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一種禽流感滅活疫苗制備方法與流程

文檔序號(hào):12343410閱讀:來(lái)源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.一種禽流感滅活疫苗制備方法,其特征在于包括以下步驟:

1)病毒的接種,將禽流感La Sota種毒用滅菌生理鹽水作5000倍稀釋,尿囊腔內(nèi)接種10日齡SPF雞胚,每胚0.1ml,37℃孵育;

2)病毒的收獲,選取接種后48~120小時(shí)之間死亡且病痕明顯的雞胚,收獲尿囊腔液,保存于-20℃;按照《中華人民共和國(guó)獸藥典》規(guī)定的半數(shù)感染量測(cè)定方法,進(jìn)行病毒含量測(cè)定,病毒效價(jià)應(yīng)≥108.5EID50/0.1ml;

3)病毒的滅活,向病毒液中加入質(zhì)量濃度為37%,終濃度為0.07%~0.15%的福爾馬林溶液,混勻,37℃搖床中180~200rpm/min滅活16~24小時(shí);

4)乳化即得到禽流感滅活疫苗。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法,其特征在于步驟4)所述的乳化包括以下操作:

水相制備:將滅活后的禽流感病毒液通過(guò)GQ管式離心機(jī)離心,棄去沉淀,將濾過(guò)液用截留分子量為300KD的Millipore膜包進(jìn)行2~3倍濃縮,濃縮后的病毒液即為水相,使用前置于30~32℃水浴鍋中進(jìn)行預(yù)熱。

油相制備:取進(jìn)口MONTANIDETMISA 206VG佐劑,使用前進(jìn)行充分混勻,并置于30~32℃水浴中進(jìn)行預(yù)熱,即為油相。

將水相和油相按質(zhì)量比為1:1的比例混合,磁力攪拌裝置進(jìn)行預(yù)混合,然后采用ATS Engineering Inc公司AH100D型均質(zhì)機(jī)進(jìn)行水包油包水型疫苗的乳化,二級(jí)閥壓力20~30bar,一級(jí)閥壓力調(diào)節(jié)至400~500bar,共乳化1~2遍,制備成水包油包水型禽流感滅活疫苗,病毒含量≥108.5EID50/0.1ml。

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