本發(fā)明涉及一種冬蟲夏草與北蟲草的提取液及其制備方法和應(yīng)用，特別是一種具有美白抗氧化效果的冬蟲夏草與北蟲草的提取液及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

冬蟲夏草(Cordyceps sinensis)，又名中華蟲草，是中國(guó)歷史中傳統(tǒng)的名貴中藥材，是麥角菌科一種寄生于蝙蝠蛾科昆蟲幼蟲體上的子囊菌。冬蟲夏草主要產(chǎn)于中國(guó)青海、西藏、四川、云南、甘肅和貴州等海拔3000公尺至5000公尺的高原。據(jù)《本草綱目》記載："冬蟲夏草性甘、味平、歸肺、腎經(jīng)、補(bǔ)肺益腎、止血、化痰、用于久咳虛喘、陽(yáng)萎遺精、腰膝酸痛"。中醫(yī)認(rèn)為冬蟲夏草：具有養(yǎng)肺陰，補(bǔ)腎陽(yáng)、止咳化痰、抗癌防老的功效，為平補(bǔ)陰陽(yáng)之品。據(jù)臨床研究，冬蟲夏草具有抗菌、免疫調(diào)節(jié)、抗癌功能、滋腎、提高腎上腺皮質(zhì)醇含量、抗心律失常、抗疲勞等多方面功能。

北冬蟲夏草(Cordyceps militaris)又稱“蛹蟲草”，簡(jiǎn)稱“北蟲草”，與冬蟲夏草(Cordyceps sinensis)為近緣種，寄生于鱗翅目昆蟲幼蟲或蛹體，是由子實(shí)體(草部分)與菌核(蟲體部分)兩部分組成的復(fù)合體。主要分布中國(guó)大陸的東北、華北及西北等地區(qū)，臨床研究報(bào)道有降血脂、防動(dòng)脈硬化、促進(jìn)造血功能、抗疲勞、提高機(jī)體免疫力、殺滅癌細(xì)胞等作用。

冬蟲夏草為傳統(tǒng)稀有珍貴中藥材，原產(chǎn)中國(guó)青藏高原海拔3,000米以上的高冷地區(qū)，近年來(lái)由于人工大量采挖，野生資源已日漸枯竭，加上人工培養(yǎng)困難，不易產(chǎn)生子實(shí)體，致價(jià)格相當(dāng)昂貴。北冬蟲夏草為冬蟲夏草的近緣種，生長(zhǎng)模式相近，多量研究報(bào)告顯示，北冬蟲夏草重要功能性成分，大致與冬蟲夏草相 近，已被公認(rèn)為冬蟲夏草的替代種，并已逐漸取代應(yīng)用。

近年，冬蟲夏草因?yàn)槠湎鄠鞯拿腊坠πС蔀闁|方女士們的恩物。冬蟲夏草對(duì)改善皮膚的功效主要源于中醫(yī)的理論。明代李時(shí)珍的《本草綱目》和清代吳儀洛的《本草從新》描述冬蟲夏草有“補(bǔ)肺、益腎”的作用。而在《黃帝內(nèi)經(jīng)》內(nèi)有記載“肺主皮毛、司呼吸”，可見冬蟲夏草對(duì)改善皮膚的功效主要透過(guò)改善肺的功能。然而如果從現(xiàn)代科學(xué)的角度來(lái)看，目前并未找到任何能證明冬蟲夏草有美白及抗氧化功效的證據(jù)。

酪氨酸酶活性抑制作用的測(cè)試是傳統(tǒng)用來(lái)篩選美白藥品的測(cè)試方法。當(dāng)中酪氨酸會(huì)因?yàn)槔野彼崦傅淖饔枚D(zhuǎn)化成左旋多巴(L-DOPA)，再轉(zhuǎn)化成為多巴色素(Dopachrome)。多巴色素在492nm波長(zhǎng)下有吸亮度，故此可以量化及計(jì)算酪氨酸酶的活性。多巴色素只是暫存物，它會(huì)轉(zhuǎn)化成黑色素(Melanin)。人類皮膚上的黑色素是由黑色素細(xì)胞(Melanocytes)所產(chǎn)生的多巴色素轉(zhuǎn)化而成的。黑色素會(huì)漸漸地在黑色素細(xì)胞內(nèi)的黑色素體(Melanosome)內(nèi)成熟，成熟后黑色素體便會(huì)沿著黑色素細(xì)胞的樹突(Dentrite)轉(zhuǎn)移到角質(zhì)細(xì)胞(Keratinocytes)，使膚色變深。抑制酪氨酸酶活性能有效減少多巴色素及黑色素的產(chǎn)生，從而使膚色變得更淡更白?，F(xiàn)時(shí)大部份的美白藥品如對(duì)苯二酚(Hydroquinone)及熊果苷(Arbutin)等均為針對(duì)酪氨酸酶活性而達(dá)至美白功效的。雖然對(duì)苯二酚的美白功效明顯，卻于2006年因?yàn)橹掳┑娘L(fēng)險(xiǎn)而被禁用。及后，熊果苷亦因?yàn)榛瘜W(xué)結(jié)構(gòu)與對(duì)苯二酚相似而被禁用?，F(xiàn)時(shí)科學(xué)界正找尋安全性較高的美白藥品來(lái)取締對(duì)苯二酚等藥品。

近年來(lái)許多疾病的發(fā)生已證實(shí)與自由基有關(guān),因此,利用抗氧化機(jī)理來(lái)治療許多疾病也陸續(xù)受到重視,包括:心血管疾病,慢性腎炎,老年癡呆癥(Alzheimer’s disease)及過(guò)敏性疾病等。具有抗氧化能力的天然產(chǎn)物,更被廣泛用于抗皮膚衰老 的化妝品上。冬蟲夏草具有保肺益腎、增強(qiáng)體能的功能。本研究用學(xué)界認(rèn)為可以準(zhǔn)確測(cè)定抗氧化能力的試劑盒(Total Antioxidant Capacity Colorimetric Assay Kit)來(lái)檢測(cè)冬蟲夏草樣品的抗氧化能力。

目前市場(chǎng)上有許多冬蟲夏草或冬蟲夏草提取物所制成的美容產(chǎn)品。但由于近年來(lái)人工大量采挖，野生資源已日漸枯竭，加上人工培養(yǎng)困難，價(jià)格相當(dāng)昂貴。因此，有必要努力尋找一種低成本高效率得到安全性較高的美白藥品的方法。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

基于此，本發(fā)明的目的之一在于提供一種冬蟲夏草和北蟲草的提取液的制備方法，該方法成本低，簡(jiǎn)單易操作，且由該法得到的提取液具有最佳的美白抗氧化效果。

實(shí)現(xiàn)上述目的技術(shù)方案如下：

一種冬蟲夏草與北蟲草的提取液的制備方法，包括以下步驟：

a)溫浸：將冬蟲夏草與北蟲草分別磨粉，過(guò)篩，分別以冬蟲夏草與北蟲草重量18-22倍的水溫浸攪拌，溫浸溫度為38-42℃，溫浸時(shí)間為9-11小時(shí)；

b)過(guò)濾：將冬蟲夏草藥液與北蟲草藥液分別過(guò)濾，濾液各自定容至藥液濃度為0.05g/ml，再過(guò)濾，分別得到冬蟲夏草提取液和北蟲草提取液；

c)混合：將冬蟲夏草提取液與北蟲草提取液按1:1-5的質(zhì)量比混合，得到冬蟲夏草與北蟲草的提取液。

在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述冬蟲夏草提取液與北蟲草提取液按1:5的質(zhì)量比混合。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種冬蟲夏草與北蟲草的提取液，該提取液具有美白抗氧化效果。

具體技術(shù)方案為：根據(jù)上述制備方法得到的冬蟲夏草與北蟲草的提取液。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供上述冬蟲夏草與北蟲草的提取液的應(yīng)用。

具體技術(shù)方案為：上述制備方法得到的冬蟲夏草與北蟲草的提取液在制備 美白和/或抗氧化的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

所述美白和/或抗衰老產(chǎn)品為藥品、保健品、食品、飲料、食品添加劑、營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑或美容用品。

本發(fā)明所述的冬蟲夏草與北蟲草提取液及其制備方法具有以下優(yōu)點(diǎn)和有益效果：

本發(fā)明找到了適合冬蟲夏草與北蟲草的提取方法，應(yīng)用于工業(yè)，具有簡(jiǎn)單易操作的特點(diǎn)，該工藝僅需溫水浸泡和攪拌兩個(gè)主要步驟，極大地簡(jiǎn)化了制備工藝。而且，北蟲草替代部分冬蟲夏草，節(jié)約了大量的生產(chǎn)成本，更重要的是，本發(fā)明通過(guò)優(yōu)化冬蟲夏草與北蟲草不同配比的提取液,冬蟲夏草與北蟲草的提取液具有最佳的美白和抗氧化效果。本發(fā)明得到的提取液還不會(huì)刺激皮膚細(xì)胞增生，可安全應(yīng)用在美容及相關(guān)的產(chǎn)品。

本發(fā)明可以用于各種以冬蟲夏草與北蟲草為原料的冬蟲夏草與北蟲草的提取液制備，冬蟲夏草與北蟲草的提取液可加工為各種產(chǎn)品，使冬蟲夏草這種珍貴稀少、價(jià)格昂貴的中藥材以相對(duì)較低的原料成本和產(chǎn)品價(jià)格，廣泛地用于藥品、保健品、食品和美容產(chǎn)品中，具有巨大的市場(chǎng)潛力。

附圖說(shuō)明

圖1為實(shí)施例1冬蟲夏草與北蟲草(1:5)提取液工藝流程。

圖2為實(shí)施例2冬蟲夏草提取液,北蟲草提取液及冬蟲夏草與北蟲草(1:5)提取液對(duì)酪氨酸酶活性的抑制作用結(jié)果。

圖3為實(shí)施例2不同配比的冬蟲夏草與北蟲草提取液對(duì)酪氨酸酶活性的抑制作用結(jié)果。

圖4為實(shí)施例2冬蟲夏草與北蟲草(1:5)提取液與熊果苷水溶液對(duì)酪氨酸酶活性的抑制作用結(jié)果。

圖5為實(shí)施例3Trolox在570nm下的吸亮度的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

圖6為實(shí)施例3冬蟲夏草提取液、北蟲草提取液及冬蟲夏草與北蟲草(1:5)提取液的抗氧化能力測(cè)試結(jié)果。

圖7為實(shí)施例3不同配比的冬蟲夏草與北蟲草提取液的抗氧化能力測(cè)試結(jié) 果。

圖8為實(shí)施例4冬蟲夏草與北蟲草(1:5)提取液對(duì)HaCaT皮膚細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)和密度的結(jié)果。

圖9為實(shí)施例4冬蟲夏草與北蟲草(1:5)提取液對(duì)HaCaT皮膚細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線的結(jié)果。

具體實(shí)施方式

以下將結(jié)合附圖和具體實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明。

實(shí)施例1

本實(shí)施例所述的冬蟲夏草與北蟲草(1:5)提取液的制備方法，工藝流程請(qǐng)參閱圖1，包括以下步驟：

a)溫浸：將冬蟲夏草與北蟲草分別磨粉，過(guò)篩，分別以冬蟲夏草與北蟲草重量20倍的水溫浸攪拌，溫浸溫度為40℃，溫浸時(shí)間為10小時(shí)；

b)過(guò)濾：將冬蟲夏草藥液與北蟲草藥液分別過(guò)濾，濾液各自定容至藥液濃度為0.05g/ml，再過(guò)濾，分別得到冬蟲夏草提取液和北蟲草提取液；

c)混合：將冬蟲夏草提取液與北蟲草提取液按1:5的質(zhì)量比混合，得到冬蟲夏草與北蟲草提取液。

由該制備方法制得的冬蟲夏草與北蟲草提取液，可用于美白抗衰老產(chǎn)品，包括藥品、保健品、食品、飲料、食品添加劑、營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑或美容用品。

實(shí)施例2

本實(shí)施例所述的酪氨酸酶抑制作用實(shí)驗(yàn)，包括以下步驟：

a)以不同比例的冬蟲夏草提取液和北蟲草提取液混合，得到不同配比的冬蟲夏草與北蟲草提取液，分別為5:1、3:1、1:1、1:3、1:5、1:7和1:10。

b)將各提取液分別用于酪氨酸酶活性抑制作用測(cè)試，同時(shí)加入沒有任何抑制劑的測(cè)試結(jié)果作為實(shí)驗(yàn)對(duì)照、維生素C和熊果苷(美白作用)的測(cè)試結(jié)果作為實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性對(duì)照。

同時(shí)還以實(shí)施例1的制備方法分別得到冬蟲夏草提取液和北蟲草提取液，分別用于酪氨酸酶活性抑制作用實(shí)驗(yàn)。

酪氨酸酶活性抑制作用測(cè)試是篩選美白藥品的傳統(tǒng)測(cè)試方法。由于酪氨酸酶可以將酪氨酸轉(zhuǎn)化為多巴色素，故此在該測(cè)試中，多巴色素生成量越低，則說(shuō)明提取液對(duì)酪氨酸酶的抑制作用越好。

請(qǐng)參閱圖2。冬蟲夏草提取液,北蟲草提取液及冬蟲夏草與北蟲草(1:5)提取液，對(duì)酪氨酸酶均有的抑制作用，而冬蟲夏草與北蟲草(1:5)提取液比同等量的單用冬蟲夏草提取液或北蟲草提取液更好。

請(qǐng)參閱圖3，不同配比的冬蟲夏草與北蟲草提取液對(duì)酪氨酸酶均有的抑制作用，其中以冬蟲夏草與北蟲草(1:1)提取液、冬蟲夏草與北蟲草(1:3)提取液、冬蟲夏草與北蟲草(1:5)提取液的作用較佳，冬蟲夏草與北蟲草(1:5)提取液的作用最佳。

請(qǐng)參閱圖4，冬蟲夏草與北蟲草(1:5)提取液對(duì)酪氨酸酶的抑制作用,與熊果苷水溶物相近。由此可知，本發(fā)明公開的冬蟲夏草與北蟲草(1:5)提取液制備方法，對(duì)酪氨酸酶活性具有顯著抑制而起到美白作用,其功效媲美熊果苷，可用于制備各種美白產(chǎn)品。

實(shí)施例3

本實(shí)施例所述的抗氧化能力實(shí)驗(yàn)，包括以下步驟：

a)以不同比例的冬蟲夏草提取液和北蟲草提取液混合，得到不同配比的冬蟲夏草與北蟲草提取液，分別為5:1、3:1、1:1、1:3、1:5、1:7和1:10。

b)以Trolox(一種維生素E的類似物)的抗銅離子氧化能力來(lái)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。

c)將各提取液分別用于抗氧化能力的試劑盒測(cè)試，同時(shí)以沒有加入任何提取液的測(cè)試結(jié)果為實(shí)驗(yàn)陰性對(duì)照。

同時(shí)還以實(shí)施例1的制備方法分別得到冬蟲夏草提取液和北蟲草提取液，分別用于抗氧化能力實(shí)驗(yàn)。

請(qǐng)參閱圖5。此圖以Trolox(一種維生素E的類似物)的抗銅離子氧化能力建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，并根據(jù)該標(biāo)準(zhǔn)曲線來(lái)計(jì)算不同蟲草提取液的總抗氧化能力。在此測(cè)試中，Trolox等值越高，則說(shuō)明提取液抗氧化能力越好。

請(qǐng)參閱圖6。冬蟲夏草提取液,北蟲草提取液及冬蟲夏草與北蟲草(1:5)提取 液，均有的抗氧化作用。而冬蟲夏草與北蟲草(1:5)提取液比同等量的單用冬蟲夏草提取液或北蟲草提取液更好。

請(qǐng)參閱圖7，不同配比的冬蟲夏草與北蟲草提取液具有抗氧化作用，其中以冬蟲夏草與北蟲草(1:1)提取液、冬蟲夏草與北蟲草(1:3)提取液、冬蟲夏草與北蟲草(1:5)提取液的作用較佳，冬蟲夏草與北蟲草(1:5)提取液的作用最佳。由此可知，本發(fā)明公開的配比為1:1-5的冬蟲夏草與北蟲草提取液，有抗氧化作用，可廣泛用于抗皮膚衰老的化妝品上。

實(shí)施例4

有些美容藥品可刺激皮膚細(xì)胞增生,可能會(huì)增加患皮膚癌的潛在風(fēng)險(xiǎn),本發(fā)明將冬蟲夏草與北蟲草(1:5)提取液與HaCaT皮膚細(xì)胞一起培養(yǎng),對(duì)其細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài),密度和生長(zhǎng)曲線進(jìn)行測(cè)試,確認(rèn)冬蟲夏草與北蟲草(1:5)對(duì)皮膚角質(zhì)細(xì)胞的活性,從而間接評(píng)估冬蟲夏草與北蟲草(1:5)提取液的安全性。

本實(shí)施例所述的HaCaT皮膚細(xì)胞的活性作用實(shí)驗(yàn)，包括以下步驟：

a)冬蟲夏草與北蟲草(1:5)提取液過(guò)濾，稀釋。

b)向a)所得溶液加入HaCaT皮膚細(xì)胞一起培養(yǎng)，在不同時(shí)間收取細(xì)胞。

c)使用顯微鏡觀察b)所得細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)和密度，在不同時(shí)值拍下照片，與沒有加入提取液的陰性對(duì)照做比較。

d)在不同時(shí)間收取細(xì)胞,應(yīng)用MTT試驗(yàn)測(cè)試細(xì)胞存活率,建立生長(zhǎng)曲線,與沒有加入提取液的陰性對(duì)照作比較。

請(qǐng)參閱圖8。冬蟲夏草與北蟲草(1:5)提取液對(duì)于皮膚細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)和密度與對(duì)照沒有明顯分別,細(xì)胞密度適中，生長(zhǎng)形態(tài)沒有異常。不會(huì)影響細(xì)胞的存活率和生長(zhǎng)形態(tài),也不會(huì)刺激皮膚細(xì)胞增生。

請(qǐng)參閱圖9。冬蟲夏草與北蟲草(1:5)提取液對(duì)于皮膚細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線與對(duì)照沒有明顯分別,生長(zhǎng)曲線正常。不會(huì)影響細(xì)胞的生長(zhǎng)率,也不會(huì)刺激皮膚細(xì)胞增生。

由此可知，冬蟲夏草與北蟲草(1:5)提取液可安全用于各種產(chǎn)品中。

由上述實(shí)驗(yàn)可知，本發(fā)明所述的冬蟲夏草與北蟲草提取液對(duì)酪氨酸酶有抑制作用而起到美白作用，同時(shí)具有抗氧化作用而起到抗衰老效果。提取液對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)不會(huì)產(chǎn)生影響,也不會(huì)刺激皮膚細(xì)胞增生,可安全應(yīng)用在美白抗衰老產(chǎn)品中，包括藥品、保健品、食品、飲料、食品添加劑、營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑或美容用品。

本發(fā)明所公開冬蟲夏草與北蟲草提取液的制備方法，其工藝流程簡(jiǎn)化、減少使用冬蟲夏草。保護(hù)日漸枯竭的野生資源之余，又大大降低成本。按照該方法所制得的冬蟲夏草與北蟲草(1:5)提取液，具有最佳的美白及抗氧化效果，其美白功效可媲美熊果苷,同時(shí)不會(huì)刺激皮膚細(xì)胞增生。本發(fā)明所得的冬蟲夏草與北蟲草提取液可加工為各種產(chǎn)品，使冬蟲夏草這種珍貴稀少、價(jià)格昂貴的天然補(bǔ)品以相對(duì)較低的原料成本和產(chǎn)品價(jià)格，廣泛地用于藥品、保健品、食品和美容產(chǎn)品，具有巨大的市場(chǎng)潛力。

以上所述實(shí)施例僅表達(dá)了本發(fā)明的幾種實(shí)施方式，其描述較為具體和詳細(xì)，但并不能因此而理解為對(duì)本發(fā)明專利范圍的限制。應(yīng)當(dāng)指出的是，對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進(jìn)，這些都屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。因此，本發(fā)明專利的保護(hù)范圍應(yīng)以所附權(quán)利要求為準(zhǔn)。