本發(fā)明涉及疫苗制備技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種豬藍(lán)耳病滅活疫苗制備方法。

背景技術(shù)：

豬藍(lán)耳病是一種高度接觸性傳染病，呈地方流行性。PRRSV只感染豬，各種品種、不同年齡和用途的豬均可感染，但以妊娠母豬和1月齡以內(nèi)的仔豬最易感?；疾∝i和帶毒豬是本病的重要傳染源。主要傳播途徑是接觸感染、空氣傳播和精液傳播，也可通過胎盤垂直傳播。易感豬可經(jīng)口、鼻腔、肌肉、腹腔、靜脈及子宮內(nèi)接種等多種途徑而感染病毒，豬感染病毒后2～14周均可通過接觸將病毒傳播給其他易感豬。從病豬的鼻腔、糞便及尿中均可檢測(cè)到病毒。易感豬與帶毒豬直接接觸或與污染有PRRSV的運(yùn)輸工具、器械接觸均可受到感染。感染豬的流動(dòng)也是本病的重要傳播方式。

疫苗是預(yù)防該病的主要方法之一。目前，我國商品化的萊利斯塔病毒疫苗生產(chǎn)工藝普遍是將收獲的病毒液直接滅活，而后加入礦物油佐劑乳化而制成。這種方法由于直接以細(xì)胞繁殖的病毒液進(jìn)行成品苗的生產(chǎn)，因此會(huì)受到細(xì)胞破碎產(chǎn)物、培養(yǎng)基成分、血清蛋白、細(xì)胞代謝產(chǎn)物等雜質(zhì)的影響，致使疫苗免疫動(dòng)物后易發(fā)生過敏反應(yīng)，發(fā)熱反應(yīng)等副作用，同時(shí)還會(huì)影響免疫效果，而且礦物油佐劑疫苗普遍存在注射困難，注射部位易產(chǎn)生腫塊。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明旨在針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的技術(shù)缺陷，提供一種豬藍(lán)耳病滅活疫苗制備方法，以解決其副反應(yīng)率高、免疫效果差、注射困難以及不易吸收的技術(shù)問題。

為實(shí)現(xiàn)以上技術(shù)目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

一種豬藍(lán)耳病滅活疫苗制備方法，包括病毒澄清、濃縮、分子篩層析、滅活、凍干并包括以下步驟：

1)對(duì)萊利斯塔病毒細(xì)胞培養(yǎng)液進(jìn)行澄清；

2)通過橫向切留超濾濃縮方式對(duì)初濾的萊利斯塔病毒液進(jìn)行濃縮；

3)使用分子篩層析柱對(duì)萊利斯塔病毒液進(jìn)行純化；

4)使用β-丙內(nèi)酯對(duì)萊利斯塔病毒液進(jìn)行滅活；

5)將滅活的病毒液加入適宜的凍干保護(hù)劑進(jìn)行凍干；

作為優(yōu)選，步驟1)采用8層紗布過濾后，再采用0.5-2μm的雙層濾膜進(jìn)行過濾。

作為優(yōu)選，步驟2)的濃縮倍數(shù)為20～50倍。

作為優(yōu)選，步驟2)的橫向切留超濾濃縮膜孔徑為30K～50K。

作為優(yōu)選，所述步驟3)所述分子篩層析柱選自下述的層析樹脂：Sepharose 4Fast Flow(4FF)、Sepharose 6Fast Flow(6FF)、Sepharose CL-2B或Sepharose CL-4B。

利用本發(fā)明制備的PRRSV滅活凍干疫苗抗原含量高，免疫原性高；抗原純度高，安全性好，副反應(yīng)低；無佐劑，快速產(chǎn)生抗體保護(hù)；易注射，易吸收。

具體實(shí)施方式

以下將對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施方式進(jìn)行詳細(xì)描述。為了避免過多不必要的細(xì)節(jié)，在以下實(shí)施例中對(duì)屬于公知的結(jié)構(gòu)或功能將不進(jìn)行詳細(xì)描述。

除有定義外，以下實(shí)施例中所用的技術(shù)和科學(xué)術(shù)語具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域技術(shù)人員普遍理解的相同含義。

實(shí)施例1

一種豬藍(lán)耳病滅活疫苗制備方法，包括病毒澄清、濃縮、分子篩層析、滅活、凍干并包括以下步驟：

1)對(duì)萊利斯塔病毒細(xì)胞培養(yǎng)液進(jìn)行澄清；

2)通過橫向切留超濾濃縮方式對(duì)初濾的萊利斯塔病毒液進(jìn)行濃縮；

3)使用分子篩層析柱對(duì)萊利斯塔病毒液進(jìn)行純化；

4)使用β-丙內(nèi)酯對(duì)萊利斯塔病毒液進(jìn)行滅活；

5)將滅活的病毒液加入適宜的凍干保護(hù)劑進(jìn)行凍干；

在以上技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，滿足以下條件：

步驟1)采用8層紗布過濾后，再采用0.5μm的雙層濾膜進(jìn)行過濾。

步驟2)的濃縮倍數(shù)為20倍。

步驟2)的橫向切留超濾濃縮膜孔徑為30K。

步驟3)所述分子篩層析柱選自下述的層析樹脂：Sepharose 4Fast Flow(4FF)、Sepharose 6Fast Flow(6FF)、Sepharose CL-2B或Sepharose CL-4B。

實(shí)施例2

一種豬藍(lán)耳病滅活疫苗制備方法，包括病毒澄清、濃縮、分子篩層析、滅活、凍干并包括以下步驟：

1)對(duì)萊利斯塔病毒細(xì)胞培養(yǎng)液進(jìn)行澄清；

2)通過橫向切留超濾濃縮方式對(duì)初濾的萊利斯塔病毒液進(jìn)行濃縮；

3)使用分子篩層析柱對(duì)萊利斯塔病毒液進(jìn)行純化；

4)使用β-丙內(nèi)酯對(duì)萊利斯塔病毒液進(jìn)行滅活；

5)將滅活的病毒液加入適宜的凍干保護(hù)劑進(jìn)行凍干；

在以上技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，滿足以下條件：

步驟1)采用8層紗布過濾后，再采用2μm的雙層濾膜進(jìn)行過濾。

步驟2)的濃縮倍數(shù)為50倍。

步驟2)的橫向切留超濾濃縮膜孔徑為50K。

步驟3)所述分子篩層析柱選自下述的層析樹脂：Sepharose 4Fast Flow(4FF)、Sepharose 6Fast Flow(6FF)、Sepharose CL-2B或Sepharose CL-4B。

實(shí)施例3

一種豬藍(lán)耳病滅活疫苗制備方法，包括病毒澄清、濃縮、分子篩層析、滅活、凍干并包括以下步驟：

1)對(duì)萊利斯塔病毒細(xì)胞培養(yǎng)液進(jìn)行澄清；

2)通過橫向切留超濾濃縮方式對(duì)初濾的萊利斯塔病毒液進(jìn)行濃縮；

3)使用分子篩層析柱對(duì)萊利斯塔病毒液進(jìn)行純化；

4)使用β-丙內(nèi)酯對(duì)萊利斯塔病毒液進(jìn)行滅活；

5)將滅活的病毒液加入適宜的凍干保護(hù)劑進(jìn)行凍干；

以上對(duì)本發(fā)明實(shí)施例進(jìn)行了詳細(xì)說明，但所述內(nèi)容僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例，并不用以限制本發(fā)明。凡在本發(fā)明的申請(qǐng)范圍內(nèi)所做的任何修改、等同替換和改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。