丹參提取物、其制劑及用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于中藥天然藥物領(lǐng)域，具體地說，本發(fā)明涉及丹參提取物、其制劑及用 途。
【背景技術(shù)】
[0002] 中藥丹參來源于唇形科鼠尾草屬植物丹參（Salvia miltiorrhiza Bunge)的干燥 根及根莖。具有巧癒止痛、活血通經(jīng)、清必除煩的功效，主要用于必腦血管疾病的治療。研 究表明，其中的活性成分具有抗血栓、抗血小板凝集、抗氧化、抗腫瘤等藥理活性。
[0003] 丹參的活性成分可W分為水溶性和脂溶性兩部分，其中水溶性部分W酪酸類化合 物為主；脂溶性活性成分W二聰菲釀類化合物為主。丹參水溶性成分的分離純化工藝雖起 步較晚，但發(fā)展迅速。主要方法有水提醇沉法、高速逆流色譜法、C〇2超臨界萃取法等。送些 方法工藝復(fù)雜，設(shè)備要求高，難W滿足丹酪酸B藥物開發(fā)的需求。
[0004] 中國專利化200810041104. 1，采用了生物轉(zhuǎn)化步驟，雖然可W將丹酪酸B純度提 高至99% W上，但工藝過程繁瑣，同時純化中用到的反相樹脂價格昂貴，不利于工業(yè)化生 產(chǎn)。本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有技術(shù)中得到含有高純度丹酪酸B的丹參提取 物，步驟繁瑣的缺陷，開發(fā)一種工藝簡單、穩(wěn)定，有利于實現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)，制備成本低的含有 高純度丹酪酸B的丹參提取物。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供一種丹參提取物其制劑及用途。
[0006] 本發(fā)明的第一方面，提供了一種丹參提取物，所述丹參提取物中含有丹酪酸B和 雜質(zhì)，所述雜質(zhì)的HPLC含量> 0,并且所述雜質(zhì)包括HPLC相對保留時間約為1. 51的雜質(zhì) I，所述雜質(zhì)I的HPLC含量《0. 5%;優(yōu)選地，所述雜質(zhì)I的HPLC含量《0. 10%;更優(yōu)選地， 所述雜質(zhì)I的HPLC含量《0. 05% ;最優(yōu)選地，所述雜質(zhì)I的HPLC含量《0.0 l %。
[0007] 在另一優(yōu)選例中，所述雜質(zhì)的HPLC含量《1. 0%。
[0008] 在另一優(yōu)選例中，所述雜質(zhì)I的HPLC含量大于或等于0。
[0009] 在另一優(yōu)選例中，所述丹酪酸B的HPLC含量> 98. 0%;優(yōu)選地，> 99. 0%;更優(yōu)選 地> 99. 5%。
[0010] 在另一優(yōu)選例中，所述雜質(zhì)還包括HPLC相對保留時間約為1. 48的雜質(zhì)II，所述雜 質(zhì)II的HPLC含量《0. 25%;優(yōu)選地，所述雜質(zhì)II的HPLC含量《0. 1 %;更優(yōu)選地，所述雜 質(zhì)II的HPLC含量《0.05% ;更優(yōu)選地，所述雜質(zhì)II的HPLC含量《0.01%。
[0011] 在另一優(yōu)選例中，所述雜質(zhì)還包括HPLC相對保留時間約為0. 55的雜質(zhì)III，所述 雜質(zhì)III的HPLC含量>0并且《0. 15%，優(yōu)選地，所述雜質(zhì)III的HPLC含量《0. 1%，更優(yōu) 選地，所述雜質(zhì)III的HPLC含量《0. 05%;更優(yōu)選地，所述雜質(zhì)III的HPLC含量《0.0 l %。
[0012] 在另一優(yōu)選例中，所述雜質(zhì)還包括HPLC相對保留時間約為0. 70的雜質(zhì)IV，所述 雜質(zhì)IV的HPLC含量> 0并且《0. 2 %，優(yōu)選地，所述雜質(zhì)IV的HPLC含量《0. 1 %;更優(yōu)選 地，所述雜質(zhì)IV的HPLC含量《0. 05% ;更優(yōu)選地，所述雜質(zhì)IV的HPLC含量《0.0 l %。
[0013] 在另一優(yōu)選例中，所述雜質(zhì)還包括HPLC相對保留時間約為0. 26的雜質(zhì)V，所述雜 質(zhì)V的HPLC含量> 0并且《0. 3%，優(yōu)選地，所述雜質(zhì)V的HPLC含量《0. 2% ;更優(yōu)選地， 所述雜質(zhì)V的HPLC含量《0. 1 % ;更優(yōu)選地，所述雜質(zhì)V的HPLC含量《0. 05%。
[0014] 在另一優(yōu)選例中，所述雜質(zhì)還包括HPLC相對保留時間約為1. 1的雜質(zhì)VI，所述雜 質(zhì)VI的HPLC含量> 0并且《0. 2%，優(yōu)選地，所述雜質(zhì)VI的HPLC含量《0. 1% ;更優(yōu)選 地，所述雜質(zhì)V的HPLC含量《0. 05% ;更優(yōu)選地，所述雜質(zhì)V的HPLC含量《0.0 l %。
[0015] 在另一優(yōu)選例中，所述HPLC的檢測條件為：
[001 引 Welchrom@ C18 柱（4. 6巧50mm，5 U m);流動相 A，0. 5% (v/v)甲酸溶液；流動相 B，0. 5% (v/v)甲酸溶液-己臘巧0:50);柱溫35°C ;流速Iml/min ;進樣量=IOiil ;檢測波 長286nm ;梯度洗脫，流動相梯度比例如下：
[0017] 0-30min，流動相 A:流動相 B = 59:41 ;
[001 引 30-45min，流動相 A:59 - 10%，流動相 B ;41 - 90 ;
[0019] 45-50min，流動相 A:10 - 59%，流動相 B;90 - 41 ;
[0020] 5〇-55min,流動相 A:流動相 B = 59:41。
[0021] 本發(fā)明的第二方面，提供了如本發(fā)明第一方面所述的丹參提取物的用途，其特征 在于，所述丹參提取物用于制備藥物，所述藥物用于治療或預(yù)防必腦血管疾病。
[0022] 在另一優(yōu)選例中，所述必腦血管疾病包括：
[002引 （1)急性腦缺血；和/或
[0024] 似腦部缺血性壞死。
[0025] 在另一優(yōu)選例中，本發(fā)明第二方面所述的丹參提取物的用途，其中所述丹參提取 物通過如下方法制備：
[002引 （1)巧[|備丹參提取物中間體
[0027] 丹參藥材的提取液上第一樹脂層析柱，洗脫液經(jīng)己酸己醋萃取后，去除己酸己醋 得丹參提取物中間體作為下一步中的上柱樣品，所述丹參提取物中間體中丹酪酸BHPLC含 量為10% W上，優(yōu)選地為10% -70% ;
[0028] (2)純化制得丹參提取物
[0029] (2. 1)將上柱樣品加水溶解，上第二樹脂層析柱，水洗脫，收集洗脫液，洗脫液經(jīng)己 酸己醋萃取后去除己酸己醋；
[0030] (2. 2)重復(fù)步驟化1)至少一次，得到所述丹參提取物，所述丹參提取物中丹酪酸 BHPLC含量為95% W上，優(yōu)選地為98% -100%。
[0031] 在另一優(yōu)選例中，所述第一樹脂層析柱為大孔吸附樹脂層析柱。
[0032] 在另一優(yōu)選例中，所述第二樹脂層析柱為微球樹脂層析柱、反相樹脂層析柱或大 孔吸附樹脂層析柱。
[0033] 在另一優(yōu)選例中，所述步驟（1)中，所述所述丹參藥材的提取液的制備方法包括：
[0034] 將丹參干藥材粉碎，加入3-10倍水浸泡0. 5-地，于20-9(TC提取0. 5-化，過濾藥渣 取水提液，藥渣重復(fù)提取1-4次，合并水提液，得所述丹參藥材的提取液。
[0035] 在另一優(yōu)選例中，所述步驟（1)中，上柱流速為0. 5-她VA，然后用0. 5-2BV水洗 脫，再用4-12BV的5 % -60 %的己醇洗脫，洗脫流速0. 5-6BVA，合并醇洗脫部分減壓濃縮至 無醇味。
[0036] 在另一優(yōu)選例中，所述步驟化1)中，取上柱樣品加水溶解，W丹酪酸B計濃度 為50-300g/L，調(diào)節(jié)抑1-7,上微球樹脂層析柱，用2-10BV純水洗脫，流速0. 5-她VA，再用 1-4BV的5% -60%己醇洗脫，流速0. 5-她VA，HPLC檢測各洗脫部分丹酪酸B純度。
[0037] 在另一優(yōu)選例中，所述步驟化2)中，將上一步中制得的丹酪酸B的HPLC純度在 60%W上的樣品，作為上柱樣品，重復(fù)步驟（2. 1)，得到所述丹參提取物，所述丹參提取物中 丹酪酸BHPLC含量為98 % W上，優(yōu)選地為99 % W上。
[0038] 在另一優(yōu)選例中，制備所述丹參提取物的方法還包括步驟：
[0039] (3)將所得丹酪酸B提取物溶于水中，冷凍干燥得粉末狀丹酪酸B提取物。
[0040] 本發(fā)明的第H方面，提供了一種藥物組合物，所述藥物組合物包括本發(fā)明第一方 面所述的丹參提取物和藥學(xué)上可接受的載體。
[0041] 在另一優(yōu)選例中，所述藥物組合物的劑型選自下組；膠囊劑、片劑、顆粒劑、混懸 劑、微囊制劑、注射劑、栓劑、粉劑、噴霧劑、貼片或軟膏劑。
[0042] 本發(fā)明的第四方面，提供了一種制備丹參提取物的方法，包括如下步驟：
[004引 （1)巧[|備丹參提取物中間體
[0044] 丹參藥材的提取液上第一樹脂層析柱，洗脫液經(jīng)己酸己醋萃取后，去除己酸己醋， 得丹參提取物中間體作為下一步中的上柱樣品，所述丹參提取物中間體中丹酪酸B HPLC含 量為10% W上，優(yōu)選地為10% -70% ;
[0045] (2)純化制得丹參提取物
[004引 （2. 1)將上柱樣品加水溶解，上第二樹脂層析柱，水洗脫，收集洗脫液，洗脫液經(jīng)己 酸己醋萃取后去除己酸己醋；
[0047] (2. 2)重復(fù)步驟化1)至少一次，得到所述丹參提取物。所述丹參提取物中丹酪酸 B的HPLC含量為95% W上，優(yōu)選地為98% W上。
[0048] 在另一優(yōu)選例中，所述第一樹脂層析柱為大孔吸附樹脂層析柱。
[0049] 在另一優(yōu)選例中，所述第二樹脂層析柱為微球樹脂層析柱、反相樹脂層析柱或大 孔吸附樹脂層析柱。
[0050] 在另一優(yōu)選例中，所述第一樹脂層析柱中的大孔吸附樹脂選自下組；HPD300、 HPD400、HPD700、HPD-722、監(jiān)-803、監(jiān)-806、監(jiān)-816、H103、AB-8。
[0051] 在另一優(yōu)選例中，所述微球樹脂層析柱中的微球樹脂平均粒徑為1-500 U m。
[0052] 在另一優(yōu)選例中，所述第二樹脂層析柱中的吸附樹脂選自下組；HP-21、HP20SS、 乂八0-4^40-16、乂40-118(^^40-1600、微球一號、微球二號、監(jiān)-803、監(jiān)-816。
[0053] 在另一優(yōu)選例中，所述步驟（1)中，所述丹參藥材的提取液的制備方法包括：
[0054] 將丹參干藥材粉碎，加入3-10倍水浸泡0. 5-地，于20-9(TC提取0. 5-化，過濾藥渣 取水提液，藥渣重復(fù)提取1-4次，合并水提液，得所述丹參藥材的提取液。
[00巧]在另一優(yōu)選例中，所述步驟（1)中，上柱流速為0. 5-她VA，然后用0. 5-2BV水洗 脫，再用4-12BV的5% -60% (v/v)的己醇洗脫，洗脫流速0. 5-6BVA，合并醇洗脫部分減壓 濃縮至無醇味；優(yōu)選地，在所述步驟（1)中，合并醇洗脫部分后先調(diào)節(jié)合并液中己醇濃度至 70% - 80% (v/v)，去除沉淀，然后再減壓濃縮至無醇味。
[0056] 在另一優(yōu)選例中，所述步驟化1)中，