本發(fā)明屬于獸藥制劑制備技術(shù)，具體涉及將鹽酸多西環(huán)素和泊洛沙姆407制備成載藥微粒，將載藥微粒懸浮于油性介質(zhì)中，制備含鹽酸多西環(huán)素載藥微粒的獸用長效注射劑。

背景技術(shù)：
目前已商品化的獸用多西環(huán)素注射劑和專利公開的技術(shù)，其劑型多為溶液型，制劑需充氮貯存，并且組成制劑的水、有機(jī)溶劑、助溶劑、絡(luò)合劑、抗氧化劑等助劑的用量和制劑的pH值都要求的很嚴(yán)格，稍有偏差，制劑的穩(wěn)定性便會出現(xiàn)問題，該劑型不易制備出穩(wěn)定的高濃度制劑，緩釋效果也不明顯，該劑型對注射部位組織有損傷。專利CN101862293B公開了以植物油和表面活性劑為載體制備的含鹽酸多西環(huán)素的混懸液，該制劑穩(wěn)定性好、具有緩釋作用，一次用藥，藥效維持時間長達(dá)2天。專利CN102440998A描述的是一種以植物油為載體制備的含鹽酸多西環(huán)素和磷酸替米可星的復(fù)方制劑。專利CN102895245A描述的是一種含鹽酸多西環(huán)素和甲氧芐啶的水包油型納米乳制劑。泊洛沙姆為聚氧乙烯-聚氧丙烯醚類共聚物，此類聚合物有多種規(guī)格，其中泊洛沙姆407(以下簡稱P407)的水溶液具有“隨溫度升高由溶膠向凝膠轉(zhuǎn)化的特性”，一定濃度的P407水溶液一般在30℃以上即發(fā)生膠凝，據(jù)此特性，P407被用于緩釋注射劑的制備，該制劑被稱之為原位膠凝制劑。含P407的原位膠凝注射劑注入體內(nèi)后，在體溫的作用下，一般在1分鐘左右，即由溶膠轉(zhuǎn)變?yōu)槟z(半固體)，藥物被包裹在凝膠中，從而減緩了釋藥速率，使藥效維持時間延長。文獻(xiàn)和專利公開的含P407的原位膠凝注射劑，是以水為主要溶劑，制劑中P407的濃度要達(dá)到20％以上才會有較好的緩釋作用；在制劑中加入一定量的甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、高取代羥丙基纖維素(H-HPC)或羥丙基甲基纖維素(HPMC)等阻滯劑，可增強(qiáng)緩釋作用，但會導(dǎo)致制劑粘度升高，使注射更加困難。P407也是一種水溶性很好的非離子表面活性劑，更多的是被用于制備乳劑、乳膏劑、水性栓劑、滴丸劑等；P407也被作為難溶藥物(水溶性很差的藥物)的分散載體，用于制備固溶體，已公開的用P407制備的固溶體，多是用于內(nèi)服制劑的制備。本發(fā)明制劑不同于已公開的含鹽酸多西環(huán)素的注射劑和含P407的原位膠凝注射劑，本發(fā)明是將鹽酸多西環(huán)素與P407(或與P407和纖維素醚類)組成固溶體或其它形式的載藥微粒(如附聚體)，并用油性介質(zhì)(十四烷酸異丙酯，以下簡稱IPM；注射用植物油)替代水來制備含P407的注射劑。本制劑穩(wěn)定性好，經(jīng)過將鹽酸多西環(huán)素與P407組合成載藥微粒并分散于油性介質(zhì)中，從而克服了鹽酸多西環(huán)素易氧化、易降解，很不穩(wěn)定的缺陷。本制劑注入動物皮下或肌內(nèi)，載藥微粒在“突破”油相接觸體液(水)后，借助于P407“吸水(體液)”或吸水溶脹(HPMC或H-HPC存在時)，“粘聚”在一起，在注射部位形成高濃度與高粘度的、并具有“生物粘附性”(在制劑中含有H-HPC或HPMC時)的半固體團(tuán)塊，藥物被包裹在團(tuán)塊中，從而有效的延長了釋藥時間，因此，本制劑還有很好的緩釋作用。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
將鹽酸多西環(huán)素與P407、或?qū)Ⅺ}酸多西環(huán)素與P407和HPMC(或H-HPC)制備成載藥微粒，并將載藥微粒懸浮于油性介質(zhì)中，經(jīng)研磨制備成含鹽酸多西環(huán)素的油質(zhì)長效注射劑，這是本制劑的突出特征。本制劑組成和制備方法如下：本制劑包括鹽酸多西環(huán)素、P407和油性介質(zhì)。每升制劑中含鹽酸多西環(huán)素80-200g、P40720-150g、油性介質(zhì)加至1升。所述的油性介質(zhì)為IPM或注射用大豆油、玉米油、茶籽油中的一種。所述的每升注射劑中還可加入20-60gHPMC或H-HPC，HPMC或H-HPC需與P407組合成固溶體或與P407和鹽酸多西環(huán)素一起組成載藥微粒，才能用于本制劑的制備。H-HPC在甲醇中有很好的溶解性，鹽酸多西環(huán)素在甲醇中同樣有很好的溶解性，這是H-HPC、P407、鹽酸多西環(huán)素能夠組成一體，制備成載藥微粒的重要基礎(chǔ)。H-HPC和HPMC無毒、無藥理作用，在生理活性上表現(xiàn)出極端惰性。HPMC、H-HPC或P407在IPM等油性介質(zhì)中不溶，因此，將H-HPC或HPMC與P407組成微粒，即使以較高的濃度分散于油性介質(zhì)中，也不會使制劑粘度明顯升高，但含高濃度H-HPC或HPMC的載藥微粒在注射部位能吸水溶脹，形成高粘度的團(tuán)塊，高粘度的團(tuán)塊具有更強(qiáng)的阻滯(減緩)藥物釋放的作用，因此，根據(jù)要求，在載藥微粒中添加適量的H-HPC和HPMC可達(dá)到預(yù)期的緩釋效果，尤其對于制備含水溶性藥物(如鹽酸多西環(huán)素)的緩釋注射劑，加入H-HPC或HPMC是十分必要的。含鹽酸多西環(huán)素的載藥微粒在制劑中的含量為10-35％，適宜的含量為15-25％，重量/體積百分比。在每升制劑中還可加入0.2-2g抗氧劑，抗氧劑包括叔丁基-4-羥基茴香醚(BHA)、二丁基羥基甲苯(BHT)或沒食子酸丙酯(PG)中的一種或一種以上任何比例的混合物。在每升制劑中還可加入1-1.5gEDTA-2鈉。制備方法：歸納起來主要有以下三種。(1)在加熱(55-70℃)或常溫條件下，將鹽酸多西環(huán)素與P407、或鹽酸多西環(huán)素與P407和HPMC、或鹽酸多西環(huán)素與P407和H-HPC一起用甲醇溶解(甲醇的適宜加入量為鹽酸多西環(huán)素的2-5倍，重量/體積比)，然后減壓蒸餾除去溶劑，得鹽酸多西環(huán)素/P407固溶體或鹽酸多西環(huán)素/P407/HPMC固溶體或鹽酸多西環(huán)素/P407/H-HPC固溶體；將制備的固溶體粉碎過40目篩，得載藥微粒；將載藥微粒分散于部分油性介質(zhì)中，用膠體磨研磨至粒徑小于100μm，再用砂磨機(jī)研磨至粒徑小于20μm，加入剩余成份至終體積，用高剪切均質(zhì)機(jī)在5000-10000rpm進(jìn)一步均質(zhì)化即得本制劑。(2)將藥物和P407或藥物和固溶體(P407/HPMC或P407/H-HPC)分散于部分油性介質(zhì)中，用膠體磨和砂磨機(jī)研磨至粒徑小于20μm，加入剩余成份，用高剪切均質(zhì)機(jī)均質(zhì)化即得本制劑。(3)將藥物微粉化，然后與已融化和溶解的P407和H-HPC混合均勻，冷卻使之固化，粉碎、過篩，得載藥微粒，將載藥微粒分散于油性介質(zhì)中，經(jīng)研磨得本制劑。P407/H-HPC或P407/HPMC固溶體微粒制備：在加熱條件下，將HPMC或H-HPC和P407溶于甲醇或溶于80％乙醇溶液中，混勻，在攪拌下減壓除去溶劑，粉碎、過篩即得。本制劑制備過程需在無菌條件下進(jìn)行，研磨時物料溫度不可超過40℃，制劑中固體微粒的粒徑應(yīng)小于20μm，以小于10μm較合適。本制劑特點(diǎn)歸納如下：本藥劑釋藥過程不同于以水為介質(zhì)的原位膠凝制劑，也不同于傳統(tǒng)的油劑，主要不同之處是：存在載藥微?！巴黄啤庇拖嗯c體液接觸并吸水形成高粘度團(tuán)塊過程。將適量的H-HPC或HPMC與P407組成固溶體顆粒，分散于油相中進(jìn)一步研磨，解決了單純用H-HPC(或HPMC)包裹藥物很難研磨(粉碎)成細(xì)微顆粒(小于20μm)的技術(shù)難題，同時保留了H-HPC和HPMC具有吸水溶脹，形成高粘度團(tuán)塊的特性。含藥“團(tuán)塊”粘附于注射部位組織中，有利于藥物更好的吸收，并且保證了一定程度的緩釋效果，這是本劑具有生物利用度高，又有長效作用的基礎(chǔ)。用油性介質(zhì)替代水制備含P407的緩釋注射劑，可減少P407的用量，P407用量在5-10％時，制劑就有很好的緩釋作用。以水為溶劑制備含P407的原位膠凝注射劑，P407的用量要達(dá)到20～45％，制劑才能顯示出很好的緩釋作用。目前國產(chǎn)P407價格較貴(醫(yī)用級在160～200元/kg)，因此，P407在制劑中用量越多，制備成本越高，不利于在獸醫(yī)領(lǐng)域推廣應(yīng)用。具體實(shí)施方式實(shí)施例1、制備15％鹽酸多西環(huán)素注射劑制劑組成：鹽酸多西環(huán)素150g、P407100g、BHT0.2g、BHA0.1g、IPM加至1升。制備方法：(1)在65-75℃將P407融化，然后加入鹽酸多西環(huán)素和相當(dāng)于多西環(huán)素2-3倍量的甲醇，充分?jǐn)嚢?，減壓蒸餾，除去甲醇，制得固溶體，將固溶體粉碎，過40目篩，得鹽酸多西環(huán)素/P407載藥微粒。(2)將載藥微粒分散于適量的IPM中，用膠體磨研磨至粒徑約100μm，用砂磨機(jī)進(jìn)一步研磨至粒徑小于10μm，然后加入剩余成份，用高剪切均質(zhì)機(jī)在5000rpm條件下經(jīng)多次均質(zhì)化后，制得15％鹽酸多西環(huán)素注射劑。實(shí)施例2、制備10％鹽酸多西環(huán)素注射劑制劑組成：每升含鹽酸多西環(huán)素100g、P40750g、HPMC30g、BHT0.2g、BHA0.1g、PG0.1g，注射用大豆油加至終體積。制備方法：(1)在65-75℃將P407融化，然后加入鹽酸多西環(huán)素和HPMC，充分混勻后加入相當(dāng)于多西環(huán)素2倍量的甲醇，充分?jǐn)嚢?，減壓蒸餾，除去甲醇，制得固溶體，將固溶體粉碎，過40目篩，得含鹽酸多西環(huán)素的載藥微粒。(2)將載藥微粒分散于適量的大豆油中，用膠體磨研磨至粒徑約100μm，用砂磨機(jī)進(jìn)一步研磨至粒徑小于8μm，然后加入剩余成份，用高剪切均質(zhì)機(jī)在5000rpm條件下經(jīng)多次均質(zhì)化后，制得10％鹽酸多西環(huán)素注射劑。實(shí)施例3、制備8％鹽酸多西環(huán)素注射劑制劑組成：鹽酸多西環(huán)素80g、P40780g、BHT0.2g、BHA0.1g、PG0.1g，注射用玉米油加至1升。制備方法：(1)在65-75℃將P407融化，然后加入鹽酸多西環(huán)素和相當(dāng)于多西環(huán)素2倍量的甲醇，充分?jǐn)嚢?，冷卻并減壓，除去甲醇，制得固溶體，將固溶體粉碎，過40目篩，得鹽酸多西環(huán)素/P407載藥微粒。(2)將載藥微粒分散于適量的玉米油中，用膠體磨研磨至粒徑約100μm，用砂磨機(jī)進(jìn)一步研磨至粒徑小于8μm，然后加入剩余成份，用高剪切均質(zhì)機(jī)在5000rpm條件下經(jīng)多次均質(zhì)化后，制得8％鹽酸多西環(huán)素注射劑。實(shí)施例4、制備20％鹽酸多西環(huán)素注射劑制劑組成：鹽酸多西環(huán)素20g、P40760g、IPM加至1升。制備方法：將鹽酸多西環(huán)素分散于已融化的P407中，冷卻固化后粉碎，將粉碎物分散于約2倍量的IPM中，用膠體磨研磨至粒徑小于100μm，再用砂磨機(jī)研磨至粒徑小于5μm，加入剩余介質(zhì)，用均質(zhì)機(jī)均質(zhì)化，得20％鹽酸多西環(huán)素注射劑。實(shí)施例5、制備12％鹽酸多西環(huán)素注射劑制劑組成：鹽酸多西環(huán)素120g、P407/HPMC(1∶0.6)固溶體70g，茶籽油加至1升。制備方法：(1)將P407和HPMC混合均勻，加入相當(dāng)于HPMC3-4倍量的甲醇，70-80℃回流，待HPMC完全溶解后，減壓蒸餾，除去甲醇，冷卻，得P407/HPMC固溶體，經(jīng)粉碎、過篩，得固溶體顆粒。(2)將鹽酸多西環(huán)素和固溶體顆粒分散于部分茶籽油中，用膠體磨和砂磨機(jī)研磨至粒徑小于20μm，加入剩余IPM，用高剪切均質(zhì)機(jī)均質(zhì)化即得本制劑。實(shí)施例6、制備20％鹽酸多西環(huán)素注射劑制劑組成：鹽酸多西環(huán)素20g、P40760g、IPM加至1升。制備方法：向相當(dāng)于鹽酸多西環(huán)素2倍量的IPM中，加入鹽酸多西環(huán)素和P407，混合，用膠體磨研磨至粒徑小于100μm，再用砂磨機(jī)研磨至粒徑小于5μm，加入剩余介質(zhì)，用均質(zhì)機(jī)均質(zhì)化，得20％鹽酸多西環(huán)素注射劑。實(shí)施例7、制備15％鹽酸多西環(huán)素注射劑制劑組成：每100ml含鹽酸多西環(huán)素15g、P4078g、H-HPC5g、BHT0.02g、BHA0.01g、PG0.005g、EDTA-2鈉0.12g，IPM加至終體積。制備方法：(1)在65-75℃將P407融化，然后加入鹽酸多西環(huán)素和H-HPC，充分混勻后加入相當(dāng)于鹽酸多西環(huán)素約2倍量的甲醇，充分混勻，降溫至50℃左右，減壓蒸餾，除去甲醇，制得固溶體，將固溶體粉碎，過40目篩，得含鹽酸多西環(huán)素的載藥微粒。(2)將載藥微粒分散于適量(相當(dāng)于載藥微粒量的1.5-2.5倍)的IPM中，用膠體磨研磨至粒徑約100μm，用砂磨機(jī)進(jìn)一步研磨至粒徑小于8μm，然后加入抗氧劑和其它剩余成份，用高剪切均質(zhì)機(jī)在5000rpm條件下經(jīng)多次均質(zhì)化后，制得15％鹽酸多西環(huán)素注射劑。實(shí)施例8、綿羊注射實(shí)施例7制劑和對比制劑后血藥濃度檢測對比制劑a：每100ml制劑含鹽酸多西環(huán)素15g、P4078g、H-HPC3.5g，無菌水加至終體積?，F(xiàn)用現(xiàn)配。對比制劑b：每100ml制劑含鹽酸多西環(huán)素超微粉15g、BHT0.01g、BHA0.01g、PG0.005g、EDTA-2鈉0.12g，IPM加至終體積。試驗方法：選健康綿羊9只，分3組，每組3只；分別皮下注射實(shí)施例7制劑和對比制劑，給藥劑量為15mg/kgb.w.，按時采血，離心分離血漿，將同一試驗組同一時間的血漿樣品等量混合后提取，在經(jīng)離心分離、過濾等過程，制得檢測樣品，采用高壓液相色譜法(C18柱)測定血漿中鹽酸多西環(huán)素濃度，實(shí)驗結(jié)果如下表所示。表中數(shù)值為每組3只羊檢測的平均值。實(shí)施例9、實(shí)施例7制劑穩(wěn)定性試驗將實(shí)施例7制劑于30-35℃放置12個月，用HPLC檢測鹽酸多西環(huán)素含量，結(jié)果顯示12個月期間實(shí)施例7制劑多西環(huán)素減少量占初始量的1.6-2.2％，表明本制劑很穩(wěn)定，優(yōu)于以水為介質(zhì)制備的制劑。