生物活性可降解珊瑚羥基磷灰石人工骨的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及涉及醫(yī)用生物材料【技術(shù)領(lǐng)域】，尤其涉及一種生物活性可降解珊瑚羥基磷灰石人工骨及其制備方法。該人工骨包括支架，支架上附著有誘骨活性細(xì)胞因子和緩釋劑；所述支架包括支架本體，支架的本體為珊瑚，支架本體表面覆蓋有羥基磷灰石層；誘骨活性細(xì)胞因子為重組人骨形成蛋白-2成熟肽，緩釋劑選自膠原、纖連蛋白、透明質(zhì)酸等；所述支架為粒型或圓柱型，所述微孔的孔徑范圍是77-180μm，所述微孔的孔隙率是8-11％。根據(jù)中國(guó)藥品生物制品檢定所(檢驗(yàn)報(bào)告編號(hào)：QZ200701428，QZ200804480)和中國(guó)食品藥品檢定研究院(檢驗(yàn)報(bào)告編號(hào)：QZ201206312)檢定結(jié)果，該人工骨是優(yōu)秀的骨移植替代物。
【專利說(shuō)明】生物活性可降解珊瑚羥基磷灰石人工骨

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及醫(yī)用生物材料【技術(shù)領(lǐng)域】，尤其涉及一種生物活性可降解珊瑚羥基磷灰 石人工骨及其制備方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 骨缺損的病人在骨科患者中占有很高的比例，這類病人無(wú)法通過(guò)肌體自身恢復(fù)機(jī) 制修復(fù)缺損，因此必須進(jìn)行骨移植治療。
[0003] 用于骨移植治療的材料簡(jiǎn)稱為人工骨，人工骨需要有合適的尺寸，合適的孔隙率 和孔徑，并具有合適的材料和功能。
[0004] 理想的骨移植材料，需要同時(shí)具備骨傳導(dǎo)和骨誘導(dǎo)活性。珊瑚和由珊瑚衍生的羥 基磷灰石材料具有與人體骨相似的孔隙結(jié)構(gòu)，作為支架材料被廣泛用于骨缺損的填充，因 其具有良好的三維立體結(jié)構(gòu)和生物力學(xué)性能，因此表現(xiàn)出優(yōu)秀的骨傳導(dǎo)活性，但新生骨的 誘導(dǎo)能力不足，成骨過(guò)程緩慢，尤其對(duì)于大截段骨缺損和大面積骨缺損無(wú)法取得滿意的療 效。另外，珊瑚主要成分CaCO 3，植入體內(nèi)很快被降解，不足以維持整個(gè)成骨過(guò)程，而羥基磷 灰石在體內(nèi)降解速度極慢，影響自身組織的替代。骨形成蛋白-2是肌體內(nèi)具有最強(qiáng)誘導(dǎo) 骨形成能力的細(xì)胞因子之一，骨形成蛋白-2的使用可以加速骨折愈合和新骨形成過(guò)程，但 是，骨形成蛋白-2是小分子蛋白質(zhì)，容易擴(kuò)散，不能夠在需要成骨的區(qū)域內(nèi)保持有效濃度， 持續(xù)發(fā)揮骨誘導(dǎo)作用，因此細(xì)胞因子雖然具有良好的誘骨活性，單獨(dú)使用仍無(wú)法在骨缺損 的修復(fù)過(guò)程中發(fā)揮明顯效果。
[0005] 因此，對(duì)于組織工程人工骨而言，單一要素的使用已很難滿足臨床上對(duì)骨移植替 代物的需求，目前研宄和應(yīng)用已逐步轉(zhuǎn)向了多要素的復(fù)合使用，以構(gòu)建更有效更合理的人 工骨。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 為了解決現(xiàn)有人工骨的可降解性不理想，骨誘導(dǎo)活性較差的缺陷，本發(fā)明提供一 種生物活性可降解珊瑚羥基磷灰石人工骨及其制備方法。
[0007] 為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采用下述技術(shù)方案：
[0008] 本發(fā)明提供一種生物活性可降解珊瑚羥基磷灰石人工骨，該人工骨包括支架，所 述支架上附著有誘骨活性細(xì)胞因子，緩釋劑；所述支架包括支架本體，支架的本體為珊瑚， 支架本體表面覆蓋有羥基磷灰石層；所述誘骨活性細(xì)胞因子為重組人骨形成蛋白-2成熟 肽；所述的緩釋劑選自膠原、纖連蛋白、透明質(zhì)酸、幾丁質(zhì)、聚乙烯吡咯烷酮中的一種或至少 兩種的組合。
[0009] 進(jìn)一步的，所述支架為不規(guī)則的三維立體結(jié)構(gòu)，長(zhǎng)度、寬度和高度的范圍均為 2-20_，所述微孔的孔徑范圍是77-200 y m，所述微孔的孔隙率是8% -11 %。
[0010] 進(jìn)一步的，所述人工骨為粒型或圓柱型。
[0011] 進(jìn)一步的，粒型人工骨：直徑為2-6mm。
[0012] 進(jìn)一步的，圓柱型人工骨：圓柱直徑為10±0. 5mm;圓柱高為20± I. 0mm。
[0013] 進(jìn)一步的，所述微孔的孔徑范圍是77-180 ym，所述微孔的孔隙率是8% -11%。
[0014] 進(jìn)一步的，所述重組人骨形成蛋白-2成熟肽的氨基酸序列如下：
[0015] KRLKSSCKRHPLYVDFSDVGWNDWIVAPPGYHAFYCHGECPFPLADHLNSTNHAIVQTLVNSVNSKIPK ACCVPTELSAISMLYLDENEKVVLKNYQDMVVEGCGCR。（參見序列 1)
[0016] 進(jìn)一步的，所述誘骨活性細(xì)胞因子的濃度為0. 1-lmg/cm3,所述緩釋劑的濃度為 0? 2-2%〇
[0017] 所述誘骨活性細(xì)胞因子的濃度為0. 1-lmg/cm3,是指每立方厘米人工骨的支架內(nèi) 含有0. I-Img誘骨活性細(xì)胞因子。所述緩釋劑的濃度為0. 2-2%，是指每100立方厘米人工 骨的支架內(nèi)含有〇. 2-2g緩釋劑。
[0018] 進(jìn)一步的，所述誘骨活性細(xì)胞因子的濃度為0. 6-lmg/cm3,所述緩釋劑的濃度為 0? 2%〇
[0019] 進(jìn)一步的，所述誘骨活性細(xì)胞因子的濃度為0. 6-lmg/cm3,所述緩釋劑的濃度為 1-2 % 〇
[0020] 進(jìn)一步的，所述的緩釋劑為膠原、纖連蛋白、透明質(zhì)酸和幾丁質(zhì)的組合，前述四種 緩釋劑的質(zhì)量比為1:1:1:1。
[0021] 本發(fā)明還提供上述可降解珊瑚羥基磷灰石人工骨的制備方法，所述方法包括下述 步驟：
[0022] (1)由珊瑚制備可降解珊瑚羥基磷灰石
[0023] 取珊瑚進(jìn)行切割打磨，制備成所需尺寸、形狀；清洗；清洗干凈后放入烘箱 在50-100 °C干燥3-4小時(shí)；然后，將珊瑚與（NH4)2HPO4的水溶液一同放入高壓反應(yīng)釜， (NH 4) 2HP04水溶液的質(zhì)量濃度是0? 05-lmol/L，（NH 4) 2HP04溶液中的（NH 4) 2HP04與珊瑚 (CaCO3)的摩爾比是1:10-15;再向（NH4)2即04溶液中加入磷酸二氫鉀，每升（NH 4)2HPO4溶液 中加入磷酸二氫鉀Img;反應(yīng)12小時(shí)，之后用去離子水煮沸4小時(shí)，每半小時(shí)換去離子水一 次，去除無(wú)機(jī)離子；再用y射線照射消毒，得到可降解珊瑚羥基磷灰石支架；
[0024] (2)將重組人骨形成蛋白-2成熟肽與緩釋劑配制成混合均勻的水溶液。
[0025](3)將重組人骨形成蛋白-2成熟肽與緩釋劑附著到可降解珊瑚羥基磷灰石支架 的表面及孔隙內(nèi)。
[0026] 進(jìn)一步的，所述可降解珊瑚羥基磷灰石人工骨的制備方法，所述方法包括下述步 驟：
[0027] (1)由珊瑚制備可降解珊瑚羥基磷灰石
[0028] 取珊瑚進(jìn)行切割打磨，制備成所需尺寸、形狀；清洗；清洗干凈后放入烘箱 在50-100 °C干燥3-4小時(shí)；然后，將珊瑚與（NH4)2HPO4的水溶液一同放入高壓反應(yīng)釜， (NH 4) 2HP04水溶液的質(zhì)量濃度是0? 05-lmol/L，（NH 4) 2HP04溶液中的（NH 4) 2HP04與珊瑚 (CaCO3)的摩爾比是1:10-1:15 ;再向（NH4)2即04溶液中加入磷酸二氫鉀，每升（NH4) 2即04溶 液中加入磷酸二氫鉀Img;反應(yīng)12小時(shí)，之后用去離子水煮沸4小時(shí)，每半小時(shí)換去離子水 一次，去除無(wú)機(jī)離子；再用y射線照射消毒，得到可降解珊瑚羥基磷灰石支架，最后將可降 解珊瑚羥基磷灰石支架干燥分裝西林瓶；
[0029] (2)重組人骨形成蛋白-2成熟肽與緩釋劑的配制
[0030] 重組人骨形成蛋白-2成熟肽配制成濃度0. 1-lmg/ml的水溶液，向前述水溶液中 加入占水溶液總重量0. 2% -2%的緩釋劑，低溫下低速攪拌至混合充分，得到重組人骨形 成蛋白-2成熟肽與緩釋劑的均勻混合溶液；
[0031] (3)重組人骨形成蛋白-2成熟肽與緩釋劑附著到可降解珊瑚羥基磷灰石支架上
[0032] 將步驟⑵得到的混合溶液加到步驟⑴得到的可降解珊瑚羥基磷灰石支架內(nèi)， 加入量為〇. 1-lmg/cm3(即：每立方厘米支架加入含有0. I-Img重組人骨形成蛋白-2成熟 肽的混合溶液），低溫負(fù)壓使重組人骨形成蛋白-2成熟肽與緩釋劑的混合溶液充分進(jìn)入可 降解珊瑚羥基磷灰石支架的孔隙內(nèi)，-30°C以下抽真空，冷凍干燥，得到所述的人工骨，將人 工骨密封，_20°C長(zhǎng)期保存。
[0033] 步驟（1)中天然珊瑚的主要成分是碳酸鈣（CaCO3)，經(jīng)與（NH4) 2HPO4反應(yīng)可使表面 部分轉(zhuǎn)化為羥基磷灰石。
[0034] 進(jìn)一步的，步驟（1)中的清洗過(guò)程是先用超聲清洗，后用流水沖洗20分鐘，以去除 珊瑚表面和內(nèi)部孔隙中的有機(jī)成分和珊瑚碎肩。
[0035] 進(jìn)一步的，所述可降解珊瑚羥基磷灰石人工骨的制備方法中，所述步驟（1)中反 應(yīng)釜內(nèi)的壓力為：4-9MPa，溫度為：270-280°C。
[0036] 進(jìn)一步的，所述可降解珊瑚羥基磷灰石人工骨的制備方法中，所述步驟（1)中珊 瑚與（NH 4)2HPO4的比例為：10:1，反應(yīng)釜內(nèi)的壓力為：7MP，溫度為：280°C。
[0037]進(jìn)一步的，所述步驟（2)中低溫溫度為2°C -6°C，低速攪拌轉(zhuǎn)速為50-150轉(zhuǎn)/分 鐘。
[0038] 進(jìn)一步的，所述的步驟（3)中低溫溫度為1-5°C，負(fù)壓為-0. 01至-0. 05MPa。
[0039] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明所提供的生物活性可降解珊瑚羥基磷灰石人工骨具有下 述優(yōu)點(diǎn)：
[0040] 1、同時(shí)具備良好的骨傳導(dǎo)活性和骨誘導(dǎo)活性，即具有良好的生物力學(xué)特性、與自 體骨相似的孔隙結(jié)構(gòu)和很好的組織相容性，又能夠充分發(fā)揮骨形成蛋白-2的誘導(dǎo)新生骨 形成的能力。具有良好的骨缺損修復(fù)能力，是一種理想的骨移植替代物。
[0041] 2、支架材料能夠在體內(nèi)逐漸降解，最終被自體骨組織所替代，降解產(chǎn)物可被自身 成骨過(guò)程所利用，并且降解速度與自身成骨過(guò)程能夠保持同步。
[0042] 3、重組人骨形成蛋白-2成熟肽首先與緩釋劑相復(fù)合，在植入體內(nèi)后骨形成蛋 白-2成熟肽能夠被緩慢釋放，從而不易流失，能夠在新骨形成局部長(zhǎng)期作用，促進(jìn)缺損區(qū) 域局部新骨快速形成。
[0043] 4、本發(fā)明所提供的生物活性可降解珊瑚羥基磷灰石人工骨，為復(fù)合凍干產(chǎn)品，能 夠在-20°C保存3年以上，能夠在4°C保存2年以上，室溫保存1. 5年以上，普適性廣，便于 操作和運(yùn)輸。
[0044] 5、本發(fā)明所提供的生物活性可降解珊瑚羥基磷灰石人工骨的生產(chǎn)成本較低，是一 種安全、高效、源材料廉價(jià)充足，便于制備和保存的骨移植替代物。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0045] 圖1為天然珊瑚的掃描電鏡照片；
[0046]圖2為表面經(jīng)羥基磷灰石化的珊瑚的掃描電鏡照片；放大倍數(shù)是50 ;
[0047] 圖3為表面復(fù)合有人骨形成蛋白結(jié)晶的珊瑚的掃描電鏡照片；
[0048] 圖4為本發(fā)明提供的人工骨骨內(nèi)植入切片圖片，顯示了皮質(zhì)骨區(qū)成骨情況；
[0049] 圖5為本發(fā)明提供的人工骨骨內(nèi)植入切片圖片，顯示了骨髓區(qū)成骨情況；
[0050] 圖6為高倍的表面經(jīng)羥基磷灰石化的珊瑚的掃描電鏡照片。放大倍數(shù)是3000。

【具體實(shí)施方式】
[0051] 為了更易理解本發(fā)明提供的人工骨的功能特征和優(yōu)點(diǎn)，下文將本發(fā)明的較佳的實(shí) 施例，并配合圖式做詳細(xì)說(shuō)明如下：
[0052] 本發(fā)明提供的人工骨的支架的原料采用天然珊瑚，如圖1所示。
[0053] 由天然珊瑚制得的支架本體的表面經(jīng)與（見14)2即0 4反應(yīng)生成羥基磷灰石降解層， 得到人工骨的支架，如圖2所示。
[0054] 在圖2所示人工骨的支架表面復(fù)合人骨形成蛋白和緩釋劑，如圖3所示，得到本發(fā) 明所述的人工骨。圖3中的人骨形成蛋白為結(jié)晶形態(tài)。
[0055] 從圖1，圖2和圖6中可以看到，由天然珊瑚的碳酸鈣生成了羥基磷灰石，經(jīng)過(guò)水熱 反應(yīng)后生成的珊瑚羥基磷灰石保留了天然珊瑚的多孔性和高孔隙率，表面結(jié)構(gòu)發(fā)生了明顯 的改變。如圖3所示，所述重組人骨形成蛋白-2成熟肽在珊瑚羥基磷灰石的表面及孔隙可 見蛋白結(jié)晶。
[0056] 如圖4所示，本發(fā)明提供的人工骨植入大白兔皮質(zhì)骨區(qū)，骨內(nèi)植入局部組織反應(yīng) 與對(duì)照材料相比無(wú)明顯差異。對(duì)照材料是指：羥基磷灰石生物陶瓷（國(guó)食藥監(jiān)械（準(zhǔn)）字 2011 第 3461652 號(hào)）。
[0057] 如圖5所示，本發(fā)明提供的人工骨植入大鼠骨缺損區(qū)，骨內(nèi)植入局部組織反應(yīng)與 對(duì)照材料相比無(wú)明顯差異。對(duì)照材料是指：羥基磷灰石生物陶瓷（國(guó)食藥監(jiān)械（準(zhǔn)）字2011 第 3461652 號(hào)）。
[0058] 圖4和圖5中的3m是指3個(gè)月，6m是指6個(gè)月。
[0059] 圖4中，3m對(duì)應(yīng)的圖片是人工骨骨內(nèi)植入切片圖片，顯示了人工骨植入3個(gè)月的皮 質(zhì)骨區(qū)成骨情況。6m對(duì)應(yīng)的圖片是人工骨骨內(nèi)植入切片圖片，顯示了人工骨植入6個(gè)月的 皮質(zhì)骨區(qū)成骨情況。
[0060] 圖5中，3m對(duì)應(yīng)的圖片是人工骨骨內(nèi)植入切片圖片，顯示了人工骨植入3個(gè)月的骨 髓區(qū)成骨情況。6m對(duì)應(yīng)的圖片是人工骨骨內(nèi)植入切片圖片，顯示了人工骨植入6個(gè)月的骨 髓區(qū)成骨情況。
[0061] 按照本發(fā)明提供的下述方法制備生物活性可降解珊瑚羥基磷灰石人工骨。該方法 包括下述步驟：
[0062] (1)由珊瑚制備可降解珊瑚羥基磷灰石
[0063] 取珊瑚進(jìn)行切割打磨，制備成所需尺寸、形狀；清洗；清洗干凈后放入烘箱 在50-100 °C干燥3-4小時(shí)；然后，將珊瑚與（NH4)2HPO4的水溶液一同放入高壓反應(yīng)釜， (NH 4)2HPO4水溶液的質(zhì)量濃度是0.06mol/L，（NH4) 2HPO4溶液中的（NH4)2HPO4與珊瑚（CaCO 3) 的摩爾比是1:10 ;再向（NH4)2HPO4溶液中加入磷酸二氫鉀，每升（NH4) 2HPO4溶液中加入磷酸 二氫鉀Img ;反應(yīng)釜內(nèi)的壓力為7MP，溫度為280°C;反應(yīng)12小時(shí)，之后用去離子水煮沸4小 時(shí)，每半小時(shí)換去離子水一次，去除無(wú)機(jī)離子；干燥分裝入西林瓶，最后再用y射線照射消 毒。
[0064] (2)重組人骨形成蛋白-2成熟肽與緩釋劑的配制
[0065] 重組人骨形成蛋白-2成熟肽配制成濃度0. 1-lmg/ml的水溶液，向前述水溶液中 加入占水溶液總重量0. 2% -2%的緩釋劑，低溫下低速攪拌至混合充分，得到重組人骨形 成蛋白-2成熟肽與緩釋劑的均勻混合溶液；
[0066] (3)重組人骨形成蛋白-2成熟肽與緩釋劑附著到可降解珊瑚羥基磷灰石支架上
[0067] 將步驟⑵得到的混合溶液加到步驟⑴得到的可降解珊瑚羥基磷灰石支架內(nèi)， 加入量為〇.1-lmg/cm3(即：每立方厘米支架加入含有0. I-Img重組人骨形成蛋白-2成熟 肽的混合溶液），低溫負(fù)壓使重組人骨形成蛋白-2成熟肽與緩釋劑的混合溶液充分進(jìn)入可 降解珊瑚羥基磷灰石支架的孔隙內(nèi)，-30°C以下抽真空，冷凍干燥，得到所述的人工骨，將人 工骨密封，_20°C長(zhǎng)期保存。
[0068] 步驟（1)中天然珊瑚的主要成分是碳酸鈣（CaCO3)，經(jīng)與（NH4)2HPO4反應(yīng)可使表面 部分轉(zhuǎn)化為羥基磷灰石。
[0069] 實(shí)施例1
[0070] 本發(fā)明提供一種生物活性可降解珊瑚羥基磷灰石人工骨，該人工骨包括支架，所 述支架上附著有誘骨活性細(xì)胞因子，緩釋劑；所述支架包括支架本體，支架的本體為珊瑚， 支架本體表面覆蓋有羥基磷灰石層；所述誘骨活性細(xì)胞因子為重組人骨形成蛋白-2成熟 肽；所述的緩釋劑為膠原和纖連蛋白的組合，膠原和纖連蛋白的質(zhì)量比為1:1。
[0071] 所述重組人骨形成蛋白-2成熟肽的氨基酸序列如下：
[0072] KRLKSSCKRHPLYVDFSDVGWNDWIVAPPGYHAFYCHGECPFPLADHLNSTNHAIVQTLVNSVNSKIPK ACCVPTELSAISMLYLDENEKVVLKNYQDMVVEGCGCR(參見序列1)。
[0073] 所述人工骨為粒型，直徑為2-6mm，所述微孔的孔徑范圍是77-180 ym，所述微孔 的孔隙率是8% -11%。
[0074] 所述誘骨活性細(xì)胞因子的濃度為0. 6%mg/cm3,所述緩釋劑的濃度為0. 2%。
[0075] 將實(shí)施例1制備得到的人工骨，送檢測(cè)單位進(jìn)行檢測(cè)。檢測(cè)單位為：中國(guó)藥品生物 制品檢定所。檢驗(yàn)報(bào)告編號(hào)：QZ200701428。檢驗(yàn)項(xiàng)目：部分檢驗(yàn)。主要檢測(cè)內(nèi)容及結(jié)果參 見下面表1。
[0076] 表1實(shí)施例1制備得到的人工骨的檢測(cè)結(jié)果
[0077]

【權(quán)利要求】
1. 一種生物活性可降解珊瑚羥基磷灰石人工骨，其特征在于，該人工骨包括支架，所述 支架上附著有誘骨活性細(xì)胞因子，緩釋劑；所述支架包括支架本體，支架的本體為珊瑚，支 架本體表面覆蓋有羥基磷灰石層；所述誘骨活性細(xì)胞因子為重組人骨形成蛋白-2成熟肽； 所述的緩釋劑選自膠原、纖連蛋白、透明質(zhì)酸、幾丁質(zhì)、聚乙烯吡咯烷酮中的一種或至少兩 種的組合。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述可降解珊瑚羥基磷灰石人工骨，其特征在于，所述支架為 不規(guī)則的三維立體結(jié)構(gòu)，長(zhǎng)度、寬度和高度的范圍均為2-20mm，所述微孔的孔徑范圍是 77-200 y m，所述微孔的孔隙率是8% -11 %。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述可降解珊瑚羥基磷灰石人工骨，其特征在于，所述重組人骨形 成蛋白-2成熟肽的氨基酸序列如下： KRLKSSCKRHPLYVDFSDVGWNDWIVAPPGYHAFYCHGECPFPLADHLNSTNHAIVQTLVNSVNSKIPKACCV PTELSAISMLYLDENEKVVLKNYQDMVVEGCGCR 〇
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述可降解珊瑚羥基磷灰石人工骨，其特征在于，所述誘骨活性細(xì) 胞因子的濃度為〇. 1-lmg/cm3,所述緩釋劑的濃度為0. 2-2%。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述可降解珊瑚羥基磷灰石人工骨，其特征在于，所述誘骨活性細(xì) 胞因子的濃度為〇. 6-lmg/cm3,所述緩釋劑的濃度為0. 2%。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述可降解珊瑚羥基磷灰石人工骨，其特征在于，所述誘骨活性細(xì) 胞因子的濃度為〇. 6-lmg/cm3,所述緩釋劑的濃度為1-2%。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1至6之一所述可降解珊瑚羥基磷灰石人工骨的制備方法，其特征在 于，所述方法包括下述步驟： (1) 由珊瑚制備可降解珊瑚羥基磷灰石 取珊瑚進(jìn)行切割打磨，制備成所需尺寸、形狀；清洗；清洗干凈后放入烘箱在50-KKTC 干燥3-4小時(shí)；然后，將珊瑚與（NH4) 2HP04的水溶液一同放入高壓反應(yīng)爸，（NH 4) 2HP04水溶 液的質(zhì)量濃度是0.05-lmol/L，（順4)2即04溶液中的（NH 4)2HP04與珊瑚（CaC03)的摩爾比是 1:10-15;再向（順4)2即04溶液中加入磷酸二氫鉀，每升（順 4)2即04溶液中加入磷酸二氫鉀 lmg ;反應(yīng)12小時(shí)，之后用去離子水煮沸4小時(shí)，每半小時(shí)換去離子水一次，去除無(wú)機(jī)離子； 再用y射線照射消毒，得到可降解珊瑚羥基磷灰石支架； (2) 將重組人骨形成蛋白-2成熟肽與緩釋劑配制成混合均勻的水溶液； (3) 將重組人骨形成蛋白-2成熟肽與緩釋劑附著到可降解珊瑚羥基磷灰石支架的表 面及孔隙內(nèi)。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1-6之一所述可降解珊瑚羥基磷灰石人工骨的制備方法，其特征在 于，所述方法包括下述步驟： (1)由珊瑚制備可降解珊瑚羥基磷灰石 取珊瑚進(jìn)行切割打磨，制備成所需尺寸、形狀；清洗；清洗干凈后放入烘箱在50-KKTC 干燥3-4小時(shí)；然后，將珊瑚與（NH4) 2HP04的水溶液一同放入高壓反應(yīng)爸，（NH 4) 2HP04水溶 液的質(zhì)量濃度是0.05-lmol/L，（順4)2即04溶液中的（NH 4)2HP04與珊瑚（CaC03)的摩爾比是 1:10-1:15 ;再向（NH4)2HP04溶液中加入磷酸二氫鉀，每升（NH4) 2HP04溶液中加入磷酸二氫 鉀lmg ;反應(yīng)12小時(shí)，之后用去離子水煮沸4小時(shí)，每半小時(shí)換去離子水一次，去除無(wú)機(jī)離 子；再用y射線照射消毒，得到可降解珊瑚羥基磷灰石支架，最后將可降解珊瑚羥基磷灰 石支架干燥分裝西林瓶； (2) 重組人骨形成蛋白-2成熟肽與緩釋劑的配制 重組人骨形成蛋白-2成熟肽配制成濃度0. 1-lmg/ml的水溶液，向前述水溶液中加入 占水溶液總重量0. 2 % -2 %的緩釋劑，低溫下低速攪拌至混合充分，得到重組人骨形成蛋 白-2成熟肽與緩釋劑的均勻混合溶液； (3) 重組人骨形成蛋白-2成熟肽與緩釋劑附著到可降解珊瑚羥基磷灰石支架上 將步驟（2)得到的混合溶液加到步驟（1)得到的可降解珊瑚羥基磷灰石支架內(nèi)，加入 量為0. 1-lmg/cm3 (即：每立方厘米支架加入含有0. 1-lmg重組人骨形成蛋白-2成熟肽的 混合溶液），低溫負(fù)壓使重組人骨形成蛋白-2成熟肽與緩釋劑的混合溶液充分進(jìn)入可降解 珊瑚羥基磷灰石支架的孔隙內(nèi)，_30°C以下抽真空，冷凍干燥，得到所述的人工骨，將人工骨 密封，-20°C長(zhǎng)期保存。
9. 根據(jù)權(quán)利要求7或8所述可降解珊瑚羥基磷灰石人工骨的制備方法，其特征在于，所 述步驟（1)中反應(yīng)釜內(nèi)的壓力為：4-9MPa，溫度為：270-280°C。
10. 根據(jù)權(quán)利要求7或8所述可降解珊瑚羥基磷灰石人工骨的制備方法，其特征在 于，所述步驟（1)中珊瑚與（NH4)2HP04的比例為：10:1，反應(yīng)釜內(nèi)的壓力為：7MP，溫度為： 280。。。
【文檔編號(hào)】A61L27/56GK104474591SQ201410843797
【公開日】2015年4月1日 申請(qǐng)日期:2014年12月30日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月30日
【發(fā)明者】筴文奎, 后力 申請(qǐng)人:力度生物科技股份有限公司