本發(fā)明屬于中藥領(lǐng)域，尤其涉及一種沙苑子乙醇提取物及其制備方法和應(yīng)用

背景技術(shù)：

目前心血管疾病成為世界各地的主要殺手之一。世界衛(wèi)生組織估計，到2020年世界各地將有近2500萬的人因心血管病死亡。大量研究表明，心腦血管疾病的主要病理基礎(chǔ)是動脈粥樣硬化，而高膽固醇血癥是常見而多發(fā)的代謝與內(nèi)分泌疾病之一，是導(dǎo)致動脈粥樣硬化及心腦血管疾病的重要危險因素之一，如發(fā)生在冠狀動脈和腦動脈就會引起心臟和大腦供血、供氧不足，引發(fā)心絞痛、心肌梗死或腦中風(fēng)。而且與糖尿病、脂肪肝和腎病等關(guān)系十分密切，嚴重威脅人們的健康和生命。臨床和實驗研究已證明高膽固醇飲食消費是導(dǎo)致由動脈粥樣硬化、高脂血癥，以及脂質(zhì)代謝紊亂的發(fā)展形成的心血管疾病的主要因素之一。

近年來，對于高膽固醇血癥的治療及預(yù)防愈來愈受到人們的重視，目前的治療以藥物治療為主。臨床上可供選用以降低血漿膽固醇為主的調(diào)脂藥物有：膽汁酸鰲合劑，煙酸及其衍生物、HMG-CoA還原酶抑制劑(他汀類)等。但是這些西藥長期服用可出現(xiàn)停藥反跳、消化道癥狀、肝腎功能損害、橫紋肌溶解癥等不良反應(yīng)。而中藥具有調(diào)脂作用溫和、療效較持久、不良反應(yīng)較少和藥物食品化等一系列優(yōu)點，而日益受到廣泛關(guān)注。

沙苑子為補益肝腎的傳統(tǒng)中藥，主要含有黃酮類、三萜苷類、有機酸、氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)、鞣質(zhì)、甾醇等成分，具有抗肝損傷、調(diào)節(jié)血脂、降低血壓、抑制血小板聚集、改善血液流變學(xué)指標、增強免疫功能、抗腫瘤、抗炎及 鎮(zhèn)痛等作用。目前，對于沙苑子相關(guān)的研究主要集中在將沙苑子黃酮類部位或者和其它中藥組成的復(fù)方制劑方面，并沒有針對單味沙苑子乙醇提取物作為研究對象。

此外，中藥作為傳統(tǒng)藥物，其質(zhì)量控制一直成為制約其推廣應(yīng)用的瓶頸。有效的獲得質(zhì)量可控的沙苑子乙醇提取物，對中藥的推進更是具有深入的意義。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種沙苑子乙醇提取物，旨在提供一種能夠用于預(yù)防或治療高血脂和脂肪肝的沙苑子乙醇提取物。

本發(fā)明的另一目的在于提供一種沙苑子乙醇提取物的制備方法。

本發(fā)明的另一目的在于提供沙苑子乙醇提取物的應(yīng)用。

本發(fā)明是這樣實現(xiàn)的，一種沙苑子乙醇提取物，所述沙苑子乙醇提取物為沙苑子在體積百分濃度為65-75％的乙醇中的提取物。

以及，一種沙苑子乙醇提取物的制備方法，包括以下步驟：

采集沙苑子，依次進行除雜處理、粉碎處理后得到粉碎物料；

使用體積百分濃度為65-75％的乙醇對所述粉碎物料進行加熱回流提取，獲得乙醇提取液；

將所述乙醇提取液進行濃縮除去溶劑。

以及，沙苑子乙醇提取物在制備防治或治療高血脂疾病藥物中的應(yīng)用。

沙苑子乙醇提取物在制備防治或治療脂肪肝疾病藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明提供的沙苑子乙醇提取物為沙苑子在體積百分濃度為65-75％的乙醇中的提取物，具有降低高膽固醇水平、舒張血管、減少脂肪肝脂質(zhì)含量、減少脂肪肝脂滴的作用。

本發(fā)明提供的沙苑子乙醇提取物的制備方法，工藝簡單可控，提取效率高，且條件溫和、活性成分不易被破壞，易于實現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化。

本發(fā)明提供的苑子乙醇提取物在制備防治或治療高血脂以及脂肪肝疾病藥 物中的應(yīng)用，為高血脂以及脂肪肝疾病的預(yù)防治療指明了新的方向。

附圖說明

圖1是本發(fā)明實施例提供的沙苑子乙醇提取物對DPPH自由基清除百分率(SR％)；

圖2是本發(fā)明實施例提供的沙苑子乙醇提取物各化學(xué)成分的超高效液相色譜-四極桿飛行時間質(zhì)譜圖；

圖3是本發(fā)明實施例4提供的沙苑子乙醇提取物對高脂血癥大鼠的肝組織抗氧化酶活性和MDA的作用圖；

圖4是本發(fā)明實施例5提供的沙苑子乙醇提取物對高脂血癥大鼠的大鼠肝臟外觀及其病理切片染色后的顯微圖片；

圖5是本發(fā)明實施例5提供的沙苑子乙醇提取物對高脂血癥大鼠肝臟的PEPCK、LDLR、PPAR-α蛋白水平變化的作用圖；

圖6是本發(fā)明實施例6提供的沙苑子乙醇提取物對高脂血癥大鼠的血管舒張作用圖。

具體實施方式

為了使本發(fā)明要解決的技術(shù)問題、技術(shù)方案及有益效果更加清楚明白，以下結(jié)合附圖及實施例，對本發(fā)明進行進一步詳細說明。應(yīng)當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。

一種沙苑子乙醇提取物，所述沙苑子乙醇提取物為沙苑子在體積百分濃度為65-75％的乙醇中的提取物。

本發(fā)明實施例中，為了獲得活性成分更集中、防治或治療高血脂以及脂肪肝活性更好的沙苑子乙醇提取物，作為優(yōu)選實施例，所述沙苑子乙醇提取物為沙苑子在體積百分濃度為70％的乙醇中的提取物。

具體的，本發(fā)明實施例所述沙苑子乙醇提取物中，包括酚類化合物和沙苑 子苷。本發(fā)明實施例沙苑子乙醇提取物作為唯一活性成分，具有降低高膽固醇水平、舒張血管、減少脂肪肝脂質(zhì)含量、減少脂肪肝脂滴的作用。

為了有效保證所述沙苑子乙醇提取物在防治或治療高血脂以及脂肪肝疾病中的應(yīng)用，作為一個優(yōu)選實施例，以所述沙苑子乙醇提取物的重量百分含量為100％計，所述酚類化合物的重量百分含量≥30％。作為另一個優(yōu)選實施例，以所述沙苑子乙醇提取物的重量百分含量為100％計，所述沙苑子苷的重量百分含量為≥1.5％。

作為優(yōu)選實施例，所述沙苑子乙醇提取物中總多酚含量為33.909±0.693mg GAE/g。所述總多酚的含量可通過Folin-Ciocalteu比色法測得，其結(jié)果如附圖1所示。

作為具體實施例，所述沙苑子乙醇提取物中，含有如下化學(xué)組分，精氨酸(L-arginine)、谷氨酸(L-glutamic acid)、天門冬氨酸(L-aspartic acid)；苑子苷(rhamnocitrin-3,4'-O-diglucoside)、沙苑子苷A(myricetin 3,4'-diglucoside)、毛蕊異黃酮-7-O-葡萄糖苷(calycosin-7-O-glucopyranoside)、異槲皮苷(quercetin 3-O-glucopyranoside)、山柰酚-3-O-蕓香糖苷(kaempferol-3-O-rutinoside)、楊梅素-3/3'-O-葡萄糖苷(myricetin-3/3’-O-glucopyranoside)、鼠李檸檬素-3-O-葡萄糖苷(rhamnocitrin-3-O-glucopyranoside)、沙苑子新苷(neocomplanoside)、槲皮素(quercetin)、山奈酚(kaempferol)、芒柄花素(formononetin)等。對所述沙苑子乙醇提取物進行化學(xué)成分鑒定可采用超高效液相色譜-四極桿飛行時間質(zhì)譜聯(lián)用儀(UPLC-QTOF/MS)實現(xiàn)，所述各化學(xué)成分的保留時間、質(zhì)譜數(shù)據(jù)如表1所示，其中“*”標示的樣品采用標準品鑒定。所述各化學(xué)成分的超高效液相色譜-四極桿飛行時間質(zhì)譜圖如附圖2所示。

表1

*經(jīng)標準品核對

本發(fā)明實施例提供的沙苑子乙醇提取物，為沙苑子在體積百分濃度為65-75％、特別優(yōu)選為體積百分濃度為70％的乙醇中的提取物，所述沙苑子乙醇提取物中含有防治或治療高血脂以及脂肪肝的活性成分，且該部分提取物作為唯一活性成分，具有降低高膽固醇水平、舒張血管、減少脂肪肝脂質(zhì)含量、減少脂肪肝脂滴的作用。此外，本發(fā)明實施例將所述沙苑子乙醇提取物作為唯一活性成分，與常規(guī)的含有沙苑子的復(fù)方中藥相比，用于制備藥物時，所述沙苑 子乙醇提取物的質(zhì)量更溶液控制，從而便于中藥現(xiàn)代化的推廣應(yīng)用。

本發(fā)明實施例所述沙苑子乙醇提取物優(yōu)選通過下述制備方法獲得，當然，應(yīng)當理解，也可以通過其他方法獲得。

相應(yīng)地，本發(fā)明實施例提供了一種沙苑子乙醇提取物的制備方法，包括以下步驟：

S01.采集沙苑子，依次進行除雜處理、粉碎處理后得到粉碎物料；

S02.使用體積百分濃度為65-75％的乙醇對所述粉碎物料進行加熱回流提取，獲得乙醇提取液；

S03.將所述乙醇提取液進行濃縮除去溶劑。

具體的，上述步驟S01中，對所述沙苑子進行除雜處理，可通過常規(guī)方法實現(xiàn)，只要使得所述沙苑子潔凈度不影響所述沙苑子進行后續(xù)活性成分的提取即可。

作為優(yōu)選實施例，為了充分提取所述沙苑子乙醇提純的活性成分，并有效提高提取效率，所述粉碎處理后的沙苑子具有一定的粒度要求，具體的，所述粉碎處理后的沙苑子的粒度大小能過20目篩。因此，作為具體實施例，所述沙苑子乙醇提取物的制備方法，還包括將經(jīng)過所述粉碎處理獲得的粉碎物料過20目篩處理。

上述步驟S02中，采用乙醇對所述沙苑子進行提取，所述乙醇的用量為所述沙苑子重量的2.5-3.5倍，更優(yōu)選為，所述乙醇的用量為所述沙苑子重量的4倍。為了進一步集中提取活性組分，并提高活性組分的提取率，所述乙醇的體積百分濃度進一步優(yōu)選為70％。

為了提高提取效率，可以進一步對粉碎的所述沙苑子進行室溫浸泡處理。作為優(yōu)選實施例，所述浸泡時間為30-60分鐘。

本發(fā)明實施例所述沙苑子乙醇提取物的制備方法中，所述加熱回流提取是關(guān)鍵步驟，所述加熱回流處理直接關(guān)系著所述沙苑子化學(xué)成分的溶出，更重要的是，關(guān)系到其中的活性成分是否在不被破壞的前提下溶出。因此，為了獲得 活性組分不被破壞且活性組分提取率高的效果，所述加熱回流處理的加熱溫度為70-85℃，加熱時間為50-70分鐘。進一步的，所述加熱回流處理的加熱溫度為80℃，加熱時間為60分鐘。

為了進一步提高所述沙苑子乙醇提取物的提取率，可以視情況將提取后的沙苑子濾渣采用上述條件再行提取1-3次，并將提取后的濾液進行合并。

上述步驟S03中，將所述乙醇提取液進行濃縮除去溶劑，可以采用減壓蒸餾的方式實現(xiàn)。作為優(yōu)選實施例，所述減壓蒸餾采用在溫度為50-70℃的條件下水浴實現(xiàn)。

作為另一個優(yōu)選實施例，將去除溶劑后的沙苑子乙醇提取物進行凍干處理后可以獲得所述沙苑子乙醇提取物的粉末，便于保存。所述凍干處理的溫度為≤-20℃。

本發(fā)明實施例提供的沙苑子乙醇提取物的制備方法，工藝簡單可控，提取效率高，可以使得所述沙苑子乙醇提取物的提取率在15％以上，且條件溫和、活性成分不易被破壞，易于實現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化。

以及，本發(fā)明實施例提供了所述沙苑子乙醇提取物在醫(yī)藥領(lǐng)域的應(yīng)用。

具體的，所述沙苑子乙醇提取物在制備防治或治療高血脂疾病藥物中的應(yīng)用。

以及，所述沙苑子乙醇提取物在制備防治或治療脂肪肝疾病藥物中的應(yīng)用。

下面結(jié)合具體實施例進行說明。

實施例1

一種沙苑子乙醇提取物，所述沙苑子乙醇提取物為沙苑子在體積百分濃度為65-75％的乙醇中的提取物。

所述沙苑子乙醇提取物的制備方法，包括以下步驟：

S11.采集沙苑子，依次進行除雜處理、粉碎處理后，過20目篩得到粉碎物料；

S12.使用3倍體積百分濃度為65-75％的乙醇對所述粉碎物料進行加熱回 流提取，加熱回流溫度為80℃，加熱時間1小時，獲得乙醇提取液；

S13.將所述乙醇提取液進行減壓濃縮除去溶劑、凍干處理。

實施例2

一種沙苑子乙醇提取物，所述沙苑子乙醇提取物為沙苑子在體積百分濃度為70％的乙醇中的提取物。以所述沙苑子乙醇提取物的重量百分含量為100％計，所述酚類化合物的重量百分含量≥30％，所述沙苑子苷的重量百分含量為≥1.5％。

所述沙苑子乙醇提取物的制備方法，包括以下步驟：

S21.采集沙苑子，依次進行除雜處理、粉碎處理后，過20目篩得到粉碎物料；

S22.使用3倍體積百分濃度為70％的乙醇對所述粉碎物料進行加熱回流提取，加熱回流溫度為75-85℃，加熱時間1小時，獲得乙醇提取液；

S23.將所述乙醇提取液進行減壓濃縮除去溶劑、凍干處理。

實施例3沙苑子乙醇提取物對高脂血癥大鼠的降血脂作用

建立大鼠高脂血癥模型：正常組用標準鼠料(含14％蛋白質(zhì)、10％脂肪和76％碳水化合物)；采用改良配方的高脂飼料(標準鼠料添加1％膽酸、2％膽固醇和5.5％花生油)誘導(dǎo)大鼠高脂血癥。

沙苑子乙醇提取物給藥：期間給予灌服本發(fā)明實施例制備的沙苑子乙醇提取物低劑量組(SAC-L，200mg·kg^-1)、高劑量組(SAC-H，600mg·kg^-1)，設(shè)辛伐他汀組(SIM，3mg·kg^-1)作對照。動物模型與藥物處理SD雄性大鼠，隨機分成5組，設(shè)正常對照組(p.o.生理鹽水)、模型對照組(p.o生理鹽水)、陽性對照組(辛伐他汀SIM，3mg·kg^-1，p.o.)、沙苑子乙醇提取物低劑量組(SAC-L，200mg·kg^-1，p.o.)、沙苑子乙醇提取物高劑量組(SAC-H，600mg·kg^-1，p.o.)。除正常組喂飼標準飼料外，其余4組喂飼高脂飼料造模。開始造模當日 起，各組每天分別p.o.給藥(1ml·100g^-1體重)，正常組、模型組p.o.等體積蒸餾水。連續(xù)給藥28天后，各組小鼠均禁食12小時，頸椎脫臼處死，打開胸腔，心臟取血，制備血清，-80℃保存待檢。給藥28天后，測定血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)。

本發(fā)明實施例采用血脂檢測氧化酶法測總膽固醇，甘油磷酸氧化酶法測甘油三酯，直接法測高、低密度脂蛋白膽固醇；以上指標均按試劑盒說明測定。數(shù)據(jù)處理實驗數(shù)據(jù)表示，實驗統(tǒng)計采用SPSS12.0統(tǒng)計程序進行單因素方差分析，組間采用Post hoc方法比較，具體結(jié)果見下表2所示。

表2(n＝6–8)

其中，“###”表示與正常組比較p＜0.001；“*”表示與模型組比較p＜0.05。實驗數(shù)據(jù)表明沙苑子乙醇提取物低劑量組、沙苑子乙醇提取物高劑量組均顯著降低高脂血癥大鼠血清TC、LDL-C含量(p＜0.05)。

沙苑子乙醇提取物對高脂血癥大鼠各組動脈粥樣硬化指數(shù)的影響如下表3所示。

表3(n＝6–8)

其中，“###”表示與正常組比較p＜0.001；“*”表示與模型組比較，p＜0.05。

由本發(fā)明實施例可知，沙苑子乙醇提取物可以降低高脂血癥大鼠血清中的TC和LDL-C，降低大鼠的動脈粥樣硬化指數(shù)。

本發(fā)明實施例中，藥品及試劑沙苑子產(chǎn)地陜西省渭南市，經(jīng)香港理工大學(xué)深圳市中藥藥學(xué)及分子藥理學(xué)研究重點實驗室陳四保教授鑒定為豆科植物扁莖黃芪Astragalus complanatus Bunge的成熟種子(批號：syz-026-10)；辛伐他汀，石藥集團中諾藥業(yè)(石家莊)有限公司，批號：178120201。國藥準字：H19990366；總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇試劑盒(上海科華生物工程股份有限公司)。

本發(fā)明實施例中，所述大鼠采用動物Sprague-Dawley大鼠，雄性，體重160～180g，SPF級，由廣東省醫(yī)學(xué)實驗動物中心提供。實驗動物生產(chǎn)許可證號：SCXK(粵)2008-0002；實驗動物質(zhì)量合格證明號：0116188。

儀器：全自動生化儀HITACHI7100(日本，日立)。

實施例4沙苑子乙醇提取物對高脂血癥大鼠的肝組織抗氧化酶活性和MDA的影響

本發(fā)明通過檢測肝臟中多組抗氧化酶的活性，來研究沙苑子乙醇提取物對高脂血癥大鼠的肝組織抗氧化酶活性和MDA的影響。

實驗方法：采用實施例3相同的方法建立大鼠高脂血癥模型、采用沙苑子乙醇提取物給藥、處死大鼠。稱取大鼠肝臟(約1g)儲存于-80℃,加生理鹽水(1/9，w/v)勻漿(10次，10秒/次，每次間隔15秒)冷凍的肝臟樣品，勻漿后的樣品離心(150×g,5min，4℃)，取上清后-20℃儲存，使用試劑盒檢測超氧化物歧化酶(SOD),谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)，過氧化氫酶(CAT)和丙二醛(MDA)的表達，并使用BCA蛋白濃度測定試劑盒檢測蛋白含量。高脂血癥大鼠的肝組織抗氧化酶活性和MDA(丙二醛)的作用見附圖3所示。其中，與正常組比較，“#”表示p＜0.05；“##”表示p＜0.01；“###”表示p＜0.001。 與模型組比較,“*”表示p＜0.05,“*”表示p＜0.05，“***”表示p＜0.001。其中，control、HCD、SIM、SAC-L、SAC-H分別表示正常組、模型組、辛伐他丁組、沙苑子乙醇提取物低劑量組、沙苑子乙醇提取物高劑量組，后述附圖中，上述英文釋義相同。

實驗數(shù)據(jù)表明與正常組相比，模型組(HCD組)中抗氧化酶SOD,GSH-PX,CAT的含量顯著降低(p＜0.05，p＜0.05，p＜0.001)。辛伐他汀組能顯著逆轉(zhuǎn)由HCD引起的抗氧化酶SOD,CAT含量的下降(p＜0.001，p＜0.001)。與HCD組相比，沙苑子乙醇提取物低劑量組能增加抗氧化酶GSH-PX的表達，但不具有統(tǒng)計學(xué)意義(p＞0.05)。

與正常組相比，模型組(HCD組)測得丙二醛(MDA)的含量顯著增高(p＜0.01)。辛伐他汀組、沙苑子乙醇提取物低劑量組能顯著降低HCD引起的丙二醛含量的升高(p＜0.001，p＜0.05)。

由本發(fā)明實施例可知，沙苑子提取物可以降低高脂血癥大鼠血清中的丙二醛的含量。

儀器與試劑:ulteraturax T-25勻化器、酶活測定試劑盒(南京凱基生物科技發(fā)展有限公司)、BCA蛋白濃度測定試劑盒(上海博彩生物科技有限公司)。

實施例5沙苑子乙醇提取物對高脂血癥大鼠抗脂肪肝的作用

5.1采用實施例3相同的方法建立大鼠高脂血癥模型、采用沙苑子乙醇提取物給藥、處死大鼠。取大鼠肝臟，采用肝臟的組織病理學(xué)切片直觀地檢視各實驗組大鼠肝臟情況的差異性。將大鼠處死后，取各實驗組大鼠的肝臟的同一部位的肝臟，立即用生理鹽水清洗并用10％福爾馬林液固定。固定后，肝臟組織被埋藏進石蠟中，隨后肝臟組織被切成5μm的切片，用蘇木精和曙紅染色，并用400倍光學(xué)顯微鏡拍照，大鼠肝臟外觀及其切片染色后的顯微圖片結(jié)果見圖4所示。其中，a、b、c、d、e分別表示：正常組、模型組、辛伐他汀組、沙苑子乙醇提取物低劑量組、沙苑子乙醇提取物高劑量組。

5.2采用蛋白免疫印跡法定量檢測大鼠肝臟的PEPCK,LDLR,PPAR-α蛋白水平。

采用實施例3相同的方法建立大鼠高脂血癥模型、采用沙苑子乙醇提取物給藥、處死大鼠。取大鼠肝臟，大鼠肝臟提取物用8％和10％SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳分離，電泳完畢轉(zhuǎn)移至PVDF膜上，PVDF膜用不含脂肪的牛奶4℃封閉過夜。將PVDF膜用適當?shù)囊豢?℃孵育過夜，二抗anti-rabbit,anti-mouse和goat(1：4000)室溫孵育1小時。ECL發(fā)光液(Rockford,USA)與免疫反應(yīng)條帶結(jié)合發(fā)出化學(xué)熒光，用膠片捕獲熒光。所得的實驗數(shù)據(jù)是任一條帶與β-actin(β-肌動蛋白)條帶熒光強度的比值。實驗結(jié)果見附圖5所示。

實驗數(shù)據(jù)表明，與正常組相比，模型組(HCD組)大鼠的肝臟在PEPCK(磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶)和LDLR(低密度脂蛋白受體)的蛋白表達中被顯著抑制。辛伐他汀組、沙苑子乙醇提取物低劑量組、沙苑子乙醇提取物高劑量組能顯著增強由HCD誘導(dǎo)的PEPCK和LDLR的蛋白表達的降低。另外，與正常組相比，HCD能顯著上調(diào)大鼠肝臟的PPAR-α(過氧化物酶體增殖物活化受體)的蛋白表達而辛伐他汀組、沙苑子乙醇提取物低劑量組、沙苑子乙醇提取物高劑量組均能顯著抑制由HCD誘導(dǎo)的PPAR-α的上調(diào)。

實施例6沙苑子乙醇提取物對高脂血癥大鼠的血管舒張作用

采用實施例3相同的方法建立大鼠高脂血癥模型、采用沙苑子乙醇提取物給藥。給藥階段完成后，將大鼠處死并將其胸主動脈血管立即置于4℃Tyrode's臺式液中(氯化鈉118mM,氯化鉀4.7mM,磷酸二氫鉀1.2mM,碳酸氫鈉25mM,葡萄糖11mM,氯化鈣2.5mM,硫酸鎂1.2mM)，剝除脂肪和結(jié)締組織后將胸主動脈切成2個主動脈環(huán)瓣。一部分胸主動脈環(huán)瓣(3mm)用于內(nèi)皮依賴性血管舒張性實驗，一部分胸主動脈環(huán)瓣(15mm)用于測定NO產(chǎn)生引起的血管平滑肌舒張。

6.1內(nèi)皮依賴性血管舒張性實驗

一部分胸主動脈環(huán)瓣置于離體器官浴槽中加入5ml臺式液(37℃，供氣95％氧氣和5％二氧化碳)，在1.2g的最佳負載下持續(xù)60分鐘。環(huán)瓣舒張收縮力度的變化會被等距位移傳感器記錄并與Powerlab數(shù)據(jù)收集系統(tǒng)連接，記錄頻率設(shè)定為每分鐘40次，血管需在靜息張力下平衡1小時。在平衡期間，每20分鐘用未加藥的臺式液潤洗胸主動脈環(huán)瓣，并在必要時再調(diào)整靜息張力。在平衡結(jié)束后，用60mM KCL測試兩次以確保適當?shù)氖湛s力。通過對等距收縮張力的檢測，觀察乙酰膽堿對于胸主動脈的舒張效果。胸主動脈環(huán)瓣預(yù)先給藥1μM苯腎上腺素，隨后加入1μM消炎痛(非選擇性的環(huán)加氧酶抑制劑)和1μM新斯的明(抗膽堿酯酶)。在進入穩(wěn)定的收縮階段后，乙酰膽堿以累計濃度10nM–10μM加入離體器官浴槽，誘導(dǎo)血管舒張。濃度響應(yīng)曲線將通過乙酰膽堿累計濃度對數(shù)與對苯腎上腺素引起的胸主動脈環(huán)瓣引起的收縮的相對舒張百分比體現(xiàn)。

6.2測定NO產(chǎn)生引起的血管平滑肌舒張

另一部分胸主動脈環(huán)瓣，由SNP通過影響血管平滑肌從而誘導(dǎo)血管舒張。SNP濃度響應(yīng)曲線將通過SNP累計對數(shù)濃度對苯腎上腺素引起的環(huán)瓣引起的收縮的相對舒張百分比體現(xiàn)。

內(nèi)皮依賴性血管舒張性實驗和測定NO產(chǎn)生引起的血管平滑肌舒張的實驗結(jié)果分別如附圖6A、6B所示。

實驗數(shù)據(jù)表明乙酰膽堿對于血管的舒張能力成濃度依耐性，當乙酰膽堿濃度達到10μM，對于不同組的大鼠所分離的血管相對舒張程度28-75％。

與正常組相比，模型組(HCD組)的血管相對舒張百分比明顯低于正常組，具有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.001)。與模型組相比，辛伐他汀組(3mg/kg/day)、沙苑子乙醇提取物低劑量組(200mg/kg/day)能顯著提高血管的舒張能力，具有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.001)，沙苑子乙醇提取物高劑量組(600mg/kg/day)也能促進對乙酰膽堿引起的血管舒張的響應(yīng)(p＜0.05)，但沙苑子對于提高血管舒張能并不存在濃度依賴性。

另外，由SNP產(chǎn)生NO通過血管平滑肌舒張引起的血管舒張，然而在該實驗中個實驗組未體現(xiàn)出顯著性差異(p＞0.05)。

本實施例可知，沙苑子提取物非濃度依賴性地提高高脂血癥大鼠的內(nèi)皮細胞依賴性的血管舒張性，并對HCD大鼠血管平滑肌舒張性無影響。

以上所述僅為本發(fā)明的較佳實施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)所作的任何修改、等同替換和改進等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。