白質(zhì)序列可在公共數(shù)據(jù)庫例如genbank中獲得?？贵w所靶向的腫瘤相關(guān)抗原包括以下所有氨基酸序列變體和同工型，其與在所引用的參考文獻中鑒定的序列具有至少約70％、80％、85％、90％或95％序列同一性和/或顯示出與具有在所引用的參考文獻中發(fā)現(xiàn)的序列的taa基本上相同的生物性質(zhì)或特征。例如，具有變體序列的taa通常能夠與以下抗體特異性結(jié)合，所述抗體與具有所列相應序列的taa特異性結(jié)合。本申請具體記載的參考文獻中的序列和內(nèi)容通過引用明確地并入本申請。

(1)bmpr1b(骨形態(tài)發(fā)生蛋白受體ib型,genbank登錄號nm_001203)

tendijke,p.等人,science264(5155):101-104(1994),oncogene14(11):1377-1382(1997)；wo2004063362(權(quán)利要求2)；wo2003042661(權(quán)利要求12)；us2003134790a1(第38-39頁)；wo2002102235(權(quán)利要求13；第296頁)；wo2003055443(第91-92頁)；wo200299122(實施例2；第528-530頁)；wo2003029421(權(quán)利要求6)；wo2003024392(權(quán)利要求2；圖112)；wo200298358(權(quán)利要求1；第183頁)；wo200254940(第100-101頁)；wo200259377(第349-350頁)；wo200230268(權(quán)利要求27；第376頁)；wo200148204(實施例；圖4)

np_001194骨形態(tài)發(fā)生蛋白受體ib型/pid＝np_001194.1-

交叉引用:mim:603248；np_001194.1；ay065994

(2)e16(lat1,slc7a5,genbank登錄號nm_003486)

biochem.biophys.res.commun.255(2),283-288(1999),nature395(6699):288-291(1998),gaugitsch,h.w.等人(1992)j.biol.chem.267(16):11267-11273；wo2004048938(實施例2)；wo2004032842(實施例iv)；wo2003042661(權(quán)利要求12)；wo2003016475(權(quán)利要求1)；wo200278524(實施例2)；wo200299074(權(quán)利要求19；第127-129頁)；wo200286443(權(quán)利要求27；第222,393頁)；wo2003003906(權(quán)利要求10；第293頁)；wo200264798(權(quán)利要求33；第93-95頁)；wo200014228(權(quán)利要求5；第133-136頁)；us2003224454(圖3)；wo2003025138(權(quán)利要求12；第150頁)；

np_003477溶質(zhì)載體家族7(陽離子氨基酸轉(zhuǎn)運蛋白,y+系統(tǒng)),成員5/pid＝np_003477.3-智人

交叉引用:mim:600182；np_003477.3；nm_015923；nm_003486_1

(3)steap1(前列腺6跨膜上皮抗原,genbank登錄號nm_012449)

cancerres.61(15),5857-5860(2001),hubert,r.s.等人(1999)proc.natl.acad.sci.u.s.a.96(25):14523-14528；wo2004065577(權(quán)利要求6)；wo2004027049(圖1l)；ep1394274(實施例11)；wo2004016225(權(quán)利要求2)；wo2003042661(權(quán)利要求12)；us2003157089(實施例5)；us2003185830(實施例5)；us2003064397(圖2)；wo200289747(實施例5；第618-619頁)；wo2003022995(實施例9；圖13a,實施例53；第173頁,實施例2；圖2a)；

np_036581前列腺六跨膜上皮抗原

交叉引用:mim:604415；np_036581.1；nm_012449_1

(4)0772p(ca125,muc16,genbank登錄號af361486)

j.biol.chem.276(29):27371-27375(2001)；wo2004045553(權(quán)利要求14)；wo200292836(權(quán)利要求6；圖12)；wo200283866(權(quán)利要求15；第116-121頁)；us2003124140(實施例16)；交叉引用:gi:34501467；aak74120.3；af361486_1

(5)mpf(mpf,msln,smr,巨核細胞增強因子,間皮素,genbank登錄號nm_005823)yamaguchi,n.等人,biol.chem.269(2),805-808(1994),proc.natl.acad.sci.u.s.a.96(20):11531-11536(1999),proc.natl.acad.sci.u.s.a.93(1):136-140(1996),j.biol.chem.270(37):21984-21990(1995)；wo2003101283(權(quán)利要求14)；(wo2002102235(權(quán)利要求13；第287-288頁)；wo2002101075(權(quán)利要求4；第308-309頁)；wo200271928(第320-321頁)；wo9410312(第52-57頁)；交叉引用:mim:601051；np_005814.2；nm_005823_1

(6)napi2b(napi-3b,nptiib,slc34a2,溶質(zhì)載體家族34(磷酸鈉),成員2,ii型鈉依賴性磷酸轉(zhuǎn)運蛋白3b,genbank登錄號nm_006424)

j.biol.chem.277(22):19665-19672(2002),genomics62(2):281-284(1999),feild,j.a.等人(1999)biochem.biophys.res.commun.258(3):578-582)；wo2004022778(權(quán)利要求2)；ep1394274(實施例11)；wo2002102235(權(quán)利要求13；第326頁)；ep875569(權(quán)利要求1；第17-19頁)；wo200157188(權(quán)利要求20；第329頁)；wo2004032842(實施例iv)；wo200175177(權(quán)利要求24；第139-140頁)；

交叉引用:mim:604217；np_006415.1；nm_006424_1

(7)sema5b(flj10372,kiaa1445,mm.42015,sema5b,semag,信號素5bhlog,sema結(jié)構(gòu)域,7凝血酶敏感蛋白重復(1型和1型樣),跨膜結(jié)構(gòu)域(tm)和短胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域,(信號素)5b,genbank登錄號ab040878)

nagaset.等人(2000)dnares.7(2):143-150；wo2004000997(權(quán)利要求1)；wo2003003984(權(quán)利要求1)；wo200206339(權(quán)利要求1；第50頁)；wo200188133(權(quán)利要求1；第41-43,48-58頁)；wo2003054152(權(quán)利要求20)；wo2003101400(權(quán)利要求11)；

登錄:q9p283；embl；ab040878；baa95969.1.genew；hgnc:10737；

(8)pscahlg(2700050c12rik,c530008o16rik,rikencdna2700050c12,rikencdna2700050c12基因,genbank登錄號ay358628)；ross等人(2002)cancerres.62:2546-2553；us2003129192(權(quán)利要求2)；us2004044180(權(quán)利要求12)；us2004044179(權(quán)利要求11)；us2003096961(權(quán)利要求11)；us2003232056(實施例5)；wo2003105758(權(quán)利要求12)；us2003206918(實施例5)；ep1347046(權(quán)利要求1)；wo2003025148(權(quán)利要求20)；

交叉引用:gi:37182378；aaq88991.1；ay358628_1

(9)etbr(內(nèi)皮縮血管肽b型受體,genbank登錄號ay275463)；

nakamutam.等人,biochem.biophys.res.commun.177,34-39,1991；ogaway.等人,biochem.biophys.res.commun.178,248-255,1991；araih.等人,jpn.circ.j.56,1303-1307,1992；araih.等人,j.biol.chem.268,3463-3470,1993；sakamotoa.,yanagisawam.等人,biochem.biophys.res.commun.178,656-663,1991；elshourbagyn.a.等人,j.biol.chem.268,3873-3879,1993；haendlerb.等人,j.cardiovasc.pharmacol.20,s1-s4,1992；tsutsumim.等人,gene228,43-49,1999；strausbergr.l.等人,proc.natl.acad.sci.u.s.a.99,16899-16903,2002；bourgeoisc.等人,j.clin.endocrinol.metab.82,3116-3123,1997；okamotoy.等人,biol.chem.272,21589-21596,1997；verheijj.b.等人,am.j.med.genet.108,223-225,2002；hofstrar.m.w.等人,eur.j.hum.genet.5,180-185,1997；puffenbergere.g.等人,cell79,1257-1266,1994；attiet.等人,hum.mol.genet.4,2407-2409,1995；auricchioa.等人,hum.mol.genet.5:351-354,1996；amielj.等人,hum.mol.genet.5,355-357,1996；hofstrar.m.w.等人,nat.genet.12,445-447,1996；svenssonp.j.等人,hum.genet.103,145-148,1998；fuchss.等人,mol.med.7,115-124,2001；pingaultv.等人(2002)hum.genet.111,198-206；wo2004045516(權(quán)利要求1)；wo2004048938(實施例2)；wo2004040000(權(quán)利要求151)；wo2003087768(權(quán)利要求1)；wo2003016475(權(quán)利要求1)；wo2003016475(權(quán)利要求1)；wo200261087(圖1)；wo2003016494(圖6)；wo2003025138(權(quán)利要求12；第144頁)；wo200198351(權(quán)利要求1；第124-125頁)；ep522868(權(quán)利要求8；圖2)；wo200177172(權(quán)利要求1；第297-299頁)；us2003109676；us6518404(圖3)；us5773223(權(quán)利要求1a；第31-34欄)；wo2004001004；

(10)msg783(rnf124,假想蛋白flj20315,genbank登錄號nm_017763)；

wo2003104275(權(quán)利要求1)；wo2004046342(實施例2)；wo2003042661(權(quán)利要求12)；wo2003083074(權(quán)利要求14；第61頁)；wo2003018621(權(quán)利要求1)；wo2003024392(權(quán)利要求2；圖93)；wo200166689(實施例6)；

交叉引用:locusid:54894；np_060233.2；nm_017763_1

(11)steap2(hgnc_8639,ipca-1,pcanap1,stamp1,steap2,stmp,前列腺癌相關(guān)基因1,前列腺癌相關(guān)蛋白1,前列腺6跨膜上皮抗原,6跨膜前列腺蛋白,genbank登錄號af455138)

lab.invest.82(11):1573-1582(2002)；wo2003087306；us2003064397(權(quán)利要求1；圖1)；wo200272596(權(quán)利要求13；第54-55頁)；wo200172962(權(quán)利要求1；圖4b)；wo2003104270(權(quán)利要求11)；wo2003104270(權(quán)利要求16)；us2004005598(權(quán)利要求22)；wo2003042661(權(quán)利要求12)；us2003060612(權(quán)利要求12；圖10)；wo200226822(權(quán)利要求23；圖2)；wo200216429(權(quán)利要求12；圖10)；

交叉引用:gi:22655488；aan04080.1；af455138_1

(12)trpm4(br22450,flj20041,trpm4,trpm4b,瞬時受體電位陽離子通道,亞家族m,成員4,genbank登錄號nm_017636)

xu,x.z.等人,proc.natl.acad.sci.u.s.a.98(19):10692-10697(2001),cell109(3):397-407(2002),j.biol.chem.278(33):30813-30820(2003)；us2003143557(權(quán)利要求4)；wo200040614(權(quán)利要求14；第100-103頁)；wo200210382(權(quán)利要求1；圖9a)；wo2003042661(權(quán)利要求12)；wo200230268(權(quán)利要求27；第391頁)；us2003219806(權(quán)利要求4)；wo200162794(權(quán)利要求14；圖1a-d)；

交叉引用:mim:606936；np_060106.2；nm_017636_1

(13)cripto(cr,cr1,crgf,cripto,tdgf1,畸胎癌源性生長因子,genbank登錄號np_003203或nm_003212)

ciccodicola,a.等人,emboj.8(7):1987-1991(1989),am.j.hum.genet.49(3):555-565(1991))；us2003224411(權(quán)利要求1)；wo2003083041(實施例1)；wo2003034984(權(quán)利要求12)；wo200288170(權(quán)利要求2；第52-53頁)；wo2003024392(權(quán)利要求2；圖58)；wo200216413(權(quán)利要求1；第94-95,105頁)；wo200222808(權(quán)利要求2；圖1)；us5854399(實施例2；第17-18欄)；us5792616(圖2)；

交叉引用:mim:187395；np_003203.1；nm_003212_1

(14)cd21(cr2(補體受體2)或c3dr(c3d/epsteinbarr病毒受體)或hs.73792,genbank登錄號m26004)

fujisaku等人(1989)j.biol.chem.264(4):2118-2125；weisj.j.等人,j.exp.med.167,1047-1066,1988；moorem.等人,proc.natl.acad.sci.u.s.a.84,9194-9198,1987；barelm.等人,mol.immunol.35,1025-1031,1998；weisj.j.等人,proc.natl.acad.sci.u.s.a.83,5639-5643,1986；sinhas.k.等人(1993)j.immunol.150,5311-5320；wo2004045520(實施例4)；us2004005538(實施例1)；wo2003062401(權(quán)利要求9)；wo2004045520(實施例4)；wo9102536(圖9.1-9.9)；wo2004020595(權(quán)利要求1)；

登錄:p20023；q13866；q14212；embl；m26004；aaa35786.1

(15)cd79b(cd79b,cd79b,igb(免疫球蛋白相關(guān)β),b29,genbank登錄號nm_000626或11038674)

proc.natl.acad.sci.u.s.a.(2003)100(7):4126-4131,blood(2002)100(9):3068-3076,muller等人(1992)eur.j.immunol.22(6):1621-1625)；wo2004016225(權(quán)利要求2,圖140)；wo2003087768；us2004101874(權(quán)利要求1,第102頁)；wo2003062401(權(quán)利要求9)；wo200278524(實施例2)；us2002150573(權(quán)利要求5,第15頁)；us5644033；wo2003048202(權(quán)利要求1,第306和309頁)；wo99/558658；us6534482(權(quán)利要求13,圖17a/b)；wo200055351(權(quán)利要求11,第1145-1146頁)；

交叉引用:mim:147245；np_000617.1；nm_000626_1

(16)fcrh2(ifgp4,irta4,spap1a(含有sh2結(jié)構(gòu)域的磷酸酶錨定蛋白1a),spap1b,spap1c,genbank登錄號nm_030764,ay358130)

genomeres.13(10):2265-2270(2003),immunogenetics54(2):87-95(2002),blood99(8):2662-2669(2002),proc.natl.acad.sci.u.s.a.98(17):9772-9777(2001),xu,m.j.等人(2001)biochem.biophys.res.commun.280(3):768-775；wo2004016225(權(quán)利要求2)；wo2003077836；wo200138490(權(quán)利要求5；圖18d-1-18d-2)；wo2003097803(權(quán)利要求12)；wo2003089624(權(quán)利要求25)；

交叉引用:mim:606509；np_110391.2；nm_030764_1

(17)her2(erbb2,genbank登錄號m11730)

coussensl.等人,science(1985)230(4730):1132-1139)；yamamotot.等人,nature319,230-234,1986；sembak.等人,proc.natl.acad.sci.u.s.a.82,6497-6501,1985；swierczj.m.等人,j.cellbiol.165,869-880,2004；kuhnsj.j.等人,j.biol.chem.274,36422-36427,1999；choh.-s.等人,nature421,756-760,2003；ehsania.等人(1993)genomics15,426-429；wo2004048938(實施例2)；wo2004027049(圖1i)；wo2004009622；wo2003081210；wo2003089904(權(quán)利要求9)；wo2003016475(權(quán)利要求1)；us2003118592；wo2003008537(權(quán)利要求1)；wo2003055439(權(quán)利要求29；圖1a-b)；wo2003025228(權(quán)利要求37；圖5c)；wo200222636(實施例13；第95-107頁)；wo200212341(權(quán)利要求68；圖7)；wo200213847(第71-74頁)；wo200214503(第114-117頁)；wo200153463(權(quán)利要求2；第41-46頁)；wo200141787(第15頁)；wo200044899(權(quán)利要求52；圖7)；wo200020579(權(quán)利要求3；圖2)；us5869445(權(quán)利要求3；第31-38欄)；wo9630514(權(quán)利要求2；第56-61頁)；ep1439393(權(quán)利要求7)；wo2004043361(權(quán)利要求7)；wo2004022709；wo200100244(實施例3；圖4)；

登錄:p04626；embl；m11767；aaa35808.1.embl；m11761；aaa35808.1

(18)nca(ceacam6,genbank登錄號m18728)；

barnettt.等人,genomics3,59-66,1988；tawaragiy.等人,biochem.biophys.res.commun.150,89-96,1988；strausbergr.l.等人,proc.natl.acad.sci.u.s.a.99:16899-16903,2002；wo2004063709；ep1439393(權(quán)利要求7)；wo2004044178(實施例4)；wo2004031238；wo2003042661(權(quán)利要求12)；wo200278524(實施例2)；wo200286443(權(quán)利要求27；第427頁)；wo200260317(權(quán)利要求2)；

登錄:p40199；q14920；embl；m29541；aaa59915.1.embl；m18728；

(19)mdp(dpep1,genbank登錄號bc017023)

proc.natl.acad.sci.u.s.a.99(26):16899-16903(2002))；wo2003016475(權(quán)利要求1)；wo200264798(權(quán)利要求33；第85-87頁)；jp05003790(圖6-8)；wo9946284(圖9)；

交叉引用:mim:179780；aah17023.1；bc017023_1

(20)il20rα(il20rα,zcytor7,genbank登錄號af184971)；

clarkh.f.等人,genomeres.13,2265-2270,2003；mungalla.j.等人,nature425,805-811,2003；blumbergh.等人,cell104,9-19,2001；dumoutierl.等人,j.immunol.167,3545-3549,2001；parrish-novakj.等人,j.biol.chem.277,47517-47523,2002；pletnevs.等人(2003)biochemistry42:12617-12624；sheikhf.等人(2004)j.immunol.172,2006-2010；ep1394274(實施例11)；us2004005320(實施例5)；wo2003029262(第74-75頁)；wo2003002717(權(quán)利要求2；第63頁)；wo200222153(第45-47頁)；us2002042366(第20-21頁)；wo200146261(第57-59頁)；wo200146232(第63-65頁)；wo9837193(權(quán)利要求1；第55-59頁)；

登錄:q9uhf4；q6uwa9；q96sh8；embl；af184971；aaf01320.1

(21)短小蛋白聚糖(bcan,behab,genbank登錄號af229053)

garys.c.等人,gene256,139-147,2000；clarkh.f.等人,genomeres.13,2265-2270,2003；strausbergr.l.等人,proc.natl.acad.sci.u.s.a.99,16899-16903,2002；us2003186372(權(quán)利要求11)；us2003186373(權(quán)利要求11)；us2003119131(權(quán)利要求1；圖52)；us2003119122(權(quán)利要求1；圖52)；us2003119126(權(quán)利要求1)；us2003119121(權(quán)利要求1；圖52)；us2003119129(權(quán)利要求1)；us2003119130(權(quán)利要求1)；us2003119128(權(quán)利要求1；圖52)；us2003119125(權(quán)利要求1)；wo2003016475(權(quán)利要求1)；wo200202634(權(quán)利要求1)；

(22)ephb2r(drt,erk,hek5,epht3,tyro5,genbank登錄號nm_004442)

chan,j.和watt,v.m.,oncogene6(6),1057-1061(1991),oncogene10(5):897-905(1995),annu.rev.neurosci.21:309-345(1998),int.rev.cytol.196:177-244(2000)；wo2003042661(權(quán)利要求12)；wo200053216(權(quán)利要求1；第41頁)；wo2004065576(權(quán)利要求1)；wo2004020583(權(quán)利要求9)；wo2003004529(第128-132頁)；wo200053216(權(quán)利要求1；第42頁)；

交叉引用:mim:600997；np_004433.2；nm_004442_1

(23)aslg659(b7h,genbank登錄號ax092328)

us20040101899(權(quán)利要求2)；wo2003104399(權(quán)利要求11)；wo2004000221(圖3)；us2003165504(權(quán)利要求1)；us2003124140(實施例2)；us2003065143(圖60)；wo2002102235(權(quán)利要求13；第299頁)；us2003091580(實施例2)；wo200210187(權(quán)利要求6；圖10)；wo200194641(權(quán)利要求12；圖7b)；wo200202624(權(quán)利要求13；圖1a-1b)；us2002034749(權(quán)利要求54；第45-46頁)；wo200206317(實施例2；第320-321頁,權(quán)利要求34；第321-322頁)；wo200271928(第468-469頁)；wo200202587(實施例1；圖1)；wo200140269(實施例3；第190-192頁)；wo200036107(實施例2；第205-207頁)；wo2004053079(權(quán)利要求12)；wo2003004989(權(quán)利要求1)；wo200271928(第233-234,452-453頁)；wo0116318；

(24)psca(前列腺干細胞抗原前體,genbank登錄號aj297436)

reiterr.e.等人,proc.natl.acad.sci.u.s.a.95,1735-1740,1998；guz.等人,oncogene19,1288-1296,2000；biochem.biophys.res.commun.(2000)275(3):783-788；wo2004022709；ep1394274(實施例11)；us2004018553(權(quán)利要求17)；wo2003008537(權(quán)利要求1)；wo200281646(權(quán)利要求1；第164頁)；wo2003003906(權(quán)利要求10；第288頁)；wo200140309(實施例1；圖17)；us2001055751(實施例1；圖1b)；wo200032752(權(quán)利要求18；圖1)；wo9851805(權(quán)利要求17；第97頁)；wo9851824(權(quán)利要求10；第94頁)；wo9840403(權(quán)利要求2；圖1b)；

登錄:o43653；embl；af043498；aac39607.1

(25)geda(genbank登錄號ay260763)；

aap14954脂肪瘤hmgic融合伴侶樣蛋白/pid＝aap14954.1-智人

物種:智人(人類)

wo2003054152(權(quán)利要求20)；wo2003000842(權(quán)利要求1)；wo2003023013(實施例3,權(quán)利要求20)；us2003194704(權(quán)利要求45)；

交叉引用:gi:30102449；aap14954.1；ay260763_1

(26)baff-r(b細胞活化因子受體,blys受體3,br3,genbank登錄號af116456)；baff受體/pid＝np_443177.1-智人

thompson,j.s.等人,science293(5537),2108-2111(2001)；wo2004058309；wo2004011611；wo2003045422(實施例；第32-33頁)；wo2003014294(權(quán)利要求35；圖6b)；wo2003035846(權(quán)利要求70；第615-616頁)；wo200294852(第136-137欄)；wo200238766(權(quán)利要求3；第133頁)；wo200224909(實施例3；圖3)；

交叉引用:mim:606269；np_443177.1；nm_052945_1；af132600

(27)cd22(b細胞受體cd22-b同工型,bl-cam,lyb-8,lyb8,siglec-2,flj22814,genbank登錄號ak026467)；

wilson等人(1991)j.exp.med.173:137-146；wo2003072036(權(quán)利要求1；圖1)；

交叉引用:mim:107266；np_001762.1；nm_001771_1

(28)cd79a(cd79a,cd79α,免疫球蛋白相關(guān)α,與igβ共價相互作用的與igm分子在表面上形成復合物的轉(zhuǎn)導b細胞分化所涉及的信號的b細胞特異性蛋白(cd79b),),pi:4.84,mw:25028tm:2[p]genechromosome:19q13.2,genbank登錄號np_001774.10)

wo2003088808；us20030228319；wo2003062401(權(quán)利要求9)；us2002150573(權(quán)利要求4,第13-14頁)；wo9958658(權(quán)利要求13,圖16)；wo9207574(圖1)；us5644033；ha等人(1992)j.immunol.148(5):1526-1531；mueller等人(1992)eur.j.biochem.22:1621-1625；hashimoto等人(1994)immunogenetics40(4):287-295；preud’homme等人(1992)clin.exp.immunol.90(1):141-146；yu等人(1992)j.immunol.148(2)633-637；sakaguchi等人(1988)emboj.7(11):3457-3464；

(29)cxcr5(伯基特淋巴瘤受體1,由cxcl13趨化因子活化的在淋巴細胞遷移和體液防御中發(fā)揮作用的在hiv-2感染中發(fā)揮作用的可能在aids,淋巴瘤,骨髓瘤和白血病的發(fā)展中發(fā)揮作用的g蛋白偶聯(lián)受體)；372aa,pi:8.54mw:41959tm:7[p]genechromosome:11q23.3,genbank登錄號np_001707.1)

wo2004040000；wo2004015426；us2003105292(實施例2)；us6555339(實施例2)；wo200261087(圖1)；wo200157188(權(quán)利要求20,第269頁)；wo200172830(第12-13頁)；wo200022129(實施例1,第152-153頁,實施例2,第254-256頁)；wo9928468(權(quán)利要求1,第38頁)；us5440021(實施例2,第49-52欄)；wo9428931(第56-58頁)；wo9217497(權(quán)利要求7,圖5)；dobner等人(1992)eur.j.immunol.22:2795-2799；barella等人(1995)biochem.j.309:773-779；

(30)hla-dob(結(jié)合肽并將其呈遞給cd4+t淋巴細胞的mhcii類分子(ia抗原)的β亞基)；273aa,pi:6.56mw:30820tm:1[p]genechromosome:6p21.3,genbank登錄號np_002111.1)

tonnelle等人(1985)emboj.4(11):2839-2847；jonsson等人(1989)immunogenetics29(6):411-413；beck等人(1992)j.mol.biol.228:433-441；strausberg等人(2002)proc.natl.acad.sciusa99:16899-16903；servenius等人(1987)j.biol.chem.262:8759-8766；beck等人(1996)j.mol.biol.255:1-13；naruse等人(2002)tissueantigens59:512-519；wo9958658(權(quán)利要求13,圖15)；us6153408(第35-38欄)；us5976551(第168-170欄)；us6011146(第145-146欄)；kasahara等人(1989)immunogenetics30(1):66-68；larhammar等人(1985)j.biol.chem.260(26):14111-14119；

(31)p2x5(嘌呤能受體p2x配體門控離子通道5,一種由細胞外atp門控的離子通道,可能參與突觸傳遞和神經(jīng)發(fā)生,缺陷可能促進特發(fā)性逼尿肌不穩(wěn)定的病理生理學)；422aa),pi:7.63,mw:47206tm:1[p]genechromosome:17p13.3,genbank登錄號np_002552.2)

le等人(1997)febslett.418(1-2):195-199；wo2004047749；wo2003072035(權(quán)利要求10)；touchman等人(2000)genomeres.10:165-173；wo200222660(權(quán)利要求20)；wo2003093444(權(quán)利要求1)；wo2003087768(權(quán)利要求1)；wo2003029277(第82頁)；

(32)cd72(b細胞分化抗原cd72,lyb-2)proteinsequencefullmaeaity...tafrfpd(1..359；359aa),pi:8.66,mw:40225tm:1[p]genechromosome:9p13.3,genbank登錄號np_001773.1)

wo2004042346(權(quán)利要求65)；wo2003026493(第51-52,57-58頁)；wo200075655(第105-106頁)；vonhoegen等人(1990)j.immunol.144(12):4870-4877；strausberg等人(2002)proc.natl.acad.sciusa99:16899-16903；

(33)ly64(淋巴細胞抗原64(rp105),亮氨酸富含重復(lrr)家族的i型膜蛋白,調(diào)節(jié)b細胞活化和凋亡,功能喪失與系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者疾病活動增加相關(guān))；661aa,pi:6.20,mw:74147tm:1[p]genechromosome:5q12,genbank登錄號np_005573.1)

us2002193567；wo9707198(權(quán)利要求11,第39-42頁)；miura等人(1996)genomics38(3):299-304；miura等人(1998)blood92:2815-2822；wo2003083047；wo9744452(權(quán)利要求8,第57-61頁)；wo200012130(第24-26頁)；

(34)fcrh1(fc受體樣蛋白1,一種含有c2型ig樣和itam結(jié)構(gòu)域的免疫球蛋白fc結(jié)構(gòu)域的推定受體,可能在b淋巴細胞分化中發(fā)揮作用)；429aa,pi:5.28,mw:46925tm:1[p]genechromosome:1q21-1q22,genbank登錄號np_443170.1)

wo2003077836；wo200138490(權(quán)利要求6,圖18e-1-18-e-2)；davis等人(2001)proc.natl.acad.sciusa98(17):9772-9777；wo2003089624(權(quán)利要求8)；ep1347046(權(quán)利要求1)；wo2003089624(權(quán)利要求7)；

(35)irta2(免疫球蛋白超家族受體易位相關(guān)2,一種推定的免疫受體,可能在b細胞發(fā)育和淋巴瘤生成中發(fā)揮作用；通過易位使基因失調(diào)在一些b細胞惡性腫瘤中出現(xiàn))；977aa,pi:6.88mw:106468tm:1[p]genechromosome:1q21,genbank登錄號human:af343662,af343663,af343664,af343665,af369794,af397453,ak090423,ak090475,al834187,ay358085；mouse:ak089756,ay158090,ay506558；np_112571.1

wo2003024392(權(quán)利要求2,圖97)；nakayama等人(2000)biochem.biophys.res.commun.277(1):124-127；wo2003077836；wo200138490(權(quán)利要求3,圖18b-1-18b-2)；

(36)tenb2(tmeff2,tomoregulin,tpef,hpp1,tr,推定的跨膜蛋白聚糖,與egf/神經(jīng)生長因子家族的生長因子和卵泡抑素相關(guān))；374aa,ncbi登錄:aad55776,aaf91397,aag49451,ncbirefseq:np_057276；ncbigene:23671；omim:605734；swissprotq9uik5；genbank登錄號af179274；ay358907,caf85723,cq782436

wo2004074320(seqidno810)；jp2004113151(seqidno2,4,8)；wo2003042661(seqidno580)；wo2003009814(seqidno411)；ep1295944(第69-70頁)；wo200230268(第329頁)；wo200190304(seqidno2706)；us2004249130；us2004022727；wo2004063355；us2004197325；us2003232350；us2004005563；us2003124579；horie等人(2000)genomics67:146-152；uchida等人(1999)biochem.biophys.res.commun.266:593-602；liang等人(2000)cancerres.60:4907-12；glynne-jones等人(2001)intjcancer.oct15；94(2):178-84；

(37)pmel17(銀同系物；silv；d12s53e；pmel17；(si)；(sil)；me20；gp100)bc001414；bt007202；m32295；m77348；nm_006928；mcglinchey,r.p.等人(2009)proc.natl.acad.sci.u.s.a.106(33),13731-13736；kummer,m.p.等人(2009)j.biol.chem.284(4),2296-2306；

(38)tmeff1(具有egf樣和兩個卵泡抑素樣結(jié)構(gòu)域的跨膜蛋白1；tomoregulin-1；h7365；c9orf2；c9orf2；u19878；x83961)nm_080655；nm_003692；harms,p.w.(2003)genesdev.17(21),2624-2629；gery,s.等人(2003)oncogene22(18):2723-2727；

(39)gdnf-ra1(gdnf家族受體α1；gfra1；gdnfr；gdnfra；retl1；trnr1；ret1l；gdnfr-α1；gfr-α-1；u95847；bc014962；nm_145793)nm_005264；kim,m.h.等人(2009)mol.cell.biol.29(8),2264-2277；treanor,j.j.等人(1996)nature382(6586):80-83；

(40)ly6e(淋巴細胞抗原6復合物,基因座e；ly67,rig-e,sca-2,tsa-1)np_002337.1；nm_002346.2；denooij-vandalen,a.g.等人(2003)int.j.cancer103(6),768-774；zammit,d.j.等人(2002)mol.cell.biol.22(3):946-952；

(41)tmem46(shisa同系物2(有爪蟾蜍)；shisa2)np_001007539.1；nm_001007538.1；furushima,k.等人(2007)dev.biol.306(2),480-492；clark,h.f.等人(2003)genomeres.13(10):2265-2270；

(42)ly6g6d(淋巴細胞抗原6復合物,基因座g6d；ly6-d,megt1)np_067079.2；nm_021246.2；mallya,m.等人(2002)genomics80(1):113-123；ribas,g.等人(1999)j.immunol.163(1):278-287；

(43)lgr5(含有亮氨酸富含重復的g蛋白偶聯(lián)受體5；gpr49,gpr67)np_003658.1；nm_003667.2；salanti,g.等人(2009)am.j.epidemiol.170(5):537-545；yamamoto,y.等人(2003)hepatology37(3):528-533；

(44)ret(ret原癌基因；men2a；hscr1；men2b；mtc1；(ptc)；cdhf12；hs.168114；ret51；ret-ele1)np_066124.1；nm_020975.4；tsukamoto,h.等人(2009)cancersci.100(10):1895-1901；narita,n.等人(2009)oncogene28(34):3058-3068；

(45)ly6k(淋巴細胞抗原6復合物,基因座k；ly6k；hsj001348；flj35226)np_059997.3；nm_017527.3；ishikawa,n.等人(2007)cancerres.67(24):11601-11611；denooij-vandalen,a.g.等人(2003)int.j.cancer103(6):768-774；

(46)gpr19(g蛋白偶聯(lián)受體19；mm.4787)np_006134.1；nm_006143.2；montpetit,a.andsinnett,d.(1999)hum.genet.105(1-2):162-164；o’dowd,b.f.等人(1996)febslett.394(3):325-329；

(47)gpr54(kiss1受體；kiss1r；gpr54；hot7t175；axor12)np_115940.2；nm_032551.4；navenot,j.m.等人(2009)mol.pharmacol.75(6):1300-1306；hata,k.等人(2009)anticancerres.29(2):617-623；

(48)asphd1(含有天冬氨酸β-羥化酶的結(jié)構(gòu)域1；loc253982)np_859069.2；nm_181718.3；gerhard,d.s.等人(2004)genomeres.14(10b):2121-2127；

(49)酪氨酸酶(tyr；ocaia；oca1a；酪氨酸酶；shep3)np_000363.1；nm_000372.4；bishop,d.t.等人(2009)nat.genet.41(8):920-925；nan,h.等人(2009)int.j.cancer125(4):909-917；

(50)tmem118(環(huán)指蛋白,跨膜2；rnft2；flj14627)np_001103373.1；nm_001109903.1；clark,h.f.等人(2003)genomeres.13(10):2265-2270；scherer,s.e.等人(2006)nature440(7082):346-351

(51)gpr172a(g蛋白偶聯(lián)受體172a；gpcr41；flj11856；d15ertd747e)np_078807.1；nm_024531.3；ericsson,t.a.等人(2003)proc.natl.acad.sci.u.s.a.100(11):6759-6764；takeda,s.等人(2002)febslett.520(1-3):97-101。

在一個實施方案中，所述抗體結(jié)合至以下一種或多種多肽：bmpr1b、e16、steap1、0772p、mpf、napi2b、sema5b、pscahlg、etbr、msg783、steap2、trpm4、cripto、cd21、cd79b、fcrh2、her2、nca、mdp、il20rα、短小蛋白聚糖、ephb2r、aslg659、psca、geda、baff-r、cd22、cd79a、cxcr5、hla-dob、p2x5、cd72、ly64、fcrh1、irta2、tenb2、pmel17、tmeff1、gdnf-ra1、ly6e、tmem46、ly6g6d、lgr5、ret、ly6k、gpr19、gpr54、asphd1、酪氨酸酶、tmem118、gpr172a或cd33。

在一個實施方案中，所述抗體結(jié)合至bmpr1b。

在一個實施方案中，所述抗體結(jié)合至e16。

在一個實施方案中，所述抗體結(jié)合至steap1。

在一個實施方案中，所述抗體結(jié)合至0772p。

在一個實施方案中，所述抗體結(jié)合至mpf。

在一個實施方案中，所述抗體結(jié)合至napi2b。

在一個實施方案中，所述抗體結(jié)合至sema5b。

在一個實施方案中，所述抗體結(jié)合至pscahlg。

在一個實施方案中，所述抗體結(jié)合至etbr。

在一個實施方案中，所述抗體結(jié)合至msg783。

在一個實施方案中，所述抗體結(jié)合至steap2。

在一個實施方案中，所述抗體結(jié)合至trpm4。

在一個實施方案中，所述抗體結(jié)合至cripto。

在一個實施方案中，所述抗體結(jié)合至cd21。

在一個實施方案中，所述抗體結(jié)合至cd79b。

在一個實施方案中，所述抗體結(jié)合至fcrh2。

在一個實施方案中，所述抗體結(jié)合至her2。

在一個實施方案中，所述抗體結(jié)合至nca。

在一個實施方案中，所述抗體結(jié)合至mdp。

在一個實施方案中，所述抗體結(jié)合至il20rα。

在一個實施方案中，所述抗體結(jié)合至短小蛋白聚糖。

在一個實施方案中，所述抗體結(jié)合至ephb2r。

在一個實施方案中，所述抗體結(jié)合至aslg659。

在一個實施方案中，所述抗體結(jié)合至psca。

在一個實施方案中，所述抗體結(jié)合至geda。

在一個實施方案中，所述抗體結(jié)合至baff-r。

在一個實施方案中，所述抗體結(jié)合至cd22。

在一個實施方案中，所述抗體結(jié)合至cd79a。

在一個實施方案中，所述抗體結(jié)合至cxcr5。

在一個實施方案中，所述抗體結(jié)合至hla-dob。

在一個實施方案中，所述抗體結(jié)合至p2x5。

在一個實施方案中，所述抗體結(jié)合至cd72。

在一個實施方案中，所述抗體結(jié)合至ly64。

在一個實施方案中，所述抗體結(jié)合至fcrh1。

在一個實施方案中，所述抗體結(jié)合至irta2。

在一個實施方案中，所述抗體結(jié)合至tenb2。

在一個實施方案中，所述抗體結(jié)合至pmel17。

在一個實施方案中，所述抗體結(jié)合至tmeff1。

在一個實施方案中，所述抗體結(jié)合至gdnf-ra1。

在一個實施方案中，所述抗體結(jié)合至ly6e。

在一個實施方案中，所述抗體結(jié)合至tmem46。

在一個實施方案中，所述抗體結(jié)合至ly6g6d。

在一個實施方案中，所述抗體結(jié)合至lgr5。

在一個實施方案中，所述抗體結(jié)合至ret。

在一個實施方案中，所述抗體結(jié)合至ly6k。

在一個實施方案中，所述抗體結(jié)合至gpr19。

在一個實施方案中，所述抗體結(jié)合至gpr54。

在一個實施方案中，所述抗體結(jié)合至asphd1。

在一個實施方案中，所述抗體結(jié)合至酪氨酸酶。

在一個實施方案中，所述抗體結(jié)合至tmem118。

在一個實施方案中，所述抗體結(jié)合至gpr172a。

在一個實施方案中，所述抗體結(jié)合至cd33。

親本抗體也可為包含白蛋白結(jié)合肽(abp)序列的融合蛋白(dennis等人(2002)“albuminbindingasageneralstrategyforimprovingthepharmacokineticsofproteins”jbiolchem.277:35035-35043；wo01/45746)。本申請抗體包括具有以下教導的abp序列的融合蛋白：(i)dennis等人(2002)jbiolchem.277:35035-35043,表iii和iv,第35038頁；(ii)us20040001827,[0076]；和(iii)wo01/45746,第12-13頁，所有這些都通過引用并入本申請。

可使用重組方法和組合物制備抗體，例如如us4816567所述和本領(lǐng)域所已知的那樣。在一些實施方案中，抗體在真核宿主細胞(例如哺乳動物宿主細胞)中產(chǎn)生。在一些實施方案中，抗體在原核宿主細胞(例如大腸桿菌)中產(chǎn)生。

在某些實施方案中，可將一個或多個氨基酸修飾引入本申請?zhí)峁┑目贵w的fc區(qū)，從而產(chǎn)生fc區(qū)變體。fc區(qū)變體可包含在一個或多個氨基酸位置包含氨基酸修飾(例如取代)的人fc區(qū)序列(例如人igg1、igg2、igg3或igg4fc區(qū))。

在某些實施方案中，本申請涉及具有一些但非全部效應子功能的抗體變體，這使其對于體內(nèi)抗體的半衰期是重要的應用來說是理想的候選物，但是某些效應子功能(例如補體和adcc)是不必要或有害的?？蛇M行體外和/或體內(nèi)細胞毒性測定以確認cdc和/或adcc活性的減少/剝奪。例如，可進行fc受體(fcr)結(jié)合測定以確保抗體缺乏fcγr結(jié)合(因此可能缺乏adcc活性)，但是保留fcrn結(jié)合能力。

adc的藥物負載量

藥物負載量是每個抗體的藥物部分的平均數(shù)。藥物負載量可為1至8個藥物(d)/抗體(ab)，即其中1、2、3、4、5、6、7和8個藥物部分共價連接至抗體。adc的組成包括與一定范圍即1到8個的藥物綴合的抗體的集合。來自綴合反應的adc制劑中每個抗體的平均藥物數(shù)可通過常規(guī)手段例如質(zhì)譜、elisa測定、電泳和hplc來表征。也可確定adc在p方面的定量分布。通過elisa可確定具體的adc制劑中p的平均值(hamblett等人(2004)clin.cancerres.10:7063-7070；sanderson等人(2005)clin.cancerres.11:843-852)。然而，通過elisa的抗體-抗原結(jié)合和檢測限不可辨別p(藥物)值的分布。另外，用于檢測抗體-藥物綴合物的elisa測定不能確定藥物部分連接到抗體的位置例如重鏈或輕鏈片段或具體的氨基酸殘基。在一些情況下，分離、純化和表征均質(zhì)adc(其中p是來自具有其它藥物負載量的adc的一定值)可通過反相hplc或電泳等手段來實現(xiàn)。

對于一些抗體-藥物綴合物，p可能受抗體上附著位點的數(shù)目的限制。例如，抗體可具有僅一個或幾個半胱氨酸巰基部分或可具有僅一個或幾個足夠反應性的巰基部分(連接基可通過其連接)。較高的藥物負載量例如p>5可能導致某些抗體-藥物綴合物的聚集、不溶性、毒性或細胞通透性的喪失。

通常，在綴合反應期間，小于理論最大值的藥物部分與抗體綴合?？贵w可含有例如許多不與連接基-藥物中間體(x-l-d)或連接基試劑反應的賴氨酸殘基。只有最具反應性的賴氨酸基團可與胺反應性連接基試劑反應。另外，只有最具反應性的半胱氨酸巰基可與巰基反應性連接基試劑或連接基-藥物中間體反應。通常，抗體不含有可與藥物部分連接的許多(若有的話)游離和反應性半胱氨酸巰基部分?；衔锏目贵w中大多數(shù)半胱氨酸巰基殘基作為二硫鍵存在且必須在部分或完全還原條件下用還原劑如二硫蘇糖醇(dtt)或tcep還原?？砂磶追N不同的方式控制adc的負載量(藥物/抗體比例“dar”)，包括：(i)限制連接基-藥物中間體或連接基試劑相對于抗體的摩爾過量，(ii)限制綴合反應時間或溫度，和(iii)半胱氨酸巰基修飾的部分或限制性還原條件。

當抗體的多于一個親核或親電子基團與連接基-藥物中間體或連接基試劑及隨后的二聚體藥物部分試劑反應時，所得產(chǎn)物是抗體-藥物綴合物的混合物(具有連接至抗體的藥物部分的分布例如1、2、3等)。液相色譜例如聚合反相(plrp)和疏水相互作用(hic)可通過藥物負載量值分離混合物中的化合物。可分離具有單一藥物負載量值(p)的adc的制劑，然而，這些單一負載量值adc可能仍然是非均質(zhì)混合物，因為藥物部分可通過連接基連接在抗體上的不同位點。因此，本申請抗體-藥物綴合物組合物包括抗體-藥物綴合物化合物的混合物，其中抗體具有一個或多個藥物部分，且其中藥物部分可在各種氨基酸殘基處與抗體連接。

示例性藥物部分

含有叔胺或吡啶官能團的藥物的實例包括但不限于拓撲替康、lb-100、ib-01212、mcl-1抑制劑、68ga-bnota-prgd2、venetoclax、锝tc99mtilmanocept、e-7016、hm-30181ak、紫杉醇、as-1896596、em-015、釓特醇、bgj-398、ec-1456、度維替尼、pyrroltinib馬來酸鹽、gsk-923295、伊立替康、bgp-15、90y-依多曲肽、咪拉地爾、resminostat、itarnafloxin、nms-p153、nms-p937、伊立替康硫糖酯、阿比特龍、a-366、sb-743921、gilteritinib、abemaciclib、ipp-204106、長春氟寧、cx-5461、多西環(huán)素、tp-0903、tlk-58747、伊立替康、numonafide、on-123300、vintafolide、kx2391、釓噴酸葡胺、gedatolisib、他西多丁hcl、genzyme/ergomed、ttl-1177、納曲酮、富馬酸cfi-400945、pictilisib、felotaxel、otx-008、巴諾蒽醌、g-773、trabicingin、no-沙奎那韋、enmd-2076、釓布醇、bgb-102、ga68-標記、黃芩素綴合物、thz-1、tsr-011、onc-201、asp-3026、半乳糖神經(jīng)酰胺增強的長春瑞濱、pmx-20005、111in-rp-782、dsr-6434、硫酸長春新堿、j-21475、apitolisib、mdx-1203、鎵-68-sh-7139、cnx-1351、ct-1578、tg-02、伊馬替尼、luminespib、長春地辛-cb-3717綴合物、amg511、azd1152hqpaaccurins、米帕林、cgm-097、tr-100、bgb-324、cep-37440、otssp-167、apr-246、indotecan、釓特酸葡甲胺、硫蒽酮、navitoclax、來昔決南釤(153sm)、dmdapata、oct-1002、鹽酸伊立替康、bay-87-2243、simm-559、cep-33779、xl-388、shr-1258、voruciclib、unbs-5162、諾斯卡品、青蒿素、pha-665752、吡咯并苯并二氮雜環(huán)庚三烯類、葉酸-長春地肼酰肼綴合物、brn-103、nsc-134754、amp-53、pki-402、tariquidar、cg-200745、vo-100、prlx-93936、cenisertib、ssr-125329、crd-401、sn-24771、巴拉莫德、bibx-1382、105509、kw-2152、力達霉素、ct-17、sn-23490、l-000021649、u-74389g、jnj-17029259、pak-200、pfp-6、xr-842、rp-697、nco-700、b-220、帕澤普汀、r-116010、nl-2001、rc-3940-ii、bim-46068、mdl-73811、chir-200131、halitulin、氟卓斯汀、辛可寧、bn-52207、abt-546、nsc-639366、達替氯銨、wr-63320、ly-329146、dapaphenine雄甾烷sr-25989、xr-9051、rsu-1069、n-1379、epelmycina、pnu-144113、fce-27726、nsc-357704、pd-171851、dz-3358、b-9309-068、goe-7874、ro-44-5912、mdl-103323、莫法羅汀、ro-46-7864、ru-45144、win-63320、nc-190、nsc-646958、va-033、gi-149893、bbr-2378、nsc-639365、長春磷汀、sdz-62-434、bch-2051、rb-90745、ti-356、er-37328、sr-26050、cl-329753、ly-326315、an-1006、cp-117227、r-替魯?shù)仄健b-90740、syuiq-05、sr-16388、sn-28049、sn-30000、鹽酸托泊替康、長春瑞濱、wbz-7、s-44563、gsk-1070916、rpr-203360、去甲基脫氨基pateaminea、eu-517、at-9283、鹽酸螺旋鍺、e-7974、azoacridone、長春瑞濱、gtx-134、阿司咪唑、瑞替普汀、米托萘胺、林卡唑、pbt-1、阿替莫德、托匹生瓊、a-620223、曲多高舍、tesetaxelemd-94283、a-923573、e-7107、nrc-2694、鹽酸阿螺旋霉素、smt-14400、pha-793887、hb-19、s-12363、索利多丁、cep-28122、tks-040、abt-306552、ati-1025、a-928605、pf-3758309、99mtc-rp-527、mln-576、k-454、w-198、debio-0931、佐舒喹達、pf-337210、abt-737、folatetubulysin綴合物、依克立達、cp-31398、av-412、依洛替康、gsk-1838705a、abt-839、aew-541、長春新堿、吉非替尼、多柔比星、yho-13351、培利替尼、西馬多丁、a-947864、托澤色替、pd-115934、多拉司他汀-10、su-11274、美琥他辛、eht-1864、多非喹達、dx-52-1、rta-502、卡紐替尼、甲氧氯普胺、bms-753493、pd-166285、auristatinpye、alchemix、c-1305、ang-1009、鹽酸普魯卡因、sirameine、hoe-33342、manzamines、osi-632、stx-1801、bibf-1000、勒托替康、zk-191703、硫姆林、vx-322、多西紫杉醇、ro-28-2653、貝特卡令、gs-164、jnk-401、他莫利嗪、哌溴來新、s-16020-2、nk-611、拉柔比星、top-008、地氯普胺、勒托替康、tas-103、右尼古地平、bam-1120、conophylline、icrf-193、脫水長春堿、tubulysin、依克特納西啶和l-745631。

適應癥和治療方法

預期本申請抗體-藥物綴合物(adc)可用于治療各種疾病或病癥，例如其特征在于腫瘤抗原的過表達。示例性狀況或過度增殖性病癥包括良性或惡性實體瘤和血液學病癥例如白血病和淋巴惡性腫瘤。其它包括神經(jīng)元、膠質(zhì)細胞、星形膠質(zhì)細胞、下丘腦、腺體、巨噬細胞、上皮、間質(zhì)、囊胚腔、炎癥、血管生成和免疫學(包括自身免疫性)疾病。

在某些實施方案中，包含抗napi2b抗體(例如上述那些)的本申請adc用于治療實體瘤例如卵巢實體瘤的方法。

在另一個實施方案中，包含抗cd33抗體(例如本申請所述的那些)的本申請adc用于治療血液惡性腫瘤的方法，所述血液惡性腫瘤為例如非霍奇金淋巴瘤(nhl)、彌漫性大造血淋巴瘤、濾泡淋巴瘤、套細胞淋巴瘤、慢性淋巴細胞白血病、多發(fā)性骨髓瘤、急性髓細胞樣白血病(aml)和髓細胞白血病(mcl)并包括b細胞相關(guān)癌癥和增殖性疾病。參見us8226945；li等人(2013)mol.cancer.ther.12(7):1255-1265；polson等人(2010)leukemia24:1566-1573；polson等人(2011)expertopin.investig.drugs20(1):75-85，其內(nèi)容通過引用并入本申請。

在另一個實施方案中，包含抗muc16抗體(例如本申請所述的那些)的本申請adc用于治療卵巢癌、乳腺癌和胰腺癌的方法。癌癥可與muc16/ca125/o772p多肽的表達或活性相關(guān)。參見wo2007/001851；us7989595；us8449883；us7723485；chen等人(2007)cancerres.67(10):4924-4932；junutula等人,(2008)naturebiotech.26(8):925-932，其內(nèi)容通過引用并入本申請。

在某些實施方案中，包含抗her2抗體(例如上述那些)的本申請adc用于治療癌癥的方法，所述癌癥為例如乳腺癌或胃癌，更特別是her2+乳腺癌或胃癌，其中該方法包括向需要這種治療的患者施用該adc。在一個這樣的實施方案中，adc包含抗her2抗體曲妥珠單抗或帕妥珠單抗。

通常，待治療的疾病或病癥是過度增殖性疾病例如癌癥。本申請要治療的癌癥的實例包括但不限于癌瘤、淋巴瘤、母細胞瘤、肉瘤和白血病或淋巴惡性腫瘤。這樣的癌癥的更具體的實例包括鱗狀細胞癌(例如上皮鱗狀細胞癌)、肺癌(包括小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌和肺鱗狀細胞癌)、腹膜癌、肝細胞癌、胃部癌癥或胃癌(包括胃腸癌)、胰腺癌、成膠質(zhì)細胞瘤、宮頸癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝細胞瘤、乳腺癌、結(jié)腸癌、直腸癌、結(jié)腸直腸癌、子宮內(nèi)膜或子宮癌、唾液腺癌、腎癌或腎部癌癥、前列腺癌、外陰癌、甲狀腺癌、肝癌、肛門癌、陰莖癌及頭頸癌。

抗體-藥物綴合物可用于治療的自身免疫性疾病包括風濕病(例如類風濕性關(guān)節(jié)炎、舍格倫綜合征、硬皮病、狼瘡例如系統(tǒng)性紅斑狼瘡(sle)和狼瘡性腎炎、多發(fā)性肌炎/皮肌炎、冷球蛋白血癥、抗磷脂抗體綜合征和銀屑病關(guān)節(jié)炎)、骨關(guān)節(jié)炎、自身免疫性胃腸和肝臟疾病(例如炎性腸病(例如潰瘍性結(jié)腸炎和克羅恩病)、自身免疫性胃炎和惡性貧血、自身免疫性肝炎、原發(fā)性膽汁性肝硬化、原發(fā)性硬化性膽管炎和乳糜瀉)、血管炎(例如anca相關(guān)血管炎(包括churg-strauss血管炎)、韋格納肉芽腫病和多動脈炎)、自身免疫性神經(jīng)學病癥(例如多發(fā)性硬化癥、眼陣攣-肌陣攣綜合征、重癥肌無力、視神經(jīng)脊髓炎、帕金森病、阿爾茨海默病和自身免疫性多發(fā)性神經(jīng)病)、腎臟疾病(例如腎小球性腎炎、古德帕斯特綜合征和伯格氏病)、自身免疫性皮膚病(例如銀屑病、蕁麻疹、蕁麻疹、尋常型天皰瘡、大皰性類天皰瘡和皮膚紅斑狼瘡)、血液病(例如血小板減少性紫癜、血栓性血小板減少性紫癜、輸血后紫癜和自身免疫性溶血性貧血)、動脈粥樣硬化、葡萄膜炎、自身免疫性聽力疾病(例如內(nèi)耳疾病和聽力損失)、白塞病、雷諾氏綜合征、器官移植和自身免疫性內(nèi)分泌病癥(例如糖尿病相關(guān)自身免疫疾病例如胰島素依賴性糖尿病(iddm)、艾迪生病和自身免疫性甲狀腺疾病(例如格雷夫斯病和甲狀腺炎))。更優(yōu)選的這樣的疾病包括例如類風濕性關(guān)節(jié)炎、潰瘍性結(jié)腸炎、anca相關(guān)血管炎、狼瘡、多發(fā)性硬化、舍格倫綜合征、格雷夫斯病、iddm、惡性貧血、甲狀腺炎和腎小球性腎炎。

為了預防或治療疾病，adc的適當劑量將取決于如上定義的待治療的疾病的類型、疾病的嚴重性和病程、分子是否用于預防或治療目的而施用、先前的治療、患者的臨床病史和對抗體的反應及主治醫(yī)師的判斷。分子在一次或一系列治療中適當?shù)厥┯糜诨颊摺８鶕?jù)疾病的類型和嚴重程度，約1μg/kg至15mg/kg(例如0.1-20mg/kg)分子是用于施用給患者的初始候選劑量，無論例如通過一次或更多次單獨的施用或是通過連續(xù)輸注。取決于上述因素，典型的日劑量可在約1μg/kg至100mg/kg或更高的范圍內(nèi)。要施用給患者的adc的示例性劑量在約0.1至約10mg/kg患者體重的范圍內(nèi)。

實驗部分

實施例1(mc-sq-cit-pab-多拉司他汀10)

[4-[[(2s)-2-[[1-[5-(2,5-二氧代吡咯-1-基)戊基氨甲?；鵠環(huán)丁烷羰基]氨基]-5-脲基-戊酰基]氨基]苯基]甲基-[(1s)-1-[[(1s)-1-[[(1s,2r)-2-甲氧基-4-[(2s)-2-[(1r,2r)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-[[(1s)-2-苯基-1-噻唑-2-基-乙基]氨基]丙基]吡咯烷-1-基]-1-[(1s)-1-甲基丙基]-4-氧代-丁基]-甲基-氨甲?；鵠-2-甲基-丙基]氨甲酰基]-2-甲基-丙基]-二甲基-銨

在小瓶中將n1’-[(1s)-1-[[4-(氯甲基)苯基]氨甲?；鵠-4-脲基-丁基]-n1-[5-(2,5-二氧代吡咯-1-基)戊基]環(huán)丁烷-1,1-二甲酰胺(100質(zhì)量％,1當量,0.04713mmol,1.000,27.76mg)、多拉司他汀10(100質(zhì)量％,37mg,0.04713mmol,1.000,37mg)和四丁基碘化銨(65.65質(zhì)量％,0.3當量,0.01414mmol,0.3000,7.956mg)合并并溶于n,n-二甲基甲酰胺(100質(zhì)量％,50μl,0.646mmol,13.7,47.3mg,0.05ml)。將混合物在室溫攪拌3小時且沒有觀察到反應。向反應混合物中加入n,n-二異丙基乙胺(100質(zhì)量％,1.5當量,0.07069mmol,1.500,9.136mg,0.0123ml)。將反應混合物在室溫攪拌過夜。反應混合物的lc/ms顯示16％產(chǎn)物。再加入1當量堿，其改善了產(chǎn)物形成并給出了較清晰的lc/ms峰。

將反應混合物用dmf稀釋且然后在hplc上在甲酸條件下直接純化。得到一純級份的[4-[[(2s)-2-[[1-[5-(2,5-二氧代吡咯-1-基)戊基氨甲?；鵠環(huán)丁烷羰基]氨基]-5-脲基-戊酰基]氨基]苯基]甲基-[(1s)-1-[[(1s)-1-[[(1s,2r)-2-甲氧基-4-[(2s)-2-[(1r,2r)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-[[(1s)-2-苯基-1-噻唑-2-基-乙基]氨基]丙基]吡咯烷-1-基]-1-[(1s)-1-甲基丙基]-4-氧代-丁基]-甲基-氨甲?；鵠-2-甲基-丙基]氨甲?；鵠-2-甲基-丙基]-二甲基-銨(100質(zhì)量％,c,5mg,0.0037350mmol,0.07925,5mg)m/z＝1338.1(7.9％一純級份收率)和得到一不純級份。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.47(d,j＝2.5hz,1h),8.92(q,j＝9.0hz,1h),8.31(s,4h),8.05-7.91(m,0h),7.91-7.75(m,4h),7.67(s,0h),7.63(d,j＝3.2hz,0h),7.62-7.54(m,0h),7.54(s,0h),7.58-7.45(m,2h),7.33-7.11(m,5h),7.08-6.95(m,2h),6.13(t,j＝5.6hz,1h),5.75(s,1h),5.57-5.37(m,3h),4.76-4.55(m,3h),4.41(dt,j＝15.5,6.0hz,1h),3.98(q,j＝6.3hz,2h),3.61-3.28(m,4h),3.28-3.07(m,9h),3.07-2.87(m,10h),2.84-2.68(m,1h),2.49-2.31(m,6h),2.31-1.90(m,0h),1.88-1.54(m,7h),1.41(ddt,j＝28.5,22.6,10.5hz,10h),1.18(tdd,j＝19.3,7.8,4.5hz,3h),1.12-1.02(m,5h),1.02-0.91(m,5h),0.91-0.82(m,6h),0.79(td,j＝7.4,3.0hz,4h)。

實施例2(mc-sq-cit-pab-tubulysinm)

(2r)-2-((2s,3s)-1-(((1r,3r)-1-乙酰氧基-1-(4-((2r,4s)-4-羧基-1-苯基戊-2-基氨甲?；?噻唑-2-基)-4-甲基戊-3-基)(甲基)氨基)-3-甲基-1-氧代戊-2-基氨甲?；?-1-(4-((s)-2-(1-(5-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1h-吡咯-1-基)戊基氨甲?；?環(huán)丁烷甲酰氨基)-5-脲基戊酰氨基)芐基)-1-甲基哌啶鎓

在小瓶中將n1’-[(1s)-1-[[4-(氯甲基)苯基]氨甲?；鵠-4-脲基-丁基]-n1-[5-(2,5-二氧代吡咯-1-基)戊基]環(huán)丁烷-1,1-二甲酰胺(100質(zhì)量％,17mg,0.02886mmol,1.000,17mg)、(2s,4r)-4-[[2-[(1r,3r)-1-乙酰氧基-4-甲基-3-[甲基-[(2s,3s)-3-甲基-2-[[(2r)-1-甲基哌啶-2-羰基]氨基]戊酰基]氨基]戊基]噻唑-4-羰基]氨基]-2-甲基-5-苯基-戊酸(100質(zhì)量％,1當量,0.02886mmol,1.000,21.01mg)和四丁基碘化銨(65.65質(zhì)量％,0.3當量,0.008657mmol,0.3000,4.872mg)溶于n,n-二甲基甲酰胺(100質(zhì)量％,75μl,0.970mmol,33.6,70.9mg,0.075ml)。將所得反應混合物在室溫攪拌1小時且沒有觀察到所需產(chǎn)物。向反應混合物中加入n,n-二異丙基乙胺(100質(zhì)量％,1.1當量,0.03174mmol,1.100,4.103mg,0.00554ml)并形成少量產(chǎn)物。然后將反應混合物在室溫攪拌過夜，然后再加入1當量堿并將混合物攪拌至一天結(jié)束。然后觀察到所需產(chǎn)物，稀釋并在hplc上純化以避免產(chǎn)物的任何損失。

分離(2s,4r)-4-[[2-[(1r,3r)-1-乙酰氧基-3-[[(2s,3s)-2-[[(2r)-1-[[4-[[(2s)-2-[[1-[5-(2,5-二氧代吡咯-1-基)戊基氨甲?；鵠環(huán)丁烷羰基]氨基]-5-脲基-戊?；鵠氨基]苯基]甲基]-1-甲基-哌啶-1-鎓-2-羰基]氨基]-3-甲基-戊?；鵠-甲基-氨基]-4-甲基-戊基]噻唑-4-羰基]氨基]-2-甲基-5-苯基-戊酸(100質(zhì)量％,11.7mg,0.0091292mmol,0.3164,11.7mg)。31.64％收率。hrms:m/z＝1281.6780。¹hnmr(500mhz,dmso-d6)δ10.80(s,2h),9.50(s,2h),8.48(s,6h),8.36(s,3h),8.12(s,2h),8.05(s,1h),7.75(s,3h),7.33-7.26(m,4h),7.26-7.18(m,5h),7.13(d,j＝7.6hz,5h),6.99(d,j＝5.7hz,2h),6.42(s,2h),5.73(s,2h),5.56(s,3h),4.64(s,4h),4.57(t,j＝7.8hz,2h),4.38(dq,j＝15.0,5.4hz,2h),4.13(dd,j＝13.0,7.6hz,2h),3.05(q,j＝6.9,6.2hz,12h),3.00-2.87(m,10h),2.84-2.70(m,3h),2.50(s,2h),2.40(hept,j＝13.1,10.5hz,9h),2.25(d,j＝11.2hz,1h),2.18-1.94(m,0h),1.91-1.64(m,0h),1.58(s,0h),1.42(ddt,j＝23.8,16.7,8.4hz,15h),1.32-1.23(m,12h),1.17(p,j＝8.3,7.4hz,6h),1.11-0.99(m,6h),0.94-0.85(m,12h),0.80(q,j＝7.6hz,10h)。

實施例3(硝基-mm-pds-pab-tubulysinm)

(2s,4r)-4-[[2-[(1r,3r)-1-乙酰氧基-4-甲基-3-[甲基-[(2s,3s)-3-甲基-2-[[(2r)-1-甲基-1-[[4-[[(2r)-2-[(6-硝基-3-吡啶基)二硫基]丙氧基]羰基氨基]苯基]甲基]哌啶-1-鎓-2-羰基]氨基]戊?；鵠氨基]戊基]噻唑-4-羰基]氨基]-2-甲基-5-苯基-戊酸

步驟1：單甲基-硝基-pds-pab-cl

單甲基(r)-2-((6-硝基吡啶-3-基)二硫基)丙基4-(氯甲基)苯基氨基甲酸酯

在小瓶中將單甲基(r)-2-((6-硝基吡啶-3-基)二硫基)丙基4-(羥基甲基)苯基氨基甲酸酯(-硝基-pds-pab-oh)(100質(zhì)量％,50mg,0.1265mmol,1.000,50mg)溶于n,n-二甲基甲酰胺(100質(zhì)量％,0.2ml,3mmol,20,200mg,0.2ml)。將所得反應混合物在冰浴中冷卻并逐滴加入亞硫酰氯(100質(zhì)量％,1.2當量,0.1517mmol,1.200,18.05mg,0.01106ml)在二氯甲烷(100質(zhì)量％,50μl,0.7800mmol,6.168,66.25mg,0.05ml)中的溶液。將反應混合物從冰浴中取出且在室溫攪拌30分鐘后，lcms顯示期望的產(chǎn)物。向反應混合物中逐滴加入一額外當量的亞硫酰氯(在dcm中的溶液)并在室溫攪拌過夜。形成新的lcms峰，其接近產(chǎn)物峰且質(zhì)量為438。將反應混合物用乙酸乙酯稀釋，用水淬滅，有機層用水洗滌兩次，經(jīng)mgso4干燥并在硅膠上濃縮并通過快速色譜純化(用30％etoac/庚烷洗脫)。分離白色固體。lc/ms顯示具有醇前體作為雜質(zhì)的物質(zhì)。單甲基(r)-2-((6-硝基吡啶-3-基)二硫基)丙基4-(氯甲基)苯基氨基甲酸酯(-硝基-pds-pab-cl)(100質(zhì)量％,b,38mg,0.09181mmol,0.7260,38mg)(72.6％收率)。m/z＝414.00。

在小瓶中將n-[4-(氯甲基)苯基]氨基甲酸[(2r)-2-[(6-硝基-3-吡啶基)二硫基]丙基]酯(100質(zhì)量％)和(2s,4r)-4-[[2-[(1r,3r)-1-乙酰氧基-4-甲基-3-[甲基-[(2s,3s)-3-甲基-2-[[(2r)-1-甲基哌啶-2-羰基]氨基]戊?；鵠氨基]戊基]噻唑-4-羰基]氨基]-2-甲基-5-苯基-戊酸(100質(zhì)量％,9.6mg,0.013mmol,1.0,9.6mg)溶于n,n-二甲基甲酰胺(100質(zhì)量％)。向反應混合物中加入四丁基碘化銨(65.65質(zhì)量％,0.2當量,0.0026mmol,0.20,1.5mg)，然后加入n,n-二異丙基乙胺(100質(zhì)量％,1當量,0.013mmol,1.0,1.7mg,0.0023ml)。將反應混合物溫熱至38℃保持20分鐘，然后在室溫攪拌2小時。lc/ms顯示期望的產(chǎn)物。將反應在約一半時停止以避免分解，用dmf稀釋并在酸性條件下直接在hplc上純化。分離(2s,4r)-4-[[2-[(1r,3r)-1-乙酰氧基-4-甲基-3-[甲基-[(2s,3s)-3-甲基-2-[[(2r)-1-甲基-1-[[4-[[(2r)-2-[(6-硝基-3-吡啶基)二硫基]丙氧基]羰基氨基]苯基]甲基]哌啶-1-鎓-2-羰基]氨基]戊?；鵠氨基]戊基]噻唑-4-羰基]氨基]-2-甲基-5-苯基-戊酸。(100質(zhì)量％,4.6mg,0.0041576mmol,0.32,4.6mg)(32％收率),m/z＝1106.4。

實施例4(mc-sq-cit-pab倍癌霉素dm)

制備2-[[2-[(1s)-1-(氯甲基)-5-羥基-1,2-二氫苯并[e]吲哚-3-羰基]-1h-吲哚-5-基]氧基]乙基-[[4-[[(2s)-2-[[1-[5-(2,5-二氧代吡咯-1-基)戊基氨甲酰基]環(huán)丁烷羰基]氨基]-5-脲基-戊?；鵠氨基]苯基]甲基]-二甲基-銨

步驟1：(s)-n-(5-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1h-吡咯-1-基)戊基)-n-(1-(4-(羥基甲基)苯基氨基)-1-氧代-5-脲基戊-2-基)環(huán)丁烷-1,1-二甲酰胺

方案

程序

將化合物1(150g,1.53mol)加到化合物2(201g,1.53mol)在hoac(1000ml)中的攪拌溶液中。將混合物在室溫攪拌2h后，將其加熱回流8h。在減壓下除去有機溶劑并將殘余物用etoac(500ml×3)萃取并用h2o洗滌。將合并的有機層經(jīng)na2so4干燥并濃縮，得到產(chǎn)物。將所得產(chǎn)物用石油醚洗滌，得到化合物3，其為白色固體(250g,77.4％)。

將dppa(130g,473mmol)和tea(47.9g,473mmol)加到化合物3(100g,473mmol)在t-buoh(200ml)中的溶液中。將混合物在n2下加熱回流8h。將混合物濃縮并將殘余物通過硅膠柱色譜(pe:etoac＝3:1)純化，得到化合物4(13g,10％)。

向化合物4(28g,992mmol)在無水etoac(30ml)中的溶液中逐滴加入hcl/etoac(50ml)。將混合物在室溫攪拌5h后，將其過濾并將固體干燥，得到化合物5(16g,73.7％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6):δ8.02(s,2h),6.99(s,2h),3.37-3.34(m,2h),2.71-2.64(m,2h),1.56-1.43(m,4h),1.23-1.20(m,2h)。

向化合物6(17.50g,0.10mol)在二噁烷和h2o的混合物(50ml/75ml)中的混合物中加入k2co3(34.55g,0.25mol)。在0℃緩慢加入fmoc-cl(30.96g,0.12mol)。將反應混合物經(jīng)2h溫熱至室溫。在減壓下除去有機溶劑并用6mhcl溶液將水漿調(diào)至ph＝3并用etoac(100ml×3)萃取。將有機層經(jīng)na2so4干燥，過濾并在減壓下濃縮，得到所需產(chǎn)物7(38.0g,95.6％)。(化合物7后來是可商業(yè)獲得的。)

向化合物7(4g,10mmol)在dcm和meoh的混合物(100ml/50ml)中的溶液中加入4-氨基-苯基-甲醇(8)(1.6g,13mmol,1.3當量)和eedq(3.2g,13mmol,1.3當量)。將混合物在室溫在n2下攪拌16h后，將其濃縮，得到棕色固體。加入mtbe(200ml)并將其在15℃攪拌2h。通過過濾收集固體，用mtbe(50ml×2)洗滌，得到粗產(chǎn)物9，其為橙色固體(4.2g,84％)。

lcms(esi):m/z503.0[m+1]。

在室溫向化合物9(4.2g,8.3mmol)在無水dmf(20ml)中的攪拌溶液中逐滴加入哌啶(1.65ml,17mmol,2當量)。將混合物在室溫攪拌30min并形成固體析出物。加入無水dcm(50ml)且混合物立即變透明。將混合物在室溫再攪拌30min且lcms顯示化合物9被消耗。將其在減壓下濃縮至干(確保無哌啶剩余)并將殘余物在etoac和h2o(50ml/20ml)之間分配。將水相用etoac(50ml×2)洗滌并濃縮，得到10，其為油狀殘余物(2.2g,94％)(含有少量dmf)。

向化合物11(8g,29.7mmol)在dme(50ml)中的溶液中加入化合物10(6.0g,21.4mmol)和nahco3(7.48g,89.0mmol)在水(30ml)中的溶液。將混合物在室溫攪拌16h后，將其在減壓下濃縮至干并將殘余物通過柱色譜純化(dcm:meoh＝10:1)，得到粗化合物12，其為白色固體(6.4g,68.7％)。

lcms(esi):m/z435.0[m+1]。

在室溫向化合物12(6.4g,14.7mmol)在thf和meoh的混合物(20ml/10ml)中的攪拌溶液中加入lioh·h2o(1.2g,28.6mmol)在h2o(20ml)中的溶液。將反應混合物在室溫攪拌16h后，在減壓下除去溶劑并將所得殘余物通過制備型hplc純化，得到化合物13(3.5g,收率：58.5％)。

lcms(esi):m/z406.9[m+1]。¹hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ8.86(d,j＝8.4hz,2h),8.51(d,j＝8.4hz,2h),5.88-5.85(m,1h),5.78(s,2h),4.54-4.49(m,3h),4.38-4.32(m,1h),3.86-3.75(m,1h),3.84-3.80(m,2h),3.28-3.21(m,1h),3.30-3.24(m,1h),3.00-2.80(m,1h),2.37-2.28(m,2h)。

在0℃將dipea(1.59g,12.3mmol)和bop-cl(692mg,2.71mmol)加到化合物13(1.0g,2.46mmol)在dmf(10ml)中的溶液中，隨后加入化合物5(592mg,2.71mmol)。將混合物在0℃攪拌0.5h。將反應混合物用檸檬酸溶液(10ml)淬滅，用dcm/meoh(10:1)萃取。將有機層干燥并濃縮并將殘余物通過硅膠柱色譜(dcm:meoh＝10:1)純化，得到化合物14(1.0g,71％)。

¹hnmr(400mhz,dmso-d6):δ10.00(s,1h),7.82-7.77(m,2h),7.53(d,j＝8.4hz,2h),7.19(d,j＝8.4hz,2h),6.96(s,2h),5.95(t,j＝6.4hz,1h),5.39(s,2h),5.08(t,j＝5.6hz,1h),4.40-4.35(m,3h),4.09(d,j＝4.8hz,1h),3.01(d,j＝3.2hz,2h),3.05-2.72(m,4h),2.68-2.58(m,3h),2.40-2.36(m,4h),1.72-1.70(m,3h),1.44-1.42(m,1h),1.40-1.23(m,6h),1.21-1.16(m,4h)。

步驟2：(s)-n-(1-(4-(氯甲基)苯基氨基)-1-氧代-5-脲基戊-2-基)-1-(6-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1h-吡咯-1-基)己酰氨基)環(huán)丁烷甲酰胺

在0℃向化合物14(2.0g,3.5mmol)在nmp(50ml)中的溶液中逐滴加入socl2(1.25g,10.5mmol)。將反應混合物在20℃攪拌30min后，將其用水(50ml)稀釋并用etoac(50ml×3)萃取。將有機層干燥，濃縮并通過快速柱純化(dcm:meoh＝20:1),得到產(chǎn)物15(1.0g,48.4％)，其為灰色固體。lcms:(5-95,ab,1.5min),0.696min,m/z＝589.0[m+1]⁺。

步驟3：2-[[2-[(1s)-1-(氯甲基)-5-羥基-1,2-二氫苯并[e]吲哚-3-羰基]-1h-吲哚-5-基]氧基]乙基-[[4-[[(2s)-2-[[1-[5-(2,5-二氧代吡咯-1-基)戊基氨甲?；鵠環(huán)丁烷羰基]氨基]-5-脲基-戊?；鵠氨基]苯基]甲基]-二甲基-銨

將n1’-[(1s)-1-[[4-(氯甲基)苯基]氨甲?；鵠-4-脲基-丁基]-n1-[5-(2,5-二氧代吡咯-1-基)戊基]環(huán)丁烷-1,1-二甲酰胺15(100質(zhì)量％,1當量,0.04310mmol,1.000,25.39mg)和[(1s)-1-(氯甲基)-5-羥基-1,2-二氫苯并[e]吲哚-3-基]-[5-(2-二甲基氨基乙基氧基)-1h-吲哚-2-基]甲酮(100質(zhì)量％,20mg,0.04310mmol,1.000,20mg)在n,n-二甲基甲酰胺(100質(zhì)量％)中合并并將所得混合物攪拌數(shù)天。接下來加入四丁基碘化銨(65.65質(zhì)量％,0.3當量,0.01293mmol,0.3000,7.276mg)并將混合物攪拌過夜。沒有觀察到碘化物與氯化物的交換。然后加入n,n-二異丙基乙胺(100質(zhì)量％,1.2當量,0.05172mmol,1.200,6.685mg,0.00902ml)并將混合物攪拌4小時。反應混合物在lcms上含有主峰，其對應于所需產(chǎn)物。然后將反應混合物用dmf稀釋，在酸性條件下在hplc上直接純化并分離純級份。在室溫濃縮級份使一些物質(zhì)降解。因此，物質(zhì)被再次純化。2-[[2-[(1s)-1-(氯甲基)-5-羥基-1,2-二氫苯并[e]吲哚-3-羰基]-1h-吲哚-5-基]氧基]乙基-[[4-[[(2s)-2-[[1-[5-(2,5-二氧代吡咯-1-基)戊基氨甲?；鵠環(huán)丁烷羰基]氨基]-5-脲基-戊?；鵠氨基]苯基]甲基]-二甲基-銨(100質(zhì)量％,11.8mg,0.0116mmol,0.269,11.8mg)。26.9％收率。m/z＝1017.35

實施例5：mc-sq-cit-pab-長春堿

(5s,7s,9s)-9-((3ar,3a1r,4r,5s,5ar,10br)-4-乙酰氧基-3a-乙基-5-羥基-8-甲氧基-5-(甲氧基羰基)-6-甲基-3a,3a1,4,5,5a,6,11,12-八氫-1h-吲嗪并[8,1-cd]咔唑-9-基)-3-(4-((s)-2-(1-((5-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1h-吡咯-1-基)戊基)氨甲酰基)環(huán)丁烷甲酰氨基)-5-脲基戊酰氨基)芐基)-5-乙基-5-羥基-9-(甲氧基羰基)-1,2,3,4,5,6,7,8,9,10-十氫-3,7-橋亞甲基[1]氮雜環(huán)十一碳并[5,4-b]吲哚-3-鎓

在小瓶中加入在n,n-二甲基甲酰胺(100質(zhì)量％,100μl,1.29mmol,29.4,94.5mg,0.1ml)中的n1’-[(1s)-1-[[4-(氯甲基)苯基]氨甲?；鵠-4-脲基-丁基]-n1-[5-(2,5-二氧代吡咯-1-基)戊基]環(huán)丁烷-1,1-二甲酰胺(100質(zhì)量％,1當量,0.04400mmol,1.000,25.92mg)和長春堿(89.21質(zhì)量％,b,40mg,0.04400mmol,1.000,40mg)。向該混合物中加入四丁基碘化銨(65.65質(zhì)量％,0.3當量,0.01320mmol,0.3000,7.428mg)和n,n-二異丙基乙胺(100質(zhì)量％,1當量,0.04400mmol,1.000,5.687mg,0.00767ml)并將混合物攪拌數(shù)天。再加入1當量堿以進一步推動反應。將反應混合物用dmf稀釋，在酸性條件下在hplc上直接純化。分離一個純級份，得到最終產(chǎn)物(100質(zhì)量％,8.1mg,0.0059mmol,0.13,8.1mg)m/z＝1364.85(13％收率)。還分離幾個不純級份。¹hnmr(500mhz,dmso-d6)δ10.58(s,1h),9.84(s,1h),8.78(s,1h),8.43(s,2h),8.11(d,j＝7.9hz,1h),7.91(t,j＝5.6hz,1h),7.74(d,j＝8.1hz,2h),7.66(d,j＝8.1hz,1h),7.47(d,j＝8.1hz,2h),7.35(d,j＝8.0hz,1h),7.14-6.99(m,2h),6.98(d,j＝2.4hz,1h),6.57(s,1h),6.41(s,1h),6.31(t,j＝6.6hz,1h),5.80(dd,j＝10.5,4.9hz,1h),5.54(s,2h),5.28(d,j＝10.1hz,1h),5.13(s,2h),4.60(d,j＝12.4hz,2h),4.40(dt,j＝17.3,6.1hz,2h),4.18-4.07(m,2h),3.78(s,3h),3.62(t,j＝14.1hz,6h),3.36(t,j＝7.0hz,2h),3.20(dq,j＝29.0,8.5,6.3hz,2h),3.07(q,j＝6.6hz,2h),2.98(q,j＝6.4hz,2h),2.93-2.86(m,1h),2.83-2.71(m,2h),2.67(s,3h),2.48-2.33(m,5h),2.30(d,j＝14.8hz,1h),2.12-2.04(m,1h),1.97(s,3h),1.70(ddtd,j＝44.3,19.2,9.5,8.5,4.4hz,4h),1.56-1.31(m,14h),1.26-1.14(m,3h),0.81(t,j＝7.4hz,4h),0.60(t,j＝7.3hz,3h)。

實施例6和7

實施例6：mc-sq-cit-pab-經(jīng)嗎啉連接的-吉非替尼

(s)-4-(3-(4-(3-氯-4-氟苯基氨基)-7-甲氧基喹唑啉-6-基氧基)丙基)-4-(4-(2-(1-(5-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1h-吡咯-1-基)戊基氨甲?；?環(huán)丁烷甲酰氨基)-5-脲基戊酰氨基)芐基)嗎啉-4-鎓

實施例7：mc-sq-cit-pab-經(jīng)嘧啶連接的-吉非替尼

(s)-4-(3-氯-4-氟苯基氨基)-1-(4-(2-(1-(5-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1h-吡咯-1-基)戊基氨甲?；?環(huán)丁烷甲酰氨基)-5-脲基戊酰氨基)芐基)-7-甲氧基-6-(3-嗎啉代丙氧基)喹唑啉-1-鎓

方案1

方案2.中間體的合成

將化合物1(113.88mg,0.20mmol)和化合物2(100mg,0.22mmol)在dmf(3.0ml)中的溶液在23℃攪拌18.0h。將反應混合物濃縮并通過硅膠色譜(10-20％meoh/dcm)純化，得到呈黃色固體的化合物3a(9mg,4.3％收率)和呈白色固體的化合物3(8mg,3.5％收率)。3a的¹hnmr:(400mhz,dmso-d6)δ10.10(s,1h),8.31(s,1h),8.17(s,1h),7.87-7.66(d,j＝8.8hz,2h),7.69-7.58(m,6h),7.39-7.02(m,8h),6.86(s,1h),6.0(s,1h),5.43(s,2h),5.33(s,2h),4.25-4.12(m,6h),3.74(s,4h),3.53-3.51(m,5h),2.99-2.92(m,2h),2.40-2.32(m,5h),1.89-1.85(m,2h),1.60-1.36(m,4h)；lcms(5-95ab/1.5min):rt＝0.673min,[m+h]⁺931.3。3的¹hnmr:(dmso,400mhz)δ:10.59(s,1h),10.05(s,1h),8.50(s,2h),8.46(s,1h),8.18-8.16(d,j＝8.0hz,1h),8.00(s,1h),7.88-7.71(m,7h),7.514-7.24(m,8h),6.29(s,1h),5.54(s,2h),4.69(s,2h),4.30-4.14(m,6h),3.97-3.95(m,8h),3.57-3.51(m,6h),2.98-2.97(d,j＝5.6hz,2h),1.68-1.60(m,2h),1.47-1.40(m,2h)；lcms(5-95ab/1.5min):rt＝0.662min,[m+h]⁺931.3。

向化合物3(50.0mg,0.050mmol)在dmf(1.5ml)中的溶液中加入哌啶(9.13mg,0.110mmol)并將混合物在23℃攪拌3.0h。lcms顯示50.6％的產(chǎn)物。將混合物濃縮并將殘余物用mtbe(6.0ml)洗滌兩次，得到化合物4(31mg,0.044mmol,81.4％)，其為白色固體且直接使用。lcms(5-95ab/1.5min):rt＝0.553min,[m+h]⁺709.2。

向化合物4(31.0mg,0.040mmol)在dmf(3.0ml)中的溶液中加入化合物5(41.4mg,0.090mmol)和diea(11.3mg,0.090mmol)。將混合物在23℃攪拌18.0h后，lcms顯示52％的產(chǎn)物。將殘余物通過制備型hplc(fa,乙腈20％-50％)純化，得到(s)-4-(3-(4-(3-氯-4-氟苯基氨基)-7-甲氧基喹唑啉-6-基氧基)丙基)-4-(4-(2-(1-(5-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1h-吡咯-1-基)戊基氨甲?；?環(huán)丁烷甲酰氨基)-5-脲基戊酰氨基)芐基)嗎啉-4-鎓即實施例6(10.4mg,23.6％收率)，其為白色固體。lcms(5-95ab/1.5min):rt＝0.736min,[m+h]⁺1001.1。

向化合物3a(110.0mg,0.120mmol)在dmf(2.5ml)中的溶液中加入哌啶(20.1mg,0.240mmol)。將混合物在23℃攪拌3.0h。lcms顯示50.7％的產(chǎn)物。將混合物濃縮以除去dmf，用mtbe(10.0ml)洗滌兩次，得到粗化合物4a(85mg,100％收率)，其為黃色固體且直接用于下一步。

向化合物4a(40mg,0.060mmol)在dmf(3ml)中的溶液中加入化合物5(53.4mg,0.110mmol)和diea(14.6mg,0.113mmol)。將混合物在23℃攪拌18.0h。將所得殘余物通過制備型hplc(fa,乙腈20％-50％)純化，得到(s)-4-(3-氯-4-氟苯基氨基)-1-(4-(2-(1-(5-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1h-吡咯-1-基)戊基氨甲?；?環(huán)丁烷甲酰氨基)-5-脲基戊酰氨基)芐基)-7-甲氧基-6-(3-嗎啉代丙氧基)喹唑啉-1-鎓即實施例7(10.3mg,17.9％收率)，其為黃色固體。lcms(5-95ab/1.5min):rt＝0.740min,[m]⁺1001.6。

在0℃向裝有化合物6(1000mg,1.99mmol)的燒瓶中逐滴加入hbr/hoac溶液(4.0ml)。將其在25℃攪拌3.0h。lcms(5-95ab/1.5min)顯示90.2％的產(chǎn)物。將混合物濃縮，加入etoac(300ml)并濃縮以除去少量酸，然后將殘余物倒入冰-水(50.0ml)并通過過濾收集固體，得到化合物2(726mg,41.3％收率)，其為灰色固體。lcms(5-95ab/1.5min):rt＝0.772min,[m+h]⁺567.0。

向化合物7(200mg,0.65mmol)在dcm(12ml)中的溶液中加入化合物8(179mg,0.97mmol)和dic(123mg,0.97mmol)，將混合物在23℃攪拌1.5h。lcms顯示70.9％的產(chǎn)物。將混合物濃縮并用thf(2.0ml)洗滌兩次，得到化合物5(120mg,0.263mmol,40.5％收率)，其為無色油狀物且直接用于下一步。

制備adc的方法

通過還原和再氧化制備用于綴合的半胱氨酸工程化抗體

在某些條件下通過用還原劑例如dtt(cleland試劑,二硫蘇糖醇)或tcep(三(2-羧基乙基)膦鹽酸鹽；getz等人(1999)anal.biochem.vol273:73-80；soltecventures,beverly,ma)處理可使半胱氨酸工程化抗體具有反應性以與本申請連接基-藥物中間體綴合。還原(例如在室溫用約50倍過量的dtt還原過夜)在cho細胞中表達的全長半胱氨酸工程化單克隆抗體(thiomabs)(gomez等人(2010)biotechnologyandbioeng.105(4):748-760；gomez等人(2010)biotechnol.prog.26:1438-1445)以減少可在新引入的半胱氨酸殘基和存在于培養(yǎng)基中的半胱氨酸之間形成的二硫鍵。

輕鏈氨基酸根據(jù)kabat(kabat等人,sequencesofproteinsofimmunologicalinterest,(1991)第5版,usdeptofhealthandhumanservice,nationalinstitutesofhealth,bethesda,md)編號。重鏈氨基酸根據(jù)eu編號系統(tǒng)(edelman等人(1969)proc.natl.acad.ofsci.63(1):78-85)編號，除注明kabat系統(tǒng)外。使用單字母氨基酸縮寫。

在cho細胞中表達的全長半胱氨酸工程化單克隆抗體(thiomab)由于細胞培養(yǎng)條件而在工程化半胱氨酸上具有半胱氨酸加合物(胱氨酸)或谷胱甘肽化。為了釋放工程化半胱氨酸的反應性巰基，將thiomab溶解在約ph8.0的500mm硼酸鈉和500mm氯化鈉中并用約50-100倍過量的1mmtcep(三(2-羧基乙基)膦鹽酸鹽(getz等人(1999)anal.biochem.vol273:73-80；soltecventures,beverly,ma)在37℃還原約1-2小時?？蛇x擇地，dtt可用作還原劑。通過非還原性sds-page或通過變性反相hplcplrp柱色譜監(jiān)測鏈間二硫鍵的形成。將還原的thiomab稀釋并加載到在10mm醋酸鈉(ph5)中的hitrapspff柱上并用含有0.3m氯化鈉的pbs或含有150mm氯化鈉的50mmtris-cl(ph7.5)洗脫。

通過進行再氧化在存在于母體mab中的半胱氨酸殘基之間重新建立二硫鍵。用15×或2mm脫氫抗壞血酸(dhaa)在ph7將洗脫的還原的thiomab處理3小時或在50mmtris-cl(ph7.5)中或用2mm硫酸銅(cuso4)水溶液在室溫處理過夜?？墒褂帽绢I(lǐng)域已知的其它氧化劑和氧化條件。環(huán)境空氣氧化也可為有效的。這種溫和的部分再氧化步驟以高精確度有效地形成鏈內(nèi)二硫化物。通過在sephadexg25樹脂上洗脫來交換緩沖液并用具有1mmdtpa的pbs洗脫。通過由溶液在280nm的吸光度測定還原的抗體濃度及通過與dtnb(aldrich,milwaukee,wi)反應并測定在412nm的吸光度測定巰基濃度來檢查巰基/ab值。

在具有擴展質(zhì)量范圍的tsqquantumtriplequadrupole^tm質(zhì)譜儀(thermoelectron,sanjosecalifornia)上進行液相色譜/質(zhì)譜分析。樣品在加熱至75℃的prlp-1000a微孔柱(50mm×2.1mm,polymerlaboratories,shropshire,uk)上進行色譜分離。使用30-40％b(溶劑a:0.05％tfa的水溶液,溶劑b:0.04％tfa的乙腈溶液)的線性梯度并使用電噴霧源直接將洗脫液離子化。數(shù)據(jù)通過數(shù)據(jù)系統(tǒng)收集并使用(novatia,llc,newjersey)進行去卷積。進行l(wèi)c/ms分析前，用pngasef(2單位/ml；prozyme,sanleandro,ca)在37℃將抗體或藥物綴合物(50微克)處理2小時以除去經(jīng)n連接的碳水化合物。

將疏水相互作用色譜(hic)樣品注射到butylhicnpr柱(2.5微米粒徑,4.6mm×3.5cm)(tosohbioscience)上并以0.8ml/min用0-70％b(a:1.5m硫酸銨在50mm磷酸鉀(ph7)中的溶液,b:50mm磷酸鉀(ph7),20％異丙醇)的線性梯度進行洗脫。使用配備有多波長檢測器和chemstation軟件的agilent1100系列hplc系統(tǒng)以解析和定量具有不同的藥物/抗體比例的抗體種類。本申請半胱氨酸工程化抗體可按照上述一般方法制備。

連接基-藥物中間體與抗體的綴合(程序1)

當在cho細胞中表達時，工程化抗體半胱氨酸作為與谷胱甘肽和/或半胱氨酸的混合二硫化物被封閉。這些半胱氨酸在綴合前必須被“去封閉”。將在20mm琥珀酸鹽、150mmnacl、2mmedta中的去封閉的抗體(5-12mg/ml)加到75-100mmtris(ph7.5-8)(使用1mtris)中。將共溶劑(dmso、dmf或dma)加到抗體溶液中，然后加入連接基-藥物(在dmso或dmf中)，使有機溶劑的最終％為10-13％且連接基-藥物的最終濃度相對于抗體濃度為2.5-10×。使反應在室溫進行1-12小時(直到達到最大綴合)。通過陽離子交換色譜和/或使用一次性柱進行凝膠過濾(分別為smaxi或zeba)來純化綴合反應混合物。若根據(jù)分析性sec粗綴合物是顯著聚集的(例如>10％)，則通過制備型凝膠過濾(s200柱)進行額外的純化。隨后使用凝膠過濾或透析將綴合物交換到制劑緩沖液(20mmhis-乙酸鹽,ph5.5,240mm蔗糖)中。隨后將tween-20加到純化的綴合物中以達到0.02％的最終濃度。最終綴合物濃度范圍為2.4-7.5mg/ml(來自去封閉的抗體的％收率為34-81％)。通過lcms分析綴合物以獲得藥物-抗體比(dar)的測量值，其范圍為1.3-2.1(平均值為1.8)。還使用分析型sec(zenix或shodex柱)分析綴合物的高分子量聚集體的存在；純化的最終綴合物顯示0-10％的聚集。還對綴合物進行了內(nèi)毒素污染評估，其在所有情況下都不超過1.3eu/毫克。游離的非綴合的藥物不超過最終綴合物的1％。

連接基-藥物中間體與抗體的綴合(方法2即替代方法)

上述實施例的還原和再氧化程序后，將抗體溶于pbs(磷酸鹽緩沖鹽水)緩沖液并在冰上冷卻。將約1.5摩爾濃度至20當量的過量的具有巰基反應性官能團例如馬來酰亞氨基或溴乙酰胺的連接基-藥物中間體溶于dmso，稀釋在乙腈和水中并加到在pbs中的冷卻的還原的再氧化的抗體中。約1小時后，加入過量的馬來酰亞胺以淬滅反應并封閉任何未反應的抗體巰基。綴合物混合物可通過hitrapspff柱負載和洗脫以除去過量的藥物-連接基中間體和其它雜質(zhì)。通過離心超濾濃縮反應混合物并通過在pbs中通過g25樹脂洗脫來純化和脫鹽半胱氨酸工程化抗體藥物綴合物，在無菌條件下通過0.2μm過濾器過濾并冷凍儲存。

本申請adc可根據(jù)上述章節(jié)描述的程序制備。

測定

然后測試所選連接基并在體外和體內(nèi)測定中發(fā)現(xiàn)其是有活性的。裂解數(shù)據(jù)顯示在下表中。

組織蛋白酶b裂解測定

如肽連接基那樣，用于adc的非肽連接基預期在溶酶體中可裂解以用于適當?shù)乃幬镝尫?。作為細胞的消化性細胞器，溶酶體富含一些在酸性ph顯示最佳水解活性的蛋白酶。組織蛋白酶b是代表性溶酶體蛋白酶且已被證實有助于adc肽連接基的活化。作為初始篩選，使用純化的組織蛋白酶b開發(fā)用于對適于與抗體綴合的可裂解的連接基-藥物構(gòu)建體進行鑒定的測定。諾氟沙星用于代表連接基-藥物的藥物組分。在給定的時間點測量相對于對照肽(例如val-cit)的裂解百分比及裂解反應的動力學參數(shù)(km和vmax)。關(guān)于測定的詳細描述如下所示。由該測定可鑒定多種具有蛋白水解活性且在結(jié)構(gòu)上不同的連接基且隨后用于制備adc。

使用實驗性連接基-藥物作為底物的組織蛋白酶b裂解活性通過使用lc/ms監(jiān)測諾氟沙星的釋放來測量。將不同濃度的連接基-藥物(3倍連續(xù)稀釋)在含有20nm組織蛋白酶b(emdmillipore目錄號219364,人肝)、10mmmesph6.0、1mmdtt、0.03％chaps和25nm諾氟沙星-d5內(nèi)標(santacruzbiotechnology,目錄號sc-301482)的20μl反應混合物中溫育。將反應混合物在37℃溫育1小時，然后加入60μl2％甲酸以淬滅反應。通過在watersacquityuplcbehphenyl柱(2.1mm×50mm,waters目錄號186002884)上注射2μl停止的反應混合物來分析樣品。在wateracquityuplc上使用2分鐘線性梯度(0％至80％)的乙腈,0.1％甲酸純化樣品。使用以正mrm模式運行的absciexqtrap5500三重四極質(zhì)譜儀檢測諾氟沙星和諾氟沙星-d5內(nèi)標(諾氟沙星320→233m/z,諾氟沙星-d5325→233m/z)。將定量的諾氟沙星(用內(nèi)標歸一化)對連接基-藥物濃度作圖并使用graphpadprism軟件用michaelis-menten擬合來曲線擬合所得圖以得到動力學常數(shù)km和vmax。

體外細胞增殖測定

通過使用以下方案的細胞增殖測定來測量adc的效力(celltiterglo^tmluminescentcellviabilityassay,promegacorp.technicalbulletintb288；mendoza等人(2002)cancerres.62:5485-5488)：

1.將100μl含有約10⁴個細胞(skbr-3、bt474、mcf7或mda-mb-468)在培養(yǎng)基中的細胞培養(yǎng)物的等分試樣沉積在96孔具有不透明壁的板的每個孔中。

2.制備含有培養(yǎng)基且不含細胞的對照孔。

3.將adc加到實驗孔中并溫育3-5天。

4.將板平衡至室溫且保持約30分鐘。

5.加入體積與在每個孔中存在的細胞培養(yǎng)基的體積相等的celltiterglo^tm試劑。

6.將內(nèi)容物在軌道振蕩器上混合2分鐘以誘導細胞裂解。

7.將板在室溫溫育10分鐘以穩(wěn)定發(fā)光信號。

8.記錄發(fā)光并在圖中報道為rlu＝相對發(fā)光單位。

將數(shù)據(jù)繪制為每個重復組的發(fā)光平均值+標準偏差誤差棒。所述方案是celltiterglo^tm發(fā)光細胞培養(yǎng)基的改良：sk-br-3在50/50/10％fbs/谷氨酰胺/250μg/mlg-418中生長，ovcar-3在rpmi/20％fbs/谷氨酰胺中生長。

體內(nèi)測定

1.在igrov-1(人卵巢癌)的小鼠異種移植物模型中研究抗napi2b抗體-藥物綴合物(adc)的效力。

將雌性c.b-17scid米色小鼠(charlesriverlaboratories；sandiego,ca)各自在胸部乳腺脂肪墊區(qū)域接種500萬個igrov-1細胞。當異種移植物腫瘤達到100-300mm³的平均腫瘤體積(稱為第0天)時，將動物隨機分成每組7-10只小鼠的組并接受adc的單次靜脈內(nèi)注射。在整個研究期間每周測量1-2次小鼠的腫瘤和體重。當體重減輕為其初始體重的>20％時，將小鼠立即安樂死。所有動物在腫瘤達到3000mm³或顯示即將潰瘍的跡象前安樂死。

2.在ovcar3-x2.1(人卵巢癌)的小鼠異種移植物模型中研究抗napi2b抗體-藥物綴合物(adc)的效力。ovcar3細胞系獲自atcc(americantypeculturecollection；manassas,va)并在genentech產(chǎn)生支系ovcar3-x2.1用于在小鼠中最佳生長。

將雌性c.b-17scid米色小鼠(charlesriverlaboratories；sandiego,ca)各自在胸部乳腺脂肪墊區(qū)域接種1000萬個ovcar3-x2.1細胞。當異種移植物腫瘤達到100-300mm³的平均腫瘤體積(稱為第0天)時，將動物隨機分成每組7-10只小鼠的組并接受adc的單次靜脈內(nèi)注射。在整個研究期間每周測量1-2次小鼠的腫瘤和體重。當體重減輕為其初始體重的>20％時，將小鼠立即安樂死。所有動物在腫瘤達到3000mm³或顯示即將潰瘍的跡象前安樂死。

3.在bjab-luc(人伯基特氏淋巴瘤)或wsu-dlcl2(人彌漫性大b細胞淋巴瘤)的小鼠異種移植物模型中研究抗cd22抗體-藥物綴合物(adc)的效力。bjab細胞系獲自dsmz(germancollectionofmicroorganismsandcellcultures；braunschweig,germany)并在genentech產(chǎn)生支系bjab-luc以穩(wěn)定表達螢光素酶基因。wsu-dlcl2細胞系也來自dsmz。

將雌性c.b-17scid小鼠(charlesriverlaboratories；sandiego,ca)各自在脅腹區(qū)域皮下接種2000萬個bjab-luc或wsu-dlcl2細胞。當異種移植物腫瘤達到100-300mm³的平均腫瘤體積(稱為第0天)時，將動物隨機分成每組7-10只小鼠的組并接受adc的單次靜脈內(nèi)注射。在整個研究期間每周測量1-2次小鼠的腫瘤和體重。當體重減輕為其初始體重的>20％時，將小鼠立即安樂死。所有動物在腫瘤達到3000mm³或顯示即將潰瘍的跡象前安樂死。

4.在wsu-dlcl2(人彌漫性大b細胞淋巴瘤)的小鼠異種移植物模型中研究抗cd22抗體-藥物綴合物(adc)的效力。wsu-dlcl2細胞系獲自dsmz(germancollectionofmicroorganismsandcellcultures；braunschweig,germany)。

將雌性c.b-17scid小鼠(charlesriverlaboratories；sandiego,ca)各自在脅腹區(qū)域皮下接種2000萬個wsu-dlcl2細胞。當異種移植物腫瘤達到100-300mm³的平均腫瘤體積(稱為第0天)時，將動物隨機分成每組7-10只小鼠的組并接受adc的單次靜脈內(nèi)注射。在整個研究期間每周測量1-2次小鼠的腫瘤和體重。當體重減輕為其初始體重的>20％時，將小鼠立即安樂死。所有動物在腫瘤達到3000mm³或顯示即將潰瘍的跡象前安樂死。

生物學數(shù)據(jù)

adc連接基-藥物結(jié)構(gòu)

序列

napi2b人源化抗體：

在一個實施方案中，本申請adc的napi2b抗體包含三個輕鏈高變區(qū)和三個重鏈高變區(qū)(seqidno:1-6)，其序列如下所示。

在一個實施方案中，本申請adc的napi2b抗體包含seqidno:7的可變輕鏈序列和seqidno:8的可變重鏈序列。

在一個實施方案中，本申請adc的napi2b抗體包含seqidno:9的輕鏈序列和seqidno:10的重鏈序列。

抗cd33人源化抗體：

在一個實施方案中，本申請adc的抗cd33抗體包含三個輕鏈高變區(qū)和三個重鏈高變區(qū)，其序列(seqidno:11-16)如下所示。

在一個實施方案中，本申請adc的抗cd33抗體包含seqidno:17的可變輕鏈序列和seqidno:18的可變重鏈序列。

在一個實施方案中，本申請adc的抗cd33抗體包含seqidno:19的輕鏈序列和seqidno:20的重鏈序列。

在一個實施方案中，本申請adc的抗cd33抗體包含三個輕鏈高變區(qū)和三個重鏈高變區(qū)，其序列(seqidno:19-24)如下所示。

在一個實施方案中，本申請adc的抗cd33抗體包含seqidno:25的可變輕鏈序列和seqidno:26的可變重鏈序列。

在一個實施方案中，本申請adc的抗cd33抗體包含seqidno:27的可變輕鏈序列和seqidno:28的可變重鏈序列。

在一個實施方案中，本申請adc的抗cd33抗體包含seqidno:29的可變輕鏈序列和seqidno:30的可變重鏈序列。

在一個實施方案中，本申請adc的抗cd33抗體包含seqidno:31的可變輕鏈序列和seqidno:32的可變重鏈序列。

抗cd22人源化抗體：

在一個實施方案中，本申請adc的抗cd22抗體包含三個輕鏈高變區(qū)和三個重鏈高變區(qū)(seqidno:41-46)，其序列如下所示。

在一個實施方案中，本申請adc的抗cd22抗體包含seqidno:47的可變輕鏈序列和seqidno:48的可變重鏈序列。

在一個實施方案中，本申請adc的抗cd22抗體包含seqidno:49的輕鏈序列和seqidno:50的重鏈序列。

adc體內(nèi)數(shù)據(jù)

抗cd2210f4v3lck149cmc-sq-cit-pab-tubulysinm(adc2-2)在bjab和wsu-dlcl2中顯示靶標特異性殺滅

抗cd2210f4v3lck149cmc-sq-cit-pab-多拉司他汀10(adc1-2)在wsu-dlcl2中顯示靶標特異性殺滅

抗napi2b10h1.11.4blck149cmc-sq-cit-pab-tubulysinm(adc2-1)在eduprolif測定中在igrov-1和ovcar-3x2.1中顯示靶標特異性殺滅

抗napi2b10h1.11.4blck149cmc-sq-cit-pab-多拉司他汀10(adc1-1)在eduprolif測定中在igrov-1和ovcar-3x2.1中顯示靶標特異性殺滅

adc體內(nèi)數(shù)據(jù)

以下adc在上述體內(nèi)測定中進行測試且發(fā)現(xiàn)其具有活性。所述adc的活性在圖1和以下描述中示出。

圖1顯示了多種cd22adc在具有wsu-dlcl2人彌漫性大b細胞淋巴瘤的scid小鼠中的效力比較。cd22adc1-2和adc2-2與媒介物組相比都對腫瘤生長顯示出劑量依賴性抑制，且adc1-2顯示出比adc2-2更強的抗腫瘤活性。非結(jié)合對照napi2badc對腫瘤生長具有最小的影響。

序列表

<110>基因泰克公司

<120>季銨化合物及其抗體-藥物綴合物

<130>p32456-wo

<140>

<141>

<150>62/087,127

<151>2014-12-03

<160>50

<170>patentinversion3.5

<210>1

<211>16

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<221>來源

<223>/注釋="對人工序列的描述:合成肽"

<400>1

argsersergluthrleuvalhisserserglyasnthrtyrleuglu

151015

<210>2

<211>7

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<221>來源

<223>/注釋="對人工序列的描述:合成肽"

<400>2

argvalserasnargpheser

15

<210>3

<211>9

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<221>來源

<223>/注釋="對人工序列的描述:合成肽"

<400>3

pheglnglyserpheasnproleuthr

15

<210>4

<211>10

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<221>來源

<223>/注釋="對人工序列的描述:合成肽"

<400>4

glypheserpheseraspphealametser

1510

<210>5

<211>18

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<221>來源

<223>/注釋="對人工序列的描述:合成肽"

<400>5

alathrileglyargvalalaphehisthrtyrtyrproaspsermet

151015

lysgly

<210>6

<211>13

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<221>來源

<223>/注釋="對人工序列的描述:合成肽"

<400>6

alaarghisargglypheaspvalglyhispheaspphe

1510

<210>7

<211>113

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<221>來源

<223>/注釋="對人工序列的描述:合成肽"

<400>7

aspileglnmetthrglnserproserserleuseralaservalgly

151015

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505560

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65707580

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859095

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100105110

arg

<210>8

<211>120

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<221>來源

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151015

serleuargleusercysalaalaserglypheserpheseraspphe

202530

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354045

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505560

lysglyargphethrileserargaspasnserlysasnthrleutyr

65707580

leuglnmetasnserleuargalagluaspthralavaltyrtyrcys

859095

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100105110

glythrleuvalthrvalserser

115120

<210>9

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<212>prt

<213>人工序列

<220>

<221>來源

<223>/注釋="對人工序列的描述:合成肽"

<400>9

aspileglnmetthrglnserproserserleuseralaservalgly

151015

aspargvalthrilethrcysargsersergluthrleuvalhisser

202530

serglyasnthrtyrleuglutrptyrglnglnlysproglylysala

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prolysleuleuiletyrargvalserasnargpheserglyvalpro

505560

serargpheserglyserglyserglythraspphethrleuthrile

65707580

serserleuglnprogluaspphealathrtyrtyrcyspheglngly

859095

serpheasnproleuthrpheglyglnglythrlysvalgluilelys

100105110

argthrvalalaalaproservalpheilepheproproseraspglu

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130135140

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lyshislysvaltyralacysgluvalthrhisglnglyleuserser

195200205

provalthrlysserpheasnargglyglucys

210215

<210>10

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<212>prt

<213>人工序列

<220>

<221>來源

<223>/注釋="對人工序列的描述:合成肽"

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gluvalglnleuvalgluserglyglyglyleuvalglnproglygly

151015

serleuargleusercysalaalaserglypheserpheseraspphe

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alametsertrpvalargglnalaproglylysglyleuglutrpval

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alathrileglyargvalalaphehisthrtyrtyrproaspsermet

505560

lysglyargphethrileserargaspasnserlysasnthrleutyr

65707580

leuglnmetasnserleuargalagluaspthralavaltyrtyrcys

859095

alaarghisargglypheaspvalglyhispheaspphetrpglygln

100105110

glythrleuvalthrvalsersercysserthrlysglyproserval

115120125

pheproleualaproserserlysserthrserglyglythralaala

130135140

leuglycysleuvallysasptyrpheprogluprovalthrvalser

145150155160

trpasnserglyalaleuthrserglyvalhisthrpheproalaval

165170175

leuglnserserglyleutyrserleuserservalvalthrvalpro

180185190

serserserleuglythrglnthrtyrilecysasnvalasnhislys

195200205

proserasnthrlysvalasplyslysvalgluprolyssercysasp

210215220

lysthrhisthrcysproprocysproalaprogluleuleuglygly

225230235240

proservalpheleupheproprolysprolysaspthrleumetile

245250255

serargthrprogluvalthrcysvalvalvalaspvalserhisglu

260265270

aspprogluvallyspheasntrptyrvalaspglyvalgluvalhis

275280285

asnalalysthrlysproargglugluglntyrasnserthrtyrarg

290295300

valvalservalleuthrvalleuhisglnasptrpleuasnglylys

305310315320

glutyrlyscyslysvalserasnlysalaleuproalaproileglu

325330335

lysthrileserlysalalysglyglnproarggluproglnvaltyr

340345350

thrleuproproserarggluglumetthrlysasnglnvalserleu

355360365

thrcysleuvallysglyphetyrproseraspilealavalglutrp

370375380

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385390395400

leuaspseraspglyserphepheleutyrserlysleuthrvalasp

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420425430

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glylys

450

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<213>人工序列

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<221>來源

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<400>11

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<212>prt

<213>人工序列

<220>

<221>來源

<223>/注釋="對人工序列的描述:合成肽"

<400>12

leuglyvalasnservalser

15

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<212>prt

<213>人工序列

<220>

<221>來源

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<400>13

metglnalaleuglnthrprotrpthr

15

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<212>prt

<213>人工序列

<220>

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asnhisalaileser

15

<210>15

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<212>prt

<213>人工序列

<220>

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<223>/注釋="對人工序列的描述:合成肽"

<400>15

glyileileproilepheglythralaasntyralaglnlysphegln

151015

gly

<210>16

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<212>prt

<213>人工序列

<220>

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glutrpalaaspvalpheaspile

15

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<212>prt

<213>人工序列

<220>

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<400>17

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151015

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100105110

<210>18

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<212>prt

<213>人工序列

<220>

<221>來源

<223>/注釋="對人工序列的描述:合成肽"

<400>18

glnvalglnleuvalglnserglyalagluvallyslysproglyser

151015

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202530

alailesertrpvalargglnalaproglyglnglyleuglutrpmet

354045

glyglyileileproilepheglythralaasntyralaglnlysphe

505560

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65707580

metgluleuserserleuargsergluaspthralavaltyrtyrcys

859095

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100105110

valthrvalserser

115

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<211>11

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<221>來源

<223>/注釋="對人工序列的描述:合成肽"

<400>19

argalaserglnglyileargasnaspleugly

1510

<210>20

<211>7

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<221>來源

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<400>20

alaalaserserleuglnser

15

<210>21

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<212>prt

<213>人工序列

<220>

<221>來源

<223>/注釋="對人工序列的描述:合成肽"

<400>21

leuglnhisasnsertyrprotrpthr

15

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<212>prt

<213>人工序列

<220>

<221>來源

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<400>22

glyasntyrmetser

15

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<212>prt

<213>人工序列

<220>

<221>來源

<223>/注釋="對人工序列的描述:合成肽"

<400>23

leuiletyrserglyaspserthrtyrtyralaaspservallysgly

151015

<210>24

<211>10

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<221>來源

<223>/注釋="對人工序列的描述:合成肽"

<400>24

aspglytyrtyrvalseraspmetvalval

1510

<210>25

<211>107

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<221>來源

<223>/注釋="對人工序列的描述:合成肽"

<400>25

aspileglnmetthrglnserproserserleuseralaservalgly

151015

aspargvalthrilethrcysargalaserglnglyileargasnasp

202530

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tyralaalaserserleuglnserglyvalproserargphesergly

505560

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65707580

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thrpheglyglnglythrlysleugluilelys

100105

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<212>prt

<213>人工序列

<220>

<221>來源

<223>/注釋="對人工序列的描述:合成肽"

<400>26

gluvalglnleuvalgluserglyglyalaleuileglnproglygly

151015

serleuargleusercysvalalaserglyphethrileserglyasn

202530

tyrmetsertrpvalargglnalaproglylysglyleuglutrpval

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serleuiletyrserglyaspserthrtyrtyralaaspservallys

505560

glyargpheasnileserargaspileserlysasnthrvaltyrleu

65707580

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100105110

thrvalthrvalserser

115

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<212>prt

<213>人工序列

<220>

<221>來源

<223>/注釋="對人工序列的描述:合成肽"

<400>27

aspileglnmetthrglnserproserserleuseralaservalgly

151015

aspargvalthrilethrcysargalaserglnglyileargasnasp

202530

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354045

tyralaalaserserleuglnserglyvalproserargphesergly

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serglyserglythrgluphethrleuthrileserserleuglnpro

65707580

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100105

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<212>prt

<213>人工序列

<220>

<221>來源

<223>/注釋="對人工序列的描述:合成肽"

<400>28

gluvalglnleuvalgluserglyglyalaleuileglnproglygly

151015

serleuargleusercysvalalaserglyphethrileserglyasn

202530

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serleuiletyrserglyaspserthrtyrtyralaaspservallys

505560

glyargphethrileserargaspileserlysasnthrvaltyrleu

65707580

glnmetasnserleuargvalgluaspthralavaltyrtyrcysval

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100105110

thrvalthrvalserser

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<212>prt

<213>人工序列

<220>

<221>來源

<223>/注釋="對人工序列的描述:合成肽"

<400>29

aspileglnmetthrglnserproserserleuseralaservalgly

151015

aspargvalthrilethrcysargalaserglnglyileargasnasp

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65707580

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100105

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<212>prt

<213>人工序列

<220>

<221>來源

<223>/注釋="對人工序列的描述:合成肽"

<400>30

gluvalglnleuvalgluserglyglyalaleuileglnproglygly

151015

serleuargleusercysvalalaserglyphethrileserglyasn

202530

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354045

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505560

glyargpheserileserargaspileserlysasnthrvaltyrleu

65707580

glnmetasnserleuargvalgluaspthralavaltyrtyrcysval

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100105110

thrvalthrvalserser

115

<210>31

<211>107

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<221>來源

<223>/注釋="對人工序列的描述:合成肽"

<400>31

aspileglnmetthrglnserproserserleuseralaservalgly

151015

aspargvalthrilethrcysargalaserglnglyileargasnasp

202530

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tyralaalaserserleuglnserglyvalproserargphesergly

505560

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65707580

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<212>prt

<213>人工序列

<220>

<221>來源

<223>/注釋="對人工序列的描述:合成肽"

<400>32

gluvalglnleuvalgluserglyglyalaleuileglnproglygly

151015

serleuargleusercysvalalaserglyphethrileserglyasn

202530

tyrmetsertrpvalargglnalaproglylysglyleuglutrpval

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505560

glyargphealaileserargaspileserlysasnthrvaltyrleu

65707580

glnmetasnserleuargvalgluaspthralavaltyrtyrcysval

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argaspglytyrtyrvalseraspmetvalvaltrpglylysglythr

100105110

thrvalthrvalserser

115

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000

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<400>40

000

<210>41

<211>16

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<221>來源

<223>/注釋="對人工序列的描述:合成肽"

<400>41

argserserglnserilevalhisservalglyasnthrpheleuglu

151015

<210>42

<211>7

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<221>來源

<223>/注釋="對人工序列的描述:合成肽"

<400>42

lysvalserasnargpheser

15

<210>43

<211>9

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<221>來源

<223>/注釋="對人工序列的描述:合成肽"

<400>43

pheglnglyserglnpheprotyrthr

15

<210>44

<211>10

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<221>來源

<223>/注釋="對人工序列的描述:合成肽"

<400>44

glytyrglupheserargsertrpmetasn

1510

<210>45

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<221>來源

<223>/注釋="對人工序列的描述:合成肽"

<400>45

argiletyrproglyaspglyaspthrasntyrserglylysphelys

151015

gly

<210>46

<211>11

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<221>來源

<223>/注釋="對人工序列的描述:合成肽"

<400>46

aspglysersertrpasptrptyrpheaspval

1510

<210>47

<211>113

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<221>來源

<223>/注釋="對人工序列的描述:合成肽"

<400>47

aspileglnmetthrglnserproserserleuseralaservalgly

151015

aspargvalthrilethrcysargserserglnserilevalhisser

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valglyasnthrpheleuglutrptyrglnglnlysproglylysala

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505560

serargpheserglyserglyserglythraspphethrleuthrile

65707580

serserleuglnprogluaspphealathrtyrtyrcyspheglngly

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serglnpheprotyrthrpheglyglnglythrlysvalgluilelys

100105110

arg

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<211>120

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<221>來源

<223>/注釋="對人工序列的描述:合成肽"

<400>48

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151015

serleuargleusercysalaalaserglytyrglupheserargser

202530

trpmetasntrpvalargglnalaproglylysglyleuglutrpval

354045

glyargiletyrproglyaspglyaspthrasntyrserglylysphe

505560

lysglyargphethrileseralaaspthrserlysasnthralatyr

65707580

leuglnmetasnserleuargalagluaspthralavaltyrtyrcys

859095

alaargaspglysersertrpasptrptyrpheaspvaltrpglygln

100105110

glythrleuvalthrvalserser

115120

<210>49

<211>219

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<221>來源

<223>/注釋="對人工序列的描述:合成肽"

<400>49

aspileglnmetthrglnserproserserleuseralaservalgly

151015

aspargvalthrilethrcysargserserglnserilevalhisser

202530

valglyasnthrpheleuglutrptyrglnglnlysproglylysala

354045

prolysleuleuiletyrlysvalserasnargpheserglyvalpro

505560

serargpheserglyserglyserglythraspphethrleuthrile

65707580

serserleuglnprogluaspphealathrtyrtyrcyspheglngly

859095

serglnpheprotyrthrpheglyglnglythrlysvalgluilelys

100105110

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serglyasnserglngluservalthrgluglnaspserlysaspser

165170175

thrtyrserleuserserthrleuthrleuserlysalaasptyrglu

180185190

lyshislysvaltyralacysgluvalthrhisglnglyleuserser

195200205

provalthrlysserpheasnargglyglucys

210215

<210>50

<211>450

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<221>來源

<223>/注釋="對人工序列的描述:合成肽"

<400>50

gluvalglnleuvalgluserglyglyglyleuvalglnproglygly

151015

serleuargleusercysalaalaserglytyrglupheserargser

202530

trpmetasntrpvalargglnalaproglylysglyleuglutrpval

354045

glyargiletyrproglyaspglyaspthrasntyrserglylysphe

505560

lysglyargphethrileseralaaspthrserlysasnthralatyr

65707580

leuglnmetasnserleuargalagluaspthralavaltyrtyrcys

859095

alaargaspglysersertrpasptrptyrpheaspvaltrpglygln

100105110

glythrleuvalthrvalserseralaserthrlysglyproserval

115120125

pheproleualaproserserlysserthrserglyglythralaala

130135140

leuglycysleuvallysasptyrpheprogluprovalthrvalser

145150155160

trpasnserglyalaleuthrserglyvalhisthrpheproalaval

165170175

leuglnserserglyleutyrserleuserservalvalthrvalpro

180185190

serserserleuglythrglnthrtyrilecysasnvalasnhislys

195200205

proserasnthrlysvalasplyslysvalgluprolyssercysasp

210215220

lysthrhisthrcysproprocysproalaprogluleuleuglygly

225230235240

proservalpheleupheproprolysprolysaspthrleumetile

245250255

serargthrprogluvalthrcysvalvalvalaspvalserhisglu

260265270

aspprogluvallyspheasntrptyrvalaspglyvalgluvalhis

275280285

asnalalysthrlysproargglugluglntyrasnserthrtyrarg

290295300

valvalservalleuthrvalleuhisglnasptrpleuasnglylys

305310315320

glutyrlyscyslysvalserasnlysalaleuproalaproileglu

325330335

lysthrileserlysalalysglyglnproarggluproglnvaltyr

340345350

thrleuproproserarggluglumetthrlysasnglnvalserleu

355360365

thrcysleuvallysglyphetyrproseraspilealavalglutrp

370375380

gluserasnglyglnprogluasnasntyrlysthrthrproproval

385390395400

leuaspseraspglyserphepheleutyrserlysleuthrvalasp

405410415

lysserargtrpglnglnglyasnvalphesercysservalmethis

420425430

glualaleuhisasnhistyrthrglnlysserleuserleuserpro

435440445

glylys

450