本發(fā)明屬于植物活性成分提取技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種芒果葉多酚的提取方法。
背景技術(shù)：
植物多酚是目前功能食品與天然產(chǎn)物研究開發(fā)等領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)，國內(nèi)外不斷有發(fā)現(xiàn)植物多酚新功能及從新植物資源中開發(fā)利用植物多酚的報(bào)道。按照自由基能力，目前所報(bào)道的植物多酚眾多的功能，如預(yù)防心腦血管疾病、調(diào)節(jié)免疫能力、抗腫瘤等， 都與植物多酚清除自由基的能力有關(guān)。在體內(nèi)危害人體健康的主要自由基是超氧陰離子自由基與羥基自由基。
植物多酚是廣泛存在于植物體內(nèi)的重要次生代謝產(chǎn)物，廣泛分布于植物體的根、葉、皮、果肉和殼中，具有抗氧化、抗腫瘤、保護(hù)肝臟等多種生理功能，是人體每天必須從食物中攝取的抗氧化物質(zhì)，被稱為繼膳食纖維之后的第七營養(yǎng)素。
芒果，為常綠喬木，原產(chǎn)印度，現(xiàn)熱帶各地均栽種，栽培于華南地區(qū)，廣西、廣東、海南各地村莊或屋宅旁，稍微潤濕土壤可見星散植株。芒果的果實(shí)、樹葉和樹皮均可入藥，具有較高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。芒果葉是漆樹科芒果屬熱帶常綠大喬木芒果( Mangiferaindica Linn) 的葉。芒果葉富含芒果苷、槲皮素、金絲桃苷、原兒茶酸、沒食子酸等多酚類物質(zhì)，這些多酚類化合物具有平喘止咳、鎮(zhèn)痛、抗氧化、抗菌、抗腫瘤、治療心腦血管疾病等廣泛的生理活性。芒果盛產(chǎn)于我國南方各省和自治區(qū)，副產(chǎn)品芒果葉資源相當(dāng)豐富，我國目前對芒果葉的開發(fā)利用多局限于為數(shù)甚少的幾種平喘止咳的制劑。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明提供一種芒果葉多酚的提取方法，該方法制得的芒果葉多酚純度高，收率高。
技術(shù)方案：一種芒果葉多酚的提取方法，包括以下步驟：
1)打漿、酶解：采用料液比1: 3-5，用打漿機(jī)將洗凈瀝干的芒果葉打漿3-5min，然后加入蛋白酶充分?jǐn)嚢韬箪o置1-2 h 進(jìn)行酶解后，用 800-1000 目濾網(wǎng)過濾取上清酶解液備用；
2) 粗提：用乙醇對芒果葉酶解液進(jìn)行超聲浸提，離心，收集上清液，減壓回收乙醇，得到芒果葉粗提液；
3)過膜：將上清液過膜過濾裝置進(jìn)行過濾，得到澄清液；
4)純化：將澄清液上大孔樹脂柱，上樣流速為0.4～0.6BV/h，上大孔樹脂柱，水洗柱，然后用乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓濃縮，干燥，即得芒果葉多酚。
上述步驟1) 中，所述的酶解是每100克芒果葉加入0.2-0.4g 蛋白酶，45-55℃酶解1-2h。
步驟2) 中，芒果葉中含有蛋白質(zhì)和碳水化合物，采用乙醇為溶媒，不利于蛋白質(zhì)和碳水化合物的溶解，可減少雜質(zhì)成分的溶出，對后續(xù)純化有益。乙醇體積濃度為40～50％及酶解液與乙醇的料液比為1ml：2～4ml為佳，乙醇濃度過高會對蛋白質(zhì)產(chǎn)生凝聚作用，使得蛋白質(zhì)滯留在顆粒的內(nèi)部孔道中，反而增加芒果葉多酚的擴(kuò)散阻力，降低終產(chǎn)品的收率。乙醇濃度過低則雜質(zhì)含量較大，影響終產(chǎn)品的純度。
步驟3) 中，所述膜過濾裝置為50000 道爾頓微濾膜。
步驟4) 中, 水洗流速為2.5～3BV/h，水的洗脫量為5～6BV ；乙醇的洗脫流速為2～2.5BV/h，乙醇的洗脫量為4～5BV；乙醇的體積濃度為65～85％。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有提取溫度低、適用性廣、提取率高、操作簡便等優(yōu)點(diǎn)；制得的芒果葉多酚純度在95％以上，提取率為6.5%以上，比傳統(tǒng)加熱浸提法提取率高1.5%以上。
具體實(shí)施方式
以下具體實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步闡述，但不作為對本發(fā)明的限定。
實(shí)施例1
1) 打漿、酶解：取洗凈瀝干芒果葉1000g,采用料液比1:3加入純凈水，用打漿機(jī)將洗凈瀝干的芒果葉打漿3min，然后加入2g蛋白酶充分?jǐn)嚢韬笤?5℃酶解1h，然后用 800目濾網(wǎng)過濾取上清酶解液備用；
2) 粗提：按酶解液與乙醇的料液比為1ml：2ml加入40％乙醇對芒果葉酶解液進(jìn)行超聲浸提，離心，收集上清液，減壓回收乙醇，得到芒果葉粗提液；
3) 過膜：將上清液50000 道爾頓微濾膜裝置進(jìn)行過濾，得到澄清液；
4)純化：將澄清液上DA201大孔樹脂柱，上樣流速為0.4BV/h，先水洗柱，水洗流速為2.5 BV/h，水的洗脫量為5BV；然后用65％乙醇洗脫，乙醇的洗脫流速為2BV/h，乙醇的洗脫量為4BV，收集乙醇洗脫液，減壓濃縮，干燥，即得13.78g芒果葉多酚。經(jīng)HPLC 檢測，成品中芒果葉多酚的純度為95.2％，芒果葉多酚提取率（相對于干料）為6.5%以上。
實(shí)施例2
1) 打漿、酶解：取洗凈瀝干芒果葉1000g,采用料液比1:5加入純凈水，用打漿機(jī)將洗凈瀝干的芒果葉打漿5min，然后加入4g蛋白酶充分?jǐn)嚢韬笤?5℃酶解2h，然后用1000目濾網(wǎng)過濾取上清酶解液備用；
2) 粗提：按酶解液與乙醇的料液比為1ml：4ml加入50％乙醇對芒果葉酶解液進(jìn)行超聲浸提，離心，收集上清液，減壓回收乙醇，得到芒果葉粗提液；
3) 過膜：將上清液50000 道爾頓微濾膜裝置進(jìn)行過濾，得到澄清液；
4)純化：將澄清液上DA201大孔樹脂柱，上樣流速為0.6BV/h，先水洗柱，水洗流速為3BV/h，水的洗脫量為6BV；然后用85％乙醇洗脫，乙醇的洗脫流速為2.5BV/h，乙醇的洗脫量為5BV，收集乙醇洗脫液，減壓濃縮，干燥，即得13.88g芒果葉多酚。經(jīng)HPLC 檢測，成品中芒果葉多酚的純度為95.1％，芒果葉多酚提取率（相對于干料）為6.5%以上。
實(shí)施例3
1) 打漿、酶解：取洗凈瀝干芒果葉1000g,采用料液比1:4加入純凈水，用打漿機(jī)將洗凈瀝干的芒果葉打漿4min，然后加入3g蛋白酶充分?jǐn)嚢韬笤?0℃靜置酶解1.5h，然后用900目濾網(wǎng)過濾取上清酶解液備用；
2) 粗提：按酶解液與乙醇的料液比為1ml：3ml加入45％乙醇對芒果葉酶解液進(jìn)行超聲浸提，離心，收集上清液，減壓回收乙醇，得到芒果葉粗提液；
3) 過膜：將上清液50000 道爾頓微濾膜裝置進(jìn)行過濾，得到澄清液；
4)純化：將澄清液上DA201大孔樹脂柱，上樣流速為0.5BV/h，先水洗柱，水洗流速為2.8BV/h，水的洗脫量為5.5BV；然后用75％乙醇洗脫，乙醇的洗脫流速為2.3BV/h，乙醇的洗脫量為4.5BV，收集乙醇洗脫液，減壓濃縮，干燥，即得14.26g芒果葉多酚。經(jīng)HPLC 檢測，成品中芒果葉多酚的純度為95.8％，芒果葉多酚提取率（相對于干料）為6.5%以上。
實(shí)施例4
將上述實(shí)施例1-3得到的芒果葉多酚對超氧陰離子O2-·清除效果的測定：
在試驗(yàn)濃度范圍內(nèi), 芒果葉多酚對O2-·的清除能力較強(qiáng),0.5mg/mL～2.5mg/mL 濃度范圍內(nèi)清除率隨濃度上升而提高的趨勢明顯。當(dāng)芒果葉多酚濃度達(dá)到 2.5mg/mL 時, 對O2-·的清除率已超過90%。
實(shí)施例5
將上述實(shí)施例1-3得到的芒果葉多酚對羥基自由基·OH 清除效果的測定：
芒果葉多酚濃度在0.5mg/mL～2.0mg/mL 范圍內(nèi)對·OH 清除率隨濃度上升而顯著提高。當(dāng)芒果葉多酚濃度達(dá)到 2.0mg/mL 時, 清除率已超過90%。