本發(fā)明屬于制藥領(lǐng)域，具體而言，涉及藥物組合物及其應(yīng)用、藥物包合物、靜脈制劑及制備方法。
背景技術(shù)：
：KX2-361是美國KinexPharmaceuticals公司研發(fā)的能夠用于治療細胞增殖性疾病(特別是癌癥)的小分子化合物，該化合物可能通過酪氨酸激酶抑制作用來治療細胞增殖性疾病(參見專利文獻WO2006/071960)。KX2-361的中文化學名稱為N-(3-氟芐基)-2-(5-(4-嗎啉苯基)吡啶-2-基)乙酰胺，英文化學名稱為N-(3-Fluorobenzyl)-2-(5-(4-Morpholinophenyl)pyridin-2-yl)-acetamide)，分子式為C24H24FN3O2，分子量為405.46g/mol，結(jié)構(gòu)式如式1所示：KX2-361為自由堿形式，其可藥用的鹽可以是苯磺酸鹽、鹽酸鹽、磷酸鹽等。KX2-361具有難溶于水的性質(zhì)，其可藥用的鹽的水溶性也不理想，也是難溶于水的。當藥物活性分子難溶于水時，口服會造成藥物生物利用度低、難以吸收等問題。當要將其制成適合的注射劑時，需要增加其溶解度，以達到靜脈給藥的需要。因此，為了使KX2-361或其可藥用的鹽可有效地對患者施用，迫切需要找到能夠使其增溶的方式。針對難溶性藥物，本領(lǐng)域常用的增溶方法包括：加表面活性劑類增溶劑、加助溶劑、使用混合溶劑、制成可溶性鹽、在主藥分子結(jié)構(gòu)上導入親水基團、制成固體分散體、制成環(huán)糊精包合物、加入嵌段共聚物增溶劑、制成脂質(zhì)體、制成微乳、制成微球和毫微粒、加入樹狀大分子增溶劑等(參見科技文獻：“吳佩穎,徐蓮英,陶建生.難溶性藥物增溶方法研究進展[J].中成藥,2005,09:1126-1129.”)。將藥物制成環(huán)糊精包合物時，已知多種可供選擇的環(huán)糊精及其衍生物。已知的環(huán)糊精有α、β、γ三種，分別由6個、7個和8個葡萄糖所組成。經(jīng)X射線衍射和核磁共振研究證明，環(huán)糊精的立體結(jié)構(gòu)是上寬下窄、兩端開口的環(huán)狀中空圓筒形，被包合的物質(zhì)分子進入圓筒內(nèi)，形成包合物。通常，在由環(huán)糊精和藥物形成的包合物中，藥物和環(huán)糊精的結(jié)合摩爾比通常是1:1，但也常見其它比例。目前，在上述環(huán)糊精的基礎(chǔ)上形成了一系列的衍生物，藥學上適用的有例如：甲基化-β-環(huán)糊精(RM-β-CD)、羥丙基-β-環(huán)糊精(HP-β-CD)、磺丁基醚-β-環(huán)糊精(SBE-β-CD)、麥芽糖-β-環(huán)糊精、羥丙基-γ-環(huán)糊精(HP-γ-CD)等。在科技文獻“LoftssonT,BrewsterME.Pharmaceuticalapplicationsofcyclodextrins:basicscienceandproductdevelopment.JPharmPharmacol.2010Nov；62(11):1607-21.”中列舉了一些包含環(huán)糊精的世界范圍內(nèi)的上市制劑，例如包含α-環(huán)糊精的前列地爾注射液、鹽酸頭孢替安酯片；包含β-環(huán)糊精的頭孢菌素片、鹽酸貝奈克酯膠囊；包含γ-環(huán)糊精的Tc-99替锝注射液；包含SBE-β-CD的伏立康唑注射液、甲磺酸齊拉西酮注射液；包含HP-β-CD的伊曲康唑口服溶液及注射液、絲裂霉素注射液。然而，不同的環(huán)糊精及其衍生物適用于不同的藥物，目前針對某種給定化合物的具體結(jié)構(gòu)很難推測出哪種環(huán)糊精或其衍生物在增溶能力上是適用的。在前述專利文獻WO2006/071960中公開了包括KX2-361等一系列具體化合物在內(nèi)的通式化合物，其可以采用多種方式給藥，如口服給藥、針劑方式給藥、直腸給藥、肺部給藥、鼻內(nèi)給藥、瞬時給藥、波動釋放給藥等。該專利文獻進一步公開了針對不同的給藥方式，可以采用不同形式的固體劑型、液體劑型等。該專利文獻還公開了可注射的藥水可利用溶劑制成，這些溶劑包括例如芝麻或花生油、水性丙二醇；或者，可注射的藥水可用可溶于水的KX2-361的可藥用的鹽的水溶液制成，在具體例子中，可分散相可以采用甘油、液體聚乙二醇和它們在油中的混合物。該專利文獻還公開了包含環(huán)狀或脂肪族包封劑或溶解劑的劑型(如液體劑型)，環(huán)狀或脂肪族包封劑或溶解劑為例如：環(huán)糊精、聚醚、多糖；具體優(yōu)選的例子包括：甲基纖維素或(即，磺丁基醚-β-環(huán)糊精)。即，該專利文獻公開了一些本領(lǐng)域針對難溶性藥物通常采用的增溶方式和增溶用試劑。然而，本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，在KX2-361的藥物研發(fā)過程中，文獻WO2006/071960公開的具體增溶方式和增溶用試劑并不理想，并不適于將KX2-361進一步開發(fā)成能有效地施用給患者、成本有效的藥物制劑。因此仍然迫切需要針對KX2-361或其可藥用的鹽找到其在藥學上更適合的增溶方式和增溶用試劑。技術(shù)實現(xiàn)要素：為解決上述現(xiàn)有技術(shù)中所存在的問題，本發(fā)明提供了藥物組合物及其應(yīng)用、藥物包合物、靜脈制劑及制備方法。具體而言，本發(fā)明提供了：(1)一種藥物組合物，包含羥丙基-β-環(huán)糊精和活性成分，所述活性成分為KX2-361或其可藥用的鹽，所述KX2-361由下式1表示：(2)根據(jù)(1)所述的藥物組合物，其中所述活性成分與羥丙基-β-環(huán)糊精的摩爾比為1:(4-59)。(3)根據(jù)(1)所述的藥物組合物，其中所述活性成分為KX2-361、KX2-361·單苯磺酸鹽、KX2-361·二鹽酸鹽、KX2-361·單磷酸鹽和/或KX2-361·二磷酸鹽。(4)根據(jù)(1)所述的藥物組合物，其中至少一部分所述羥丙基-β-環(huán)糊精包裹至少一部分所述活性成分而形成藥物包合物。(5)根據(jù)(1)所述的藥物組合物，還包含可藥用的賦形劑。(6)一種藥物包合物，包含活性成分和包裹該活性成分的包合成分，其中，所述包合成分為羥丙基-β-環(huán)糊精，所述活性成分為KX2-361或其可藥用的鹽，所述KX2-361由下式1表示：(7)根據(jù)(6)所述的藥物包合物，其中所述活性成分為KX2-361、KX2-361·單苯磺酸鹽、KX2-361·二鹽酸鹽、KX2-361·單磷酸鹽和/或KX2-361·二磷酸鹽。(8)一種用于治療細胞增殖性疾病的靜脈制劑，包含(1)至(5)中任一項所述的藥物組合物。(9)根據(jù)(8)所述的靜脈制劑，其中所述活性成分與羥丙基-β-環(huán)糊精的摩爾比為1:(9-59)。(10)根據(jù)(8)所述的靜脈制劑，其中所述靜脈制劑為凍干粉劑的形式。(11)根據(jù)(8)所述的靜脈制劑，其中所述靜脈制劑為液體制劑的形式。(12)根據(jù)(11)所述的靜脈制劑，其中在所述液體制劑中，羥丙基-β-環(huán)糊精的濃度為100mg/ml至500mg/ml，以KX2-361計，所述KX2-361或其可藥用的鹽的濃度為0.5mg/ml至5mg/ml。(13)根據(jù)(11)所述的靜脈制劑，其中所述液體制劑是采用緩沖鹽水溶液、葡萄糖水溶液、氯化鈉水溶液或乳酸林格氏液配制得到的。(14)根據(jù)(13)所述的靜脈制劑，其中所述緩沖鹽水溶液為pH4.0的緩沖鹽水溶液。(15)一種制備(8)所述的靜脈制劑的方法，包括以下步驟：1)提供溶解有羥丙基-β-環(huán)糊精的第一溶液，該第一溶液的pH為1-2；2)將KX2-361或其可藥用的鹽與所述第一溶液混合，制得溶解有KX2-361或其可藥用的鹽的第二溶液。(16)根據(jù)(15)所述的方法，其中，在所述第一溶液中，羥丙基-β-環(huán)糊精濃度為10％(w/v)至50％(w/v)。(17)根據(jù)(15)所述的方法，其中，在所述第二溶液中，以KX2-361計，所述KX2-361或其可藥用的鹽的濃度為0.5mg/ml至5mg/ml。(18)根據(jù)(15)所述的方法，其中，在所述第二溶液中，所述KX2-361或其可藥用的鹽與羥丙基-β-環(huán)糊精的摩爾比為為1:(9-59)。(19)根據(jù)(15)所述的方法，其中，所述方法還包括3)冷凍干燥所述第二溶液，以制得凍干粉劑。(20)根據(jù)(19)所述的方法，其中，在第2)步和第3)步之間，還任選地包括：i)將所述第二溶液的pH調(diào)節(jié)至4-6；和/或ii)無菌過濾。(21)根據(jù)(19)或(20)所述的方法，其中，所述方法還包括用注射用溶液將所述凍干粉劑復溶的步驟。(22)根據(jù)(21)所述的方法，其中，所述注射用溶液為緩沖鹽水溶液、葡萄糖水溶液、氯化鈉水溶液或乳酸林格氏液。(23)根據(jù)(22)所述的方法，其中，所述注射用溶液為pH4.0的緩沖鹽水溶液。(24)根據(jù)(15)所述的方法，其中，所述KX2-361的可藥用的鹽為KX2-361·單苯磺酸鹽、KX2-361·二鹽酸鹽、KX2-361·單磷酸鹽和/或KX2-361·二磷酸鹽。(25)(1)至(5)中任一項所述的藥物組合物在制備用于治療細胞增殖性疾病的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點和積極效果：1.本發(fā)明將羥丙基-β-環(huán)糊精與KX2-361或其可藥用的鹽混合，從而使其形成包合物，極大地提高了難溶性藥物KX2-361的溶解度，并且與其他環(huán)糊精及其衍生物輔料、可供注射的表面活性劑溶液、可供注射的溶媒或復合溶媒相比，羥丙基-β-環(huán)糊精表現(xiàn)出了更強的增溶能力。2.本發(fā)明通過將羥丙基-β-環(huán)糊精與KX2-361或其可藥用的鹽混合從而使其形成包合物，使得可將難溶的KX2-361或其可藥用的鹽配制成穩(wěn)定的液體制劑，進而可由該液體制劑制成凍干制劑，并由此可制成多種可在臨床上施用于患者的藥物制劑，包括：靜脈制劑(如靜脈注射劑或靜脈滴注劑)、口服制劑(如片劑)等。3.本發(fā)明進一步對包合工藝進行了優(yōu)化，并且對靜脈制劑和口服制劑的載藥配方進行了優(yōu)化，使得可以得到各指標(包括藥物復溶、放置穩(wěn)定性、溶出度)均合格的可供直接靜脈注射的藥物制劑和可進行10倍以內(nèi)稀釋的靜脈滴注制劑、以及口服制劑，并且實現(xiàn)了載藥量的最大優(yōu)化。這些藥物制劑的穩(wěn)定性好、安全性高、可吸收性好、生物利用度高、成本較為經(jīng)濟。附圖說明圖1示出本發(fā)明實施例7的處方B4口服片劑的血藥濃度隨時間變化的曲線圖。其中橫軸表示時間，單位為小時；縱軸表示對雄性比格犬以51mg/只的劑量(以KX2-361計)口服施用藥物后，KX2-361的血漿濃度，單位為ng/ml。具體實施方式以下通過具體實施方式的描述并參照附圖對本發(fā)明作進一步說明，但這并非是對本發(fā)明的限制，本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)本發(fā)明的基本思想，可以做出各種修改或改進，但是只要不脫離本發(fā)明的基本思想，均在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。在本文中，術(shù)語“注射劑”是指：由藥物制成的供注入體內(nèi)的無菌溶液(包括真溶液、乳濁液和混懸液)，以及供臨用前配制成所述無菌溶液(包括真溶液、乳濁液和混懸液)的凍干粉末或濃溶液。在本文中，術(shù)語“靜脈滴注”是指：通過輸液管，將包含藥物的大量液體由靜脈輸入體內(nèi)的方法。又稱“輸液”、“點滴”、“靜滴”、“掛水”。在本文中，術(shù)語“靜脈制劑”旨在涵蓋“靜脈注射劑”和“靜脈滴注劑”，其中包括可用于配置靜脈注射溶液和靜脈滴注溶液的“凍干粉劑”。在本文中，術(shù)語“口服制劑”是指：經(jīng)口給予，且藥物在胃腸道內(nèi)吸收入血的制劑形式，包括片劑、顆粒劑、膠囊劑、口服溶液劑等。在本文中，術(shù)語“細胞增殖性疾病”包括專利文獻WO2006/071960中描述的疾病，其是指細胞增殖失去控制和/或異常生長的狀態(tài)，包括癌癥的或非癌疾病?！鞍┌Y”包括實體腫瘤，如，肺癌，乳腺癌，結(jié)腸癌，卵巢癌，腦癌，肝癌，胰腺癌，前列腺癌，惡性黑素瘤，非-黑素瘤皮膚癌，惡性血液瘤，如，兒童的白血病和淋巴瘤，多樣性骨髓瘤，何杰金病，淋巴細胞和原發(fā)性皮膚的淋巴瘤，急性和慢性白血病，如，急性成淋巴細胞、急性髓細胞或慢性髓細胞白血病，漿細胞贅生物，淋巴贅生物和跟AIDS相關(guān)的癌癥。非癌疾病包括(例如)，銀屑病，上皮的和皮樣的囊腫，脂肪瘤，腺瘤，毛狀的和皮膚的血管瘤，淋巴管瘤，蜘蛛痣病變，畸胎瘤，腎瘤，肌纖維瘤，成骨瘤和其他發(fā)育異常聚集及其他類似疾病。在本文中，術(shù)語“包合物”是指一種藥物分子結(jié)構(gòu)被全部或部分包合入另一種物質(zhì)的分子腔中而形成獨特形式的絡(luò)合物。包合物在藥物制劑研究領(lǐng)域很活躍，在20世紀50年代，研究人員已經(jīng)認識到包合物對藥物的性質(zhì)有影響，如包合物增加藥物溶解度和穩(wěn)定性、影響藥物在體內(nèi)的吸收、分布及起效時間等。在本文中，術(shù)語“活性成分”是指對細胞增殖性疾病具有治療作用的藥物分子，例如本文所述的KX2-361或其可藥用的鹽。本文所述的KX2-361的可藥用鹽包括(例如)KX2-361的苯磺酸鹽、KX2-361的鹽酸鹽、KX2-361的磷酸鹽等。本文所述的KX2-361的可藥用鹽可以是KX2-361的單鹽或二鹽形式，包括(例如)KX2-361·單苯磺酸鹽、KX2-361·二鹽酸鹽、KX2-361·單磷酸鹽和/或KX2-361·二磷酸鹽。在本文中，術(shù)語“包合成分”是指將藥物分子的全部或部分結(jié)構(gòu)包裹入其分子腔中的物質(zhì)，例如本文所述的羥丙基-β-環(huán)糊精。在本文中，術(shù)語“羥丙基-β-環(huán)糊精”是指倍他環(huán)糊精與1,2-環(huán)氧乙烷的醚化物；按無水物計算，羥丙氧基(-OCH2CHOHCH3)含量為19.6％～26.3％(參見2015年版中國藥典第四部)。一、藥物組合物KX2-361及其可藥用的鹽具有難溶于水的性質(zhì)，本發(fā)明的發(fā)明人希望找到能夠有效使其增溶的方法，從而將其制成可供臨床使用的藥物制劑。如上文所述，已知各種可以使藥物增溶的方法，僅針對KX2-361或其可藥用的鹽而言，專利文獻WO2006/071960也列舉了多種增溶方式。然而，本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)這些針對KX2-361或其可藥用的鹽的增溶方式并不理想。并且困難的是，目前針對某種給定化合物的具體結(jié)構(gòu)很難推測出哪種增溶方式或增溶用試劑在增溶能力上是最適用的。因此，針對KX2-361及其可藥用的鹽，本發(fā)明的發(fā)明人在藥學上針對不同的增溶方式和不同的增溶用試劑進行了大量的研究篩選工作，最終發(fā)現(xiàn)采用包合技術(shù)能夠有效地使KX2-361或其可藥用的鹽增溶，并且驚奇地發(fā)現(xiàn)最為適宜的包合劑為羥丙基-β-環(huán)糊精。因此，本發(fā)明提供了一種藥物組合物，包含羥丙基-β-環(huán)糊精和活性成分，所述活性成分為KX2-361或其可藥用的鹽，所述KX2-361由下式1表示：優(yōu)選地，在所述藥物組合物中，所述活性成分與羥丙基-β-環(huán)糊精的摩爾比為1:(1-250)，優(yōu)選為1:(4-59)，例如1:(9-59)，或例如1:(4-17)。優(yōu)選地，在所述藥物組合物中，所述活性成分中含有的KX2-361與羥丙基-β-環(huán)糊精的質(zhì)量比為(0.1～29):100，更優(yōu)選為(0.5～5):100，例如：(2～2.5):100，(0.5～1.5):100，或(0.5～0.7):100等。優(yōu)選地，所述活性成分為KX2-361、KX2-361·單苯磺酸鹽、KX2-361·二鹽酸鹽、KX2-361·單磷酸鹽和/或KX2-361·二磷酸鹽，其中優(yōu)選為KX2-361·單苯磺酸鹽。在本文中，除非特別說明，所述的“KX2-361·苯磺酸鹽”指KX2-361·單苯磺酸鹽，其分子量為563.64。在本發(fā)明的藥物組合物中，至少一部分所述羥丙基-β-環(huán)糊精可包裹至少一部分所述活性成分而形成藥物包合物。其中在該藥物包合物中，所述羥丙基-β-環(huán)糊精可形成兩端開口的中空筒狀結(jié)構(gòu)，所述KX2-361或其可藥用的鹽能被全部或部分包裹在所述筒狀結(jié)構(gòu)中。優(yōu)選地，本發(fā)明的藥物組合物還包含可藥用的賦形劑。所述賦形劑可以根據(jù)所需劑型進行選擇。例如，劑型為靜脈制劑時，所述賦形劑可以為選自甘露醇、乳糖、右旋糖苷、木糖醇、山梨醇、葡萄糖和氯化鈉中的一種或多種。另外，劑型為口服制劑時，所述賦形劑還可以為選自填充劑、崩解劑、潤滑劑中的一種或多種。填充劑可選自微晶纖維素、乳糖、淀粉、甘露醇等中的一種或多種，崩解劑可選自交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、交聯(lián)聚維酮、羧甲基淀粉鈉等中的一種或多種，潤滑劑可選自硬脂酸鎂、微粉硅膠、滑石粉等中的一種或多種。本發(fā)明還提供了所述的藥物組合物在制備用于治療細胞增殖性疾病的藥物中的應(yīng)用。二、藥物包合物另一方面，本發(fā)明還提供了一種藥物包合物，包含活性成分和包裹該活性成分的包合成分，其中，所述包合成分為羥丙基-β-環(huán)糊精，所述活性成分為KX2-361或其可藥用的鹽，所述KX2-361由下式1表示：在該藥物包合物中，所述羥丙基-β-環(huán)糊精可形成兩端開口的中空筒狀結(jié)構(gòu)，所述KX2-361或其可藥用的鹽能被全部或部分包裹在所述筒狀結(jié)構(gòu)中。優(yōu)選地，所述活性成分為KX2-361、KX2-361·單苯磺酸鹽、KX2-361·二鹽酸鹽、KX2-361·單磷酸鹽和/或KX2-361·二磷酸鹽，其中優(yōu)選為KX2-361·單苯磺酸鹽。在本文中，除非特別說明，所述的“KX2-361·苯磺酸鹽”指KX2-361·單苯磺酸鹽，其分子量為563.64。三、靜脈制劑另一方面，本發(fā)明還提供了一種用于治療細胞增殖性疾病的靜脈制劑，其包含本發(fā)明所述的藥物組合物。優(yōu)選地，在所述靜脈制劑中，所述活性成分與羥丙基-β-環(huán)糊精的摩爾比為1:(1-250)，更優(yōu)選為1:(9-59)，例如為1:(9-15)，1:(12-59)，1:(16-53)，1:(31-56)等。優(yōu)選地，在所述靜脈制劑中，所述活性成分中含有的KX2-361與羥丙基-β-環(huán)糊精的質(zhì)量比為(0.1～29):100，更優(yōu)選為(0.5～2.5):100，例如：(2～2.5):100，(0.5～2):100，(0.5～1.5):100，或(0.5～0.7):100等。本發(fā)明的靜脈制劑可以包含賦形劑，所述賦形劑優(yōu)選選自甘露醇、乳糖、右旋糖苷、木糖醇、山梨醇、葡萄糖和氯化鈉中的一種或多種。所述靜脈制劑可以為凍干粉劑的形式，也可以為液體制劑的形式。當為液體制劑時，在所述液體制劑中，羥丙基-β-環(huán)糊精的濃度可以為100mg/ml至500mg/ml，優(yōu)選為200mg/ml至400mg/ml；以KX2-361計，所述KX2-361或其可藥用的鹽的濃度可以為0.5mg/ml至5mg/ml，優(yōu)選為1.4mg/ml至4.3mg/ml?？梢杂米⑸溆萌芤簩⑺鰞龈煞蹌腿芤灾苽湟后w制劑。注射用溶液可以采用本領(lǐng)域已知的任何注射用溶液，例如可以為緩沖鹽水溶液、葡萄糖水溶液、氯化鈉水溶液或乳酸林格氏液。緩沖鹽水溶液例如可以為枸櫞酸鹽緩沖液、乙酸-乙酸鈉緩沖液、磷酸鹽緩沖液等；葡萄糖水溶液例如可以為5％(w/v)葡萄糖水溶液；氯化鈉水溶液例如可以為0.9％(w/v)氯化鈉水溶液。優(yōu)選地，所述緩沖鹽水溶液為pH4.0的緩沖鹽水溶液，例如pH4.0的枸櫞酸鹽緩沖液。另一方面，本發(fā)明還提供了一種制備本發(fā)明所述的靜脈制劑的方法，包括以下步驟：1)提供溶解有羥丙基-β-環(huán)糊精的第一溶液，該第一溶液為水溶液，pH為1-2；2)將KX2-361或其可藥用的鹽與所述第一溶液混合，制得溶解有KX2-361或其可藥用的鹽的第二溶液。優(yōu)選地，在所述第一溶液中，羥丙基-β-環(huán)糊精的濃度為10％(w/v)至50％(w/v)，更優(yōu)選為20％(w/v)至40％(w/v)，還更優(yōu)選為30％(w/v)至40％(w/v)。如果羥丙基-β-環(huán)糊精濃度低于10％(w/v)，則包合藥物的量過低；如果高于50％(w/v)，則配成的溶液粘度過大，無法進行冷凍干燥。所述第一溶液可以含有pH調(diào)節(jié)劑，所述pH調(diào)節(jié)劑可以為鹽酸等強酸性溶液。優(yōu)選地，在所述第二溶液中，以KX2-361計，所述KX2-361或其可藥用的鹽的濃度為0.5mg/ml至5mg/ml，優(yōu)選為1.4mg/ml至4.3mg/ml。如果KX2-361的濃度低于0.5mg/ml，則包合藥物的量過低；如果高于5mg/ml，則制得的凍干粉在復溶后，所得復溶溶液以及與其他稀釋介質(zhì)形成的溶液的穩(wěn)定性差，藥物易析出。所述KX2-361的可藥用的鹽可以為KX2-361·單苯磺酸鹽、KX2-361·二鹽酸鹽、KX2-361·單磷酸鹽和/或KX2-361·二磷酸鹽，其中優(yōu)選為KX2-361·單苯磺酸鹽。優(yōu)選地，在所述第二溶液中，所述KX2-361或其可藥用的鹽與羥丙基-β-環(huán)糊精的摩爾比為1:(1-250)，更優(yōu)選為1:(9-59)。關(guān)于所述第一溶液的pH，由于KX2-361或其可藥用的鹽對酸不穩(wěn)定，因此如果其pH值低于1，則會導致酸降解雜質(zhì)顯著增加；如果其pH值高于2，則藥物的溶解速度慢，溶解時間明顯增加，一方面給生產(chǎn)帶來了很多不便，同時也增加了酸降解雜質(zhì)的量。更優(yōu)選地，所述第一溶液的pH為1.2-2.0。在本發(fā)明所述方法的第2)步中，即獲得了本發(fā)明所述的藥物包合物。在本發(fā)明所述方法的第2)步中，所述混合包括通過攪拌混合或通過超聲混合。還優(yōu)選地，本發(fā)明所述方法還包括3)冷凍干燥所述第二溶液，以制得凍干粉劑。冷凍干燥可以采用本領(lǐng)域常規(guī)的方法進行。還優(yōu)選地，在第3)步之前且第2)步之后，還包括i)將所述第二溶液的pH調(diào)節(jié)至3-7的步驟，更優(yōu)選調(diào)節(jié)至4-6。該回調(diào)pH的步驟有利于避免由于后續(xù)冷凍干燥工藝時間長以及凍干樣品中的酸殘留而造成的藥物降解。可選用的pH調(diào)節(jié)劑包括如NaOH水溶液等堿溶液。在該調(diào)節(jié)pH的步驟中，如果將pH調(diào)節(jié)至超過7，則羥丙基-β-環(huán)糊精對KX2-361或其可藥用的鹽的包裹效果較差，KX2-361或其可藥用的鹽容易析出。在該調(diào)節(jié)pH的步驟中，如果將pH調(diào)節(jié)至低于3，由于KX2-361結(jié)構(gòu)易在酸中開環(huán)降解，降解雜質(zhì)將明顯增加，所制得的制劑不穩(wěn)定。還優(yōu)選地，在第3)步之前且第2)步之后，還包括ii)無菌過濾的步驟。無菌過濾的方法是本領(lǐng)域公知的，例如可以用濾膜過濾，例如用0.22μm的濾膜對活微生物進行物理截留。無菌過濾后得到的溶液可直接灌裝成小容量注射劑，也可以進行冷凍干燥，得到凍干粉劑。可將凍干粉劑進行復溶得到注射液，用于注射給藥，也可以用大容量稀釋劑將凍干粉劑進行稀釋，得到滴注液，用于滴注給藥。還優(yōu)選地，在第ii)步之前且第i)步之后，還包括去除熱原的步驟。去除熱原的方法是本領(lǐng)域公知的，例如加入活性炭去除熱原，并過濾除去活性炭。在本發(fā)明的一個具體實施方案中，所述制備本發(fā)明所述的靜脈制劑的方法，包括以下依次進行的步驟：a)取適量濃鹽酸加注射用水，制備pH為1.2～2.0的鹽酸溶液；b)向a)所得鹽酸溶液中加入處方量的羥丙基-β-環(huán)糊精，攪拌使溶解；再加入處方量的KX2-361或其可藥用的鹽，攪拌或超聲使其溶解；c)用氫氧化鈉水溶液調(diào)節(jié)b)步驟所得溶液的pH值至4.0-6.0；d)加入活性炭吸附除去熱原，過濾除炭；e)無菌過濾；f)冷凍干燥。作為本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案，上述步驟f)中的冷凍干燥工藝是在對真空度和溫度進行控制的條件下進行的，溫度控制過程可為(例如)：在-40℃至-50℃保溫2-5小時；用5-7小時升溫至-20℃，并保溫5-7小時；用5-7小時升溫至0℃，并保溫5-7小時；用5-7小時升溫至10℃，并保溫5-8小時，至樣品干燥。在本發(fā)明的又一個優(yōu)選實施方案中，當羥丙基-β-環(huán)糊精的濃度為10％(w/v)時，KX2-361或其可藥用的鹽與羥丙基-β-環(huán)糊精的摩爾比為1:(31-56)；當羥丙基-β-環(huán)糊精的濃度為20％(w/v)時，KX2-361或其可藥用的鹽與羥丙基-β-環(huán)糊精的摩爾比為1:(16-53)；當羥丙基-β-環(huán)糊精的濃度為30％(w/v)時，KX2-361或其可藥用的鹽與羥丙基-β-環(huán)糊精的摩爾比為1:(12-59)；當羥丙基-β-環(huán)糊精的濃度為40％(w/v)時，KX2-361或其可藥用的鹽與羥丙基-β-環(huán)糊精的摩爾比為1:(9-15)。在制備靜脈制劑的液體制劑時，所述方法還包括用注射用溶液將所述凍干粉劑復溶的步驟。可以采用本領(lǐng)域已知的任何注射用溶液，例如可以為緩沖鹽水溶液、葡萄糖水溶液、氯化鈉水溶液或乳酸林格氏液。緩沖鹽水溶液例如可以為枸櫞酸鹽緩沖液、乙酸-乙酸鈉緩沖液、磷酸鹽緩沖液等；葡萄糖水溶液例如可以為5％(w/v)葡萄糖水溶液；氯化鈉水溶液例如可以為0.9％(w/v)氯化鈉水溶液。優(yōu)選地，所述緩沖鹽水溶液為pH4.0的緩沖鹽水溶液，例如pH4.0的枸櫞酸鹽緩沖液。在本發(fā)明在靜脈制劑的研究中，對包合工藝進行了優(yōu)化，從而對載藥配方實現(xiàn)了優(yōu)化，最終得到了各指標均合格的可供直接靜脈注射的配方，和可進行10倍以內(nèi)稀釋后靜滴的配方。靜注或靜滴給藥后，藥物在血管中的行為可通過動態(tài)、靜態(tài)模擬試驗檢測，并且發(fā)明人發(fā)現(xiàn)均不存在析出沉淀的現(xiàn)象。因此本發(fā)明提供了可以安全注射給藥的制劑配方。本發(fā)明還對凍干粉劑進行了初步穩(wěn)定性試驗，試驗結(jié)果顯示在40℃、25℃條件下放置3個月后，制劑均穩(wěn)定。四、口服制劑另一方面，本發(fā)明還提供了一種用于治療細胞增殖性疾病的口服制劑，包含羥丙基-β-環(huán)糊精和活性成分，所述活性成分為KX2-361或其可藥用的鹽，所述KX2-361由下式1表示：優(yōu)選地，在所述口服制劑中，所述活性成分與羥丙基-β-環(huán)糊精的摩爾比為1:(1-250)，更優(yōu)選為1:(4-59)，還更優(yōu)選為1:(4-17)。還優(yōu)選地，在所述口服制劑中，以KX2-361計，所述活性成分中含有的KX2-361與羥丙基-β-環(huán)糊精的質(zhì)量比為(0.1～29):100，更優(yōu)選為(0.5～5):100，還更優(yōu)選為(1.7～5):100。優(yōu)選地，所述活性成分為KX2-361、KX2-361·單苯磺酸鹽、KX2-361·二鹽酸鹽、KX2-361·單磷酸鹽和/或KX2-361·二磷酸鹽，其中優(yōu)選為KX2-361·單苯磺酸鹽。在本文中，除非特別說明，所述的“KX2-361·苯磺酸鹽”指KX2-361·單苯磺酸鹽，其分子量為563.64。在本發(fā)明的口服制劑中，至少一部分所述羥丙基-β-環(huán)糊精可包裹至少一部分所述活性成分而形成藥物包合物。其中在該藥物包合物中，所述羥丙基-β-環(huán)糊精可形成兩端開口的中空筒狀結(jié)構(gòu)，所述KX2-361或其可藥用的鹽能被全部或部分包裹在所述筒狀結(jié)構(gòu)中。優(yōu)選地，本發(fā)明的口服制劑還包含可藥用的賦形劑。所述可藥用的賦形劑可選自填充劑、崩解劑、潤滑劑中的一種或多種。所述填充劑可選自微晶纖維素(MCC)、乳糖、淀粉、甘露醇等中的一種或多種，其中優(yōu)選為乳糖；基于所述口服制劑的總重量，所述填充劑的量優(yōu)選為0％～69％(w/w)。崩解劑可選自交聯(lián)羧甲基纖維素鈉(CC-Na)、交聯(lián)聚維酮(PVPP)、羧甲基淀粉鈉等中的一種或多種，其中優(yōu)選為交聯(lián)羧甲基纖維素鈉；基于所述口服制劑的總重量，所述崩解劑的量優(yōu)選為0％～5％(w/w)。潤滑劑可選自硬脂酸鎂、微粉硅膠、滑石粉等中的一種或多種，其中優(yōu)選為硬脂酸鎂；基于所述口服制劑的總重量，所述潤滑劑的量為0.5％～3％(w/w)。優(yōu)選地，所述口服制劑為片劑的形式，其中所述活性成分在單劑片劑中的含量為0.5％～6.5％(w/w)。在本發(fā)明的一個具體實施方案中，本發(fā)明的片劑含有：約1％(w/w)的KX2-361·單苯磺酸鹽，大于28.6％(w/w)且小于29％(w/w)的羥丙基-β-環(huán)糊精，約64％(w/w)的乳糖，約5％(w/w)的交聯(lián)羧甲基纖維素鈉，約1％(w/w)的硬脂酸鎂，以及大于0且小于0.4％(w/w)的NaCl。另一方面，本發(fā)明還提供了一種制備本發(fā)明所述的口服制劑的方法，包括以下步驟：A)提供溶解有羥丙基-β-環(huán)糊精的第一溶液，該第一溶液的pH為1-2；B)將KX2-361或其可藥用的鹽與所述第一溶液混合，制得溶解有KX2-361或其可藥用的鹽的第二溶液；C)將所述第二溶液干燥，以得到干燥物。優(yōu)選地，在所述第一溶液中，羥丙基-β-環(huán)糊精濃度為10％(w/v)至50％(w/v)，更優(yōu)選為20％(w/v)至40％(w/v)，還更優(yōu)選為30％(w/v)至40％(w/v)。如果羥丙基-β-環(huán)糊精濃度低于10％(w/v)，則包合藥物的量過低；如果高于50％(w/v)，則配成的溶液粘度過大，無法進行干燥(例如冷凍干燥)。所述第一溶液可以含有pH調(diào)節(jié)劑，所述pH調(diào)節(jié)劑可以為鹽酸等強酸性溶液。優(yōu)選地，在所述第二溶液中，以KX2-361計，所述KX2-361或其可藥用的鹽的濃度為0.5mg/ml至15mg/ml，優(yōu)選為3.6mg/ml至15mg/ml，更優(yōu)選為5mg/ml至10mg/ml。如果KX2-361的濃度低于0.5mg/ml，則包合藥物的量過低；如果高于15mg/ml，則包合體系穩(wěn)定性差，藥物易析出。所述KX2-361的可藥用的鹽可以為KX2-361·單苯磺酸鹽、KX2-361·二鹽酸鹽、KX2-361·單磷酸鹽和/或KX2-361·二磷酸鹽，其中優(yōu)選為KX2-361·單苯磺酸鹽。優(yōu)選地，在所述第二溶液中，所述KX2-361或其可藥用的鹽與羥丙基-β-環(huán)糊精的摩爾比為1:(1-250)，更優(yōu)選為1:(4-59)，還更優(yōu)選為1:(4-17)。關(guān)于所述第一溶液的pH，由于KX2-361或其可藥用的鹽對酸不穩(wěn)定，因此如果其pH值低于1，則會導致酸降解雜質(zhì)顯著增加；如果其pH值高于2，則藥物的溶解速度慢，溶解時間明顯增加，一方面給生產(chǎn)帶來了很多不便，同時也增加了酸降解雜質(zhì)的量。更優(yōu)選地，所述第一溶液的pH為1.2-2.0。在本發(fā)明所述方法的步驟B)中，所述混合包括通過攪拌混合或通過超聲混合。在本發(fā)明所述方法的步驟C)中，所述干燥的例子為冷凍干燥和噴霧干燥等。冷凍干燥和噴霧干燥可以采用本領(lǐng)域常規(guī)的方法進行。還優(yōu)選地，在步驟C)之前且步驟B)之后，還包括I)將所述第二溶液的pH調(diào)節(jié)至3-7，更優(yōu)選調(diào)節(jié)至4-6。該回調(diào)pH的步驟有利于避免由于后續(xù)冷凍干燥工藝時間長以及凍干樣品中的酸殘留而造成的藥物降解?？蛇x用的pH調(diào)節(jié)劑包括如NaOH水溶液等堿溶液。在該調(diào)節(jié)pH的步驟中，如果將pH調(diào)節(jié)至超過7，則羥丙基-β-環(huán)糊精對KX2-361或其可藥用的鹽的包裹效果較差，KX2-361或其可藥用的鹽容易析出。如果將pH調(diào)節(jié)至低于3，由于KX2-361結(jié)構(gòu)易在酸中開環(huán)降解，降解雜質(zhì)將明顯增加，所制得的制劑不穩(wěn)定。還優(yōu)選地，在步驟C)之前且步驟B)之后，還包括III)過濾的步驟。過濾的方法是本領(lǐng)域公知的，例如可以用濾膜過濾來獲得澄清溶液，例如0.8μm的濾膜。優(yōu)選地，在步驟C)之后，還包括D)對所述干燥物進行壓片。具體而言，步驟D)包括將所述干燥物與選自填充劑、崩解劑、潤滑劑中的一種或多種的賦形劑混合，然后進行所述壓片。所述填充劑可選自微晶纖維素(MCC)、乳糖、淀粉、甘露醇等中的一種或多種，其中優(yōu)選為乳糖；基于所述口服制劑的總重量，所述填充劑的量優(yōu)選為0％～69％(w/w)。崩解劑可選自交聯(lián)羧甲基纖維素鈉(CC-Na)、交聯(lián)聚維酮(PVPP)、羧甲基淀粉鈉等中的一種或多種，其中優(yōu)選為交聯(lián)羧甲基纖維素鈉；基于所述口服制劑的總重量，所述崩解劑的量優(yōu)選為0％～5％(w/w)。潤滑劑可選自硬脂酸鎂、微粉硅膠、滑石粉等中的一種或多種，其中優(yōu)選為硬脂酸鎂；基于所述口服制劑的總重量，所述潤滑劑的量為0.5％～3％(w/w)。在本發(fā)明的一個具體實施方案中，所述制備本發(fā)明所述的口服制劑的方法包括以下依次進行的步驟：①取適量濃鹽酸加注射用水，制備pH為1.2～2.0的鹽酸溶液；②向步驟①所得鹽酸溶液中加入處方量的羥丙基-β-環(huán)糊精，攪拌使溶解；再加入處方量的KX2-361或其可藥用的鹽，攪拌或超聲使其溶解；③用氫氧化鈉水溶液調(diào)節(jié)步驟②所得溶液的pH值至4.0-6.0；④過濾；⑤冷凍干燥；⑥將步驟⑤所得凍干粉過篩；⑦將步驟⑥所得過篩物與選自填充劑、崩解劑、潤滑劑中的一種或多種的賦形劑混合；⑧壓片。作為本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案，上述步驟⑤中的冷凍干燥工藝是在對真空度和溫度進行控制的條件下進行的，溫度控制過程可為(例如)：-40℃至-50℃保溫2-5小時；用5-7小時升溫至-20℃，并保溫5-7小時；用5-7小時升溫至0℃，并保溫5-7小時；用5-7小時升溫至10℃，并保溫5-8小時，至樣品干燥。在制備本發(fā)明所述的口服制劑的方法的又一個優(yōu)選實施方案中，以KX2-361計，當羥丙基-β-環(huán)糊精的濃度為10％(w/v)-30％(w/v)時，KX2-361或其可藥用的鹽的濃度為0.5mg/ml至6mg/ml；以KX2-361計，當羥丙基-β-環(huán)糊精的濃度為40％(w/v)-50％(w/v)時，KX2-361或其可藥用的鹽的濃度為0.5mg/ml至10mg/ml。本發(fā)明的口服制劑是在本發(fā)明的凍干粉劑的基礎(chǔ)上進一步開發(fā)而來的片劑。本發(fā)明對包合工藝進行了優(yōu)化，以包合溶液的放置穩(wěn)定性、有關(guān)物質(zhì)、溶出度等作為評價指標，對載藥配方實現(xiàn)了載藥量的最大優(yōu)化。最終采用在pH1-2的溶液中包合KX2-361或其可藥用的鹽(活性成分)，再回調(diào)pH的工藝，并采用冷凍干燥技術(shù)制備凍干粉劑，使得活性成分的包合濃度以KX2-361計，可達10mg/ml。本發(fā)明的口服片劑取得了較高的生物利用度。另外，對片劑也進行了溶出度、有關(guān)物質(zhì)等關(guān)鍵指標的檢測，均合格。例子以下除非特別說明，否則各試劑的百分濃度(％)均指該試劑的重量(g)/體積(100mL)百分濃度(％(w/v))，例如，HP-β-CD的濃度為40％是指該HP-β-CD的濃度為40％(w/v)。以下例子中提及乙醇時，除非特別指明濃度，否則是指95％(v/v)的乙醇水溶液?？s寫如下：KX2-361·BSA：KX2-361·苯磺酸鹽HP-β-CD：羥丙基-倍他-環(huán)糊精SBE-β-CD：磺丁基醚-倍他-環(huán)糊精API：ActivePharmaceuticalIngredient(活性藥物成分)(除非特別說明，下文均指KX2-361·BSA)PTFE：聚四氟乙烯以下各例子中所用的材料和設(shè)備購買信息如下：名稱型號廠家冷凍干燥機Lyopro-0.4上海凜馬機械科技有限公司天平CP225DSartorius公司(德國)pH計FE20METTLERTOLEDO公司HPLCAgilent1260安捷倫公司(美國)質(zhì)譜儀API4000ABSCIEX紫外分光光度計Varian50Bio美國瓦里安公司壓片機ZP10A北京國藥龍立科技有限公司微粒檢測儀GWJ-8天津天大天發(fā)科技有限公司崩解時限測定儀LB-2D型上海黃海藥檢儀器有限公司實施例1：注射用KX2-361·苯磺酸鹽凍干劑和復溶溶液的制備及評價(HP-β-CD濃度為30％，高載藥量)制備以下組成的處方：注：HP-β-CD的分子量為1431～1806，因此計算摩爾比時分別取其分子量的上下限來進行計算。依次按照以下步驟制備上述處方：1)將1.8mL濃鹽酸置于200mL容量瓶中，用蒸餾水定容至200mL，得pH約為1.2的鹽酸溶液(濃度為0.1mol/L，下同)。2)按上述處方量分別稱取HP-β-CD，分別加入三個50mL容量瓶。加入1)所得溶液，超聲(超聲頻率59kHz)溶解并用上述鹽酸溶液定容至約46mL。3)按上述處方量分別稱取API(KX2-361·苯磺酸鹽)，分別加入上述HP-β-CD溶液中，超聲(超聲頻率59kHz)溶解。4)用5NNaOH水溶液和0.1NNaOH水溶液將3)所得溶液分別調(diào)pH至6.0左右(±0.05)。用蒸餾水將溶液定容至50mL。5)用0.45μm聚醚砜濾膜過濾并將三種處方溶液分別分裝于10mL西林瓶中(以2mL體積分裝)，進行冷凍干燥。凍干曲線如下：階段溫度(℃)真空控制(Pa)時間(分鐘)真空泵狀態(tài)冷凝器預凍(℃)1-40不開啟5關(guān)閉-402-40不開啟120關(guān)閉3-4020±2360開啟4-2020±2360開啟5-2010±2360開啟6010±2360開啟7010±2360開啟810不控制360開啟910不控制120開啟冷凍干燥后樣品狀態(tài)：樣品成型性較好。凍干樣品均呈淡黃色疏松固體。將上述三個處方(處方A1、A2、A3)的凍干樣品進行復溶，并評價其復溶情況、不溶性微粒及稀釋穩(wěn)定性。1、用水及緩沖鹽水溶液進行復溶復溶方法為：向每種凍干樣品的每支西林瓶中分別加入2mL的下述復溶介質(zhì)，加完之后上下顛倒30次，如不溶解則振搖至溶解為止。在加入緩沖鹽水溶液后開始計時，同時進行兩個重復。緩沖鹽成分組成如下：注：c表示配制成緩沖鹽的溶質(zhì)的摩爾濃度。復溶時間如下：注：各處方復溶時間取2個重復的平均值不溶性顆粒(檢測方法參照中國藥典2015版第四部0903不溶性微粒檢查法第一法光阻法，以下同)如下：注：不溶顆粒為取兩份樣品分別檢測所得結(jié)果的平均值，分別測量0小時和4小時后的不溶顆粒。由上述結(jié)果可知含30％HP-β-CD的樣品用不同pH緩沖鹽復溶時，其復溶時間均比用純水復溶的約4分鐘縮短到約2.5分鐘。30％HP-β-CD的樣品用pH＝4.0緩沖鹽復溶時不溶顆粒情況均較好，其中處方A2在三種緩沖鹽復溶時不溶顆粒情況均較好。另外，根據(jù)中國藥典標準，任何小于100mL的容器中≥10μm的不溶顆粒不得超過6000，≥25μm的不溶顆粒不得超過600。由于上表所示不溶性顆粒的試驗結(jié)果是1mL溶液的檢測值，因此，處方A1-A3均適合進一步研制成體積放大的(從藥物的有效性及安全性考慮其規(guī)格)、可以達到較大的單次給藥劑量且符合中國藥典標準的成品藥物制劑。2、用5％葡萄糖水溶液和0.9％氯化鈉水溶液進行復溶復溶方法為：向每種凍干樣品的每支西林瓶中分別加入2mL下述復溶介質(zhì)，加完之后上下顛倒30次，如不溶解則振搖至溶解為止。在加入復溶介質(zhì)后開始計時，同時進行兩個重復。復溶時間如下：注：各處方復溶時間取2個重復的平均值不溶性顆粒如下：注：不溶顆粒為取兩份樣品分別檢測所得結(jié)果的平均值，分別測量0小時和4小時后的不溶顆粒。上述結(jié)果說明，與用5％葡萄糖水溶液和0.9％氯化鈉水溶液復溶的效果相比，用pH4.0緩沖鹽水溶液復溶的效果更好。實施例2：注射用KX2-361·苯磺酸鹽凍干劑和復溶溶液的制備及評價(HP-β-CD濃度為30％，低載藥量)制備以下組成的處方：注：HP-β-CD的分子量為1431～1806，因此計算摩爾比時分別取其分子量的上下限來進行計算。依次按照以下步驟制備上述處方：1)將1.8mL濃鹽酸置于200mL容量瓶中，用蒸餾水定容至200mL，得pH約為1.2的鹽酸溶液。2)按上述處方量分別稱取HP-β-CD，分別加入三個25mL容量瓶。加入1)所得溶液，超聲(超聲頻率59kHz)溶解并用上述鹽酸溶液定容至約23mL。3)按上述處方量分別稱取API，分別加入上述HP-β-CD溶液中，對于處方A6加入枸櫞酸50.7mg，超聲(超聲頻率59kHz)溶解。4)用5NNaOH水溶液和0.1NNaOH水溶液將3)所得溶液分別調(diào)pH至上表所示(±0.05)。用蒸餾水將溶液定容至25mL。5)用0.45μm聚醚砜濾膜過濾并將三種處方溶液分別分裝于10mL西林瓶中(每瓶2mL)，進行冷凍干燥。階段溫度(℃)真空控制(Pa)時間(分鐘)真空泵狀態(tài)冷凝器預凍(℃)1-40不開啟5關(guān)閉-402-40不開啟120關(guān)閉3-4020±2360開啟4-2020±2360開啟5-2010±2360開啟6010±2360開啟7010±2360開啟810不控制360開啟910不控制120開啟冷凍干燥后樣品狀態(tài)：樣品成型性較好。凍干樣品均呈蓬松雪狀固體。將上述三個處方(處方A4、A5、A6)的凍干樣品進行復溶，并評價其在5％葡萄糖水溶液和生理鹽水中的復溶情況和不溶性顆粒情況。復溶方法為：向每種凍干樣品的每支西林瓶中分別加入2mL的下述復溶介質(zhì)，加完之后上下顛倒30次，如不溶解則振搖至溶解為止。在加完復溶介質(zhì)后開始計時，重復測定兩份樣品，復溶時間如下：注：各處方復溶時間取兩份樣品檢測結(jié)果的平均值不溶性顆粒如下：注：不溶顆粒為兩份樣品分別檢測得到結(jié)果的平均值。將上述三個處方(處方A4、A5、A6)的凍干樣品分別用下表中所述復溶介質(zhì)進行復溶，復溶后藥物溶液在相同的介質(zhì)中按照一定比例進行稀釋，稀釋比例(復溶后溶液體積:稀釋介質(zhì)體積)分別為1:2,1:5,1:10，對稀釋后的溶液檢測0時和4小時的不溶性顆粒。稀釋后的不溶顆粒如下：注：不溶顆粒為取兩份樣品分別檢測所得結(jié)果的平均值，分別測量0小時和4小時后的不溶顆粒。觀察上述樣品的稀釋情況可知，4小時均沒有API析出。3種處方均有潛力可以通過加配過濾器進行稀釋后藥液的靜脈滴注。選取30％HP-β-CD濃度的高載藥量配方A2和低載藥量配方A5進行如下試驗。試驗例1：放置8天后的不溶性微粒及滲透壓測定按照實施例1和實施例2所述的方法，以200mL的批量分別重新制備處方A2和處方A5。處方A2(30％HP-β-CD+6mg/mLAPI)和處方A5(30％HP-β-CD+2mg/mLAPI)的凍干樣品在4℃保存8天后，檢測不溶性微粒，結(jié)果如下：注：n＝10表示針對每種處方檢測了10份樣品，不溶顆粒為10份樣品分別檢測得到結(jié)果的平均值。上表結(jié)果表明，兩個配方的凍干粉在4℃放置8天后，復溶后不溶性微粒仍合格。對腎及心肺功能差的老年、嬰幼兒患者輸?shù)葷B液容易造成電解質(zhì)潴留而出現(xiàn)水腫等嚴重合并癥，故兒科臨床上把等滲輸液稱為“危險輸液”。由于人體體表蒸發(fā)、肺呼出等形式不斷失水，一般在低滲輸液區(qū)的安全范圍較寬，低滲輸液量的安全幅度較大，低滲輸液使用的范圍較廣。因此，進行了用低滲溶液進行的稀釋穩(wěn)定性試驗及滲透壓測定。取處方A5(30％HP-β-CD+2mg/mLAPI)凍干樣品，每支西林瓶用2mL蒸餾水復溶后，按不同比例以低滲溶液(0.45％氯化鈉水溶液和2.5％葡萄糖水溶液)進行稀釋，測不溶性微粒和滲透壓。結(jié)果如下：注：不溶顆粒為取兩份樣品分別檢測所得結(jié)果的平均值，分別測量0小時和4小時后的不溶顆粒。滲透壓測定結(jié)果如下：注：滲透壓為取兩份樣品分別檢測所得結(jié)果的平均值。一般等滲溶液的滲透壓摩爾濃度為280～320mOsm，可見處方A5經(jīng)低滲溶液以不同比例稀釋后，其溶液的滲透壓較低，其不溶性微粒檢測結(jié)果也較好。試驗例2：3個月穩(wěn)定性考察將處方A2和A5的凍干樣品于25攝氏度和40攝氏度恒溫箱中放置3個月，進行穩(wěn)定性考察。對于每種條件各取兩份樣品，利用HPLC考察API含量％、有關(guān)物質(zhì)(即，API降解所得物質(zhì))，并且考察不溶性微粒，見表1和表2。含量及有關(guān)物質(zhì)HPLC測定條件如下：表1凍干制劑的3個月穩(wěn)定性考察-含量％及總雜％從上表可見，兩個凍干粉劑的含量在3個月內(nèi)基本沒有變化，從雜質(zhì)譜上看，出現(xiàn)了3個新增降解雜質(zhì)，總雜量略有增加，但均在可接受范圍內(nèi)。取處方A2和處方A5在25℃和40℃放置三個月時間內(nèi)表2所示時間點的樣品，進行不溶性微粒檢測，詳見下表：表2凍干制劑的3個月穩(wěn)定性考察-不溶性微粒注：n＝2表示針對每種處方檢測了2份樣品，不溶顆粒為2份樣品分別檢測得到結(jié)果的平均值?？梢姡瑑蓚€處方均分別在25℃和40℃放置3個月，不溶性微粒試驗結(jié)果均較好。試驗例3：動態(tài)吸附試驗將處方A2和處方A5的凍干樣品加注射用水復溶，將處方A2配成6mg/mL的藥物濃度，將處方A5配成2mg/mL的藥物濃度，之后模擬其注射入血管的狀態(tài)，考察其在生理條件下的物理穩(wěn)定性，推測其靜脈給藥后析出沉淀的可能性。一、試驗操作：利用蠕動泵使5％BSA(牛血清蛋白)以5ml/分鐘的流速通過1.6mm內(nèi)徑的柔性管(Longerpump，14#)。將復溶后的上述藥物溶液通過插入距柔性管末端30cm處的針注入到柔性管中，利用注射器泵來控制樣品注入的速率，注入速率為0.2～5ml/分鐘(見表3)。待藥物溶液、5％BSA溶液以一定速率混勻后，在柔性管末端接取流出液：(1)取流出液4ml，以紫外分光光度計測定在540nm處的吸光度值，檢測沉淀物的出現(xiàn)，以空白制劑(30％羥丙基-β-環(huán)糊精水溶液)與5％BSA的混合溶液作為對照；(2)取流出液1ml，加入乙腈9ml，渦旋5分鐘，0.45μm尼龍濾膜過濾，取續(xù)濾液作為100％濃度的樣品，以HPLC檢測。取流出液4ml，0.45μm聚醚砜濾膜過濾，取續(xù)濾液1ml，加入乙腈9ml，渦旋5分鐘，0.45μm尼龍濾膜過濾，取續(xù)濾液1ml作為待測樣品，以HPLC檢測。待測樣品與100％濃度樣品的比值即為樣品中未析出的API的比例。二、試驗結(jié)果：表3動態(tài)析出試驗結(jié)果(n＝2)注：n＝2表示針對每種處方檢測了2份樣品，試驗結(jié)果為2份樣品分別檢測得到結(jié)果的平均值。沉淀物的檢測及藥物含量檢測結(jié)果見上表。由結(jié)果可見，各組的紫外吸收值均很低，說明3個制劑以不同速率注入5％BSA后，均無明顯的沉淀析出。樣品流出液過濾后，藥物基本全部存在于濾液中，說明其并未析出。由本試驗的結(jié)果可以看出，試驗所考察的處方A2和處方A5與模擬血漿的相容性良好，其靜脈滴注或推注后析出沉淀的風險均較小。試驗例4：靜態(tài)吸附試驗為了更充分的驗證動態(tài)吸附實驗的結(jié)論，又做了一個靜態(tài)吸附實驗。稀釋液1為含50mmol/LNaH2PO4的PBS(pH7.4的磷酸鹽緩沖液)溶液，以此稀釋液1溶解BSA(牛血清白蛋白)制成5％BSA稀釋液2。取處方A5(30％HP-β-CD+2mg/mLAPI，最終pH＝4.0)和處方A2(30％HP-β-CD+6mg/mLAPI，最終pH＝6.0)凍干樣品，分別用2mL蒸餾水復溶。以上述兩種稀釋液1和2稀釋不同的倍數(shù)(體積比)，觀察樣品是否析出，每個稀釋倍數(shù)下的稀釋試驗均重復一次。結(jié)果如下：實驗結(jié)果表明，處方A5用PBS(pH＝7.4)和含5％BSA的PBS(pH＝7.4)稀釋不同比例均未明顯析出固體。該結(jié)果進一步驗證了處方A5可采取以10倍以內(nèi)稀釋后再靜脈滴注的方式來給物。處方A2用PBS(pH＝7.4)(稀釋液1)按1:5和1:10稀釋時在半小時內(nèi)均析出固體，而用含5％BSA的PBS(pH＝7.4)(稀釋液2)稀釋相同比例在2小時內(nèi)無明顯析出。在16小時后，稀釋液1稀釋組有大量固體析出，稀釋液2稀釋組析出固體較少。實驗結(jié)果表明BSA結(jié)合了部分藥物，阻止了藥物的析出。動態(tài)吸附試驗結(jié)果為，處方A2在不同的滴注速度下均沒有藥物析出，因此認為該處方按69.5mg劑量給藥時采用靜脈推注(推注11.6mL，可推注2～3分鐘)的方式是可行的。實施例3：注射用KX2-361·苯磺酸鹽凍干劑和復溶溶液的制備及評價(HP-β-CD濃度為20％，較高載藥量)制備以下組成的處方：注：HP-β-CD的分子量為1431～1806，因此計算摩爾比時分別取其分子量的上下限來進行計算。依次按照以下步驟制備上述處方：1)將1.8mL濃鹽酸置于200mL容量瓶中，用蒸餾水定容至200mL，得pH約為1.2的鹽酸溶液。2)按上述處方量分別稱取HP-β-CD，分別加入兩個25mL容量瓶。加入1)所得溶液，超聲(超聲頻率59kHz)溶解并用上述鹽酸溶液定容至約23mL。3)按上述處方量分別稱取API，分別加入上述HP-β-CD溶液中，超聲(超聲頻率59kHz)溶解。4)用5NNaOH水溶液和0.1NNaOH水溶液將3)所得溶液分別調(diào)pH至6.0左右(±0.05)。用蒸餾水將溶液定容至25mL。5)用0.45μm聚醚砜濾膜過濾并將兩種處方溶液分別分裝于10mL西林瓶中(按2mL體積分裝)，進行冷凍干燥。凍干曲線如下：階段溫度(℃)真空控制(Pa)時間(分鐘)真空泵狀態(tài)冷凝器預凍(℃)1-40不開啟5關(guān)閉-402-40不開啟120關(guān)閉3-4020±2360開啟4-2020±2360開啟5-2010±2360開啟6010±2360開啟7010±2360開啟810不控制360開啟910不控制120開啟冷凍干燥后樣品狀態(tài)：樣品成型性較好。凍干樣品均呈白色蓬松雪狀固體。將上述兩個處方(處方A7和A8)的凍干樣品進行復溶，并評價其復溶情況和不溶性微粒。復溶方法為：向每種凍干樣品的每支西林瓶中分別加入2mL的水及下述緩沖鹽水溶液，加完之后上下顛倒30次，如不溶解則振搖至溶解為止。在加完復溶介質(zhì)后開始計時，同時進行兩個重復。緩沖鹽成分組成如下：pH(理論/實際)成分理論稱量/實際稱量濃度4.0/4.00一水合枸櫞酸210.14mg/211.4mgc＝0.01mmol/L5.0/5.01三水合乙酸鈉136.08mg/137.4mgc＝0.01mmol/L6.0/6.00二水合磷酸二氫鈉156.06mg/156.6mgc＝0.01mmol/L復溶時間如下：注：各處方復溶時間取2個重復的平均值不溶性顆粒如下：注：各處方不溶顆粒為兩瓶合并測量，分別測量0小時和4小時后的不溶顆粒。由上述結(jié)果可知含20％HP-β-CD的樣品用不同pH緩沖鹽復溶時，其復溶時間均比用純水復溶的約3分鐘縮短到約1.5分鐘。而且，處方A8在pH4.0及pH5.0緩沖鹽水溶液中復溶后的不溶性顆粒試驗的結(jié)果較處方A7更優(yōu)。實施例4：注射用KX2-361·苯磺酸鹽凍干劑和復溶溶液的制備及評價(HP-β-CD濃度為20％，低載藥量，包合pH值為1.2)制備以下組成的處方：注：HP-β-CD的分子量為1431～1806，因此計算摩爾比時分別取其分子量的上下限來進行計算。依次按照以下步驟制備上述處方：1)將1.8mL濃鹽酸置于200mL容量瓶中，用蒸餾水定容至200mL，得pH＝1.21的鹽酸溶液。2)按上述處方量稱取HP-β-CD，加入25mL容量瓶。加入1)所得溶液，超聲(超聲頻率59kHz)溶解并用上述鹽酸溶液定容至約23mL。3)按上述處方量稱取API，加入上述HP-β-CD溶液中，超聲(超聲頻率59kHz)溶解。4)用5NNaOH水溶液和0.1NNaOH水溶液將3)所得溶液調(diào)pH至4.0左右(±0.05)。用蒸餾水將溶液定容至25mL。5)用0.45μm聚醚砜濾膜過濾并將處方溶液分裝于10mL西林瓶中(每瓶2mL)，進行冷凍干燥。凍干曲線如下：階段溫度(℃)真空控制(Pa)時間(分鐘)真空泵狀態(tài)冷凝器預凍(℃)1-40不開啟5關(guān)閉-402-40不開啟120關(guān)閉3-4020±2360開啟4-2020±2360開啟5-2010±2360開啟6010±2360開啟7010±2360開啟810不控制360開啟910不控制120開啟冷凍干燥后樣品狀態(tài)：樣品成型性較好。凍干樣品呈淡黃色蓬松雪狀固體。取處方A9凍干樣品的兩支西林瓶，分別用2mL生理鹽水(即0.9％氯化鈉水溶液)和5％葡萄糖水溶液復溶，再用對應(yīng)溶液稀釋，檢測不溶性微粒，每個稀釋倍數(shù)下的稀釋試驗均重復一次。結(jié)果如下：注：不溶顆粒為取兩份樣品分別檢測所得結(jié)果的平均值，分別測量0小時和4小時后的不溶顆粒。由上表可知，處方A9復溶后，用相同介質(zhì)進行2倍內(nèi)稀釋得到的溶液穩(wěn)定性較好，多倍稀釋則體系不穩(wěn)定，容易析出固體。因此，處方A9可采取復溶后直接給予藥物的方式，也可以在復溶后進行2倍體積內(nèi)稀釋后再給予藥物。實施例5：注射用KX2-361·苯磺酸鹽凍干劑的制備及評價(HP-β-CD濃度為20％，低載藥量，包合pH值為2)制備以下組成的處方：注：HP-β-CD的分子量為1431～1806，因此計算摩爾比時分別取其分子量的上下限來進行計算。依次按照以下步驟制備上述處方：1)將0.18mL濃鹽酸置于200mL容量瓶中，用蒸餾水定容至200mL，得pH＝2.03的鹽酸溶液。2)按上述處方量稱取HP-β-CD，分別加入25mL容量瓶。加入1)所得溶液，超聲(超聲頻率59kHz)溶解并用上述鹽酸溶液定容至約23mL。3)按上述處方量稱取API，分別加入上述HP-β-CD溶液中，在40℃下分別攪拌1.5小時(處方10)和1小時(處方11)左右溶解。4)用5NNaOH水溶液和0.1NNaOH水溶液將3)所得溶液分別調(diào)pH至4.0左右(±0.05)。用蒸餾水將溶液定容至25mL。5)用0.45μm聚醚砜濾膜過濾并將兩種處方溶液分裝于10mL西林瓶中(每瓶2mL)，進行冷凍干燥。凍干曲線如下：階段溫度(℃)真空控制(Pa)時間(分鐘)真空泵狀態(tài)冷凝器預凍(℃)1-40不開啟5關(guān)閉-402-40不開啟120關(guān)閉3-4020±2360開啟4-2020±2360開啟5-2010±2360開啟6010±2360開啟7010±2360開啟810不控制360開啟910不控制120開啟冷凍干燥后樣品狀態(tài)：樣品成型性較好。凍干樣品呈淺黃色接近白色蓬松雪狀固體。試驗例5：處方A9-A11的性質(zhì)研究1、復溶試驗和不溶性顆粒的檢驗本試驗例考察了處方A9-A11在5％葡萄糖水溶液、蒸餾水和生理鹽水(即0.9％氯化鈉注射液)中的復溶情況和不溶性顆粒情況。復溶方法為：向每種凍干樣品的每支西林瓶中分別加入下述體積的復溶介質(zhì)，加完之后上下顛倒30次，如不溶解則振搖至溶解為止。在加完復溶介質(zhì)后開始計時。復溶時間如下：不溶性顆粒如下：注：各處方復溶時間取2瓶平均值，不溶顆粒為兩瓶合并測量，分別測量0小時和4小時后的不溶顆粒。由試驗中的現(xiàn)象和試驗結(jié)果可知，當包合pH提高到2.03后，包合難度增加(例如，需要在40℃下攪拌1小時以上)，且凍干后復溶溶液的不溶性微粒較pH＝1.2包合時有所增加。但處方A9-A11的不溶性微粒情況均符合制備靜脈注射劑的要求。2、不同pH包合樣品的穩(wěn)定性：取處方A9-A11凍干樣品，分別用水配制成濃度為0.1mg/mL的溶液各兩瓶，用HPLC測其有關(guān)物質(zhì)(方法詳見試驗例2中所述的含量及有關(guān)物質(zhì)HPLC測定條件)，結(jié)果如下。由上表可見，相對于處方A9而言，處方A10和A11的總雜并沒有顯著降低?？紤]到與pH1.2包合工藝相比，包合pH2時包合時間明顯增加，包合難度較大，因此工藝最優(yōu)選在pH1.2條件下進行包合。實施例6：注射用KX2-361·苯磺酸鹽凍干劑和復溶溶液的制備及評價(HP-β-CD濃度為10％，低載藥量)制備以下組成的處方：注：HP-β-CD的分子量為1431～1806，因此計算摩爾比時分別取其分子量的上下限來進行計算。依次按照以下步驟制備上述處方：1)將1.8mL濃鹽酸置于200mL容量瓶中，用蒸餾水定容至200mL，得pH約為1.2的鹽酸溶液。2)按上述處方量稱取HP-β-CD，分別加入兩個25mL容量瓶。分別加入1)所得溶液，超聲(超聲頻率59kHz)溶解并用上述鹽酸溶液定容至約25mL。3)按上述處方量稱取API，分別加入上述HP-β-CD溶液中，超聲(超聲頻率59kHz)溶解。4)用5NNaOH水溶液和0.1NNaOH水溶液將3)所得溶液分別調(diào)pH至4.0左右(±0.05)。用蒸餾水將溶液定容至50mL。5)向4)所得兩溶液中加入0.1g注射用活性炭，室溫攪拌半小時后用0.45μm聚醚砜濾膜過濾，并將處方溶液分別分裝于10mL西林瓶中(每瓶2mL)，進行冷凍干燥。凍干曲線如下：階段溫度(℃)真空控制(Pa)時間(分鐘)真空泵狀態(tài)冷凝器預凍(℃)1-40不開啟5關(guān)閉-402-40不開啟120關(guān)閉3-4020±2360開啟4-2020±2360開啟5-2010±2360開啟6010±2360開啟7010±2360開啟810不控制360開啟910不控制120開啟冷凍干燥后樣品狀態(tài)：樣品成型性較好。凍干樣品均呈白色疏松固體。將上述兩個處方(處方A12和A13)的凍干樣品進行復溶，并評價其在生理鹽水、蒸餾水、和不同pH的緩沖鹽水溶液(配制方法與實施例3中pH分別為4、5和6的緩沖鹽水溶液相同)中的復溶情況和不溶性微粒。復溶方法為：向每種凍干樣品的每支西林瓶中分別加入2ml的下述復溶介質(zhì)，加完之后上下顛倒30次，如不溶解則振搖至溶解為止。加完復溶介質(zhì)后開始計時，每種介質(zhì)中的復溶試驗重復一次。兩處方的復溶時間均為1分鐘左右。不溶性顆粒如下：注：表中各值均為3次測量平均值。由上述結(jié)果可知，A12和A13均符合靜脈注射劑的要求，且與處方A13相比，處方A12的不溶性微粒更少，但是與處方A9(20％HP-β-CD+2mg/mLAPI)相比較高。說明將羥丙基-β-環(huán)糊精及藥物濃度等比例降低時，低環(huán)糊精濃度對藥物包合能力減弱。因此，在本發(fā)明的基礎(chǔ)上進一步選擇合適的羥丙基-β-環(huán)糊精濃度及藥物的包合濃度對KX2-361注射劑的開發(fā)也是重要的。對比例1：藥物溶解度測試KX2-361及其鹽均為難溶性藥物，本對比例對比測試了KX2-361·苯磺酸鹽在下述介質(zhì)中的溶解度。(1)含表面活性劑的水溶液將藥物(KX2-361·苯磺酸鹽)(折合含KX2-361的量為10mg)分別加入10％CremophorEL水溶液、2％Tween80水溶液、8％SolutolHS15水溶液、0.6％Poloxamer188水溶液各50ml中，磁力攪拌1個小時，藥物未能完全溶解。(2)單一增溶劑(無水)單獨使用足夠量的增溶劑可以溶解藥物，但溶解度普遍很?。磺揖鶡o法使藥物溶液在用水稀釋的過程中不析出。藥物析出時，體系各組分的量見表4。表4各增溶劑的藥物溶液的加水析出臨界點(3)單一非水溶劑或復合溶劑本研究采用單一非水溶劑乙醇進行溶解試驗，發(fā)現(xiàn)KX2-361·苯磺酸鹽在乙醇中的溶解度為1.12-2.38mg/mL，即溶解100mg藥物需要乙醇約50～100ml，顯然大量的乙醇無法用于靜脈給藥。本研究還采用PEG400或PEG200與無水乙醇分別組成的復合溶劑進行溶解試驗，發(fā)現(xiàn)同樣存在所需溶劑體積過大的問題，且無法用水溶液體系進行稀釋。另外本研究還采用了單一非水溶劑丙二醇、或丙二醇與其他非水溶劑組成的復合溶劑進行溶解試驗，發(fā)現(xiàn)單用丙二醇20ml能基本溶解折合含50mgKX2-361的藥物(KX2-361·苯磺酸鹽)，但澄清溶液中尚有微量的小顆粒存在。當將非水溶劑丙二醇與其他溶劑如乙醇、PEG400聯(lián)用時，對藥物的溶解基本沒有貢獻。(4)增溶劑與其他溶劑組成復合溶劑以增溶劑(CremophorEL或SolutoloHS15)與溶劑(包括水和丙二醇)組成二元或三元體系來增溶藥物，篩選出2種溶劑體系可以溶解藥物，分別為：①溶劑體系為5ml的丙二醇:CremophorEL(50:50)(v/v)，可溶解折合含50mgKX2-361的藥物，且溶液穩(wěn)定性較好；②11.5ml復合溶劑(由10ml丙二醇、1mlCremophorEL和0.5ml水組成)，同樣能溶解藥物。接下來測試了這兩種溶劑體系的稀釋穩(wěn)定性。(5)稀釋穩(wěn)定性試驗將上述可以溶清的含藥溶液進行稀釋穩(wěn)定性試驗，用上文(1)中所述的含不同表面活性劑的水溶液、0.9％氯化鈉注射液或5％葡萄糖注射液進行等體積稀釋，發(fā)現(xiàn)溶液均變得渾濁，即藥物析出。以上試驗表明，在目前可用于注射的溶劑、增溶劑或混合體系中，本發(fā)明所述的藥物均無法達到較高的溶解度，或者即使溶解后也無法進行稀釋，即難以保證藥物溶液進入血管后不析出。對比例2：不同濃度和種類的環(huán)糊精對API包合能力的測定用pH1.2的鹽酸水溶液(0.1N)溶解不同種類的環(huán)糊精，確定每種環(huán)糊精的飽和濃度。將KX2-361·苯磺酸鹽溶解到不同濃度和種類的環(huán)糊精溶液中，考察不同種類和濃度的環(huán)糊精對API的包合能力與包合效果。(1)分別稱取一定量的α-、β-和γ-環(huán)糊精于10mL的容量瓶中，逐漸加入pH1.2鹽酸水溶液直至刻度，震蕩及超聲，使環(huán)糊精溶解。記錄在10mL溶液中能溶解的環(huán)糊精的最大量。實驗結(jié)果顯示，α-環(huán)糊精在pH1.2的鹽酸水溶液中最大溶解量約為8％，β-環(huán)糊精約為1％，γ-環(huán)糊精約為20％。(2)以pH1.2鹽酸水溶液分別配制8％α-環(huán)糊精溶液，1％β-環(huán)糊精溶液，20％γ-環(huán)糊精溶液，20％、30％及40％的磺丁基醚倍他環(huán)糊精溶液，和20％、30％及40％的羥丙基倍他環(huán)糊精溶液。稱取一定量的API，加入適當體積的上述環(huán)糊精溶液，如果API能完全溶解，則該溶液用0.45μmPTFE濾膜過濾，然后用5NNaOH水溶液和0.1NNaOH水溶液緩慢調(diào)節(jié)pH值至4.0，邊調(diào)pH邊觀察。如果在調(diào)節(jié)pH時，溶液變渾濁，則嘗試降低API的濃度。將調(diào)節(jié)pH后的澄清溶液靜置，觀察靜置2小時、4小時、24小時的狀態(tài)。實驗過程與結(jié)果見下表5：表5不同種類與濃度的環(huán)糊精對API包合能力的檢測/：終止觀察由實驗現(xiàn)象和結(jié)果可知，HP-β-CD對API的包合效果顯著優(yōu)于SBE-β-CD，而α-環(huán)糊精、β-環(huán)糊精、γ-環(huán)糊精對API包合效果均較差。實施例7：口服片劑的制備和評價(一)凍干粉制備pH1.2鹽酸水溶液的配制：將0.9ml濃鹽酸置于100ml容量瓶中，用蒸餾水定容至100ml。30％HP-β-CD溶液及7mg/ml含藥溶液的配制(HP-β-CD:API摩爾比為13～17：1，HP-β-CD:KX2-361質(zhì)量比為100:1.68)：將70mlpH1.2的鹽酸水溶液加入250ml的燒杯中。稱量HP-β-CD30g，邊磁力攪拌邊將其加入該鹽酸水溶液中，直至全部溶解。稱量KX2-361·苯磺酸鹽700mg，邊磁力攪拌邊將API加入上述配制的HP-β-CD溶液中，超聲(超聲頻率59kHz)使藥物溶解完全。用5NNaOH水溶液和0.1NNaOH水溶液將含藥溶液的pH調(diào)節(jié)至約4.0，加適量蒸餾水定容至100ml，測得最終pH值為4.0?；蛘卟徽{(diào)pH直接定容(即，含藥溶液pH為1.2)。過濾：將上述含藥溶液用0.45μmPES濾膜過濾，濾液裝于不銹鋼托盤中，液面高度約為0.3cm。冷凍干燥：凍干曲線如表所示階段溫度(℃)真空控制(Pa)時間(分鐘)真空泵狀態(tài)冷凝器預凍1-40不開啟5關(guān)閉-402-40不開啟120關(guān)閉-3-4020±2360開啟-4-2020±2360開啟-5-2010±2360開啟-6010±2360開啟-7010±2360開啟-810不控制360開啟-910不控制60開啟-(二)處方工藝及壓片工藝分別將凍干粉(pH1.2)和凍干粉(pH4.0)過40目篩。根據(jù)處方設(shè)計的比例進行原輔料稱量，混勻。采用19×8異形沖，按每片含API14mg進行壓片。壓片過程中，根據(jù)硬度對片厚進行調(diào)節(jié)，控制硬度在50-100N。考察其硬度和片重均合格的片劑的溶出特性。表5處方設(shè)計(API含量14mg)(三)溶出度評價壓片規(guī)模增加后，含0.5％硬脂酸鎂的處方B1、B2在壓片過程中發(fā)生粘沖。溶出度試驗方法：溶出介質(zhì)(pH4.0，含1.0％SDS)的配制：將1.22g三水合乙酸鈉、10gSDS溶于950ml純水中，用乙酸調(diào)至pH4.0，定容至1L。試驗采用轉(zhuǎn)籃法(方法參照中國藥典2015版第四部0903溶出度與釋放度測定法第一法)，每片片劑采用溶出介質(zhì)900ml，轉(zhuǎn)速為50rpm，溫度37℃。取樣時間點分別為5、10、15、20、30、45、60和90分鐘。60分鐘后將轉(zhuǎn)速調(diào)至250rpm，90分鐘樣品作為每個片劑的終極溶出。溶出API的量采用HPLC檢測(方法參照試驗例2中所述的含量及有關(guān)物質(zhì)HPLC測定條件)，然后以外標法計算溶出度。按照上述方法，對處方B1、B3、B4進行溶出度測定并進行比較，如下表所示：表6溶出度結(jié)果對處方B3、B4進行比較可知，凍干前是否將含藥溶液的pH值由1.2調(diào)至4.0對溶出度結(jié)果幾乎沒有影響。對處方B1和處方B4進行比較可知，將處方中的硬脂酸鎂由0.5％(w/w)提高至1％(w/w)后，15分鐘內(nèi)API溶出速度略有減慢，但在15分鐘時均達到95％以上。對比例3：片劑的生物利用度對比試驗使犬口服實施例7中的處方B4片劑，并將靜脈給藥受試物按折合含KX2-361為0.5mg/kg的劑量靜脈注射給犬作為對比，計算口服片劑的絕對生物利用度。操作方法：1.口服給藥：取健康雄性比格犬3只(體重范圍為8-12kg，犬的編號分別為201M\201M\203M)，每只犬均單次口服給予5片。給藥前禁食過夜，給藥后4小時重新給食；給藥前1小時及給藥后1小時內(nèi)禁止飲水。2.靜脈注射：靜脈給藥用受試物的制備：精確稱取19.34mgKX2-361·苯磺酸鹽，置于玻璃瓶中，加入5.565mL的乙醇，渦旋后24℃超聲3分鐘，再加入33.393mL的PEG400，渦旋后24℃超聲4分鐘，再加入16.696mL生理鹽水，渦旋后24℃超聲4分鐘，得到理論濃度為0.25mg/mL的無色透明溶液。受試犬給藥前禁食過夜，給藥后四小時喂食。緩慢靜脈推注(約8分鐘)給予受試物，給藥前及給藥后1小時內(nèi)禁止飲水。3.生物利用度測定：對于口服給藥組和靜脈給藥組，于給藥結(jié)束后0.083(僅應(yīng)用于靜脈給藥組)、0.25、0.5、1、2、4、8和24小時分別經(jīng)前肢頭靜脈穿刺采血(約0.5mL)至含5uLEDTA-K2(20％)的抗凝管中。血液樣品1小時內(nèi)以8000rpm離心6分鐘(離心前置于濕冰上)，取上清液即血漿，于-20℃冰箱冷凍保存，以備用質(zhì)譜儀進行LC-MS/MS(以甲基磺丁脲為內(nèi)標，模式：APCI電離，MRM檢測)分析。藥代參數(shù)見下表，血藥濃度隨時間變化的曲線圖參見圖1。靜脈給藥組的曲線下面積(0-t)(AUC(0-t))為164.3。絕對生物利用度(F％)計算公式：F％＝(口服AUC(0-t)/口服劑量)÷(靜脈AUC(0-t)/靜脈劑量)×100％。表7可以看出，該片劑口服給予犬，獲得了較高的生物利用度(平均F％為75.7％)。采用其他制劑方案檢測動物體內(nèi)吸收情況，如制劑1、2(配方及工藝如下表)。對犬口服給藥，并進行藥效動力學研究(方法同上)，計算絕對生物利用度，結(jié)果如下：可見，與其他兩種制劑方案相比，將KX2-361·苯磺酸鹽與羥丙基-β-環(huán)糊精制成包合物，然后制成片劑，實現(xiàn)了較高的吸收(約20倍)，體現(xiàn)了在本發(fā)明的制劑中，輔料羥丙基-β-環(huán)糊精在提高藥物的體內(nèi)生物利用度方面的顯著效果。試驗例6：穩(wěn)定性考察將處方B3(含pH1.2凍干粉)和處方B4(含pH4.0凍干粉)的片劑裝入帶干燥劑(變色硅膠)的高密度聚乙烯(HDPE)瓶中，放置在40℃/75％RH條件的穩(wěn)定性箱中進行高溫加速試驗，分別在1個月末、2個月末、3個月末取樣，測定有關(guān)物質(zhì)(方法參照試驗例2中所述的含量及有關(guān)物質(zhì)HPLC測定條件)。表8處方B3、B4的片穩(wěn)定性考察結(jié)果編號樣品總雜(％)1處方B3-0天0.36(n＝2)2處方B3-1月2.283處方B3-2月3.884處方B3-3月9.045處方B4-0天0.30(n＝2)6處方B4-1月0.397處方B4-2月0.268處方B4-3月0.65注：n＝2代表取樣2份，分別測定，結(jié)果為兩份樣品的平均值。加速1月-3月考察過程中，處方B3雜質(zhì)有所增加，可能與其強酸性環(huán)境有關(guān)；處方B4雜質(zhì)雖略有增長，但變化不明顯。由此可知，制備口服片劑優(yōu)選采用包合后再回調(diào)pH的工藝。實施例8：片劑的制備和評價(一)凍干工藝pH1.2鹽酸水溶液的配制：將9ml濃鹽酸置于1000ml容量瓶中，用蒸餾水定容。30％HP-β-CD溶液的配制方法：將700mlpH1.2鹽酸水溶液加入1000ml燒杯中。稱量HP-β-CD300g，邊磁力攪拌邊將其加入該pH1.2鹽酸水溶液中，直至全部溶解，加蒸餾水至1000ml。配制一定量以備用。(1)約7mg/ml含藥制劑的配制(HP-β-CD:API摩爾比為13～17：1，HP-β-CD:KX2-361質(zhì)量比為100:1.68)：稱量KX2-361·苯磺酸鹽1750mg，攪拌下加入到250ml上述HP-β-CD溶液中，超聲(超聲頻率59kHz)使其溶解完全，用5NNaOH水溶液和0.1NNaOH水溶液調(diào)節(jié)pH4.0。然后用0.45μmPES濾膜過濾，濾液裝于不銹鋼托盤中，液面高度約為0.5cm。凍干后命名為凍干粉I(凍干方法同實施例7，下同)。(2)約14mg/ml含藥制劑的配制(HP-β-CD:API摩爾比為7～8：1，HP-β-CD:KX2-361質(zhì)量比為100:3.36)；稱量KX2-361·苯磺酸鹽4200mg，攪拌下加入到300ml上述HP-β-CD溶液中，超聲(超聲頻率59kHz)使其溶解完全。用0.45μmPES濾膜過濾，濾液裝于不銹鋼托盤中，液面高度約為0.5cm。凍干后命名為凍干粉II。(3)21mg/ml含藥制劑的配制(HP-β-CD:API摩爾比為4～6：1，HP-β-CD:KX2-361質(zhì)量比為100:5.03)：稱量KX2-361·苯磺酸鹽6300mg，攪拌下加入到300ml上述HP-β-CD溶液中，超聲(超聲頻率59kHz)30分鐘，API未完全溶解，仍可見一定量的不溶顆粒。用0.45μmPES濾膜過濾，濾液裝于不銹鋼托盤中，液面高度約為0.5cm。該21mg/ml的含藥制劑過濾后以HPLC標定濃度，為20.66mg/ml。凍干后命名為凍干粉III。(二)處方組成及壓片工藝分別將制備得到的凍干粉過40目篩。根據(jù)以下處方設(shè)計的比例進行原輔料稱量。采用19×8異形沖，按每片含HP-β-CD600mg進行壓片。壓片過程中，根據(jù)硬度對片厚進行調(diào)節(jié)，控制硬度在50-100N。按照實施例7中所述的方法，考察其硬度和片重均合格的片劑的溶出特性，見表9。表9溶出度考察結(jié)果(n＝3)注：n＝3代表取樣3份，分別測定，結(jié)果為3份樣品的平均值。溶出度測定結(jié)果如下：各處方在20分鐘內(nèi)均可溶出95％以上。API含量增加后，溶出速度有所降低，處方B5與處方B6差異較小，但均慢于處方B4。試驗例7：含不同濃度SDS的溶出介質(zhì)對高劑量片劑的溶出效果研究為使溶出介質(zhì)更能顯示其對處方的區(qū)分能力，因此，對以下幾個處方在不同濃度SDS中的溶出行為進行考察?？疾鞂嵤├?的處方B3、實施例8的處方B5和B6在含0.5％SDS，0.2％SDS以及無SDS的溶出介質(zhì)中的溶出度。數(shù)據(jù)見表10-12。溶出度試驗方法：轉(zhuǎn)籃法，溶出介質(zhì)900ml，轉(zhuǎn)速為50rpm，溫度37℃。取樣時間點分別為5、10、15、20、30、45、60分鐘。pH4.0溶出介質(zhì)的配制方法同實施例7中所述。不同之處在于，含0.5％SDS、0.2％SDS以及無SDS的1L溶出介質(zhì)分別采用含5g、2g、0gSDS的pH4.0緩沖鹽溶液。表10三種處方在無SDS的pH4.0溶出介質(zhì)中的溶出度表11三種處方在含0.5％SDS的pH4.0溶出介質(zhì)中的溶出度表12三種處方在含0.2％SDS的pH4.0溶出介質(zhì)中的溶出度觀察到的現(xiàn)象為：當溶出介質(zhì)中無SDS時，處方B5的溶出杯內(nèi)有少量絮狀物，處方B6的溶出杯內(nèi)有大量絮狀物。當溶出介質(zhì)中含0.2％SDS或者0.5％SDS時，處方B6的溶出杯內(nèi)有絮狀物，30分中后絮狀物減少。結(jié)論：無SDS時，樣品溶出受到較大影響，三個處方的溶出情況均較差。與含0.5％SDS的溶出介質(zhì)相比，含0.2％SDS時，處方B3的溶出速度與其在含0.5％SDS的溶出介質(zhì)中類似，但處方B5和B6的溶出速度有所減慢且終極溶出減小，這說明0.2％SDS不適用于這兩種處方的溶出。當溶出介質(zhì)含0.5％SDS時，三種處方溶出良好，且與含1％SDS時的情況十分接近，處方B5和B6的溶出特性無明顯差別。實施例9：片劑的制備和評價制備處方B16的片劑：以40％HP-β-CD包合14mg/ml藥物，凍干粉的制備工藝同實施例7(回調(diào)pH至4.0)。將凍干粉過40目篩，稱量凍干粉以及硬脂酸鎂(硬脂酸鎂是凍干粉的1.0％(w/w))，混勻；采用19×8異形沖壓片，片重約600mg，硬度50-100N。其崩解時限為8分鐘。溶出結(jié)果如下：表15處方B16與處方B3的溶出結(jié)果對比結(jié)論：處方B16溶出比處方B3略慢，但在15分鐘時溶出了85％以上。處方B16每片載藥量(每片API含量)約為20.29mg，與處方B3相比提高了約45％，達到了提高載藥量的目的。實施例10：片劑的制備和評價由試驗例6可知，含pH1.2凍干粉的片劑的穩(wěn)定性較差，含pH4.0凍干粉片劑的穩(wěn)定性明顯改善。因此，嘗試將pH調(diào)至6.0以確保其穩(wěn)定性。(一)凍干工藝1、pH1.2鹽酸水溶液的配制：將0.9ml濃鹽酸置于100ml容量瓶中，用蒸餾水定容至100ml。2、40％HP-β-CD溶液的配制：稱取HP-β-CD10g，以適量pH1.2鹽酸水溶液溶解后轉(zhuǎn)移至25ml容量瓶并用上述鹽酸水溶液定容。3、約14mg/ml含藥制劑的配制：稱量KX2-361·苯磺酸鹽56mg，加入到4ml上述HP-β-CD溶液中。超聲(超聲頻率59kHz)使藥物溶解完全。4、pH的調(diào)節(jié)：用5NNaOH水溶液和0.1NNaOH水溶液將含藥溶液的pH調(diào)節(jié)至約6.0。此時，溶液近乎無色。靜置30分鐘未見明顯渾濁和析出。放置過夜析出少量沉淀，液體部分為溶液。5、凍干粉制備：在調(diào)節(jié)pH至約6.0后，以0.22μmPES濾膜過濾，凍干。得白色凍干粉。凍干工藝同實施例7。復溶考察：用水復溶凍干粉，在輕微振搖下約10分鐘完成，無明顯異常。(二)處方組成及壓片工藝1、將凍干粉和各填充劑分別過40目篩。2、按處方設(shè)計量(見表16和表17)稱量API及各填充劑，混合后再與潤滑劑硬脂酸鎂等量遞加混合。過40目篩三次混合。3、采用Φ8mm沖模，按片重約200mg(含API約2mg)進行壓片。壓片過程中，根據(jù)硬度對片厚進行調(diào)節(jié)，控制硬度在50-100N。實驗結(jié)果：成功壓制得各處方片。表16處方設(shè)計1表17處方設(shè)計2處方處方B11處方B12處方B13處方B14處方B15凍干粉(mg)6060606060噴霧干燥乳糖(mg)128128134128甘露醇SD200(mg)134PVPPXL(mg)10CC-Na(mg)106硬脂酸鎂(mg)2(1％)2(1％)6(3％)6(3％)6(3％)利用崩解時限測定儀檢測上述各處方片劑的崩解時限(方法為參照中國藥典2015版第四部附錄0921崩解時限檢查法)和溶出度，結(jié)果見表18和表19。表18各處方片劑的崩解時限結(jié)果處方B7B8B9B10B11B12B13B14B15崩解時間(分鐘)～0.5～1～11～6～4～4～14～6～8由結(jié)果可知，處方B9與處方B13的片劑崩解時間超過10分鐘，而其他處方崩解時間則更短，更有利于藥物的快速溶出。表19各處方片劑的溶出度考察結(jié)果由溶出度數(shù)據(jù)可知，處方B9、B10、B13、B14、B15溶出均較慢。其他處方在15分鐘的溶出量均大于90％，顯示了藥物從速釋片劑中的快速溶出能力。將各片劑處方分別放置于高溫(60℃)、高濕(92.5％RH)、-20℃等條件下，在特定時間點取樣檢測(方法參照試驗例2中所述的含量及有關(guān)物質(zhì)HPLC測定條件)，并與API的雜質(zhì)增長情況進行對比。結(jié)果見表20。表20各處方片劑穩(wěn)定性考察結(jié)果由上表可知，處方B11穩(wěn)定性不如其它處方，處方B7、B8亦欠佳。其余處方片在各條件下放置20d(天)均未見異常。綜合溶出度數(shù)據(jù)，處方B12為較優(yōu)處方。當前第1頁1 2 3