發(fā)明領(lǐng)域

本文提供一些烷基雜芳基-二氨基嘧啶基化合物、包含有效量的這樣的化合物的組合物、及用于治療或預(yù)防PKC-θ介導(dǎo)的病癥的方法，所述方法包括向需要其的對(duì)象施用有效量的這樣的烷基雜芳基-二氨基嘧啶基化合物。

背景技術(shù)：

已知異常蛋白磷酸化和疾病的病因或結(jié)果之間的聯(lián)系超過(guò)20年。因此，蛋白激酶已成為一組非常重要的藥物靶標(biāo)。[參見(jiàn)Cohen，Nature，1：309-315(2002)，Gaestel et al.Curr.Med.Chem.14：2214-223(2007)；Grimminger et al.Nat.Rev.Drug Disc.9(12)：956-970(2010)]。多種蛋白激酶抑制劑已在臨床上用于治療多種疾病，比如癌癥和慢性炎性疾病，包括類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和銀屑病。[參見(jiàn)Cohen，Eur.J.Biochem.，268：5001-5010(2001)；Protein Kinase Inhibitors for the Treatment of Disease：The Promise and the Problems，Handbook of Experimental Pharmacology，Springer Berlin Heidelberg，167(2005)]。

對(duì)蛋白激酶通路的復(fù)雜性和各種蛋白激酶和激酶通路之中和之間的關(guān)系和相互作用的復(fù)雜性的闡明強(qiáng)調(diào)了開(kāi)發(fā)能夠充當(dāng)對(duì)多種激酶或多種激酶通路具有有益活性的蛋白激酶調(diào)節(jié)劑(modulator)、調(diào)控劑(regulator)或抑制劑的藥物。因此，仍需要新的激酶調(diào)節(jié)劑。

蛋白激酶C(PKC)家族是一組涵蓋十二個(gè)相關(guān)同工酶的絲氨酸/蘇氨酸激酶。PKC在大量組織和細(xì)胞類(lèi)型中表達(dá)。PKC同工酶可以分為三組。I組(典型的PKC)包括Ca²⁺和DAG(二酰甘油)依賴(lài)性同工酶：PKC-α、PKC-βI、PKC-βII和PKC-γ。II組(新的PKC)包括Ca²⁺非依賴(lài)性同工酶：PKC-δ(或PKC-delta)、PKC-ε、PKC-η(或PKC-eta)和PKC-θ(或PKC-θ)。III組(非典型性的PKC)包括Ca²⁺和DAG非依賴(lài)性同工酶：PKC-ι、PKC-ζ和PKC-μ(蛋白激酶D)。蛋白激酶C的PKC-θ同工型在T淋巴細(xì)胞中選擇性表達(dá)，并且在成熟T細(xì)胞的T細(xì)胞抗原受體(TCR)-觸發(fā)的活化和隨后釋放細(xì)胞因子比如IL-2和T細(xì)胞增殖中起重要作用(Isakov and Altman，Annu. Rev.Immunol.，2002，20，761-94)。已經(jīng)確認(rèn)T細(xì)胞在調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)中起重要作用(Powrie and Coffman，Immunology Today，1993，14，270)，并且T細(xì)胞的活化通常是多種免疫學(xué)病癥的起始事件。當(dāng)經(jīng)由TCR活化時(shí)，T細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子(包括IL-2)，導(dǎo)致細(xì)胞增殖、分化和效應(yīng)子功能。用IL-2抑制劑的臨床研究已經(jīng)表明在體內(nèi)干擾T細(xì)胞活化和增殖能有效地抑制免疫反應(yīng)(Waldmann，Immunology Today，1993，14，264)。因此，抑制T淋巴細(xì)胞活化和隨后細(xì)胞因子產(chǎn)生的試劑治療性用于選擇性地抑制需要這種免疫抑制的患者中的免疫反應(yīng)，因此用于治療免疫病癥比如自身免疫疾病和炎性疾病。PKC-θ活化也與白血病有關(guān)，因此PKC-θ的抑制劑可以用于治療白血病(Villalba and Altman，Current Cancer Targets，2002，2，125)。

然而，PKC-Δ與PKC-θ密切相關(guān)，其顯示出不同的組織表達(dá)模式且具有獨(dú)特的細(xì)胞功能。雖然PKC-θ在T-淋巴細(xì)胞、NK細(xì)胞中高度表達(dá)且在骨骼肌中以較少范圍表達(dá)時(shí)，但是PKC-δ在骨髓細(xì)胞和B-淋巴細(xì)胞中高度表達(dá)(ExPasy database；PRKCT and PRKCD)。PKC-δ對(duì)于調(diào)節(jié)B-細(xì)胞耐受性很重要，因此缺乏PKC-δ的小鼠顯示出遞增量的自我反應(yīng)性B-細(xì)胞，高(elevated)IL-6表達(dá)核抗原的自身抗體，且顯示出狼瘡樣病理(Mecklenbrauker et al.，Nature，2002，416，860-865；Miyamoto et al.，Nature，2002，416，865-869)。此外，具有幼年發(fā)作型狼瘡的同胞的遺傳檢測(cè)鑒別了PKC-δ(PRCKD)基因的突變(Belot et al.，Arthritis&Rheumatism，2013，65，2161-2165)。為此，抑制PKC-δ可能在自身免疫疾病的治療中是不利的，避免長(zhǎng)期抑制該酶是合理的。之前，在急性治療局部缺血-再灌注損傷的背景下，已臨床評(píng)價(jià)了為了治療而選擇性抑制PKC-δ(delcasertib；Kai Pharmaceuticals)。

仍需要開(kāi)發(fā)用于與PKC-θ的活化有關(guān)的大部分疾病和病癥的有效治療劑(Chaudhary and Kasaian，Curr Opin Investig Dmgs 20067(5)：432-437；Zhang，E.Y，Kong，K.，and Altman，A.，Adv Pharmacol 2013，Vol 66，267-312；Chand，S.，et.Al.Curr Pharmaceut Design 212，Vol 18(30)：4725-4746)。因此，提供用作PKC-θ的選擇性抑制劑的安全有效的化合物，且因此治療與PKC-θ的活化有關(guān)的病癥和疾病將是有益的。特別地，仍需要有效的治療劑，其是PKC-θ的選擇性抑制劑，而不會(huì)影響PKC家族的其它成員，比如PKC-δ和/或PKC-eta。

在本申請(qǐng)的第2節(jié)中任何參考文獻(xiàn)的引用或確定都不應(yīng)解釋為承認(rèn)該參考文獻(xiàn)為本申請(qǐng)的現(xiàn)有技術(shù)。

發(fā)明簡(jiǎn)述

本文提供具有下式(I)的化合物：

或其可藥用鹽、互變異構(gòu)體、同位素體或立體異構(gòu)體，其中：L、X、R¹和R²如本文定義的。

在一個(gè)方面，本文提供如本公開(kāi)內(nèi)容所述的二氨基嘧啶基化合物，比如例如式(I)的化合物、或來(lái)自表1或表2的化合物、或其可藥用鹽、互變異構(gòu)體、同位素體或立體異構(gòu)體。

在一個(gè)方面，本文提供藥物組合物，包含有效量的如本文所述的二氨基嘧啶基化合物及可藥用載體、賦形劑或溶媒。在某些實(shí)施方案中，藥物組合物適于口服、腸胃外、粘膜、透皮或局部施用。

在一個(gè)方面，本文提供用于治療或預(yù)防PKC-θ介導(dǎo)的病癥的方法或化合物，比如移植物抗宿主疾病、器官移植排斥反應(yīng)、銀屑病、迪謝內(nèi)肌營(yíng)養(yǎng)不良、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、糖尿病、胰島素抗性、重癥肌無(wú)力、多發(fā)性硬化癥、結(jié)腸炎、銀屑病關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)直性脊柱炎、特應(yīng)性皮炎、干燥綜合癥(Sjogren syndrome)、哮喘或狼瘡，其中所述方法包括向需要其的對(duì)象施用有效量的如本文所述的二氨基嘧啶基化合物。

在一個(gè)方面，本文提供用于在表達(dá)激酶的細(xì)胞中抑制所述激酶(例如PKC-θ)的方法，包括用有效量的如本文所述的二氨基嘧啶基化合物接觸所述細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，二氨基嘧啶基化合物相對(duì)于PKC-δ選擇性地抑制PKC-θ。在其它這樣的實(shí)施方案中，所述二氨基嘧啶基化合物相對(duì)于PKC-δ和/或PKC-eta選擇性地抑制PKC-θ。

在另一個(gè)方面，本文提供用于制備如本文所述的二氨基嘧啶基化合物的方法。

通過(guò)參照詳細(xì)說(shuō)明和實(shí)例可以更充分地理解本發(fā)明的實(shí)施方案，該詳細(xì)說(shuō)明和實(shí)例旨在舉例說(shuō)明非限制性實(shí)施方案。

詳細(xì)說(shuō)明

定義

“烷基”基團(tuán)是具有1至10個(gè)碳原子，通常地1至8個(gè)碳，或在一些實(shí)施方案中中，1至6個(gè)、1至4個(gè)或2至6個(gè)碳原子的飽和、部分飽和或不飽和直鏈或支鏈非環(huán)狀烴。代表性的烷基包括-甲基、-乙基、-正-丙基、-正丁基、-正戊基和-正己基；而飽和的支鏈烷基包括-異丙基、-仲丁基、-異丁基、-叔丁基、異戊基、-新戊基、-叔戊基、-2-甲基戊基、-3-甲基戊基、-4-甲基戊基、2，3-二甲基丁基等。不飽和的烷基的實(shí)例包括，但不限于乙烯基、烯丙基、-CH＝CH(CH₃)、-CH＝C(CH₃)₂、-C(CH₃)＝CH₂、-C(CH₃)＝CH(CH₃)、-C(CH₂CH₃)＝CH₂、-C≡CH、-C≡C(CH₃)、-C≡C(CH₂CH₃)、-CH₂C≡CH、-CH₂C≡C(CH₃)和-CH₂C≡C(CH₂CH₃)等。烷基可以是取代的或未取代的。當(dāng)本文所述烷基被認(rèn)為是“取代的”時(shí)，它們可以用任何取代基取代：如本文所述示例性的化合物和實(shí)施方案中存在的那些取代基，以及鹵素(氯、碘、溴或氟)；烷基；羥基；烷氧基；烷氧基烷基；氨基；烷基氨基；羧基；硝基；氰基；硫醇；硫醚；亞胺；二酰亞胺；脒；胍；烯胺；氨基羰基；酰氨基；膦酸酯；膦；硫代羰基；亞磺?；豁?；磺酰胺；酮；醛；酯；脲；尿烷；肟；羥胺；烷氧基胺；芳烷氧基胺；N-氧化物；肼；酰肼；腙；疊氮化物；異氰酸酯；異硫氰酸酯；氰酸酯；硫氰酸酯；B(OH)₂或O(烷基)氨基羰基。

“環(huán)烷基”基團(tuán)為具有單個(gè)環(huán)狀環(huán)或多個(gè)稠環(huán)或橋環(huán)的3至10個(gè)碳原子的飽和的或部分飽和的環(huán)狀烴基，其可以任選地被1至3個(gè)烷基取代。在某些實(shí)施方案中，環(huán)烴基具有3至8個(gè)環(huán)成員，而在其他實(shí)施方式中，環(huán)碳原子的數(shù)目范圍為3至5、3至6或3至7。舉例來(lái)說(shuō)，這樣的環(huán)烷基包括單環(huán)結(jié)構(gòu)，比如環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基、環(huán)辛基、1-甲基環(huán)丙基、2-甲基環(huán)戊基、2-甲基環(huán)辛基等；或多環(huán)或橋環(huán)結(jié)構(gòu)，比如1-二環(huán)[1.1.1]戊基、二環(huán)[2.1.1]己基、二環(huán)[2.2.1]庚基、二環(huán)[2.2.2]辛基、金剛烷基等。不飽和的環(huán)烷基的實(shí)例包括環(huán)己烯基、環(huán)戊烯基、環(huán)己二烯基、丁二烯基、戊二烯基、己二烯基等。環(huán)烷基可以是取代的或未取代的。舉例來(lái)說(shuō)，這樣的取代的環(huán)烷基包括環(huán)己酮等。

“芳基”是具有單個(gè)環(huán)(例如，苯基)或多個(gè)稠環(huán)(例如，萘基或蒽基)的6至14個(gè)碳原子的芳族碳環(huán)基。在某些實(shí)施方案中，芳基基團(tuán)在基團(tuán)的環(huán)部分包含6-14個(gè)碳，在其他實(shí)施方案中包含6至12個(gè)或甚至6至10個(gè)碳原子。特定的芳基包括苯基、聯(lián)苯基、萘基等。芳基可以是取代的或未取代的。短語(yǔ)“芳基基團(tuán)”也包括含有稠環(huán)的基團(tuán)，比如稠合芳族-脂族環(huán)系統(tǒng)(例如，茚滿(mǎn)基、四氫萘基等)。

“雜芳基”是在雜芳族環(huán)系統(tǒng)中具有1至4個(gè)雜原子作為環(huán)原子的芳環(huán)系統(tǒng)，其中其余原子為碳原子。在某些實(shí)施方案中，雜芳基在基團(tuán)的環(huán)部分中含有3至6個(gè)環(huán)原子，在其他實(shí)施方案中含有6至9個(gè)或甚至6至10個(gè)原子。合適的雜原子包括氧、硫和氮。在某些實(shí)施方案中，雜芳基環(huán)系統(tǒng)為單環(huán)或雙環(huán)。非限制性實(shí)例包括但不限于下述基團(tuán)：比如吡咯基、吡唑基、咪唑基、三唑基、四唑基、噁唑基、異噁唑基、苯并異噁唑基(例如，苯并[d]異噁唑基)、噻唑基、吡咯基、噠嗪基、嘧啶基、吡嗪基、噻吩基、苯并噻吩基、呋喃基、苯并呋喃基、吲哚基(例如，吲哚基-2-酮基或異二氫吲哚-1-酮基)、氮雜吲哚基(吡咯并吡啶基或1H-吡咯并[2，3-b]吡啶基)、吲唑基、苯并咪唑基(例如，1H-苯并[d]咪唑基)、咪唑并吡啶基(例如，氮雜苯并咪唑基或1H-咪唑并[4，5-b]吡啶基)、吡唑并吡啶基、三唑并吡啶基、苯并三唑基(例如，1H-苯并[d][1，2，3]三唑基)、苯并噁唑基(例如，苯并[d]噁唑基)、苯并噻唑基、苯并噻二唑基、異噁唑并吡啶基、噻萘基、嘌呤基、黃嘌呤基、腺嘌呤基、鳥(niǎo)嘌呤基、喹啉基、異喹啉基(例如，3，4-二氫異喹啉-1(2H)-酮基)、四氫喹啉基、喹喔啉基和喹唑啉基。

“雜環(huán)基”是其中一至四個(gè)環(huán)原子被選自O(shè)、S和N的雜原子獨(dú)立地替代的芳族(也稱(chēng)為雜芳基)或非芳族環(huán)烷基。在某些實(shí)施方案中，雜環(huán)基基團(tuán)包括3至10個(gè)環(huán)成員，而其他這樣的基團(tuán)具有3至5個(gè)、3至6個(gè)或3至8個(gè)環(huán)成員。雜環(huán)基也可以在任何環(huán)原子處(即，在雜環(huán)環(huán)的任何碳原子或雜原子處)結(jié)合其他基團(tuán)。雜環(huán)烷基基團(tuán)可以是取代的或未取代的。雜環(huán)基基團(tuán)包括不飽和、部分飽和及飽和環(huán)系統(tǒng)，比如例如，咪唑基、咪唑啉基和咪唑烷基(例如，咪唑啉-4-酮或咪唑啉-2，4-二酮基)基團(tuán)。短語(yǔ)雜環(huán)基包括稠環(huán)類(lèi)，包括包含稠合芳族和非芳族基團(tuán)的那些，比如例如1-和2-氨基四氫化萘、苯并三唑基(例如，1H-苯并[d][1，2，3]三唑基)、苯并咪唑基(例如，1H-苯并[d]咪唑基)、2，3-二氫苯并[1，4]二氧雜環(huán)己烯基和苯并[1，3]間二氧雜環(huán)戊烯基。該短語(yǔ)也包括含有雜原子的橋接多環(huán)環(huán)系統(tǒng)，比如但不限于奎寧環(huán)基。雜環(huán)基基團(tuán)的代表性實(shí)例包括但不限于，氮丙啶基、氮雜環(huán)丁烷基、氮雜環(huán)庚烷基、氧雜環(huán)丁烷基、吡咯烷基、咪唑烷基(例如咪唑啉-4-酮基或咪唑啉-2，4-二酮基)、吡唑烷基、噻唑烷基、四氫噻吩基、四氫呋喃基、間二氧雜環(huán)戊烯基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、吡咯啉基、咪唑基、咪唑啉基、吡唑基、吡唑啉基、三唑基、四唑基、噁唑基、異噁唑基、苯并異噁唑基(例如，苯并[d]異噁唑基)、噻唑基、噻唑啉基、異噻唑基、噻二唑基、噁二唑基、哌啶基、哌嗪基(例如，哌嗪-2-酮基)、嗎啉基、硫代嗎啉基、四氫吡喃基(例如，四氫-2H-吡喃基)、四氫噻喃基、氧硫雜環(huán)已烷(oxathianyl)、二噁烷基(dioxyl)、二噻烷基、吡喃基、吡啶基、嘧啶基、噠嗪基、吡嗪基、三嗪基、二氫吡啶基、二氫二噻英基(dihydrodithiinyl)、二氫二亞硫?；?、1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷基、高哌嗪基、奎寧基、吲哚基(例如，吲哚-2-酮基或異二氫吲哚-1-酮基)、二氫吲哚基、異吲哚基、異二氫吲哚基、氮雜吲哚基(吡咯并吡啶基或1H-吡咯并[2，3-b]吡啶基)、吲唑基、吲嗪基、苯并三唑基(例如，1H-苯并[d][1，2，3]三唑基)、苯并咪唑基(例如，1H-苯并[d]咪唑基或1H-苯并[d]咪唑-2(3H)-酮基)、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并噻唑基、苯并噁二唑基、苯并噁嗪基、苯并二噻英基(benzodithiinyl)、苯并噁噻英基、苯并噻嗪基、苯并噁唑基(即，苯并[d]噁唑基))、苯并噻唑基、苯并噻二唑基、苯并[1，3]間二氧雜環(huán)戊烯基、吡唑并吡啶基(例如，1H-吡唑并[3，4-b]吡啶基、1H-吡唑并[4，3-b]吡啶基)、咪唑并吡啶基(例如，氮雜苯并咪唑基或1H-咪唑并[4，5-b]吡啶基)、三唑并吡啶基、異噁唑并吡啶基、嘌呤基、黃嘌呤基、腺嘌呤基、鳥(niǎo)嘌呤基、喹啉基、異喹啉基(例如，3，4-二氫異喹啉-1(2H)-酮基)、喹嗪基、喹喔啉基、喹唑啉基、噌啉基、酞嗪基、萘啶基、蝶啶基、噻萘基、二氫苯并噻嗪基、二氫苯并呋喃基、二氫吲哚基、二氫苯并二噁烯基、四氫吲哚基、四氫吲唑基、四氫苯并咪唑基、四氫苯并三唑基、四氫吡咯并吡啶基、四氫吡唑并吡啶基、四氫咪唑并吡啶基、四氫三唑并吡啶基、四氫嘧啶-2(1H)-酮和四氫喹啉基。代表性的非芳族雜環(huán)基基團(tuán)不包括那些包括稠合芳香基的稠環(huán)種類(lèi)。非芳族雜環(huán)基基團(tuán)的實(shí)例包括氮丙啶基、氮雜環(huán)丁烷基、氮雜環(huán)庚烷基、吡咯烷基、咪唑烷基(例如，咪唑烷基-4-酮基或咪唑啉-2，4-二酮基)、吡唑烷基、噻唑烷基、四氫噻吩基、四氫呋喃基、哌啶基、哌嗪基(例如，哌嗪-2-酮基)、嗎啉基、硫代嗎啉基、四氫吡喃基(例如，四氫-2H-吡喃基)、四氫噻喃基、氧雜噻烷基、二噻烷基、1，4-二氧雜螺[4.5]癸烷基、高哌嗪基、奎寧環(huán)基或四氫嘧啶-2(1H)-酮。代表性的取代的雜環(huán)基基團(tuán)可以是單取代的或被取代一次以上，比如例如但不限于，吡啶基或嗎啉基，其為2-、3-、4-、5-或6-取代，或被各種取代基比如以下列出的那些二取代。

“環(huán)烷基烷基”基團(tuán)是式：-烷基-環(huán)烷基的基團(tuán)，其中烷基和環(huán)烷基為如上定義的。取代的環(huán)烷基烷基可以在基團(tuán)的烷基、環(huán)烷基或烷基和環(huán)烷基部分兩者處被取代。代表性的環(huán)烷基烷基基團(tuán)包括，但不限于甲基環(huán)丙基、甲基環(huán)丁基、甲基環(huán)戊基、甲基環(huán)己基、乙基環(huán)丙基、乙基環(huán)丁基、乙基環(huán)戊基、乙基環(huán)己基、丙基環(huán)戊基、丙基環(huán)己基等。

“芳烷基”基團(tuán)是式：-烷基-芳基的基團(tuán)，其中烷基和芳基為上述定義的。取代的芳烷基可以在基團(tuán)的烷基、芳基或烷基和芳基部分兩者處被取代。代表性的芳烷基包括，但不限于芐基和苯乙基和稠合的(環(huán)烷基芳基)烷基，比如4-乙基-茚滿(mǎn)基。

“雜環(huán)基烷基”基團(tuán)是式：-烷基-雜環(huán)基的基團(tuán)，其中烷基和雜環(huán)基為上述定義的。取代的雜環(huán)基烷基可以在基團(tuán)的烷基、雜環(huán)基或烷基和雜環(huán)基部分兩者處被取代。代表性的雜環(huán)基烷基包括，但不限于4-乙基-嗎啉基、4-丙基嗎啉基、呋喃-2-基甲基、呋喃-3-基甲基、吡啶-3-基甲基、四氫呋喃-2-基乙基和吲哚-2-基丙基。

“鹵素”為氟、氯、溴或碘。

“羥烷基”基團(tuán)是被一個(gè)或多個(gè)羥基取代的如上所述烷基。

“烷氧基”是-O-(烷基)，其中烷基為上述定義的。

“烷氧基烷基”基團(tuán)是-(烷基)-O-(烷基)，其中烷基為上述定義的。

“氨基”基團(tuán)是式：-NH₂的基團(tuán)。

“烷氨基”基團(tuán)是式：-NH-烷基或-N(烷基)₂的基團(tuán)，其中每個(gè)烷基獨(dú)立地如上定義的。

“羧基”基團(tuán)是式：-C(O)OH的基團(tuán)。

“氨基羰基”基團(tuán)是式：-C(O)N(R^#)₂、-C(O)NH(R^#)或-C(O)NH₂的基團(tuán)，其中每個(gè)R^#獨(dú)立地為取代的或未取代的如本文定義的烷基、環(huán)烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)基或雜環(huán)基。

“酰氨基”基團(tuán)是式：-NHC(O)(R^#)或-N(烷基)C(O)(R^#)的基團(tuán)，其中每個(gè)烷基和R#_獨(dú)立地為如上定義的。

“磺酰氨基”基團(tuán)是式：-NHSO₂(R^#)或-N(烷基)SO₂(R^#)的基團(tuán)，其中每個(gè)烷基和R#_為上述定義的。

“脲”基團(tuán)是式：-N(烷基)C(O)N(R^#)₂，、-N(烷基)C(O)NH(R^#)，-N(烷基)C(O)NH₂，、-NHC(O)N(R^#)₂、-NHC(O)NH(R^#)或-NH(CO)NHR^#的基團(tuán)，其中每個(gè)烷基和R^#獨(dú)立地為如上定義的。

當(dāng)本文所述的除烷基之外的化合物稱(chēng)為“取代的”時(shí)，其可以被任何適合的取代基或多個(gè)取代基取代。取代基的說(shuō)明性實(shí)例是在本文所公開(kāi)的示例性化合物和實(shí)施方案中可見(jiàn)的那些，以及鹵素(氯、碘、溴或氟)；烷基；羥基；烷氧基；烷氧基烷基；氨基；烷氨基；羧基；硝基；氰基；硫醇；硫醚；亞胺；酰亞胺；脒；胍；烯胺；氨基羰基；酰胺基；膦酸基；膦；硫代羰基；亞磺?；豁?；磺酰胺；酮；醛；酯；脲；尿烷；肟；羥胺；烷氧基胺；芳烷氧基胺；N-氧化物；肼；酰肼；腙；疊氮化物；異氰酸酯；異硫氰酸酯；氰酸酯；硫氰酸酯；氧(＝O)；B(OH)₂、O(烷基)氨基羰基；環(huán)烷基，其可以是單環(huán)或稠合或非稠合多環(huán)(例如，環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基或環(huán)己基)；或雜環(huán)基，其可以是單環(huán)或稠合或非稠合多環(huán)(例如，吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、嗎啉基或噻嗪基)；單環(huán)或稠合或非稠合多環(huán)基或雜芳基(例如，苯基、萘基、吡咯基、吲哚基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噁唑基、異噁唑基、噻唑基、三唑基、四唑基、吡唑基、吡啶基、喹啉基、異喹啉基、吖啶基、吡嗪基、噠嗪基、嘧啶基、苯并咪唑基、苯并噻吩基或苯并呋喃基)；芳氧基；芳烷氧基；雜環(huán)基氧基；和雜環(huán)基烷氧基。

如本文使用的術(shù)語(yǔ)“二氨基嘧啶基化合物”指式(I)的化合物，以及本文提供的進(jìn)一步實(shí)施方案。在一個(gè)實(shí)施方案中，“二氨基嘧啶基化合物”為表1或2中列出的化合物。術(shù)語(yǔ)“二氨基嘧啶基化合物”包括本文提供的化合物的可藥用鹽、互變異構(gòu)體、同位素體和立體異構(gòu)體。

此處所用的術(shù)語(yǔ)“可藥用鹽”指由可藥用無(wú)毒的酸或堿(包括無(wú)機(jī)酸和堿以及有機(jī)酸和堿)制備的鹽。式(I)的化合物的合適的可藥用堿加成鹽包括但不限于由鋁、鈣、鋰、鎂、鉀、鈉和鋅制成的金屬鹽，或由賴(lài)氨酸、N，N’-二芐基乙二胺、氯普魯卡因、膽堿、二乙醇胺、乙二胺、葡甲胺(N-甲基葡糖胺)和普魯卡因制成的有機(jī)鹽。合適的無(wú)毒酸包括，但不限于無(wú)機(jī)酸和有機(jī)酸，比如乙酸、海藻酸、鄰氨基苯甲酸、苯磺酸、苯甲酸、樟腦磺酸、檸檬酸、乙磺酸、甲酸、富馬酸、糠酸、半乳糖醛酸、葡糖酸、葡糖醛酸、谷氨酸、乙醇酸、氫溴酸、鹽酸、羥乙磺酸、乳酸、馬來(lái)酸、蘋(píng)果酸、扁桃酸、甲磺酸、粘液酸、硝酸、撲酸、泛酸、苯乙酸、磷酸、丙酸、水楊酸、硬脂酸、琥珀酸、對(duì)氨基苯磺酸、硫酸、酒石酸和對(duì)甲苯磺酸。特定的無(wú)毒酸包括鹽酸、氫溴酸、馬來(lái)酸、磷酸、硫酸和甲磺酸。因此，特定鹽的實(shí)例包括鹽酸鹽和甲磺酸鹽。其他的鹽是本領(lǐng)域熟知的，參見(jiàn)例如，Remington’s Pharmaceutical Sciences，18^th eds.，Mack Publishing，Easton PA(1990)or Remington：The Science and Practice of Pharmacy，第19版.，Mack Publishing，Easton PA(1995)。

如本文所使用且除非另有說(shuō)明，否則術(shù)語(yǔ)“立體異構(gòu)體”或“立體異構(gòu)純”是指二氨基嘧啶基化合物的一種立體異構(gòu)體，其基本上不含該化合物的其他立體異構(gòu)體。例如，具有一個(gè)手性中心的立體異構(gòu)純化合物將基本上不含該化合物的相反對(duì)映異構(gòu)體。具有兩個(gè)手性中心的立體異構(gòu)純化合物將基本上不含該化合物的其他非對(duì)映異構(gòu)體。典型的立體異構(gòu)體純的化合物包含大于約80％重量的化合物的一種立體異構(gòu)體和少于約20％重量的該化合物的其它立體異構(gòu)體、大于約90％重量的化合物的一種立體異構(gòu)體和少于約10％％重量的該化合物的其它立體異構(gòu)體、大于約95％重量的化合物的一種立體異構(gòu)體和少于約5％重量的該化合物的其它立體異構(gòu)體、或大于約97％重量的化合物的一種立體異構(gòu)體和少于約3％重量的該化合物的其它立體異構(gòu)體。二氨基嘧啶基化合物可以具有手性中心并且可以作為外消旋體、單個(gè)對(duì)映異構(gòu)體或非對(duì)映異構(gòu)體及其混合物存在。所有這種異構(gòu)形式均包括在本文公開(kāi)的實(shí)施方案中，包括其混合物。

這樣的二氨基嘧啶基化合物的立體異構(gòu)純形式的使用，以及那些形式的混合物的使用涵蓋在本文公開(kāi)的實(shí)施方案中。例如，包含等量或不等量的特定二氨基嘧啶基化合物的對(duì)映異構(gòu)體的混合物可用于本文公開(kāi)的方法和組合物中。這些異構(gòu)體可以經(jīng)不對(duì)稱(chēng)合成或使用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)比如手性柱或手性拆分劑來(lái)拆分。參見(jiàn)例如Jacques，J.，et al.，Enantiomers，Racemates and Resolutions(Wiley-Interscience，New York，1981)；Wilen，S.H.，et al.，Tetrahedron 33：2725(1977)；Eliel，E.L.，Stereochemistry of Carbon Compounds(McGraw-Hill，NY，1962)；and Wilen，S.H.，Tables of Resolving Agents and Optical Resolutions p.268(E.L Eliel，Ed.，Univ.of Notre Dame Press，Notre Dame，IN，1972)。

也應(yīng)注意，二氨基嘧啶基化合物可以包括E和Z異構(gòu)體或其混合物，以及順式和反式異構(gòu)體或其混合物。在某些實(shí)施方案中，二氨基嘧啶基化合物分離為E或Z異構(gòu)體。在其他實(shí)施方案中，二氨基嘧啶基化合物是E和Z異構(gòu)體的混合物。

“互變異構(gòu)體”是指彼此平衡的化合物的異構(gòu)形式。異構(gòu)形式的濃度將取決于化合物存在的環(huán)境，并且可以根據(jù)例如化合物是否為固體或在有機(jī)或水性溶液中而不同。例如，在水性溶液中，吡唑可以顯示下述異構(gòu)形式，其稱(chēng)為彼此的互變異構(gòu)體：

如本領(lǐng)域技術(shù)人員容易地理解的，多種官能團(tuán)和其他結(jié)構(gòu)可以顯示互變異構(gòu)現(xiàn)象，并且式(I)的化合物的所有互變異構(gòu)體都在本發(fā)明的范圍內(nèi)。

也應(yīng)注意，二氨基嘧啶基化合物可以在一個(gè)或多個(gè)原子處含有非天然比例的原子同位素。例如，化合物可以使用放射性同位素進(jìn)行放射性標(biāo)記，所述放射性同位素比如例如氚(³H)、碘-125(¹²⁵I)、硫-35(³⁵S)，或碳-14(¹⁴C)或可以是同位素富集的，比如使用氘(²H)、碳-13(¹³C)或氮-15(¹⁵N)進(jìn)行同位素富集。如本文所使用的，“同位素體(isotopologue)”是同位素富集的化合物。術(shù)語(yǔ)“同位素富集的”指具有不同于原子的天然同位素組成的同位素組成的原子?！巴凰馗患摹币部梢灾负兄辽僖环N不同于原子的天然同位素組成的同位素組成的原子的化合物。術(shù)語(yǔ)“同位素組成”指給定的原子存在的每種同位素的量。放射性標(biāo)記和同位素富集的化合物可用作治療劑，例如，癌癥和炎癥治療劑、研究試劑(例如，結(jié)合分析試劑)和診斷試劑(例如，體內(nèi)成像劑)。如本文所述的二氨基嘧啶基化合物的所有同位素變體，無(wú)論是否具有放射性，都旨在涵蓋在本文提供的實(shí)施方案的范圍內(nèi)。在某些實(shí)施方案中，提供了二氨基嘧啶基化合物的同位素體，例如，同位素體為氘、碳-13或氮-15富集的二氨基嘧啶基化合物。

應(yīng)當(dāng)理解，獨(dú)立于每個(gè)L、X、R¹或R²、立體異構(gòu)或同位素組成的取代基的選擇，本文所述的每個(gè)二氨基嘧啶基化合物可以以任何本文討論的可藥用鹽形式提供。同樣地，應(yīng)當(dāng)理解，同位素組成可以與本文所述每個(gè)二氨基嘧啶基化合物的立體異構(gòu)組成獨(dú)立地變化。進(jìn)一步，同位素組成，雖然限于相應(yīng)的二氨基嘧啶基化合物或其鹽中存在的那些元素，可以以不同方式獨(dú)立于每個(gè)L、X、R¹或R²的取代基選擇或相應(yīng)的二氨基嘧啶基化合物的可藥用鹽選擇而變化。

應(yīng)當(dāng)注意，如果描述的結(jié)構(gòu)和結(jié)構(gòu)給出的名稱(chēng)之間存在矛盾，則以描述的結(jié)構(gòu)為準(zhǔn)。

如本文使用的“抑制”指在二氨基嘧啶基化合物的存在下指定活性(例如，激酶或磷酸化活性)的特定反應(yīng)相對(duì)地降低。激酶活性(例如PKC-θ活性)的抑制可以通過(guò)本文所屬生化分析來(lái)確定。

如本文使用的“選擇性的”或“選擇性地”指對(duì)于特定靶標(biāo)(例如激酶比如PKC-θ)具有優(yōu)于其它靶標(biāo)(例如激酶比如PKC-δ和/或PKC-eta)的活性?xún)?yōu)先性，其可以基于證實(shí)激酶活性的分析，如本文所公開(kāi)的生化分析來(lái)定量。通過(guò)比較其在相應(yīng)靶標(biāo)的IC₅₀(或者，如果使用生物體測(cè)定，EC₅₀或ED₅₀)確定二氨基嘧啶基化合物的選擇性。例如，具有對(duì)于PKC-δ而言50nM的IC₅₀且對(duì)于PKC-θ而言10nM的IC₅₀的二氨基嘧啶基化合物具有對(duì)于PKC-δ相對(duì)于PKC-θ的選擇比為5：1，或其對(duì)于PKC-θ的選擇性為相對(duì)于PKC-δ的5倍。在某些實(shí)施方案中，二氨基嘧啶基化合物對(duì)于PKC-θ的選擇性為相對(duì)于PKC-δ的約5倍、約10倍、約15倍、約20倍、約50倍、約100倍、約150倍、約200倍、約250倍、約300倍或約500倍。在其它實(shí)施方案中，二氨基嘧啶基化合物對(duì)于PKC-θ的選擇性為相對(duì)于PKC-δ和PKC-eta的約5倍、約10倍、約15倍、約20倍、約50倍、約100倍、約150倍、約200倍、約250倍、約300倍或約500倍。

已經(jīng)報(bào)道了PKC-θ在病癥中的作用。例如，PKC-θ介導(dǎo)的病癥包括銀屑病(Skvara et al.，J Clin Invest.2008；118(9)：3151-3159)、迪謝內(nèi)肌營(yíng)養(yǎng)不良(Duchenne muscular dystrophy)(Madaro et al，PLoS One 2012；7(2)：e31515)、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(Healy et al.，J Immunol.2006；177(3)：1886-1893；Zanin-Zhorov et al.，Science 2010；328(5976)：372-726)、2型糖尿病和胰島素抗性(Kim et al.，J Clin Invest.2004；114(6)：823-7)、重癥肌無(wú)力(Miles and Wagner，J Neurosci Res.2003；71(2)：188-195)、多發(fā)性硬化癥(Salek-Ardakani et al.，J Immunol.2005；175(11)：7635-41)和結(jié)腸炎((Zanin-Zhorov et al.，Science 2010；328(5976)：372-726)。

如本文使用的“治療”指完全或部分減緩障礙、疾病或病癥、或與障礙、疾病或病癥相關(guān)的一種或多種癥狀，或者減慢或停止那些癥狀的進(jìn)一步進(jìn)展或惡化，或者減緩或根除所述障礙、疾病或病癥本身的病因。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述病癥為PKC-θ介導(dǎo)的病癥，比如例如移植物抗宿主疾病、器官移植排斥反應(yīng)、銀屑病、迪謝內(nèi)肌營(yíng)養(yǎng)不良、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、糖尿病、胰島素抗性、重癥肌無(wú)力、多發(fā)性硬化癥、結(jié)腸炎、銀屑病關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)直性脊柱炎、特應(yīng)性皮炎、舍格倫綜合征、哮喘或狼瘡。在某些實(shí)施方案中，“治療”指完全或部分減緩障礙、疾病或病癥、或與障礙、疾病或病癥相關(guān)的癥狀，例如PKC-θ介導(dǎo)的障礙，比如例如移植物抗宿主疾病、器官移植排斥反應(yīng)、銀屑病、迪謝內(nèi)肌營(yíng)養(yǎng)不良、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、糖尿病、胰島素抗性、重癥肌無(wú)力、多發(fā)性硬化癥、結(jié)腸炎、銀屑病關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)直性脊柱炎、特應(yīng)性皮炎、舍格倫綜合征、哮喘或狼瘡，或減慢或停止那些癥狀的進(jìn)一步進(jìn)展或惡化。在另一個(gè)實(shí)施方案中，“治療”指完全或部分減緩?fù)ㄟ^(guò)抑制PKC-θ可治療或預(yù)防的障礙、疾病或病癥或與病癥相關(guān)的癥狀。在另一個(gè)實(shí)施方案中，“治療”指完全或部分減緩?fù)ㄟ^(guò)相對(duì)于PKC-δ選擇性地抑制PKC-θ可治療或預(yù)防的障礙、疾病或病癥、或與病癥相關(guān)的癥狀。在仍然另一個(gè)實(shí)施方案中，“治療”指完全或部分減緩?fù)ㄟ^(guò)相對(duì)于PKC-δ和/或PKC-eta而言選擇性地抑制PKC-θ可治療或可預(yù)防的障礙、疾病或病癥、或與病癥相關(guān)的癥狀。

如本文使用的“預(yù)防”指完全或部分延遲和/或阻止障礙、疾病或病癥的發(fā)病、復(fù)發(fā)或傳播；使對(duì)象免于獲得障礙、疾病或病癥；或降低對(duì)象獲得障礙、疾病或病癥的風(fēng)險(xiǎn)。在一個(gè)實(shí)施方案中，病癥為PKC-θ介導(dǎo)的病癥，比如例如如本文所述的移植物抗宿主疾病、器官移植排斥反應(yīng)、銀屑病、迪謝內(nèi)肌營(yíng)養(yǎng)不良、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、糖尿病、胰島素抗性、重癥肌無(wú)力、多發(fā)性硬化癥、結(jié)腸炎、銀屑病關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)直性脊柱炎、特應(yīng)性皮炎、舍格倫綜合征、哮喘或狼瘡，或其癥狀。

與二氨基嘧啶基化合物聯(lián)用的術(shù)語(yǔ)“有效量”指能夠治療或預(yù)防本文公開(kāi)的障礙、疾病或病癥或其癥狀的量。

術(shù)語(yǔ)“對(duì)象”包括動(dòng)物，包括但不限于下述動(dòng)物：比如牛、猴、馬、綿羊、豬、雞、火雞、鵪鶉、貓、狗、小鼠、大鼠、兔或豚鼠，在一個(gè)實(shí)施方案中，包括哺乳動(dòng)物，在另一種實(shí)施方案中，包括人類(lèi)，在另一個(gè)實(shí)施方案中，包括來(lái)自任一個(gè)前述動(dòng)物的細(xì)胞。在一個(gè)實(shí)施方案中，對(duì)象為非人類(lèi)動(dòng)物，在另一個(gè)實(shí)施方案中，為非人類(lèi)哺乳動(dòng)物。在一個(gè)實(shí)施方案中，對(duì)象為患有肝纖維變性障礙或糖尿病或?qū)е赂卫w維變性障礙的代謝性綜合征、或通過(guò)抑制激酶例如PKC-θ可治療或可預(yù)防的病癥、或其癥狀的人類(lèi)或處于上述風(fēng)險(xiǎn)中的人類(lèi)。

二氨基嘧啶基化合物

本文提供具有下式(I)的化合物：

可藥用鹽、互變異構(gòu)體、同位素體或立體異構(gòu)體，

其中：

X為CN或CF₃；

L為(C_1-4烷基)；

R¹為取代的或未取代的雜芳基；和

R²為取代的或未取代的環(huán)烷基。

在式(I)的化合物的某些實(shí)施方案中，X為CN。在其它實(shí)施方案中，X為CF₃。

在式(I)的化合物的某些實(shí)施方案中，L為CH₂。在另一個(gè)實(shí)施方案中，L為CH₂CH₂或CH₂CH₂CH₂。在仍然另一個(gè)實(shí)施方案中，L為CH₂，CH₂CH₂或CH₂CH₂CH₂。

在式(I)的化合物的某些實(shí)施方案中，X為CN且L為CH₂(C₁烷基)。在其它實(shí)施方案中，X為CF₃且L為CH₂(C₁烷基)。在式(I)的化合物的某些實(shí)施方案中，X為CN且L為CH₂CH₂(C₂烷基)。在其它實(shí)施方案中，X為CF₃和L為CH₂CH₂(C₂烷基)。在式(I)的化合物的某些實(shí)施方案中，X為CN且L為CH₂CH₂CH₂(C₃烷基)。在其它實(shí)施方案中，X為CF₃和L為CH₂CH₂CH₂(C₃烷基)。在式(I)的化合物的某些實(shí)施方案中，X為CN且L為CH₂CH₂CH₂CH₂(C₄烷基)。在其它實(shí)施方案中，X為CF₃且L為CH₂CH₂CH₂CH₂(C₄烷基)。

在式(I)的化合物的某些實(shí)施方案中，X為CN，L為CH₂(C₁烷基)且R¹為取代的雜芳基。在其它實(shí)施方案中，X為CF₃，L為CH₂(C₁烷基)且R¹為取代的雜芳基。在式(I)的化合物的某些實(shí)施方案中，X為CN，L為CH₂CH₂(C₂烷基)且R¹為取代的雜芳基。在其它實(shí)施方案中，X為CF₃，L為CH₂CH₂(C₂烷基)且R¹為取代的雜芳基。在式(I)的化合物的某些實(shí)施方案中，X為CN，L為CH₂CH₂CH₂(C₃烷基)且R¹為取代的雜芳基。在其它實(shí)施方案中，X為CF₃，L為CH₂CH₂CH₂(C₃烷基)且R¹為取代的雜芳基。在式(I)的化合物的某些實(shí)施方案中，X為CN，L為CH₂CH₂CH₂CH₂(C₄烷基)且R¹為取代的雜芳基。在其它實(shí)施方案中，X為CF₃，L為CH₂CH₂CH₂CH₂(C₄烷基)且R¹為取代的雜芳基。在式(I)的化合物的某些實(shí)施方案中，X為CN，L為CH₂(C₁烷基)且R¹為未取代的雜芳基。在其它實(shí)施方案中，X為CF₃，L為CH₂(C₁烷基)且R¹為未取代的雜芳基。在式(I)的化合物的某些實(shí)施方案中，X為CN，L為CH₂CH₂(C₂烷基)且R¹為未取代的雜芳基。在其它實(shí)施方案中，X為CF₃，L為CH₂CH₂(C₂烷基)且R¹為未取代的雜芳基。在式(I)的化合物的某些實(shí)施方案中，X為CN，L為CH₂CH₂CH₂(C₃烷基)且R¹為未取代的雜芳基。在其它實(shí)施方案中，X為CF₃，L為CH₂CH₂CH₂(C₃烷基)且R¹為未取代的雜芳基。在式(I)的化合物的某些實(shí)施方案中，X為CN，L為CH₂CH₂CH₂CH₂(C₄烷基)且R¹為未取代的雜芳基。在其它實(shí)施方案中，X為CF₃，L為CH₂CH₂CH₂CH₂(C₄烷基)且R¹為未取代的雜芳基。

在式(I)的化合物的某些實(shí)施方案中，X為CN，L為CH₂(C₁烷基)，R¹為取代的雜芳基且R²為取代的環(huán)烷基。在其它實(shí)施方案中，X為CF₃，L為CH₂(C₁烷基)，R¹為取代的雜芳基且R²為取代的環(huán)烷基。在式(I)的化合物的某些實(shí)施方案中，X為CN，L為CH₂CH₂(C₂烷基)，R¹為取代的雜芳基且R²為取代的環(huán)烷基。在其它實(shí)施方案中，X為CF₃，L為CH₂CH₂(C₂烷基)，R¹為取代的雜芳基且R²為取代的環(huán)烷基。在式(I)的化合物的某些實(shí)施方案中，X為CN，L為CH₂CH₂CH₂(C₃烷基)，R¹為取代的雜芳基且R²為取代的環(huán)烷基。在其它實(shí)施方案中，X為CF₃，L為CH₂CH₂CH₂(C₃烷基)，R¹為取代的雜芳基且R²為取代的環(huán)烷基。在式(I)的化合物的某些實(shí)施方案中，X為CN，L為CH₂CH₂CH₂CH₂(C₄烷基)，R¹為取代的雜芳基且R²為取代的環(huán)烷基。在其它實(shí)施方案中，X為CF₃，L為CH₂CH₂CH₂CH₂(C₄烷基)，R¹為取代的雜芳基且R²為取代的環(huán)烷基。在式(I)的化合物的某些實(shí)施方案中，X為CN，L為CH₂(C₁烷基)，R¹為未取代的雜芳基且R²為取代的環(huán)烷基。在其它實(shí)施方案中，X為CF₃，L為CH₂(C₁烷基)，R¹為未取代的雜芳基且R²為取代的環(huán)烷基。在式(I)的化合物的某些實(shí)施方案中，X為CN，L為CH₂CH₂(C₂烷基)，R¹為未取代的雜芳基且R²為取代的環(huán)烷基。在其它實(shí)施方案中，X為CF₃，L為CH₂CH₂(C₂烷基)，R¹為未取代的雜芳基且R²為取代的環(huán)烷基。在式(I)的化合物的某些實(shí)施方案中，X為CN，L為CH₂CH₂CH₂(C₃烷基)，R¹為未取代的雜芳基且R²為取代的環(huán)烷基。在其它實(shí)施方案中，X為CF₃，L為CH₂CH₂CH₂(C₃烷基)，R¹為未取代的雜芳基且R²為取代的環(huán)烷基。在式(I)的化合物的某些實(shí)施方案中，X為CN，L為CH₂CH₂CH₂(C₄烷基)，R¹為未取代的雜芳基且R²為取代的環(huán)烷基。在其它實(shí)施方案中，X為CF₃，L為CH₂CH₂CH₂CH₂(C₄烷基)，R¹為未取代的雜芳基且R²為取代的環(huán)烷基。

在式(I)的化合物的某些實(shí)施方案中，X為CN，L為CH₂(C₁烷基)，R¹為取代的雜芳基且R²為未取代的環(huán)烷基。在其它實(shí)施方案中，X為CF₃，L為CH₂(C₁烷基)，R¹為取代的雜芳基且R²為未取代的環(huán)烷基。在式(I)的化合物的某些實(shí)施方案中，X為CN，L為CH₂CH₂(C₂烷基)，R¹為取代的雜芳基且R²為未取代的環(huán)烷基。在其它實(shí)施方案中，X為CF₃，L為CH₂CH₂(C₂烷基)，R¹為取代的雜芳基且R²為未取代的環(huán)烷基。在式(I)的化合物的某些實(shí)施方案中，X為CN，L為CH₂CH₂CH₂(C₃烷基)，R¹為取代的雜芳基且R²為未取代的環(huán)烷基。在其它實(shí)施方案中，X為CF₃，L為CH₂CH₂CH₂(C₃烷基)，R¹為取代的雜芳基且R²為未取代的環(huán)烷基。在式(I)的化合物的某些實(shí)施方案中，X為CN，L為CH₂CH₂CH₂CH₂(C₄烷基)，R¹為取代的雜芳基且R²為未取代的環(huán)烷基。在其它實(shí)施方案中，X為CF₃，L為CH₂CH₂CH₂CH₂(C₄烷基)，R¹為取代的雜芳基且R²為未取代的環(huán)烷基。在式(I)的化合物的某些實(shí)施方案中，X為CN，L為CH₂(C₁烷基)，R¹為未取代的雜芳基且R²為未取代的環(huán)烷基。在其它實(shí)施方案中，X為CF₃，L為CH₂(C₁烷基)，R¹為未取代的雜芳基且R²為未取代的環(huán)烷基。在式(I)的化合物的某些實(shí)施方案中，X為CN，L為CH₂CH₂(C₂烷基)，R¹為未取代的雜芳基且R²為未取代的環(huán)烷基。在其它實(shí)施方案中，X為CF₃，L為CH₂CH₂(C₂烷基)，R¹為未取代的雜芳基且R²為未取代的環(huán)烷基。在式(I)的化合物的某些實(shí)施方案中，X為CN，L為CH₂CH₂CH₂(C₃烷基)，R¹為未取代的雜芳基且R²為未取代的環(huán)烷基。在其它實(shí)施方案中，X為CF₃，L為CH₂CH₂CH₂(C₃烷基)，R¹為未取代的雜芳基且R²為未取代的環(huán)烷基。在式(I)的化合物的某些實(shí)施方案中，X為CN，L為CH₂CH₂CH₂CH₂(C₄烷基)，R¹為未取代的雜芳基且R²為未取代的環(huán)烷基。在其它實(shí)施方案中，X為CF₃，L為CH₂CH₂CH₂CH₂(C₄烷基)，R¹為未取代的雜芳基且R²為未取代的環(huán)烷基。

在式(I)的化合物的某些實(shí)施方案中，R¹為取代的或未取代的吡啶基、吡啶基-1-氧化物、或嘧啶基。在某些這樣的實(shí)施方案中，R¹被一個(gè)或多個(gè)下述基團(tuán)取代：鹵素、-OR³、取代的或未取代的C_1-4烷基、或取代的或未取代的芳基，其中R³為H、取代的或未取代的C_1-6烷基、或取代的或未取代的芳基。在某些這樣的實(shí)施方案中，R¹被一個(gè)或多個(gè)下述基團(tuán)取代：鹵素、-OR³、取代的或未取代的C_1-4烷基、或取代的或未取代的芳基，其中每個(gè)R³獨(dú)立地為H、取代的或未取代的C_1-6烷基、或取代的或未取代的芳基。在某些實(shí)施方案中，R¹被一個(gè)或多個(gè)下述基團(tuán)取代：F、Cl、Br、I、甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、叔丁基、苯基、萘基、-CH₂F、-CHF₂、-CF₃、-CHFCH₃、-CF₂CH₃、-C(CH₃)₂F、-OCH₃、-OCH₂F、-OCHF₂、-OCF₃、-OCH₂CH₃、-OCH₂CH₂F、-OCH₂CHF₂、-OCH₂CF₃、-OCH₂CH(CH₃)F、-OCH₂C(CH₃)₂F、-OCH₂C(CH₃)F₂、-OCH₂CH₂CF₃或-O-苯基，其中每個(gè)苯基任選地被鹵素或取代的或未取代的C_1-4烷基取代。例如，R¹被一個(gè)或多個(gè)下述基團(tuán)取代；F、甲基、乙基、異丙基、苯基、-CF₃、-CF₂CH₃、-C(CH₃)₂F、-OCH₃、-OCH₂CH₃、-OCH₂CH₂F、-OCH₂CHF₂、-OCH₂C(CH₃)F₂、-OCH₂CH₂CF₃或-O-苯基，其中每個(gè)苯基任選地被F或甲基取代。

在其它實(shí)施方案中，R¹為取代的或未取代的吡嗪基。在某些實(shí)施方案中，R¹為取代的或未取代的吡啶基、吡啶基-1-氧化物、嘧啶基或吡嗪基。在某些這樣的實(shí)施方案中，R¹被一個(gè)或多個(gè)下述基團(tuán)取代：Cl、或-OCH₂CF₃。在其它這樣的實(shí)施方案中，R¹被一個(gè)或多個(gè)下述基團(tuán)取代：F、Cl、甲基、乙基、異丙基、苯基、-CF₃、-CF₂CH₃、-C(CH₃)₂F、-OCH₃、-OCH₂CH₃、-OCH₂CF₃、-OCH₂CH₂F、-OCH₂CHF₂、-OCH₂C(CH₃)F₂、-OCH₂CH₂CF₃或-O-苯基，其中每個(gè)苯基任選地被F或甲基取代。

在式(I)的化合物的某些實(shí)施方案中，R¹選自

其中R^a選自鹵素、-OR³、取代的或未取代的C_1-4烷基、或取代的或未取代的芳基，其中R³為H、取代的或未取代的C_1-6烷基、或取代的或未取代的芳基；且p為0-3。在其它實(shí)施方案中，R^a選自鹵素、-OR³、取代的或未取代的C_1-4烷基、取代的或未取代的芳基，其中每個(gè)R³獨(dú)立地為H、取代的或未取代的C_1-6烷基、或取代的或未取代的芳基；且p為0-3。

在某些這樣的實(shí)施方案中，R^a選自F、Cl、Br、I、甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、叔丁基、苯基、萘基、-CH₂F、-CHF₂、-CF₃、-CHFCH₃、-CF₂CH₃、-C(CH₃)₂F、-OCH₃、-OCH₂F、-OCHF₂、-OCF₃、-OCH₂CH₃、-OCH₂CH₂F、-OCH₂CHF₂、-OCH₂CF₃、-OCH₂CH(CH₃)F、-OCH₂C(CH₃)₂F、-OCH₂C(CH₃)F₂、-OCH₂CH₂CF₃或-O-苯基，其中每個(gè)苯基任選地被鹵素或取代的或未取代的C_1-4烷基取代；且p為1-2。例如，R^a選自F、甲基、乙基、異丙基、苯基、-CF₃、-CF₂CH₃、-C(CH₃)₂F、-OCH₃、-OCH₂CH₃、-OCH₂CH₂F、-OCH₂CHF₂、-OCH₂C(CH₃)F₂、-OCH₂CH₂CF₃或-O-苯基，其中每個(gè)苯基任選地被F或甲基取代，且p為1或2。

在式(I)的化合物的某些其它實(shí)施方案中，R^a選自Cl或-OCH₂CF₃。在式(I)的化合物的某些實(shí)施方案中，R^a選自：F、Cl、甲基、乙基、異丙基、苯基、-CF₃、-CF₂CH₃、-C(CH₃)₂F、-OCH₃、-OCH₂CH₃、OCH₂CF₃、-OCH₂CH₂F、-OCH₂CHF₂、-OCH₂C(CH₃)F₂、-OCH₂CH₂CF₃或-O-苯基，其中每個(gè)苯基任選地被F或甲基取代，且p為1或2。

在式(I)的化合物的某些實(shí)施方案中，R¹選自

其中R^a選自鹵素、-OR³、取代的或未取代的C_1-4烷基、或取代的或未取代的芳基，其中每個(gè)R³獨(dú)立地為H、取代的或未取代的C_1-6烷基、或取代的或未取代的芳基；且p為0-3。例如，R^a選自F、甲基、乙基、異丙基、苯基、

-CF₃、-CF₂CH₃、-C(CH₃)₂F、-OCH₃、-OCH₂CH₃、-OCH₂CH₂F、-OCH₂CH F₂、-OCH₂C(CH₃)F₂、-OCH₂CH₂CF₃或-O-苯基，其中每個(gè)苯基任選地被F或甲基取代，且p為1或2。例如，R^a選自甲基、-CF₃或-OCH₂CH₃。

在式(I)的化合物的某些實(shí)施方案中，R¹為取代的或未取代的吲哚基、吲哚啉酮基(indolinonyl)、苯并噁唑基、吡咯并吡啶基、吲唑基、苯并咪唑基、二氫苯并咪唑啉酮基或喹啉基.在某些這樣的實(shí)施方案中，R¹被一個(gè)或多個(gè)下述基團(tuán)取代：鹵素、CN、-OR³、取代的或未取代的C_1-4烷基、或取代的或未取代的芳基，其中每個(gè)R³獨(dú)立地為H、取代的或未取代的C_1-6烷基、或取代的或未取代的芳基。在某些這樣的實(shí)施方案中，R¹被一個(gè)或多個(gè)下述基團(tuán)取代：F、Cl、CN、甲基、乙基、-CH₂SO₂NHCH₃、-OH、-OCH₃或OCF₃。

在式(I)的化合物的某些實(shí)施方案中，R¹選自

其中R^c選自鹵素、CN、-OR³、取代的或未取代的C_1-4烷基、或取代的或未取代的芳基，其中每個(gè)R³獨(dú)立地為H、取代的或未取代的C_1-6烷基、或取代的或未取代的芳基；R為H或C_1-4烷基；且r為0-3。例如，R^c選自F、Cl、CN、甲基、乙基、-CH₂SO₂NHCH₃、-OH、-OCH₃或-OCF₃。

在式(I)的化合物的某些實(shí)施方案中，R¹為取代的或未取代的呋喃基、吡咯基、噻吩基、噁唑基、吡唑基、咪唑基、噁二唑基或三唑基。在某些這樣的實(shí)施方案中，R¹被一個(gè)或多個(gè)下述基團(tuán)取代：鹵素、CN、-OR³、取代的或未取代的C_1-4烷基、或取代的或未取代的芳基，其中每個(gè)R³獨(dú)立地為H、取代的或未取代的C_1-6烷基、或取代的或未取代的芳基。在某些這樣的實(shí)施方案中，R¹被一個(gè)或多個(gè)下述基團(tuán)取代：CN、甲基、乙基、-CF₃或-CH₂OCH₃。

在式(I)的化合物的某些實(shí)施方案中，R¹選自

其中R^d選自鹵素、CN、-OR³、取代的或未取代的C_1-4烷基、或取代的或未取代的芳基，其中每個(gè)R³獨(dú)立地為H、取代的或未取代的C_1-6烷基、或取代的或未取代的芳基；R獨(dú)立地為H或C_1-4烷基；且s為0-3。例如，R^c選自：CN、甲基、乙基、-CF₃或-CH₂OCH₃。

在某些實(shí)施方案中，R¹為取代的或未取代的吡啶基、吡啶基-1-氧化物、嘧啶基、噠嗪基、吲哚基、吲哚啉酮基、苯并噁唑基、吡咯并吡啶基、吲唑基、苯并咪唑基、二氫苯并咪唑啉酮基、喹啉基、呋喃基、吡咯基、噻吩基、噁唑基、吡唑基、咪唑基、噁二唑基或三唑基。在某些這樣的實(shí)施方案中，R¹被一個(gè)或多個(gè)下述基團(tuán)取代：鹵素、CN、-OR³、取代的或未取代的C_1-4烷基、或取代的或未取代的芳基，其中每個(gè)R³獨(dú)立地為H、取代的或未取代的C_1-6烷基、或取代的或未取代的芳基。在某些這樣的實(shí)施方案中，R¹被一個(gè)或多個(gè)下述基團(tuán)取代：F、Cl、CN、甲基、乙基、異丙基、苯基、-CF₃、-CF₂CH₃、-C(CH₃)₂F、-CH₂OCH₃、-CH₂SO₂NHCH₃、-OH、-OCH₃、-OCF₃、-OCH₂CH₃、-OCH(CH₃)₂、-OCH₂CF₃、-OCH₂CH₂F、-OCH₂CHF ₂、-OCH₂C(CH₃)F₂、-OCH₂CH₂CF₃或-O-苯基，其中每個(gè)苯基任選地被F或甲基取代。

在式(I)的化合物的某些實(shí)施方案中，R²為取代的或未取代的C^3-12環(huán)烷基。例如，R²為取代的或未取代的環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基、或金剛烷基。在某些這樣的實(shí)施方案中，R²被一個(gè)或多個(gè)C_1-4烷基、-OR⁴或-C(＝O)NR₂取代，其中R⁴為H或C_1-6烷基，且每個(gè)R獨(dú)立地為H或C_1-4烷基。在其它這樣的實(shí)施方案中，R²被一個(gè)或多個(gè)C_1-4烷基、-OR⁴或-C(＝O)NR₂取代，其中每個(gè)R⁴獨(dú)立地為H或C_1-6烷基，且每個(gè)R獨(dú)立地為H或C_1-4烷基。在其它實(shí)施方案中，R²被一個(gè)或多個(gè)下述基團(tuán)取代：甲基、乙基、丙基、異丙基、-CH₂OH、-CH(CH₃)OH、-C(CH₃)₂OH、-OH、-OCH₃、-OCH₂CH₃、-C(＝O)NH₂、-C(＝O)NHCH₃或-C(＝O)N(CH₃)₂。例如，R²被一個(gè)或多個(gè)下述基團(tuán)取代：甲基、-CH₂OH、-C(CH₃)₂OH、-OH、-OCH₃或-C(＝O)NHCH₃。

在式(I)的化合物的某些實(shí)施方案中，R²選自

其中R^b選自C_1-4烷基、-OR⁴或-C(＝O)NR₂，其中R⁴為H或C_1-6烷基，每個(gè)R獨(dú)立地為H或C_1-4烷基，且q為0-6。在其它實(shí)施方案中，R^b選自C_1-4烷基、-OR⁴或-C(＝O)NR₂，其中每個(gè)R⁴獨(dú)立地為H或C_1-6烷基，每個(gè)R獨(dú)立地為H或C_1-4烷基，且q為0-6。

在某些這樣的實(shí)施方案中，R^b選自甲基、乙基、丙基、異丙基、-CH₂OH、-CH(CH₃)OH、-C(CH₃)₂OH、-OH、-OCH₃、-OCH₂CH₃、-C(＝O)NH₂、-C(＝O)NHCH₃或-C(＝O)N(CH₃)₂，且q為1-5。在其它實(shí)施方案中，R^b選自甲基、-CH₂OH、-C(CH₃)₂OH、-OH、-OCH₃或-C(＝O)NHCH₃且q為1-5。在某些這樣的實(shí)施方案中，R^b選自三唑基、-C(＝O)NH₂或-C(＝O)N(CH₃)₂。在其它實(shí)施方案中，R^b選自甲基、三唑基、-CH₂OH、-C(CH₃)₂OH、-OH、-OCH₃、-C(＝O)NH₂、-C(＝O)NHCH₃或-C(＝O)N(CH₃)₂。

在式(I)的化合物的某些實(shí)施方案中，R²選自

其中R^b選自C_1-4烷基、-OR⁴或-C(＝O)NR₂，其中R⁴為H或C_1-6烷基，每個(gè)R獨(dú)立地為H或C_1-4烷基，且t為0-5。在其它實(shí)施方案中，其中R^b選自C_1-4烷基、-OR⁴或-C(＝O)NR₂，其中每個(gè)R⁴獨(dú)立地為H或C_1-6烷基，每個(gè)R獨(dú)立地為H或C_1-4烷基，且t為0-5。

在某些這樣的實(shí)施方案中，R^b選自甲基、乙基、丙基、異丙基、-CH₂OH、-CH(CH₃)OH、-C(CH₃)₂OH、-OH、-OCH₃、-OCH₂CH₃、-C(＝O)NH₂、-C(＝O)NHCH₃、or-C(＝O)N(CH₃)₂且t為0-4。在其它實(shí)施方案中，R^b選自甲基、-CH₂OH、-C(CH₃)₂OH、-OH、-OCH₃或-C(＝O)NHCH₃，且t為0-4。

在式(I)的化合物的某些其它實(shí)施方案中，R²選自

其中R^b選自C_1-4烷基、-OR⁴或-C(＝O)NR₂，其中R⁴為H或C_1-6烷基，每個(gè)R獨(dú)立地為H或C_1-4烷基，且t為0-5。在其它實(shí)施方案中，R^b選自C_1-4烷基、-OR⁴或-C(＝O)NR₂，其中每個(gè)R⁴獨(dú)立地為H或C_1-6烷基，每個(gè)R獨(dú)立地為H或C_1-4烷基，且t為0-5。

在某些這樣的實(shí)施方案中，R^b選自甲基、乙基、丙基、異丙基、-CH₂OH、-CH(CH₃)OH、-C(CH₃)₂OH、-OH、-OCH₃、-OCH₂CH₃、-C(＝O)NH₂、-C(＝O)NHCH₃或-C(＝O)N(CH₃)₂，且t為0-4。在其它實(shí)施方案中，R^b選自甲基、-CH₂OH，、-C(CH₃)₂OH、-OH、-OCH₃或-C(＝O)NHCH₃，且t為0-4。

在其它實(shí)施方案中，R^b選自三唑基、C_1-4烷基、-OR⁴、-C(＝O)NR₂，其中每個(gè)R⁴獨(dú)立地為H或C_1-6烷基，且每個(gè)R獨(dú)立地為H或C_1-4烷基，且t為0-5。例如，R^b選自三唑基、-C(＝O)NH₂或-C(＝O)N(CH₃)₂。在其它實(shí)施方案中，R^b選自甲基、三唑基、-CH₂OH、-C(CH₃)₂OH、-OH、-OCH₃、-C(＝O)NH₂、-C(＝O)NHCH₃、或-C(＝O)N(CH₃)₂。

在式(I)的化合物的某些實(shí)施方案中，R²選自

其中R^e選自C_1-4烷基、-OR⁴或-C(＝O)NR₂，其中每個(gè)R⁴獨(dú)立地為H或C_1-6烷基，每個(gè)R獨(dú)立地為H或C_1-4烷基，且u為0-4。例如，R^e選自甲基或-OH。

在R²的某些這樣的實(shí)施方案中，R¹選自

其中R^a選自鹵素、-OR³、取代的或未取代的C_1-4烷基、或取代的或未取代的芳基，其中R³為H、取代的或未取代的C_1-6烷基、或取代的或未取代的芳基；且p為0-3。在其它實(shí)施方案中，R^a選自鹵素、-OR³、取代的或未取代的C_1-4烷基、或取代的或未取代的芳基，其中每個(gè)R³獨(dú)立地為H、取代的或未取代的C_1-6烷基、或取代的或未取代的芳基；且p為0-3。

在R²的其它的這樣的實(shí)施方案中，R¹選自

其中R^a選自鹵素、-OR³、取代的或未取代的C_1-4烷基、或取代的或未取代的芳基，其中每個(gè)R³獨(dú)立地為H、取代的或未取代的C_1-6烷基、或取代的或未取代的芳基；且p為0-3。

在R²的仍然其它這樣的實(shí)施方案中，R¹選自

其中R^c選自鹵素、CN、-OR³、取代的或未取代的C_1-4烷基、或取代的或未取代的芳基，其中每個(gè)R³獨(dú)立地為H、取代的或未取代的C_1-6烷基、或取代的或未取代的芳基；R獨(dú)立地為H或C_1-4烷基；且r為0-3。

在R²的仍然其它這樣的實(shí)施方案中，R¹選自

其中R^d選自鹵素、CN、-OR³、取代的或未取代的C_1-4烷基、或取代的或未取代的芳基，其中每個(gè)R³獨(dú)立地為H、取代的或未取代的C_1-6烷基、或取代的或未取代的芳基；R獨(dú)立地為H或C_1-4烷基；且s為0-3。

本文提供的進(jìn)一步的實(shí)施方案包括一種或多種上述列出的具體實(shí)施方案的組合。

式(I)的代表性化合物列在表1中。

在其它實(shí)施方案中，二氨基嘧啶基化合物選自表2。

在本文所述PKC測(cè)定中測(cè)試表1和表2中列出的二氨基嘧啶基化合物，發(fā)現(xiàn)其具有作為PKC-θ抑制劑的活性。在一個(gè)實(shí)施方案中，二氨基嘧啶基化合物為如本文所述的化合物，其中濃度10μM的所述化合物抑制PKC-θ至少約50％或以上。在實(shí)施方案中，二氨基嘧啶基化合物為如本文所述的化合物，其中濃度100nM的所述化合物抑制PKC-θ至少約50％或以上。在某些這樣的實(shí)施方案中，二氨基嘧啶基化合物對(duì)于PKC-θ選擇性為相對(duì)于PKC-δ的至少5倍。在某些這樣的實(shí)施方案中，二氨基嘧啶基化合物對(duì)于PKC-θ選擇性為相對(duì)于PKC-δ的至少20倍。在某些這樣的實(shí)施方案中，二氨基嘧啶基化合物對(duì)于PKC-θ的選擇性為相對(duì)于PKC-δ的至少100倍。在某些這樣的實(shí)施方案中，二氨基嘧啶基化合物對(duì)于PKC-θ的選擇性為相對(duì)于PKC-δ的大于100倍。在其它實(shí)施方案中，二氨基嘧啶基化合物對(duì)于PKC-θ的選擇性為相對(duì)于PKC-δ和PKC-eta的至少20倍。在其它實(shí)施方案中，二氨基嘧啶基化合物對(duì)于PKC-θ的選擇性為相對(duì)于PKC-δ和PKC-eta的至少100倍。

制備二氨基嘧啶基化合物的方法

可以使用常規(guī)有機(jī)合成和市售可獲得的起始材料制備二氨基嘧啶基化合物。舉例且非限制，式(I)的二氨基嘧啶基化合物可以如下所示方案1和2以及本文所述實(shí)施例中描述的制備。應(yīng)當(dāng)注意，本領(lǐng)域技術(shù)人員將知道如何修飾示例性方案和實(shí)施例中所述的方法，以獲得期望的產(chǎn)物。

方案1

方案1中顯示式(I)的化合物的合成，其中X、L、R¹和R²為如本文定義的。在有機(jī)溶劑(例如，DMF、THF、乙醇、甲醇或異丙醇)中，在堿(例如，DIEA、TEA、1，8-二氮雜二環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯、N-甲基嗎啉、碳酸鈉、碳酸氫鈉、碳酸銫或磷酸鉀)的存在下，用R²NH₂處理含有2，4-二氯嘧啶的起始材料，得到R²側(cè)鏈的引入。接著，在升高的溫度(例如，60℃至80℃)下，在有機(jī)溶劑(例如，THF、乙醇、NMP、DMF、DMSO、二噁烷、1-丁醇、甲醇或異丙醇)中，在堿(例如，DIEA、1，8-二氮雜二環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯、N-甲基嗎啉、TEA、碳酸銫、碳酸鉀、碳酸鈉、碳酸氫鈉或磷酸鉀)的存在下，用R¹-L-NH₂處理，得到式(I)的化合物。

方案2

可選地，可以在有機(jī)溶劑(例如，乙醇、正丁醇、NMP、DMF、DMSO或二噁烷)中，在堿(例如，DIEA、TEA、N-甲基嗎啉、1，8-二氮雜二環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯、碳酸鉀、碳酸鈉、碳酸氫鈉、碳酸銫或磷酸鉀)的存在下，在室溫下或在升高的溫度(例如，25℃至70℃)下，用R²NH₂處理，由4-氯-2-烷基硫代嘧啶-腈(其中R^x為C_1-2烷基)制備式(I)的化合物。通過(guò)在有機(jī)溶劑(比如例如THF、DCM、NMP、DMF或DMA)中，用氧化劑(比如mCPBA、oxone、過(guò)氧化氫或3-苯基-2-(苯磺?；?-1，2-氧氮雜環(huán)丙烷(oxaziridine))處理，獲得烷基硫醇部分的氧化。在室溫下或升高的溫度(例如，25℃-110℃)下，在溶劑(比如，例如二噁烷、DMSO、NMP、DMF、THF或正丁醇)中，在有機(jī)堿(比如DIEA、TEA、1，8-二氮雜二環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯或N-甲基嗎啉)的存在下，用R1-L-NH₂處理得到的砜(m＝1)和亞砜(m＝2)的混合物，得到其中X為CN的式(I)的化合物。

在一個(gè)方面，本文提供用于制備式(I)的化合物的方法：

該方法包括在適于得到式(I)的化合物的條件下，在有機(jī)溶劑中，在堿的存在下，用R¹-L-NH₂接觸式(Ia)的化合物，

其中：

X為CN或CF₃；

L為(C_1-4烷基)；

R¹為取代的或未取代的雜芳基；和

R²為取代的或未取代的環(huán)烷基。

在一個(gè)實(shí)施方案中，溶劑為T(mén)HF、乙醇、NMP、DMF、DMSO、二噁烷、1-丁醇、甲醇或異丙醇。在一個(gè)實(shí)施方案中，堿為DIEA、1，8-二氮雜二環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯、N-甲基嗎啉、TEA、碳酸銫、碳酸鉀、碳酸鈉、碳酸氫鈉或磷酸鉀。在某些實(shí)施方案中，接觸是在升高的溫度例如約60℃至約80℃下進(jìn)行的。

在某些實(shí)施方案中，所述方法進(jìn)一步包括制備式(Ia)的化合物：

該方法包括在適于得到式(Ia)的化合物的條件下，在有機(jī)溶劑中，在堿的存在下，用R²NH₂接觸接觸式(Ib)的化合物，

在一個(gè)實(shí)施方案中，溶劑為DMF、THF、乙醇、甲醇或異丙醇。在另一個(gè)實(shí)施方案中，堿為DIEA、TEA、1，8-二氮雜二環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯、N-甲基嗎啉、碳酸鈉、碳酸氫鈉、碳酸銫或磷酸鉀。

在一個(gè)方面，本文提供用于制備式(I)的化合物的方法：

該方法包括在適于得到式(I)的化合物的條件下，在有機(jī)溶劑中，在堿的存在下，用R¹-L-NH₂接觸式(Ic)的化合物，

其中：

X為CN或CF₃；

L為(C_1-4烷基)；

R¹為取代的或未取代的雜芳基；和

R²為取代的或未取代的環(huán)烷基；

R^x為C_1-2烷基；和

m為1或2。

在一個(gè)實(shí)施方案中，溶劑為二噁烷、DMSO、NMP、DMF、THF或正丁醇。在另一個(gè)實(shí)施方案中，堿為DIEA、TEA、1，8-二氮雜二環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯、或N-甲基嗎啉。在某些實(shí)施方案中，接觸是在室溫或升高的溫度例如約25℃至約110℃下進(jìn)行的。

在某些實(shí)施方案中，所述方法進(jìn)一步包括制備式(Ic)的化合物：

該方法包括與適于得到式(Ic)的化合物的條件下，與有機(jī)溶劑中，用氧化劑氧化式(Ib)的化合物，

在一個(gè)實(shí)施方案中，溶劑為T(mén)HF、DCM、NMP、DMF或DMA。在另一個(gè)實(shí)施方案中，氧化劑為mCPBA、oxone、過(guò)氧化氫或3-苯基-2-(苯磺?；?-1，2-氧氮雜環(huán)丙烷(oxaziridine)。

在某些實(shí)施方案中，所述方法進(jìn)一步包括制備式(Id)的化合物：

該方法包括在適于得到式(Id)的化合物的條件下，在有機(jī)溶劑中，在堿的存在下，用R²NH₂接觸接觸式(Ie)的化合物，

在一個(gè)實(shí)施方案中，溶劑為乙醇、正丁醇、NMP、DMF、DMSO或二噁烷。在另一個(gè)實(shí)施方案中，堿為DIEA、TEA、N-甲基嗎啉、1，8-二氮雜二環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯、碳酸鉀、碳酸鈉、碳酸氫鈉、碳酸銫或磷酸鉀。在某些實(shí)施方案中，接觸是在室溫或升高的溫度例如約25℃至約70℃下進(jìn)行的。

使用方法

二氨基嘧啶基化合物用作治療、預(yù)防或改善動(dòng)物或人類(lèi)中的病癥的藥物。進(jìn)一步，二氨基嘧啶基化合物具有針對(duì)蛋白激酶例如PKC-θ的活性。因此，本文提供二氨基嘧啶基化合物的許多用途，包括治療或預(yù)防下述那些疾病。本文提供的方法包括向需要其的對(duì)象給藥有效量的一種或多種二氨基嘧啶基化合物。

在一個(gè)方面，本文提供用于治療或預(yù)防PKC-θ介導(dǎo)的病癥的方法中的化合物，所述PKC-θ介導(dǎo)的病癥為比如例如移植物抗宿主疾病、器官移植排斥反應(yīng)、銀屑病、迪謝內(nèi)肌營(yíng)養(yǎng)不良、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、糖尿病、胰島素抗性、重癥肌無(wú)力、多發(fā)性硬化癥、結(jié)腸炎、銀屑病關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)直性脊柱炎、特應(yīng)性皮炎、舍格倫綜合征、哮喘或狼瘡，所述方法包括向需要其的對(duì)象給藥有效量的二氨基嘧啶基化合物。

在另一個(gè)方面，本文提供治療或預(yù)防PKC-θ介導(dǎo)的病癥的方法和用于該方法中的化合物，所述PKC-θ介導(dǎo)的病癥為比如例如移植物抗宿主疾病、器官移植排斥反應(yīng)、銀屑病、迪謝內(nèi)肌營(yíng)養(yǎng)不良、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、糖尿病、胰島素抗性、重癥肌無(wú)力、多發(fā)性硬化癥、結(jié)腸炎、銀屑病關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)直性脊柱炎、特應(yīng)性皮炎、舍格倫綜合征、哮喘或狼瘡。

在一個(gè)方面，本文提供在體內(nèi)、離體或體外抑制表達(dá)激酶的細(xì)胞中所述激酶的方法和用于該方法中的化合物，所述方法包括用有效量的二氨基嘧啶基化合物接觸所述細(xì)胞。在一個(gè)實(shí)施方案中，激酶為PKC-θ。在某些實(shí)施方案中，二氨基嘧啶基化合物對(duì)于PKC-θ而言相對(duì)于PKC-δ具有選擇性。在其它實(shí)施方案中，二氨基嘧啶基化合物對(duì)于PKC-θ而言相對(duì)于PKC-δ和PKC-eta具有選擇性。

在某些這樣的實(shí)施方案中，二氨基嘧啶基化合物對(duì)于PKC-θ的選擇性為相對(duì)于PKC-δ的至少5倍。在某些這樣的實(shí)施方案中，二氨基嘧啶基化合物對(duì)于PKC-θ的選擇性為相對(duì)于PKC-δ的至少20倍。在某些這樣的實(shí)施方案中，二氨基嘧啶基化合物對(duì)于PKC-θ的選擇性為相對(duì)于PKC-δ的至少100倍。在某些這樣的實(shí)施方案中，二氨基嘧啶基化合物對(duì)于PKC-θ的選擇性為相對(duì)于PKC-δ的大于100倍。在其它實(shí)施方案中，二氨基嘧啶基化合物對(duì)于PKC-θ的選擇性為相對(duì)于PKC-δ和PKC-eta的至少20倍。在其它實(shí)施方案中，二氨基嘧啶基化合物對(duì)于PKC-θ的選擇性為相對(duì)于PKC-δ和PKC-eta的至少100倍。

例如，二氨基嘧啶基化合物為來(lái)自表1或表2的化合物。

藥物組合物和給藥途徑

二氨基嘧啶基化合物可以以常規(guī)制劑形式(比如，膠囊、微膠囊、片劑、顆粒劑、散劑、錠劑、丸劑、栓劑、注射劑、混懸劑、糖漿劑、貼劑、乳膏、洗劑、軟膏、凝膠劑、噴霧劑、溶液和乳劑)口服、局部或腸胃外給藥至對(duì)象。合適的制劑可以通過(guò)通常使用的方法制備，其使用常規(guī)的、有機(jī)或無(wú)機(jī)的添加劑，比如賦形劑(例如，蔗糖、淀粉、甘露醇、山梨醇、乳糖、葡萄糖、纖維素、滑石粉、磷酸鈣或碳酸鈣)，粘合劑(例如，纖維素、甲基纖維素、羥甲基纖維素、聚丙基吡咯烷酮、聚乙烯吡咯烷酮、明膠、阿拉伯膠、聚乙二醇、蔗糖或淀粉)，崩解劑(例如，淀粉、羧甲基纖維素、羥丙基淀粉、低取代的羥丙基纖維素、碳酸氫鈉、磷酸鈣或檸檬酸鈣)，潤(rùn)滑劑(例如，硬脂酸鎂、輕質(zhì)無(wú)水硅酸、滑石粉或月桂基硫酸鈉)，矯味劑(例如，檸檬酸、薄荷醇、甘氨酸或橙粉)，防腐劑(例如，苯甲酸鈉、亞硫酸氫鈉、尼泊金甲酯或尼泊金丙酯)，穩(wěn)定劑(例如，檸檬酸、檸檬酸鈉或乙酸)，助懸劑(例如，甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮或硬脂酸鋁)，分散劑(例如，羥丙基甲基纖維素)，稀釋劑(例如，水)和底蠟(例如，可可脂、白凡士林或聚乙二醇)。藥物組合物中所述二氨基嘧啶基化合物的有效量可以為產(chǎn)生預(yù)期效果的水平；例如，在用于口服和腸胃外給藥的單位劑量中約0.005mg/kg對(duì)象體重至約10mg/kg對(duì)象體重。

向?qū)ο蠼o藥的二氨基嘧啶基化合物的劑量在相當(dāng)大程度上可變化，并且可以接受健康護(hù)理執(zhí)業(yè)醫(yī)師的判斷。通常，所述二氨基嘧啶基化合物可以以約0.005mg/kg對(duì)象體重至約10mg/kg對(duì)象體重的劑量向患者每天給藥一至四次，但是上述劑量可根據(jù)對(duì)象的年齡、體重和醫(yī)學(xué)病癥以及給藥的類(lèi)型進(jìn)行適當(dāng)?shù)母淖?。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述劑量為約0.01mg/kg對(duì)象體重至約5mg/kg對(duì)象體重，約0.05mg/kg對(duì)象體重至約1mg/kg對(duì)象體重，約0.1mg/kg對(duì)象體重至約0.75mg/kg對(duì)象體重，或約0.25mg/kg對(duì)象體重至約0.5mg/kg對(duì)象體重。在一個(gè)實(shí)施方案中，每天給予一個(gè)劑量。在任意給定的情況下，所給藥的二氨基嘧啶基化合物的量將取決于如活性成分溶解度、使用的劑型和給藥途徑的因素。在一個(gè)實(shí)施方案中，應(yīng)用局部濃度提供細(xì)胞內(nèi)暴露或約0.01-10mM的濃度。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供用于治療或預(yù)防疾病或病癥的方法，包括向需要其的對(duì)象給藥約0.375mg/天至約750mg/天、約0.75mg/天至約375mg/天、約3.75mg/天至約75mg/天、約7.5mg/天至約55mg/天或約18mg/天至約37mg/天的二氨基嘧啶基化合物。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供用于治療或預(yù)防疾病或病癥的方法，包括向需要其的對(duì)象給藥約1mg/天至約1200mg/天、約10mg/天至約1200mg/天、約100mg/天至約1200mg/天、約400mg/天至約1200mg/天、約600mg/天至約1200mg/天、約400mg/天至約800mg/天或約600mg/天至約800mg/天的二氨基嘧啶基化合物。在一個(gè)特定實(shí)施方案中，本文公開(kāi)的方法包括向需要其的對(duì)象給藥400mg/天、600mg/天或800mg/天的二氨基嘧啶基化合物。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供包括在約1mg至約200mg、約35mg至約1400mg、約125mg至約1000mg、約250mg至約1000mg、或約500mg至約1000mg之間的二氨基嘧啶基化合物的單位劑量制劑。

在特定的實(shí)施方案中，本文提供包括約100mg或400mg的二氨基嘧啶基化合物的單位劑量劑型。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供包括1mg、5mg、10mg、15mg、20mg、30mg、35mg、50mg、70mg、100mg、125mg、140mg、175mg、200mg、250mg、280mg、350mg、500mg、560mg、700mg、750mg、1000mg或1400mg的二氨基嘧啶基化合物的單位劑量劑型。

二氨基嘧啶基化合物可以每日給藥一次、兩次、三次、四次或更多次。在一個(gè)特定實(shí)施方案中，600mg或更少的劑量作為一次日劑量給藥，而多于600mg的劑量以等于總?cè)談┝恳话氲牧棵咳諆纱谓o藥。

出于方便的原因，二氨基嘧啶基化合物可以口服給藥。在一個(gè)實(shí)施方案中，當(dāng)口服給藥時(shí)，二氨基嘧啶基化合物與食物和水一起給藥。在另一個(gè)實(shí)施方案中，二氨基嘧啶基化合物分散在水或果汁(例如，蘋(píng)果汁或橙汁)中并作為懸浮液口服給藥。

二氨基嘧啶基化合物也可以皮內(nèi)注射、肌內(nèi)注射、腹膜內(nèi)、經(jīng)皮、靜脈內(nèi)、皮下、鼻內(nèi)、硬膜外、舌下、腦內(nèi)、陰道內(nèi)、透皮、直腸、粘膜、吸入或局部給藥至耳、鼻、眼睛或皮膚。給藥方式由健康護(hù)理執(zhí)業(yè)醫(yī)師判斷，并且可以部分地取決于醫(yī)學(xué)疾病的部位。

在一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供含有二氨基嘧啶基化合物而沒(méi)有額外的載體、賦形劑或溶媒的膠囊。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供包括有效量的二氨基嘧啶基化合物和可藥用載體或溶媒的組合物，其中可藥用載體或溶媒可以包括賦形劑、稀釋劑或其混合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，該組合物為藥物組合物。

所述組合物可以為片劑、咀嚼片、膠囊、溶液、腸胃外溶液、錠劑、栓劑和混懸劑等形式。組合物可以配制為在劑量單位中含有日劑量或合適的部分日劑量，其可以為單獨(dú)的片劑或膠囊劑或適當(dāng)體積的液體。在一個(gè)實(shí)施方案中，可以由水溶性鹽(比如鹽酸鹽)制備該溶液。一般而言，所有的組合物都是根據(jù)藥物化學(xué)中的已知方法制備。可以通過(guò)將二氨基嘧啶基化合物與合適的載體或稀釋劑混合，并將合適量的該混合物填充在膠囊來(lái)制備膠囊劑。常用的載體和稀釋劑包括，但不限于，惰性粉狀物質(zhì)，比如許多不同種類(lèi)的淀粉，粉狀纖維素(尤其是結(jié)晶和微晶纖維素)，糖(比如，果糖、甘露醇和蔗糖)，谷類(lèi)粉以及類(lèi)似的可食用粉末。

片劑可以通過(guò)直接壓縮、通過(guò)濕法制粒或通過(guò)干法制粒制備。它們的制劑通常包含稀釋劑、粘合劑、潤(rùn)滑劑和崩解劑以及該化合物。典型的稀釋劑包括，例如各種類(lèi)型的淀粉、乳糖、甘露醇、高齡土、磷酸鈣或硫酸鈣，無(wú)機(jī)鹽(比如氯化鈉)和粉狀糖。粉狀纖維素衍生物也是有用的。典型的片劑粘合劑為物質(zhì)，比如淀粉、明膠和糖，比如乳糖、果糖、葡萄糖等。天然和合成的樹(shù)膠也是合適的，包括阿拉伯膠、藻酸鹽、甲基纖維素、聚乙烯基吡咯烷等。聚乙二醇、乙基纖維素和蠟也可以用作粘合劑。

潤(rùn)滑劑可能是片劑配制中必需的，用于防止片劑和沖壓機(jī)與模具粘連。潤(rùn)滑劑可以選自如光滑的固體，如滑石粉、硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、硬脂酸和氫化植物油。片劑崩解劑是在潤(rùn)濕后膨脹使片劑破碎并釋放出化合物的物質(zhì)。它們包括淀粉、粘土、纖維素、褐藻膠和樹(shù)膠。更特別地，可以使用例如玉米淀粉和馬鈴著淀粉、甲基纖維素、瓊脂、膨潤(rùn)土、木纖維素、粉狀天然海綿、陽(yáng)離子交換樹(shù)脂、藻酸、瓜爾膠、柑桔渣和羧甲基纖維素以及月桂基硫酸鈉。片劑可以用糖作為調(diào)味劑和密封劑包衣，或者用成膜保護(hù)劑包衣以改善片劑的溶出性質(zhì)。組合物也可以通過(guò)例如在制劑中使用物質(zhì)比如甘露醇配制為咀嚼片。

當(dāng)期望將二氨基嘧啶基化合物作為栓劑給藥時(shí)，可以使用典型的基質(zhì)?？煽芍莻鹘y(tǒng)的栓劑基質(zhì)，其可以通過(guò)加入蠟略微提高其熔點(diǎn)得到改良。廣泛使用水可混溶性栓劑基質(zhì)，特別是包括不同分子量的聚乙二醇的這種基質(zhì)。

二氨基嘧啶基化合物的作用可以通過(guò)適當(dāng)?shù)闹苿┭舆t或延長(zhǎng)。例如，可制備二氨基嘧啶基化合物的緩慢溶解性微丸并結(jié)合到片劑或膠囊中，或者制成緩釋的可植入裝置。該技術(shù)還包括制備幾種不同溶出速率的微丸，并用微丸的混合物填充膠囊。片劑或膠囊可以用能耐受可預(yù)測(cè)時(shí)間段的溶出的薄膜包衣。即使胃腸外制劑也可通過(guò)將二氨基嘧啶基化合物溶解或懸浮于可使其在血清中緩慢分散的油性或乳化溶媒中而制成長(zhǎng)效制劑。

實(shí)施例

提供下述實(shí)施例作為示例，不限于此。使用Chemdraw Ultra 9.0(Cambridgesoft)中提供的自動(dòng)生成名稱(chēng)的工具命名化合物，其生成化學(xué)結(jié)構(gòu)的系統(tǒng)名，且對(duì)于立體化學(xué)支持Cahn-Ingold-Prelog規(guī)則。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以修飾示例性的實(shí)施例中列出的方法，以獲得期望的產(chǎn)物，例如表1和2中所列的化合物。

使用的縮寫(xiě)：

化合物合成

實(shí)施例1：2-(((4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-基)甲基)氨基)-4-(((1R，4S)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基)嘧啶-5-甲腈

A. 7，7-二甲基-1，4-二氧雜螺[4.5]癸-8-酮。在0℃下，在氮?dú)庀?，?，4-二氧雜螺[4.5]癸-8-酮(1.0當(dāng)量)在無(wú)水THF(0.6M)中的溶液中加入氫化鈉(2.0當(dāng)量，在礦物油中60％)。在室溫下，攪拌得到的反應(yīng)混合物60分鐘，加入碘代甲烷(2.5當(dāng)量)。在10℃下，攪拌該反應(yīng)過(guò)夜。TLC(石油醚∶乙酸乙酯＝10∶1)顯示反應(yīng)完成。用飽和的氯化銨水溶液淬滅該反應(yīng)，并用乙酸乙酯萃取水層。用鹽水洗滌合并的有機(jī)層，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥并過(guò)濾。在真空下濃縮濾液，并通過(guò)硅膠柱色譜(在石油醚中的10％乙酸乙酯)純化殘余物，得到呈無(wú)色油狀物的7，7-二甲基-1，4-二氧雜螺[4.5]癸-8-酮(產(chǎn)率40％)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ(ppm)3.99(s，4H)，2.55-2.58(m，2H)，1.97-2.00(m，2H)，1.87(s，2H)，1.16(s，6H)。

B. 7，7-二甲基-1，4-二氧雜螺[4.5]癸-8-醇。在0℃下，在氮?dú)庀拢?，7-二甲基-1，4-二氧雜螺[4.5]癸-8-酮(1.0當(dāng)量)在MeOH(0.5M)中的溶液中慢慢地加入硼氫化鈉(1.0當(dāng)量)，并在室溫下攪拌得到的反應(yīng)混合物60分鐘。TLC(石油醚∶乙酸乙酯＝10∶1)顯示反應(yīng)完成。加入水，并在減壓下除去溶劑。用DCM萃取水層。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥并過(guò)濾。在真空下濃縮濾液，得到7，7-二甲基-1，4-二氧雜螺[4.5]癸-8-醇(產(chǎn)率99％)，其用于下一步而無(wú)需進(jìn)一步純化。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ(ppm)3.85-3.94(m，4H)，3.37-3.40(m，1H)，1.41-1.81(m，7H)，0.97(s，6H)。

C. 4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己酮。在室溫下，攪拌7，7-二甲基-1，4-二氧雜螺[4.5]癸-8-醇(1.0當(dāng)量)在2.0N鹽酸水溶液(3.7當(dāng)量)和MeOH(0.9M)中的溶液過(guò)夜。TLC(石油醚∶乙酸乙酯＝3∶1)顯示反應(yīng)完成。在減壓下除去溶劑，用飽和的碳酸氫鈉水溶液堿化得到的殘余物，并用乙酸乙酯萃取水層。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥并過(guò)濾。在真空下濃縮濾液，得到4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己酮(產(chǎn)率88％)，其用于下一步而無(wú)需進(jìn)一步純化。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ(ppm)3.69-3.71(m，1H)，2.42-2.45(m，2H)，2.09-2.25(m，1H)，2.04-2.08(m，4H)，1.91-1.95(m，1H)，0.98(s，6H)

D. (E)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己酮肟。在室溫下，攪拌4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己酮(1.0當(dāng)量)、鹽酸羥胺(2.0當(dāng)量)和碳酸氫鈉(2.5當(dāng)量)在MeOH(0.7M)中的混合物過(guò)夜。除去溶劑，并使殘余物通過(guò)短硅膠柱(在石油醚中50％乙酸乙酯)，得到呈無(wú)色油狀物的粗(E)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己酮肟(產(chǎn)率96％)。

E. 4-氨基2，2-二甲基環(huán)己醇。向(E)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己酮肟(1.0當(dāng)量)在MeOH(0.8M)中的溶液中加入Raney-Ni(10當(dāng)量)。在室溫下，在氫氣氛下，攪拌該反應(yīng)混合物過(guò)夜。TLC(DCM∶MeOH＝10∶1)顯示反應(yīng)完成。過(guò)濾該混合物，并在真空中濃縮濾液，得到4-氨基-2，2-二甲基環(huán)己醇(產(chǎn)率92％)，其用于下一步而無(wú)需進(jìn)一步純化。

F. (4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基甲酸芐酯。在0℃下，向4-氨基-2，2-二甲基環(huán)己醇(1.0當(dāng)量)在1.7M碳酸鈉溶液(1.3當(dāng)量)和THF(1.3M)中的混合物中慢慢地加入氯甲酸芐基酯(1.5當(dāng)量)。在加入之后，在室溫下攪拌該混合物過(guò)夜。TLC(二氯甲烷∶MeOH＝10∶1)顯示反應(yīng)完成。過(guò)濾該混合物，并用乙酸乙酯萃取水層。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥并過(guò)濾。在真空中濃縮濾液，得到粗外消旋產(chǎn)物，將其通過(guò)硅膠柱色譜(DCM∶MeOH＝20∶1)純化，得到呈無(wú)色油狀物的(4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基甲酸芐酯(110g，49.4％)。

G. (4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基甲酸芐酯。通過(guò)手性超臨界流體色譜(儀器：Thar 200制備SFC，柱：ChiralPak AD-10μm，300×50mm I.D，流動(dòng)相：A：CO₂和40％B：乙醇(0.1％NH₃·H₂O)，流速：240mL/min，背壓：100bar，柱溫：38℃，波長(zhǎng)：210nm，循環(huán)時(shí)間：～4.0min)分離外消旋混合物(1.0當(dāng)量)，分離峰1，得到(4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基甲酸芐酯(產(chǎn)率22％)的1種異構(gòu)體。

H. (1S，4R)-4-氨基-2，2-二甲基環(huán)己醇。在室溫下，在氫氣球下，攪拌在MeOH(0.37M)中的芐基-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基氨基甲酸酯(峰1)(1.0當(dāng)量)和鈀碳(10％)過(guò)夜。TLC(DCM∶MeOH＝10∶1)顯示反應(yīng)完成。將該混合物過(guò)濾通過(guò)硅藻土墊料，并在減壓下蒸發(fā)溶劑，得到呈白色固體的4-氨基-2，2-二甲基環(huán)己醇(產(chǎn)率95％)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ(ppm)3.70(s，2H)，3.16(s，1H)，2.65-2.71(m，1H)，1.18-1.65(m，6H)，0.83(m，6H)。

I. 4-(((1S，4R)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈。向4-氯-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(1.0當(dāng)量)和DIEA(3.0當(dāng)量)在THF(0.05M)中的混合物中加入4-氨基-2，2-二甲基環(huán)己醇(峰1，上述得到的)(1.2當(dāng)量)。在50℃下，攪拌該混合物過(guò)夜。在反應(yīng)完成之后，在減壓下除去溶劑，并通過(guò)硅膠柱色譜(在石油醚中20％乙酸乙酯)純化殘余物，得到呈白色固體的標(biāo)題化合物(產(chǎn)率82％)。MS(ESI)m/z 293.1[M+H]⁺。在裝有Mo Kα放射的Bruker Kappa APEX-II CCD衍射儀上進(jìn)行單晶X-射線衍射研究。通過(guò)將戊烷汽相擴(kuò)散到異丙醇溶液中，使目標(biāo)化合物的晶體生長(zhǎng)。將0.215×0.183×0.055mm無(wú)色塊用帕拉通油(paratone oil)固定在Cryoloop 上。在氮?dú)饬髦校?0(2)K，使用和ω掃描，收集數(shù)據(jù)。晶體與檢測(cè)器的距離為60mm，使用0.5°的掃描寬度，每幀曝光時(shí)間為5秒。在θ中，到25.00°時(shí)數(shù)據(jù)收集完成99.9％。收集覆蓋指數(shù)-53＜＝h＜＝56，-14＜＝k＜＝13，-23＜＝1＜＝27的總共45590個(gè)反射。發(fā)現(xiàn)21888個(gè)反射是不依賴(lài)對(duì)稱(chēng)的，具有0.0549的R_int。指數(shù)化和單位晶胞精修表明C-中心的、單斜點(diǎn)陣。發(fā)現(xiàn)空間群為C2。使用Bruker SAINT軟件程序整合數(shù)據(jù)，并使用SADABS軟件程序度量(scaled)。直接方法解決(Solution by direct methods)(SHELXS)產(chǎn)生與提出的結(jié)構(gòu)一致的完整階段模式。

所有非氫原子都采用全矩陣最小二乘法(SHELXL-2013)進(jìn)行各向異性精修。使用騎式模型(riding model)放置所有氫原子。使用SHELXL-2013中的合適HFIX命令限制它們相對(duì)于它們的母原子的位置。它們的絕對(duì)立體化學(xué)顯示為4-(((1S，4R)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈。

J. 4-(((1S，4R)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲基亞磺?；?嘧啶-5-甲腈和4-(((1S，4R)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶-5-甲腈。在0℃下，向4-(((1S，4R)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(1.0當(dāng)量)在THF(0.1M)中的溶液中加入3-氯過(guò)苯甲酸(85％，2.0當(dāng)量)。然后，在室溫下，攪拌該混合物2小時(shí)。在反應(yīng)完成之后，在減壓下除去溶劑，并通過(guò)硅膠柱色譜(在石油醚中50％乙酸乙酯)純化殘余物，得到呈黃色固體的標(biāo)題化合物，MS(ESI)m/z 309.1，325.1[M+H]⁺，其用于下一步而無(wú)需進(jìn)一步純化。

K. 4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-甲腈。用60％NaH(1.1當(dāng)量)處理2，2-二氟丙-1-醇(1.2當(dāng)量)在無(wú)水DMSO(1.0M)中的溶液。在室溫下，攪拌得到的混合物5分鐘，接著一次性加入4-氯嘧啶-5-甲腈(1.0當(dāng)量)。在室溫下，攪拌反應(yīng)混合物1小時(shí)。加入乙酸乙酯，并用水和鹽水分配反應(yīng)物。濃縮有機(jī)層，得到黃色油狀物(4.19g)，將其通過(guò)硅膠柱色譜(在己烷中0-75％乙酸乙酯，100g柱)純化。合并期望的級(jí)分，并在減壓下除去揮發(fā)性溶劑。將殘余物與己烷一起研磨，并在減壓下除去揮發(fā)性溶劑，得到呈黃色油狀物的4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-甲腈(產(chǎn)率72.4％)。MS(ESI)m/z 199.8[M+1]⁺。

L. (4-2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-基)甲胺。將4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-甲腈(1.0當(dāng)量)溶于乙醇和乙酸乙酯(0.2M)的1∶1混合物中。向反應(yīng)容器中加入海綿鎳催化劑(50％含水漿液)(19當(dāng)量)和氫氧化銨(12當(dāng)量)，用氫氣充分吹掃，并允許在室溫下攪拌16小時(shí)。將反應(yīng)混合物過(guò)濾通過(guò)含有硅藻土的微纖維過(guò)濾器，用乙醇洗滌，并在減壓下除去揮發(fā)性溶劑。使用硅膠色譜(在己烷中60-100％的乙酸乙酯，接著是在乙酸乙酯中1-20％MeOH)純化殘余物。合并期望的級(jí)分，并在減壓下除去揮發(fā)性溶劑，得到(4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-基)甲胺(產(chǎn)率82％)。MS(ESI)m/z 204.1[M+1]⁺。

M. 2-(((4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-基)甲基)氨基)-4-(((1R，4S)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基)嘧啶-5-甲腈。在110℃下，加熱4-(((1S，4R)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲基亞磺?；?嘧啶-5-甲腈(1.0當(dāng)量)和(4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-基)甲胺(1.5當(dāng)量)在二噁烷(0.15M)中的溶液1小時(shí)。標(biāo)準(zhǔn)處理，得到2-(((4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-基)甲基)氨基)-4-(((1R，4S)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基)嘧啶-5-甲腈(產(chǎn)率69.6％)。¹HNMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ(ppm)8.72(s，1H)，8.26(s，1H)，8.18(s，1H)，7.99(t，J＝5.66Hz，1H)，7.17(d，J＝7.81Hz，1H)，4.64(t，J＝12.89Hz，2H)，4.39-4.49(m，2H)，4.29(d，J＝3.51Hz，1H)，3.85-4.00(m，1H)，3.12(br.s.，1H)，1.73(t，J＝19.14Hz，4H)，1.42-1.55(m，3H)，1.21-1.33(m，3H)，1.10(br.s.，1H)，0.59-0.78(m，5H).MS(ESI)m/z 448.2[M+1]⁺。

實(shí)施例2：4-(((1S，4R)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-((2-(5-甲基-1H-四唑-1-基)芐基)氨基)嘧啶-5-甲腈

A. 4-(((1S，4R)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈。向4-氯-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(1.0當(dāng)量)和DIEA(3.0當(dāng)量)在THF(0.05M)中的混合物中加入(1R，4S)-4-氨基-2，2-二甲基環(huán)己醇(如上所述確定立體化學(xué))(1.2當(dāng)量)。在50℃下，攪拌該混合物過(guò)夜。在反應(yīng)完成之后，在減壓下除去溶劑，并通過(guò)硅膠柱色譜(在石油醚中20％乙酸乙酯)純化殘余物，得到呈白色固體的標(biāo)題化合物(產(chǎn)率82％)。MS(ESI)m/z 293.1[M+H]⁺。

B. 4-(((1S，4R)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲基亞磺?；?嘧啶-5--甲腈和4-(((1S，4R)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲基磺?；?嘧啶-5-甲腈的混合物。在0℃下，向4-(((1S，4R)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(1.0當(dāng)量)在THF(0.1M)中的溶液中加入3-氯過(guò)苯甲酸(85％，2.0當(dāng)量)。然后，在室溫下攪拌該混合物2小時(shí)。在反應(yīng)完成之后，在真空下除去溶劑，并通過(guò)硅膠柱色譜(在石油醚中50％乙酸乙酯) 純化殘余物，得到呈黃色固體的標(biāo)題混合化合物，MS(ESI)m/z 309.1，325.1[M+H]⁺，其用于下一步而無(wú)需進(jìn)一步純化。

C. N-(2-溴苯基)乙酰胺。在0℃下，向2-溴苯胺(1.0當(dāng)量)在DCM(0.2M)中的溶液中加入乙酰氯(1.5M)。在該溫度下，攪拌得到的混合物過(guò)夜。加入1N鹽酸(0.4當(dāng)量)淬滅反應(yīng)。用DCM和碳酸氫鈉萃取該混合物，并用鹽水洗滌合并的有機(jī)層，經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并與在石油醚中的16％乙酸乙酯研磨，得到呈白色粉末的期望產(chǎn)物(產(chǎn)率73％)。¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ(ppm)8.33-8.31(m，1H)，7.61(br，1H)，7.54-7.52(m，1H)，7.33-7.26(m，1H)，6.99-6.95(m，1H)，2.24(s，3H)；MS(ESI)m/z 203.2[M+H]⁺。

D. 1-(2-溴苯基)-5-甲基-1H-四唑。在5℃下，向N-(2-溴苯基)乙酰胺(1.0當(dāng)量)在乙腈(0.4M)中的溶液中滴加三氟甲烷磺酸酸酐(2.0當(dāng)量)，并攪拌該混合物5分鐘。慢慢地加入三甲基甲硅烷基疊氮化物(4.0當(dāng)量)，同時(shí)保持溫度在-5℃下，然后在0℃下，攪拌該混合物80分鐘。將混合物傾倒入冰冷的碳酸氫鈉溶液中，用乙酸乙酯萃取，并將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾并濃縮，得到粗殘余物。通過(guò)硅膠柱色譜(在石油醚中16％乙酸乙酯)純化殘余物，得到呈黃色固體的期望產(chǎn)物(產(chǎn)率44％)。MS(ESI)m/z 239.1[M+H]⁺。

E. 2-(5-甲基-1H-四唑-1-基)芐腈。在90℃下，攪拌1-(2-溴苯基)-5-甲基-1H-四唑(1.0當(dāng)量)、鋅粉(0.25M)、氰化鋅(0.65當(dāng)量)、三(二亞芐基丙酮)二鈀(0.1當(dāng)量)和1，1′-二茂鐵二基-雙(二苯基膦)(0.08當(dāng)量)在乙二醇二甲醚(0.2M)中的混合物過(guò)夜。在反應(yīng)完成之后，在減壓下除去溶劑，并通過(guò)硅膠色譜(在石油醚中50％乙酸乙酯)純化殘余物，得到呈黃色固體的標(biāo)題化合物(產(chǎn)率65％)。¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ(ppm)7.958-7.956(m，1H)，7.94-7.87(m，1H)，7.80-7.76(m，1H)，7.59-7.57(m，1H)，2.63(S，3H)；MS(ESI)m/z186.1[M+H]⁺.

F. (2-(5-甲基-1H-四唑-1-基)苯基)甲胺鹽酸鹽。向2-(5-甲基-1H-四唑-1-基)芐腈(1.0當(dāng)量)在MeOH(0.4M)中的溶液中加入鈀炭和濃鹽酸(1.0當(dāng)量)。在室溫下，在氫氣氛(50psi)下攪拌該反應(yīng)混合物過(guò)夜。在反應(yīng)完成之后，將該混合物過(guò)濾通過(guò)硅藻土。在真空中濃縮濾液，得到粗產(chǎn)物(產(chǎn)率81％)，其用于下一步而無(wú)需進(jìn)一步純化。1H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ(ppm)7.85-7.75(m，3H)，7.66-7.64(m，1H)，3.96(s，2H)，2.60(s，3H)；MS(ESI)m/z190.1[M+H]⁺。

G. 4-(((1S，4R)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-((2-(5-甲基-1H-四唑-1-基)芐基)氨基)嘧啶-5-甲腈。向4-(((1S，4R)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲基亞磺?；?嘧啶-5-甲腈和4-(((1S，4R)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基) 氨基)-2-(甲基磺?；?嘧啶-5-甲腈(1.0當(dāng)量)在二噁烷(0.4M)中的混合物中加入(2-(5-甲基-1H-四唑-1-基)苯基)甲胺鹽酸鹽(1.0當(dāng)量)和DIEA(2.0當(dāng)量)。在120℃下，在微波中攪拌該混合物2小時(shí)。在反應(yīng)完成和標(biāo)準(zhǔn)處理之后，得到期望產(chǎn)物(產(chǎn)率37％)。¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ(ppm)8.12(s，1H)，7.82-7.78(m，1H)，7.63-7.61(m，1H)，7.58-7.51(m，3H)，7.02-6.92(m，1H)，4.32-4.17(m，3H)，4.01-3.99(m，1H)，3.21-3.14(m，1H)，2.41-2.36(m，3H)，1.65-1.47(m，1H)，1.36(br，1H)，1.23-1.17(m，2H)，0.81(s，3H)，0.73(s，3H)；MS(ESI)m/z 434.2[M+H]⁺。

實(shí)施例3：2-(((4-(4-氟苯基)嘧啶-5-基)甲基)氨基)-4-(((1s，4s)-4-羥基環(huán)己基)氨基)嘧啶-5-甲腈

A. 4-(4-氟苯基)嘧啶-5-甲腈.用氮?dú)獯祾?-氯嘧啶-5-甲腈(1.0當(dāng)量)、(4-氟苯基)硼酸(1.2當(dāng)量)、1，1′-雙(二苯基膦基二茂鐵-二氯化鈀(ii)二氯甲烷復(fù)合物(10mol％)和碳酸鉀(3.0當(dāng)量)在二噁烷/水3∶1(0.5M)中的混合物3分鐘。將壓力反應(yīng)容器緊緊地封蓋，并在100℃下加熱5小時(shí)。加入乙酸乙酯和水，并分離各層。將有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并濃縮，得到褐色、粘性油狀物，通過(guò)硅膠柱色譜(在己烷中0-30％乙酸乙酯，100g柱)純化，得到呈白色固體的標(biāo)題化合物(產(chǎn)率58％)。¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ(ppm)9.39(s，1H)，9.06(s，1H)，8.23-8.17(m，2H)，7.31-7.27(m，2H).MS(ESI)m/z200.2[M+1]⁺。

B. (4-(4-氟苯基)嘧啶-5-基)甲胺。在真空下，使4-(4-氟苯基)嘧啶-5-甲腈(1.0當(dāng)量)和Raney-nickel(20mol％)在MeOH(0.1M)中的混合物脫氣，接著加入30％氫氧化銨(10當(dāng)量)。在室溫下，用氫氣氫化得到的混合物過(guò)夜。將該混合物過(guò)濾通過(guò)硅藻土墊，并用MeOH洗滌濾餅。濃縮濾液，并進(jìn)一步干燥，得到褐色油狀物，通過(guò)硅膠柱色譜(在DCM中0-10％MeOH，25g柱)純化，得到呈黃色固體的標(biāo)題化合物(產(chǎn)率32％)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ(ppm)9.19(s，1H)，8.88(s，1H)，7.71-7.78(m，2H)，7.17-7.24(m，2H)，3.99(s，2H)，1.41(br.s.，2H).MS(ESI)m/z204.1[M+1]⁺。

2-(((4-(4-氟苯基)嘧啶-5-基)甲基)氨基)-4-(((1s，4s)-4-羥基環(huán)己基)氨基)嘧啶-5-甲腈。在120℃下，通過(guò)微波加熱4-(((1s，4s)-4-羥基環(huán)己基)氨基)-2-(甲基磺?；?嘧啶-5-甲腈和4-(((1s，4s)-4-羥基環(huán)己基)氨基)-2-(甲基亞磺酰基)嘧啶-5-甲腈(1.0當(dāng)量)和粗(4-(4-氟苯基)嘧啶-5-基)甲胺(2.0當(dāng)量)的混合物在二噁烷(0.2M)中的懸浮液1小時(shí)。加入水和乙酸乙酯。標(biāo)準(zhǔn)處理方法得到呈白色固體的標(biāo)題化合物(產(chǎn)率10％)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ(ppm)9.12(s，1H)，8.75(s，1H)，8.24(t，J＝5.7Hz，1H)，8.15(s，1H)，7.76(dd，J＝5.5，8.6Hz，2H)，7.37(t，J＝8.8Hz，2H)，7.08(d，J＝7.4Hz，1H)，4.64-4.54(m，2H)，4.37-4.27(m，1H)，3.66(br.s.，1H)，3.46(d，J＝7.0Hz，1H)，1.72-1.52(m，2H)，1.52-1.37(m，3H)，1.24-1.08(m，3H).MS(ESI)m/z 420.1[M+1]⁺。

實(shí)施例4：順式-1-甲基-4-((2-(((4-(對(duì)-甲苯氧基)嘧啶-5-基)甲基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)環(huán)己醇

A. 4-(對(duì)-甲苯氧基)嘧啶-5-甲腈。將對(duì)甲酚(1.0當(dāng)量)置于含有DMSO(1.0M)和氫化鈉(0.9當(dāng)量)的圓底燒瓶中。在環(huán)境溫度下，攪拌該反應(yīng)混合物5分鐘。向該混合物中加入4-氯嘧啶-5-甲腈(1.0當(dāng)量)。在25℃下，攪拌該反應(yīng)2小時(shí)。將反應(yīng)混合物分配在乙酸乙酯和水之間。用鹽水(3x)洗滌有機(jī)層，并經(jīng)硫酸鈉干燥。在減壓下除去揮發(fā)性有機(jī)溶劑，得到呈淺褐色固體的4-(對(duì)-甲苯氧基)嘧啶-5-甲腈(產(chǎn)率41.6％)，其用于下一步而無(wú)需進(jìn)一步純化。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ(ppm)9.24(s，1H)，8.94(s，1H)，7.29(dd，J＝0.8，8.6Hz，2H)，7.21-7.16(m，2H)，2.34(s，3H).MS(ESI)m/z 211.7[M+1]⁺。

B. (4-(4-(三氟甲基)苯氧基)嘧啶-5-基)甲胺。向在2-丙醇(0.3M)中的4-(對(duì)-甲苯氧基)嘧啶-5-甲腈(1.0當(dāng)量)中加入氫氧化銨(1.2當(dāng)量)和拉尼鎳。用氫氣充分吹掃反應(yīng)容器，并允許在室溫下攪拌16小時(shí)。將反應(yīng)混合物過(guò)濾通過(guò)含有硅藻土的微纖維過(guò)濾器，并用MeOH洗滌。在減壓下除去揮發(fā)性有機(jī)溶劑。將殘余物負(fù)載在硅膠柱上，并使用在DCM中的0-15％MeOH純化。合并期望的級(jí)分，并在減壓下除去所述溶劑，得到呈琥珀色油狀物的(4-(4-(三氟甲基)苯氧基)嘧啶-5-基)甲胺，在16小時(shí)之后其轉(zhuǎn)化成黃色固體。

C. 4-氯-N-((4-(對(duì)-甲苯氧基)嘧啶-5-基)甲基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-胺。將(4-(對(duì)-甲苯氧基)嘧啶-5-基)甲胺(1.0當(dāng)量)置于含有DIEA(1.0當(dāng)量)和DMF(0.4M)的圓底燒瓶中。將該燒瓶置于冷卻浴中，并冷卻至-10℃。向燒瓶中加入2，4-二氯-5-(三氟甲基)嘧啶(1.0當(dāng)量)，并在-10℃下繼續(xù)攪拌。經(jīng)3小時(shí)，使反應(yīng)混合物升溫至室溫。將反應(yīng)混合物直接地負(fù)載在硅膠柱(100g)上，并使用在己烷中的5-27％乙酸乙酯，接著使用在己烷中的27％乙酸乙酯純化。合并含有期望產(chǎn)物的級(jí)分(通過(guò)薄層色譜檢測(cè)的較低Rf點(diǎn))，并在減壓下除去溶劑，得到呈淺黃色固體的4-氯-N-((4-(對(duì)-甲苯氧基)嘧啶-5-基)甲基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-胺(產(chǎn)率27.0％)。MS(ESI)m/z 396.2[M+1]⁺

D. (1s，4s)-1-甲基-4-((2-(((4-(對(duì)-甲苯氧基)嘧啶-5-基)甲基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)環(huán)己醇。將4-氯-N-((4-(對(duì)-甲苯氧基)嘧啶-5-基)甲基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-胺(1.0當(dāng)量)置于含有(1s，4s)-4-氨基-1-甲基環(huán)己醇(1.0當(dāng)量)、DIEA(1.2當(dāng)量)和THF(0.1M)的可密封燒瓶中。用氮?dú)獯祾咴摕浚⒚芊?。將反?yīng)混合物加熱至60℃18小時(shí)。將反應(yīng)混合物直接負(fù)載在硅膠柱上，并使用在DCM中的0-10％MeOH純化。合并含有期望產(chǎn)物的級(jí)分，并在減壓下除去揮發(fā)性有機(jī)溶劑，得到黃白色泡沫狀物。使用標(biāo)準(zhǔn)方法純化該泡沫狀物，得到呈白色固體的順式-1-甲基-4-((2-(((4-(對(duì)-甲苯氧基)嘧啶-5-基)甲基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)環(huán)己醇(產(chǎn)率40.0％)。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ(ppm)8.51(s，1H)，8.44(s，1H)，7.99(s，1H)，7.24(d，J＝8.59Hz，2H)，7.02-7.09(m，2H)，4.67(s，2H)，3.87(br.s.，1H)，2.36(s，3H)，1.56(br.s.，6H)，1.27(br.s.，2H)，1.12(br.s.，3H).MS(ESI)m/z 489.3[M+1]⁺

實(shí)施例5：5-((4-((1R，4S)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)甲基)-2-甲基-4-(三氟甲基)吡啶1-氧化物

A. ((6-甲基-4-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯.將6-甲基-4-(三氟甲基)煙腈(1.0當(dāng)量)溶于MeOH(0.1M)中，加入濕的拉尼鎳，接著加入氫氧化銨(32當(dāng)量)。將反應(yīng)容器抽空三次，用氫氣再填充，然后裝入氫氣球，并在室溫下攪拌48小時(shí)。使該混合物過(guò)濾通過(guò)短的硅藻土墊，用MeOH洗滌。當(dāng)濃縮時(shí)，加入乙醇以除去過(guò)量的水。除去揮發(fā)性溶劑，得到粗產(chǎn)物，將其溶于DCM中。加入DIEA(1.8當(dāng)量)，接著加入BOC2O (0.95當(dāng)量)。在室溫下，攪拌該反應(yīng)1小時(shí)。除去揮發(fā)性溶劑，并經(jīng)由Biotage色譜(在己烷中10-100％乙酸乙酯)純化殘余物，得到((6-甲基-4-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(產(chǎn)率90％)；MS(ESI)m/z 290.3[M+1]⁺。

B. 5-(氨基甲基)-2-甲基-4-(三氟甲基)吡啶1-氧化物。向圓底燒瓶中加入溶于DCM(0.7M)中的((6-甲基-4-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(1.0當(dāng)量)。向該溶液中加入間-氯過(guò)苯甲酸(1.3當(dāng)量)，并在室溫下攪拌該混合物12小時(shí)。除去溶劑，得到粗固體，將其溶于MeOH中，并在室溫下加入在二噁烷中的4N HCl(4.2當(dāng)量)。攪拌該混合物24小時(shí)，開(kāi)始形成一些沉淀。在減壓下除去揮發(fā)性溶劑，得到粗殘余物。將殘余物溶于甲醇中，并將得到的混合物負(fù)載在Strata離子交換柱上。用水、乙腈、MeOH和在MeOH中的7N氨水連續(xù)沖洗柱。用在MeOH洗脫液中的7N氨水洗脫產(chǎn)物，并在減壓下濃縮含有產(chǎn)物的洗脫液，得到呈游離堿的5-(氨基甲基)-2-甲基-4-(三氟甲基)吡啶1-氧化物(產(chǎn)率90％)；MS(ESI)m/z 207.0[M+I]⁺。

C. 5-((4-((1R，4S)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)甲基)-2-甲基-4-(三氟甲基)吡啶1-氧化物.在110℃下加熱(1S，4R)-2，2-二甲基-4-((2-(甲基亞磺?；?-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)環(huán)己醇(1.0當(dāng)量)和5-(氨基甲基)-2-甲基-4-(三氟甲基)吡啶1-氧化物(1.0當(dāng)量)在在二噁烷(0.15M)中的溶液14小時(shí)。標(biāo)準(zhǔn)處理，得到5-(((4-(((1R，4S)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)甲基)-2-甲基-4-(三氟甲基)吡啶1-氧化物(產(chǎn)率30％)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d⁶)δ(ppm)8.06(s，1H)7.81-7.99(m，3H)5.94-6.14(m，1H)4.53(m，2H)4.24-4.42(m，1H)3.91(m，1H)2.98-3.24(m，1H)2.23-2.39(m，3H)1.28-1.75(m，4H)0.83-1.24(m，3H)0.74(s，3H)0.57(s，3H)；MS(ESI)m/z 494.3[M+1]⁺。

實(shí)施例6：(1S，3R)-3-(2-((4-異丙基嘧啶-5-基)甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基氨基)-2，2-二甲基環(huán)丁醇

A. ((4-異丙基嘧啶-5-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯。在THF(0.25M)中混合(4-異丙基嘧啶-5-基)甲胺(1.0當(dāng)量)、二碳酸二叔丁酯(1.0當(dāng)量)和三乙胺(2.5當(dāng)量)。環(huán)境溫度下，攪拌該溶液。在90分鐘之后，LCMS顯示期望的產(chǎn)物混合物。將該溶液直接傾倒在100克biotage柱(在己烷中0-20％乙酸乙酯，然后在己烷中20％乙酸乙酯，之后在己烷中30％乙酸乙酯)，得到((4-異丙基嘧啶-5-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(產(chǎn)率33.5％)。MS(ESI)m/z 252.0[M+1]⁺。

B. (4-異丙基嘧啶-5-基)甲胺二鹽酸鹽。在DCM(3.8M)中混合((4-異丙基嘧啶-5-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(1.0當(dāng)量)，并冷卻至0℃。然后，經(jīng)由注射器加入在二噁烷(3.1當(dāng)量)中的氯化氫(4M)。在環(huán)境溫度下，攪拌該溶液。在5小時(shí)之后，加入氯化氫(4M)在二噁烷中的另外的溶液，并繼續(xù)攪拌。在另外2小時(shí)之后，在減壓下除去揮發(fā)性有機(jī)溶劑，得到呈雙鹽酸鹽的(4-異丙基嘧啶-5-基)甲胺二鹽酸鹽(產(chǎn)率95％)。MS(ESI)m/z 151.3[M+1]⁺。

C. 2，2-二甲基-3-氧代環(huán)丁烷羧酸甲酯。在氮?dú)庀拢?-氯-N，N，2-三甲基丙-1-烯-1-胺(1.0當(dāng)量)和三氟甲烷磺酸鋅(1.3當(dāng)量)的攪拌混合物中加入丙烯酸甲酯(1.2當(dāng)量)。然后，將得到的混合物超聲處理12小時(shí)。在反應(yīng)完成之后，加入碳酸氫鈉水溶液，并用乙酸乙酯萃取該混合物，用鹽水洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥并過(guò)濾。在真空下濃縮濾液，并通過(guò)硅膠柱色譜(在石油醚中20％乙酸乙酯)純化殘余物，得到呈黃色油狀物的標(biāo)題產(chǎn)物(產(chǎn)率37％)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ(ppm)3.76(s，3H)，3.59-3.51(m，1H)，3.15-3.06(m，1H)，2.99-2.94(m，1H)，1.32(s，3H)，1.12(s，3H)。

D. 2，2-二甲基-3-氧代環(huán)丁烷羧酸。向2，2-二甲基-3-氧代環(huán)丁烷羧酸甲酯(1.0當(dāng)量)在MeOH(1.1M)中的溶液中加入氫氧化鈉水溶液(4.48N，2.0當(dāng)量)，并在50℃下攪拌得到的混合物2小時(shí)。如通過(guò)薄層色譜監(jiān)測(cè)起始材料的消耗，用在石油醚中的20％乙酸乙酯洗脫。在除去揮發(fā)性溶劑之后，將鹽酸鹽水溶液(2N，1.4當(dāng)量)加入到反應(yīng)混合物中，并用乙酸乙酯萃取該混合物。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥并過(guò)濾。在真空中濃縮濾液，得到呈白色固體的產(chǎn)物(產(chǎn)率88％)，其用于下一步而無(wú)需進(jìn)一步純化。¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ(ppm)12.4(br，1H)，3.31-3.23(m，1H)，3.17-3.08(m，1H)，2.97-2.91(m，1H)，1.22(s，3H)，1.04(s，3H)。

E. (2，2-二甲基-3-氧代環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯。在0℃下，向2，2-二甲基-3-氧代環(huán)丁烷羧酸(1.0當(dāng)量)和三乙胺(1.5當(dāng)量)在甲苯(0.2M)中的溶液中慢慢地加入二苯基磷?；B氮化物(1.5當(dāng)量)。然后，在100℃下攪拌該混合物4小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，并加入叔丁醇(2.5當(dāng)量)。然后，將得到的混合物回流15小時(shí)。在反應(yīng)完成之后，加入碳酸氫鈉水溶液，并用乙酸乙酯萃取該混合物，用碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌有機(jī)層，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥并過(guò)濾。在真空下濃縮濾液，并通過(guò)硅膠柱色譜(在石油醚中7％乙酸乙酯)純化殘余物，得到標(biāo)題產(chǎn)物(產(chǎn)率16％)。¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ(ppm)4.79(br，1H)，4.03-4.01(m，1H)，3.43(dd，J₁＝18.0Hz，J₂＝9.0Hz，1H)，2.94(dd，J₁＝18.0Hz，J₂＝6.9Hz，1H)，1.48(s，9H)，1.28(s，3H)，1.13(s，3H)。

F. (3-羥基-2，2-二甲基環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯。在0℃下，向(2，2-二甲基-3-氧代環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(1.0當(dāng)量)在MeOH(0.1M)中的溶液中分小批加入硼氫化鈉(1.0當(dāng)量)。在加入之后，在室溫下攪拌該混合物2小時(shí)，然后用丙酮淬滅該混合物。在真空下除去溶劑，使殘余物通過(guò)短硅膠柱色譜(在石油醚中40％乙酸乙酯)，得到粗標(biāo)題產(chǎn)物(產(chǎn)率85％)，其用于下一步而無(wú)需進(jìn)一步純化。MS(ESI)m/z 216.2[M+H]⁺。

G. 3-氨基-2，2-二甲基環(huán)己醇。在0℃下，向(3-羥基-2，2-二甲基環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(1.0當(dāng)量)在無(wú)水DCM(0.5M)中的溶液中加入TFA(1.4當(dāng)量)，并在室溫下攪拌該混合物30分鐘。在除去揮發(fā)性溶劑之后，用氨水的MeOH溶液中和殘余物，并濃縮最終得到的混合物，得到粗標(biāo)題產(chǎn)物，其用于下一步而無(wú)需進(jìn)一步純化。MS(ESI)m/z 116.2[M+H]⁺。

H. 3-氨基-2，2-二甲基環(huán)丁醇鹽酸鹽。通過(guò)手性SFC(儀器：Thar200制備SFC，柱：ChiralPak IC-10μm，250×30mm I.D，流動(dòng)相A：CO2和25％B：異丙醇，流速：200mL/min，背壓：100bar，柱溫：38℃，波長(zhǎng)：210nm，循環(huán)時(shí)間：～4.5min)分離3-氨基-2，2-二甲基環(huán)丁醇。分離峰1，得到3-羥基-2，2-二甲基環(huán)丁基氨基甲酸酯的一種異構(gòu)體。為了分離化合物，在0℃下，加入HCl(g)/MeOH(4.0當(dāng)量)，然后在室溫下攪拌20分鐘。在減壓下濃縮該混合物，得到呈白色固體的3-氨基-2，2-二甲基環(huán)丁醇鹽酸鹽(產(chǎn)率22％)。¹H NMR(DMSO-d₆ 400MHz)δ(ppm)8.26(s，3H)，3.53-3.57(m，1H)，2.84-2.85(m，1H)，2.35-2.40(m，1H)，1.85-1.88(m，1H)，1.06(s，3H)，0.99(s，3H)。

I. (1S，3R)-2，2-二甲基-3-((2-(甲硫基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)環(huán)丁醇。在圓底燒瓶中，在THF(1.0M)和DMF(1.0M)中混合3-氨基-2，2-二甲基環(huán)丁醇鹽酸鹽(峰1，上述得到的)(1.0當(dāng)量)和DIEA(1.3當(dāng)量)。在0℃下，向該溶液中加入4-氯-2-(甲硫基)-5-(三氟甲基)嘧啶(1.0當(dāng)量)。經(jīng)2小時(shí)使該混合物升溫至室溫。LCMS顯示期望產(chǎn)物。加入乙酸乙酯，分離有機(jī)相，并經(jīng)硫酸鈉干燥。過(guò)濾有機(jī)相，并濃縮成殘余物。通過(guò)硅膠色譜(Biotage柱，在乙酸乙酯中0-50％己烷；340g SNAP柱)純化干殘余物。濃縮期望的級(jí)分，得到標(biāo)題化合物。如對(duì)于本文所述其它中間體所述的，通過(guò)X-射線晶體衍射測(cè)定立體化學(xué)。¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ(ppm)8.22(d，J＝0.63Hz，1H)5.21(br.s.，1H)4.08-4.23(m，1H)3.78-3.91(m，1H)2.80(dt，J＝11.66，7.41Hz，1H)2.52-2.57(m，3H)1.79(ddd，J＝11.66，9.46，7.88 Hz，1H)1.67(d，J＝6.31Hz，1H)1.24-1.32(m，3H)0.97-1.06(m，3H)。

J. (1S，3R)-3-(2-((4-異丙基嘧啶-5-基)甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基氨基)-2，2-二甲基環(huán)丁醇。在圓底燒瓶中，在THF(0.5M)中混合(1S，3R)-2，2-二甲基-3-((2-(甲硫基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)環(huán)丁醇(1.0當(dāng)量)和3-氯苯并過(guò)氧酸(2.0當(dāng)量)。在25℃下，攪拌該反應(yīng)45分鐘。用乙酸乙酯稀釋混合物。向該溶液中加入碳酸鉀(4.0當(dāng)量)。在室溫下，攪拌該混合物30分鐘，然后過(guò)濾。濃縮濾液，得到粗產(chǎn)物。在環(huán)境溫度下，在二噁烷(0.4M)中混合(1S，3R)-2，2-二甲基-3-((2-(甲基磺?；?-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)環(huán)丁醇(1.0當(dāng)量)、DIEA(3.0當(dāng)量)和(4-異丙基嘧啶-5-基)甲胺二鹽酸鹽(1.5當(dāng)量)，并攪拌。加入另外的二噁烷以確保溶解。在室溫下1小時(shí)之后，LCMS指示存在一些產(chǎn)物。在12小時(shí)之后，將反應(yīng)加熱至75℃6小時(shí)。標(biāo)準(zhǔn)處理得到標(biāo)題化合物(產(chǎn)率39％)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ(ppm)8.97(s，1H)8.32-8.68(m，1H)8.03(s，1H)7.26-7.93(m，1H)6.07(d，J＝7.03Hz，1H)4.79(m，1H)4.54(br.s.，2H)3.80-3.96(m，1H)3.37-3.59(m，1H)2.15-2.41(m，1H)2.05(m，1H)1.06-1.24(m，6H)0.67-0.92(m，6H)；MS(ESI)m/z 411.3[M+1]⁺。

實(shí)施例7：4-((1R，3S)-3-羥基-2，2-二甲基環(huán)丁基氨基)-2-((4-異丙基嘧啶-5-基)甲基氨基)嘧啶-5-甲腈；4-((1S，3R)-3-羥基-2，2-二甲基環(huán)丁基氨基)-2-((4-異丙基嘧啶-5-基)甲基氨基)嘧啶-5-甲腈

A. 4-(3-乙氧基-2，2-二甲基環(huán)丁基氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈。用碳酸鉀粉末(3.0當(dāng)量)處理3-乙氧基-2，2-二甲基環(huán)丁烷胺(1.0當(dāng)量)和4-氯-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(1.1equiv.)在叔丁醇/1，2-二氯乙烷(0.5M)中的溶液。然后，在70℃下，在氮?dú)庀录訜岬玫降姆磻?yīng)混合物3小時(shí)。在冷卻之后，加入乙酸乙酯，并強(qiáng)力攪拌該混合物。通過(guò)真空-過(guò)濾除去固體。濃縮濾液，并進(jìn)一步干燥，得到蠟狀、黃色固體(產(chǎn)率100％)，其用于下一步而無(wú)需進(jìn)一步純化。MS(ESI)m/z 293.0[M+1]⁺。

B. 4-(3-羥基-2，2-二甲基環(huán)丁基氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈。用在DCM(3.0當(dāng)量)中的1.0M三溴硼烷處理4-((3-乙氧基-2，2-二甲基環(huán)丁基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(1.0當(dāng)量)在DCM(0.7M)中的冷卻的(0℃)、攪拌溶液。除去冷卻浴，并在室溫下攪拌該反應(yīng)混合物1小時(shí)。用MeOH淬滅反應(yīng)。加入DCM和飽和的碳酸氫鈉。用DCM萃取分離的水層。將有機(jī)萃取物經(jīng)硫酸鈉干燥，過(guò)濾并濃縮，得到褐色油狀物，通過(guò)硅膠柱色譜(在己烷中0-45％乙酸乙酯，25g柱)純化，得到黃色固體(產(chǎn)率37％)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ(ppm)8.24(s，1H)，5.42(d，J＝7.03Hz，1H)，4.09(dt，J＝7.62，9.37Hz，1H)，3.80-3.89(m，1H)，2.77(dt，J＝7.42，11.72Hz，1H)，2.48-2.54(m，3H)，1.84(ddd，J＝8.20，9.47，11.62Hz，1H)，1.74(d，J＝6.25Hz，1H)，1.23-1.28(m，3H)，0.99-1.03(m，3H).MS(ESI)m/z 264.8[M+1]⁺。

C. 4-(3-羥基-2，2-二甲基環(huán)丁基氨基)-2-(甲基磺?；?嘧啶-5-甲腈。在室溫下，用77％的3-氯過(guò)苯甲酸(2.0當(dāng)量)分批(portion-wise)處理4-((3-羥基-2，2-二甲基環(huán)丁基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(1.0當(dāng)量)在THF(0.25M)中的溶液，并慢慢地保持溫度降低。在室溫下，攪拌反應(yīng)溶液1小時(shí)，LCMS顯示完全反應(yīng)，形成上述兩種產(chǎn)物。用乙酸乙酯稀釋該反應(yīng)，并用碳酸鉀粉末(4.0當(dāng)量)處理。強(qiáng)力攪拌該混合物2小時(shí)并過(guò)濾。用乙酸乙酯充分沖洗濾餅。濃縮濾液，得到0.76g(粗100％)的黃色泡沫狀物，其用于下一步而無(wú)需進(jìn)一步純化。MS(ESI)m/z 297.1[M+1]⁺.MS(ESI)m/z 281.1[M+1]⁺。

D. (4-異丙基嘧啶-5-基)甲胺。在真空下，使4-(2-氟丙-2-基)嘧啶-5-甲腈(1.0當(dāng)量)和拉尼鎳在THF(0.5M)中的混合物脫氣。在室溫下，在完全充氣的氣球下，氫化得到的混合物過(guò)夜。將該混合物過(guò)濾通過(guò)硅藻土墊，并用MeOH洗滌濾餅。濃縮濾液，并進(jìn)一步干燥，得到褐色油狀物，通過(guò)硅膠柱色譜(在乙酸乙酯中0-20％MeOH，50g柱)純化，得到(產(chǎn)率30％)呈上述兩種產(chǎn)物的3∶2混合物的淺黃色油狀物。MS(ESI)m/z 152.0[M+1]⁺.MS(ESI)m/z 170.0[M+1]⁺。

E. 4-((1R，3S)-3-羥基-2，2-二甲基環(huán)丁基氨基)-2-((4-異丙基嘧啶-5-基)甲基氨基)嘧啶-5-甲腈和4-((1S，3R)-3-羥基-2，2-二甲基環(huán)丁基氨基)-2-((4-異丙基嘧啶-5-基)甲基氨基)嘧啶-5-甲腈.在110℃下，通過(guò)微波加熱粗(4-異丙基嘧啶-5-基)甲胺(2.0當(dāng)量)和4-((3-羥基-2，2-二甲基環(huán)丁基)氨基)-2-(甲基磺?；?嘧啶-5-甲腈(1.0當(dāng)量)在二噁烷(0.2M)中的溶液1小時(shí)。濃縮該反應(yīng)，得到固體殘余物，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)手性分離方法純化，得到下述兩種化合物。

4-((1R，3S)-3-羥基-2，2-二甲基環(huán)丁基氨基)-2-((4-異丙基嘧啶-5-基)甲基氨基)嘧啶-5-甲腈.對(duì)于其它化合物，如本文所述的確定絕對(duì)立體化學(xué)。99.5％ee。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ(ppm)8.96-9.03(m，1H)，8.43-8.54(m，1H)，8.17-8.24(m，1H)，8.11(t，J＝5.66Hz，1H)，7.29(d，J＝7.42Hz，1H)，4.81(d，J＝5.47Hz，1H)，4.50-4.62(m，2H)，3.74-3.85(m，1H)，3.39-3.54(m，1H)，3.28(dt，J＝6.69，13.57Hz，1H)，2.19-2.36(m，1H)，2.08-2.19(m，1H)，1.18(d，J＝5.47Hz，3H)，1.20(d，J＝5.47Hz，3H)，1.14(s，1H)，0.87(s，2H)，0.78(s，3H)；MS(ESI)m/z 368.1[M+1]⁺。

4-((1S，3R)-3-羥基-2，2-二甲基環(huán)丁基氨基)-2-((4-異丙基嘧啶-5-基)甲基氨基)嘧啶-5-甲腈。100％ee。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ(ppm)8.98-9.03(m，1H)，8.44-8.53(m，1H)，8.17-8.24(m，1H)，8.11(t，J＝5.86Hz，1H)，7.29(d，J＝7.42Hz，1H)，4.81(d，J＝5.08Hz，1H)，4.49-4.62(m，2H)，3.74-3.85(m，1H)，3.41-3.55(m，1H)，3.28(dt，J＝6.54，13.47Hz，1H)，2.19-2.35(m，1H)，2.09-2.19(m，1H)，1.19(d，J＝0.78Hz，3H)，1.19(d，J＝11.72Hz，3H)，1.14(s，1H)，0.87(s，2H)，0.78(s，3H)；MS(ESI)m/z 368.1[M+1]⁺。

實(shí)施例8：(1S，3R)-3-((2-(((4-(2-氟丙烷-2-基)嘧啶-5-基)甲基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)-2，2-二甲基環(huán)丁醇

A. ((4-(2-氟丙烷-2-基)嘧啶-5-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯。在THF(0.25M)中混合(4-(2-氟丙烷-2-基)嘧啶-5-基)甲胺和(4-異丙基嘧啶-5-基)甲胺(1.0當(dāng)量)、二碳酸二叔丁酯(1.0當(dāng)量)和三乙胺(2.5當(dāng)量.)的混合物。在環(huán)境溫度下，攪拌該溶液。在90分鐘之后，將溶液直接傾倒在100克biotage柱(在己烷(2.5L)中0-20％乙酸乙酯，接著在己烷中20％乙酸乙酯，之后在己烷中30％乙酸乙酯)上，得到期望的氟代產(chǎn)物(產(chǎn)率39％)。MS(ESI)m/z 270.0[M+1]⁺。

B. (4-(2-氟丙烷-2-基)嘧啶-5-基)甲胺二鹽酸鹽。環(huán)境溫度下，在DCM(1.5M)中混合((4-(2-氟丙烷-2-基)嘧啶-5-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(1.0當(dāng)量)，并經(jīng)由注射器加入在二噁烷中的4.0M氯化氫。在環(huán)境溫度下，攪拌該溶液。在16小時(shí)之后，在減壓下濃縮溶液，得到呈白色固體的標(biāo)題化合物(產(chǎn)率100％)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 9.17(d，J＝1.56Hz，1H)，8.89(s，1H)，8.32(br.s.，2H)，4.22(dd，J＝5.66，3.32Hz，2H)，1.59-1.84(m，6H)；MS(ESI)m/ [M+1]⁺。

C. (1S，3R)-2，2-二甲基-3-((2-(甲基磺?；?-5-(三氟甲基)-嘧啶-4-基)氨基)環(huán)丁醇和(1S，3R)-2，2-二甲基-3-((2-(甲基亞磺?；?-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)環(huán)丁醇。經(jīng)30秒，用3-氯過(guò)苯甲酸(2.0當(dāng)量)分批處理(1S，3R)-2，2-二甲基-3-((2-(甲硫基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)環(huán)丁醇(1.0當(dāng)量)在THF(0.5M)中的溶液。在環(huán)境溫度下，攪拌反應(yīng)溶液。在45分鐘之后，用乙酸乙酯稀釋該溶液，接著加入顆粒狀碳酸鉀(4.0當(dāng)量)。在環(huán)境溫度下，攪拌混合物30分鐘。然后，將該溶液過(guò)濾通過(guò)紙濾料(paper frit)，并在減壓下濃縮濾液，得到80％砜和20％亞砜的白色泡沫狀物(產(chǎn)率96％)。MS(ESI)m/z324.0[M+1]⁺and MS(ESI)m/z340.4[M+1]⁺。

D. (1S，3R)-3-((2-(((4-(2-氟丙烷-2-基)嘧啶-5-基)甲基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)-2，2-二甲基環(huán)丁醇。在環(huán)境溫度下，在二噁烷(0.4M)中混合(1S，3R)-2，2-二甲基-3-((2-(甲基磺?；?-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)環(huán)丁醇(1.0當(dāng)量)和(4-(2-氟丙烷-2-基)嘧啶-5-基)甲胺二鹽酸鹽(1.3當(dāng)量)，并攪拌。在1小時(shí)之后，將該溶液加熱至75℃。在16小時(shí)之后，在減壓下濃縮溶液，并在標(biāo)準(zhǔn)處理之后，得到標(biāo)題化合物(產(chǎn)率50.9％)。如本文對(duì)于其它化合物所述，使用手性中間體，確定絕對(duì)立體化學(xué)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ(ppm)9.01(s，1H)，8.47-8.67(m，1H)，7.94-8.14(m，1H)，7.78(br.s.，1H)，6.07(d，J=7.81Hz，1H)，4.66-4.91(m，2H)，3.35(br.s.，1H)，1.96-2.22(m，1H)，1.62-1.82(m，6H)，0.54-1.23(m，6H)；MS(ESI)m/z429.3[M+1]⁺。

實(shí)施例9：3-(((5-氰基-4-(((1s，4s)-4-羥基-4-甲基環(huán)己基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)甲基)-4-(三氟甲基)吡啶1-氧化物

A. 3-(((5-氰基-4-(((1s，4s)-4-羥基-4-甲基環(huán)己基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)甲基)-4-(三氟甲基)吡啶1-氧化物.將3-(((4-氯-5-氰基嘧啶-2-基)氨基)甲基)-4-(三氟甲基)吡啶1-氧化物(1.0當(dāng)量)置于含有(1s，4s)-4-氨基-1-甲基環(huán)己醇(1.1當(dāng)量)、DIEA(1.1當(dāng)量)和THF(0.3M)的可密封燒瓶中。用氮?dú)獯祾邿坎⒚芊?。將反?yīng)混合物加熱至60℃18小時(shí)。在標(biāo)準(zhǔn)處理之后，得到3-(((5-氰基-4-(((1s，4s)-4-羥基-4-甲基環(huán)己基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)甲基)-4-(三氟甲基)吡啶1-氧化物(產(chǎn)率57％)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ(ppm)8.26-8.35(m，1H)8.15-8.25(m，2H)7.94-8.09(m，1H)7.70-7.81(m，1H)7.31(d，J=7.42Hz，1H)4.44-4.66(m，2H)3.85-4.10(m，1H)1.54-1.71(m，1H)1.43(m，1H)1.22(m，1H)0.92-1.14(m，4H)；MS(ESI)m/z423.4[M+1]⁺。

實(shí)施例10：2-(((2-氟-4-苯基嘧啶-5-基)甲基)氨基)-4-(((1s，4s)-4-羥基-4-甲基環(huán)己基)氨基)嘧啶-5-甲腈

A. 4-(((1s，4s)-4-羥基-4-甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈。在50℃，攪拌4-氯-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(1.0當(dāng)量)、(1s，4s)-4-氨基-1-甲基環(huán)己醇(1.2當(dāng)量)和DIEA(2.4當(dāng)量)在THF(0.2M)中的混合物2小時(shí)。在反應(yīng)完成之后，在減壓下除去溶劑，并通過(guò)硅膠柱色譜(在石油醚中20％乙酸乙酯)純化殘余物，得到呈白色固體的標(biāo)題化合物(產(chǎn)率83％)。MS(ESI)m/z279.1[M+H]⁺。

B. 4-(((1s，4s)-4-羥基-4-甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲基亞磺酰基)嘧啶-5-甲腈和4-(((1s，4s)-4-羥基-4-甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲基磺?；?嘧啶-5-甲腈的混合物。在0℃下，向4-(((1s，4s)-4-羥基-4-甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(1.0當(dāng)量)在DCM(0.5M)中的冷卻溶液中分小批加入3-氯過(guò)苯甲酸(1.1當(dāng)量)。然后，在室溫下攪拌該混合物1小時(shí)。在反應(yīng)完成之后，濃縮反應(yīng)混合物。通過(guò)硅膠柱色譜(在DCM中10％MeOH)純化殘余物，得到呈白色固體的期望產(chǎn)物，其用于下一步而沒(méi)有進(jìn)一步純化。MS(ESI)m/z＝295.2[M+1]⁺/311.2[M+1]⁺。

C. 3-氧代-3-苯基丙腈。在氮?dú)庀拢虮郊姿峒柞?1.0當(dāng)量)和甲基氰(2.0當(dāng)量)在無(wú)水THF(1.0M)中的溶液中加入氫化鈉(在礦物油中60％，2當(dāng)量)。在將攪拌得到的反應(yīng)混合物在70℃下過(guò)夜之后，用冰-水淬滅反應(yīng)混合物，并用乙酸乙酯萃取。用鹽水洗滌合并的有機(jī)層，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥并過(guò)濾。在真空下濃縮，得到呈褐色固體的粗產(chǎn)物。¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ(ppm)7.94-7.92(m，2H)，7.69-7.65(m，1H)，7.55-7.54(m，2H)，4.08(s，2H)。

D. 2-氨基-4-苯基嘧啶-5-甲腈。在50℃下，在氮?dú)庀?，攪?-氧代-3-苯基丙腈(1.0當(dāng)量)在1，1-二甲氧基-N，N-二甲基甲胺(2.2M)中的溶液過(guò)夜。在反應(yīng)完成之后，濃縮該反應(yīng)混合物。通過(guò)硅膠柱色譜(在石油醚中30％乙酸乙酯)純化殘余物，得到呈黃色油狀物的2-苯甲?；?3-(二甲基氨基)丙烯腈(產(chǎn)率8％)。¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ(ppm)7.83(s，1H)，7.61-7.60(m，2H)，7.52-7.50(m，1H)，7.47-7.45(m，2H)，3.37(s，3H)，3.28(s，3H)；MS (ESI)m/z＝201.2[M+1]⁺。

在80℃下，在氮?dú)庀拢瑪嚢?-苯甲?；?3-(二甲基氨基)丙烯腈(1.0當(dāng)量)、碳酸鉀(2.0當(dāng)量)和硝酸胍(1.3當(dāng)量)在乙醇(0.2M)中的溶液過(guò)夜。在反應(yīng)完成之后，濃縮該反應(yīng)混合物。通過(guò)硅膠柱色譜(在石油醚中30％乙酸乙酯)純化殘余物，得到呈黃色固體的期望混合物產(chǎn)物(產(chǎn)率48％)，其用于下一步而無(wú)需進(jìn)一步純化。¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ(ppm)8.73(s，1H)，7.87-7.83(m，4H)，7.58-7.56(m，3H)；MS(ESI)m/z＝197.2[M+1]⁺。

E. 5-(氨基甲基)-4-苯基嘧啶-2-胺。向2-氨基-4-苯基嘧啶-5-甲腈(1.0當(dāng)量)在THF(0.15M)中的溶液中加入氫氧化銨和拉尼鎳。在室溫下，在氫氣氛下，攪拌該混合物過(guò)夜，然后使反應(yīng)混合物過(guò)濾通過(guò)硅藻土。在真空中濃縮濾液，得到呈黃色固體的粗標(biāo)題化合物(產(chǎn)率56％)。使用該產(chǎn)物而無(wú)需進(jìn)一步純化。¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ(ppm)8.34(s，1H)，7.69-7.65(m，2H)，7.46-7.44(m，3H)，6.50(br，2H)，3.54(s，2H)，1.70(br，2H)；MS(ESI)m/z＝201.2[M+1]⁺。

F. 2-(((2-氨基-4-苯基嘧啶-5-基)甲基)氨基)-4-(((1s，4s)-4-羥基-4-甲基環(huán)己基)氨基)嘧啶-5-甲腈。在微波反應(yīng)器中，在120℃下，攪拌4-(((1s，4s)-4-羥基-4-甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲基亞磺?；?嘧啶-5-甲腈和4-(((1s，4s)-4-羥基-4-甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶-5-甲腈(1.0當(dāng)量)、5-(氨基甲基)-4-苯基嘧啶-2-胺(1.0當(dāng)量)和DIEA(1.7當(dāng)量)在THF(0.2M)中的混合物2小時(shí)。在反應(yīng)完成之后，在減壓下除去溶劑，并通過(guò)硅膠色譜(在DCM中5％甲醇)純化殘余物，得到呈黃色固體的期望產(chǎn)物(產(chǎn)率74％)。MS(ESI)m/z431.2[M+H]⁺。

G. 2-(((2-氟-4-苯基嘧啶-5-基)甲基)氨基)-4-(((1s，4s)-4-羥基-4-甲基環(huán)己基)氨基)嘧啶-5-甲腈。在0℃下，經(jīng)30分鐘，向2-(((2-氨基-4-苯基嘧啶-5-基)甲基)氨基)-4-(((1s，4s)-4-羥基-4-甲基環(huán)己基)氨基)嘧啶-5-甲腈(1.0當(dāng)量)在四氟硼酸和丙酮中的懸浮液中滴加亞硝酸鈉(1.7當(dāng)量)水溶液，然后在室溫下攪拌該反應(yīng)混合物2小時(shí)。用碳酸氫鈉粉末淬滅反應(yīng)，并標(biāo)準(zhǔn)處理，得到呈白色固體的標(biāo)題化合物(產(chǎn)率6％)。¹H-NMR(400MHz，CD₃0D)δ(ppm)8.59(s，1H)，7.97(s，1H)，7.61-7.60(m，2H)，7.47-7.46(m，3H)，4.60(s，2H)，3.55-3.53(m，1H)，1.65-1.49(m，6H)，1.40-1.35(m，2H)，1.10(s，3H)；MS(ESI)m/z433.2[M+H]+。

實(shí)施例11：3-(((4-(((1R，3S)-3-(羥甲基)-2，2-二甲基環(huán)丁基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)甲基)-4-(三氟甲基)吡啶1-氧化物

A. 3-(((4-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)甲基)-4-(三氟甲基)吡啶1-氧化物。將3-(氨基甲基)-4-(三氟甲基)吡啶1-氧化物鹽酸鹽(1.0當(dāng)量)溶于DIEA(2.5當(dāng)量)和DMF(0.4M)中。使用冰和鹽水浴將該均質(zhì)溶液冷卻至-20℃。向該溶液中加入2，4-二氯-5-(三氟甲基)嘧啶(1.0當(dāng)量)。在-20℃下，攪拌該溶液10分鐘，然后升溫至環(huán)境溫度30分鐘。在30分鐘之后，用乙酸乙酯和水稀釋該溶液。分離水層，并用乙酸乙酯(3X)萃取。合并有機(jī)層，并經(jīng)硫酸鎂干燥，過(guò)濾并在減壓下除去溶劑，得到白色固體。經(jīng)由biotage色譜(在己烷中0-60％乙酸乙酯，然后60％乙酸乙酯)純化固體，得到呈白色固體的標(biāo)題化合物(產(chǎn)率47％)。MS(ESI)m/z372.8[M]⁺。

B. 3-(((4-(((1R，3S)-3-(羥甲基)-2，2-二甲基環(huán)丁基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)甲基)-4-(三氟甲基)吡啶1-氧化物。在乙醇(0.1M)中混合3-(((4-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)甲基)-4-(三氟甲基)吡啶1-氧化物(1.0當(dāng)量)、((1S，3R)-3-氨基-2，2-二甲基環(huán)丁基)MeOH和DIEA(1.2當(dāng)量)。在螺帽的(screw capped)閃爍瓶中，在85℃下攪拌該溶液。在16小時(shí)之后，在減壓下濃縮溶液，并通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)手性分離方法純化殘余物，得到標(biāo)題化合物(產(chǎn)率54％)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ(ppm)8.26(d，J＝6.64Hz，1H)，8.07(s，1H)，7.96-8.03(m，1H)，7.89-7.96(m，1H)，7.75(d，J＝6.64Hz，1H)，6.30(d，J＝7.81Hz，1H)，4.61(br.s.，2H)，4.25-4.41(m，1H)，4.04-4.18(m，1H)，1.90-2.02(m，1H)，1.73-1.89(m，1H)，1.54-1.69(m，1H)，1.21(br.s.，1H)，0.68-0.92(m，6H)；MS(ESI)m/z466.2[M+1]。

實(shí)施例12：(1R，2R，5S)-2-甲基-5-(5-(三氟甲基)-2-((4-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲基氨基)嘧啶-4-基氨基)環(huán)己醇

A. 4-氯-5-(三氟甲基)-N-((4-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲基)嘧啶-2-胺.將(4-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲胺HCl(1.0當(dāng)量)置于含有DIEA(2.5M)和DMF(0.6M)的圓底燒瓶中。將該燒瓶冷卻至0℃，并慢慢地分批加入2，4-二氯-5-(三氟甲基)嘧啶(1.0當(dāng)量)。將反應(yīng)混合物攪拌過(guò)夜，并使其升溫至室溫。將反應(yīng)混合物直接負(fù)載在硅膠柱上，并使用在己烷中的0-20％乙酸乙酯，接著使用在己烷中的20％乙酸乙酯純化。合并含有期望異構(gòu)體的級(jí)分(通過(guò)薄層色譜檢測(cè)的較低Rf點(diǎn))，并在減壓下除去揮發(fā)性有機(jī)溶劑，得到呈白色固體的4-氯-5-(三氟甲基)-N-((4-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲基)嘧啶-2-胺(產(chǎn)率17.2％)。MS(ESI)m/z357.2[M+1]⁺。

B. (1R，2R，5S)-2-甲基-5-(5-(三氟甲基)-2-((4-(三氟甲基)-吡啶-3-基)甲基氨基)嘧啶-4-基氨基)環(huán)己醇。將4-氯-5-(三氟甲基)-N-((4-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲基)嘧啶-2-胺(1.0當(dāng)量)置于含有(1R，2R，5S)-5-氨基-2-甲基環(huán)己醇(1.1當(dāng)量)、DIEA(2.0當(dāng)量)和THF(0.1M)的可密封燒瓶中。用氮?dú)獯祾咴摕坎⒚芊狻⒎磻?yīng)混合物加熱至60℃18小時(shí)。標(biāo)準(zhǔn)處理，得到呈白色固體的(1R，2R，5S)-2-甲基-5-(5-(三氟甲基)-2-((4-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲基氨基)嘧啶-4-基氨基)環(huán)己醇(產(chǎn)率47.3％)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ(ppm)8.65-8.76(m，2H)8.01-8.14(m，1H)7.71(d，J=5.08Hz，1H)5.74(br.s.，1H)4.67-4.80(m，1H)4.57-4.67(m，1H)4.54(br.s.，1H)4.39(d，J=4.30Hz，1H)4.14(br.s.，1H)3.21-3.31(m，1H)1.78(br.s.，1H)1.54(br.s.，1H)1.41(br.s.，1H)1.33(br.s.，1H)1.10-1.24(m，1H)0.96(br.s.，1H)0.81-0.89(m，2H).MS(ESI)m/z450.2[M+1]⁺

實(shí)施例13：順式-4-((5-氰基-2-(((4-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-N-甲基環(huán)己烷甲酰胺

A. 4-氯-2-((4-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲基氨基)嘧啶-5-甲腈。向在DMF(1.0M)中的(4-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲胺鹽酸鹽(1.0當(dāng)量)中加入DIEA(2.5當(dāng)量)。將該反應(yīng)冷卻至-20℃(冰/鹽水浴)，然后加入2，4-二氯嘧啶-5-甲腈(1.0當(dāng)量)。攪拌該反應(yīng)混合物10分鐘，然后從冰浴移出，并允許攪拌30分鐘。將反應(yīng)混合物用乙酸乙酯稀釋?zhuān)⒂盟峙?。分離有機(jī)層，并在減壓下除去揮發(fā)性溶劑。使用硅膠色譜(在己烷中的5-50％乙酸乙酯)純化殘余物。合并期望的級(jí)分，并在減壓下除去揮發(fā)性溶劑。將殘余物在己烷中的10％乙酸乙酯中研磨，過(guò)濾，用己烷洗滌，并在真空中干燥，得到呈淺黃褐色固體的4-氯-2-(((4-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲基)氨基)嘧啶-5-甲腈(產(chǎn)率43.0％)；MS(ESI)m/z 314.0[M+1]⁺。

B. 順式-4-((5-氰基-2-(((4-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-N-甲基環(huán)己烷甲酰胺。將4-氯-2-(((4-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲基)氨基)嘧啶-5-甲腈(1.0當(dāng)量)置于含有(1s，4s)-4-氨基-N-甲基環(huán)己烷甲酰胺(1.0當(dāng)量)、1，8-二氮雜二環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯(1.2當(dāng)量)和THF(0.1M)的可密封燒瓶中。用氮?dú)獯祾咴摕坎⒚芊?。將反?yīng)混合物加熱至60℃18小時(shí)。標(biāo)準(zhǔn)處理得到呈白色固體的順式-4-((5-氰基-2-(((4-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-N-甲基環(huán)己烷甲酰胺(產(chǎn)率48.2％)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ(ppm)8.73(d，J＝5.08Hz，1H)，8.64-8.69(m，1H)，8.29(t，J＝5.66Hz，1H)，8.21(s，1H)，7.72(d，J＝5.08Hz，1H)，7.53-7.66(m，1H)，7.00-7.12(m，1H)，4.62-4.73(m，2H)，3.69(br.s.，1H)，2.53-2.61(m，3H)，2.15-2.30(m，1H)，1.70-1.97(m，2H)，1.42-1.62(m，3H)，1.15-1.27(m，3H).MS(ESI)m/z434.3[M+1]⁺

實(shí)施例14：3-((4-(3-羥基-2，2，4，4-四甲基環(huán)丁基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)甲基)-4-(三氟甲基)吡啶1-氧化物

A. 3-((4-(3-羥基-2，2，4，4-四甲基環(huán)丁基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)甲基)-4-(三氟甲基)吡啶1-氧化物。將DIEA(3.0當(dāng)量)置于含有3-(((4-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)甲基)-4-(三氟甲基)吡啶1-氧化物(1.0當(dāng)量)、3-氨基-2，2，4，4-四甲基環(huán)丁醇(2.0當(dāng)量)(制備參見(jiàn)J.Med.Chem.2011，54，7693-7704)和乙醇的可密封燒瓶中。用氮?dú)獯祾邿坎⒚芊狻⒎磻?yīng)混合物加熱至80℃9小時(shí)。標(biāo)準(zhǔn)處理得到下述化合物。基于在本文所述生物化學(xué)測(cè)定中如本文提供的其它化合物類(lèi)似的活性對(duì)立體化學(xué)進(jìn)行歸屬。

3-((4-((1R，3R)-3-羥基-2，2，4，4-四甲基環(huán)丁基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)甲基)-4-(三氟甲基)吡啶1-氧化物。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 8.28(d，J=6.25Hz，1H)8.09-8.18(m，1H)8.00-8.08(m，1H)7.96(s，1H)7.75(m，1H)5.26(m，1H)4.60(m，2H)3.77(m，1H)3.34(s，1H)0.71-1.15(m，12H)；MS(ESI)m/z 480.0[M+1]⁺。

3-((4-((1S，3S)-3-羥基-2，2，4，4-四甲基環(huán)丁基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2- 基氨基)甲基)-4-(三氟甲基)吡啶1-氧化物。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ(ppm)8.27(d，J=6.64Hz，1H)8.06-8.17(m，2H)8.00(s，1H)7.75(m，1H)5.12(m，1H)4.90(br.s.，1H)4.60(m，2H)3.65-3.86(m，1H)3.26(br.s.，1H)3.14(m，1H)0.68-0.93(m，12H)；MS(ESI)m/z 480.0[M+1]⁺。

實(shí)施例15：2-(((4-乙基嘧啶-5-基)甲基)氨基)-4-(((1S，3R)-3-羥基-2，2，3-三甲基環(huán)丁基)氨基)嘧啶-5-甲腈，2-(((4-乙基嘧啶-5-基)甲基)氨基)-4-(((1R，3S)-3-羥基-2，2，3-三甲基環(huán)丁基)氨基)嘧啶-5-甲腈

A. 4-乙基嘧啶-5-甲腈.在室溫下，攪拌3-氧代戊烷腈(1.0當(dāng)量)和1，1-二甲氧基-N，N-二甲基甲胺(4.3M)在THF(1.6M)中的混合物過(guò)夜。在反應(yīng)完成之后，在真空中除去溶劑，得到粗2-((二甲基氨基)亞甲基)-3-氧代戊烷腈(0.98當(dāng)量)，其用于下一步而無(wú)需進(jìn)一步純化。MS(ESI)m/z152.1[M+H]⁺0

將粗2-((二甲基氨基)亞甲基)-3-氧代戊烷腈(0.98當(dāng)量)、甲脒鹽酸鹽(2.0當(dāng)量)和三乙胺(2.0當(dāng)量)在乙醇(1.0M)中的混合物回流36小時(shí)。除去溶劑，并通過(guò)二氧化硅柱色譜(在石油醚中20％乙酸乙酯)純化殘余物，得到標(biāo)題產(chǎn)物(產(chǎn)率35％)。¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ(ppm)9.20(s，1H)，8.83(s 1H)，2.98(d，J＝7.6Hz，2H)，1.32(t，J＝7.6Hz，3H)；MS(ESI)m/z134.1[M+H]⁺。

B. (4-乙基嘧啶-5-基)甲胺。向4-乙基嘧啶-5-甲腈(1.0當(dāng)量)在MeOH(0.4M)中的溶液中加入氫氧化銨和拉尼鎳。在氫氣氛下，在室溫下，攪拌該混合物過(guò)夜，然后將反應(yīng)混合物過(guò)濾通過(guò)硅藻土。在真空中濃縮濾液，得到粗標(biāo)題化合物(59％)，其用于下一步而無(wú)需進(jìn)一步純化。MS(ESI)m/z138.1/[M+H]⁺。

C. 4-氯-2-(((4-乙基嘧啶-5-基)甲基)氨基)嘧啶-5-甲腈。向2，4-二氯嘧啶-5-甲腈(1.0當(dāng)量，61.4)和(4-乙基嘧啶-5-基)甲胺(1.0當(dāng)量)在異丙醇(0.2M)中的混合物中加入DIEA(2.0當(dāng)量)。在氮?dú)庀拢谑覝叵?，攪拌該混合物過(guò)夜。用乙酸乙酯萃取反應(yīng)混合物，用氯化銨溶液洗滌有機(jī)層，并在真空下濃縮得到粗產(chǎn)物，通過(guò)硅膠色譜(在石油醚中30％乙酸乙酯)純化，得到呈褐色固體的標(biāo)題化合物(產(chǎn)率11.4％)。¹H-NMR(400MHz，CD₃OD)δ(ppm)9.95(d，J＝3.2Hz，1H)，8.64(d，J＝12.0Hz，1H)，8.58(d，J＝19.6Hz，1H)，4.70(d，J＝20.4Hz，2H)，2.97-2.87(m，2H)，1.33-1.27(m，3H)；MS(ESI)m/z 275.1[M+H]⁺。

D. 2，2-二甲基-3-氧代環(huán)丁烷羧酸甲酯。在氮?dú)夥障拢?-氯-N，N，2-三甲基丙-1-烯-1-胺(1.0當(dāng)量)和三氟甲烷磺酸鋅(1.3當(dāng)量)的混合物中加入丙烯酸甲酯(1.3當(dāng)量)，同時(shí)攪拌。然后，將得到的混合物超聲處理12小時(shí)。用水淬滅該混合物，并用DCM萃取。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥并過(guò)濾。在減壓下蒸發(fā)濾液，并通過(guò)硅膠色譜(在石油醚中8％乙酸乙酯)純化殘余物，得到呈淺黃色油狀物的標(biāo)題化合物(產(chǎn)率37％)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ(ppm)3.76(s，3H)，3.59-3.51(m，1H)，3.15-3.06(m，1H)，2.99-2.94(m，1H)，1.32(s，3H)，1.12(s，3H)。

E. 2，2-二甲基-3-氧代環(huán)丁烷羧酸。向2，2-二甲基-3-氧代環(huán)丁烷羧酸甲酯(1.0當(dāng)量)在MeOH(1.1M)中的溶液中加入氫氧化鈉水溶液(4.48N，2.0當(dāng)量)，并在50℃下攪拌得到的混合物2小時(shí)。在反應(yīng)完成之后，在減壓下除去過(guò)量的MeOH，并用乙醚萃取該混合物，然后用鹽酸(4N，2.9當(dāng)量)中和水溶液。用乙酸乙酯萃取該混合物，用鹽水洗滌有機(jī)層，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥并過(guò)濾。在真空下濃縮濾液，得到呈白色固體的標(biāo)題產(chǎn)物(產(chǎn)率88％)。¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ(ppm)12.4(br，1H)，3.31-3.23(m，1H)，3.17-3.08(m，1H)，2.97-2.91(m，1H)，1.22(s，3H)，1.04(s，3H)。

F. (2，2-二甲基-3-氧代環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯。在冰-水浴下，向2，2-二甲基-3-氧代環(huán)丁烷羧酸(1.0當(dāng)量)和三乙胺(1.5當(dāng)量)在甲苯(0.2M)中的溶液中慢慢地加入二苯基磷?；B氮化物(2.0當(dāng)量)。然后，在100℃下攪拌該混合物4小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，并加入叔丁醇(2.2當(dāng)量)。將得到的混合物回流15小時(shí)。在混合物冷卻之后，加入碳酸氫鈉水溶液和乙酸乙酯。分離有機(jī)層，并用乙酸乙酯萃取水溶液。將合并的有機(jī)層用碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥并過(guò)濾。在真空下濃縮濾液，通過(guò)硅膠柱色譜(在石油醚中7％乙酸乙酯)純化殘余物，得到標(biāo)題產(chǎn)物(產(chǎn)率16％)。¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ(ppm)4.81-4.70(m，1H)，4.05-3.93(m，1H)，3.37(dd，J₁＝18.0Hz，J₂＝9.0Hz，1H)，2.89(dd，J₁＝18.0Hz，J₂＝6.9Hz，1H)，1.48(s，9H)，1.28(s，3H)，1.13(s，3H)。

G. (3-羥基-2，2，3-三甲基環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯。在氮?dú)庀?，?2，2-二甲基-3-氧代環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(1.0當(dāng)量)在無(wú)水THF(0.15M)中的溶液中分批加入甲基鋰(在乙醚中1.6M，4.0當(dāng)量)，保持溫度低于-70℃。在該溫度下攪拌該混合物1小時(shí)。用氯化銨水溶液淬滅該混合物，并用乙酸乙酯萃取該混合物，用碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥并過(guò)濾。在真空下濃縮濾液，通過(guò)硅膠柱色譜(在石油醚中5％至25％乙酸乙酯)純化殘余物，得到標(biāo)題產(chǎn)物(產(chǎn)率30％)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ(ppm)4.65-4.52(m，1H)，3.60-3.49(m，1H)，2.37-2.28(m，1H)，1.84-1.76(m，1H)，1.66(s，1H)，1.44(s，9H)，1.28(s，3H)，1.06(s，3H)，1.01(s，3H)；MS(ESI)m/z230.2[M+H]⁺。

H. 3-氨基-1，2，2-三甲基環(huán)丁醇。在0℃下，向(3-羥基-2，2，3-三甲基環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(1.0當(dāng)量)在無(wú)水DCM(0.5M)中的溶液中加入三氟乙酸(1.0M)，并在室溫下攪拌該混合物30分鐘。在除去揮發(fā)性溶劑之后，通過(guò)氨水MeOH溶液中和殘余物，并濃縮最終得到的混合物，得到粗標(biāo)題產(chǎn)物，其用于下一步而無(wú)需進(jìn)一步純化。MS(ESI)m/z130.1[M+H]⁺。

I. 2-(((4-乙基嘧啶-5-基)甲基)氨基)-4-(((1S，3R)-3-羥基-2，2，3-三甲基環(huán)丁基)氨基)嘧啶-5-甲腈和2-(((4-乙基嘧啶-5-基)甲基)氨基)-4-(((1R，3S)-3-羥基-2，2，3-三甲基環(huán)丁基)氨基)嘧啶-5-甲腈。在微波反應(yīng)器中，在120℃下，加熱乙基二異丙胺(2.0當(dāng)量)、3-氨基-1，2，2-三甲基環(huán)丁醇(1.0當(dāng)量)和4-氯-2-(((4-乙基嘧啶-5-基)甲基)氨基)嘧啶-5-甲腈(2.0當(dāng)量)在二噁烷(0.2M)中的混合物2小時(shí)。在反應(yīng)完成之后，在減壓下除去溶劑，并通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)手性分離方法純化殘余物，得到標(biāo)題化合物?；谠诒疚乃錾锘瘜W(xué)測(cè)定中與本文提供的其它化合物類(lèi)似的活性對(duì)立體化學(xué)進(jìn)行歸屬。

2-(((4-乙基嘧啶-5-基)甲基)氨基)-4-(((1S，3R)-3-羥基-2，2，3-三甲基環(huán)丁基)氨基)嘧啶-5-甲腈(手性HPLC 100％e.e.，保留時(shí)間＝2.63min).¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆，T＝323K)δ(ppm)8.96(s，1H)，8.48(s，1H)，8.19(s，1H)，7.98(s，1H)，6.91(s，1H)，4.55(d，J＝5.6Hz，2H)，4.37(s，1H)，3.92-3.83-(m，1H)，2.81(q，J＝7.2Hz，2H)，2.24(t，J＝10.4Hz，1H)，2.02(s，1H)，1.23(t，J＝7.6Hz，3H)，1.13(s，3H)，0.87(s，3H)，0.80(s，3H)；MS(ESI)m/z368.2[M+H]⁺。

2-(((4-乙基嘧啶-5-基)甲基)氨基)-4-(((1R，3S)-3-羥基-2，2，3-三甲基環(huán)丁基)氨基)嘧啶-5-甲腈(手性HPLC 99％e.e.，r.t.＝6.16min).¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆，T＝323K)δ8.95(s，1H)，8.47(s，1H)，8.19(s，1H)，7.98(s，1H)，6.90(s，1H)，4.54(d，J＝6.4Hz，2H)，4.37(s，1H)，3.90-3.83(m，1H)，2.82(q，J＝7.6Hz，2H)，2.24(t，J＝10.0Hz，1H)，2.02(s，1H)，1.23(t，J＝7.6Hz，3H)，1.13(s，3H)，0.87(s，3H)，0.80(s，3H)；MS(ESI)m/z368.2[M+H]⁺。

實(shí)施例16：4-(((1R，3S)-3-(羥甲基)-2，2-二甲基環(huán)丁基)氨基)-2-(((4-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲基)氨基)嘧啶-5-甲腈

A. 2，2-二甲基-3-氧代環(huán)丁烷羧酸甲酯。在N₂下，在室溫下，攪拌丙烯酸甲酯(1.3當(dāng)量)、1-氯-N，N，2-三甲基丙-1-烯-1-胺(1.0當(dāng)量)和三氟甲烷磺酸鋅(0.25當(dāng)量)的懸浮液以混合其內(nèi)容物15分鐘。然后，在36-39℃下，將該混合物超聲處理(100W)24小時(shí)。向該混合物中加入THF：H2O＝10：1的混合物，并超聲處理。濃縮該混合物，并用乙酸乙酯萃取。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥并過(guò)濾。在減壓下蒸發(fā)濾液，并通過(guò)硅膠色譜(石油醚；石油醚∶乙酸乙酯＝50∶1，10∶1)純化殘余物，得到呈淺黃色油狀物的標(biāo)題化合物2，2-二甲基-3-氧代環(huán)丁烷羧酸甲酯(產(chǎn)率29％)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ(ppm)3.73(s，3H)，3.51(dd，J＝7.6Hz，18.4Hz，1H)，3.07(q，J＝9.2Hz，18Hz 1H)，2.94(t，J＝7.2Hz，8.8Hz，1H)，1.29(s，3H)，1.09(s，3H)。

B. 3-(羥基亞氨基)-2，2-二甲基-環(huán)丁烷羧酸甲酯。將2，2-二甲基-3-氧代環(huán)丁烷羧酸甲酯(1.0當(dāng)量)、鹽酸羥胺(1.4當(dāng)量)和碳酸氫鈉(2.5當(dāng)量)的混合物懸浮在MeOH(0.6M)中，并在11℃下攪拌12小時(shí)。在減壓下除去溶劑，并加入水。將該混合物用乙酸乙酯萃取，用鹽水洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥并過(guò)濾。在減壓下濃縮溶劑，得到呈黃色油狀物的粗標(biāo)題產(chǎn)物3-(羥基亞氨基)-2，2-二甲基-環(huán)丁烷羧酸甲酯(產(chǎn)率92.7％)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ(ppm)3.73(s，3H)，3.27(dd，J＝7.6Hz，18.4Hz，1H)，3.04(q，J＝9.2Hz，18Hz 1H)，2.89(t，J＝7.2Hz，8.8Hz，1H)，1.57(s，1H)，1.40(s，2H)，1.28(s，1H)，1.19(s，2H).

C. 3-氨基-2，2-二甲基環(huán)丁烷羧酸甲酯。向3-(羥基亞氨基)-2，2-二甲基環(huán)丁烷羧酸甲酯(1.0當(dāng)量)在MeOH(0.4M)中的溶液中加入氫氧化銨(0.2M)和拉尼鎳(20wt％)。在50psi氫氣氛下，在50℃下，攪拌該混合物約6小時(shí)。在反應(yīng)完成之后，將該混合物過(guò)濾通過(guò)硅藻土。在真空中濃縮濾液，得到呈綠色液體的粗標(biāo)題化合物3-氨基-2，2-二甲基環(huán)丁烷羧酸甲酯(產(chǎn)率82.3％)。使用該產(chǎn)物而無(wú)需進(jìn)一步純化。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ(ppm)3.56(s，3H)，2.50(s，0.4H)，2.14(s，0.24H)，1.94(s，0.35H)，1.71(s，0.73H)，1.05(s，2.0H)，0.76(s，2H)。

D. (3-氨基-2，2-二甲基環(huán)丁基)甲醇。在0℃下，向氫化鋁鋰(2.8當(dāng)量)在無(wú)水THF(1.7M)中的懸浮液中加入粗3-氨基-2，2-二甲基環(huán)丁烷羧酸甲酯(1.0當(dāng)量)在無(wú)水THF(0.7M)中的溶液。然后，在10℃下，強(qiáng)力攪拌該混合物0.5小時(shí)，之后加熱至35-40℃12小時(shí)。通過(guò)慢慢地加入在0℃下的水、氫氧化鈉水溶液(3N)和水淬滅反應(yīng)。在10℃下，攪拌該混合物20分鐘，過(guò)濾通過(guò)硅藻土，并用乙酸乙酯洗滌。經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥有機(jī)相并過(guò)濾。在真空中濃縮濾液，得到呈外消旋混合物的粗標(biāo)題化合物(3-氨基-2，2-二甲基環(huán)丁基)甲醇(產(chǎn)率89.7％)。

E. 3-(羥甲基)-2，2-二甲基環(huán)丁基)氨基甲酸芐酯。在0℃下，向在飽和的碳酸鈉水溶液(1.3當(dāng)量)中的4-氨基-2，2-二甲基環(huán)己醇(1.0當(dāng)量)在水(1.7M)和THF(1.4M)中的混合物中慢慢地加入氯甲酸芐基酯(2.1當(dāng)量)。在0℃下，攪拌該反應(yīng)混合物0.5小時(shí)。除去水性溶劑，并將殘余物溶于H2O中，用乙酸乙酯萃取。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥并過(guò)濾。在減壓下濃縮濾液，得到粗產(chǎn)物，通過(guò)硅膠柱色譜(在DCM中5％MeOH)純化，得到呈外消旋混合物的3-(羥甲基)-2，2-二甲基環(huán)丁基)氨基甲酸芐酯(產(chǎn)率59％)。通過(guò)手性超臨界流體色譜(柱：ChiralPak AY-H，300×50mmI.D.)，使用20％乙醇/CO₂，流速＝200mL/min，循環(huán)時(shí)間3min，純化外消旋混合物，以分離異構(gòu)體。在下一個(gè)反應(yīng)中使用第一個(gè)洗脫峰。

F. 3-氨基-2，2-二甲基環(huán)丁基)甲醇鹽酸鹽。在H₂下，在室溫下，攪拌在MeOH(0.4M)中的3-(羥甲基)-2，2-二甲基環(huán)丁基)氨基甲酸芐酯(峰1，上述獲得的)(1.0當(dāng)量)和鈀碳(10％)12小時(shí)。在反應(yīng)完成之后，將該混合物過(guò)濾通過(guò)硅藻土墊，并用MeOH洗滌。在減壓下蒸發(fā)溶劑，得到呈白色固體的粗產(chǎn)物3-氨基-2，2-二甲基環(huán)丁基)MeOH，其用于下一步而無(wú)需純化。在0℃下，將粗產(chǎn)物溶于HCl/MeOH(4N，10.0當(dāng)量)中，在18℃下攪拌2小時(shí)，并除去溶劑，得到呈固體的3-氨基-2，2-二甲基環(huán)丁基)MeOH鹽酸鹽(產(chǎn)率85％)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ(ppm)8.21(s，1H)，3.96(s，1H)，3.29-3.40(m，2H)，3.12-3.16(m，1H)，2.06-2.09(m，1H)，1.87-1.88(m，1H)，1.61-1.67(m，1H)，1.02(d，J=25.2Hz，6H)；MS(ESI)m/z(M+H)⁺130.0。

G. 4-(((1R，3S)-3-(羥甲基)-2，2-二甲基環(huán)丁基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈。將上述分離的化合物、3-氨基-2，2-二甲基環(huán)丁基)MeOH鹽酸鹽(1.0當(dāng)量)和4-氯-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(1.0當(dāng)量)溶于DIEA(3.0當(dāng)量)和乙醇(0.4M)中。將該溶液加熱至40℃1小時(shí)。在減壓下濃縮反應(yīng)物，并經(jīng)由biotage色譜(在己烷中0-60％乙酸乙酯，然后在己烷中60％乙酸乙酯)純化黃色殘余物，得到標(biāo)題化合物(產(chǎn)率96％)。MS(ESI)m/z278.6[M]⁺。

在裝有Cu Kα放射(λ＝1.5478)的Bruker D8Smart APEX CCD衍射儀上進(jìn)行單晶X-射線衍射研究。通過(guò)將戊烷汽相擴(kuò)散到二氯乙烷溶液中，使目標(biāo)化合物的晶體生長(zhǎng)。將0.115×0.087×0.082mm無(wú)色塊用帕拉通油(paratone oil)固定在cryoloop上。在氮?dú)饬髦校?00(2)K，使用和ω掃描，收集數(shù)據(jù)。晶體與檢測(cè)器的距離為50mm，使用可變曝光時(shí)間(2s-10s)，取決于θ與1.0°的掃描寬度。在θ中，到68.00°時(shí)數(shù)據(jù)收集完成98.2％。收集覆蓋指數(shù)-13＜＝h＜＝13，-8＜＝k＜＝9，-28＜＝1＜＝28的總共23976個(gè)反射。發(fā)現(xiàn)7222個(gè)反射是不依賴(lài)對(duì)稱(chēng)的，具有0.0328的R_int。指數(shù)化和單位晶胞精修表明初級(jí)的單斜點(diǎn)陣。發(fā)現(xiàn)空間群為P2₁。使用Bruker SAINT軟件程序整合數(shù)據(jù)，并使用SADABS軟件程序度量。直接方法解決(SHELXS)產(chǎn)生與提出的結(jié)構(gòu)一致的完整階段模式(complete phasing model)。確定絕對(duì)立體構(gòu)型與其一致。所有非氫原子都采用全矩陣最小二乘法(SHELXL-2013)進(jìn)行各向異性精修。使用騎式模型(riding model)放置所有氫原子。使用SHELXL 2013中的合適HFIX命令限制它們相對(duì)于它們的母原子的位置。確定絕對(duì)立體構(gòu)型與4-(((1R，3S)-3-h羥甲基)-2，2-二甲基環(huán)丁基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈一致。

H. 4-(((1R，3S)-3-(羥甲基)-2，2-二甲基環(huán)丁基)氨基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶-5-甲腈和4-(((1R，3S)-3-(羥甲基)-2，2-二甲基環(huán)丁基)氨基)-2-(甲基亞磺酰基)嘧啶-5-甲腈。在DCM(0.2M)中混合4-(((1R，3S)-3-(羥甲基)-2，2-二甲基環(huán)丁基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(1.0當(dāng)量)和3-氯苯并過(guò)氧酸(2.2當(dāng)量)，并在環(huán)境溫度下允許攪拌。在16小時(shí)之后，將該溶液加入到含有另外的DCM的分液漏斗中，并用飽和的硫酸氫鈉洗滌有機(jī)層，接著用飽和的碳酸氫鈉洗滌，最后用飽和的氯化鈉溶液洗滌。經(jīng)硫酸鎂干燥有機(jī)層，過(guò)濾并在減壓下除去溶劑，得到標(biāo)題化合物(產(chǎn)率71％)。MS(ESI)m/z311.3[M+1]⁺。

I. 4-(((1R，3S)-3-(羥甲基)-2，2-二甲基環(huán)丁基)氨基)-2-(((4-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲基)氨基)嘧啶-5-甲腈。在乙醇(0.1M)中混合4-(((1R，3S)-3-(羥甲基)-2，2-二甲基環(huán)丁基)氨基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶-5-甲腈和4-(((1R，3S)-3-(羥甲基)-2，2-二甲基環(huán)丁基)氨基)-2-(甲基亞磺酰基)嘧啶-5-甲腈(1.0當(dāng)量)、(4-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲胺鹽酸鹽(1.0當(dāng)量)和DIEA(3.0當(dāng)量)的混合物，并加熱至80℃。在2小時(shí)之后，使用標(biāo)準(zhǔn)方法處理混合的反應(yīng)物，得到標(biāo)題化合物(產(chǎn)率45％)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ(ppm)8.71(d，J＝5.08Hz，1H)，8.57-8.65(m，1H)，8.15-8.25(m，2H)，7.65-7.75(m，1H)，7.19-7.32(m，1H)，4.70(d，J＝5.08Hz，2H)，4.23(t，J＝4.88Hz，1H)，3.96(q，J＝8.33Hz，1H)，3.20-3.29(m，1H)，1.73-1.96(m，2H)，1.53-1.68(m，1H)，1.20(s，1H)，0.86(s，1H)，0.62-0.77(m，6H)：MS(ESI)m/z407.3[M+I]⁺。

實(shí)施例17：2-(((4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-基)甲基)氨基)-4-(((1R，4R)-4-羥基-3，3，4-三甲基環(huán)己基)氨基)嘧啶-5-甲腈

A. ((1R，4S)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基甲酸叔丁酯。在0℃下，向(1S，4R)-4-氨基-2，2-二甲基環(huán)己醇(1.00g，6.99mmol)在THF(22mL)中的溶液中慢慢地加入碳酸氫二叔丁酯(1.81g，8.39mmol)。在55℃下，攪拌得到的混合物2小時(shí)。將反應(yīng)混合物用水稀釋?zhuān)⒂靡宜嵋阴?2×200mL)萃取。將合并的有機(jī)層用鹽水(100mL)洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥并過(guò)濾。在減壓下蒸發(fā)濾液，得到呈黃色油狀物的粗產(chǎn)物(2.00g粗物質(zhì))，其直接用于下一步而無(wú)需純化。MS(ESI)m/z244.2[M+H]⁺。

B. (R)-(3，3-二甲基-4-氧代環(huán)己基)氨基甲酸叔丁酯。向((1R，4S)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基甲酸叔丁酯(2g粗物質(zhì))在DCM(110mL)中的溶液中加入Dess-Martin過(guò)碘烷(4.24g，10mmol)，保持溫度低于5℃。在室溫下，攪拌得到的混合物1小時(shí)。將反應(yīng)物用DCM稀釋?zhuān)⒂蔑柡吞妓釟溻c溶液洗滌。經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥分離的有機(jī)層，并過(guò)濾。在減壓下，蒸發(fā)濾液，并通過(guò)硅膠色譜(在石油醚中6％乙酸乙酯)純化殘余物，得到呈黃色油狀物的標(biāo)題化合物(1.10g，4.56mmol，經(jīng)2步驟產(chǎn)率65％)。MS(ESI)m/z242.2[M+H]⁺。

C. ((1R)-4-羥基-3，3，4-三甲基環(huán)己基)氨基甲酸叔丁酯。在氮?dú)庀拢?30℃至40℃下，向(R)-(3，3-二甲基-4-氧環(huán)己基)氨基甲酸叔丁酯(550mg，2.28mmol)在乙醚(15mL)中的溶液中加入溴化甲基鎂(3M，3.00mL)。在該溫度下攪拌該混合物0.5小時(shí)，并用飽和的氯化銨水溶液(150mL)淬滅。用乙酸乙酯(300mL×3)萃取水層。將合并的有機(jī)層用鹽水(150mL)洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥并過(guò)濾。在減壓下蒸發(fā)濾液。通過(guò)硅膠色譜柱(在石油醚中12％乙酸乙酯)純化殘余物，得到呈黃色油狀物的標(biāo)題化合物(520mg，5.02mmol，產(chǎn)率88％)。MS(ESI)m/z258.2[M+H]⁺。

D. (4R)-4-氨基-1，2，2-三甲基環(huán)己醇.在0℃，向((1R)-4-羥基-3，3，4-三甲基環(huán)己基)氨基甲酸叔丁酯(520mg，2.15mmol)在DCM(6.00mL)中的溶液中加入TFA(3.00mL)。在室溫下，攪拌得到的混合物1小時(shí)。在真空中濃縮反應(yīng)，得到粗產(chǎn)物粗產(chǎn)物(450mg，粗物質(zhì))，其直接用于下一步而無(wú)需進(jìn)一步純化。MS(ESI)m/z158.1[M+H]⁺。

E. 4-(((1R，4R)-4-羥基-3，3，4-三甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈和4-(((1R，4S)-4-羥基-3，3，4-三甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈。向(4R)-4-氨基-1，2，2-三甲基環(huán)己醇(323mg，2.06mmol)和4-氯-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(450mg，粗物質(zhì))在異丙醇(5.00mL)中的混合物中加入DIEA(800mg，6.60mmol)。在90℃下，攪拌得到的溶液1.5小時(shí)。蒸發(fā)溶劑，并通過(guò)硅膠色譜(在石油醚中30％乙酸乙酯)純化殘余物，得到標(biāo)題化合物(380mg，1.24mmol，產(chǎn)率60％)。通過(guò)超臨界流體色譜(柱：AD，0.46cm I.D.×15cm L；流動(dòng)相：CO2/EtOH/DEA＝70/30/0.1(v/v/v)；流速：1.5ml/min；WL：UV254nm；T＝35℃)進(jìn)一步分離標(biāo)題化合物，得到標(biāo)題化合物。

4-(((1R，4R)-4-羥基-3，3，4-三甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(120mg，0.391mmol，手性SFC：d.e.＝100％)。

4-(((1R，4S)-4-羥基-3，3，4-三甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(240mg，0.782mmol，手性SFC：d.e.＝100％)。

F. 4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-甲腈。在0℃下，向氫化鈉(60％分散在礦物油中，315mg，7.88mmol)在THF(20mL)中的懸浮液中加入2，2-二氟丙-1-醇(757mg，7.88mmol)，并攪拌得到的混合物1小時(shí)。然后，分批加入4-氯嘧啶-5-甲腈(1.00g，7.16mmol)，并在室溫下攪拌30分鐘。用飽和的氯化銨水溶液淬滅該反應(yīng)，并用乙酸乙酯(500mL×2)萃取。將合并的有機(jī)層干燥并濃縮，并通過(guò)硅膠色譜柱(在石油醚中12％乙酸乙酯)純化殘余物，得到呈黃色固體的標(biāo)題化合物(850mg，4.27mmol，產(chǎn)率58％)。MS(ESI)m/z200.0[M+H]⁺。

G. (4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-基)甲胺。向4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-甲腈(850mg，4.27mmol)在THF(30mL)中的溶液中加入拉尼鎳(600mg)。使該混合物在真空下脫氣10分鐘，然后在在室溫下，在全充氣(fully-inflated)氣球下氫化過(guò)夜。將該混合物過(guò)濾通過(guò)硅藻土墊，并用乙酸乙酯(200mL)洗滌濾餅。在真空下除去濾液，并通過(guò)制備HPLC(在水中5％至60％乙腈)純化殘余物，得到呈黃色油狀物的產(chǎn)物(260mg，1.28mmol，產(chǎn)率30％)。MS(ESI)m/z204.0[M+H]⁺。

H. 4-(((1R，4R)-4-羥基-3，3，4-三甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶-5-甲腈。在冰-水浴下，向4-(((1R，4R)-4-羥基-3，3，4-三甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(80mg，0.261mmol)在DCM(3.00mL)中的溶液中加入3-氯過(guò)苯甲酸(85％，114mg，0.653mmol)。在室溫下，攪拌該混合物2小時(shí)。將反應(yīng)物用DCM稀釋?zhuān)⒂昧虼蛩徕c水溶液洗滌，然后用碳酸鉀水溶液洗滌。經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥分離的有機(jī)層并濃縮，得到粗標(biāo)題化合物(90mg粗物質(zhì))。MS(ESI)m/z323.1，339.1[M+H]⁺。

I. 2-(((4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-基)甲基)氨基)-4-(((1R，4R)-4-羥基-3，3，4-三甲基環(huán)己基)氨基)嘧啶-5-甲腈。向4-(((1R，4R)-4-羥基-3，3，4-三甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲基磺?；?嘧啶-5-甲腈(90mg，粗物質(zhì))在THF(2.8mL)中的溶液中加入(4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-基)甲胺(50mg，0.246mmol)和DIEA(100mg，0.738mmol)。在微波反應(yīng)器中，在100℃下，攪拌得到的混合物2小時(shí)。蒸發(fā)溶劑，并經(jīng)由標(biāo)準(zhǔn)方法純化殘余物，得到標(biāo)題化合物(34.2mg，0.074mmol，產(chǎn)率30％)。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ(ppm)8.70(s，1H)，8.34-8.32(m，1H)，8.13(s，1H)，4.70(t，J=12.0Hz，1H)，4.64-4.59(m，2H)，4.18-4.15(m，1H)，1.81-1.74(m，3H)，1.68-1.41(m，6H)，1.32-1.30(s，3H)，0.92-0.85(s，6H).MS(ESI)m/z 462.2[M+H]⁺。

實(shí)施例18：2-(((4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-基)甲基)氨基)-4-(((1R，4S)-4-羥基-3，3，4-三甲基環(huán)己基)氨基)嘧啶-5-甲腈

A. ((1R，4S)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基甲酸叔丁酯。在0℃下，向(1S，4R)-4-氨基-2，2-二甲基環(huán)己醇(1.00g，6.99mmol)在THF(22mL)中的溶液中慢慢地加入碳酸氫二叔丁酯(1.81g，8.39mmol)。在55℃下，攪拌得到的混合物2小時(shí)。將反應(yīng)混合物用水稀釋?zhuān)⒂靡宜嵋阴?2×200mL)萃取。將合并的有機(jī)層用鹽水(100mL)洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥并過(guò)濾。在減壓下蒸發(fā)濾液，得到呈黃色油狀物的粗產(chǎn)物(2.00g粗物質(zhì))，其直接用于下一步而無(wú)需純化。MS(ESI)m/z244.2[M+H]⁺。

B. (R)-(3，3-二甲基-4-氧代環(huán)己基)氨基甲酸叔丁酯.向((1R，4S)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基甲酸叔丁酯(2g粗物質(zhì))在DCM(110mL)中的溶液中加入Dess-Martin過(guò)碘烷(4.24g，10mmol)，保持溫度低于5℃。在室溫下，攪拌得到的混合物1小時(shí)。將反應(yīng)物用DCM稀釋?zhuān)⒂蔑柡吞妓釟溻c溶液洗滌。經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥分離的有機(jī)層，并過(guò)濾。在減壓下，蒸發(fā)濾液，并通過(guò)硅膠色譜(在石油醚中6％乙酸乙酯)純化殘余物，得到呈黃色油狀物的標(biāo)題化合物(1.10g，4.56mmol，經(jīng)2步驟產(chǎn)率65％)。MS(ESI)m/z242.2[M+H]⁺。

C. ((1R)-4-羥基-3，3，4-三甲基環(huán)己基)氨基甲酸叔丁酯.在氮?dú)庀拢?30℃至-40℃下，向(R)-(3，3-二甲基-4-氧代環(huán)己基)氨基甲酸叔丁酯(550mg，2.28mmol)在乙醚(15mL)中的溶液中加入溴化甲基鎂(3M，3.00mL)。在該溫度下攪拌該混合物0.5小時(shí)，并用飽和的氯化銨水溶液(150mL)淬滅。用乙酸乙酯(300mL×3)萃取水層。將合并的有機(jī)層用鹽水(150mL)洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥并過(guò)濾。在減壓下蒸發(fā)濾液。通過(guò)硅膠色譜柱(在石油醚中12％乙酸乙酯)純化殘余物，得到呈黃色油狀物的標(biāo)題化合物(520mg，5.02mmol，產(chǎn)率88％)。MS(ESI)m/z 258.2[M+H]⁺。

D. (4R)-4-氨基-1，2，2-三甲基環(huán)己醇。在0℃下，向((1R)-4-羥基-3，3，4-三甲基環(huán)己基)氨基甲酸叔丁酯(520mg，2.15mmol)在DCM(6.00mL)中的溶液中加入TFA(3.00mL)。在室溫下，攪拌得到的混合物1小時(shí)。在真空中濃縮反應(yīng)物，得到粗產(chǎn)物(450mg，粗物質(zhì))，其直接用于下一步而無(wú)需進(jìn)一步純化。MS(ESI)m/z 158.1[M+H]⁺。

E. 4-(((1R，4R)-4-羥基-3，3，4-三甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈和4-(((1R，4S)-4-羥基-3，3，4-三甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈。向(4R)-4-氨基-1，2，2-三甲基環(huán)己醇(323mg，2.06mmol)和4-氯-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(450mg，粗物質(zhì))在異丙醇(5.00mL)中的混合物中加入DIEA(800mg，6.60mmol)。在90℃下，攪拌得到的溶液1.5小時(shí)。蒸發(fā)溶劑，并通過(guò)硅膠色譜(在石油醚中30％乙酸乙酯)純化殘余物，得到標(biāo)題化合物(380mg，1.24mmol，產(chǎn)率60％)。通過(guò)超臨界流體色譜(柱：AD，0.46cm I.D.×15cm L；流動(dòng)相：CO2/EtOH/DEA＝70/30/0.1(v/v/v)；流率：1.5ml/min；WL：UV 254nm；T＝35℃)進(jìn)一步分離標(biāo)題化合物，得到標(biāo)題化合物。

4-(((1R，4R)-4-羥基-3，3，4-三甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(120mg，0.391mmol，手性SFC：d.e.＝100％)。

4-(((1R，4S)-4-羥基-3，3，4-三甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(240mg，0.782mmol，手性SFC：d.e.＝100％)。

F. 4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-甲腈。在0℃下，向氫化鈉(60％分散在礦物油中，315mg，7.88mmol)在THF(20mL)中的懸浮液中加入2，2-二氟丙-1-醇(757mg，7.88mmol)，并攪拌得到的混合物1小時(shí)。然后，分批加入4-氯嘧啶-5-甲腈(1.00g，7.16mmol)，并在室溫下，攪拌該混合物30分鐘。用飽和的氯化銨水溶液淬滅反應(yīng)，并用乙酸乙酯(500mL×2)萃取。將合并的有機(jī)層干燥并濃縮，并通過(guò)硅膠色譜柱(在石油醚中12％乙酸乙酯)純化殘余物，得到呈黃色固體的標(biāo)題化合物(850mg，4.27mmol，產(chǎn)率58％)。MS(ESI)m/z 200.0[M+H]⁺。

G. (4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-基)甲胺.向4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-甲腈(850mg，4.27mmol)在THF(30mL)中的溶液中加入拉尼鎳(600mg)。使該混合物在真空下脫氣10分鐘，然后在在室溫下，在全充氣(fully-inflated)氣球下氫化過(guò)夜。將該混合物過(guò)濾通過(guò)硅藻土墊，并用乙酸乙酯(200mL)洗滌濾餅。在真空下除去除去濾液，并通過(guò)制備HPLC(在水中的5％至60％乙腈)純化殘余物，得到呈黃色油狀物的產(chǎn)物((260mg，1.28mmol，產(chǎn)率30％)。MS(ESI)m/z 204.0[M+H]⁺。

H. 4-(((1R，4S)-4-羥基-3，3，4-三甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲基磺?；?嘧啶-5-甲腈。在冰-水浴下，向4-(((1R，4S)-4-羥基-3，3，4-三甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(80mg，0.261mmol)在DCM(3.00mL)中的溶液中加入3-氯過(guò)苯甲酸(85％，114mg，0.653mmol)。在室溫下，攪拌該混合物2小時(shí)。將反應(yīng)物用DCM稀釋?zhuān)⒂昧虼蛩徕c水溶液洗滌，然后用碳酸鉀水溶液洗滌。經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥分離的有機(jī)層并濃縮，得到粗化合物(90mg粗物質(zhì))。MS(ESI)m/z 323.1，339.1[M+H]⁺。

I. 2-(((4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-基)甲基)氨基)-4-(((1R，4S)-4-羥基-3，3，4-三甲基環(huán)己基)氨基)嘧啶-5-甲腈。向4-(((1R，4S)-4-羥基-3，3，4-三甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲基磺?；?嘧啶-5-甲腈(90mg，粗物質(zhì))在THF(2.8mL)中的溶液中加入(4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-基)甲胺(50mg，0.246mmol)和DIEA(100mg，0.738mmol)。在微波微波反應(yīng)器中，在100℃下，攪拌得到的混合物2小時(shí)。蒸發(fā)溶劑，并通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)方法純化殘余物，得到標(biāo)題化合物(38.7mg，0.084mmol，產(chǎn)率34％)。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ(ppm)8.90(s，1H)，8.57-8.54(s，1H)，8.34(s，1H)，4.92(t，J＝12.0Hz，1H)，4.81-4.78(m，2H)，4.34-4.28(m，1H)，2.04-1.95(m，3H)，1.92-1.68(m，6H)，1.47-1.45(m，3H)，1.09-1.01(m，6H).MS(ESI)m/z 462.2[M+H]⁺。

實(shí)施例19：2-((4-氰基-3-(三氟甲氧基)苯乙基)氨基)-4-(((1R，3S)-3-羥基-2，2-二甲基環(huán)丁基)氨基)嘧啶-5-甲腈

A. 4-氨基-3-(三氟甲氧基)苯甲酸甲酯。在室溫下，攪拌4-氨基-3-(三氟甲氧基)苯甲酸(8.88g 40.2mmol)、MeOH(142mL)和鹽酸1，4-二噁烷(4.0M，142mL，568mmol)中的混合物72小時(shí)。在除去有機(jī)溶劑之后，將殘余物的pH調(diào)節(jié)至pH 8，并用乙酸乙酯(50mL×3)萃取水層。將合并的有機(jī)層干燥并在真空中濃縮，得到標(biāo)題化合物(9.3g，39.6mmol，產(chǎn)率95％)。MS(ESI)m/z 236.1[M+1]⁺。

B. 4-溴-3-(三氟甲氧基)苯甲酸甲酯。向4-氨基-3-(三氟甲氧基)苯甲酸甲酯(9.3g，39.6mmol)和亞硝酸叔丁酯(6.77mL，57.6mmol)在乙腈(300mL)和水(30mL)中的混合物中加入溴化銅(10.3g，46.2mmol)。在75℃下，攪拌得到的反應(yīng)混合物1.5小時(shí)。將反應(yīng)物用水處理，并用乙酸乙酯萃取。將合并的有機(jī)層用飽和的碳酸氫鈉洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥并過(guò)濾。在真空下蒸發(fā)濾液，得到標(biāo)題化合物(10.6g，35.6mmol，產(chǎn)率90％)。MS(ESI)m/z 299.1，300.1[M+1]⁺。

C. (4-溴-3-(三氟甲氧基)苯基)甲醇。在0℃下，向硼氫化鋰(1.16g，53.4mmol)在THF(100mL)中的溶液中加入4-溴-3-(三氟甲氧基)苯甲酸甲酯(10.6g，35.6mmol)，并在氮?dú)夥障拢?0℃下，加熱得到的溶液3小時(shí)。用水淬滅反應(yīng)，并用乙酸乙酯萃取該混合物。將合并的有機(jī)層用飽和的鹽水洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥并過(guò)濾。在真空下蒸發(fā)濾液，得到粗標(biāo)題產(chǎn)物(9.17g，34mmol)。MS(ESI)m/z 270.1[M]⁺，272.1[M+2]⁺。

D. 1-溴-4-(溴乙基)-2-(三氟甲氧基)苯。在-10℃下，向(4-溴-3-(三氟甲氧基)苯基)MeOH(5g，18.5mmol)和三苯基膦(8.24g，31.45mmol)在無(wú)水DCM(50mL)中的混合物中加入N-溴琥珀酰亞胺(5.83g，32.92mmol)。在氮?dú)庀拢谑覝叵?，攪拌得到的反?yīng)混合物0.5小時(shí)。加入水，并用DCM(3×40mL)萃取該混合物。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥并過(guò)濾。在真空下蒸發(fā)濾液，得到粗產(chǎn)物，通過(guò)硅膠柱色譜(在石油醚中5％乙酸乙酯)純化，得到標(biāo)題化合物(4.3g，12.9mmol，產(chǎn)率67％，經(jīng)兩個(gè)步驟)。MS(ESI)m/z 332.8，334.8，336.8[M+H]⁺。

E. 2-(4-溴-3-(三氟甲氧基)苯基)乙腈。向1-溴-4-(溴乙基)-2-(三氟甲氧基)苯(1g，3.0mmol)在EtOH(20mL)和水(5mL)中的混合物中加入氰化鉀(390mg，6mmol)。在85℃下，攪拌得到的混合物2小時(shí)。加入碳酸氫鈉，并用乙酸乙酯萃取該混合物。將有機(jī)層用鹽水洗滌，干燥并濃縮，得到粗標(biāo)題產(chǎn)物(800mg，2.86mmol)。MS(ESI)m/z 279.9[M]⁺，281.1[M+2]⁺。

F. 2-(4-溴-3-(三氟甲氧基)苯基)乙胺。在0℃下，向2-(4-溴-3-(三氟甲氧基)苯基)乙腈(800mg，2.86mmol)在THF(40mL)中的溶液中加入硼烷二甲基硫醚復(fù)合物(2M，2.15mL，4.3mmol)。在氮?dú)夥障?，?5℃下，加熱得到的溶液2小時(shí)。在0℃下，用MeOH(10mL)淬滅反應(yīng)，并在真空下濃縮，得到粗標(biāo)題產(chǎn)物(720mg，2.54mmol)。MS(ESI)m/z 283.9[M]⁺，291.1 [M+2]⁺。

G. 4-溴-3-(三氟甲氧基)苯乙基氨基甲酸叔丁酯。向2-(4-溴-3-(三氟甲氧基)苯基)乙胺(720mg，2.54mmol)在THF(10mL)中的溶液中加入二碳酸二叔丁酯(575mg，2.66mmol)。在75℃下，攪拌得到的反應(yīng)混合物2小時(shí)。濃縮該反應(yīng)混合物，得到粗產(chǎn)物，通過(guò)硅膠柱色譜(在石油醚中5％乙酸乙酯)純化，得到呈黃色固體的標(biāo)題化合物(460mg，1.2mmol，產(chǎn)率40％，經(jīng)3個(gè)步驟)。MS(ESI)m/z 384.1[M+1]⁺。

H. 4-氰基-3-(三氟甲氧基)苯乙基氨基甲酸叔丁酯。在氮?dú)庀?，?60℃下，攪拌4-溴-3-(三氟甲氧基)苯乙基氨基甲酸叔丁酯(460mg，1.2mmol)、氰化鋅(463mg，1.56mmol)和四(三苯基膦)鈀(69mg，0.06mmol)在DMF(10mL)中的混合物1小時(shí)。用飽和的碳酸氫鈉處理該反應(yīng)，并用乙酸乙酯(30mL×3)萃取。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，干燥，濃縮并通過(guò)制備薄層色譜(在DCM中2.9％MeOH)純化，得到標(biāo)題化合物(150mg，0.45mmol，產(chǎn)率38％)。MS(ESI)m/z 331.1[M+1]⁺。

I. 4-(2-氨基乙基)-2-(三氟甲氧基)芐腈。向4-氰基-3-(三氟甲氧基)苯乙基氨基甲酸酯(150mg，0.45mmol)在DCM(3mL)中的溶液中加入TFA(1.5mL)。在室溫下，攪拌得到的反應(yīng)混合物1.5小時(shí)。濃縮該混合物，得到粗標(biāo)題產(chǎn)物(120mg，粗物質(zhì))，其直接用于下一步而無(wú)需進(jìn)一步純化。MS(ESI)m/z 231.1[M+H]⁺。

J. 4-(((1R，3S)-3-羥基-2，2-二甲基環(huán)丁基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈。在85℃下，攪拌(1S，3R)-3-氨基-2，2-二甲基環(huán)丁醇(550mg，粗物質(zhì))、4-氯-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(887mg，4.78mmol)和DIEA(1.12g，8.7mmol)在異丙醇(20mL)中的混合物3小時(shí)。在冷卻至室溫之后，濃縮該反應(yīng)混合物，并通過(guò)硅膠柱色譜(在DCM中0.6％MeOH)純化殘余物，得到標(biāo)題化合物(760mg，2.88mmol，產(chǎn)率66.3％)。MS(ESI)m/z 265.1[M+1]⁺。

K. 4-(((1R，3S)-3-羥基-2，2-二甲基環(huán)丁基)氨基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶-5-甲腈。向4-(((1R，3S)-3-羥基-2，2-二甲基環(huán)丁基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(760mg，2.88mmol)在DCM(10mL)中的溶液中加入間-氯過(guò)苯甲酸(85％，1.25g，6.18mmol)。在室溫下，攪拌得到的混合物1小時(shí)。用硫代硫酸鈉水溶液淬滅該反應(yīng)混合物，并用DCM萃取。將合并的有機(jī)層用碳酸鉀水溶液和鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并濃縮，得到標(biāo)題化合物(550mg，粗物質(zhì))，其直接用于下一步而無(wú)需進(jìn)一步純化。MS(ES1)m/z 281.1，297.1[M+1]⁺。

L. 2-((4-氰基-3-(三氟甲氧基)苯乙基)氨基)-4-(((1R，3S)-3-羥基-2，2-二甲基環(huán)丁基)氨基)嘧啶-5-甲腈。在微波反應(yīng)器中，在100℃下，攪拌4-(((1R，3S)-3-羥基-2，2-二甲基環(huán)丁基)氨基)-2-(甲基磺?；?嘧啶-5-甲腈(80 mg，0.27mmol)、4-(2-氨基乙基)-2-(三氟甲氧基)芐腈(60mg，粗物質(zhì)))和DIEA(105mg，0.81mmol)在THF(2mL)中的混合物1.5小時(shí)。在冷卻至室溫之后，濃縮反應(yīng)混合物，并通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)方法純化殘余物，得到標(biāo)題化合物(34.4mg，0.077mmol，產(chǎn)率40％，經(jīng)2個(gè)步驟)。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ8.14-8.07(m，1H)，7.82-7.80(m，1H)，7.45-7.43(m，2H)，3.97-3.93(m，1H)，3.83-3.70(m，2H)，3.68-3.59(m，1H)，3.10-2.01(m，2H)，2.58-2.54(m，1H)，2.15-2.06(m，1H)，1.21(s，3H)，0.95(s，3H).MS(ESI)m/z 447.2[M+1]⁺。

實(shí)施例20：2-((4-(2，2-二氟丙氧基)苯乙基)氨基)-4-(((1R，4S)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基)嘧啶-5-甲腈

A. 4-羥基苯乙基氨基甲酸叔丁酯。向4-(2-氨基乙基)苯酚(1.00g，7.30mmol)在THF(10mL)中的溶液中加入焦碳酸二叔丁酯(1.89g，8.79mmol)。在室溫下，攪拌得到的反應(yīng)混合物16小時(shí)。濃縮該混合物以除去溶劑，用乙酸乙酯稀釋?zhuān)^(guò)濾并濃縮，得到粗標(biāo)題產(chǎn)物(1.65g，6.96mmol，產(chǎn)率95％)。MS(ESI)m/z 238.1[M+H]⁺。

B. 2，2-二氟丙基甲磺酸酯。在0℃下，向2，2-二氟丙-1-醇(2.00g，20.8mmol)和TEA(3.16g，31.25mmol)在無(wú)水DCM(20mL)中的混合物中加入甲磺酰氯(2.84g，24.96mmol)。在室溫下，攪拌得到的反應(yīng)混合物1.5小時(shí)。加入水，并用DCM(3×100mL)萃取該混合物。將合并的有機(jī)層用飽和的氯化銨水溶液、鹽水洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥并過(guò)濾。在真空下蒸發(fā)濾液，得到標(biāo)題產(chǎn)物(2.70g，15.52mmol，產(chǎn)率75％)，其直接用于下一步而無(wú)需進(jìn)一步純化。

C. 4-(2，2-二氟丙氧基)苯乙基氨基甲酸叔丁酯。在微波反應(yīng)器中，在115℃下，攪拌4-羥基苯乙基氨基甲酸叔丁酯(700g，2.94mmol)、2，2-二氟丙基甲磺酸酯(668mg，3.84mmol)和碳酸銫(1.92g，5.88mmol)在DMF(5mL)中的混合物3小時(shí)。在冷卻至室溫之后，加入水，并用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥并過(guò)濾。在真空下蒸發(fā)濾液，得到粗產(chǎn)物，通過(guò)制備薄層色譜(在石油醚中22％乙酸乙酯)純化，得到標(biāo)題化合物(130mg，0.41mmol，產(chǎn)率14％)。MS(ESI)m/z 316.1[M+H]⁺。

D. 2-(4-(2，2-二氟丙氧基)苯基)乙胺。在0～5℃下，向4-(2，2-二氟丙氧基)苯乙基氨基甲酸酯(95mg，0.30mmol)在DCM(2mL)中的溶液中加入TFA(1mL)。在室溫下，攪拌得到的反應(yīng)混合物1.5小時(shí)。濃縮該反應(yīng)混合物，得到粗產(chǎn)物，其直接用于下一步而無(wú)需進(jìn)一步純化(70mg，粗物質(zhì))。MS(ESI)m/z 216.1[M+H]⁺。

E. 4-(((1R，4S)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈。在100℃下，加熱4-氯-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(2.15g，11.6mmol))、(1S，4R)-4-氨基-2，2-二甲基環(huán)己醇(1.51g，10.5mmol)和DIEA(2.72mg，21.1mmol)在異丙醇(30mL)中的混合物3小時(shí)。在減壓下除去有機(jī)溶劑之后，用水處理殘余物，并用乙酸乙酯萃取。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并濃縮，得到粗產(chǎn)物，通過(guò)硅膠柱色譜(在石油中15％乙酸乙酯)純化，得到呈淺黃色固體的標(biāo)題化合物(2.2g，7.53mmol，產(chǎn)率72％)。MS(ESI)m/z 293.2[M+H]⁺。

F. 4-(((1R，4S)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲基磺?；?嘧啶-5-甲腈。在冰-水浴中冷卻下，向4-(((1R，4S)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(1.02g，3.48mmol)在無(wú)水DCM(20mL)中的溶液中加入間-氯過(guò)苯甲酸(85％，1.78g，8.79mmol)。在室溫下，攪拌得到的混合物3小時(shí)。用硫代硫酸鈉水溶液淬滅反應(yīng)，并用DCM萃取。將合并的有機(jī)層用碳酸鉀水溶液和鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并濃縮，得到呈淺黃色固體的標(biāo)題化合物(0.9g，粗物質(zhì))。MS(ESI)m/z 309.2，325.2[M+H]⁺。

J. 2-((4-(2，2-二氟丙氧基)苯乙基)氨基)-4-(((1R，4S)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基)嘧啶-5-甲腈。在微波反應(yīng)器中，在100℃下，攪拌4-(((1R，4S)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲基磺?；?嘧啶-5-甲腈(90mg，0.28mmol)、2-(4-(2，2-二氟丙氧基)苯基)乙胺(70mg，粗物質(zhì))和DIEA(85mg，0.66mmol)在THF(2mL)中的混合物1.5小時(shí)。在冷卻至室溫之后，濃縮該反應(yīng)混合物，并通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)方法純化殘余物，得到標(biāo)題產(chǎn)物(38.6mg，0.084mmol，產(chǎn)率28％)。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ(ppm)8.15-7.97(m，1H)，7.15(d，J＝8.4Hz，2H)，6.87(d，J＝8.4Hz，2H)，4.39-4.22(m，1H)，4.12(t，J＝11.6Hz，2H)，3.66-3.49(m，2H)，3.41-3.35(m，1H)，2.88-2.77(t，J＝7.2Hz，2H)，1.96-1.82(m，1H)，1.80-1.42(m，8H)，1.03-0.95(m，6H).MS(ESI)m/z 460.2[M+H]⁺。

實(shí)施例21：3-氯-5-(2-((5-氰基-4-(((1R，4S)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)乙基)吡啶1-氧化物

A. (5-氯-吡啶-3-基)-甲醇。在0℃下，向5-氯-煙酸(2g，12.7mmol)和TEA(1.52g，15mmol)在THF(30mL)中的溶液中慢慢地加入氯甲酸甲酯(1.42g，15mmol)。在室溫下，攪拌得到的混合物過(guò)夜。用乙酸乙酯稀釋反應(yīng)物，用飽和的氯化氨洗滌，并經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥。濃縮有機(jī)層，得到粗產(chǎn)物(2.8g，粗物質(zhì))，將其溶于THF(40mL)中，并冷卻至-78℃。分批加入氫化鋁鋰(570mg，15mmol)。攪拌得到的混合物30分鐘。用氫氧化鈉水溶液淬滅該反應(yīng)，并用乙酸乙酯萃取。將合并的有機(jī)層經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥并濃縮，得到粗產(chǎn)物，通過(guò)硅膠柱色譜(在石油醚中30％乙酸乙酯)純化，得到標(biāo)題化合物(1.4g，9.72mmol，產(chǎn)率76％)。MS(ESI)m/z 144.1[M+H]⁺。

B. (5-氯吡啶-3-基)甲基甲磺酸酯。在0℃下，向(5-氯吡啶-3-基)MeOH(1.60g，11.3mmol)和TEA(1.7g，16.8mmol)在無(wú)水DCM(30mL)中的混合物中加入甲磺酰氯(1.53g，13.4mmol)。在室溫下，攪拌得到的反應(yīng)混合物1.5小時(shí)。加入水，并用DCM(3×100mL)萃取該混合物。將合并的有機(jī)層用飽和的氯化銨水溶液、鹽水洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥并過(guò)濾。在真空下蒸發(fā)濾液，得到呈黃色油狀物的粗標(biāo)題化合物(2.09g，粗物質(zhì))，其直接用于下一步而無(wú)需進(jìn)一步純化。MS(ESI)m/z 222.0[M+H]⁺。

C. 3-氯-5-(異氰基甲基)吡啶。向(5-氯吡啶-3-基)甲基甲磺酸酯(2.09g，粗物質(zhì))在EtOH(45mL)和水(5mL)中的混合物中加入氰化鉀(926mg，14.3mmol)，并在85℃下攪拌得到的混合物2小時(shí)。加入碳酸氫鈉，并用乙酸乙酯萃取該混合物，用鹽水洗滌有機(jī)層，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥并濃縮。通過(guò)硅膠色譜柱(在石油醚中50％乙酸乙酯)純化殘余物，得到呈黃色固體的標(biāo)題化合物(820mg，5.43mmol，產(chǎn)率48％，2個(gè)步驟)。MS(ESI)m/z 153.1[M+H]⁺。

D. 2-(5-氯吡啶-3-基)乙胺。向3-氯-5-(異氰基甲基)吡啶(810mg，5.36mmol)在MeOH(15mL)中的溶液中加入拉尼鎳和氨水。在氫氣下，在室溫下，攪拌得到的反應(yīng)混合物5小時(shí)。過(guò)濾該反應(yīng)混合物，并濃縮濾液，得到粗標(biāo)題化合物(780mg，粗物質(zhì))。MS(ESI)m/z 157.0[M+H]⁺。

E. (2-(5-氯吡啶-3-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯。在0℃下，向2-(5-氯吡啶-3-基)乙胺(780mg，crude)在THF(10mL)中的溶液中加入二碳酸二叔丁酯(1.1g，5.1mmol)。在室溫下，攪拌得到的反應(yīng)混合物2小時(shí)。在真空中濃縮該反應(yīng)混合物，并通過(guò)硅膠柱色譜(在石油醚中20％乙酸乙酯)純化殘余物，得到呈黃色固體的標(biāo)題化合物(650mg，2.54mmol，產(chǎn)率48％，2個(gè)步驟)。MS(ESI)m/z 257.1[M+H]⁺。

F. 3-(2-((叔-丁氧基羰基)氨基)乙基)-5-氯吡啶1-氧化物。在0℃下，向(2-(5-氯吡啶-3-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(93mg，0.36mmol)在DCM(4mL)中的溶液中加入3-氯過(guò)苯甲酸(85％，94.8mg，0.54mmol)。用硫代硫酸鈉水溶液淬滅反應(yīng)，并用DCM萃取。將合并的有機(jī)層用碳酸鉀水溶液和鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并濃縮，得到粗產(chǎn)物，其直接用于下一步而無(wú)需進(jìn)一步純化(90mg，粗物質(zhì))。MS(ESI)m/z 273.1[M+H]⁺。

G. 3-(2-氨基乙基)-5-氯吡啶1-氧化物。在0℃下，向3-(2-((叔-丁氧基羰基)氨基)乙基)-5-氯吡啶1-氧化物(90mg，粗物質(zhì))在DCM(3mL)中的溶液中加入TFA(1.5mL)。在室溫下，攪拌得到的反應(yīng)混合物1.5小時(shí)。濃縮該反應(yīng)混合物，得到粗標(biāo)題產(chǎn)物，其直接用于下一步而無(wú)需進(jìn)一步純化(80mg，粗物質(zhì))。MS(ESI)m/z 173.1[M+H]⁺。

H. 4-(((1R，4S)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈。在100℃下，加熱4-氯-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(2.15g，11.6mmol))、(1S，4R)-4-氨基-2，2-二甲基環(huán)己醇(1.51g，10.5mmol)和DIEA(2.72mg，21.1mmol)在異丙醇(30mL)中的混合物3小時(shí)。在減壓下除去有機(jī)溶劑之后，用水處理殘余物，并用乙酸乙酯萃取。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并濃縮，得到粗產(chǎn)物，通過(guò)硅膠柱色譜(在石油中15％乙酸乙酯)純化，得到呈淺黃色固體的標(biāo)題化合物(2.2g，7.53mmol，產(chǎn)率72％)。MS(ESI)m/z 293.2[M+H]⁺。

I. 4-(((1R，4S)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲基磺?；?嘧啶-5-甲腈。在冰-水浴中冷卻下，向4-(((1R，4S)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(1.02g，3.48mmol)在無(wú)水DCM(20mL)中的溶液中加入間-氯過(guò)苯甲酸(85％，1.78g，8.79mmol)。在室溫下，攪拌得到的混合物3小時(shí)。用硫代硫酸鈉水溶液淬滅反應(yīng)，并用DCM萃取。將合并的有機(jī)層用碳酸鉀水溶液和鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并濃縮，得到呈淺黃色固體的標(biāo)題化合物(0.9g，粗物質(zhì))。MS(ESI)m/z 309.2，325.2[M+H]⁺。

J. 3-氯-5-(2-((5-氰基-4-(((1R，4S)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)乙基)吡啶1-氧化物。在微波反應(yīng)器中，在85℃下，攪拌4-(((1R，4S)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲基磺?；?嘧啶-5-甲腈(80mg，粗物質(zhì))、3-(2-氨基乙基)-5-氯吡啶1-氧化物(80mg，粗物質(zhì))和DIEA(169mg，1.31mmol)在THF(2mL)中的混合物1小時(shí)。在冷卻至室溫之后，將反應(yīng)混合物濃縮，并通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)方法純化殘余物，得到標(biāo)題產(chǎn)物(32.6mg，0.08mmol，產(chǎn)率22％，經(jīng)3個(gè)步驟)。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ(ppm)8.30(s，1H)，8.16(s，1H)，8.08(s，1H)，7.51(s，1H)，4.32-4.25(m，1H)，3.77-3.65(m，2H)，3.42-3.40(s，1H)，2.99-2.93(m，2H)，1.95-1.50(m，6H)，1.03(s，3H)，0.99(s，3H).MS(ESI)m/z 417.2[M+H]⁺。

實(shí)施例22：4-(((1S，3S)-3-氨基-2，2-二甲基環(huán)丁基)氨基)-2-((3-氯苯乙基)氨基)嘧啶-5-甲腈

4-(((1R，3R)-3-氨基-2，2-二甲基環(huán)丁基)氨基)-2-((3-氯苯乙基)氨基)嘧啶-5-甲腈

4-(((1S，3R)-3-氨基-2，2-二甲基環(huán)丁基)氨基)-2-((3-氯苯乙基)氨基)嘧啶-5-甲腈

4-(((1R，3S)-3-氨基-2，2-二甲基環(huán)丁基)氨基)-2-((3-氯苯乙基)氨基)嘧啶-5-甲腈

A. 2，2-二甲基-3-氧代環(huán)丁烷羧酸甲酯。向1-氯-N，N，2-三甲基丙-1-烯-1-胺(15mL，114mmol)和三氟甲烷磺酸鋅(9.3g，142mmol)的混合物中加入丙烯酸甲酯(12.6mL，142mmol)，同時(shí)在氮?dú)庀聰嚢?。然后，將得到的混合物超聲處?2小時(shí)。用碳酸氫鈉水溶液淬滅該反應(yīng)混合物，并用乙酸乙酯萃取該混合物。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥并過(guò)濾。在真空下濃縮濾液，并通過(guò)硅膠柱色譜(在石油醚中5-8％的乙酸乙酯)純化殘余物，得到呈黃色油狀物的標(biāo)題化合物(5.8g，37.2mmol，產(chǎn)率33％)。¹H NMR(400MHz，CHLOROFORM-d)δ3.76(s，3H)，3.59-3.51(m，1H)，3.15-3.06(m，1H)，2.99-2.94(m，1H)，1.32(s，3H)，1.12(s，3H)。

B. 2，2-二甲基-3-氧代環(huán)丁烷羧酸。向2，2-二甲基-3-氧代環(huán)丁烷羧酸甲酯(5.0g，32.1mmol)在MeOH(37.5mL)中的溶液中加入氫氧化鈉水溶液(4.48N，18.5mL，84mmol).。在50℃下，攪拌得到的混合物2小時(shí)。在完成之后，在減壓下除去過(guò)量的MeOH，并用乙醚(15mL)萃取混合物。用鹽酸(4N，30mL)中和水溶液，并用乙酸乙酯(100mL×2)萃取該混合物。將合并的有機(jī)層用鹽水(15mL)洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥并過(guò)濾。在真空下濃縮濾液，得到呈白色固體的標(biāo)題產(chǎn)物(3.9g，27.5mmol，產(chǎn)率86％)。¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ(ppm)12.4(br，1H)，3.31-3.23(m，1H)，3.17-3.08(m，1H)，2.97-2.91(m，1H)，1.22(s，3H)，1.04(s，3H)。

C. (2，2-二甲基-3-氧代環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯。在冰-水浴中冷卻下，向2，2-二甲基-3-氧代環(huán)丁烷羧酸(3.9g，27.5mmol)和TEA(5.75g，57mmol)在甲苯(160mL)中的溶液中慢慢地加入二苯基磷?；B氮化物(11.5mL，57mmol)。在100℃下，攪拌該混合物4小時(shí)。將該反應(yīng)混合物冷卻至室溫，并加入叔丁醇(82mL，925mmol)。將得到的混合物回流過(guò)夜。用碳酸氫鈉水溶液(150mL)處理反應(yīng)混合物，并用乙酸乙酯(50mL x 3)萃取水溶液。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥并過(guò)濾。在真空下濃縮濾液，并通過(guò)硅膠柱色譜(在石油醚中2-7％的乙酸乙酯)純化殘余物，得到呈黃色油狀物的標(biāo)題化合物(650mg，3.05mmol，產(chǎn)率11％)。¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ(ppm)4.81-4.70(m，1H)，4.05-3.93(m，1H)，3.37(dd，J₁＝18.0Hz，J₂＝9.0Hz，1H)，2.89(dd，J₁＝18.0Hz，J₂＝6.9Hz，1H)，1.48(s，9H)，1.28(s，3H)，1.13(s，3H)。

D. (3-(羥基亞氨基)-2，2-二甲基環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯肟。在室溫下，攪拌(2，2-二甲基-3-氧代環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(645mg，3.00mmol)、鹽酸羥胺(312mg，4.50mmol)和碳酸鈉(240mg，2.25mmol)在MeOH和水(7mL和7mL)中的混合物過(guò)夜。將反應(yīng)物用水處理，并用乙酸乙酯萃取。將合并的有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥并過(guò)濾。在真空下濃縮濾液，得到呈白色固體的粗標(biāo)題化合物(730mg，粗物質(zhì))。MS(ESI)m/z 229.2[M+H]⁺。

E. (3-氨基-2，2-二甲基環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯。向(3-(羥基亞氨基)-2，2-二甲基環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯肟(730mg，粗物質(zhì))在MeOH和氨水(12.5mL和2.5mL)中的溶液中加入Raney-Ni(430mg，粗物質(zhì))。在室溫下，在氫氣氛下攪拌該反應(yīng)混合物過(guò)夜。使反應(yīng)過(guò)濾通過(guò)硅藻土，并在真空下濃縮濾液。通過(guò)硅膠柱色譜(在DCM中2-5％MeOH)純化殘余物，得到標(biāo)題化合物(490mg，2.29mmol，兩步的產(chǎn)率76％)。MS(ESI)m/z 215.2[M+H]⁺。

F. 4-氯-2-((3-氯苯乙基)氨基)嘧啶-5-甲腈。在50℃下，攪拌2，4-二氯嘧啶-5-甲腈(5.0g，28.90mmol)、2-(3-氯苯基)乙胺(4.78g，28.9mmol)和DIEA(7.45g，57.8mmol)在THF(50mL)中的混合物3小時(shí)。在冷卻至室溫之后，加入水(80mL)，并用乙酸乙酯(3×100mL)萃取水層。將合并的有機(jī)層用飽和的氯化銨水溶液、鹽水洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥并過(guò)濾。在真空中蒸發(fā)濾液，得到粗產(chǎn)物，將其用乙酸乙酯(30mL)處理并攪拌30分鐘。將混合物過(guò)濾并干燥，得到標(biāo)題化合物(3.20g，10.92mmol，產(chǎn)率38％)。MS(ESI)m/z 293.1，294.1[M+H]⁺。

G. ((1S，3S)-3-((2-((3-氯苯乙基)氨基)-5-氰基嘧啶-4-基)氨基)-2，2-二甲基環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯、((1R，3R)-3-((2-((3-氯苯乙基)氨基)-5-氰基嘧啶-4-基)氨基)-2，2-二甲基環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯、((1R，3S)-3-((2-((3-氯苯乙基) 氨基)-5-氰基嘧啶-4-基)氨基)-2，2-二甲基環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯和((1S，3R)-3-((2-((3-氯苯乙基)氨基)-5-氰基嘧啶-4-基)氨基)-2，2-二甲基環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯。向4-氯-2-((3-氯苯乙基)氨基)嘧啶-5-甲腈(600mg，2.04mmol)和(3-氨基-2，2-二甲基環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(490mg，2.29mmol)在二噁烷(20mL)中的混合物中加入DIEA(738mg，5.73mmol)。在125℃下，在微波照射下，攪拌得到的混合物5小時(shí)。在減壓下，除去有機(jī)溶劑之后，將殘余物用乙酸乙酯稀釋?zhuān)⒂寐然@水溶液洗滌有機(jī)層。分離有機(jī)層，經(jīng)硫酸鈉干燥并在真空下濃縮，得到粗產(chǎn)物，通過(guò)硅膠色譜(在石油中10％至33％的乙酸乙酯)純化，得到呈淺黃色固體的標(biāo)題化合物(610mg，1.30mmol，產(chǎn)率63％)。通過(guò)手性制備超臨界流體色譜(手性柱：OJ，柱尺寸0.46cm I.D.×25cm L，5um；流動(dòng)相：CO₂∶MeOH∶DEA＝60∶40∶0.1，流率2.5mL/min，220nm T＝35℃)分離外消旋產(chǎn)物(500mg，1.06mmol)，得到四種異構(gòu)體：((1S，3S)-3-((2-((3-氯苯乙基)氨基)-5-氰基嘧啶-4-基)氨基)-2，2-二甲基環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(峰1，100mg，0.21mmol，產(chǎn)率20％，RT＝7.88min，d.e.＝100％，e.e.＝100％)、((1R，3R)-3-((2-((3-氯苯乙基)氨基)-5-氰基嘧啶-4-基)氨基)-2，2-二甲基環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(峰3，102mg，0.22mmol，產(chǎn)率20％，RT＝9.37min，d.e.＝100％，e.e.＝100％)、((1R，3S)-3-((2-((3-氯苯乙基)氨基)-5-氰基嘧啶-4-基)氨基)-2，2-二甲基環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(峰2，85mg，0.18mmol，產(chǎn)率17％，RT＝8.29min，d.e.＝100％，e.e.＝100％)和((1S，3R)-3-((2-((3-氯苯乙基)氨基)-5-氰基嘧啶-4-基)氨基)-2，2-二甲基環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(峰4，82mg，0.17mmol，產(chǎn)率17％，RT＝10.96min，d.e.＝100％，e.e.＝100％).MS(ESI)m/z 471.2[M+H]⁺

H. 4-(((1S，3S)-3-氨基-2，2-二甲基環(huán)丁基)氨基)-2-((3-氯苯乙基)氨基)嘧啶-5-甲腈。在冰-水浴中冷卻下，向((1S，3S)-3-((2-((3-氯苯乙基)氨基)-5-氰基嘧啶-4-基)氨基)-2，2-二甲基環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(100mg，0.21mmol)在無(wú)水DCM(2mL)中的溶液中滴加TFA(1.5mL)。在室溫下，攪拌得到的混合物30分鐘。在除去有機(jī)溶劑之后，用氨水中和殘余物，并用DCM萃取。將合并的有機(jī)層經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥并濃縮，得到粗產(chǎn)物，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)方法純化，得到標(biāo)題化合物(49.7mg，0.13mmol，產(chǎn)率64％)。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ(ppm)8.06(s，1H)，7.29-7.15(m，4H)，4.33(dd，J₁＝5.6Hz，J₂＝9.2Hz，1H)，3.72-3.50(m，2H)，3.18-3.12(m，1H)，2.93-2.86(m，2H)，2.45-2.39(m，1H)，2.17-2.12(m，1H)，1.20(s，3H)，0.98(s 3H).MS(ESI)m/z 371.2[M+H]⁺。

4-(((1R，3R)-3-氨基-2，2-二甲基環(huán)丁基)氨基)-2-((3-氯苯乙基)氨基)嘧啶-5-甲腈。在冰-水浴中冷卻下，向((1R，3R)-3-((2-((3-氯苯乙基)氨基)-5-氰基嘧啶-4-基)氨基)-2，2-二甲基環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(102mg，0.22mmol)在無(wú)水DCM(2mL)中的溶液中滴加TFA(1.5mL)。在室溫下，攪拌得到的混合物30分鐘。在除去有機(jī)溶劑之后，用氨水中和殘余物，并用DCM萃取。將合并的有機(jī)層經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥并濃縮，得到粗產(chǎn)物，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)方法純化，得到標(biāo)題化合物(43.8mg，0.118mmol，產(chǎn)率54％)。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ(ppm)8.06(s，1H)，7.29-7.15(m，4H)，4.33(dd，J₁＝5.6Hz，J₂＝9.2Hz，1H)，3.72-3.50(m，2H)，3.18-3.12(m，1H)，2.93-2.86(m，2H)，2.45-2.39(m，1H)，2.17-2.12(m，1H)，1.20(s，3H)，0.98(s 3H).MS(ESI)m/z 371.2[M+H]⁺。

4-(((1S，3R)-3-氨基-2，2-二甲基環(huán)丁基)氨基)-2-((3-氯苯乙基)氨基)嘧啶-5-甲腈。在冰水浴中，向((1S，3R)-3-((2-((3-氯苯乙基)氨基)-5-氰基嘧啶-4-基)氨基)-2，2-二甲基環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(85mg，0.18mmol)在無(wú)水DCM(2mL)中的溶液中滴加TFA(1.5mL)。在室溫下，攪拌得到的混合物30分鐘。在除去有機(jī)溶劑之后，用氨水中和殘余物，并用DCM萃取。將合并的有機(jī)層經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥并濃縮，得到粗產(chǎn)物，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)方法純化，得到標(biāo)題化合物(48.7mg，0.131mmol，產(chǎn)率73％)。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ(ppm)8.04(s，1H)，7.27-7.14(m，4H)，4.16-3.97(m，1H)，3.74-3.49(m，2H)，2.90-2.85(m，3H)，2.60-2.49(m，1H)，1.92-1.86(m，1H)，1.22(s，3H)，0.92(s3H).MS(ESI)m/z 371.2[M+H]⁺。

4-(((1R，3S)-3-氨基-2，2-二甲基環(huán)丁基)氨基)-2-((3-氯苯乙基)氨基)嘧啶-5-甲腈。在冰-水浴中冷卻下，向((1R，3S)-3-((2-((3-氯苯乙基)氨基)-5-氰基嘧啶-4-基)氨基)-2，2-二甲基環(huán)丁基)氨基甲酸叔丁酯(82mg，0.17mmol)在無(wú)水DCM(2mL)中的溶液中滴加三氟乙酸(1.5mL)。在室溫下，攪拌得到的混合物30分鐘。在除去有機(jī)溶劑之后，用氨水中和殘余物，并用DCM萃取。將合并的有機(jī)層經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥并濃縮，得到粗產(chǎn)物，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)方法純化，得到標(biāo)題化合物(34.3mg，0.092mmol，產(chǎn)率55％)。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ(ppm)8.04(s，1H)，7.27-7.14(m，4H)，4.16-3.97(m，1H)，3.74-3.49(m，2H)，2.90-2.85(m，3H)，2.60-2.49(m，1H)，1.92-1.86(m，1H)，1.22(s，3H)，0.92(s 3H).MS(ESI)m/z 371.2[M+H]⁺。

實(shí)施例23：4-((1R，4S)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基氨基)-2-(3-(5-甲基-1H-四唑-1-基)苯乙基氨基)嘧啶-5-甲腈

A. (3-氨基-苯基)-乙腈。在85℃下，將(3-硝基-苯基)-乙腈(2.00g，12.35mmol)、鐵粉(2.07g，37.03mmol)和氯化銨(1.96g，37.03mmol)在EtOH(20mL)和水(4mL)中的混合物回流1小時(shí)。將反應(yīng)混合物過(guò)濾通過(guò)硅藻土，并用EtOH洗滌。濃縮合并的濾液，并通過(guò)硅膠柱色譜(在石油醚中20％乙酸乙酯)純化殘余物，得到呈淺黃色固體的標(biāo)題化合物(1.57g，11.89mmol，產(chǎn)率96％)。MS(ESI)m/z 133.1[M+H]⁺。

B. N-(3-氰基甲基-苯基)-乙酰胺。在0℃下，向(3-氨基-苯基)-乙腈(500mg，3.79mmol)和TEA(498mg，4.93mmol)的混合物中慢慢地加入乙酰氯(387mg，4.93mmol)。在室溫下，攪拌得到的混合物10分鐘。用飽和的氯化銨水溶液淬滅反應(yīng)混合物，并用DCM萃取兩次。將合并的有機(jī)層用氯化銨水溶液和鹽水洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥并濃縮，得到呈淺黃色固體的標(biāo)題化合物(558mg，3.20mmol，產(chǎn)率85％)。MS(ESI)m/z 175.1[M+H]⁺。

C. [3-(5-甲基-四唑-1-基)-苯基]-乙腈。在-5℃下，向N-(3-氰基甲基-苯基)-乙酰胺(500mg，2.87mmol)在無(wú)水乙腈(5mL)中的溶液中慢慢地加入三氟甲烷磺酸酸酐(1.62g，5.74mmol)。攪拌得到的混合物5，慢慢地加入三甲基甲硅烷基疊氮化物(1.32g，11.48mmol)，同時(shí)保持溫度低于-5℃。在-5℃下，攪拌得到的混合物1小時(shí)。將該反應(yīng)物傾倒到冷卻氯化氨水溶液中，并用乙酸乙酯萃取三次。經(jīng)硫酸鈉干燥合并的有機(jī)層并濃縮，得到粗產(chǎn)物，通過(guò)硅膠柱色譜(在DCM中1-2％MeOH)純化，得到呈黃色固體的標(biāo)題化合物(260mg，1.31mmol，產(chǎn)率45％)。MS(ESI)m/z 199.9[M+H]⁺。

D. 2-[3-(5-甲基-四唑-1-基)-苯基]-乙胺。在0℃下，向[3-(5-甲基-四唑-1-基)-苯基]-乙腈(180mg，0.90mmol)在THF(3mL)中的溶液中慢慢地加入硼烷-甲基硫化物復(fù)合物在THF(2M，0.8mL，1.60mmol)中的溶液，并在80℃下，在氮?dú)庀聦⒌玫降幕旌衔锘亓?小時(shí)。用MeOH淬滅反應(yīng)，并在室溫下攪拌1小時(shí)。濃縮該混合物，得到粗產(chǎn)物，通過(guò)硅膠柱色譜(在石油醚中10-26％乙酸乙酯)純化，得到標(biāo)題化合物(85mg，0.42mmol，產(chǎn)率46％)。MS(ESI)m/z 204.1[M+H]⁺。

F. 4-(((1R，4S)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈。在100℃下，加熱4-氯-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(2.15g，11.6mmol))、(1S，4R)-4-氨基-2，2-二甲基環(huán)己醇(1.51g，10.5mmol)和DIEA(2.72g，21.1mmol)在異丙醇(30mL)中的混合物3小時(shí)。在減壓下除去有機(jī)溶劑之后，用水處理殘余物，并用乙酸乙酯萃取。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并濃縮，得到粗產(chǎn)物，通過(guò)硅膠柱色譜(在石油中15％乙酸乙酯)純化，得到呈淺黃色固體的標(biāo)題化合物(2.2g，7.53mmol，產(chǎn)率72％)。MS(ESI)m/z 293.2[M+H]⁺.

G. 4-(((1R，4S)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲基磺?；?嘧啶-5-甲腈和4-(((1R，4S)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲基亞磺?；?嘧啶-5-甲腈。在冰-水浴中冷卻下，向4-(((1R，4S)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(1.02g，3.48mmol)在無(wú)水DCM(20mL)中的溶液中加入間-氯過(guò)苯甲酸(85％，1.78g，8.79mmol)。在室溫下，攪拌得到的混合物3小時(shí)。用硫代硫酸鈉水溶液淬滅反應(yīng)，并用DCM萃取。將合并的有機(jī)層用碳酸鉀水溶液和鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并濃縮，得到呈淺黃色固體的標(biāo)題化合物(0.9g，粗物質(zhì))。MS(ESI)m/z 309.2，325.2[M+H]⁺。

H. 4-((1R，4S)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基氨基)-2-(3-(5-甲基-1H-四唑-1-基)苯乙基氨基)嘧啶-5-甲腈。在100℃下，在微波照射下，攪拌2-(2-(5-甲基-1H-四唑-1-基)苯基)乙胺(85mg，0.42mmol)、4-(((1R，4S)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲基磺?；?嘧啶-5-甲腈和4-(((1R，4S)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲基亞磺酰基)嘧啶-5-甲腈(90mg，0.27mmol)和DIEA(105mg，0.81mmol)的混合物1.5小時(shí)。在冷卻至室溫之后，濃縮反應(yīng)混合物，并通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)方法純化殘余物，得到標(biāo)題化合物(44.3mg，0.073mmol，產(chǎn)率21％)。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ(ppm)7.92(m，1H)，7.50-7.40(m，2H)，7.34-7.25(m，2H)，4.25-4.15(m，1H)，3.68-3.49(m，2H)，3.25-3.22(m，1H)，3.00-2.87(m，2H)，2.46(s，3H)，1.79-1.22(m，6H)，0.88-0.83(m，6H).MS(ESI)m/z 448.2[M+H]⁺。

實(shí)施例24：2-((3-氯-2-(三氟甲基)苯乙基)氨基)-4-(((1R，4S)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基)嘧啶-5-甲腈

A. (3-氯-2-(三氟甲基)苯基)甲醇。在0℃至5℃下，向3-氯-2-(三氟甲基)苯甲酸(0.15g，0.668mmol)在THF(5mL)中的溶液中加入硼烷二甲基硫醚復(fù)合物(2M，0.70mL，1.40mmol)。在氮?dú)夥障?，?5℃下，加熱得到的溶液2小時(shí)。在0℃下，用MeOH(1mL)淬滅反應(yīng)，并在真空下濃縮，得到粗標(biāo)題產(chǎn)物(0.12g)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ(ppm)7.66-7.64(m，1H)，7.48-7.44(m，2H)，4.90(d，J＝2.0Hz，2H)，3.70(t，J＝2.0Hz，1H)。

B. 3-氯-2-(三氟甲基)芐基甲磺酸酯。在0℃下，向(3-氯-2-(三氟甲基)苯基)MeOH(0.12g，粗物質(zhì))和TEA(0.115g，1.14mmol)在無(wú)水DCM(5mL)中的混合物中滴加甲磺酰氯(98.0mg，0.855mmol)。在室溫下，攪拌得到的反應(yīng)混合物2小時(shí)。加入水，并用DCM(10mL×3)萃取該混合物。將合并的有機(jī)層用飽和的氯化銨水溶液、鹽水洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥并過(guò)濾。在真空下蒸發(fā)濾液，得到粗標(biāo)題產(chǎn)物(0.150g)。¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ(ppm)7.62-7.43(m，3H)，5.41(d，J＝1.8Hz，2H)，3.03(s，3H)。

C. 2-(3-氯-2-(三氟甲基)苯基)乙腈。向3-氯-2-(三氟甲基)芐基甲磺酸酯(0.150g，粗物質(zhì))和三甲基硅烷睛(119mg，1.2mmol)在乙腈(5mL)中的混合物中加入氟化四丁銨在THF(1M，1.2mL，1.2mmol)中的溶液。在室溫下，攪拌該反應(yīng)2小時(shí)。用乙酸乙酯和水處理反應(yīng)物，并將分離的有機(jī)層用鹽水洗滌，干燥并濃縮，得到粗產(chǎn)物，通過(guò)硅膠柱色譜(在石油醚中的10％乙酸乙酯)純化，得到呈黃色固體的標(biāo)題化合物(0.10g，3.03mmol，經(jīng)3步的產(chǎn)率68％)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ(ppm)7.56-7.48(m，3H)，3.99(d，J＝2.0Hz，2H).

D. 2-(3-氯-2-(三氟甲基)苯基)乙胺。向2-(3-氯-2-(三氟甲基)苯基)乙腈(0.10g，3.03mmol)在MeOH(5mL)中的溶液中加入拉尼鎳(100mg)。在真空下，使該混合物脫氣10分鐘，然后在在室溫下，在全充氣氣球下氫化過(guò)夜。將該混合物過(guò)濾通過(guò)硅藻土墊，并用MeOH(10mL)洗滌濾餅。在真空下濃縮濾液，得到粗產(chǎn)物(100mg)。MS(ESI)m/z 224.1[M+H]⁺。

E. 4-(((1R，4S)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈。在100℃下，加熱4-氯-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(2.15g，11.6mmol))、(1S，4R)-4-氨基-2，2-二甲基環(huán)己醇(1.51g，10.5mmol)和DIEA(2.72mg，21.1mmol)在異丙醇(30mL)中的混合物3小時(shí)。在減壓下除去有機(jī)溶劑之后，用水處理殘余物，并用乙酸乙酯萃取。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并濃縮，得到粗產(chǎn)物，通過(guò)硅膠柱色譜(在石油中15％乙酸乙酯)純化，得到呈淺黃色固體的標(biāo)題化合物(2.2g，7.53mmol，產(chǎn)率72％)。MS(ESI)m/z 293.2[M+H]⁺。

F. 4-(((1R，4S)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲基磺?；?嘧啶-5-甲腈。在冰-水浴中冷卻下，向4-(((1R，4S)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(1.02g，3.48mmol)在無(wú)水DCM(20mL)中的溶液中加入間-氯過(guò)苯甲酸(85％，1.78g，8.79mmol)。在室溫下，攪拌得到的混合物3小時(shí)。用硫代硫酸鈉水溶液淬滅反應(yīng)，并用DCM萃取。將合并的有機(jī)層用碳酸鉀水溶液和鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并濃縮，得到呈淺黃色固體的標(biāo)題產(chǎn)物(0.9g，粗物質(zhì))。MS(ESI)m/z 309.2，325.2[M+H]⁺。

G. 2-((3-氯-2-(三氟甲基)苯乙基)氨基)-4-(((1R，4S)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基)嘧啶-5-甲腈。在微波反應(yīng)器中，在100℃下，攪拌4-(((1R，4S)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲基磺?；?嘧啶-5-甲腈(75mg，0.23mmol)、2-(3-氯-2-(三氟甲基)苯基)乙胺(100mg，粗物質(zhì))和DIEA(85mg，0.66mmol)在THF(2mL)中的混合物1.5小時(shí)。在冷卻至室溫之后，將反應(yīng)混合物濃縮，并通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)方法純化殘余物，得到標(biāo)題化合物(42.2mg，0.090mmol，產(chǎn)率39％)。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ(ppm)8.10-8.03(m，1H)，7.48-4.41(m，2H)，7.30(m，1H)，4.31-4.28(m，1H)，3.73-3.69(m，1H)，3.63-3.56(m，1H)，3.39-3.37(m，1H)，3.17-3.14(m，2H)，1.88-1.44(m，6H)，0.97(s，3H)，0.96(s，3H).MS(ESI)m/z 468.1[M+H]⁺。

實(shí)施例25：4-氯-2-(2-(5-氰基-4-((1R，4S)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基氨基)嘧啶-2-基氨基)乙基)苯磺酰胺

A. N-[2-(3-氯-苯基)-乙基]-乙酰胺。在0℃下，向2-(3-氯-苯基)-乙胺(3.00g，19.28mmol)和TEA(2.9g，28.92mmol)在無(wú)水DCM(30mL)中的溶液中滴加乙酰氯(2.27g，28.92mmol)。在室溫下，攪拌得到的混合物1小時(shí)。用水淬滅反應(yīng)，并用乙酸乙酯萃取該混合物。將合并的有機(jī)層用飽和的氯化銨水溶液、鹽水洗滌，并濃縮，得到呈黃色油狀物的標(biāo)題化合物(3.60g，18.27mmol，產(chǎn)率94％)。MS(ESI)m/z 198.1，200.1[M+H]⁺。

B. 2-(2-乙酰氨基-乙基)-4-氯-苯磺酰氯。在0-5℃下，將N-[2-(3-氯-苯基)-乙基]-乙酰胺(400mg，2.02mmol)慢慢地加入到氯磺酸(4mL)中。在室溫下，攪拌得到的混合物2小時(shí)。將該反應(yīng)混合物傾倒入冰-水中，并攪拌10分鐘。用DCM萃取該混合物。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥并濃縮，得到呈褐色固體的標(biāo)題化合物(288mg，0.97mmol，產(chǎn)率48％)。MS(ESI)m/z 296.0，298.0，300.0[M+H]⁺.

C. N-[2-(5-氯-2-氨磺?；?苯基)-乙基]-乙酰胺。在0-5℃下，向2-(2-乙酰氨基-乙基)-4-氯-苯磺酰氯(288mg，1.04mmol)在無(wú)水DCM(4mL)中的溶液中慢慢地加入氨溶液(2mL)。在室溫下，攪拌得到的反應(yīng)混合物1小時(shí)。加入水，并用氯仿/異丙醇(3∶1)萃取該混合物。將合并的有機(jī)層經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥并濃縮，得到粗產(chǎn)物，通過(guò)硅膠色譜(209mg，0.76mmol，產(chǎn)率78％)純化。MS(ESI)m/z 277.0，279.0[M+H]⁺。

D. 2-(2-氨基-乙基)-4-氯-苯磺酰胺。在100℃下，攪拌N-[2-(5-氯-2-氨磺酰基-苯基)-乙基]-乙酰胺(209mg，0.76mmol)和氫氧化鉀水溶液(2mol/L，3mL，6mmol)的混合物4小時(shí)。在冷卻至室溫之后，用2N鹽酸水溶液中和反應(yīng)。將該混合物濃縮至無(wú)水，并用溶劑(在DCM中3％MeOH，200mL)稀釋殘余物，并攪拌小時(shí)。過(guò)濾混合物，并濃縮濾液，得到呈灰色固體的標(biāo)題化合物(150mg，0.64mmol，產(chǎn)率85％)。MS(ESI)m/z 235.1，237.1[M+H]⁺。

E. 4-(((1R，4S)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈。在100℃下，加熱4-氯-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(2.15g，11.6mmol))、(1S，4R)-4-氨基-2，2-二甲基環(huán)己醇(1.51g，10.5mmol)和DIEA(2.72g，21.1mmol)在異丙醇(30mL)中的混合物3小時(shí)。在減壓下除去有機(jī)溶劑之后，用水處理殘余物，并用乙酸乙酯萃取。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并濃縮，得到粗產(chǎn)物，通過(guò)硅膠柱色譜(在石油中15％乙酸乙酯)純化，得到呈淺黃色固體的標(biāo)題化合物(2.2g，7.53mmol，產(chǎn)率72％)。MS(ESI)m/z 293.2[M+H]⁺。

F. 4-(((1R，4S)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲基磺?；?嘧啶-5-甲腈。在冰-水浴中冷卻下，向4-(((1R，4S)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(1.02g，3.48mmol)在無(wú)水DCM(20mL)中的溶液中加入間-氯過(guò)苯甲酸(85％，1.78g，8.79mmol)。在室溫下，攪拌得到的混合物3小時(shí)。用硫代硫酸鈉水溶液淬滅反應(yīng)，并用DCM萃取。將合并的有機(jī)層用碳酸鉀水溶液和鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并濃縮，得到呈淺黃色固體的標(biāo)題產(chǎn)物(0.9g，粗物質(zhì))。MS(ESI)m/z 309.2，325.2[M+H]⁺.

4-氯-2-(2-(5-氰基-4-((1R，4S)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基氨基)嘧啶-2-基氨基)乙基)苯磺酰胺。在微波反應(yīng)器中，在100℃下，攪拌4-(((1R，4S)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲基磺?；?嘧啶-5-甲腈(100mg，0.31mmol)、2-(2-氨基-乙基)-4-氯-苯磺酰胺(150mg，0.64mmol)和DIEA(80mg，0.62mmol)在THF(4mL)中的混合物1小時(shí)。在冷卻至室溫之后，將反應(yīng)混合物濃縮，并通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)方法純化殘余物，得到標(biāo)題化合物(53.3mg，0.060mmol，產(chǎn)率26％)。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ(ppm)8.18-8.00(m，1H)，7.96(d，J＝8.0Hz，1H)，7.50-7.34(m，2H)，4.41-4.23(m，1H)，3.89-3.51(m，2H)，3.41-3.33(m，2H)，3.29-3.22(m，1H)，2.04-1.80(m，1H)，1.80-1.68(m，2H)，1.67-1.38(m，3H)，1.05-0.93(m，6H).MS(ESI)m/z 479.1，481.1[M+H]⁺。

實(shí)施例26：2-氯-4-(2-(5-氰基-4-((1R，4S)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基氨基)嘧啶-2-基氨基)乙基)苯磺酰胺

A. N-苯乙基乙酰胺。在0℃下，向2-苯基乙胺(5.00g，41.32mmol)和TEA(6.26g，61.98mmol)在無(wú)水DCM(50mL)中的溶液中滴加乙酰氯(3.57g，45.45mmol)。在室溫下，攪拌得到的反應(yīng)混合物30分鐘。加入水，并用DCM萃取該混合物。將合并的有機(jī)層用飽和的氯化銨水溶液、鹽水洗滌，并濃縮，得到呈黃色油狀物的標(biāo)題產(chǎn)物(6.06g，37.19mmol，產(chǎn)率90％)。MS(ESI)m/z 164.1[M+H]⁺。

B. 4-(2-乙酰胺基乙基)苯-1-磺酰氯。在0-5℃下，將N-苯乙基乙酰胺(4.50g，27.6mmol)慢慢地加入到氯磺酸(30mL)中。在室溫下，攪拌得到的反應(yīng)混合物2小時(shí)。將該反應(yīng)混合物傾倒入冰-水中，并攪拌10分鐘。用DCM萃取該混合物。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥并濃縮，得到呈褐色固體的標(biāo)題化合物(3.30g，12.64mmol，產(chǎn)率45％)。MS(ESI)m/z 262.1[M+H]⁺。

C. N-[2-(4-氨磺?；?苯基)-乙基]-乙酰胺。在0-5℃下，向4-(2-乙酰胺基乙基)苯-1-磺酰氯(3.30g，12.64mmol)在無(wú)水DCM(30mL)中溶液中加入氨溶液(15mL)。在室溫下，攪拌得到的反應(yīng)混合物1小時(shí)。加入水，并用氯仿/異丙醇(3∶1)萃取該混合物。經(jīng)過(guò)無(wú)水硫酸鈉干燥合并的有機(jī)層，并濃縮，得到粗產(chǎn)物，通過(guò)硅膠色譜(在DCM中1-2％MeOH)純化，呈褐色固體(2.5g，10.33mmol，產(chǎn)率82％)。MS(ESI)m/z 243.1[M+H]⁺。

D. N-[2-(3-氯-4-氨磺酰基-苯基)-乙基]-乙酰胺。在0℃下，向N-[2-(4-氨磺?；?苯基)-乙基]-乙酰胺(780mg，3.21mmol)、N-氯琥珀酰亞胺(216mg，1.60mmol)、過(guò)硫酸鈉(573mg，2.41mmol)和雙乙酸鈀(108mg，0.48mmol)在二氯乙烷(30mL)中的混合物中加入三氟甲磺酸(843mg，5.62mmol)。在密封管中，在75℃下，攪拌得到的混合物7小時(shí)。用氨水中和反應(yīng)混合物，并用DCM萃取該混合物。經(jīng)過(guò)無(wú)水硫酸鈉干燥合并的有機(jī)層，并濃縮，得到粗產(chǎn)物，通過(guò)硅膠色譜(在DCM中1-3％MeOH)純化，得到呈褐色固體的標(biāo)題化合物(350mg，1.27mmol，產(chǎn)率39％)。MS(ESI)m/z 276.0[M+H]⁺。

E. 4-(2-氨基-乙基)-2-氯-苯磺酰胺。在100℃下，攪拌N-[2-(3-氯-4-氨磺?；?苯基)-乙基]-乙酰胺(350mg，1.27mmol)和氫氧化鉀水溶液(2mol/L，8mL，16mmol)的混合物4小時(shí)。在冷卻至室溫之后，用2N鹽酸水溶液中和反應(yīng)。將該混合物濃縮至無(wú)水，用溶劑(在DCM中3％MeOH，200mL)稀釋殘余物，并攪拌1小時(shí)。過(guò)濾該混合物，并濃縮濾液，得到呈淺綠色固體的標(biāo)題化合物(240mg，1.03mmol，產(chǎn)率81％)。MS(ESI)m/z235.1[M+H]+。

F. 4-(((1R，4S)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈。在100℃下，加熱4-氯-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(2.15g，11.6mmol))、(1S，4R)-4-氨基-2，2-二甲基環(huán)己醇(1.51g，10.5mmol)和DIEA(2.72g，21.1mmol)在異丙醇(30mL)中的混合物3小時(shí)。在減壓下除去有機(jī)溶劑之后，用水處理殘余物，并用乙酸乙酯萃取。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并濃縮，得到粗產(chǎn)物，通過(guò)硅膠柱色譜(在石油中15％乙酸乙酯)純化，得到呈淺黃色固體的標(biāo)題化合物(2.2g，7.53mmol，產(chǎn)率72％)。MS(ESI)m/z 293.2[M+H]⁺。

G. 4-(((1R，4S)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶-5-甲腈和4-(((1R，4S)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲基亞磺?；?嘧啶-5-甲腈。在冰-水浴冷卻下，向4-(((1R，4S)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(1.02g，3.48mmol)在無(wú)水DCM(20mL)中的溶液中加入間-氯過(guò)苯甲過(guò)苯甲酸(85％，1.78g，8.79mmol)。在室溫下，攪拌得到的混合物3小時(shí)。用硫代硫過(guò)苯甲酸鈉水溶液淬滅反應(yīng)，并用DCM萃取。將合并的有機(jī)層用碳酸鉀水溶液和鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并濃縮，得到呈淺黃色固體的標(biāo)題化合物(0.9g，粗物質(zhì))。MS(ESI)m/z 309.2，325.2[M+H]⁺。

H. 2-氯-4-{2-[5-氰基-4-(4-羥基-3，3-二甲基-環(huán)己基氨基)-嘧啶-2-基氨基]-乙基}-苯磺酰胺。在微波反應(yīng)器中，在100℃下，攪拌4-(((1R，4S)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲基磺?；?嘧啶-5-甲腈(90mg，0.28mmol)和4-(((1R，4S)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲基亞磺?；?嘧啶-5-甲腈、4-(2-氨基-乙基)-2-氯-苯磺酰胺(90mg，0.38mmol)和DIEA(72mg，0.56mmol)在THF(4mL)中的混合物1小時(shí)。在冷卻至室溫之后，濃縮反應(yīng)混合物，并通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)方法純化殘余物，得到標(biāo)題化合物(28.6mg，0.060mmol，產(chǎn)率26％)。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ(ppm)7.93(s，1H)，7.85(d，J＝8.0Hz，1H)，7.35(s，1H)，7.20(d，J＝8.0Hz，1H)，4.26-4.12(m，1H)，3.66-3.46(m，2H)，3.31-3.25(m，1H)，2.87(t，J＝6.8Hz，2H)，1.86-1.35(m，6H)，0.90(s，3H)，0.88(s，3H).MS(ESI)m/z 479.1[M+H]⁺。

實(shí)施例27：2-(((4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-基)甲基)氨基)-4-(((1S，3R)-3-羥基-3-甲基環(huán)己基)氨基)嘧啶-5-甲腈

A. 4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-甲腈。在0℃下，向氫化鈉(分散在礦物油中60％，1.84g，46mmol)在THF(30.0mL)中的懸浮液中加入2，2-二氟丙-1-醇(4.42g，46.0mmol)。在室溫下，攪拌得到的混合物1小時(shí)，然后在0℃下，分批加入4-氯嘧啶-5-甲腈(6g，43.2mmol)。在加入以后，在室溫下攪拌反應(yīng)混合物30分鐘。用飽和的氯化銨水溶液淬滅反應(yīng)，并用乙酸乙酯萃取。將合并的有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥并濃縮，得到粗產(chǎn)物，通過(guò)硅膠柱色譜(在石油醚中10％乙酸乙酯)純化，得到呈黃色固體的標(biāo)題化合物(4.40g，22.1mmol，產(chǎn)率51％)。MS(ESI)m/z 200.0[M+H]⁺。

B. (4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-基)甲胺。向4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-甲腈(1.7g，8.54mmol)在THF(30mL)中的溶液中加入拉尼鎳(500mg，粗物質(zhì))。在室溫下，在氫氣氛，攪拌得到的混合物過(guò)夜。過(guò)濾反應(yīng)物，在真空中濃縮濾液，并通過(guò)硅膠柱色譜(在DCM中5％MeOH)純化，得到呈黃色固體的期望產(chǎn)物(650mg，3.20mmol，產(chǎn)率37％)。MS(ESI)m/z 204.1[M+H]⁺。

C. (3-羥基環(huán)己基)氨基甲酸叔丁酯。向3-氨基環(huán)己醇(3.0g，26.0mol)在THF(30mL)中的溶液中加入二碳酸二叔丁酯(6.74g，31.2mmol)。在50℃下，攪拌得到的混合物16小時(shí)。然后，在真空中濃縮反應(yīng)混合物，并通過(guò)硅膠柱色譜(在石油醚中30％乙酸乙酯)純化，得到期望的化合物(4.40g，20.46mmol，產(chǎn)率78％)。MS(ESI)m/z 216.1[M+H]⁺。

D. (3-氧代環(huán)己基)氨基甲酸叔丁酯。在冰浴中冷卻下，向(3-羥基環(huán)己基)氨基甲酸叔丁酯(4.40g，20.46mmol)在DCM(250mL)中的溶液中分批加入Dess-Martin過(guò)碘烷(13.0g，30.70mmol)。在室溫下，攪拌該混合物2小時(shí)。用DCM稀釋該反應(yīng)，并用碳酸鈉水溶液洗滌。經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥分離的有機(jī)層，并濃縮。通過(guò)硅膠柱色譜(在石油醚中40％乙酸乙酯)純化粗化合物，得到標(biāo)題化合物(4.0g，18.78mmol，產(chǎn)率91％)。MS(ESI)m/z 214.1[M+H]⁺。

E. (3-羥基環(huán)己基)氨基甲酸叔丁酯。在-75℃下，向(3-氧代環(huán)己基)氨基甲酸叔丁酯(4.0g，18.78mmol)在無(wú)水THF 200mL)中的脫氣懸浮液中加入甲基鋰在THF(3M，25.0mL，75mmol)中的溶液。在-75℃下，攪拌得到的反應(yīng)混合物1小時(shí)。在-75℃下，加入甲基鋰在THF(3M，25.0mL，75mmol)中的溶液，并攪拌該混合物1小時(shí)。滴加氯化氨水溶液以淬滅反應(yīng)。在室溫下，繼續(xù)攪拌得到的反應(yīng)混合物2小時(shí)。用乙酸乙酯(150mL×3)萃取反應(yīng)混合物。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥，并在真空下濃縮，得到粗產(chǎn)物(4.0g，粗物質(zhì))，其直接用于下一步而無(wú)需進(jìn)一步純化。MS(ESI)m/z 230.1[M+H]⁺。

F. 3-氨基-1-甲基環(huán)己醇。在冰浴中冷卻下，向(3-羥基環(huán)己基)氨基甲酸叔丁酯(4.0g，粗物質(zhì))在DCM(40mL)中的溶液中加入TFA(20mL)。在室溫下，攪拌得到的反應(yīng)混合物2小時(shí)。濃縮該混合物，得到粗產(chǎn)物(3.0g，粗物質(zhì))，其用于下一步而無(wú)需進(jìn)一步純化。MS(ESI)m/z 130.1[M+H]⁺。

G. 4-(((1S，3R)-3-羥基-3-甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈and4-(((1R，3S)-3-羥基-3-甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈.在100℃下，加熱4-氯-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(3.71g，20mmol))、3-氨基-1-甲基環(huán)己醇(3.0g，粗物質(zhì))和DIEA(2.72mg，21.1mmol)在異丙醇(30mL)中的混合物3小時(shí)。在減壓下除去有機(jī)溶劑。用水處理殘余物，并用乙酸乙酯萃取。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并濃縮，得到粗產(chǎn)物，通過(guò)硅膠柱色譜(在石油中20％乙酸乙酯)純化，得到順式-異構(gòu)體(0.90g，3.24mmol，3個(gè)步驟的產(chǎn)率17％)和反式-異構(gòu)體(1.80g，6.47mmol，3個(gè)步驟的產(chǎn)率34％)。通過(guò)手性SFC(柱IF；方法：70-30-CO₂-MeOH；CO2流速：2.1；柱溫＝40℃)分離順式-異構(gòu)體(0.90g，3.24mmol)，得到4-(((1S，3R)-3-羥基-3-甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(峰1∶300mg，1.08mmol，產(chǎn)率33％，100％e.e.)和4-(((1R，3S)-3-羥基-3-甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(峰2∶310mg，1.12mmol，產(chǎn)率34％，100％e.e.)，MS(ESI)m/z 279.1[M+H]⁺。

H. 4-(((1S，3R)-3-羥基-3-甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲基磺?；?嘧啶-5-甲腈。在冰-水浴中冷卻下，向4-(((1S，3R)-3-羥基-3-甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(峰1∶250mg，0.90mmol)在無(wú)水DCM(5mL)中的溶液中加入間-氯過(guò)苯甲酸(85％，366mg，1.80mmol)。在室溫下，攪拌得到的混合物1小時(shí)。用硫代硫酸鈉水溶液淬滅反應(yīng)，并用DCM萃取。將合并的有機(jī)層用碳酸鉀水溶液和鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并濃縮，得到呈淺黃色固體的標(biāo)題化合物(230mg，粗物質(zhì))。MS(ESI)m/z 311.2[M+H]⁺。

I. 2-(((4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-基)甲基)氨基)-4-(((1S，3R)-3-羥基-3-甲基環(huán)己基)氨基)嘧啶-5-甲腈。在微波反應(yīng)器中，在100℃下，攪拌4-(((1S，3R)-3-羥基-3-甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶-5-甲腈(80mg，粗物質(zhì))、(4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-基)甲胺(50mg 0.246mmol)和DIEA(85mg，0.66mmol)在THF(2mL)中的混合物1小時(shí)。將反應(yīng)物冷卻至室溫，濃縮該混合物。通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)方法純化殘余物，得到期望產(chǎn)物(26.1mg，0.060mmol，產(chǎn)率24％)。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ(ppm)8.69(s，1H)，8.41(s，1H)，8.11(s，1H)，4.73-4.50(m，4H)，4.34-4.23(m，1H)，1.92-1.08(m，14H).MS(ESI)m/z 434.2[M+H]⁺。

實(shí)施例28：(1s，3s)-3-((2-((2-(1H-吲哚-3-基)乙基)氨基)-5-氰基嘧啶-4-基)氨基)環(huán)丁烷甲酰胺

A. (1s，3s)-甲基3-((叔丁氧基羰基)氨基)環(huán)丁烷-羧酸酯。在0℃下，向(1s，3s)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)環(huán)丁烷羧酸(600mg，2.79mmol)和碳酸鉀(577mg，4.18mmol)在DMF(4mL)中的混合物中加入碘代甲烷(593mg，4.18mmol)，在室溫下攪拌得到的混合物3小時(shí)。用水和乙酸乙酯處理反應(yīng)混合物。將分離的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥并濃縮，得到呈黃色固體的標(biāo)題化合物(590mg，2.58mmol，產(chǎn)率92％)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ(ppm)4.85-4.68(brs，1H)，4.16-4.08(m，1H)，3.68(s，3H)，2.82-2.71(m，1H)，2.67-2.54(m，2H)，2.14-2.04(m，2H)。

B. (1s，3s)-甲基3-氨基環(huán)丁烷羧酸酯。在～0℃至5℃下，向(1s，3s)-甲基3-((叔丁氧基羰基)氨基)環(huán)丁烷羧酸酯(590mg，2.58mmol)在DCM(5mL)中的溶液中加入TFA(2.5mL)。在室溫下，攪拌得到的反應(yīng)混合物1.5小時(shí)。濃縮反應(yīng)混合物，得到產(chǎn)物，其用于下一步而沒(méi)有進(jìn)一步純化(300mg，粗物質(zhì))。MS(ESI)m/z 130.1[M+H]⁺

C. 4-氯-2-[2-(1H-吲哚-3-基)-乙基氨基]-嘧啶-5-甲腈。在50℃下，攪拌2，4-二氯-嘧啶-5-甲腈(2.0g，11.5mmol)、2-(1H-吲哚-3-基)-乙胺(1.83g，11.4mmol)和DIEA(1.94g，15.0mmol)在THF(50mL)中的混合物3小時(shí)。在冷卻至室溫之后，濃縮反應(yīng)混合物，并用乙酸乙酯(150mL)稀釋殘余物。將有機(jī)層用飽和的氯化銨水溶液、鹽水洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥并過(guò)濾。在真空中蒸發(fā)濾液，得到粗產(chǎn)物，通過(guò)硅膠柱色譜(在石油醚中20％乙酸乙酯)純化，得到呈褐色固體的標(biāo)題化合物(1.3g，4.38mmol，產(chǎn)率38％)。MS(ESI)m/z 298.1[M+H]⁺。

D. (1s，3s)-3-((2-((2-(1H-吲哚-3-基)乙基)氨基)-5-氰基嘧啶-4-基)氨基)環(huán)丁烷-羧酸甲酯。在微波反應(yīng)器中，在125℃下，攪拌2-((2-(1H-吲哚--3-基)乙基)氨基)-4-氯嘧啶-5-甲腈(713mg，2.40mmol)、(1s，3s)-3-氨基環(huán)丁烷羧酸甲酯(300mg，粗物質(zhì))和DIEA(619mg，4.80mmol)在DMA(5mL)中的混合物4小時(shí)。在冷卻至室溫之后，濃縮反應(yīng)混合物，并用乙酸乙酯(100 mL)稀釋殘余物。用飽和的氯化銨水溶液、鹽水洗滌洗滌有機(jī)層，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥并過(guò)濾。在真空中蒸發(fā)濾液，得到粗產(chǎn)物，通過(guò)硅膠柱色譜(在DCM中0.6％MeOH)純化，得到呈褐色固體的標(biāo)題化合物(720mg，1.85mmol，產(chǎn)率75％)。MS(ESI)m/z 391.1[M+H]⁺。

E. (1s，3s)-3-((2-((2-(1H-吲哚--3-基)乙基)氨基)-5-氰基嘧啶-4-基)氨基)環(huán)丁烷甲酰胺。在密封管中，在65℃下，攪拌(1s，3s)-甲基3-((2-((2-(1H-吲哚--3-基)乙基)氨基)-5-氰基嘧啶-4-基)氨基)環(huán)丁烷羧酸酯(130mg，0.33mmol)在氨水的MeOH溶液(5mL，5mol/L)中的溶液72小時(shí)。在冷卻至室溫之后，濃縮反應(yīng)混合物，并通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)方法純化殘余物，得到期望產(chǎn)物(27.5mg，0.073mmol，產(chǎn)率22％)。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ(ppm)8.02(s，1H)，7.59(d，J＝8.0Hz，1H)，7.33(J＝7.2Hz，1H)，7.11-6.98(m，3H)，4.55-4.40(m，1H)，3.68(t，J＝7.2Hz，2H)，3.03(t，J＝7.2Hz，2H)，2.78-2.69(m，4H)，2.55-2.49(m，2H)，2.26-2.18(m，2H).MS(ESI)m/z 376.2[M+H]⁺。

實(shí)施例29：4-(((1R，4S)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-((2-(3-甲基-2-氧代-2，3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-1-基)乙基)氨基)嘧啶-5-甲腈

A. (2-(2-氧代-2，3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-1-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯。在0℃下，向1-(2-氨基乙基)-1H-苯并[d]咪唑-2(3H)-酮鹽酸鹽(180mg，0.84mmol)和TEA(255mg，2.52mmol)在THF(15mL)中的溶液中加入焦碳酸二叔丁酯(218mg，1.01mmol)。在50℃下，攪拌得到的反應(yīng)混合物3小時(shí)。在冷卻至室溫之后，濃縮混合物以除去溶劑，用乙酸乙酯稀釋殘余物，過(guò)濾并濃縮得到粗產(chǎn)物，通過(guò)硅膠柱色譜(在石油醚中20％乙酸乙酯)純化，得到標(biāo)題化合物(198mg，0.72mmol，產(chǎn)率85％)。MS(ESI)m/z 278.1[M+H]⁺。

B. (2-(3-甲基-2-氧代-2，3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-1-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯。在密封管中，在0℃下，在氮?dú)庀?，?2-(2-氧代-2，3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-1-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(190mg，0.69mmol)在THF(10mL)中的溶液中加入氫化鈉(34.5mg，0.86mmol，在礦物油中60％)。在室溫下攪拌得到的反應(yīng)混合物20分鐘之后，在0℃下，在氮?dú)庀?，加入在THF(2mL)中的碘代甲烷(112mg，0.79mmol)。在室溫下，攪拌反應(yīng)4小時(shí)。用飽和的氯化銨水溶液淬滅反應(yīng)，并用乙酸乙酯萃取水層。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥并過(guò)濾。在真空下濃縮，得到粗產(chǎn)物，通過(guò)硅膠柱色譜(在石油醚中20％乙酸乙酯)純化，得到標(biāo)題化合物(100mg，0.345mmol，產(chǎn)率50％)。MS(ESI)m/z 292.1[M+H]⁺。

C. 1-(2-氨基-乙基)-3-甲基-1，3-二氫-苯并咪唑-2-酮.在0℃至5℃下，向(2-(3-甲基-2-氧代-2，3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-1-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(100mg，0.345mmol)在DCM(3mL)中的溶液中加入TFA(1.5mL)。在室溫下，攪拌得到的反應(yīng)混合物2小時(shí)。濃縮該反應(yīng)混合物，得到粗產(chǎn)物，其用于下一步而無(wú)需進(jìn)一步純化(140mg粗物質(zhì))。MS(ESI)m/z 192.1[M+H]⁺。

D. 4-(((1R，4S)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈。在100℃下，加熱4-氯-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(2.15g，11.6mmol))、(1S，4R)-4-氨基-2，2-二甲基環(huán)己醇(1.51g，10.5mmol)和DIEA(2.72mg，21.1mmol)在異丙醇(30mL)中的混合物3小時(shí)。在減壓下除去有機(jī)溶劑之后，用水處理殘余物，并用乙酸乙酯萃取。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并濃縮，得到粗產(chǎn)物，通過(guò)硅膠柱色譜(在石油中15％乙酸乙酯)純化，得到呈淺黃色固體的期望化合物(2.2g，7.53mmol，產(chǎn)率72％)。MS(ESI)m/z 293.2[M+H]⁺。

E. 4-(((1R，4S)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲基磺?；?嘧啶-5-甲腈。在冰-水浴中冷卻下，向4-(((1R，4S)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(1.02g，3.48mmol)在無(wú)水DCM(20mL)中的溶液中加入間-氯過(guò)苯甲酸(85％，1.78g，8.79mmol)。在室溫下，攪拌得到的混合物3小時(shí)。用硫代硫酸鈉水溶液淬滅反應(yīng)，并用DCM萃取。將合并的有機(jī)層用碳酸鉀水溶液和鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并濃縮，得到呈淺黃色固體的期望產(chǎn)物(0.9g，粗物質(zhì))。MS(ESI)m/z 309.2，325.2[M+H]⁺。

F. 4-(((1R，4S)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-((2-(2-氧代-2，3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-1-基)乙基)氨基)嘧啶-5-甲腈。在微波反應(yīng)器中，在100℃下，攪拌4-(((1R，4S)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶-5-甲腈(100mg，0.308mmol)、1-(2-氨基-乙基)-3-甲基-1，3-二氫-苯并咪唑-2-酮(140mg，粗物質(zhì))和DIEA(85mg，0.66mmol)在THF(2mL)中的混合物1.5小時(shí)。在冷卻至室溫之后，將反應(yīng)混合物濃縮，并通過(guò)制備標(biāo)準(zhǔn)方法純化殘余物，得到標(biāo)題化合物(36.7mg，0.084mmol，經(jīng)2個(gè)步驟的產(chǎn)率24％)。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ(ppm)8.08-7.94(m，1H)，7.11-7.08(m，4H)，4.26-4.10(m，3H)，3.89-3.66(m，2H)，3.40-3.35(m，4H)，1.96-1.51(m，6H)，1.05-0.99(m，6H)。MS(ESI)m/z 436.2[M+H]⁺。

實(shí)施例30：4-(((1R，4S)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-((2-(1-甲基-1H-吲哚--3-基)乙基)氨基)嘧啶-5-甲腈

A. (2-(1H-吲哚--3-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯。向2-(1H-吲哚-3-基)乙胺(1.00g，6.25mmol)在THF(10mL)中的溶液中加入二碳酸二叔丁酯(1.42g，6.56mmol)。在室溫下，攪拌得到的反應(yīng)混合物16小時(shí)。濃縮該混合物，得到粗產(chǎn)物，通過(guò)硅膠柱色譜(在石油醚中20％乙酸乙酯)純化，得到呈黃色固體的標(biāo)題化合物(1.50g，5.77mmol，產(chǎn)率92％)。MS(ESI)m/z 261.1[M+H]⁺。

B. (2-(1-甲基-1H-吲哚--3-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯。在0℃下，在氮?dú)庀?，?2-(1H-吲哚-3-基)乙基)氨基甲酸酯(1.50g，5.77mmol)在無(wú)水THF(15mL)中的溶液中加入氫化鈉(300mg，7.50mmol，在礦物油中60％)。在室溫下，攪拌得到的反應(yīng)混合物15分鐘之后，在0℃下，慢慢地加入在THF(5mL)中的碘代甲烷(982mg，6.92mmol)。在室溫下，攪拌得到的混合物3小時(shí)，并用飽和的氯化銨水溶液淬滅。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥并過(guò)濾。在減壓下除去有機(jī)溶劑，并通過(guò)硅膠柱色譜(在DCM中0.6％MeOH)純化殘余物，得到呈褐色固體的標(biāo)題化合物(1.29g，4.71mmol，產(chǎn)率81％)。MS(ESI)m/z 275.1[M+H]⁺。

C. 2-(1-甲基-1H-吲哚--3-基)乙胺。在～0℃至5℃下，向(2-(1-甲基-1H-吲哚--3-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(1.29g，4.71mmol)在DCM(15mL)中的溶液中加入TFA(7mL)。在室溫下，攪拌得到的反應(yīng)混合物1小時(shí)。濃縮反應(yīng)混合物，得到粗產(chǎn)物，用DCM稀釋并用碳酸氫鈉水溶液洗滌。將有機(jī)層用鹽水洗滌，干燥并濃縮，得到呈黃色油狀物的期望產(chǎn)物(700mg，4.02mmol，產(chǎn)率85％)。MS(ESI)m/z 175.1[M+H]⁺。

D. 4-(((1R，4S)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈。在100℃下，加熱4-氯-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(2.15g，11.6mmol))、(1S，4R)-4-氨基-2，2-二甲基環(huán)己醇(1.51g，10.5mmol)和DIEA(2.72g，21.1mmol)在異丙醇(30mL)中的混合物3小時(shí)。在減壓下除去有機(jī)溶劑之后，用水處理殘余物，并用乙酸乙酯萃取。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并濃縮，得到粗產(chǎn)物，通過(guò)硅膠柱色譜(在石油中15％乙酸乙酯) 純化，得到呈淺黃色固體的標(biāo)題化合物(2.2g，7.53mmol，產(chǎn)率72％)。MS(ESI)m/z 293.2[M+H]⁺。

E. 4-(((1R，4S)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶-5-甲腈。在冰-水浴中冷卻下，向4-(((1R，4S)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(1.02g，3.48mmol)在無(wú)水DCM(20mL)中的溶液中加入間-氯過(guò)苯甲酸(85％，1.78g，8.79mmol)。在室溫下，攪拌得到的混合物3小時(shí)。用硫代硫酸鈉水溶液淬滅反應(yīng)，并用DCM萃取。將合并的有機(jī)層用碳酸鉀水溶液和鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并濃縮，得到呈淺黃色固體的期望產(chǎn)物(0.9g，粗物質(zhì))。MS(ESI)m/z 309.2，325.2[M+H]⁺。

F. 4-(((1R，4S)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-((2-(1-甲基-1H-吲哚--3-基)乙基)氨基)嘧啶-5-甲腈。在微波反應(yīng)器中，在100℃下，攪拌4-(((1R，4S)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶-5-甲腈(90mg，粗物質(zhì))、2-(1-甲基-1H-吲哚--3-基)乙胺(60mg，0.34mmol)和DIEA(72mg，0.56mmol)在THF(3mL)中的混合物1小時(shí)。在冷卻至室溫之后，將反應(yīng)混合物濃縮，并通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)方法純化殘余物，得到標(biāo)題化合物(21.5mg，0.051mmol，產(chǎn)率15％)。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ(ppm)8.00(s，1H)，7.52(d，J＝8.0Hz，1H)，7.30(d，J＝8.0Hz，1H)，7.14(t，J＝7.6Hz，1H)，7.00(t，J＝8.0Hz，1H)，6.94(s，1H)，4.28-4.23(m，1H)，3.75(s，3H)，3.75-3.62(m，2H)，3.02(t，J＝7.6Hz，1H)，1.82-1.26(m，6H)，1.02-0.87(m，6H).MS(ESI)m/z 419.2[M+H]⁺。

實(shí)施例31：順式-2-(((4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-基)甲基)氨基)-4-((6-羥基-6-甲基螺[3.3]庚烷-2-基)氨基)嘧啶-5-甲腈

反式-2-(((4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-基)甲基)氨基)-4-((6-羥基-6-甲基螺[3.3]庚烷-2-基)氨基)嘧啶-5-甲腈

A. (6-氧代螺[3.3]庚-2-基)氨基甲酸叔丁酯。在～0℃至10℃下，向(6-羥基螺[3.3]庚-2-基)氨基甲酸叔丁酯(1.00g，4.40mmol)在DCM(10mL)中的溶液中加入Dess-Martin過(guò)碘烷(2.80g，6.60mmol)。在室溫下，攪拌得到的反應(yīng)混合物1.5小時(shí)。用碳酸氫鈉水溶液處理反應(yīng)混合物，并用DCM萃取。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥并過(guò)濾。在真空下濃縮，得到粗產(chǎn)物，通過(guò)硅膠柱色譜(在石油醚中22％乙酸乙酯)純化，得到呈淺黃色固體的標(biāo)題化合物(800mg，3.55mmol，產(chǎn)率80％)。MS(ESI)m/z 226.1[M+H]⁺。

B. (6-羥基-6-甲基螺[3.3]庚-2-基)氨基甲酸叔丁酯。在-78℃下，在氮?dú)庀?，?6-氧代螺[3.3]庚-2-基)氨基甲酸叔丁酯(800mg，3.55mmol)在無(wú)水THF(15mL)中的溶液中加入甲基鋰在THF中的溶液(2.36mL，3mol/L，7.50mmol)。在室溫下，攪拌得到的混合物2小時(shí)。將反應(yīng)混合物用飽和的氯化銨水溶液淬滅，并用乙酸乙酯萃取該混合物。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥，并在真空中濃縮，得到呈褐色固體的標(biāo)題化合物(760mg，粗物質(zhì))，其用于下一步而無(wú)需進(jìn)一步純化。MS(ESI)m/z 242.2[M+H]⁺。

C. 6-氨基-2-甲基螺[3.3]庚-2-醇。在～0℃至5℃下，向(6-羥基-6-甲基螺[3.3]庚-2-基)氨基甲酸酯(760mg，粗物質(zhì))在DCM(7mL)中的溶液中加入TFA(3.5mL)。在室溫下，攪拌得到的反應(yīng)混合物1小時(shí)。濃縮該反應(yīng)混合物，得到呈褐色油狀物的粗產(chǎn)物(500mg，粗物質(zhì))，其用于下一步而無(wú)需進(jìn)一步純化。MS(ESI)m/z 142.1[M+H]⁺。

D. 順式-4-((6-羥基-6-甲基螺[3.3]庚-2-基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈和反式-4-((6-羥基-6-甲基螺[3.3]庚-2-基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈。將6-氨基-2-甲基螺[3.3]庚-2-醇(500mg，粗物質(zhì))、4-氯-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(656mg，3.54mmol)和DIEA(913mg，7.08mmol)在異丙醇(8mL)中攪拌回流2小時(shí)。在冷卻至室溫之后，濃縮反應(yīng)混合物，并通過(guò)硅膠柱色譜(在石油醚中22％乙酸乙酯)純化殘余物，得到呈褐色固體的外消旋化合物(700mg，2.41mmol，經(jīng)3個(gè)步驟的產(chǎn)率68％)。MS(ESI)m/z 291.1[M+H]⁺。通過(guò)手性制備超臨界流體色譜(柱：Chirlpak IF 5μm，柱尺寸4.6*250mm；流動(dòng)相己烷∶乙醇＝70∶30；流速：1.0mL/min 230nm，T＝30℃)分離外消旋化合物，得到順式-4-((6-羥基-6-甲基螺[3.3]庚-2-基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(160mg，0.55mmol，100％e.e.)和反式-4-((6-羥基-6-甲基螺[3.3]庚-2-基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(160mg，0.55mmol，99.4％e.e.)。

E. 4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-甲腈。在0℃下，向氫化鈉(分散在礦物油中60％，1.84g，46mmol)在THF(30.0mL)中的懸浮液中加入2，2-二氟丙-1-醇(4.42g，46.0mmol)。在室溫下，攪拌得到的混合物1小時(shí)，然后在0℃下，分批加入4-氯嘧啶-5-甲腈(6g，43.2mmol)。在加入以后，在室溫下攪拌反應(yīng)混合物30分鐘。用飽和的氯化銨水溶液淬滅反應(yīng)，并用乙酸乙酯萃取。將合并的有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥并濃縮，得到粗產(chǎn)物，通過(guò)硅膠柱色譜(在石油醚中10％乙酸乙酯)純化，得到呈黃色固體的標(biāo)題化合物(4.40g，22.1mmol，產(chǎn)率51％)。MS(ESI)m/z 200.0[M+H]⁺。

F. (4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-基)甲胺。向4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-甲腈(1.7g，8.54mmol)在THF(30mL)中的溶液中加入拉尼鎳(500mg，粗物質(zhì))。在室溫下，在氫氣氛，攪拌得到的混合物過(guò)夜。過(guò)濾反應(yīng)物，在真空中濃縮濾液得到粗產(chǎn)物，并通過(guò)硅膠柱色譜(在DCM中5％MeOH)純化，得到呈黃色固體的標(biāo)題化合物(650mg，3.20mmol，產(chǎn)率37％)。MS(ESI)m/z 204.1[M+H]⁺。

G. 順式-4-((6-羥基-6-甲基螺[3.3]庚-2-基)氨基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶-5-甲腈。向順式-4-((6-羥基-6-甲基螺[3.3]庚-2-基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(80mg，0.276mmol)在DCM(3mL)中的溶液中加入3-氯過(guò)苯甲酸(85％，113mg，0.552mmol)。在室溫下，攪拌得到的反應(yīng)混合物1小時(shí)。加入硫代硫酸鈉水溶液，并用DCM(50mL×2)萃取。將合并的有機(jī)層用碳酸鈉水溶液和鹽水洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥并濃縮，得到呈灰色固體的標(biāo)題化合物(80mg，粗物質(zhì))。MS(ESI)m/z 323.1[M+H]⁺。

H. 反式-4-((6-羥基-6-甲基螺[3.3]庚-2-基)氨基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶-5-甲腈。向反式4-((6-羥基-6-甲基螺[3.3]庚-2-基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(80mg，0.276mmol)在DCM(3mL)中的溶液中加入3-氯過(guò)苯甲酸(85％，113mg，0.552mmol)。在室溫下，攪拌得到的反應(yīng)混合物1小時(shí)。加入硫代硫酸鈉水溶液，并用DCM(50mL×2)萃取。將合并的有機(jī)層用碳酸鈉水溶液和鹽水洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥并濃縮，得到呈灰色固體的標(biāo)題化合物(80mg，粗物質(zhì))。MS(ESI)m/z 323.1[M+H]⁺。

I. 順式-2-(((4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-基)甲基)氨基)-4-((6-羥基-6-甲基螺[3.3]庚-2-基)氨基)嘧啶-5-甲腈。向順式-4-((6-羥基-6-甲基螺[3.3]庚-2-基)氨基)-2-(甲基磺?；?嘧啶-5-甲腈(80mg，粗物質(zhì))在THF(2.0mL)中的溶液中加入(4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-基)甲胺(56mg，0.276mmol)和DIEA (71mg，0.55mmol)。在微波反應(yīng)器中，在100℃下，攪拌得到的混合物1小時(shí)。蒸發(fā)溶劑，并通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)方法純化殘余物，得到標(biāo)題化合物(33.9mg，0.076mmol，經(jīng)兩個(gè)步驟的產(chǎn)率28％)。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ(ppm)8.68(s，1H)，8.36(s，1H)，8.10(s，1H)，4.70(t，J＝12.0Hz，2H)，4.61(s，2H)，4.50-4.20(m，1H)，2.50-1.95(m，8H)，1.74(t，J＝18.8Hz，3H)，1.26(s，3H).MS(ESI)m/z 446.1[M+H]⁺。

J. 反式-2-(((4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-基)甲基)氨基)-4-((6-羥基-6-甲基螺[3.3]庚-2-基)氨基)嘧啶-5-甲腈。向反式4-((6-羥基-6-甲基螺[3.3]庚-2-基)氨基)-2-(甲基磺?；?嘧啶-5-甲腈(80mg，粗物質(zhì))在THF(2.0mL)中的溶液中加入(4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-基)甲胺(100mg，粗物質(zhì))和DIEA(71mg，0.55mmol)。在微波反應(yīng)器中，在100℃下，攪拌得到的混合物1小時(shí)。蒸發(fā)溶劑，并通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)方法純化殘余物，得到標(biāo)題化合物(36.9mg，0.083mmol，經(jīng)兩個(gè)步驟的產(chǎn)率30％)。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ(ppm)8.68(s，1H)，8.36(s，1H)，8.10(s，1H)，4.70(t，J＝12.0Hz，2H)，4.61(s，2H)，4.50-4.20(m，1H)，2.50-1.95(m，8H)，1.74(t，J＝18.8Hz，3H)，1.26(s，3H).MS(ESI)m/z 446.1[M+H]⁺。

實(shí)施例32：2-(((4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-基)甲基)氨基)-4-(((1R，3S)-3-羥基-2，2-二甲基環(huán)己基)氨基)嘧啶-5-甲腈

A. 2，2-二甲基環(huán)己烷-1，3-二酮。將環(huán)己烷-1，3-二酮(10.0g，89.3mmol)、碳酸鉀(24.6g，178.6mmol)和碘代甲烷(28.5g，201mmol)在丙酮(50mL)中的混合物回流過(guò)夜。濃縮反應(yīng)混合物，并通過(guò)硅膠柱色譜(在石油醚中5-10％乙酸乙酯)純化殘余物，得到標(biāo)題化合物(3.5g，25.0mmol，產(chǎn)率28％)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ(ppm)2.69(t，J＝6.8Hz，4H)，1.52(m，2H)1.31(s，6H)。

B. 3-羥基-2，2-二甲基環(huán)己酮。在0℃下，向2，2-二甲基環(huán)己烷-1，3-二酮(2.00g，14.3mmol)在MeOH(20mL)中的溶液中分批加入硼氫化鈉(135mg，3.58mmol)。在室溫下，攪拌得到的溶液1小時(shí)。用水淬滅反應(yīng)，并用乙酸乙酯萃取。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥并濃縮，得到標(biāo)題化合物(1.6g，粗物質(zhì))。MS(ESI)m/z143.2[M+H]⁺。

C. 3-羥基-2，2-二甲基環(huán)己酮肟。在25℃下，攪拌3-羥基-2，2-二甲基環(huán)己酮(1.6g，粗物質(zhì))、鹽酸羥胺(2.98g，42.9mmol)和碳酸鈉(4.54g，42.9mmol)在EtOH(30mL)和水(3mL)中的混合物6小時(shí)。在減壓下除去有機(jī)溶劑，并用乙酸乙酯(2×200mL)萃取殘余物。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥并濃縮，得到標(biāo)題化合物(1.8g，粗物質(zhì))。MS(ESI)m/z158.2[M+H]⁺。

D. 3-氨基-2，2-二甲基環(huán)己醇。在25℃下，在氫氣氛下，攪拌3-羥基-2，2-二甲基環(huán)己酮肟(1.8g，粗物質(zhì))和拉尼鎳(1.5g)在MeOH(50mL)和氨水(5mL)中的混合物過(guò)夜。將反應(yīng)混合物過(guò)濾通過(guò)硅藻土，并用MeOH(50mL)洗滌濾餅。濃縮濾液，得到標(biāo)題化合物(1.30g，粗物質(zhì))。MS(ESI)m/z144.2[M+H]⁺。

E. 4-((3-羥基-2，2-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈。在90℃下，攪拌3-氨基-2，2-二甲基環(huán)己醇(1.30g，粗物質(zhì))和4-氯-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(1.35g，7.27mmol)和DIEA(1.93g，15.0mmol)在異丙醇(14mL)中的混合物1小時(shí)。在除去溶劑之后，通過(guò)硅膠柱色譜(在石油醚中10％-30％乙酸乙酯)純化殘余物，得到標(biāo)題化合物(820mg，2.81mmol，產(chǎn)率38％)，通過(guò)手性柱(超手性S-AD，0.46cm I.D.×25cm L，5μl，CO2/MeOH/DEA＝80/20/0.05(v/v/v)；流速：2.5ml/min，254nm，T＝35℃)，然后通過(guò)手性柱：Chiralpak IC，0.46cm I.D.×25cm L，5μl，CO2/MeOH/DEA＝70/30/0.05(v/v/v)；流速2.5ml/min，254nm，T＝35℃)分離，得到四種異構(gòu)體(峰1：90mg，d.e.＝100％，e.e.＝100％，峰2：220mg，d.e.＝99.7％，e.e.＝100％，峰3：210mg，d.e.＝100％，e.e.＝97.3％，峰4：125mg，d.e.＝99.6％，e.e.＝100％。通過(guò)2D-NMR確定峰1和峰4為順式-異構(gòu)體，峰2和峰3為反式-異構(gòu)體)。MS(ESI)m/z293.1[M+H]⁺

F. 4-(((1R，3S)-3-羥基-2，2-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲基磺?；?嘧啶-5-甲腈。在冰-水浴中冷卻下，向4-(((1R，3S)-3-羥基-2，2-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(120mg，0.411mmol)在DCM(2.00mL)中的溶液中加入3-氯過(guò)苯甲酸(85％，168mg，0.822mmol)。在室溫下，攪拌該混合物2小時(shí)。用DCM稀釋反應(yīng)物，并用硫代硫酸鈉水溶液洗滌，然后用碳酸鉀水溶液洗滌。經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥分離的有機(jī)物，并濃縮，得到粗化合物(130mg粗物質(zhì))，其直接用于下一步而無(wú)需進(jìn)一步純化。MS(ESI)m/z325.1[M+H]⁺。

G.. 2-(((4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-基)甲基)氨基)-4-(((1R，3S)-3-羥基-2，2-二甲基環(huán)己基)氨基)嘧啶-5-甲腈。向4-(((1R，3S)-3-羥基-2，2-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(130mg，粗物質(zhì))在THF(3.0mL)中的溶液中加入(4-(2，2-二氟丙氧基)嘧啶-5-基)甲胺(84mg，0.411mmol)和DIEA(158mg，1.23mmol)。在微波反應(yīng)器中，在100℃下，攪拌得到的混合物1小時(shí)。蒸發(fā)溶劑，并通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)方法純化殘余物，得到標(biāo)題化合物(33.6mg，0.075mmol，兩個(gè)步驟的產(chǎn)率20％)。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ(ppm)8.69(s，1H)，8.40(s，1H)，8.13(s，1H)，4.72(t，J＝12.0Hz，2H)，4.57(s，2H)，4.05-3.91(m，1H)，3.45-3.42(m，1H)，1.82-1.72(m，5H)，1.70-1.50(m，2H)，1.50-1.30(m，2H)，1.03-0.91(m，6H).MS(ESI)m/z 448.2[M+H]⁺。

實(shí)施例33：4-(((1R，4S)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-((2-((S)-3-甲基-2-氧代吲哚啉-3-基)乙基)氨基)嘧啶-5-甲腈

4-(((1R，4S)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-((2-((R)-3-甲基-2-氧代吲哚啉-3-基)乙基)氨基)嘧啶-5-甲腈

A. 2-(2-(2-氧代吲哚啉-3-基)乙基)異吲哚啉-1，3-二酮。3-(2-氨乙基)吲哚啉-2-酮鹽酸鹽(3.20g，15.06mmol)、鄰苯二甲酸酐(3.34g，22.59mmol)和TEA(4.56g，45.18mmol)在甲苯/NMP(20mL/10mL)中的混合物。將該混合物加熱回流3小時(shí)。濃縮反應(yīng)混合物，并用飽和的氯化銨水溶液和鹽水洗滌得到的混合物。經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥分離的有機(jī)層，并過(guò)濾。在真空下濃縮，得到粗產(chǎn)物，通過(guò)硅膠柱色譜(在石油醚中30％乙酸乙酯)純化，得到呈褐色固體的標(biāo)題化合物(2.60g，8.50mmol，產(chǎn)率56％)。MS(ESI)m/z307.2[M+H]⁺。

B. 3-(2-(1，3-二氧代吲哚啉-2-基)乙基)-2-氧代異吲哚啉-1-羧酸叔丁酯。向2-(2-(2-氧代吲哚啉-3-基)乙基)異吲哚啉-1，3-二酮(2.60g，8.50mmol)和碳酸鈉(1.35g，12.75mmol)在無(wú)水THF(30mL)中的混合物中加入焦碳酸酯二叔丁酯(2.02g，9.35mmol)。在室溫下，攪拌得到的混合物20小時(shí)。用水處理該混合物，并用乙酸乙酯萃取。將合并的有機(jī)層經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥，并在真空下濃縮，得到粗產(chǎn)物，通過(guò)硅膠柱色譜(在石油醚中10-20％乙酸乙酯)純化，得到呈淺黃色固體的標(biāo)題化合物(2.00g，4.93mmol，產(chǎn)率58％)。MS(ESI)m/z407.1[M+H]⁺。

C. 3-(2-(1，3-二氧代異吲哚啉-2-基)乙基)-3-甲基-2-氧代吲哚啉-1-羧酸叔丁酯。在～0℃至5℃下，向3-(2-(1，3-二氧代異吲哚啉-2-基)乙基)-2-氧代吲哚啉-1-羧酸酯(1.00g，2.46mmol)和碳酸鉀(679mg，4.92mmol)在DMF(5mL)中的混合物中加入碘代甲烷(524mg，3.69mmol)。在室溫下，攪拌得到的反應(yīng)混合物16小時(shí)。用水處理得到的混合物，并用乙酸乙酯萃取。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并濃縮，得到粗產(chǎn)物，通過(guò)硅膠柱色譜(在石油醚中10-25％乙酸乙酯)純化，得到呈褐色固體的標(biāo)題化合物(700mg，1.66mmol，產(chǎn)率67％)。MS(ESI)m/z421.1[M+H]⁺。

D. 3-(2-氨乙基)-3-甲基吲哚啉-2-酮鹽酸鹽。在100℃下，攪拌叔丁基3-(2-(1，3-二氧代異吲哚啉-2-基)乙基)-3-甲基-2-氧代吲哚啉-1-羧酸叔丁酯(600mg，1.43mmol)和鹽酸(5mL)在密封管中的混合物72小時(shí)。在冷卻至室溫之后，用乙酸乙酯萃取反應(yīng)混合物。將水層濃縮至干，得到呈黃色固體的粗產(chǎn)物(350mg，粗物質(zhì))，其直接用于下一步而需進(jìn)一步純化。MS(ESI)m/z191.1[M+H]⁺

E. 4-(((1R，4S)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-((2-((S)-3-甲基-2-氧代吲哚啉-3-基)乙基)氨基)嘧啶-5-甲腈和4-(((1R，4S)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-((2-((R)-3-甲基-2-氧代吲哚啉-3-基)乙基)氨基)嘧啶-5-甲腈。在80℃下，攪拌4-(((1R，4S)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲基磺?；?嘧啶-5-甲腈(350mg，1.08mmol)、3-(2-氨乙基)-3-甲基吲哚啉-2-酮(350mg，粗物質(zhì))和DIEA(557mg，4.32mmol)在DMA(4mL)中的混合物2小時(shí)。在冷卻至室溫之后，向反應(yīng)混合物中加入飽和的氯化銨水溶液，并用乙酸乙酯萃取該混合物。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，干燥并濃縮，得到粗產(chǎn)物，通過(guò)硅膠柱色譜(在DCM中0.6％MeOH)純化，得到呈褐色固體的外消旋化合物(340mg，0.78mmol，產(chǎn)率74％)。MS(ESI)m/z435.2[M+H]⁺。通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)方法分離外消旋化合物(340mg，0.78mmol)，得到4-(((1R，4S)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-((2-((S)-3-甲基-2-氧代吲哚啉-3-基)乙基)氨基)嘧啶-5-甲腈(峰1：80.5mg，0.185mmol，產(chǎn)率24％，100％e.e.)。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ(ppm)7.85(s，1H)，7.13(d，J＝7.6Hz，1H)，7.10(t，J＝7.2Hz，1H)，6.94(t，J＝7.6Hz，1H)，6.76(d，J＝8.0Hz，1H)，4.08-3.98(m，1H)，3.27-3.20(m，2H)，2.91-2.86(m，1H)，2.20-1.26(m，8H)，1.25(s，3H)，0.84-0.82(m，6H).MS(ESI)m/z435.2[M+H]⁺和4-(((1R，4S)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-((2-((R)-3-甲基-2-氧代吲哚啉-3-基)乙基)氨基)嘧啶-5-甲腈(峰2：22.4mg，0.052mmol，產(chǎn)率6.6％，99.1％e.e.)。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ(ppm)7.85(s，1H)，7.13(d，J＝7.6Hz，1H)，7.10(t，J＝7.2Hz，1H)，6.94(t，J＝7.6Hz，1H)，6.76(d，J＝8.0Hz，1H)，4.08-3.98(m，1H)，3.27-3.20(m，2H)，2.91-2.86(m，1H)，2.20-1.26(m，8H)，1.25(s，3H)，0.84-0.82(m，6H).MS(ESI)m/z435.2[M+H]⁺。

實(shí)施例34：2-((2-(6-氟-2-氧代吲哚啉-3-基)乙基)氨基)-4-(((1S，3S)-3-羥基-2，2-二甲基環(huán)己基)氨基)嘧啶-5-甲腈

2-((2-(6-氟-2-氧代吲哚啉-3-基)乙基)氨基)-4-(((1R，3R)-3-羥基-2，2-二甲基環(huán)己基)氨基)嘧啶-5-甲腈

2-((2-(6-氟-2-氧代吲哚啉-3-基)乙基)氨基)-4-(((1S，3R)-3-羥基-2，2-二甲基環(huán)己基)氨基)嘧啶-5-甲腈

2-((2-(6-氟-2-氧代吲哚啉-3-基)乙基)氨基)-4-(((1R，3S)-3-羥基-2，2-二甲基環(huán)己基)氨基)嘧啶-5-甲腈

A. 2，2-二甲基環(huán)己烷-1，3-二酮。將環(huán)己烷-1，3-二酮(10.0g，89.3mmol)、碳酸鉀(24.6g，178.6mmol)和碘代甲烷(28.5g，201mmol)在丙酮(50mL)中的混合物回流過(guò)夜。在完整之后，在減壓下除去溶劑，并通過(guò)硅膠柱色譜(在石油醚中5-10％乙酸乙酯)純化殘余物，得到標(biāo)題化合物(3.5g，25.0 mmol，產(chǎn)率28％)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ(ppm)2.69(t，J＝6.8Hz，4H)，1.52(m，2H)1.31(s，6H)。

B. 3-羥基-2，2-二甲基環(huán)己酮。在0℃下，向2，2-二甲基環(huán)己烷-1，3-二酮(2.00g，14.3mmol)在MeOH(20mL)中的溶液中分批加入硼氫化鈉(135mg，3.58mmol)。在室溫下，攪拌得到的溶液1小時(shí)。用水淬滅反應(yīng)，并用乙酸乙酯萃取該混合物。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥并濃縮，得到標(biāo)題化合物(1.6g，粗物質(zhì))。MS(ESI)m/z143.2[M+H]⁺.

C. 3-羥基-2，2-二甲基環(huán)己酮肟。在25℃下，攪拌3-羥基-2，2-二甲基環(huán)己酮(1.6g，粗物質(zhì))、鹽酸羥胺(2.98g，42.9mmol)和碳酸鈉(4.54g，42.9mmol)在EtOH(30mL)和水(3mL)中的混合物6小時(shí)。在除去EtOH之后，用乙酸乙酯(2×200mL)萃取殘余物。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥并濃縮，得到標(biāo)題化合物(1.8g，粗物質(zhì))。MS(ESI)m/z158.2[M+H]⁺。

D. 3-氨基-2，2-二甲基環(huán)己醇。在25℃下，在氫氣氛下，攪拌3-羥基-2，2-二甲基環(huán)己酮肟(1.8g，粗物質(zhì))和拉尼鎳(1.5g)在MeOH(50mL)和氨水(5mL)中的混合物過(guò)夜。將反應(yīng)混合物過(guò)濾通過(guò)硅藻土，并用MeOH(50mL)洗滌濾餅。濃縮濾液，得到標(biāo)題化合物(1.30g，粗物質(zhì))。MS(ESI)m/z144.2[M+H]⁺。

E. 4-(((1S，3S)-3-羥基-2，2-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈，4-(((1R，3R)-3-羥基-2，2-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈，4-(((1S，3R)-3-羥基-2，2-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈和4-(((1R，3S)-3-羥基-2，2-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈。在90℃下，攪拌3-氨基-2，2-二甲基環(huán)己醇(1.30g，粗物質(zhì))和4-氯-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(1.35g，7.27mmol)和DIEA(1.93g，15.0mmol)在異丙醇(14mL)中的混合物1小時(shí)。在除去溶劑之后，通過(guò)硅膠柱色譜(在石油醚中10％-30％乙酸乙酯)純化殘余物，得到標(biāo)題化合物(820mg，2.81mmol，產(chǎn)率38％)，通過(guò)手性柱(超手性S-AD，0.46cm I.D.×25cm L，5μl，CO2/MeOH/DEA＝80/20/0.05(v/v/v)；流速：2.5ml/min，254nm，T＝35℃)，然后通過(guò)手性柱：(Chiralpak IC，0.46cm I.D.×25cm L，5μl，CO2/MeOH/DEA＝70/30/0.05(v/v/v)；流速：2.5ml/min，254nm，T＝35℃)分離，得到四種異構(gòu)體(峰1：90mg，d.e.＝100％，e.e.＝100％，峰2：220mg，d.e.＝99.7％，e.e.＝100％，峰3：210mg，d.e.＝100％，e.e.＝97.3％，峰4：125mg，d.e.＝99.6％，e.e.＝100％。通過(guò)2D-NMR確定峰1和峰4是順式-異構(gòu)體，峰2和峰3是反式-異構(gòu)體)。MS(ESI)m/z 293.1[M+H]⁺。

F. 4-(((1S，3S)-3-羥基-2，2-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲基磺?；?嘧啶-5-甲腈。在冰-水浴中冷卻下，向4-(((1S，3S)-3-羥基-2，2-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-( 甲硫基)嘧啶-5-甲腈(峰1：85mg，0.291mmol)在DCM(2.00mL)中的溶液中加入3-氯過(guò)苯甲酸(85％，119mg，0.582mmol)。在室溫下，攪拌該混合物2小時(shí)。用DCM稀釋反應(yīng)物，并用硫代硫酸鈉水溶液洗滌，然后用碳酸鉀水溶液洗滌。經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥分離的有機(jī)物，并濃縮，得到粗化合物(90mg粗物質(zhì))。MS(ESI)m/z325.1[M+H]⁺。

4-(((1R，3R)-3-羥基-2，2-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲基磺?；?嘧啶-5-甲腈。在冰-水浴中冷卻下，向4-(((4 1R，3R)-3-羥基-2，2-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(峰4：85mg，0.291mmol)在DCM(2.00mL)中的溶液中加入3-氯過(guò)苯甲酸(85％，119mg，0.582mmol)。在室溫下，攪拌該混合物2小時(shí)。用DCM稀釋反應(yīng)物，并用硫代硫酸鈉水溶液洗滌，然后用碳酸鉀水溶液洗滌。經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥分離的有機(jī)物，并濃縮，得到粗標(biāo)題化合物(92mg，粗物質(zhì))。MS(ESI)m/z325.1[M+H]⁺。

4-(((1S，3R)-3-羥基-2，2-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲基磺?；?嘧啶-5-甲腈。在冰-水浴中冷卻下，向4-(((1S，3R)-3-羥基-2，2-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(峰2：100mg，0.342mmol)在無(wú)水DCM(2.00mL)中的溶液中加入3-氯過(guò)苯甲酸(85％，139mg，0.684mmol)。在室溫下，攪拌該混合物2小時(shí)。用DCM稀釋反應(yīng)物，并用硫代硫酸鈉水溶液洗滌，然后用碳酸鉀水溶液洗滌。經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥分離的有機(jī)層，并濃縮，得到粗標(biāo)題化合物(110mg，粗物質(zhì))。MS(ESI)m/z325.1[M+H]⁺。

4-(((1R，3S)-3-羥基-2，2-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲基磺?；?嘧啶-5-甲腈。在冰-水浴中冷卻下，向4-(((1R，3S)-3-羥基-2，2-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(峰3：100mg，0.342mmol)在DCM(2.00mL)的溶液中加入3-氯過(guò)苯甲酸(85％，139mg，0.684mmol)。在室溫下，攪拌該混合物2小時(shí)。用DCM稀釋反應(yīng)物，并用硫代硫酸鈉水溶液洗滌，然后用碳酸鉀水溶液洗滌。經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥分離的有機(jī)層，并濃縮，得到粗標(biāo)題化合物(110mg，粗物質(zhì))。MS(ESI)m/z325.1[M+H]⁺。

G. 3-(2-氨乙基)-6-氟吲哚啉-2-酮鹽酸鹽。向2-(6-氟-1H-吲哚--3-基)乙胺鹽酸鹽(500mg，2.3mmol)在DMSO(0.8mL)中的溶液中加入鹽酸(36％，1.3g，12.8mmol)。在密封管中，在50℃下，攪拌得到的反應(yīng)混合物6小時(shí)。在冷卻至室溫之后，過(guò)濾反應(yīng)混合物。在EtOH(5mL)中攪拌得到的濾餅。將該混合物過(guò)濾并干燥，得到呈黃色固體的期望產(chǎn)物(250mg，1.28mmol，產(chǎn)率47％)。MS(ESI)m/z195.1[M+H]⁺。

H. 2-((2-(6-氟-2-氧代吲哚啉-3-基)乙基)氨基)-4-(((1S，3S)-3-羥基-2，2-二甲基環(huán)己基)氨基)嘧啶-5-甲腈。在90℃下，攪拌4-(((1S，3S)-3-羥基-2，2-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(90mg，粗物質(zhì))、3-(2-氨乙基)-6- 氟吲哚啉-2-酮鹽酸鹽(95mg，0.41mmol)和DIEA(122mg，0.94mmol)在DMA(2mL)中的混合物1小時(shí)。蒸發(fā)溶劑，并通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)方法純化殘余物，得到標(biāo)題化合物(23.7mg，0.054mmol，兩個(gè)步驟的產(chǎn)率19％)。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ(ppm)8.05(s，1H)，7.34-7.29(m，1H)，6.79-6.69(m，1H)，6.69-6.61(m，1H)，4.67-4.59(m，1H)，3.60-3.44(m，4H)，2.29-2.08(m，2H)，1.93-1.67(m，3H)，1.67-1.49(m，3H)，1.02-0.97(m，6H).MS(ESI)m/z 439.2[M+H]⁺。

2-((2-(6-氟-2-氧代吲哚啉-3-基)乙基)氨基)-4-(((1R，3R)-3-羥基-2，2-二甲基環(huán)己基)氨基)嘧啶-5-甲腈。在90℃下，攪拌4-(((1R，3R)-3-羥基-2，2-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(92mg，粗物質(zhì))、3-(2-氨乙基)-6-氟吲哚啉-2-酮鹽酸鹽(95mg，0.41mmol)和DIEA(122mg，0.94mmol)在DMA(2mL)中的混合物1小時(shí)。蒸發(fā)溶劑，并通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)方法純化殘余物，得到標(biāo)題化合物(36.7mg，0.083mmol，兩個(gè)步驟的產(chǎn)率29％)。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ(ppm)8.05(s，1H)，7.34-7.29(m，1H)，6.79-6.69(m，1H)，6.69-6.61(m，1H)，4.67-4.59(m，1H)，3.60-3.44(m，4H)，2.29-2.08(m，2H)，1.93-1.67(m，3H)，1.67-1.49(m，3H)，1.02-0.97(m，6H).MS(ESI)m/z 439.2[M+H]⁺。

2-((2-(6-氟-2-氧代吲哚啉-3-基)乙基)氨基)-4-(((1S，3R)-3-羥基-2，2-二甲基環(huán)己基)氨基)嘧啶-5-甲腈。在90℃下，攪拌4-(((1S，3R)-3-羥基-2，2-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(110mg，粗物質(zhì))、3-(2-氨乙基)吲哚啉-2-酮鹽酸鹽(95mg，0.41mmol)和DIEA(122mg，0.94mmol)在N，N-二甲基乙酰胺(2mL)中的混合物1小時(shí)。蒸發(fā)溶劑，并通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)方法純化殘余物，得到標(biāo)題化合物(27.3mg，0.062mmol，兩個(gè)步驟的產(chǎn)率18％)。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ(ppm)8.05(s，1H)，7.31-7.28(m，1H)，6.77-6.73(m，1H)，6.68(d，J＝8.0Hz，1H)，4.11-4.08(m，1H)，3.56-3.46(m，4H)，2.23-2.10(m，2H)，1.84-1.31(m，6H)，1.02(s，3H)，1.00(s，3H).MS(ESI)m/z 439.2[M+H]⁺。

2-((2-(6-氟-2-氧代吲哚啉-3-基)乙基)氨基)-4-(((1R，3S)-3-羥基-2，2-二甲基環(huán)己基)氨基)嘧啶-5-甲腈。在90℃下，攪拌4-(((1R，3S)-3-羥基-2，2-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(110mg，粗物質(zhì))、3-(2-氨乙基)吲哚啉-2-酮鹽酸鹽(95mg，0.41mmol)和DIEA(122mg，0.94mmol)在N，N-二甲基乙酰胺(2mL)混合物1小時(shí)。蒸發(fā)溶劑，并通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)方法純化殘余物，得到標(biāo)題化合物(27.3mg，0.062mmol，兩個(gè)步驟的產(chǎn)率18％)。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ(ppm)8.05(s，1H)，7.31-7.28(m，1H)，6.77-6.73(m，1H)，6.68(d，J＝8.0Hz，1H)，4.11-4.08(m，1H)，3.56-3.46(m，4H)，2.23-2.10(m，2H)，1.84-1.31(m，6H)，1.02(s，3H)，1.00(s，3H).MS(ESI)m/z 439.2[M+H]⁺。

實(shí)施例35：4-(((1R，3S)-2，2-二甲基-3-(1H-1，2，4-triazol-3-基)環(huán)丁基)氨基)-2-((2-(2 -氧代吲哚啉-3-基)乙基)氨基)嘧啶-5-甲腈

A. ((1R，3S)-3-(羥甲基)-2，2-二甲基環(huán)丁基)氨基甲酸芐酯。在0℃下，向((1S，3R)-3-氨基-2，2-二甲基環(huán)丁基)MeOH鹽酸鹽(1.8g，10.9mmol)和碳酸鈉(2.31g，21.8mmol)在乙酸乙酯(54mL)和水(18mL)中的混合物中慢慢地加入氯甲酸芐酯(2.23g，13.1mmol)。在室溫下，攪拌得到的混合物2小時(shí)。分離有機(jī)層，并用乙酸乙酯萃取水溶液。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并濃縮，得到粗產(chǎn)物，通過(guò)硅膠柱色譜(在石油醚中10％-20％乙酸乙酯)純化，得到呈白色固體的標(biāo)題化合物(2.75g，10.4mmol，產(chǎn)率95％)。MS(ESI)m/z 264.2[M+H]⁺。

B. (1S，3R)-3-(((芐氧基)羰基)氨基)-2，2-二甲基環(huán)丁烷羧酸。在室溫下，向((1R，3S)-3-(羥甲基)-2，2-二甲基環(huán)丁基)氨基甲酸芐酯(2.75g，10.4mmol)在四氯化碳(14mL)中的溶液中加入高碘酸鈉(6.68g，31.2mmol)、水(21mL)和乙腈(14mL)，接著加入氯化釕(III)水合物(52mg，0.2mmol，在0.5mL的水中)。在室溫下，強(qiáng)力攪拌得到的雙相混合物1小時(shí)。用水稀釋反應(yīng)混合物，并用DCM(2×150mL)萃取。經(jīng)硫酸鈉干燥合并的有機(jī)層并濃縮，得到標(biāo)題化合物(2.6g，粗物質(zhì))，其直接用于下一步而無(wú)需進(jìn)一步純化。MS(ESI)m/z 278.1[M+H]⁺。

C. ((1R，3S)-3-氨基甲?；?2，2-二甲基環(huán)丁基)氨基甲酸芐酯。在室溫下，攪拌(1S，3R)-3-(((芐氧基)羰基)氨基)-2，2-二甲基環(huán)丁烷羧酸(2.6g，9.38mmol)、氯化銨(2.0g，37.5mmol)、TEA(2.84g，28.2mmol)和2-(7-氮雜-1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸酯(5.35g，14.1mmol)在無(wú)水DMF(52mL)中的混合物1小時(shí)。用水淬滅反應(yīng)，并用乙酸乙酯萃取。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥并濃縮，得到粗產(chǎn)物，通過(guò)HPLC(在水中10-50％乙腈)純化，得到標(biāo)題化合物(1.86g，6.71mnmol，兩個(gè)步驟的產(chǎn)率66％)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ(ppm)7.40-7.30(m，5H)，5.51-5.37(m，1H)，5.27-5.17(m，1H)，5.15-4.96(m，3H)，3.96-3.87(m，1H)，2.48-2.39(m，1H)，2.37-2.27(m，1H)，2.15-2.05(m，1H)，1.31(s，3H)，0.96(s，3H).MS(ESI)m/z277.1[M+H]⁺。

D. ((1R，3S)-3-((E)-((二甲基氨基)亞甲基)氨基甲?；?-2，2-二甲基環(huán)丁基)氨基甲酸芐酯。在120℃下，攪拌((1R，3S)-3-氨基甲酰基--2，2-二甲基環(huán)丁基)氨基甲酸酯(638mg，2.30mmol)在N，N-二甲基甲酰胺二甲基乙縮醛(13mL)中的混合物過(guò)夜。在真空中，在50℃下濃縮反應(yīng)混合物，得到呈黃色油狀物的粗產(chǎn)物(850mg)，其直接用于下一步而無(wú)需進(jìn)一步純化。MS(ESI)m/z332.2[M+H]⁺。

E. ((1R，3S)-2，2-二甲基-3-(1H-1，2，4-三唑-3-基)環(huán)丁基)-氨基甲酸芐酯。在80下，攪拌((1R，3S)-3-((E)-((二甲基氨基)亞甲基)氨基甲?；?-2，2-二甲基環(huán)丁基)氨基甲酸酯(850mg，粗物質(zhì))、肼(0.5mL)和乙酸(0.5mL)在EtOH(10mL)中的混合物2小時(shí)。除去有機(jī)溶劑，并通過(guò)硅膠色譜(在DCM中10％MeOH)純化殘余油狀物，得到標(biāo)題化合物(380mg，1.26mmol，兩個(gè)步驟的產(chǎn)率55％)。MS(ESI)m/z 301.4[M+H]⁺。

F. ((1R，3S)-2，2-二甲基-3-(1-(四氫-2H-吡喃-2-基)-1H-1，2，4-三唑-3-基)環(huán)丁基)氨基甲酸芐酯。向((1R，3S)-2，2-二甲基-3-(1H-1，2，4-三唑-3-基)環(huán)丁基)氨基甲酸芐酯(380mg，1.26mmol)和3，4-二氫-2H-吡喃(127mg，1.51mmol)在無(wú)水DCM(10mL)中的混合物中加入4-甲基苯磺酸吡啶鎓(476mg，1.89mmol)。將該混合物回流過(guò)夜。在除去溶劑之后，通過(guò)硅膠柱色譜(在石油醚中12％乙酸乙酯)純化殘余物，得到標(biāo)題化合物(438mg，1.14mmol，產(chǎn)率90％)。MS(ESI)m/z 385.4[M+H]⁺。

G. (1R，3S)-2，2-二甲基-3-(1-(四氫-2H-吡喃-2-基)-1H-1，2，4-三唑-3-基)環(huán)丁胺(cyclobutanamine)。在25℃下，在氫氣氛下，攪拌((1R，3S)-2，2-二甲基-3-(1-(四氫-2H-吡喃-2-基)-1H-1，2，4-三唑-3-基)環(huán)丁基)氨基甲酸酯(438mg，1.14mmol)和活性碳上的鈀(10％Pd，50mg)在MeOH(15mL)中的混合物5小時(shí)。將反應(yīng)混合物過(guò)濾通過(guò)硅藻土，并濃縮濾液，得到粗標(biāo)題化合物(340mg，粗物質(zhì))。MS(ESI)m/z 251.2[M+H]⁺。

H. 4-(((1R，3S)-2，2-二甲基-3-(1-(四氫-2H-吡喃-2-基)-1H-1，2，4-三唑-3-基)環(huán)丁基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈。在90℃下，攪拌(1R，3S)-2，2-二甲基-3-(1-(四氫-2H-吡喃-2-基)-1H-1，2，4-三唑-3-基)環(huán)丁胺(340mg，粗物質(zhì))和4-氯-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(210mg，1.14mmol)和DIEA(450mg，3.50mmol)在異丙醇(5mL)中的混合物1小時(shí)。在除去溶劑之后，通過(guò)硅膠柱色譜(在石油醚中10％-30％乙酸乙酯)純化殘余物，得到標(biāo)題化合物(290mg，0.727mmol，兩個(gè)步驟的產(chǎn)率65％)。MS(ESI)m/z 400.2[M+H]⁺。

I. 4-(((1R，3S)-2，2-二甲基-3-(1-(四氫-2H-吡喃-2-基)-1H-1，2，4-三唑-3yl)環(huán)丁基)氨基)-2-(甲基磺?；?嘧啶-5-甲腈。在冰-水浴冷卻下，向4-(((1R，3S)-2，2-二甲基-3-(1-(四氫-2H-吡喃-2-基)-1H-1，2，4-三唑-3-基)環(huán)丁基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(150mg，0.376mmol)在NMP(2.0mL)中的溶液中加入3-氯過(guò)苯甲酸(85％，154mg，0.752mmol)。在室溫下，攪拌該混合物2小時(shí)。將反應(yīng)物用DCM稀釋?zhuān)⒂昧虼蛩徕c水溶液洗滌，然后用碳酸鉀水溶液洗滌。經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥分離的有機(jī)層并濃縮，得到粗標(biāo)題化合物(140mg，粗物質(zhì))。MS(ESI)m/z432.2[M+H]⁺。

J. 3-(2-氨基乙基)吲哚啉-2-酮鹽酸鹽。向2-(1H-吲哚--3-基)乙胺(6.00g，37.50mmol)在DMSO(8.0mL，112.50mmol)中的溶液中慢慢地加入濃鹽酸(9.5mL，112.50mmol)。在密封管中，在50℃下，攪拌得到的反應(yīng)混合物16小時(shí)。在冷卻至室溫之后，過(guò)濾反應(yīng)混合物。在EtOH(15mL)中攪拌得到的濾餅。將混合物過(guò)濾并干燥，得到呈褐色固體的期望的標(biāo)題化合物(5.00g，23.64mmol，產(chǎn)率63％)。MS(ESI)m/z 177.2[M+H]⁺。

K. 4-(((1R，3S)-2，2-二甲基-3-(1H-1，2，4-三唑-3-基)環(huán)丁基)氨基)-2-((2-(2-氧代吲哚啉-3-基)乙基)氨基)嘧啶-5-甲腈。在100℃下，攪拌4-(((1R，3S)-2，2-二甲基-3-(1-(四氫-2H-吡喃-2-基)-1H-1，2，4-三唑-3-基)環(huán)丁基)氨基)-2-(甲基磺?；?嘧啶-5-甲腈(140mg，粗物質(zhì))、3-(2-氨乙基)吲哚啉-2-酮鹽酸鹽(80mg，0.376mmol)和DIEA(194mg，1.50mmol)在NMP(2.0mL)中的混合物1小時(shí)。用水稀釋反應(yīng)物，并用乙酸乙酯萃取。將合并的有機(jī)層經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥并濃縮，得到粗產(chǎn)物，將其溶于鹽酸鹽在MeOH(2N，5mL)中的溶液中，并在室溫下攪拌5小時(shí)。用氨水中和該反應(yīng)，并濃縮。通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)方法純化殘余物，得到標(biāo)題化合物(33.4mg，0.075mmol，兩個(gè)步驟的產(chǎn)率20％)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ(ppm)13.49(brs，1H)，10.24(s，1H)，8.52-7.41(m，3H)，7.29(t，J＝7.6Hz，1H)，7.25-7.07(m，2H)，7.01-6.93(m，1H)，6.87-6.82(m，1H)，4.41-4.29(m，1H)，3.59-3.43(m，2H)，3.42-3.25(m，1H)，3.10-2.96(m，1H)，2.81-2.66(m，1H)，2.49-2.34(m，1H)，2.16-1.94(m，2H)，1.49-1.00(m，3H)，0.63-0.62(m，3H).MS(ESI)m/z 444.2[M+H]⁺。

實(shí)施例36：(1S，3R)-3-(5-氰基-2-(2-(1-甲基-2-氧代吲哚啉-3-基)乙氨基)嘧啶-4-基氨基)-2，2-二甲基環(huán)丁烷甲酰胺

A. (2-(1H-吲哚--3-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯。向2-(1H-吲哚-3-基)乙胺(3.00g，18.75mmol)在THF(30mL)中的溶液中加入焦碳酸二叔丁酯(4.36g，20mmol)。在室溫下，攪拌得到的反應(yīng)混合物16小時(shí)。濃縮該混合物，得到粗產(chǎn)物，通過(guò)硅膠柱色譜(在石油醚中20％乙酸乙酯)純化，得到呈黃色固體的標(biāo)題化合物(4.70g，18.01mmol，產(chǎn)率95％)。MS(ESI)m/z261.1[M+H]⁺。

B. (2-(1-甲基-1H-吲哚--3-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯。在0℃下，在氮?dú)庀?，?2-(1H-吲哚-3-基)乙基)氨基甲酸酯(4.70g，18.01mmol)在無(wú)水THF(50mL)中的溶液中加入氫化鈉(800mg，20mmol，在礦物油中60％)。在室溫下，攪拌得到的反應(yīng)混合物15分鐘之后，在0℃下，慢慢地加入在THF(15mL)中的碘代甲烷(2.84g，20mmol)。在室溫下，攪拌得到的混合物3小時(shí)，并用飽和的氯化銨水溶液淬滅。用乙酸乙酯萃取水層。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥并過(guò)濾。在真空下濃縮，得到粗產(chǎn)物，通過(guò)硅膠柱色譜(在DCM中0.6％MeOH)純化，得到呈褐色固體的標(biāo)題化合物(4g，14.6mmol，產(chǎn)率80％)。MS(ESI)m/z275.1[M+H]⁺。

C. 2-(1-甲基-1H-吲哚--3-基)乙胺。在～0℃至5℃下，向(2-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(4g，14.6mmol)在DCM(30mL)中的溶液中加入TFA(15mL)。在室溫下，攪拌得到的反應(yīng)混合物1小時(shí)。濃縮該反應(yīng)混合物，得到呈黃色油狀物的粗標(biāo)題化合物(2.5g，粗物質(zhì))。MS(ESI)m/z175.1[M+H]⁺。

D. 3-(2-氨乙基)-1-甲基吲哚啉-2-酮鹽酸鹽。向2-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)乙胺(2.5g，粗物質(zhì))在DMSO(1.33g，17.0mmol)的溶液中慢慢地加入濃鹽酸(1.2mL)。在密封反應(yīng)器中，在室溫下下，攪拌得到的反應(yīng)混合物16小時(shí)。濃縮反應(yīng)混合物，并通過(guò)制備HPLC純化殘余物，得到呈黃色固體的標(biāo)題化合物(1.5g，6.59mmol，經(jīng)兩個(gè)步驟的產(chǎn)率45％)。MS(ESI)m/z 191.1[M+H]⁺。

E. ((1R，3S)-3-(羥甲基)-2，2-二甲基環(huán)丁基)氨基甲酸芐酯。在0℃下，向((1S，3R)-3-氨基-2，2-二甲基環(huán)丁基)MeOH鹽酸鹽(1.8g，10.9mmol)和碳酸鈉(2.31g，21.8mmol)在乙酸乙酯(54mL)和水(18mL)中的混合物中慢慢地加入氯甲酸芐酯(2.23g，13.1mmol)。在室溫下，攪拌得到的混合物2小時(shí)。分離有機(jī)層，并用乙酸乙酯萃取水溶液。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并濃縮，得到粗產(chǎn)物，通過(guò)硅膠柱色譜(在石油醚中10％-20％乙酸乙酯)純化，得到呈白色固體的標(biāo)題化合物(2.75g，10.4mmol，產(chǎn)率95％)。MS(ESI)m/z 264.2[M+H]⁺。

F. (1S，3R)-3-(((芐氧基)羰基)氨基)-2，2-二甲基環(huán)丁烷羧酸。在室溫下，向((1R，3S)-3-(羥甲基)-2，2-二甲基環(huán)丁基)氨基甲酸芐酯(2.75g，10.4mmol)在四氯化碳(14mL)中的溶液中加入高碘酸鈉(6.68g，31.2mmol)、水(21 mL)和乙腈(14mL)，接著加入氯化釕(III)水合物(52mg，0.2mmol，在0.5mL的水中)。在室溫下，強(qiáng)力攪拌得到的雙相混合物1小時(shí)。用水稀釋反應(yīng)混合物，并用DCM(2×150mL)萃取。經(jīng)硫酸鈉干燥合并的有機(jī)層并濃縮，得到標(biāo)題化合物(2.6g，粗物質(zhì))，其直接用于下一步而無(wú)需進(jìn)一步純化。MS(ESI)m/z 278.1[M+H]⁺。

G. ((1R，3S)-3-氨基甲?；?2，2-二甲基環(huán)丁基)氨基甲酸芐酯。在室溫下，攪拌(1S，3R)-3-(((芐氧基)羰基)氨基)-2，2-二甲基環(huán)丁烷羧酸(2.6g，9.38mmol)、氯化銨(2.0g，37.5mmol)、TEA(2.84g，28.2mmol)和2-(7-氮雜-1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸酯(5.35g，14.1mmol)在無(wú)水DMF(52mL)中的混合物1小時(shí)。用水淬滅反應(yīng)，并用乙酸乙酯萃取。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥并濃縮，得到粗產(chǎn)物，通過(guò)HPLC(在水中10-50％乙腈)純化，得到標(biāo)題化合物(1.86g，6.71mnmol，兩個(gè)步驟的產(chǎn)率66％)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ(ppm)7.40-7.30(m，5H)，5.51-5.37(m，1H)，5.27-5.17(m，1H)，5.15-4.96(m，3H)，3.96-3.87(m，1H)，2.48-2.39(m，1H)，2.37-2.27(m，1H)，2.15-2.05(m，1H)，1.31(s，3H)，0.96(s，3H).MS(ESI)m/z277.1[M+H]⁺。

H. (1S，3R)-3-氨基-2，2-二甲基環(huán)丁烷甲酰胺。在25℃下，在氫氣氛下，攪拌((1R，3S)-3-氨基甲?；?2，2-二甲基環(huán)丁基)氨基甲酸芐酯(193mg，0.70mmol)和活性碳上的鈀(10％Pd，30mg)在MeOH(5mL)中的混合物5小時(shí)。將反應(yīng)混合物過(guò)濾通過(guò)硅藻土，并濃縮濾液，得到粗標(biāo)題化合物(120mg，粗物質(zhì))。MS(ESI)m/z 143.1[M+H]⁺。

I. (1S，3R)-3-((5-氰基-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)氨基)-2，2-二甲基環(huán)丁烷甲酰胺。在80℃下，攪拌(1S，3R)-3-氨基-2，2-二甲基環(huán)丁烷甲酰胺(120mg，粗物質(zhì))、氯-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(130mg，0.70mmol)和DIEA(129mg，1.0mmol)在異丙醇(5mL)中的混合物2小時(shí)。在除去溶劑之后，通過(guò)硅膠柱色譜(在石油醚中10％-30％乙酸乙酯)純化殘余物，得到標(biāo)題化合物(160mg，0.55mmol，兩個(gè)步驟的產(chǎn)率78％)。MS(ESI)m/z 292.2[M+H]⁺。

J. (1S，3R)-3-((5-氰基-2-(甲基磺酰基)嘧啶-4-基)氨基)-2，2-二甲基環(huán)丁烷甲酰胺。在冰-水浴中，在冷卻下，向(1S，3R)-3-((5-氰基-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)氨基)-2，2-二甲基環(huán)丁烷甲酰胺(150mg，0.51mmol)在NMP(1.5mL)中的溶液中加入3-氯過(guò)苯甲酸(85％，230mg，1.12mmol)。在室溫下，攪拌該混合物2小時(shí)。將反應(yīng)混合物直接地用于下一步而無(wú)需進(jìn)一步純化。MS(ESI)m/z324.2[M+H]⁺。

K. (1S，3R)-3-(5-氰基-2-(2-(1-甲基-2-氧代吲哚啉-3-基)乙基氨基)嘧啶-4-基氨基)-2，2-二甲基環(huán)丁烷甲酰胺。在0℃下，將3-(2-氨基乙基)-1-甲基吲哚啉-2-酮(231mg，1.02mmol)和DIEA(197mg，1.53mmol)加入到(1S，3R)-3-(5-氰基-2-(甲基磺?；?嘧啶-4-基氨基)-2，2-二甲基環(huán)丁烷甲酰胺(如上所述制備的)的反應(yīng)混合物中，并在90℃下，攪拌1小時(shí)。用水稀釋反應(yīng)，并用乙酸乙酯萃取。將合并的有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥并濃縮，得到粗產(chǎn)物，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)方法純化，得標(biāo)題題化合物(17.7mg，0.041mmol，兩個(gè)步驟的產(chǎn)率8％)。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ(ppm)8.12-8.01(m，1H)，7.42-7.33(m，2H)，7.17-6.93(m，2H)，4.36-4.09(m，1H)，3.62-3.60(m，2H)，3.23-3.13(m，4H)，2.60-2.25(m，5H)，1.39-0.88(m，6H).MS(ESI)m/z 433.8[M+H]⁺。

實(shí)施例37：4-(((1R，4S)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-((2-(5-甲氧基吡啶-3-基)乙基)氨基)嘧啶-5-甲腈

A. (2-(5-甲氧基吡啶-3-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯。向裝有墊片蓋和攪拌棒的20mL小瓶中裝入碳酸銫(977mg，3.00mmol)、3-溴-5-甲氧基吡啶(188mg，1.00mmol)、[2-(叔丁氧基羰基氨基)乙基]三氟硼酸鉀(301mg，1.20mmol)、二-(1-金剛烷基)-正-丁基膦(35.8mg，0.100mmol)和乙酸鈀(II)(11.2mg，0.050mmol)。加入甲苯(3mL)和水(2mL)，用氮?dú)獯祾咝∑坎⒚芊?。?0℃下，強(qiáng)力攪拌該混合物24小時(shí)，冷卻至室溫，并除去水層。用硫酸鈉干燥有機(jī)層，并通過(guò)硅膠色譜(在DCM中0-10％MeOH)純化粗產(chǎn)物溶液，得到呈無(wú)色糖漿狀的(2-(5-甲氧基吡啶-3-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(153mg，0.606mmol，61％)。¹H NMR(CDCl₃，500MHz)：δ(ppm)8.21(d，J＝6.14Hz，1H)，8.09(d，J＝1.58Hz，1H)，6.98-7.16(m，1H)，4.53-4.90(m，1H)，3.87(s，3H)，3.33-3.47(m，2H)，2.82(t，J＝6.78Hz，2H)，1.46ppm(s，9H)。

B. 2-(5-甲氧基吡啶-3-基)乙-1-胺二鹽酸鹽。向(2-(5-甲氧基吡啶-3-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(153mg，0.606mmol)在異丙醇(2mL)中的溶液中加入在二噁烷中的4M HCl(2mL)，并在室溫下攪拌混合物16小時(shí)。濃縮該混合物，用乙醚洗滌殘余固體，并在真空中干燥，得到呈白色固體的標(biāo)題化合物(103mg，0.458mmol，75％)。¹H NMR(500MHz，CD₃OD)：δ(ppm)8.56(d，J＝2.52Hz，1H)，8.51(s，1H)，8.27(s，1H)，4.15(s，3H)，3.23-3.38ppm(m，4H)。

C. 4-(((1R，4S)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-((2-(5-甲氧基吡啶-3-基)乙基)氨基)嘧啶-5-甲腈。向裝有墊片蓋的1打小瓶中裝入4-(((1R，4S)-4-羥基-3，3-二甲基環(huán)己基)氨基)-2-(甲基亞磺酰基)嘧啶-5-甲腈(55.0mg，0.178mmol)、2-(5-甲氧基吡啶-3-基)乙-1-胺二鹽酸鹽(56.3mg，0.214mmol)和DMSO(1.4mL)。用DIEA(0.125mL，0.715mmol)處理得到的溶液，密封小瓶并在60℃下振搖(250rpm)14小時(shí)。將該混合物冷卻至室溫，用DMSO(1.5mL)稀釋?zhuān)⑦^(guò)濾。通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)方法純化溶液，得到標(biāo)題化合物。MS(ESI)m/z379.2[M+1]⁺。

分析

生物化學(xué)分析

PKC-θ分析。使用384-孔時(shí)間分辨的熒光分析監(jiān)測(cè)PKC-θ活性。在下述分析緩沖液中進(jìn)行PKC-θ分析：50mM HEPES pH 7.6，10mM MgCl₂，1mM DT T，0.01％Triton X-100，0.01％BSA和0.1mM EDTA。為了引發(fā)反應(yīng)，對(duì)于每個(gè)孔中25μL的總分析體積，將200nM的Fam-標(biāo)記的S6-來(lái)源的肽(Molecular Devices)和10μM的ATP與142pM的His-PKC-θ(Invitrogen)混合。在室溫下，培養(yǎng)所述分析物2小時(shí)，并使用60μL/孔的檢測(cè)結(jié)合溶液的混合物終止：70％IMAP Progressive Binding Buffer A、30％IMAP Progressive Binding Buffer B、1∶600 Progressive Binding Reagent和1∶400 TR-FRET Tb Donor(Molecular Devices)。然后，在室溫下培養(yǎng)分析板過(guò)夜，并在Perkin-Elmer Envision Reader上讀取。IC50值計(jì)算為熒光信號(hào)水平降低為信號(hào)窗的50％的化合物濃度。

PKCδ分析。使用384-孔時(shí)間分辨熒光分析監(jiān)測(cè)PKCδ活性。在下述分析緩沖液中進(jìn)行PKCδ分析：50mM HEPES pH 7.6，10mM MgCl₂，1mM DTT，0.01％Triton X-100，0.01％BSA和0.1mM EDTA。為了引發(fā)反應(yīng)，對(duì)于每個(gè)孔中25μL的總分析體積，將200nM的Fam-標(biāo)記的S6-來(lái)源的肽(Molecular Devices)和10μM的ATP與1.5nM的PKC-δ(Invitrogen)混合。在室溫下，培養(yǎng)該分析物2小時(shí)，并使用60μL/孔的檢測(cè)結(jié)合溶液混合物終止：70％IMAP Progressive Binding Buffer A，30％IMAP Progressive Binding Buffer B，1∶600 Progressive Binding Reagent和1∶400 TR-FRET Tb Donor(Molecular Devices)。然后，在室溫下培養(yǎng)分析板過(guò)夜，并在Perkin-Elmer Envision Reader上讀取。IC50值計(jì)算為熒光信號(hào)水平降低為信號(hào)窗的50％的化合物濃度。

表1顯示在PKC激酶酶催化分析中二氨基嘧啶基化合物的作用。表1的某些二氨基嘧啶基化合物顯示在PKC激酶酶催化分析中，對(duì)于PKC-θ的IC₅₀值的范圍為0.0001-10μM，相對(duì)于PKC-δ而言對(duì)于PKC-θ的選擇性范圍為5至＞100倍。

表2顯示一些化合物在PKC激酶酶催化分析中的作用。表2的一些化合物顯示在PKC激酶酶催化分析中對(duì)于PKC-θ的IC₅₀值的范圍為0.001-10μM，相對(duì)于PKC-δ而言，對(duì)于PKC-θ的選擇性為5至＞100倍。

細(xì)胞分析

Jurkat細(xì)胞分析：CD3/CD8-刺激的IL-2分泌。在人Jurkat細(xì)胞中，通過(guò)測(cè)量IL-2細(xì)胞因子產(chǎn)生來(lái)評(píng)價(jià)在測(cè)試化合物濃度范圍內(nèi)PKC-θ的細(xì)胞內(nèi)抑制。對(duì)于這些研究，使用來(lái)自ATCC的人Jurkat克隆E6-1。用抗-CD3(Life Technologies/Invitrogen)和抗-人類(lèi)CD28(BD Biosciences)體外活化細(xì)胞，以表達(dá)促炎細(xì)胞因子。在補(bǔ)充有1.0mM丙酮酸鈉、2mM L-谷氨酰胺、10mM Hepes、1.0mM非必需氨基酸、100IU/mL青霉素、100μg/mL鏈霉素和10％胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)Jurkat細(xì)胞。將細(xì)胞以50萬(wàn)個(gè)細(xì)胞/孔的密度鋪板在透明的96孔圓底板上的RPMI完全培養(yǎng)基中(每孔200μL)。

通過(guò)首先在100％DMSO中稀釋至適合的濃度，然后1∶50稀釋到無(wú)血清RPMI培養(yǎng)基中，由10mM儲(chǔ)液制備化合物稀釋液。接著，將化合物以1∶10的稀釋度加入到指定孔中；每個(gè)孔中，化合物的最終稀釋度為1∶500，且最終DMSO濃度為0.2％。在37℃下，將細(xì)胞暴露0、0.01、0.03、0.1、0.3、1、3和10μM劑量的化合物30分鐘，一式三份。最后，通過(guò)加入25μL/孔的15μL抗-CD3 Dynabeads和2μg/mL純的抗-CD28抗體(在無(wú)血清RPMI培養(yǎng)基中制備的)，并在37℃下培養(yǎng)20小時(shí)活化細(xì)胞。在培養(yǎng)之后，由每個(gè)孔收集100μL的培養(yǎng)基。根據(jù)制造商的方案，使用用于人IL-2的MesoScale Discovery(MSD)單-plex細(xì)胞因子分析測(cè)量所分泌的IL-2的水平。使用來(lái)自IDBS的XLfit分析原始數(shù)據(jù)，以計(jì)算每種濃度的抑制百分比。在XLfit中用于確定IC₅₀的公式的型號(hào)205，其利用S形劑量-應(yīng)答模型計(jì)算IC₅₀值。從多因素試驗(yàn)得到的IC50值必須在彼此的2倍之內(nèi)才可接受(n＝3)為正確的IC50。IC50值報(bào)告為平均值。

在該分析中，來(lái)自表1和表2的一些二氨基嘧啶基化合物具有范圍0.01-10μM的IC50值。

人全血：CD3/CD8-刺激的IL-2分泌。通過(guò)測(cè)量IL-細(xì)胞因子產(chǎn)生來(lái)評(píng)價(jià)在人全血中在測(cè)試化合物濃度范圍內(nèi)PKCθ的細(xì)胞內(nèi)抑制。人全血是在IRB方案下從正常健康供體獲得的。用CD3ε(R&DSystems)和CD28(BD Biosciences)的交聯(lián)抗體體外活化全血以表達(dá)促炎細(xì)胞因子。

為了制備CD3ε涂層板，將50μL的具有在無(wú)菌D-PBS(不含Ca++/Mg++)中的1μg/mL抗-人CD3ε(克隆UCHTl)加入到96孔CovaLinkNH模塊板(Fisher Scientific)的每個(gè)孔中，并在4℃下培養(yǎng)16-20小時(shí)。除去CD3，并用100μL的D-PBS洗滌各孔，之后將預(yù)處理的血液轉(zhuǎn)移到板。

為了制備人全血，用無(wú)血清RPMI培養(yǎng)基1∶1稀釋血液，并輕輕混合。將稀釋的血液鋪板到96孔U型底板中(每孔160μL)。通過(guò)首先在100％DMSO中稀釋至適合的濃度，然后1∶50稀釋到無(wú)血清RPMI培養(yǎng)基中，由10mM儲(chǔ)液制備化合物稀釋液。接著，將化合物以1∶10的稀釋度加入到指定孔中。化合物的最終稀釋度為1∶500，并且每個(gè)孔的最終DMSO濃度為0.2％。在37℃下，將稀釋的全血暴露于0、0.01、0.03、0.1、0.3、1、3和10μM劑量的化合物30分鐘，一式三份。將預(yù)處理的血液轉(zhuǎn)移到預(yù)涂層CD3ε板的指定孔。最后，通過(guò)加入20μL/孔的2μg/mL純的抗-CD28抗體(在無(wú)血清RPMI培養(yǎng)基中制備的)，并在37℃下培養(yǎng)20小時(shí)活化，活化血液。在培養(yǎng)之后，從每個(gè)孔收集100μL的培養(yǎng)基。根據(jù)制造商的方案，使用用于人IL-2的MesoScale Discovery(MSD)Ultrasensitive單-plex細(xì)胞因子分析測(cè)量IL-2的水平。使用來(lái)自IDBS的XLfit分析原始數(shù)據(jù)，以計(jì)算每種濃度的抑制百分比。在XLfit中用于測(cè)定IC50的公式為型號(hào)205，其使用S形劑量-應(yīng)答模型計(jì)算IC₅₀值。從多因素試驗(yàn)得到的IC₅₀值必須在彼此的2倍之內(nèi)才可接受(n＝3)為正確的IC₅₀。IC₅₀值報(bào)告為平均值。

在該分析中，來(lái)自表1和表2的一些二氨基嘧啶基化合物具有范圍0.01-10μM的IC₅₀值。

動(dòng)物模型

急性T細(xì)胞活化模型。小鼠中SEB介導(dǎo)的細(xì)胞因子釋放。因?yàn)槠咸亚蚓c毒素(SEA、B、C、和E)對(duì)于廣譜T細(xì)胞的強(qiáng)作用，其被稱(chēng)為超級(jí)抗原(sAgs)。它們進(jìn)行有絲分裂為人類(lèi)、鼠科動(dòng)物和兔子T細(xì)胞，因此細(xì)胞因子比如IL-2、IFN-g和IL-6的大量釋放。SEB介導(dǎo)的T細(xì)胞活化的小鼠和大鼠模型是識(shí)別抑制T-細(xì)胞活化的化合物的禁食穩(wěn)健模型。

之前通過(guò)口服、靜脈內(nèi)(i.v.)、腹膜內(nèi)(i.p.)或皮下(s.c.)途徑給藥試驗(yàn)制品或溶媒最多24小時(shí)。向雄性C57/B16小鼠i.p.注射25-100μg的SEB。在SEB之后2小時(shí)采集血漿或淋巴器官比如脾或淋巴結(jié)(LN)，使用標(biāo)準(zhǔn)商業(yè)ELISA試劑盒測(cè)量IL-2細(xì)胞因子水平。

如本文所述的一些二氨基嘧啶基化合物具有或預(yù)期具有＜100mg/kg的ED₅₀值，某些化合物具有＜10mg/kg的ED50，并且其它化合物具有＜1mg/kg的ED₅₀。

移植物抗宿主疾病模型。稱(chēng)為移植物抗宿主疾病(GVHD)的不想要的免疫反應(yīng)，主要由T細(xì)胞介導(dǎo)，是異源器官移植接受者中移植物衰竭的主要原因。在嚙齒類(lèi)動(dòng)物中通過(guò)如下方式對(duì)該現(xiàn)象進(jìn)行造模：通過(guò)將異源脾的或分離的T細(xì)胞注射到供體中，接著測(cè)量GVHD應(yīng)答，其能夠識(shí)別抑制T細(xì)胞活化的治療化合物。

使用C57B1/6小鼠作為供體細(xì)胞的來(lái)源，B6D2F1(C57B1/6×DBA/2的F1)用作接受者。從供體動(dòng)物(C57B1/6)取出脾，并在磷酸鹽緩沖鹽水中制備細(xì)胞懸液。將總共20-30×106個(gè)細(xì)胞注射到接受者(B6D2F1)動(dòng)物左足趾底的掉皮的足底皮下組織中。制備來(lái)自接受者動(dòng)物系的細(xì)胞懸液，并同樣地注射到接受者動(dòng)物的右足作為同系對(duì)照組。在注射后4天，取出左側(cè)和右側(cè)的腘淋巴結(jié)，剝?nèi)ジ街闹窘M織，并稱(chēng)重。通過(guò)口服、i.v.、i.p.或s.c.途徑給藥試驗(yàn)制品或溶媒最多24小時(shí)，然后注射脾細(xì)胞。當(dāng)用試驗(yàn)制品處理的淋巴結(jié)腫大與用溶媒處理的淋巴結(jié)腫大相比的差異表示為抑制％。

如本文所述的一些二氨基嘧啶基化合物具有或預(yù)期具有＜100mg/kg的ED₅₀值，某些化合物具有＜10mg/kg的ED50，并且其它化合物具有＜1mg/kg的ED₅₀。

活性表

在一個(gè)或多個(gè)生物化學(xué)分析中測(cè)試表1和2中的每種化合物，發(fā)現(xiàn)其具有的活性，所有化合物在PKC-θ分析中都具有低于10μM的IC₅₀，某些化合物具有低于100nM的IC₅₀(活性水平D)，某些化合物具有在100nM和800nM之間的IC₅₀(活性水平C)，某些化合物具有在800nM和2μM之間的IC₅₀(活性水平B)，其它化合物具有在2μM和10μM之間的IC₅₀(活性水平A)。也發(fā)現(xiàn)化合物相對(duì)于PKC-δ而言，對(duì)于PKC-θ具有選擇性，某些化合物顯示＞100倍的選擇性(選擇性水平＝IC₅₀PKC-δ/IC50PKC-θ之比)(選擇性水平E)，某些化合物顯示在20和100倍之間的選擇性(選擇性水平F)，某些化合物顯示在5-和20倍之間的選擇性(選擇性水平G)，其它化合物具有5-倍或更小的選擇性水平(選擇性水平H)。

表1。

表2

已經(jīng)引用了許多參考文獻(xiàn)，將其公開(kāi)內(nèi)容以其全文通過(guò)引用并入本文。