本發(fā)明涉及一種旨在口服給予，并且含有至少一種治療性的和/或預(yù)防性的活性物質(zhì)的抗胃溶的載體，涉及其用途，并且涉及用于生產(chǎn)該載體的方法。

口服給予對(duì)于遞送藥物和疫苗具有許多優(yōu)點(diǎn)。如果化合物在通過通常富含酶并且以高酸性ph為特征的胃區(qū)域的過程中被降解，則經(jīng)口服給予的活性成分的生物利用度大大降低。消化機(jī)制的目的實(shí)際上是裂解最大數(shù)目的化學(xué)鍵，通過將它們分解成較小分子的形式，以使大分子可吸收。對(duì)于大的復(fù)雜分子(藥用活性成分或疫苗通常(特別是基于蛋白質(zhì)的那些)通常是這些大的復(fù)雜分子)，這導(dǎo)致功效的喪失。

盡管如此，對(duì)于給予口服治療，存在兩種主要的策略用于越過胃屏障：

·給予大量的活性成分：因此，即使較高比例的活性成分被降解，其一部分活性成分將保留；

·將活性成分?jǐn)y帶在賦形劑中，該賦形劑將保護(hù)其在酸性胃區(qū)域中不被降解，并且在中性ph下在有效區(qū)域中釋放。

該第二種技術(shù)稱為以抗胃溶的形式放置。其廣泛以凝膠膠囊劑(其填充有活性成分)或以用至少一種在酸性ph下不溶且在中性ph下可溶的聚合物膜進(jìn)行薄膜包衣的片劑的形式使用。

凝膠膠囊劑的填充和片劑的薄膜包衣是非常復(fù)雜、昂貴的工業(yè)過程，并且不能降低到非常小的尺寸(極限尺寸是凝膠膠囊劑和片劑的尺寸)的給藥單元。對(duì)于可以設(shè)想用于直徑為幾毫米的微粒的薄膜包衣，這需要非常特定的、昂貴的設(shè)備和用于沉積抗胃溶的膜的方法，需要熱通風(fēng)以蒸發(fā)用于將膜沉積在移動(dòng)的支撐顆粒上的溶劑。因此，該方法不能用于熱敏性活性成分(例如像，疫苗抗原)和塵埃有毒的活性成分。此外，由于填充和薄膜包衣的限制，實(shí)際上不可能無菌地工作以產(chǎn)生無菌的藥物產(chǎn)品。

在油性基質(zhì)(例如油包水乳劑)中包封親水性活性成分的液體形式用于“保護(hù)”并通過可注射途徑逐漸釋放活性成分和抗原(例如，專利ep0073006的實(shí)例2的用于口服給予的乳劑)，但不耐受通過消化系統(tǒng)，并且當(dāng)它們通過胃時(shí)被離解和解構(gòu)。

如專利申請(qǐng)wo2001/078688中所述，使聚合物基質(zhì)增稠以確保形成非常緩慢崩解的片劑，通過這種逐漸釋放，提供抗胃溶的效果。如果經(jīng)胃/腸通過時(shí)間來計(jì)算基質(zhì)溶解動(dòng)力學(xué)，則在腸中釋放的末端部分已經(jīng)越過胃屏障，然而溶解在胃中的初始部分已經(jīng)被消化。使用術(shù)語延遲效應(yīng)基質(zhì)而不是真正的抗胃溶性。在這種情況下，該基質(zhì)必須具有大的尺寸(例如，待口服的片劑)，以根據(jù)轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)力學(xué)進(jìn)行調(diào)整，轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)力學(xué)可根據(jù)受體種類、食物團(tuán)、年齡、消化類型(例如，魚、反芻動(dòng)物等)而變化。這種類型的基質(zhì)的性能水平是可變的。

為用于口服配制品，聚合物大分子必須在中性ph下是可溶的：這是因?yàn)檫@樣做確保了活性成分的釋放。最大分子(高分子量聚合物)在通過酸性區(qū)域期間給予最好的保護(hù)。然而，這些聚合物都具有使水性溶液的粘度增加、將它們轉(zhuǎn)化為不能傾倒的凝膠或半固體的缺點(diǎn)，是難以定量測(cè)定和難以吸收的。

抗胃溶的聚合物不能在水性溶液中以高含量直接使用，因?yàn)樗鼈儼l(fā)展出的高粘度抑制流動(dòng)。此外，已知這些聚合物的凝膠在酸性ph下形成所述聚合物的沉淀。

這些沉淀物恢復(fù)到中性ph時(shí)使得釋放在聚合物沉淀期間捕獲的分子成為可能。

為此，本發(fā)明的發(fā)明人已經(jīng)尋求開發(fā)一種解決方案，其使得解決先前確定的問題成為可能。

本發(fā)明的一個(gè)主題因此是一種適合用于口服給予至少一種藥物和/或抗原活性物質(zhì)的抗胃溶的載體，該載體包括呈油包水(w/o)型乳劑形式的一種水相(w)和一種油相(o)，其中該水相包括至少一種活性成分以及不溶解于ph＜6.5的水相中的、按重量計(jì)從2％至40％的親水聚合物。

本發(fā)明的主題還是：

如上所定義的一種載體，其特征在于該油相包括至少一種表面活性劑和至少一種選自脂肪酸酯、流體礦物油、植物油、和角鯊?fù)榈挠汀?/p>

如上所定義的一種載體，其特征在于所選擇的油是油酸乙酯。

如上所定義的一種載體，其特征在于所述親水聚合物是選自以下各項(xiàng)：僅由單糖組成的多糖，由單糖衍生物、纖維素衍生物、和聚電解質(zhì)型的聚合物組成的多糖。

如上所定義的一種載體，其特征在于該親水聚合物選自以下各項(xiàng)：羥丙基甲基纖維素乙酸琥珀酸酯、羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯、鄰苯二甲酸乙酸纖維素、蟲膠、甲基丙烯酸和甲基丙烯酸甲酯的共聚物、甲基丙烯酸二甲氨基乙酯、和甲基丙烯酸丁酯。

如上所定義的一種載體，其特征在于所述親水聚合物選自以下各項(xiàng)：丙烯酰胺、丙烯酸、和乙烯基吡咯烷酮的衍生物，例如丙烯酸和2-甲基-[(1-氧-2-丙烯基)氨基]-1-丙烷磺酸(amps)的共聚物、丙烯酰胺和2-甲基-[(1-氧-2-丙烯基)氨基]-1-丙烷磺酸的共聚物、2-甲基-[(1-氧-2-丙烯基)氨基]-1-丙烷磺酸和(2-羥乙基)丙烯酸酯的共聚物、2-甲基-[(1-氧-2-丙烯基)氨基]-1-丙烷磺酸均聚物、丙烯酸均聚物、丙烯酰乙基三甲基銨氯化物和丙烯酰胺的共聚物、amps和乙烯基吡咯烷酮的共聚物、其中碳鏈包括介于十個(gè)和三十個(gè)之間的碳原子的丙烯酸物和丙烯酸烷基酯的共聚物、以及其中碳鏈包括介于十個(gè)和三十個(gè)之間的碳原子的amps和丙烯酸烷基酯的共聚物。

如上所定義的一種載體，包括選自聚丙烯酸鈉、海藻酸鹽、微乳劑、和二價(jià)鹽的免疫佐劑。

如上所定義的載體，其特征在于該活性成分是一種能夠在直接口服給予期間變性或降解的物質(zhì)，并且該活性成分選自以下各項(xiàng)：抗原、藥物、抗寄生蟲藥和抗生素。

如上所定義的載體，其特征在于添加的所述親水聚合物的量高于最終組合物的按重量計(jì)的4％并且低于按重量計(jì)的20％，并且優(yōu)選地是介于最終組合物的按重量計(jì)的10％和按重量計(jì)的20％之間。

一種抗胃溶的運(yùn)載體，包括一種或多種如上所定義的載體。

一種組合物，包括至少一種如上所定義的載體或如上所定義的運(yùn)載體。

如上所定義的載體或如上所定義的運(yùn)載體用于獲得在人或獸用治療中具有口服活性的藥物的用途，該藥物具有治療性和/或預(yù)防性的特性和/或能夠診斷的特性。

如上所定義的用途，用于生產(chǎn)旨在用于口服疫苗接種的藥物和/或獸用產(chǎn)品。

一種用于制備如上所定義的載體的方法，該方法包括以下步驟：

a)制備包括一種或多種油的油相、和乳化系統(tǒng)，包括一種或多種乳化的表面活性劑與至少一種不溶解于ph＜6.5的水相中的親水聚合物，以及任選地用于穩(wěn)定該載體的水；

b)添加含有待制成抗胃溶的活性成分的水，并攪拌，以形成包括按重量計(jì)至少10％的水的油包水(w/o)型乳劑。

如上所定義的方法，其特征在于該油包水(w/o)型乳劑的水相(w)含有一種活性成分，該活性成分是能夠在直接口服給予期間變性或降解的物質(zhì)，并且該活性成分是選自以下各項(xiàng)：抗原、藥物、抗寄生蟲藥和抗生素。

如上所定義的方法，其中將所述聚合物在步驟a)中以油性反向乳液形式進(jìn)行添加。

如上所定義的方法，其中將所述聚合物在步驟a)中以有待于分散于水中的粉劑形式進(jìn)行添加。

如上所定義的方法，其中所述聚合物在步驟a)中以液體水性分散體或有待于在起始油性組合物中乳化的有機(jī)溶液的形式進(jìn)行添加。

如上所定義的方法，其中這些步驟在低于55℃、并且優(yōu)選在介于5℃和35℃之間的溫度下發(fā)生。

一種藥物或獸用制劑，包括通過上述定義的方法制備的一種載體。

通過在經(jīng)乳化的水相中，將油性液體載體技術(shù)與高濃度的抗胃溶的親水聚合物結(jié)合，本發(fā)明的發(fā)明人已經(jīng)成功地配制出一種新穎的賦形劑，該賦形劑使獲得可傾倒的油包水型液體乳劑成為可能。另外，分散在該乳劑中的水滴含有高含量的親水聚合物。而且，該抗胃溶的親水聚合物(其在酸性ph下是不可溶的并且沉淀，但是在中性ph下是可溶的)不會(huì)使該乳劑增稠，因?yàn)樗鼈儶?dú)立地使每一滴增稠。

非常出人意料地，可以通過混合工藝摻入高含量的親水聚合物，而不使乳劑增稠是可能的。

在抗胃溶的油中的凝膠乳劑的制備進(jìn)行如下：

1/添加大約30％的水之后，配制含有一種油加一種表面活性劑系統(tǒng)的油性賦形劑，以給出一種液體和穩(wěn)定的油包水(w/o)型乳劑(油的實(shí)例：油酸乙酯、流體礦物油、植物油、角鯊?fù)?(表面活性劑的實(shí)例：montanide^tm888、montanide^tm80、montane^tm80+montanox^tm80對(duì))。

2/在該油性賦形劑中，將該親水聚合物(即在油包水乳劑中通過進(jìn)行徹底的聚合過程而獲得的親水聚合物，例如反向乳液(由seppic以商品名simulgel^tm和sepigel出售)或聚合物粉劑(通過在適當(dāng)?shù)娜軇?例如以商品名carbopol^tm和eudragit^tm出售的親水聚合物)中進(jìn)行徹底的沉淀聚合過程，或通過在油包水乳劑中進(jìn)行徹底的聚合過程，隨后是將該親水聚合物從適當(dāng)?shù)娜軇┲谐恋淼牟襟E或噴霧干燥步驟而獲得)伴隨劇烈攪拌分散，按例如油性反向乳液(由seppic以例如simulgel^tm和sepigel^tm出售)的形式或粉劑(例如carbopol^tm、eudragit^tm)的形式進(jìn)行添加。然而在沒有修飾該油性混合物的粘度下，添加的聚合物的量可以較高(在最終的配制品中按重量計(jì)2％至20％)。

3/緩慢添加含有該活性劑(抗原、藥物、抗寄生蟲藥、抗生素)的乳劑的水相，同時(shí)攪拌。因此完成了該配制。

在添加含有該活性成分的水相期間，這些液滴與分散的親水聚合物顆粒一起形成小的凝膠顆粒(直徑大約1微米的乳劑液滴)。這些液滴含有待保護(hù)的活性成分，被捕獲在由水合的親水聚合物組成的半固體聚集體中。

在使用這種流體乳劑用于口服分配(例如，一湯匙這種液體傾倒在例如雞或例如魚的食物上)時(shí)，乳劑將變成解構(gòu)的(油包水(w/o)型乳劑通過消化機(jī)制被破壞)。聚合物聚集體將因此被釋放，并且在酸性ph下將變得不可溶，導(dǎo)致強(qiáng)烈地捕獲要攜帶的活性成分的沉淀，從而保護(hù)其免受破壞性的外部介質(zhì)的影響。一旦胃的轉(zhuǎn)運(yùn)完成，則進(jìn)入中性介質(zhì)將允許該聚合物溶解，在腸液中稀釋并釋放活性成分。用于粘膜疫苗接種的免疫佐劑(聚丙烯酸鈉、海藻酸鹽、微乳劑、二價(jià)鹽)與該抗胃溶的基質(zhì)組合使用，還使得在口服疫苗接種的情況下增加免疫應(yīng)答成為可能。

根據(jù)本發(fā)明，該脂肪相包括特別是選自以下各項(xiàng)的一種或多種油：

-植物來源的油，如甜杏仁油、椰子油、單油、蓖麻油、霍霍巴油、橄欖油、菜籽油、花生油、向日葵油、小麥胚芽油、玉米胚芽油、大豆油、棉籽油、苜蓿油、罌粟籽油、南瓜油、月見草油、小米油、大麥油、黑麥油、紅花油、石栗油、西番蓮油、榛子油、棕櫚油、乳木果油、杏仁油、紅厚殼油、大蒜芥油、鱷梨油、金盞花油；

-植物油和其乙氧基化的甲酯；

-動(dòng)物來源的油，如角鯊烯或角鯊?fù)椋?/p>

-礦物油，如液體石蠟、液體凡士林、和異鏈烷烴；

-合成油，特別是脂肪酸酯，例如肉豆蔻酸丁酯、肉豆蔻酸丙酯、肉豆蔻酸鯨蠟酯、棕櫚酸異丙酯、硬脂酸丁酯、硬脂酸十六烷酯、硬脂酸異丙酯、硬脂酸辛酯、硬脂酸異鯨蠟酯、油酸十二烷基酯、月桂酸己酯、二辛酸丙二醇酯、羊毛脂酸衍生的酯類(例如羊毛脂酸異丙酯、羊毛脂酸異鯨蠟酯)、脂肪酸單甘油酯、二酰甘油和三酸甘油酯(例如三庚酸甘油酯)、苯甲酸烷基酯、聚-α-鏈烯、聚鏈烯(例如聚異丁烯)、合成的異烷烴，例如異十六烷、和異十二烷、以及全氟油。硅油還可以用于本發(fā)明的背景下。

在后者中，可以更加具體地提及的是二甲基聚硅氧烷、甲基苯基聚硅氧烷、胺改性的硅酮、脂肪酸改性的硅酮、醇改性的硅酮、由醇和脂肪酸改性的硅酮、由聚醚基團(tuán)改性的硅酮、環(huán)氧改性的硅酮、由氟基團(tuán)改性的硅酮、環(huán)狀硅酮、和由烷基改性的硅酮。然而，出于實(shí)際的原因，可能期望脂肪相不包含硅油。

該油包水乳劑通常包括按重量計(jì)從20％至80％，優(yōu)選按重量計(jì)從30％至70％的油。

在可以用于本發(fā)明的背景下的乳化的表面活性劑中，將特別提及的是n-酰基氨基酸和其鹽；脂肽和其鹽；山梨聚糖酯，例如由seppic公司在商品名montane^tm80下出售的產(chǎn)品；聚甘油酯，例如由basf在商品名isolan^tmgi34下和由蓋提佛斯(gattefosse)公司在商品名plurol^tm下出售的產(chǎn)品；乙氧基化的蓖麻油和乙氧基化且氫化的蓖麻油，例如由seppic公司在商品名simulsol^tm989下出售的產(chǎn)品；硬脂酸甘油酯；聚乙二醇聚羥基硬脂酸酯或聚甘油聚羥基硬脂酸酯，例如由利凱馬(uniqema)公司出售的稱為hypermer^tmb246、arlacel^tmp135的產(chǎn)品，由科寧(cognis)公司出售的稱為dehymuls^tmpgph的產(chǎn)品，由日光(nikko)公司出售的稱為decaglyn^tm5hs的產(chǎn)品；聚乙烯乙二醇-烷基乙二醇共聚物，例如peg-45十二烷基乙二醇共聚物，例如由阿卡佐(akzo)公司在商品名elfacosst9^tm下出售的產(chǎn)品，乙氧基化的脫水山梨糖醇酯，例如由seppic公司在商品名montanox^tm下出售的產(chǎn)品；弱乙氧基化的蛋白質(zhì)丙烯酸酯(從1個(gè)至3個(gè)oe基團(tuán))；乙氧基化的蜂蠟，例如由蓋提佛斯(gattefosse)公司出售的稱為的產(chǎn)品；陽離子乳化劑，例如氧化胺、quaternium82和在專利申請(qǐng)?zhí)杦o96/00719中描述的表面活性劑，并且主要是脂肪鏈包括至少16個(gè)碳原子的那些；蔗糖酯，可以或不可以被乙氧基化的甲基葡萄糖苷酯；乙氧基化的脂肪酸；乙氧基化的脂肪醇；陰離子乳化劑(例如癸基磷酸鹽或鯨蠟硬脂硫酸鹽)；聚氧硬脂酸鋁，例如由羅迪亞(rhodia)公司在商品名下出售的產(chǎn)品；硬脂酸鎂；硬脂酸鋁。

在特別適合于實(shí)施本發(fā)明的方法的直鏈、支鏈和/或交聯(lián)的聚電解質(zhì)型聚合物中，可以提及的是以下各項(xiàng)：丙烯酰胺、丙烯酸、和乙烯基吡咯烷酮的衍生物，例如丙烯酸和2-甲基-[(1-氧-2-丙烯基)氨基]-1-丙烷磺酸(amps)的共聚物、丙烯酰胺和2-甲基-[(1-氧-2-丙烯基)氨基]-1-丙烷磺酸的共聚物、2-甲基-[(1-氧-2-丙烯基)氨基]-1-丙烷磺酸和(2-羥乙基)丙烯酸酯的共聚物、2-甲基-[(1-氧-2-丙烯基)氨基]-1-丙烷磺酸均聚物、丙烯酸均聚物、丙烯酰乙基三甲基銨氯化物和丙烯酰胺的共聚物、amps和乙烯基吡咯烷酮的共聚物、其中碳鏈包括介于十個(gè)和三十個(gè)之間的碳原子的丙烯酸物和丙烯酸烷基酯的共聚物、以及其中碳鏈包括介于十個(gè)和三十個(gè)之間的碳原子的amps和丙烯酸烷基酯的共聚物。

此類聚合物通常通過一種反向徹底的聚合方法而制備，并且特別由seppic公司在商品名(simulgel^tmeg、sepigel^tm305、simulgel^tmns、simulgel^tm800、和simulgel^tma)下分別出售。它們包括帶有酸性官能團(tuán)的單體的部分或完全鹽化的形式。相應(yīng)的一種或多種單體通過乳化表面活性劑系統(tǒng)而溶解在分散于脂肪相中的水滴里。此類聚合物還可以通過徹底的聚合方法來制備；相應(yīng)的一種或多種單體溶解于一種溶劑(其中形成的聚合物是不可溶的)中，并且在該聚合反應(yīng)末期沉淀，隨后是過濾階段并且將獲得的聚合物粉劑進(jìn)行干燥。

有利地，如果制備此類聚電解質(zhì)的方法由沉淀聚合物方法產(chǎn)生，所述聚電解質(zhì)的干重構(gòu)成介于0.1％和4％之間、并且優(yōu)選地介于0.5％和2％之間的該水相重量；或如果制備此類聚電解質(zhì)的方法由反相乳劑聚合制備方法產(chǎn)生，所述聚電解質(zhì)的干重構(gòu)成介于0.25％和4％之間、并且優(yōu)選地介于0.5％和2％之間的該水相重量。

以下是用于油包水型乳劑的油性賦形劑的實(shí)例。

這些油性佐劑在自然中是各種各樣的。

最古老的弗氏佐劑來自石油蒸餾產(chǎn)生的白色礦物油和任選含有滅活的分枝桿菌的甘露醇酯的組合。

在商品名montanide^tmisa下出售的商業(yè)油性佐劑具有生產(chǎn)油包水(w/o)型乳劑(稱為流體)的優(yōu)點(diǎn)，具有使用配備有no.2spindle的brookfieldlvt粘度計(jì)，在每分鐘轉(zhuǎn)數(shù)60的速度旋轉(zhuǎn)下測(cè)量的約500mpa.s的粘度。

在wo號(hào)99/20305下公開的國(guó)際專利申請(qǐng)披露了表面活性劑在甘露醇油酸酯上用礦物油(例如，marcol^tm52)用于生產(chǎn)“流體”乳劑的用途。

除了含有一種或多種油以及一種或多種表面活性劑的即用型商業(yè)油性佐劑，通過免疫制造者自身來使用山梨糖醇酯(span^tm)和乙氧基化的山梨糖醇酯(tween^tm)是可能的。

通常用這些表面活性劑與一種或多種油的組合來產(chǎn)生經(jīng)乳化的油包水w/o型疫苗組合物。

通過添加聚合物進(jìn)行制備的實(shí)例

在此使用的抗胃溶的油性佐劑的組合物是聚丙烯酸鈉(spa)、montanideisa、以及水的反向乳液的最優(yōu)化的混合物。該spa的反向乳液是在使得獲得它成為可能的徹底的聚合反應(yīng)期間，聚合物在油性基質(zhì)中的分散體。

實(shí)例：

spa的50％反向乳液

20％montanide^tmisa

30％水。

另一種可能的方法可以是摻雜用粉狀聚合物(例如卡波姆如carbopol^tm971或940或其他級(jí)別)特別配制的油包水w/o型乳劑，其在劇烈機(jī)械攪拌下分散，以便產(chǎn)生具有高聚合物負(fù)載的堿性乳劑。

在酸性ph(＜6)下不可溶的聚合物、其水凝膠的粘度下降至少50％，并且當(dāng)ph從7變?yōu)?時(shí)其溶解度降低的所有化學(xué)結(jié)構(gòu)，可以用于這種類型的配制品。

在化學(xué)上，這些增稠劑的各種家族可以分類如下：

·僅由單糖組成的多糖。

·由單糖衍生物組成的多糖。

·纖維素衍生物。

·直鏈或支鏈和/或交聯(lián)的聚電解質(zhì)型聚合物。

將提及例如以下的聚合物：

·呈粉劑形式(有待于再分散于抗胃溶的油性載體(ehgr)配制品的水中)：羥丙基甲基纖維素乙酸琥珀酸酯(例如來自信越(shinetsu)公司的aqoat^tm)，羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯(例如來自信越(shinetsu)公司的hp50^tm和hp55^tm)、鄰苯二甲酸乙酸纖維素，蟲膠(例如shellac^tm)，甲基丙烯酸和甲基丙烯酸甲酯的共聚物(例如來自贏創(chuàng)(evonik)公司的eudragit^tml100和eudragit^tms100)，pvap(例如來自卡樂康(colorcon)公司的sureteric)，甲基丙烯酸二甲氨基乙酯、甲基丙烯酸丁酯、和甲基丙烯酸甲酯的共聚物(例如：來自贏創(chuàng)(evonik)公司的eudragite100^tm)。

·呈液體水性分散體的形式(有待于在ehgr中乳化：乙基纖維素(例如來自fmc公司的aquacoat^tm)，用peg8000配制的聚甲基丙烯酸酯(例如來自卡樂康(colorcon)公司的acryleze^tm)，在30％的水性分散體中的聚甲基丙烯酸酯(例如eudragitl30d^tm)。

·呈有機(jī)分散體或溶液(有待于在ehgr中待乳化)的形式：甲基丙烯酸甲酯在異丙醇中的甲基丙烯酸共聚物，例如來自贏創(chuàng)(evonik)公司的eudragit^tms12.5。

·或呈油包水乳劑(反相乳液或反向乳劑)中的聚合物的分散體形式(此時(shí)有待于在ehgr中稀釋)，例如來自seppic公司的sepigel^tm和simulgel^tm的產(chǎn)品系列。

體外抗胃溶特性證明

使用具有強(qiáng)分散能力的混合器(例如silversonl4rt)，通過將按重量計(jì)70％的ehgr與按重量計(jì)30％的模式蛋白bsa的溶液混合，將以下配方品的抗胃溶的油性賦形劑(或載體)(ehgr)乳化。

spa的50％反向乳液。

20％montanide^tmisa。

30％水。

最終組合物：

70％的油性載體。

含有活性成分的30％水性介質(zhì)，有待于制成抗胃溶性的(例如：bsa)。

關(guān)于抗胃溶的能力測(cè)試抗胃溶的乳劑的最終的組合物

濃度是在最終的混合物中4mg的bsa/克油包水(w/o)型乳劑。

使用具有600g接受介質(zhì)和60g乳劑的艾維卡(erweka)溶解裝置，在100rpm下攪拌(方案引自藥典建議)，在兩個(gè)步驟中進(jìn)行釋放測(cè)試。

將該乳劑最初置于酸性溶液(0.1mhcl)中24小時(shí)，然后該溶液的ph升高回到中性ph，并且將該溶液評(píng)估72小時(shí)。

這一試驗(yàn)的結(jié)果在圖1中示出。

在酸性介質(zhì)(0.1mhcl)中，經(jīng)一天的過程沒有bsa的釋放。在中性介質(zhì)(pbs，ph＝7.2)中，經(jīng)三天的過程有大約75％的bsa釋放。

酸性介質(zhì)的目的是模擬通過胃，中性介質(zhì)的目的是模擬通過腸。

這些結(jié)果證明了該制劑的抗胃溶的特性：事實(shí)上，包封的活性成分(在這種情況下為bsa)在酸性介質(zhì)中沒有釋放(接近0％)，但當(dāng)其通過中性介質(zhì)時(shí)有釋放(大約75％)?？蓽y(cè)定的bsa的存在表明該蛋白質(zhì)在通過酸性介質(zhì)的過程中被保護(hù)免于降解。

用分散在ehgr中的兩種其他類型的聚合物進(jìn)行這些相同的測(cè)試：

·sepigel^tm501(分散在礦物液體石蠟中的呈反相乳液形式的丙烯酰胺和丙烯酸鈉的交聯(lián)共聚物)。

·eudragit^tml100-55(具有官能的甲基丙烯酸基團(tuán)的陰離子聚合物)。

這些結(jié)果在表1中列出，與用聚丙烯酸鈉進(jìn)行的上述試驗(yàn)進(jìn)行比較。

表1：針對(duì)獲得自各種聚合物的ehgr組合物測(cè)量的抗胃溶的特性的體外結(jié)果

這些配制品對(duì)于不同化學(xué)結(jié)構(gòu)的聚合物表現(xiàn)出強(qiáng)抗胃溶性，并且以各種形式(粉劑和反相乳液)引入組合物中。

體內(nèi)抗胃溶特性證明

測(cè)試三個(gè)動(dòng)物模型以證明根據(jù)本發(fā)明的載體在動(dòng)物應(yīng)用中的有效性：

1/小鼠：麻醉后，與水性溶液相比，通過管飼法給予小鼠含有10mg模式蛋白(卵白蛋白：ova)的100μl的該ehgr制劑。與吞咽水性溶液的組相比，對(duì)于吞咽了ehgr的組，在糞便中測(cè)量的免疫應(yīng)答被證明是非常顯著的更高。因此，這表明當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)到達(dá)位于胃(派伊爾集合淋巴結(jié))后面的消化系統(tǒng)的免疫活性系統(tǒng)而沒有被降解時(shí)，蛋白質(zhì)確實(shí)是完整的，而溶液中的卵白蛋白在胃中被消化(參見表2)。

表2：在用10mg的ova/小鼠管飼后測(cè)定小鼠糞便中的抗ova抗體

當(dāng)ehgr賦形劑“載體化”ova時(shí)獲得的100和200的值非常高并且表示強(qiáng)的免疫應(yīng)答。因此，ehgr顯然是用于口服疫苗接種的佐劑。

2/魚：與水性溶液相比，在ehgr中制備耶爾森氏菌(yersinia)抗原，并且將其在分配到養(yǎng)殖的魚(虹鱒魚)之前倒入食物片劑中。與吞咽水性溶液的組相比，對(duì)于吞咽ehgr的組，誘導(dǎo)的保護(hù)(通過毒性激發(fā)測(cè)量)明顯更高。吞咽水性溶液的組表現(xiàn)得像未疫苗接種的陰性對(duì)照組(參見表3)。

表3：賦形劑對(duì)由耶爾森氏菌抗原對(duì)虹鱒魚的口服疫苗接種誘導(dǎo)的保護(hù)作用的影響

ehgr的使用使口服疫苗接種保護(hù)對(duì)抗疾病(無病損)，而對(duì)照組不耐受感染。

3/雞：將新城疫抗原口服給予組(20只一周大小的雞)。將置于飲用水中的疫苗配制在ehgr或水性溶液中。在該測(cè)試中，測(cè)量血清中的抗體滴度并且評(píng)價(jià)死亡率。

在水性溶液中給予的抗原不提供任何可檢出的抗體生成，并且這些動(dòng)物表現(xiàn)出與沒有接受任何物質(zhì)的對(duì)照組相似的疾病癥狀(死亡率)。

接受ehgr中抗原制劑的組表現(xiàn)出可檢出的抗體滴度，并且在毒性激發(fā)期間被保護(hù)免受感染(參見表4)。

表4：以抗胃溶的載體形式或水性溶液形式口服給予(飲用水)后，由新城疫抗原誘導(dǎo)的保護(hù)結(jié)果。只有接受通過ehgr載體化的抗原的組被保護(hù)以對(duì)抗該疾病，并且顯示出抗體滴度。