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一種蛹蟲草液體培養(yǎng)基瓶栽出菇培養(yǎng)方法與流程

文檔序號:11068768閱讀:742來源:國知局

本發(fā)明涉及蛹蟲草培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域,尤其涉及一種蛹蟲草液體培養(yǎng)基瓶栽出菇培養(yǎng)方法。



背景技術(shù):

蛹蟲草又稱北蟲草,隸屬于真菌科的子囊菌亞門、麥角菌科、蟲草屬。蛹蟲草是一種藥用真菌,含有糖、脂肪和蛋白質(zhì),此外,還含有多種氨基酸、微量元素和維生素。其提取物如蟲草素、蟲草酸、蟲草多糖等,具有極高的藥用價值,可用于治療系統(tǒng)失調(diào)、哮喘、支氣管炎等,同時,蛹蟲草中的多種生理活性成分具有抗腫瘤、抗菌、抗氧化、保護(hù)肝臟、增強(qiáng)免疫力等藥理作用。長期以來,人們在開發(fā)利用蛹蟲草過程中一直側(cè)重于其藥用價值,而忽略了其觀賞價值。

蛹蟲草生產(chǎn)中一般采用液體菌種、固體基質(zhì)出菇的栽培方式,這種栽培方式可以提高生產(chǎn)效率,進(jìn)而提高蛹蟲草產(chǎn)量,但是其觀賞價值較低,主要表現(xiàn)為:固體基質(zhì)透氣性好,利于蟲草子座快速生長,導(dǎo)致觀賞期縮短;在生產(chǎn)后期培養(yǎng)基質(zhì)嚴(yán)重失水,導(dǎo)致蟲草子座萎縮、失去光澤的現(xiàn)象,從而降低觀賞價值。



技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素:

本發(fā)明針對現(xiàn)有技術(shù)的不足,提供了一種培養(yǎng)方法簡便、觀賞價值高的蛹蟲草液體培養(yǎng)基瓶栽出菇培養(yǎng)方法。

本發(fā)明的目的是通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的:

一種蛹蟲草液體培養(yǎng)基瓶栽出菇培養(yǎng)方法,是由以下步驟制備得到的:

1)培養(yǎng)基配制:將液體培養(yǎng)基分裝至培養(yǎng)瓶中,透氣封口膜封口,120℃條件下滅菌20-30min;

本發(fā)明的培養(yǎng)瓶選擇透明度高,可耐高溫高壓的培養(yǎng)瓶,大小選擇250-600mL之間。

2)接種:滅菌完畢,待培養(yǎng)基溫度冷卻至25℃左右,在無菌環(huán)境下,接入2-3塊0.4 cm *0.4 cm -0.6cm*0.6cm大小蛹蟲草斜面母種;

3)液體菌球培養(yǎng):將接種后的培養(yǎng)瓶置于震蕩培養(yǎng)箱中,于轉(zhuǎn)速120r/min、溫度20℃條件下避光培養(yǎng)6-7d,液體培養(yǎng)基內(nèi)生成大量的菌球;

4)氣生菌絲培養(yǎng):將生成大量菌球的培養(yǎng)瓶置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng),于溫度20-22℃黑暗條件下靜止培養(yǎng)10-15d,培養(yǎng)基表面生成氣生菌絲;

用手傾斜培養(yǎng)瓶,氣生菌絲層不隨液面晃動;

5)轉(zhuǎn)色:將生成氣生菌絲每天照射13-15h,光照強(qiáng)度為200-250Lx、濕度為55-60%和溫度為20-22℃條件下,培養(yǎng)4-5d,至白色氣生菌絲轉(zhuǎn)化為橘黃色;

6)促原基分化:在無菌環(huán)境下進(jìn)行搔菌處理,白天控制溫度為20-21℃,夜晚控制溫度為10-15℃,給以溫差刺激,在光照強(qiáng)度100-200Lx條件下每天光照13-14h,5-10d后即有大量原基形成;

具體措施為:選擇頂端寬度為0.5-1mm的搔菌工具(如安裝了操作長柄的鐵釘或大號鋼針)進(jìn)行搔菌處理。用酒精燈火焰反復(fù)灼燒搔菌工具,在無菌環(huán)境中冷卻后,輕輕在氣生菌絲表面每間隔1cm劃1條平行線。要求線條長度橫貫培養(yǎng)瓶兩側(cè),深度以不劃透氣生菌絲層為宜。

7)出菇管理:在透氣封口膜上刺6-8個直徑為1cm的小孔,光照強(qiáng)度為200-250Lx、溫度為20-22℃和濕度為75-85%條件下,全天給光,培養(yǎng)5d,即有子座幼體形成;待子座幼體長到1cm以上,溫度控制在18-20℃,濕度控制在80-90%,并逐步加強(qiáng)通風(fēng),可促使子座緩慢成長,即可。

子座幼體形成后逐步加強(qiáng)通風(fēng),可使子座顏色保持賞心悅目的金黃色,并適時調(diào)整光線方向,保證蟲草子座形態(tài)端正,增加觀賞價值;適當(dāng)降低溫度可減緩蟲草子座生長速率,延長觀賞期。

所述步驟1)中,液體培養(yǎng)基的裝液量為培養(yǎng)瓶體積的30-50%。

所述液體培養(yǎng)基的配方為:馬鈴薯為100g/L,可溶性淀粉為10g/L,蛋白胨20g/L,KH2PO4為1.5g/L,MgSO4.7H2O為1.0g/L。

所述液體培養(yǎng)基是由以下步驟制得的:稱100g去皮馬鈴薯,切成長寬高均約為1cm的小塊,加1000mL水中,煮沸20-30min,用4層紗布過濾取濾液,加入10g可溶性淀粉、20g蛋白胨、1.5gKH2PO4和1.0g MgSO4.7H2O定容至1000mL。

本發(fā)明的蛋白胨可替換為同等質(zhì)量的牛肉膏和酵母膏,牛肉膏和酵母膏的質(zhì)量比為1:1。

注意可溶性淀粉在加入時,要邊緩慢加入邊用玻棒攪拌,切不可加入過快,防止溶解不完全。

本發(fā)明的有益效果:

1.本發(fā)明的液體培養(yǎng)基成分簡單易得,成本低廉,蛋白質(zhì)含量高,質(zhì)量好,萌發(fā)速度快。

2.本發(fā)明在蛹蟲草液體培養(yǎng)的基礎(chǔ)上,通過靜止避光培養(yǎng)生成大量氣生菌絲,并形成氣生菌絲層作為支撐蛹蟲草子座的基礎(chǔ);采用液體培養(yǎng)基瓶栽出菇不需要接種到固體培養(yǎng)基上,減少了操作步驟,提高培養(yǎng)效率,延長觀賞期,避免了由液體培養(yǎng)基接種到固體培養(yǎng)基造成的污染,同時避免了培養(yǎng)基質(zhì)由于缺水而導(dǎo)致菇體干枯的現(xiàn)象,使得蛹蟲草子座長時間保持新鮮狀態(tài),顯著提高觀賞價值。

具體實(shí)施方式

為了進(jìn)一步了解本發(fā)明,下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案進(jìn)行描述,但是應(yīng)當(dāng)理解,這些描述只是為進(jìn)一步說明本發(fā)明的特點(diǎn)和優(yōu)點(diǎn)而不是對本發(fā)明專利要求的限制。

實(shí)施例1

一種蛹蟲草液體培養(yǎng)基瓶栽出菇培養(yǎng)方法,是由以下步驟制備得到的:

1)培養(yǎng)基配制:將液體培養(yǎng)基分裝至培養(yǎng)瓶中,透氣封口膜封口,120℃條件下滅菌20min;

2)接種:滅菌完畢,待培養(yǎng)基溫度冷卻至25℃左右,在無菌環(huán)境下,接入3塊 0.4 cm *0.4 cm 大小蛹蟲草斜面母種;

3)液體菌球培養(yǎng):將接種后的培養(yǎng)瓶置于震蕩培養(yǎng)箱中,于轉(zhuǎn)速120r/min、溫度20℃條件下避光培養(yǎng)6d,液體培養(yǎng)基內(nèi)生成大量的菌球;

4)氣生菌絲培養(yǎng):將生成大量菌球的培養(yǎng)瓶置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng),于溫度22℃黑暗條件下靜止培養(yǎng)10d,培養(yǎng)基表面生成氣生菌絲;

5)轉(zhuǎn)色:將生成氣生菌絲每天照射15h,光照強(qiáng)度為200Lx、濕度為60%和溫度為20℃條件下,培養(yǎng)5d,至白色氣生菌絲轉(zhuǎn)化為橘黃色;

6)促原基分化:在無菌環(huán)境下進(jìn)行搔菌處理,白天控制溫度為21℃,夜晚控制溫度為10℃,給以溫差刺激,在光照強(qiáng)度100Lx條件下每天光照14h, 10d后即有大量原基形成;

7)出菇管理:在透氣封口膜上刺6-8個直徑為1cm的小孔,光照強(qiáng)度為200Lx、溫度為20℃和濕度為85%條件下,全天給光,培養(yǎng)5d,即有子座幼體形成;待子座幼體長到1cm以上,溫度控制在18℃,濕度控制在90%,并逐步加強(qiáng)通風(fēng),可促使子座緩慢成長,即可。

所述步驟1)中,液體培養(yǎng)基的裝液量為培養(yǎng)瓶體積的30%。

所述液體培養(yǎng)基的配方為:馬鈴薯為100g/L,可溶性淀粉為10g/L,蛋白胨20g/L,KH2PO4為1.5g/L,MgSO4.7H2O為1.0g/L。

所述液體培養(yǎng)基是由以下步驟制得的:稱100g去皮馬鈴薯,切成長寬高均約為1cm的小塊,加1000mL水中,煮沸20-30min,用4層紗布過濾取濾液,加入10g可溶性淀粉、20g蛋白胨、1.5gKH2PO4和1.0g MgSO4.7H2O定容至1000mL。

實(shí)施例2

一種蛹蟲草液體培養(yǎng)基瓶栽出菇培養(yǎng)方法,是由以下步驟制備得到的:

1)培養(yǎng)基配制:將液體培養(yǎng)基分裝至培養(yǎng)瓶中,透氣封口膜封口,120℃條件下滅菌25min;

2)接種:滅菌完畢,待培養(yǎng)基溫度冷卻至25℃左右,在無菌環(huán)境下,接入2塊0.5 cm *0.5 cm大小蛹蟲草斜面母種;

3)液體菌球培養(yǎng):將接種后的培養(yǎng)瓶置于震蕩培養(yǎng)箱中,于轉(zhuǎn)速120r/min、溫度20℃條件下避光培養(yǎng)7d,液體培養(yǎng)基內(nèi)生成大量的菌球;

4)氣生菌絲培養(yǎng):將生成大量菌球的培養(yǎng)瓶置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng),于溫度21℃黑暗條件下靜止培養(yǎng)13d,培養(yǎng)基表面生成氣生菌絲;

5)轉(zhuǎn)色:將生成氣生菌絲每天照射14h,光照強(qiáng)度為230Lx、濕度為58%和溫度為21℃條件下,培養(yǎng)4d,至白色氣生菌絲轉(zhuǎn)化為橘黃色;

6)促原基分化:在無菌環(huán)境下進(jìn)行搔菌處理,白天控制溫度為20℃,夜晚控制溫度為13℃,給以溫差刺激,在光照強(qiáng)度150Lx條件下每天光照13h,8d后即有大量原基形成;

7)出菇管理:在透氣封口膜上刺6-8個直徑為1cm的小孔,光照強(qiáng)度為230Lx、溫度為21℃和濕度為80%條件下,全天給光,培養(yǎng)5d,即有子座幼體形成;待子座幼體長到1cm以上,溫度控制在19℃,濕度控制在85%,并逐步加強(qiáng)通風(fēng),可促使子座緩慢成長,即可。

所述步驟1)中,液體培養(yǎng)基的裝液量為培養(yǎng)瓶體積的40%。

所述液體培養(yǎng)基的配方為:馬鈴薯為100g/L,可溶性淀粉為10g/L,蛋白胨20g/L,KH2PO4為1.5g/L,MgSO4.7H2O為1.0g/L。

所述液體培養(yǎng)基是由以下步驟制得的:稱100g去皮馬鈴薯,切成長寬高均約為1cm的小塊,加1000mL水中,煮沸20-30min,用4層紗布過濾取濾液,加入10g可溶性淀粉、20g蛋白胨、1.5gKH2PO4和1.0g MgSO4.7H2O定容至1000mL。

實(shí)施例3

一種蛹蟲草液體培養(yǎng)基瓶栽出菇培養(yǎng)方法,是由以下步驟制備得到的:

1)培養(yǎng)基配制:將液體培養(yǎng)基分裝至培養(yǎng)瓶中,透氣封口膜封口,120℃條件下滅菌30min;

2)接種:滅菌完畢,待培養(yǎng)基溫度冷卻至25℃左右,在無菌環(huán)境下,接入2塊0.6cm*0.6cm大小蛹蟲草斜面母種;

3)液體菌球培養(yǎng):將接種后的培養(yǎng)瓶置于震蕩培養(yǎng)箱中,于轉(zhuǎn)速120r/min、溫度20℃條件下避光培養(yǎng)6d,液體培養(yǎng)基內(nèi)生成大量的菌球;

4)氣生菌絲培養(yǎng):將生成大量菌球的培養(yǎng)瓶置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng),于溫度20℃黑暗條件下靜止培養(yǎng)15d,培養(yǎng)基表面生成氣生菌絲;

5)轉(zhuǎn)色:將生成氣生菌絲每天照射13h,光照強(qiáng)度為250Lx、濕度為55%和溫度為22℃條件下,培養(yǎng)5d,至白色氣生菌絲轉(zhuǎn)化為橘黃色;

6)促原基分化:在無菌環(huán)境下進(jìn)行搔菌處理,白天控制溫度為21℃,夜晚控制溫度為15℃,給以溫差刺激,在光照強(qiáng)度200Lx條件下每天光照14h,5d后即有大量原基形成;

7)出菇管理:在透氣封口膜上刺6-8個直徑為1cm的小孔,光照強(qiáng)度為250Lx、溫度為22℃和濕度為75%條件下,全天給光,培養(yǎng)5d,即有子座幼體形成;待子座幼體長到1cm以上,溫度控制在20℃,濕度控制在80%,并逐步加強(qiáng)通風(fēng),可促使子座緩慢成長,即可。

所述步驟1)中,液體培養(yǎng)基的裝液量為培養(yǎng)瓶體積的50%。

所述液體培養(yǎng)基的配方為:馬鈴薯為100g/L,可溶性淀粉為10g/L,蛋白胨20g/L,KH2PO4為1.5g/L,MgSO4.7H2O為1.0g/L。

所述液體培養(yǎng)基是由以下步驟制得的:稱100g去皮馬鈴薯,切成長寬高均約為1cm的小塊,加1000mL水中,煮沸20-30min,用4層紗布過濾取濾液,加入10g可溶性淀粉、20g蛋白胨、1.5gKH2PO4和1.0g MgSO4.7H2O定容至1000mL。

對比例

1)液體培養(yǎng)基配制:將液體培養(yǎng)基分裝至250mL三角瓶中,透氣封口膜封口,120℃溫度下滅菌25min;

所述步驟1)中,液體培養(yǎng)基的裝液量為培養(yǎng)瓶體積的40%。

所述液體培養(yǎng)基的配方為:馬鈴薯為100g/L,可溶性淀粉為10g/L,蛋白胨20g/L,KH2PO4為1.5g/L,MgSO4.7H2O為1.0g/L。

所述液體培養(yǎng)基是由以下步驟制得的:稱100g去皮馬鈴薯,切成長寬高均約為1cm的小塊,加1000mL水中,煮沸20-30min,用4層紗布過濾取濾液,加入10g可溶性淀粉、20g蛋白胨、1.5gKH2PO4和1.0g MgSO4.7H2O定容至1000mL。

2)接種與液體菌種培養(yǎng):滅菌完畢,待培養(yǎng)基溫度冷卻至25℃左右,在無菌環(huán)境下,接入2塊0.5 cm *0.5 cm大小蛹蟲草斜面母種,每瓶接2-3塊0.5cm*0.5 cm大小斜面固體母種;將接種后的培養(yǎng)瓶置于震蕩培養(yǎng)箱中,于轉(zhuǎn)速120r/min、溫度20℃條件下避光培養(yǎng)7d,液體培養(yǎng)基內(nèi)生成大量的菌球;

3)固體培養(yǎng)基的配制:以500m L罐頭瓶為栽培容器,每瓶裝入30g大米和54 mL營養(yǎng)液(即固液比為1︰1.8),用聚丙烯塑料薄膜封口后121℃高壓蒸汽滅菌30min;

所述營養(yǎng)液的配方為:蛋白陳5 g/L,葡萄糖10 g/L,MgSO4.7H2O 0.5 g/L,KH2PO4 1 g/L,VB120mg/L;

4)接種:培養(yǎng)基冷卻至25℃左右后,于無菌環(huán)境下每瓶用移液槍接入5mL液體菌種;

5)發(fā)菌管理:接種后將培養(yǎng)瓶置于20℃溫度、 65%濕度條件下,避光培養(yǎng)20d左右,菌絲長滿固體培養(yǎng)基;

6)轉(zhuǎn)色與促原基分化:將步驟5)得到的培養(yǎng)瓶進(jìn)行全天24 h光照,刺激菌絲轉(zhuǎn)色,保持溫度20℃、空氣濕度70%左右;轉(zhuǎn)色后,根據(jù)品種的特性決定是否采取搔菌處理,白天控制溫度為20℃,夜晚控制溫度為13℃,給以溫差刺激,在光照強(qiáng)度150Lx條件下每天光照13h,每天早、中、晚各通風(fēng)20min左右, 10d左右料面出現(xiàn)米粒大小原基。

7)出菇管理:原基出現(xiàn)后,在聚丙烯塑料薄膜上刺6-8個直徑為1cm的小孔,光照強(qiáng)度為230Lx、溫度為21℃和相對濕度為80%條件下,每天進(jìn)行12h以上光照;待子座長幼體到3-5 cm,將溫度調(diào)整到19℃、濕度控制在85%,并逐步加強(qiáng)通風(fēng)透氣,確??諝庑迈r,期間保持光照即可。

性能測試

對實(shí)施例1-3和對比例1的培養(yǎng)方法進(jìn)行對比,結(jié)果如表1所示。

表中所述的培養(yǎng)期為從液體菌種接種到子座幼體形成;所述的觀賞期為從子座幼體到子座干枯。

表1 測試結(jié)果

以上對本發(fā)明的具體實(shí)施方式進(jìn)行了描述,但本發(fā)明并不限于以上描述。對于本領(lǐng)域的技術(shù)人員而言,任何對一種蛹蟲草液體培養(yǎng)基瓶栽出菇培養(yǎng)方法進(jìn)行的同等修改和替代都是在本發(fā)明的范圍之中。因此,在不脫離本發(fā)明的精神和范圍下所做出的均等變換和修改,都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的范圍內(nèi)。

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