專利名稱：：具有快速釋放性質(zhì)的吸入式微粒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及具有快速釋放性質(zhì)的吸入式微粒。
背景技術(shù)：
：生物活性劑例如治療劑、診斷劑和預(yù)防劑的肺部給藥，提供了一種口腔給藥、透皮給藥及非腸道給藥等方式以外的很有吸引力的給藥方式。也就是說，肺部給藥通常可以在不需要醫(yī)學(xué)介入(自身給藥)的情況下完成，可以避免常常與注射療法相伴而來的痛苦，而且，生物活性劑的酶促降解和pH介導(dǎo)的降解(在口腔療法中經(jīng)常碰到)的量可以被顯著減少。此外，肺部為藥物的吸收提供了巨大的粘膜表面，而且被吸收的藥物不存在肝臟的首過效應(yīng)。而且，已經(jīng)有證據(jù)表明，可以通過肺部給藥或吸入而獲得多種分子(例如大分子)的較高的生物利用度。一般來說，肺部深處或肺泡是吸入的生物活性劑的首要靶點，特別是對于那些需要系統(tǒng)給藥的藥劑而言更是如此。在大部分的療法中，生物活性劑在進入局部和/或系統(tǒng)循環(huán)后的釋放動力學(xué)或釋放圖譜是一個很關(guān)鍵的考慮因素，包括那些采用肺部給藥的療法。也就是說，很多疾病或狀況需要給予控釋或緩釋水平的生物活性劑，以提供有效的治療。一般來說，這可以通過多劑量療法或者通過使用一種可緩釋所述藥物的系統(tǒng)而實現(xiàn)。但是，對肺系統(tǒng)給予生物活性劑時，所述藥劑可能會在給藥后迅速釋放。例如，Patton等人的美國專利5,997,848描述了通過肺部給予干粉形式的制劑以后，胰島素的吸收情況。在靈長類動物身上，胰島素水平在約30分鐘內(nèi)達到峰值，而人類則在約20分鐘內(nèi)達到峰值。此外，Heinemann、Traut和Heise在DiabeticMedicine(1463-72(1977))中指出在健康的志愿者身上通過輸入葡萄糖而進行的評估表明，吸入后所產(chǎn)生的作用在約30分鐘內(nèi)達到最大值的一半。糖尿病是嚴重影響人類健康的最常見的代謝類疾病。它可以被定義為慢性高血糖癥的狀態(tài)，也就是血糖過高，其原因是胰島素作用的相對或絕對缺乏。胰島素是由胰腺朗罕氏胰島內(nèi)的B細胞生產(chǎn)和分泌的一種多肽類激素。胰島素可以促進葡萄糖的利用、蛋白質(zhì)的合成以及中性脂的形成和儲存。葡萄糖進入肌肉時一般需要胰島素。葡萄糖，或稱“血糖”，是為人類和其他許多物種提供能量的糖類的主要來源。多余的葡萄糖以糖元的形式儲存在人體中，必要時，糖元將被代謝為葡萄糖以滿足人體的需要。與糖尿病相關(guān)的高血糖癥所產(chǎn)生的原因是由于胰島素水平相對較低或者根本沒有，因此導(dǎo)致葡萄糖利用不足以及由蛋白質(zhì)所生產(chǎn)的葡萄糖過多。糖尿病患者通常需要每天注射胰島素，而且常常是多次注射，這會給患者帶來痛苦。這種痛苦導(dǎo)致許多II型糖尿病患者拒絕注射胰島素，即使是在需要注射的時候。因此，需要適合于有效吸入的制劑，其中包括生物活性劑例如胰島素，其中，該制劑中生物活性劑的釋放效果至少要相當于現(xiàn)有的治療藥或預(yù)防藥，特別是對于糖尿病的治療。也需要適合于運送至肺部以及快速釋放至系統(tǒng)和/或局部循環(huán)的制劑。希望此類制劑能夠促進患者更好地配合治療，并且可以改善對疾病的治療和控制。發(fā)明概述本發(fā)明公開了一種制劑，其中包含含有如下成分的微粒按重量計，約40％到約60％DPPC，約30％到約50％胰島素以及約10％檸檬酸鈉。在一個實施例中，所述微粒中含有按重量計40％到60％DPPC，30％到50％胰島素以及10％檸檬酸鈉。在另一個實施例中，所述微粒中含有按重量計40％DPPC，50％胰島素以及10％檸檬酸鈉。在又一個實施例中，所述微粒中含有按重量計60％DPPC，30％胰島素以及10％檸檬酸鈉。本發(fā)明公開了一種制劑，其中包含含有如下成分的微粒按重量計，約75％到約80％DPPC，約10％到約15％胰島素以及約10％檸檬酸鈉。在一個實施例中，所述微粒中含有按重量計75％到80％DPPC，10％到15％胰島素以及10％檸檬酸鈉。在另一個實施例中，所述微粒中含有按重量計75％DPPC，15％胰島素以及10％檸檬酸鈉。在又一個實施例中，所述微粒中含有按重量計80％DPPC，10％胰島素以及10％檸檬酸鈉。本發(fā)明也公開了用于治療需要胰島素的人類患者的方法，包括通過肺部給藥，向需要治療的患者的呼吸道內(nèi)給予有效量的微粒，所述微粒中含有如下成分按重量計，約40％到約60％DPPC，約30％到約50％胰島素以及約10％檸檬酸鈉。在一個實施例中，所述微粒中含有按重量計40％到60％DPPC，30％到50％胰島素以及10％檸檬酸鈉。在另一個實施例中，所述微粒中含有按重量計40％DPPC，50％胰島素以及10％檸檬酸鈉。在又一個實施例中，所述微粒中含有按重量計60％DPPC，30％胰島素以及10％檸檬酸鈉。該方法對于治療糖尿病特別有用。如果需要的話，可以通過一個單獨的、呼吸致動的步驟給予所述微粒。本發(fā)明也公開了用于治療需要胰島素的人類患者的方法，包括通過肺部給藥，向需要治療的患者的呼吸道內(nèi)給予有效量的微粒，所述微粒中含有如下成分按重量計，約75％到約80％DPPC，約10％到約15％胰島素以及約10％檸檬酸鈉，其中，胰島素的釋放較為迅速。在一個實施例中，所述微粒中含有按重量計75％到80％DPPC，10％到15％胰島素以及10％檸檬酸鈉。在另一個實施例中，所述微粒中含有按重量計75％DPPC，15％胰島素以及10％檸檬酸鈉。在又一個實施例中，所述微粒中含有按重量計80％DPPC，10％胰島素以及10％檸檬酸鈉。該方法對于治療糖尿病特別有用。如果需要的話，可以通過一個單獨的、呼吸致動的步驟給予所述微粒。此外，本發(fā)明公開了向肺系統(tǒng)中給予有效量胰島素的方法，包括提供大量含有如下成分的微粒按重量計，約40％到約60％DPPC，約30％到約50％胰島素以及約10％檸檬酸鈉；通過同時分散并吸入微粒，而向人類受試者的呼吸道內(nèi)給予微粒，所述微粒來自于裝有大量微粒的容器，其中，胰島素的釋放較為迅速。對于快速釋放特別有用的是包含轉(zhuǎn)變溫度較低的磷脂的制劑。在一個實施例中，所述微粒中含有按重量計40％到60％DPPC，30％到50％胰島素以及10％檸檬酸鈉。在另一個實施例中，所述微粒中含有按重量計40％DPPC，50％胰島素以及10％檸檬酸鈉。在又一個實施例中，所述微粒中含有按重量計60％DPPC，30％胰島素以及10％檸檬酸鈉。本發(fā)明也公開了向肺系統(tǒng)中給予有效量胰島素的方法，包括提供大量含有如下成分的微粒按重量計，約75％到約80％DPPC，約10％到約15％胰島素以及約10％檸檬酸鈉；通過同時分散并吸入微粒，而向人類受試者的呼吸道內(nèi)給予微粒，所述微粒來自于裝有大量微粒的容器，其中，胰島素的釋放較為迅速。對于快速釋放特別有用的是包含轉(zhuǎn)變溫度較低的磷脂的制劑。在一個實施例中，所述微粒中含有按重量計75％到80％DPPC，10％到15％胰島素以及10％檸檬酸鈉。在另一個實施例中，所述微粒中含有按重量計75％DPPC，15％胰島素以及10％檸檬酸鈉。在又一個實施例中，所述微粒中含有按重量計80％DPPC，10％胰島素以及10％檸檬酸鈉。本發(fā)明也公開了一種試劑盒，包括兩個或更多個容器，其中包含選自此處所描述的胰島素制劑的單位劑量。例如，所述制劑可以是含有如下成分的微粒按重量計，約60％DPPC，約30％胰島素以及約10％檸檬酸鈉；或者，按重量計，約40％DPPC，約50％胰島素以及約10％檸檬酸鈉；或者，按重量計，約40％到約60％DPPC，約30％到約50％胰島素以及約10％檸檬酸鈉；或者，按重量計，約80％DPPC，約10％胰島素以及約10％檸檬酸鈉；或者，按重量計，約75％到約80％DPPC，約10％到約15％胰島素以及約10％檸檬酸鈉。在一個實施例中，所述容器中可以包含含有如下成分的微粒按重量計，60％DPPC，30％胰島素以及10％檸檬酸鈉；或者，按重量計，40％DPPC，50％胰島素以及10％檸檬酸鈉；或者，按重量計，40％到60％DPPC，30％到50％胰島素以及10％檸檬酸鈉；或者，按重量計，80％DPPC，10％胰島素以及10％檸檬酸鈉；或者，按重量計，75％到80％DPPC，10％到15％胰島素以及10％檸檬酸鈉。在同一試劑盒中含有不同制劑的容器的組合，也是本發(fā)明的一個特征。例如，所述試劑盒中可以包括兩個或更多個容器，其中包含單位劑量的微粒，所述微粒中含有40％到60％DPPC，30％到50％胰島素以及10％檸檬酸鈉；以及一個或更多個容器，其中包含單位劑量的微粒，所述微粒中含有按重量計，75％到80％DPPC，10％到15％胰島素以及10％檸檬酸鈉。在另一個實施例中，所述試劑盒中包括一個或更多個容器，其中包含單位劑量的微粒，所述微粒中含有60％DPPC，30％胰島素以及10％檸檬酸鈉；以及一個或更多個容器，其中包含單位劑量的微粒，所述微粒中含有按重量計，80％DPPC，10％胰島素以及10％檸檬酸鈉。在另一個實施例中，所述試劑盒中包括一個或更多個容器，其中包含微粒制劑，所述微粒中含有60％DPPC，30％胰島素以及10％檸檬酸鈉；以及一個或更多個容器，其中包含單位劑量的微粒，所述微粒中含有按重量計75％DPPC，15％胰島素以及10％檸檬酸鈉。本發(fā)明也公開了一種試劑盒，包括至少兩個容器，每個容器中都含有不同量的適于吸入的干粉胰島素。另一方面，本發(fā)明公開了一種制劑，其中包含含有如下成分的微粒按重量計60％DPPC，30％胰島素以及10％檸檬酸鈉，其中，制備所述制劑的方法包括制備DPPC溶液；制備胰島素和檸檬酸鈉溶液；將每種溶液加熱直50℃；將兩種溶液組合在一起，從而使得總?cè)苜|(zhì)濃度大于3克/升(例如5、10或15克/升)；以及對組合后的溶液進行噴霧干燥，以制備微粒。在一個實施例中，組合后的溶液的溶質(zhì)濃度為15克/升。再一方面，本發(fā)明公開了一種制劑，其中包含含有如下成分的微粒按重量計75％DPPC，15％胰島素以及10％檸檬酸鈉，其中，制備所述制劑的方法包括制備DPPC溶液；制備胰島素和檸檬酸鈉溶液；將每種溶液加熱直50℃；將兩種溶液組合在一起，從而使得總?cè)苜|(zhì)濃度大于3克/升(例如5、10或15克/升)；以及對組合后的溶液進行噴霧干燥，以制備微粒。在一個實施例中，組合后的溶液的溶質(zhì)濃度為15克/升。再一方面，本發(fā)明公開了一種制劑，其中包含含有如下成分的微粒按重量計40％DPPC，50％胰島素以及10％檸檬酸鈉，其中，制備所述制劑的方法包括制備DPPC溶液；制備胰島素和檸檬酸鈉溶液；將每種溶液加熱直50℃；將兩種溶液組合在一起，從而使得總?cè)苜|(zhì)濃度大于3克/升(例如5、10或15克/升)；以及對組合后的溶液進行噴霧干燥，以制備微粒。在一個實施例中，組合后的溶液的溶質(zhì)濃度為15克/升。在另一個實施例中，上述微粒中含有質(zhì)量為約1.5mg到約20mg的胰島素(例如，1.0、1.5、2.5、5。7.5、10、12.5、15、17.5、20或25mg)。在另一個實施例中，任何一種上述微粒中的胰島素劑量在約42IU到約540IU之間。對于治療人類而言，另一個有效劑量在約155IU到約170IU之間。在另一個實施例中，上述微粒的振實密度小于約0.4g/cm3，和/或中值幾何直徑為約5微米到約30微米之間，和/或空氣動力學(xué)直徑在約1微米到約5微米之間。本發(fā)明具有很多優(yōu)點。例如，適于吸入的微?？梢员辉O(shè)計為具有可控的釋放圖譜，具體地說，是較快的釋放圖譜。這一較快的釋放圖譜使得所給予的生物活性劑，具體地說是胰島素，在肺部的滯留期縮短，并減少了治療水平的生物活性劑存在于局部環(huán)境和系統(tǒng)循環(huán)中的時間。藥劑的迅速釋放，為目前正廣泛應(yīng)用的注射療法提供了一種理想的替代方案，而對于需要迅速釋放所述藥劑的治療劑、診斷劑和預(yù)防劑而言，例如在糖尿病的治療中所使用的胰島素，它們使用的正是注射療法。此外，本發(fā)明還提供了向肺系統(tǒng)給藥的方法，其中，吸入療法中常見的藥劑的較高初始釋放被增強，具有很高的初始釋放。因此，可以改善病人的配合情況以及舒適程度，這不僅僅是由于減少了給藥頻率，而且還因為提供了一種對病人而言更易接受的療法。這一干粉給藥系統(tǒng)可以通過一個很小很方便而且不貴的給藥設(shè)備有效地進行給藥。此外，簡單方便的吸入器以及室溫下穩(wěn)定的粉末，可以為目前的注射療法提供很有吸引力的替代方案。該系統(tǒng)有可能通過增強病人接受胰島素治療的意愿，而有助于改善糖尿病病人的血糖控制。圖1是服用吸入型胰島素的受試者的葡萄糖輸入速度(GIR)-時間圖。在這幅圖中，服用84IU吸入型胰島素的受試者的藥代動力學(xué)曲線以空心的正方形表示；服用168IU吸入型胰島素的受試者的藥代動力學(xué)曲線以實心的正方形表示；服用294IU吸入型胰島素的受試者的藥代動力學(xué)曲線以空心的圓圈表示。圖2是服用了吸入型胰島素(168IU)、皮下注射賴脯胰島素(IL；15IU)或皮下注射常規(guī)可溶性胰島素(RI；15IU)的受試者的葡萄糖輸入速度(GIR)-時間圖。在這幅圖中，服用15IU賴脯胰島素的受試者的藥代動力學(xué)曲線以空心的三角形表示；服用15IU常規(guī)可溶性胰島素的受試者的藥代動力學(xué)曲線以實心的三角形表示；服用168IU吸入型胰島素的受試者的藥代動力學(xué)曲線以實心的正方形表示。圖3是一幅柱狀圖，示出了吸入型胰島素(AI；84IU、168IU或294IU)、賴脯胰島素(IL；15IU)或常規(guī)可溶性胰島素(RI；15IU)的起效，以至早期50％GIRmax的時間(單位分鐘)的形式進行測定。圖4是一幅柱狀圖，示出了吸入型胰島素(84IU)、賴脯胰島素(IL；15IU)或常規(guī)可溶性胰島素(RI；15IU)的GIR-AUC0-3小時。圖5是一幅柱狀圖，示出了在給藥后的最初三小時或十小時內(nèi)，吸入型胰島素(84IU)的生物效能，表示為賴脯胰島素(IL；15IU)或常規(guī)可溶性胰島素(RI；15IU)的生物效能的百分比。圖6是一幅柱狀圖，示出了吸入型胰島素(AI；84IU、168IU或294IU)、賴脯胰島素(IL；15IU)或常規(guī)可溶性胰島素(RI；15IU)的GIR-AUC，是作為時間的函數(shù)進行的評估，其中的每一個數(shù)據(jù)點代表一種劑量。圖7示出了吸入型胰島素(AI；84IU、168IU或294IU)的劑量范圍內(nèi)的劑量反應(yīng)。在參考本發(fā)明描述得更為具體的優(yōu)選實施例以及附圖之后，本發(fā)明的上述目的和其他目的、特征以及優(yōu)點將會變得更為明顯。具體實施例方式本發(fā)明涉及能夠快速釋放生物活性劑(具體地說是胰島素)的微粒。本發(fā)明也公開了利用這些微粒治療疾病以及通過肺系統(tǒng)給藥的方法。因此，這些微粒具有快速釋放的性質(zhì)。此處所使用的術(shù)語“快速釋放”，是指通常在給藥后的最初兩個小時內(nèi)觀察到的增強了的藥代動力學(xué)反應(yīng)，更好的是在最初的一小時內(nèi)?？焖籴尫乓仓富钚詣┑尼尫?，具體地說是吸入的胰島素，其中，有效水平的制劑的釋放時間至少要與現(xiàn)有的皮下注射活性劑(具體地說，是胰島素lispro和常規(guī)可溶性胰島素)的釋放時間相同，最好是更短。在一個實施例中，快速釋放微粒是利用胰島素、檸檬酸鈉和磷脂制成的。目前認為，選擇適當?shù)牧字瑫绊戓尫艌D譜，下面將對此進行更為詳盡的解釋。在一個優(yōu)選實施例中，快速釋放的特征是，釋放時間變短并且釋放出來的制劑水平更高。本發(fā)明的微粒具有獨特的藥物釋放性質(zhì)。下面將會提到，釋放速率是可以控制的，SujitBasu等人2000年8月23日提交的標題為“ModulationofReleaseFromDryPowderFormulations”的美國專利申請09/644,736中，對此進行了進一步的描述?？梢愿鶕?jù)制劑中生物活性劑釋放的半數(shù)時間(half-time)對藥物的釋放速率進行描述。此處所使用的術(shù)語“半數(shù)時間”是指微粒中所含有的藥物初始有效載荷釋放50％所需要的時間。迅速或快速的藥物釋放速率通常小于30分鐘，其范圍在約1分鐘到約60分鐘之間。也可以通過釋放常數(shù)來描述藥物釋放速率?？梢酝ㄟ^下列方程之一來表示一級釋放常數(shù)Mpw(t)＝M(∞)*e-k*t(1)或者M(t)＝M(∞)*(1-e-k*t)(2)其中，k是一級釋放常數(shù)。M(∞)是藥物釋放系統(tǒng)，例如干粉，中藥物的總質(zhì)量；Mpw(t)是時刻t時保留在干粉中的藥物質(zhì)量。M(t)是時刻t時從干粉中釋放出來的藥物質(zhì)量。上述關(guān)系可以表示如下M(∞)＝Mpw(t)+M(t)(3)方程式(1)、(2)、(3)可以通過藥物釋放量(也就是質(zhì)量)來表示，或者通過指定體積的釋放介質(zhì)中釋放出來的藥物濃度來表示。例如，方程式(2)可以表示為C(t)＝C(∞)*(1-e-k*t)(4)其中，k是一級釋放常數(shù)。C(∞)是釋放介質(zhì)中藥物的理論最大濃度，C(t)是時刻t時從干粉釋放到釋放介質(zhì)中的藥物濃度。通過一個有名的方程式，給出了一級釋放動力學(xué)的“半數(shù)時間”或t50％，t50％＝0.693/k(5)利用一級釋放常數(shù)和t50％表示的藥物釋放速率，可以通過下述方程式進行計算k＝-ln(Mpw(t)/M(∞))/t(6)或者，k＝-ln[(M(∞)-M(t))/M(∞)]/t(7)可以通過調(diào)節(jié)微粒的熱學(xué)性質(zhì)或物理狀態(tài)轉(zhuǎn)變，而控制或優(yōu)化藥物從微粒中釋放出來的速度。本發(fā)明微粒的一個特征是其基質(zhì)轉(zhuǎn)變溫度。正如此處所使用的，術(shù)語“基質(zhì)轉(zhuǎn)變溫度”(matrixtransitiontemperature)是指微粒由分子運動性較低的玻璃態(tài)或固態(tài)，向更加無定形的、橡膠狀的或熔融的狀態(tài)或類似流體的相轉(zhuǎn)變的溫度。正如此處所使用的，“基質(zhì)轉(zhuǎn)變溫度”是指微粒的結(jié)構(gòu)完整性減小，從而使得藥物可以從微粒中更快地釋放出來時的溫度。在基質(zhì)轉(zhuǎn)變溫度以上，微粒結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，使得藥物分子的運動性增加，從而可以更快地釋放。與此相反，在基質(zhì)轉(zhuǎn)變溫度以下，藥物微粒的運動性受到限制，從而使得釋放速度變慢?！盎|(zhì)轉(zhuǎn)變溫度”可能涉及不同相變溫度，例如，熔融溫度(Tm)、結(jié)晶溫度(Tc)和玻璃轉(zhuǎn)變溫度(Tg)，它們代表固體內(nèi)有序性和/或分子運動性的改變。正如此處所使用的，術(shù)語“基質(zhì)轉(zhuǎn)變溫度”是指微?；|(zhì)的復(fù)合(composite)或主要轉(zhuǎn)變溫度，藥物在該溫度以上時的釋放速率要大于在該溫度以下時的釋放速率。從實驗角度講，可以通過現(xiàn)有技術(shù)中的方法確定基質(zhì)轉(zhuǎn)變溫度，具體地說，可以通過差式掃描量熱法(DSC)。可以用來描述微粒或干粉的基質(zhì)轉(zhuǎn)變行為的其他技術(shù)包括同步加速器X-射線衍射和冰凍蝕刻電子顯微術(shù)。可以利用基質(zhì)轉(zhuǎn)變溫度來制造具有預(yù)期藥物釋放動力學(xué)的微粒以及優(yōu)化微粒配方，使其具有預(yù)期的藥物釋放速率?？梢灾苽渚哂兄付ǖ幕|(zhì)轉(zhuǎn)變溫度的微粒，可以通過體外或體內(nèi)釋放試驗、藥代動力學(xué)研究及現(xiàn)有技術(shù)中公知的其他技術(shù)，來測試微粒的藥物釋放性質(zhì)?；|(zhì)轉(zhuǎn)變溫度和藥物釋放速率之間的關(guān)系一旦被建立起來，就可以通過形成并給予具有相應(yīng)基質(zhì)轉(zhuǎn)變溫度的微粒，而獲得預(yù)期釋放速率或目標釋放速率?？梢酝ㄟ^調(diào)節(jié)所給予微粒的基質(zhì)轉(zhuǎn)變溫度而改變或優(yōu)化藥物釋放速率。本發(fā)明的微粒中包括一種或多種材料，這些材料單獨使用或組合在一起，有助于或能夠使微粒具有可產(chǎn)生預(yù)期或目標藥物釋放速率的基質(zhì)轉(zhuǎn)變溫度。下面將進一步描述合適的材料或材料組合的性質(zhì)和實例。例如，為了使藥物具有較快的釋放速率，當被組合使用時，能夠產(chǎn)生較低的基質(zhì)轉(zhuǎn)變溫度的材料是優(yōu)選的。此處所使用的術(shù)語“較低的轉(zhuǎn)變溫度”是指微粒的基質(zhì)轉(zhuǎn)變溫度低于或約等于受試者的生理體溫。具有較低的轉(zhuǎn)變溫度的微粒，其結(jié)構(gòu)完整性往往較為有限，而且通常更加無定形、橡膠狀、處于熔融狀態(tài)或類似流體。不希望被限制于對作用機制的任何一種具體解釋，通常認為，對于基質(zhì)轉(zhuǎn)變溫度較低的微粒而言，當暴露于體溫(通常在37℃左右)和較高的濕度(肺部的濕度接近100％)下時，微粒基質(zhì)的完整性經(jīng)歷了轉(zhuǎn)變；而且，這些微粒的組成成分往往具有較高的分子運動性，從而使得藥物可以迅速釋放，使之可以被人體吸收。可以通過設(shè)計和制造包含由相變溫度較高的材料組成的混合物的微粒，而調(diào)整或調(diào)節(jié)所得到的微粒的基質(zhì)轉(zhuǎn)變溫度以及給定藥物的相應(yīng)釋放圖譜。將合適量的材料組合在一起以生產(chǎn)具有預(yù)期轉(zhuǎn)變溫度的微粒，可以通過實驗手段加以確定(determined)，例如，通過制備具有不同比例理想材料的微粒，測定混合物的基質(zhì)轉(zhuǎn)變溫度(例如通過DSC)，選擇具有預(yù)期基質(zhì)轉(zhuǎn)變溫度的組合物，以及進一步優(yōu)化所用材料的比例(該步驟是可選的)。可以考慮材料相互之間的混溶性(miscibility)。在其他條件相同的情況下，相互之間能夠混溶的材料往往會得到中間的總體基質(zhì)轉(zhuǎn)變溫度(overallmatrixtransitiontemperature)。另一方面，相互之間能夠混溶的材料所得到的總體基質(zhì)轉(zhuǎn)變溫度，一般來講，或者是主要決定于其中一種成分，或者會產(chǎn)生兩相釋放性質(zhì)(biphasicreleaseproperty)。在一個優(yōu)選實施例中，微粒中包含一種或多種磷脂。對所述磷脂或磷脂組合物進行選擇，以使微粒具有具體的藥物釋放性質(zhì)。適于給人類受試者進行肺部給藥的磷脂是優(yōu)選的。在一個實施例中，磷脂對于肺部是內(nèi)源性的。在另一個實施例中，磷脂對于肺部不是內(nèi)源性的。微粒中磷脂的含量按重量計可以在約1％到約99％之間。微粒中磷脂的含量優(yōu)選為按重量計約10％到約80％。在另一個實例中，微粒中磷脂的含量約為40％到80％，例如35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％或85％。在另一個實例中，所述磷脂為DPPC。磷脂的實例包括但不限于磷脂酸、磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇或其組合。也可以使用經(jīng)修飾的磷脂，例如其頭部基團被修飾的磷脂，例如被烷基化或經(jīng)聚乙二醇(PEG)修飾的磷脂。在一個優(yōu)選實施例中，微粒的基質(zhì)轉(zhuǎn)變溫度與相變溫度有關(guān)，由在制備微粒時所用的磷脂或磷脂組合的熔融溫度(Tm)、結(jié)晶溫度(Tc)和玻璃轉(zhuǎn)變溫度(Tg)所確定。Tm、Tc和Tg是現(xiàn)有技術(shù)中公知的術(shù)語。例如，PhospholipidHandbook(GregorCevc，editor，1993，Marcel-Dekker，Inc.)中就討論了這些術(shù)語。可以從文獻中得到磷脂或磷脂組合的相變溫度。列出了磷脂的相變溫度的文獻包括例如，AvantiPolarLipids(Alabaster，AL)Catalog或者PhospholipidHandbook(GregorCevc，editor，1993，Marcel-Dekker，Inc.)。在不同的文獻中所列出的轉(zhuǎn)變溫度的值可能會有小的變化，這可能是由實驗條件的差異造成的，例如水分含量。從實驗上講，可以通過現(xiàn)有技術(shù)中公知的方法確定相變溫度，具體地說，可以通過差式掃描量熱法。其他可以用于表征磷脂或磷脂組合相行為的技術(shù)包括同步加速器X-射線衍射和冰凍蝕刻電子顯微術(shù)。將合適量的兩種或更多種磷脂組合在一起以生產(chǎn)具有預(yù)期相變溫度的微粒，已經(jīng)在文獻中有所記載，例如，在PhospholipidHandbook(GregorCevc，editor，1993，Marcel-Dekker，Inc.)中。磷脂相互之間的混溶性可以在AvantiPolarLipids(Alabaster，AL)Catalog中找到。用于生產(chǎn)具有預(yù)期或目標基質(zhì)轉(zhuǎn)變溫度的微粒的磷脂的量，可以通過實驗手段加以確定，例如，通過制備由不同比例的感興趣的磷脂所組成的混合物，測定每種混合物的轉(zhuǎn)變溫度，并選擇具有預(yù)期轉(zhuǎn)變溫度的混合物。磷脂的混溶性對磷脂混合物基質(zhì)轉(zhuǎn)變溫度的效果，可以通過如下手段加以測定將第一種磷脂與其他的磷脂進行組合，所述的其他磷脂與第一種磷脂的混溶性不相同，并測定組合物的轉(zhuǎn)變溫度。也可以使用由一種或多種磷脂與其他材料所形成的組合物，以獲得預(yù)期的基質(zhì)轉(zhuǎn)變溫度。實例包括聚合物和其他生物材料，例如脂類、鞘脂類、膽固醇、表面活性劑、多聚氨基酸、多糖、蛋白質(zhì)、鹽等。可以通過上面描述的方法確定選定的量和混溶性參數(shù)，以獲得預(yù)期或目標基質(zhì)轉(zhuǎn)變溫度。一般來說，在制備具有快速釋放性質(zhì)的微粒時，磷脂、磷脂的組合以及磷脂與其他材料的組合是優(yōu)選的，它們可以產(chǎn)生不高于患者生理體溫的基質(zhì)轉(zhuǎn)變溫度。此處，此類磷脂或磷脂組合被認為具有較低的轉(zhuǎn)變溫度。表1中列出了轉(zhuǎn)變溫度較低的磷脂的幾個合適的實例。所示出的轉(zhuǎn)變溫度是通過AvantiPolarLipids(Alabaster，AL)Catalog獲得的。選自肺部內(nèi)源性磷脂的具有頭部基團的磷脂是優(yōu)選的，例如磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰甘油、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰肌醇或其組合。上述材料可以單獨使用或組合在一起使用。也可以使用其他相變溫度不高于患者體溫的磷脂，或者單獨使用，或者與其他磷脂或材料組合在一起使用。表1本發(fā)明的微粒，具體地說是快速釋放的微粒，是通過肺部給藥的。此處所使用的術(shù)語“肺部給藥”是指運送到呼吸道。此處所定義的術(shù)語“呼吸道”(respiratorytract)涵蓋氣道上部，包括口咽部和喉部；以及氣道下部，包括氣管以及后面分叉形成的支氣管和細支氣管(例如終末細支氣管和呼吸細支氣管)。氣道上部和下部合稱為氣道(conductingairway)。然后終末細支氣管分化為呼吸細支氣管，后者通向最終的呼吸區(qū)域，也就是肺泡或肺部深處。肺部深處或肺泡通常是用于系統(tǒng)給藥的吸入型治療劑的預(yù)期靶標。此處所使用的術(shù)語“肺部pH范圍”是指可以在患者的肺部出現(xiàn)的pH范圍。在人體中，該pH范圍通常在約6.4到約7.0之間，例如從6.4到約6.7。R.A.Parent在“ComparativeBiologyoftheNormalLung”，CRCPress，(1991)中報道了氣道壁液體(ALF)的pH值，在6.44到6.74之間。治療劑、預(yù)防劑或診斷劑，此處也可以被稱為“生物活性劑”、“藥劑”或“藥物”。微粒中治療劑、預(yù)防劑或診斷劑的量，按重量計可以在約0.1％到約95％之間。在一個實施例中，微粒中治療劑、預(yù)防劑或診斷劑的量按重量計為100％。在其他的實施例中，微粒中生物活性劑的量約為10％到50％，例如5％，10％，15％，20％，25％，30％，35％，40％，45％，50％或55％。也可以使用生物活性劑的組合。藥物分散于其中的微粒是優(yōu)選的。合適的生物活性劑包括那些可以局部給藥、系統(tǒng)給藥或兩者皆可的藥劑。此處所使用的術(shù)語“生物活性劑”是一種藥劑或其藥學(xué)上可接收的鹽，當其在體內(nèi)釋放時，具有預(yù)期的生物學(xué)活性，例如在體內(nèi)的治療、診斷和/或預(yù)防的性質(zhì)。生物活性劑的實例包括但不限于具有治療、診斷或預(yù)防活性的合成的無機和有機化合物、蛋白質(zhì)和肽、多糖和其他糖類、脂類以及DNA和RNA核酸序列?？梢允褂幂^寬分子量范圍內(nèi)的藥劑，例如在100到500,000克/摩爾之間或更大。藥劑可以具有多種生物學(xué)活性，例如血管活性劑，神經(jīng)活性劑，激素，抗凝血劑，免疫調(diào)節(jié)劑，細胞毒劑，預(yù)防劑，抗生素，抗病毒劑，反意(antisense)，抗原，抗腫瘤劑以及抗體。蛋白質(zhì)包括完整蛋白、突變型蛋白及其活性片段，例如胰島素、免疫球蛋白、抗體、細胞因子(例如淋巴因子、單核因子、趨化因子)、白介素、干擾素(β-IFN，α-IFN以及γ-IFN)、促紅細胞生成素、核酸酶、腫瘤壞死因子、集落刺激因子、酶(例如超氧化物歧化酶、組織纖維蛋白原激活因子)、腫瘤抑制因子、血液蛋白、激素及激素類似物(例如生長激素、促腎上腺皮質(zhì)激素以及促黃體生成素釋放激素(LHRH))、疫苗(例如腫瘤、細菌和病毒抗原)、抗原、凝血因子；生長因子；粒細胞集落刺激因子(“G-CSF”)；肽包括蛋白抑制劑、蛋白拮抗劑、蛋白興奮劑(proteinagonist)、降血鈣素；核酸包括例如反意分子、寡核苷酸及核酶。也可以給予多糖，例如肝素。一種特別有用的生物活性劑是胰島素，包括但不限于Humulin，Lente(HumulinL；人胰島素鋅懸浮液)，HumulinR(常規(guī)可溶性胰島素(RI))，HumulinUltralente(HumulinU)以及Humalog100(賴脯胰島素(insulinlispro)(IL))，EliLilly公司(Indianapolis，IN；100U/ml)出品。用于肺內(nèi)局部給藥的生物活性劑包括那些用于治療哮喘、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、肺氣腫或囊腫性纖維化的藥劑。例如，可以給予用于治療例如囊腫性纖維化等疾病的基因，也可以給予用于哮喘的beta類固醇興奮劑(betaagonistssteroids)、抗膽堿能藥以及白細胞三烯調(diào)節(jié)劑(leukotrienemodifiers)。其他的具體生物活性劑包括硫酸雌素酮、硫酸沙丁胺醇、副甲狀腺激素相關(guān)肽、生長激素抑制素、尼古丁、可樂寧、水楊酸鹽/酯、色甘酸鈉、沙美特羅(Salmeterol)、福莫特諾(formeterol)、L-多巴、甲基多巴肼或其組合、gabapenatin、氯氮(clorazepate)、氨甲酰氮草(carbamazepine)以及安定。核酸序列包括基因、反意分子以及核酶，所述反意分子可以，例如，與互補DNA結(jié)合從而抑制轉(zhuǎn)錄。微粒中可以包括多種診斷劑中的任何一種，以便在對患者給藥后，對藥劑進行局部或全身運送。例如，可以使用顯影劑，包括可以購得的用于正電子發(fā)射層析X射線攝影法(PET)、計算機輔助層析X射線攝影法(CAT)、單光子發(fā)射計算機化層析X射線攝影法、X射線、熒光透視法以及磁共振成像(MRI)的制劑。在MRI中用作造影劑(contrastagent)的合適材料的實例包括目前可以獲得的螯合釓，例如二乙烯三胺五乙酸(DTPA)和gadopentotatedimeglumine，以及鐵、鎂、錳、銅和鉻。適用于CAT和X射線的材料的實例包括用于靜脈給藥的基于碘的材料，例如以泛影葡胺和腦影酸鹽為代表的離子化單體，以及離子化二體，例如ioxagalte。可以通過現(xiàn)有的標準技術(shù)以及可以購得的設(shè)備對診斷劑進行檢測。微粒中還可以包含羧酸，該羧酸與藥劑和脂(具體地說是磷脂)不同。在一個實施例中，該羧酸包括至少兩個羧基。羧酸包括該羧酸的鹽以及兩種或更多種羧酸和/或其鹽的組合。在一個優(yōu)選實施例中，該羧酸是親水性羧酸或其鹽。合適的羧酸包括但不限于羥基二羧酸，羥基三羧酸等。優(yōu)選為檸檬酸及檸檬酸鹽，例如檸檬酸鈉。也可以使用羧酸和/或其鹽的組合物或混合物。微粒中羧酸的含量按重量計可以在約0％到約80％之間。微粒中羧酸的含量優(yōu)選為約10％到約20％，例如5％，10％，15％，20％或25％。適用于本發(fā)明的微粒還可以包含氨基酸。在一個優(yōu)選實施例中，所述氨基酸是疏水的。合適的天然疏水氨基酸包括但不限于亮氨酸、異亮氨酸、丙氨酸、纈氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸和色氨酸。也可以使用疏水氨基酸的組合物。非天然氨基酸包括beta-氨基酸。也可以使用D型、L型構(gòu)象的疏水氨基酸及其外消旋混合物。合適的疏水氨基酸包括氨基酸衍生物或類似物。此處所使用的氨基酸類似物包括具有如下結(jié)構(gòu)式的D型或L型構(gòu)象的氨基酸-NH-CHR-CO-，其中R是脂肪基、取代的脂肪基、苯基、取代的苯基、芳香基或取代的芳香基，其中R不對應(yīng)于天然氨基酸的側(cè)鏈。此處所使用的脂肪基包括直鏈、支鏈或環(huán)狀的C1-C8的烴基，包括完全飽和的，含有一個或兩個雜原子例如氮、氧或硫的，以及/或者含有一個或多個不飽和單元的。芳香基或芳基包括碳環(huán)芳香基，例如苯基和萘基，以及雜環(huán)芳香基，例如咪唑基、吲哚基、噻吩基、呋喃基、吡啶基、吡喃基、呃唑基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、喹啉基、異喹啉基(isoquinolinyl)以及吖啶基(acridintyl)。可以購得多種合適的氨基酸、氨基酸類似物及其鹽。其他的可以通過現(xiàn)有技術(shù)中公知的方法加以合成。例如，GreenandWuts，“ProtectingGroupsinOrganicSynthesis”，JohnWileyandSons，Chapters5and7，1991中，描述了一些合成技術(shù)。疏水性通常是就氨基酸在非極性溶劑和水之間的分配而定義的。疏水性氨基酸是那些偏愛非極性溶劑的氨基酸。氨基酸的相對疏水性可以通過一個疏水性尺度加以表示，在此尺度下，甘氨酸的值為0.5。在此尺度下，偏愛水的氨基酸的值在0.5以下，而偏愛非極性溶劑的氨基酸的值則在0.5以上。此處所使用的術(shù)語“疏水性氨基酸”是指在該疏水性尺度下的值大于或等于0.5的氨基酸，換句話說，是指分配于非極性酸中的傾向至少相當于甘氨酸的氨基酸。可以使用的氨基酸的實例包括但不限于甘氨酸、脯氨酸、丙氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、苯丙氨酸、色氨酸。優(yōu)選的氨基酸包括亮氨酸、異亮氨酸、丙氨酸、纈氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸和色氨酸。也可以使用疏水性氨基酸的組合物。而且，也可以使用疏水性和親水性(優(yōu)先分配于水中)氨基酸的組合物，其中，組合物總體是呈疏水性的。也可以使用一種或多種氨基酸的組合物。本發(fā)明的微粒中氨基酸的量按重量計可以在約0％到約60％之間。微粒中氨基酸的量優(yōu)選為按重量計在約5％到約30％之間。本發(fā)明的微粒中疏水性氨基酸的鹽的量按重量計可以在約0％到約60％之間。微粒中氨基酸鹽的量優(yōu)選為按重量計在約5％到約30％之間。在下述專利中請中描述了制備以及運送包含氨基酸的微粒的方法1999年8月25日提交的標題為“UseofSimpleAminoAcidstoFormPorousParticles”的美國專利申請09/382,959，以及2000年8月23日提交的標題為“UseofSimpleAminoAcidstoFormPorousParticles”的美國專利申請09/644,320，在此以引用的方式將這兩項專利申請中的全部教導(dǎo)包括在本文中。在又一個實施例中，微粒中也可以包括其他材料，例如緩沖鹽、葡聚糖、多糖、乳糖、海藻糖、環(huán)式糊精、蛋白質(zhì)、肽、多肽、脂肪酸、脂肪酸酯、無機化合物、磷酸鹽/酯。在本發(fā)明的一個實施例中，微粒中還可以包含聚合物。聚合物的使用可以進一步延長釋放。優(yōu)選為具有生物相容性或生物可降解性的聚合物。例如，1999年2月23日授權(quán)的Edwards等人的美國專利5,874,064中，就描述了此類聚合物，在此以引用的方式將該專利中的全部教導(dǎo)包括在本文中。在另一個實施例中，微粒中包括不同于前述帶電磷脂之一的表面活性劑。此處所使用的術(shù)語“表面活性劑”是指優(yōu)先吸收至不相融的兩相之間的界面上的任何制劑，例如在水和有機聚合物溶液之間的界面，水/空氣界面或有機溶劑/空氣界面。表面活性劑通常具有親水性部分和親脂性部分，從而使得在被吸收至微小微粒上之后，它們傾向于將基團遞送到不吸引相似包被的微粒部分的外部環(huán)境中，從而減少微粒的聚集。表面活性劑也可以促進治療劑或診斷劑的吸收，并提高制劑的生物利用度?？梢杂糜谥苽浔景l(fā)明的微粒的合適的表面活性劑包括但不限于十六烷醇；脂肪醇，例如聚乙二醇(PEG)；聚氧乙烯基-9-十二烷基醚；表面活性脂肪酸，例如棕櫚酸或油酸；甘膽酸鹽；枯草菌表面活性劑；apoloxomer；山梨糖醇酐脂肪酸酯，例如山梨糖醇酐三油酸酯(Span85)；以及四丁酚醛。微粒中表面活性劑的量按重量計可以在約0％到約60％之間。微粒中表面活性劑的量優(yōu)選為按重量計在約5％到約50％之間。應(yīng)當理解，當微粒中包含羧酸、多價鹽、氨基酸、表面活性劑或其任意組合時，微粒的這些成分與帶電磷脂之間可能會發(fā)生相互作用。微粒，此處也稱為粉末，可以以適于吸入的干粉的形式存在。在一個具體實施例中，微粒的振實密度(tapdensity)可以小于約0.4g/cm3。此處，振實密度小于約0.4g/cm3(例如0.4g/cm3)的微粒被稱為“空氣動力學(xué)上較輕的微?！?。更為優(yōu)選的是振實密度小于約0.1g/cm3(例如0.1g/cm3)的微粒?？諝鈩恿W(xué)上較輕的微粒具有優(yōu)選的大小，例如，體積中值幾何直徑(volumemediangeometricdiameter)(VMGD)至少約5微米(μm)。在一個實施例中，VMGD為約5μm到約30μm(例如5、10、15、20、25或30μm)。在本發(fā)明的另一個實施例中，微粒的VMGD為約9μm到約30μm。在其他的實施例中，微粒的中值直徑、質(zhì)量中值直徑(MMD)、質(zhì)量中值表面直徑(massmedianenvelopediameter)(MMED)或質(zhì)量中值幾何直徑(massmediangeometricdiameter)(MMGD)至少為約5μm，例如，從約5μm到約30μm(例如5、10、15、20、25或30μm)，或從約7μm到約8μm(例如6μm、7μm或8μm)?？諝鈩恿W(xué)上較輕的微粒的“質(zhì)量中值空氣動力學(xué)直徑”(massmedianaerodynamicdiameter)(MMAD)，此處也稱為“空氣動力學(xué)直徑”，最好在約1μm到約5μm之間(例如1、2、3、4或5μm)。在本發(fā)明的一個實施例中，MMAD在約1μm到約3μm之間。在另一個實施例中，MMAD在約3μm到約5μm之間。在本發(fā)明的另一個實施例中，微粒的表面質(zhì)量密度(envelopemassdensity)，此處也稱為“質(zhì)量密度”，小于約0.4g/cm3。各向同性微粒的表面質(zhì)量密度被定義為微粒的質(zhì)量除以可將該微粒包裹起來的最小球體的表面體積?？梢酝ㄟ^本領(lǐng)域技術(shù)人員熟悉的儀器測定振實密度，例如DualPlatformMicroprocessorControlledTapDensityTester(Vankel，NC)或者GeoPycTMinstrument(MicrometricsInstrumentCorp.，Norcross，GA30093)。振實密度是對表面質(zhì)量密度的標準度量。可以利用如下文獻中的方法確定振實密度USPBulkDensityandTappedDensity，UnitedStatesPharmacopiaconvention，Rockville，MD，10thSupplement，4950-4951，1999。對較低的振實密度有貢獻的特征包括不規(guī)則的表面構(gòu)造以及多孔結(jié)構(gòu)。微粒的直徑，例如它們的VMGD，可以通過電帶感應(yīng)設(shè)備(electricalzonesensinginstrument)例如MultisizerIIe(CoulterElectronic，Luton，Beds，England)，或者激光衍射設(shè)備(例如Helos，Sympatec，Princeton，NJ制造)進行測定。用于測定微粒直徑的其他設(shè)備在現(xiàn)有技術(shù)中是公知的。樣品中微粒直徑的范圍將依賴與多種因素，例如微粒的組成以及合成方法?？梢詫悠分形⒘４笮〉姆植歼M行選擇，從而可以在呼吸道的預(yù)期位點獲得最佳的沉積效果。從實驗上講，可以通過重力沉降法確定空氣動力學(xué)直徑，其中，全部微粒沉降到一定距離的時間被用于直接推斷微粒的空氣動力學(xué)直徑。一種間接測定質(zhì)量中值空氣動力學(xué)直徑(MMAD)的方法是多階液體撞擊器(multi-stageliquidimpinger)(MSLI)。可以通過下述方程式計算空氣動力學(xué)直徑daerdaer＝dg√ρtap其中，dg是幾何直徑，例如MMGD；ρ是粉末密度。振實密度小于約0.4g/cm3，中值直徑至少約5μm，空氣動力學(xué)直徑在約1μm到約5μm之間(最好在約1μm到約3μm之間)的微粒，更能夠逃脫口咽部的慣性和重力沉積，并將氣道或肺部深處作為其靶點。使用更大的、更加多孔的微粒是很有利的，因為與更小的、更密實的氣溶膠微粒，例如目前用于吸入療法的微粒，相比，它們能夠更有效地分散為氣溶膠。與更小的微粒相比，更大的、空氣動力學(xué)上較輕的微粒，優(yōu)選為VMGD至少約5μm的微粒，在避免被肺泡巨噬細胞吞噬以及從肺部清除方面也可能是更成功的，這是由于巨噬細胞胞質(zhì)溶膠空間的限制，使得超過一定尺寸的微粒被排除在外。當微粒直徑超過約3μm時，隨著直徑的增加，肺泡巨噬細胞對微粒的吞噬作用急劇減小。Kawaguchi，H.，etal.，Biomaterials761-66(1986)；Krenis，L.J.andStrauss，B.，Proc.Soc.Exp.Med.，107748-750(1961)；andRudt，S.andMuller，R.H.，J.Contr.Rel.，22263-272(1992)。對于在統(tǒng)計上具有各向同性形狀的微粒而言，例如表面粗糙的球體，微粒的表面體積大約相當于一個巨噬細胞將微粒完全吞噬所需的胞質(zhì)溶膠的體積。微?？梢杂蛇m當?shù)牟牧现瞥?，可以具有適當?shù)谋砻娲植诔潭取⒅睆胶驼駥嵜芏?，以便運送至呼吸道的選定區(qū)域，例如肺部深處或者氣道的上部或中部。例如，密度更高或更大的微?？梢杂糜跉獾郎喜康慕o藥，或者，樣品中由不同大小的微粒構(gòu)成的混合物(其中提供了相同或不同的治療劑)，可以在一次給藥中對肺部的不同目標區(qū)域進行給藥。對于氣道上部和中部的給藥而言，空氣動力學(xué)直徑在約3μm到約5μm之間的微粒是優(yōu)選的。對于肺部深處的給藥而言，空氣動力學(xué)直徑在約1μm到約3μm之間的微粒是優(yōu)選的。在一個實施例中，本發(fā)明的微粒的空氣動力學(xué)直徑為約1.3微米，2巴/16毫巴壓力下的平均幾何直徑為約7.5微米。在另一個實施例中，微粒中小于約3.4微米的微粒的細粒分數(shù)(fineparticlefraction)(FPF)為約44-45％，這可以通過2stageAndersonCascadeImpactor(ACI)assay檢測出來。在另一個實施例中，微粒中小于約5.6微米的微粒的細粒分數(shù)為約63-66％。利用2stageACIassay測定細粒分數(shù)的方法，對于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是公知的。下面給出了此類實驗的一個實例。通過使用reducedThermoAndersonCascadeImpactorwithtwostages測足細粒分數(shù)(FPF)。稱取10毫克粉末，裝入2號羥丙基甲基纖維素(HPMC)膠囊中。利用單步的、呼吸致動的干粉吸入器分散粉末，以60L/分操作2秒鐘。對平臺(stages)進行選擇，以便收集具有如下兩種有效截止直徑(effectivecutoffdiameter)(ECD)的微粒(1)在5.6微米和3.4微米之間以及(2)小于3.4微米，并與多孔濾過材料配合，收集沉積的粉末。通過重量分析法確定沉積在每個平臺上的質(zhì)量。然后，F(xiàn)PF被表示為裝入膠囊內(nèi)的總質(zhì)量的一部分。在另一個實施例中，本發(fā)明的微粒在1巴下的平均幾何直徑為約7微米到約8微米，通過RODOS測定。在另一個實施例中，微粒中小于約3.3微米的微粒的細粒分數(shù)為約35％到約40％，約40％到約45％或者約45％到約50％，按本文中所描述的方法通過三平臺ACI實驗測定。在正常的呼吸狀況下，氣溶膠的慣性撞擊和重力沉降是其在氣道和肺泡內(nèi)沉積的主要機理。Edwards，D.A.，J.AerosolSci.，26293-317(1995)。這兩種沉積機理的重要性隨著氣溶膠的質(zhì)量，而不是微粒(或表面)體積，而成比例增加。由于氣溶膠在肺部沉積的位點是由氣溶膠的質(zhì)量決定的(至少對于平均空氣動力學(xué)直徑大于約1μm的微粒)，因此，在所有其他物理參數(shù)都相同的情況下，通過增加微粒表面的不規(guī)則性和微粒的多孔性而減小振實密度，可以使具有更大微粒表面體積的微粒運送至肺部。與實際的表面球體直徑(envelopespherediameter)相比，振實密度較低的微粒的空氣動力學(xué)直徑較小。空氣動力學(xué)直徑daer與表面球體直徑d通過下述公式相互關(guān)聯(lián)(Gonda，I.，“Physico-chemicalprinciplesinaerosoldelivery，”inTopicsinPharmaceuticalSciences1991(eds.D.J.A.CrommelinandK.K.Midha)，pp.95-117，StuttgartMedpharmScientificPublishers，1992))daer＝d√ρ其中，表面質(zhì)量ρ的單位是g/cm3。在人肺部的肺泡區(qū)域產(chǎn)生最大沉積的單分散氣溶膠微粒(～60％)是空氣動力學(xué)直徑約為daer＝3μm。Heyder，J.etal.，J.AerosolSci.，17811-825(1986)。由于它們較小的表面質(zhì)量密度，空氣動力學(xué)上較輕的微粒(其中包含在肺部深處沉積最多的單分散吸入型粉末)的實際直徑d是，d＝3√ρμm(其中ρ＜1g/cm3)其中，d總是大于3μm。例如，表面質(zhì)量密度ρ＝0.1g/cm3的空氣動力學(xué)上較輕的微粒，將會在表面直徑大至9.5μm的微粒中表現(xiàn)出最大的沉積。微粒尺寸的增大，減少了微粒間的粘附力。Visser，J.，PowderTechnology，581-10。因此，微粒的尺寸較大，除了對較低的吞噬損失有所貢獻之外，還增大了表面質(zhì)量密度較低的微粒在肺部深處分散為氣溶膠的效率?？梢杂嬎憧諝鈩恿W(xué)直徑，以提供在肺部的最大沉積，而此前是通過使用很小的微粒而實現(xiàn)這一點的，所述很小的微粒的直徑小于約5微米，優(yōu)選為在約1微米和約3微米之間，這些微粒后面將遇到吞噬作用。選擇那些直徑更大但足夠輕的微粒(因此是“空氣動力學(xué)上較輕”的)，也會得到相同的肺部給藥效果，但尺寸更大的微粒不會被吞噬。與表面光滑的微粒相比，使用那些表面粗糙或不均勻的微粒可以改善給藥效果?？梢酝ㄟ^諸如過濾或離心之類的方法制造或分離合適的微粒，以提供具有預(yù)先選定的尺寸分布的微粒樣品。例如，樣品中多于約30％、50％、70％或80％的微粒的直徑，可以在選定的至少約5μm的范圍內(nèi)。例如，選定的范圍可以是在約5μm到約30μm之間，或者最好在約5μm到約15μm之間，其中，一定比例的微粒必須落在該選定的范圍內(nèi)。在一個優(yōu)選實施例中，至少一部分微粒的直徑在約9μm到約11μm之間?；蛘撸部梢詫⑽⒘悠分苽涑芍辽偌s90％、或最好約95％或約99％的微粒的直徑落在選定的范圍內(nèi)。微粒樣品中空氣動力學(xué)上較輕的、直徑更大的微粒的比例越高，其中所包含的治療劑或診斷劑對肺部的給藥效果就越好。直徑較大的微粒通常是指平均幾何直徑至少約5μm的微粒。可以通過噴霧干燥法制備微粒。例如，噴霧干燥混合物，此處也稱為“進料溶液”或“進料混合物”，被導(dǎo)入噴霧干燥器，所述噴霧干燥混合物中包括生物活性劑以及一種或多種帶電脂類，所述帶電脂類所攜帶的電荷同與其相關(guān)聯(lián)的生物活性劑所攜帶的電荷相反。例如，當使用蛋白質(zhì)生物活性劑時，該可以將該制劑溶于緩沖體系中，其pH值可以高于或低于該制劑的pI值。具體地說，例如，可以將胰島素溶于水性緩沖體系(例如檸檬酸、磷酸、乙酸等)或者0.01N的HCl中?？梢酝ㄟ^適當?shù)膲A溶液(例如1N的NaOH)將所得到的溶液的pH值調(diào)節(jié)到預(yù)期大小。在一個優(yōu)選實施例中，pH值可以被調(diào)節(jié)到約7.4。在該pH值下，胰島素分子帶有凈負電荷(pI＝5.5)。在另一個實施例中，pH值可以被調(diào)節(jié)到約4.0。在該pH值下，胰島素分子帶有凈正電荷(pI＝5.5)。此外，如果需要的話，可以將溶液加熱到其沸點以下的溫度，例如約50℃。陽離子磷脂通常被溶于有機溶劑或溶劑組合物中。然后，將這兩種溶液混合在一起，并將所得到的混合物進行噴霧干燥?？梢源嬖谟趪婌F干燥混合物中的合適的有機溶劑包括但不限于醇類，例如乙醇、甲醇、丙醇、異丙醇、丁醇等。其他的有機溶劑包括但不限于全氟化碳、二氯甲烷、氯仿、醚、乙酸乙酯、甲基特丁基醚(methyltert-butylether)等?？梢源嬖谟谶M料混合物中的水性溶劑包括水和緩沖溶液。有機溶劑和水性溶劑都可以存在于被導(dǎo)入噴霧干燥器的噴霧干燥混合物中。在一個實施例中，優(yōu)選的乙醇-水溶劑是乙醇∶水的比例在約50∶50到約90∶10之間?；旌衔锏膒H可以是中性、酸性或堿性。也可以加入pH緩沖液。pH范圍優(yōu)選為在約3到約10之間。被噴霧干燥的混合物中所使用的有機溶劑的總量，按重量計通常大于約98％。被噴霧干燥的混合物中固體的量，按重量計可以在約1.0％到約1.5％之間變化。在噴霧干燥過程中使用包含有機溶劑和水性溶劑的混合物，使得我們可以將親水和疏水成分組合使用，而同時不要求形成脂質(zhì)體或其他結(jié)構(gòu)或復(fù)合體，以助于微粒中此類成分組合物的溶解。例如，下述文獻中描述了合適的噴霧干燥技術(shù)K.Mastersin“SprayDryingHandbook，”JohnWiley&Sons，NewYork，1984。一般來講，在噴霧干燥過程中，灼熱氣體例如熱空氣或熱氮氣中的熱，被用于氣化小液滴中的溶劑，所述小液滴是通過將連續(xù)的液體進料進行霧化而形成的。其他的噴霧干燥技術(shù)是現(xiàn)有技術(shù)中公知的。在一個優(yōu)選實施例中使用了旋轉(zhuǎn)噴霧器(rotaryatomizer)。使用旋轉(zhuǎn)噴霧法的合適的噴霧干燥器的實例包括MobileMinorspraydryer，NiroDenmard制造。灼熱氣體可以是，例如，空氣、氮氣或氬氣。本發(fā)明的微粒最好通過如下條件獲得噴霧干燥時，流入溫度在約100℃和約400℃之間，流出溫度在約50℃和約130℃之間?？梢詫婌F干燥微粒的表面構(gòu)造(surfacetexture)制造得較為粗糙，從而減少微粒聚集并改善粉末的流動性。制造出來的噴霧干燥微粒可以具有某些特征，這些特征能夠改善經(jīng)干粉吸入器的煙霧化，并使微粒在口腔、咽喉和吸入設(shè)備中的沉積更少。在適于通過肺系統(tǒng)給藥的組合物中，可以使用本發(fā)明的微粒。例如，此類組合物中可以包括微粒以及藥學(xué)上可以接受的載體，用于對患者給藥，優(yōu)選為通過吸入給藥。所述微?？梢耘c其他通過類似方法制造的微粒共同運送，后者可以含有或不含有另一種藥物。2001年6月8日提交的美國專利申請09/878,146中，描述了共同運送微粒的方法，在此以引用的方式將該專利申請的全部教導(dǎo)包括在本文中。所述微粒也可以與不含治療劑的更大的載體微粒共同運送，后者的質(zhì)量中值直徑可以，例如，在約50μm到約100μm之間。微?？梢詥为毥o藥，也可以存在于任何一種合適的藥學(xué)上可以接受的載體例如液體(如鹽水)或者粉末之中，用于對呼吸系統(tǒng)給藥。其中包括藥劑，例如一種或多種藥物，的微粒，被給予到需要治療、預(yù)防或診斷的患者的呼吸道內(nèi)。對呼吸系統(tǒng)給予微粒時，可以采用現(xiàn)有技術(shù)中公知的方法。例如，通過吸入裝置給予微粒。在一個優(yōu)選實施例中，通過干粉吸入器(DPI)給予微粒。也可以使用定量吸入器(MDI)，噴霧器或安裝技術(shù)(installationtechnique)?，F(xiàn)有技術(shù)中已有多種合適的吸入設(shè)備和方法，可以用于對患者的呼吸道給藥。例如，下列專利中描述了合適的吸入器1976年8月5日授權(quán)的Valentini等人的美國專利4,069,819，1991年2月26日授權(quán)的Valentini等人的美國專利4,995,385，以及1999年12月7日授權(quán)的Patton等人的美國專利5,997,848。其他的實例包括但不限于Spinhaler(Fisons，Loughborough，U.K.)，Rotahaler(Glaxo-Wellcome，ResearchTriangleTechnologyPark.NorthCarolina)，F(xiàn)lowCaps(Hovione，Loures，Portugal)，Inhalator(Boehringer-Ingelheim，Germany)，以及Aerolizer(Novartis，Switzerland)，diskhaler(Glaxo-Wellcome，RTP，NC)，以及現(xiàn)有技術(shù)中已知的其他吸入器。優(yōu)選為通過干粉吸入器給予干粉形式的微粒。在一個實施例中，干粉吸入器是簡單的、呼吸致動的設(shè)備。下述專利申請中描述了合適的吸入器的一個實例DavidA.Edwards等人2001年4月16日提交的標題為“InhalationDeviceandMethod”的美國專利申請，律師案卷號為00l66.0109.US00。在此以引用的方式將該專利申請的全部內(nèi)容包括在本文中。該肺部給藥系統(tǒng)是特別合適的，因為它可以通過有效的干粉給藥方式，將小分子、蛋白質(zhì)和肽類藥物運送至肺部深處。特別適合運送的是獨特的多孔微粒，例如此處描述的胰島素微粒，它們的質(zhì)量密度較低，幾何直徑相對較大，并且空氣動力學(xué)特征很理想(Edwardsetal.，1998)?？梢酝ㄟ^簡單的吸入設(shè)備有效地分散和吸入這些微粒，由于粘附力較小，因此微?？梢院苋菀椎亟饩?。具體地說，這些微粒獨特的性質(zhì)使它們具有了同時被分散和吸入的能力。在一個實施例中，容器的體積至少為約0.37cm3。在另一個實施例中，容器的體積至少為約0.48cm3。在又一個實施例中，容器的體積至少為約0.67cm3或0.95cm3。本發(fā)明也可使用膠囊類容器，例如表明了具體尺寸的膠囊，例如2、1、0、00或000。例如，可以從Shionogi(Rochville，MD)獲得合適的膠囊。例如，可以從HueckFoils(Wall，NJ)獲得合適的泡罩(blister)。適用于本發(fā)明的其他容器以及其他體積，在現(xiàn)有技術(shù)中都是公知的。容器中包裹(enclose)或儲存著微粒和/或包含微粒的呼吸組合物。在一個實施例中，微粒和/或包含微粒的呼吸組合物以粉末的形式存在。如現(xiàn)有技術(shù)中所述，容器中填充有微粒和/或包含微粒的組合物。例如，可以使用真空填充(filling)或填壓(tamping)技術(shù)。一般來講，可以通過現(xiàn)有技術(shù)中公知的方法，以粉末來填充容器。在本發(fā)明的一個實施例中，被包裹或儲存在容器中的微粒的質(zhì)量至少為約5毫克。在另一個實施例中，被包裹或儲存在容器中的微粒的質(zhì)量中，包括質(zhì)量為至少約1.5毫克至至少約20毫克的生物活性劑。呼吸道給藥的微粒，最好沿著氣道上部(口咽部和喉部)、氣道下部以及終末細支氣管運行，其中，氣道下部包括氣管以及后面分叉形成的支氣管和細支氣管，終末細支氣管分化為呼吸細支氣管，后者通向最終的呼吸區(qū)域，也就是肺泡或肺部深處。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施例中，大部分質(zhì)量的微粒沉積在肺部深處。在本發(fā)明的另一個實施例中，微粒主要運送至氣道中部。也可以運送至氣道上部。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施例中，將微粒運送至肺系統(tǒng)是通過一個單步的、呼吸致動的步驟完成的，如下述文獻中所述2000年6月9日提交的標題為“HighEfficientDeliveryofaLargeTherapeuticMassAerosol”的美國專利申請09/591,307，以及2001年6月8日提交的標題為“HighlyEfficientDeliveryofaLargeTherapeuticMassAerosol”的美國部分繼續(xù)專利申請09/848,146。在此以引用的方式將其全部教導(dǎo)包括在本文中。在一個實施例中，在呼吸致動的設(shè)備里，分散和吸入同時發(fā)生在一次吸入過程中。下述專利申請中描述了合適的吸入器的一個實例DavidA.Edwards等人2001年4月16日提交的標題為“InhalationDeviceandMethod”的美國專利申請，律師案卷號為00166.0109.US00。在此以引用的方式將該專利申請的全部內(nèi)容包括在本文中。在本發(fā)明的另一個實施例中，儲存在吸入器容器中的微粒中50％質(zhì)量的微粒，通過一個單步的、呼吸致動的步驟，被運送至受試者(subject)的呼吸系統(tǒng)中。在又一個實施例中，通過將容器內(nèi)所包裹的微粒經(jīng)一次呼吸運送至受試者的呼吸道內(nèi)，而給予至少1.5毫克或至少5毫克或至少10毫克的生物活性劑。可以給予多至15毫克的生物活性劑。此處所使用的術(shù)語“有效量”是指獲得預(yù)期的治療或診斷效果或功效所需的量。藥物的實際有效量可以隨著所使用的具體藥物或其組合，所制備的具體組合物，給藥方式，患者的年齡、體重、病況以及有待治療的癥狀或病況的嚴重程度而變化。給予具體患者的劑量可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員通過常規(guī)手段而加以確定(例如通過合適的常規(guī)藥理方案)。在一個實施例中，劑量范圍為約40IU到約540IU，取決于患者的具體情況。同樣，優(yōu)選的劑量范圍為約84IU到約294IU，取決于患者的具體情況。吸入型胰島素的另一個有效劑量范圍是約155IU到約170IU。此處所使用的一個有用的換算系數(shù)是，27IU對應(yīng)于1毫克生物活性劑，具體地說是胰島素。在具體的治療實踐中，也可以對氣溶膠劑量、配方和給藥系統(tǒng)進行選擇，例如，下列文獻中就描述了這方面的內(nèi)容Gonda，I.“Aerosolsfordeliveryoftherapeuticanddiagnosticagentstotherespiratorytract，”inCriticalreviewsinTherapeuticDrugCarrierSystems，6273-313，1990；Moren，“Aerosoldosageformsandformulations，”inAerosolsinMedicine.Principles，DiagnosisandTherapy，Moren，etal.，Eds，Esevier，Amsterdam，1985.如上所述，可以通過釋放常數(shù)描述藥物的釋放速率。一級釋放常數(shù)可以通過下述方程式表示M(t)＝M(∞)*(1-e-k*t)(1)其中，k是一級釋放常數(shù)。M(∞)是藥物釋放系統(tǒng)，例如干粉，中藥物的總質(zhì)量。M(t)是在時刻t時，從干粉中釋放出來的藥物質(zhì)量。方程式(1)可以通過釋放出來的藥物的量(例如質(zhì)量)表示，或者，也可以通過在規(guī)定體積的釋放介質(zhì)中釋放出來的藥物濃度表示。例如，方程式(1)可以表示為C(t)＝C(∞)*(1-e-k*t)，或者，釋放(t)＝釋放(∞)*(1-e-k*t)(2)其中，k是一級釋放常數(shù)。C(∞)是藥物在釋放介質(zhì)中的最大理論濃度。C(t)是在時刻t時，從干粉中釋放至釋放介質(zhì)中的藥物濃度。通過釋放常數(shù)表示的藥物釋放速率可以通過下述方程式進行計算k＝-ln(M(∞)-M(t))/M(∞)/t(3)表5中所列出的釋放常數(shù)使用了方程式(2)。此處所使用的術(shù)語“一個”是指一個或多個。此處所使用的術(shù)語“名義劑量”(nominaldose)是指存在于用于給藥的微粒中的生物活性劑的總質(zhì)量，代表了給藥時所能獲得的生物活性劑的最大量。申請人所使用的術(shù)語基于干粉氣溶膠的肺部給藥，所述氣溶膠包括較大的多孔微粒，其中每一個微粒都能包括位于多孔基質(zhì)內(nèi)的藥物和賦形劑。這些微粒在幾何上較大，但質(zhì)量密度較小，空氣動力學(xué)尺寸也較小。這產(chǎn)生了易于分散的粉末。此處所描述的包括較大的多孔微粒的干粉氣溶膠的易分散性，使得我們可以通過簡單的、呼吸致動的基于膠囊的吸入器，對蛋白質(zhì)治療劑進行有效的系統(tǒng)給藥。本發(fā)明也描述了一種試劑盒，包括至少兩個容器，每個容器中含有不同量的適于吸入的胰島素干粉。所述粉末可以是但不限于此處所描述的任何一種此類胰島素干粉。此外，本發(fā)明也描述了一種試劑盒，包括兩個或更多個容器，含有兩個或更多個單位劑量，其中包含微粒，微粒中包含此處所描述的生物活性劑制劑。依賴于制劑中生物活性劑的生物利用度，制劑中所含有的生物活性劑的量，可以比運送至受試者血流中的生物活性劑的量更大。例如，如下面的實例部分中所述，給予受試者的容器中可以含有42IU，84IU等單位劑量，但是，如果生物利用度小于100％，那么只有一部分生物活性劑到達了受試者的血液。在一個實施例中，所述生物活性劑是胰島素。例如，所述制劑可以是含有如下成分的微粒按重量計，約60％DPPC，約30％胰島素以及約10％檸檬酸鈉；或者，按重量計，約40％DPPC，約50％胰島素以及約10％檸檬酸鈉；或者，按重量計，約40％到約60％DPPC，約30％到約50％胰島素以及約10％檸檬酸鈉；或者，按重量計，約80％DPPC，約10％胰島素以及約10％檸檬酸鈉；或者，按重量計，約75％DPPC，約15％胰島素以及約10％檸檬酸鈉；或者，按重量計，約75％到約80％DPPC，約10％到約15％胰島素以及約10％檸檬酸鈉。所述制劑可以是含有如下成分的微粒按重量計，60％DPPC，30％胰島素以及10％檸檬酸鈉；或者，按重量計，40％DPPC，50％胰島素以及10％檸檬酸鈉；或者，按重量計，40％到60％DPPC，30％到50％胰島素以及10％檸檬酸鈉；或者，按重量計，80％DPPC，10％胰島素以及10％檸檬酸鈉；或者，按重量計，75％DPPC，15％胰島素以及10％檸檬酸鈉；或者，按重量計，75％到80％DPPC，10％到15％胰島素以及10％檸檬酸鈉?？梢酝ㄟ^多種不同方法獲得預(yù)期的劑量。例如，容器的大小可以被改變，和/或裝入容器的制劑的體積和/或配方(例如，胰島素的百分比)也可以被改變，以獲得預(yù)期的劑量。預(yù)期的劑量可以是容器中所包含的劑量，或者是能夠被受試者利用的劑量(例如釋放至受試者血流中的量)。當容器沒有被制劑填滿時，容器的剩余空間可以空著，或者用填料裝到100％填滿。此處所描述的試劑盒可以用于對需要生物活性劑的受試者給予生物活性劑，例如胰島素。當所述生物活性劑是胰島素時，給予受試者的劑量可以由患者或醫(yī)務(wù)人員改變，例如，通過增大或減小裝有含胰島素微粒的容器(例如膠囊)的數(shù)目，從而增大或減小胰島素的單位劑量。當患者需要比常規(guī)劑量更大的胰島素劑量時，該患者可以自行服用額外的容器，或容器的不同組合，從而將胰島素的劑量提高至預(yù)期量。相反地，如果患者需要更少的胰島素時，該患者可以自行服用更少的容器，或容器的不同組合，從而將胰島素的劑量減少至預(yù)期量。該試劑盒中也可以包括說明書，用于指導(dǎo)如何使用試劑盒中的試劑(例如含有制劑的容器)。通過使用該試劑盒，可以獲得精確的劑量。實例材料在大鼠的體內(nèi)研究中，用于噴霧干燥的大部分胰島素是從BioBras(BeloHorizonte，Brazil)或Sigma(SaintLoius，MO)獲得的。在體外研究以及人的體內(nèi)研究中，Humulin，Lente(HumulinL人胰島素鋅懸浮液)，HumulinR(常規(guī)可溶性胰島素(IR))，HumulinUltralente(HumulinU)以及Humalog100(賴脯胰島素(insulinlispro)(IL))，是從EliLilly公司(Indianapolis，IN；100U/ml)獲得的。這些溶液均儲存在2-8℃。質(zhì)量中值空氣動力學(xué)直徑-MMAD(μm)利用噴霧器/空氣分散器(Aerosizer/Aerodisperser)(AmherstProcessInstrument，Amherst，MA)確定質(zhì)量中值空氣動力學(xué)直徑。將約2mg的粉末制劑加入到空氣分散器中，通過飛行時間(timeofflight)測定法確定空氣動力學(xué)直徑。細粒分數(shù)細粒分數(shù)可以用作表征分散化粉末的氣溶膠表現(xiàn)的一種方式。細粒分數(shù)描述了空氣傳播的微粒的尺寸分布。利用Cascadeimpactors進行重量分析，是測定空氣傳播的微粒的尺寸分布或細粒分數(shù)的一種方法。AndersenCascadeImpactor(ACI)是八平臺的沖擊器，可以按照空氣動力學(xué)尺寸將氣溶膠分為9個不同的部分。每個平臺的尺寸分界值(cutoff)依賴于ACI操作時的流速?？梢岳枚脚_折疊ACI(2stagecollapsedACI)測定細粒分數(shù)。二平臺折疊ACI僅由八平臺ACI的上面兩個平臺構(gòu)成，可以收集兩個不同的粉末部分。ACI由多個平臺構(gòu)成，這些平臺則由一系列噴嘴和撞擊表面(impactionsurface)。在每一個平臺上，氣溶膠氣流通過噴嘴撞擊到表面上。在氣溶膠氣流中，慣性足夠大的那些微粒將撞擊到平板上。那些慣性不夠大的微粒將不會撞擊到平板上，它們?nèi)匀槐Ａ粼跉馊苣z氣流中，并被攜帶至下一個平臺。ACI的每一個后續(xù)平臺中，氣溶膠在噴嘴中的速度更大，從而使得更小的微粒可以在每一個后續(xù)平臺上收集起來。本發(fā)明的微粒可以通過細粒分數(shù)表征。使用二平臺折疊AndersenCascadeImpactor確定細粒分數(shù)。具體地說，對二平臺折疊ACI進行校正，從而使得一號平臺所收集的粉末部分是由空氣動力學(xué)直徑小于5.6微米并且大于3.4微米的微粒構(gòu)成的。通過了一號平臺并沉積在收集過濾器中的粉末部分，是由空氣動力學(xué)直徑小于3.4微米的微粒構(gòu)成的。此類校正中，氣流約為60L/min。也可以使用三平臺ACI確定細粒分數(shù)。按照如下步驟進行三平臺ACI分析。組裝一臺帶屏蔽物(screen)的三平臺AndersenCascadeImpactor(ACI)(AndersenInstruments，Inc.，Smyrna，GA)，用于確定細粒分數(shù)。該裝置中使用了有效截止直徑為9.0、4.7和3.3微米(流速為28.3±2L/min)的ACI平臺0、2和3。每一個平臺都包括撞擊平板(impactionplate)、屏蔽物以及噴射板(jetplate)。所用的屏蔽物是不銹鋼150微米孔，5層燒結(jié)的Dynaporelaminate(MartinKurz&Co，Inc.，Mineola，NY)。用甲醇沖洗屏蔽物，待其干燥，然后浸入HPLC等級的水中，并立即置于該裝置的固體撞擊平板上。預(yù)先稱好的81mm玻璃纖維過濾器(AndersenInstruments，Inc.，Smyrna，GA)被用作該裝置的過濾介質(zhì)。在18到25℃以及20-40％的相對濕度下，進行三平臺AndersenCascadeImpactor分析。流過該裝置的氣流速率被校正到28.3±2L/min。將膠囊中裝滿粉末并放置在吸入設(shè)備內(nèi)部。然后，利用吸入器刺破膠囊，并將其放置于ACI的吹口適配器(mouthpieceadaptor)處。將空氣泵激活約4.2秒，以便將粉末從膠囊中取出。ACI被隱藏(dissembled)起來，并將玻璃纖維過濾器稱重。用過濾器上沉積的粉末質(zhì)量除以裝入膠囊中的粉末的總質(zhì)量，得到小于3.3微米的細粒分數(shù)(FPF)。此處所使用的術(shù)語“FPF＜5.6”和“小于5.6微米的細粒分數(shù)”，是指樣品中空氣動力學(xué)直徑小于5.6微米的微粒所占的分數(shù)。可以用二平臺折疊ACI的一號平臺和收集過濾器上沉積的微粒質(zhì)量，除以稱重后裝入膠囊中用于運送至儀器中的微粒質(zhì)量，得到FPF(＜5.6)。此處所使用的術(shù)語“FPF(＜3.4)”和“小于3.4微米的細粒分數(shù)”，是指空氣動力學(xué)直徑小于3.4微米的微粒所占的分數(shù)?？梢杂枚脚_折疊ACI的收集過濾器上沉積的微粒質(zhì)量，除以稱重后裝入膠囊中用于運送至儀器中的微粒質(zhì)量，得到FPF(＜3.4)。此處所使用的術(shù)語“FPF(＜3.3)”和“小于3.3微米的細粒分數(shù)”，是指空氣動力學(xué)直徑小于3.4微米的微粒所占的分數(shù)?？梢杂萌脚_折疊ACI的收集過濾器上沉積的微粒質(zhì)量，除以稱重后裝入膠囊中用于運送至儀器中的微粒質(zhì)量，得到FPF(＜3.3)?！靶∮?.6的FPF”已經(jīng)被證明與能夠進入患者肺部的粉末分數(shù)有關(guān)，而“小于3.4的FPF”(使用二平臺ACI)或“小于3.3的FPF”(使用三平臺ACI)已經(jīng)被證明與能夠到達患者肺部深處的粉末分數(shù)有關(guān)。這些關(guān)系提供了一種數(shù)量上的指標，可以用于微粒的優(yōu)化。體積中值幾何直徑-VMGD(μm)利用RODOS干粉分散器(Sympatec，Princeton，NJ)和HELOS激光衍射計(Sympatec)測定體積中值幾何直徑。將粉末裝入RODOS入口，并通過由控制在2巴的壓縮空氣流所產(chǎn)生的剪切力進行煙霧化(aerosolize)。接下來，氣溶膠可以被導(dǎo)入HELOS的測量區(qū)域，在此處，它將來自激光束的光散射掉，并產(chǎn)生Fraunhofer衍射圖樣，用于推斷微粒尺寸的分布以及確定中值。當注明時，體積中值幾何直徑是利用CoulterMultisizerII確定的。將約5-10mg粉末制劑加入到50mL的isotonII溶液中，直到微粒的一致性(coincidence)在5％到8％之間。大鼠血漿胰島素水平的確定使用人胰島素特異的RIA試劑盒(LincoResearch，Inc.，St.Charles，MO，catalog#HI-14K)對大鼠血漿胰島素進行定量測定。分析表明與大鼠胰島素的交叉反應(yīng)小于0.1％。對試劑盒分析步驟進行修改，以便適應(yīng)于從大鼠中得到的體積較小的血漿，其靈敏度約為5μU/mL。胰島素制劑的制備按如下步驟制備表2中所列出的粉末制劑。將脂溶于乙醇中，將胰島素、亮氨酸和/或檸檬酸鈉溶于水中，從而制備噴霧干燥前的溶液。然后，將乙醇溶液與水溶液混合，乙醇/水的比例為60/40。用于噴霧干燥的溶液的最終總?cè)苜|(zhì)濃度在1g/L到3g/L之間變化。例如，將600mgDPPC溶于600mL乙醇中，將100mg檸檬酸鈉和300mg胰島素溶于400mL水中，然后將這兩種溶液混合，得到1升的共溶劑(cosolvent)，其總?cè)苜|(zhì)濃度為1g/L(w/v)，從而制得DPPC/檸檬酸/胰島素(60/10/30)的噴霧干燥溶液。可以將三倍量的每種溶質(zhì)溶于同樣體積的乙醇和水中，從而制得溶質(zhì)濃度更高的3g/L(w/v)的溶液。所述溶液可以用于制備干粉。使用了Niro噴霧器便攜式噴霧干燥器(NiroAtomizerPortableSprayDryer)(Niro，Inc.，Columbus，MD)。具有不同壓力(1到5巴)的壓縮空氣進入位于干燥器上方的旋轉(zhuǎn)噴霧器(2,000到30,000rpm)中。通過電子定量泵(electronicmeteringpump)將不同速率(20到66mL/min)的液體進料連續(xù)泵入噴霧器中。測定流入和流出的溫度。手動控制流入溫度，流入溫度可以在100℃和400℃之間變化，并被確定在100、110、150、175或200℃，控制范圍為5℃。流出溫度取決于流入溫度以及其他因素，例如氣體進料和液體進料的速率(在50℃和130℃之間變化)。將一個容器與旋流器緊密連接，以便收集粉末產(chǎn)品。含胰島素粉末的物理特性列于表3中。MMAD和VMGD按照上面所述的方法確定。表3中列出的數(shù)據(jù)示出了含胰島素制劑的物理特性，這些數(shù)據(jù)對于確定制劑的可呼吸性(respirability)有一定預(yù)見作用。也就是說，如同前面所討論的，按照本文所提供的方法制備的粉末所具有的較大的幾何直徑、較小的空氣動力學(xué)直徑以及較低的密度，使得這些微粒很適于呼吸。表2胰島素粉末制劑同一制劑的不同類型(lots)。表3胰島素粉末制劑的物理特性§質(zhì)量中值空氣動力學(xué)直徑#在2巴壓力下的體積中值幾何直徑通過daer＝dg√ρ確定按重量計含30％胰島素的微粒的制備和包裝方法下面的實例描述了按重量計含30％胰島素的微粒(按重量計，DPPC/胰島素/檸檬酸，60/30/10)的制備。下面的步驟詳細描述了每批次為一升溶液的制備程序?？梢韵鄳?yīng)地按比例調(diào)整每批次產(chǎn)品的制備，從而得到更大體積的進料溶液。對于1號Niro噴霧干燥器(見下文)而言，每批次噴霧干燥的大小通常約為24升。按下述方法制備水溶液。按下述方法制備0.4LpH為2.5的檸檬酸緩沖液將1.26克的單水檸檬酸溶于0.4L注射用無菌水中，并用1.0N的HCl將pH調(diào)節(jié)至2.5。然后，將4.5克胰島素溶于該檸檬酸緩沖液中。最后，加入1.0N的氫氧化鈉(NaOH)，直到將pH調(diào)節(jié)至6.7。將9.0gDPPC溶于600mL乙醇(200proof，USP)中，制備有機溶液。在進行噴霧干燥之前，對水性溶液和有機溶液進行在線過濾(0.22微米過濾器)，然后在線加熱至50℃。將加熱后的水性溶液和加熱后的有機溶液進行在線靜態(tài)混合(staticmixing)，從而制得噴霧干燥的進料溶液。在進行混合時，應(yīng)使所得到的水性/有機進料溶液中含有最終體積組成為60％∶40％的乙醇∶水，其中溶質(zhì)濃度為15g/L。將進料溶液泵入噴霧干燥室的上部(1號Niro噴霧干燥器，ModelMobilMinor2000)，并將進料速率控制在50mL/min。在溶液進入噴霧干燥室之后，利用二液體噴霧器(2liquidatomizer)(LiquidCap2850andGasCap67147，SprayingSystemsInc)將溶液霧化為小液滴，其中，噴霧氣體的速率為70g/min。處理氣體，也就是維持在-20℃露點的灼熱氮氣，被引入干燥室的上部，其流速控制在94kg/hr。當小液滴與灼熱的氮氣相接觸時，液體被蒸發(fā)掉，多孔微粒形成。流入的干燥氣體(dryinggas)的溫度為135℃，流出的處理氣體(processgas)的溫度為67.5℃。微粒隨著處理氣體離開干燥室，并進入下游的產(chǎn)品過濾器。產(chǎn)品過濾器將多孔微粒從處理氣體中分離出來。處理氣體從收集器的頂部流出，并被導(dǎo)入排氣系統(tǒng)(exhaustsystem)。過濾器被周期性地施以反向脈沖(reversepulsed)，產(chǎn)品從產(chǎn)品過濾器的底部離開，并在粉末收集器中回收。所得到的微粒的振實密度為0.09g/cm3，通過標準方法測定；1巴壓力下的VMGD為7到8微米，通過RODOS測定；＜3.3微米的細粒分數(shù)(FPF)為45-50％，通過帶有濕屏蔽物的三平臺ACI分析得到，具體方法如前所述。將約8.7mg粉末裝入2號羥丙基甲基纖維素(HPMC)膠囊中，然后在Aclar-foilblistercards中進行包裝。將blistercards用鋁箔袋密封起來，其中包括一個小包裝的食品級干燥劑袋，用于防水。按重量計含10％胰島素的微粒的制備和包裝方法下面的內(nèi)容描述了按重量計含10％胰島素的微粒(按重量計，DPPC/胰島素/檸檬酸，80/10/10)的制備。下面的步驟詳細描述了每批次為一升溶液的制備程序。按下述方法制備水溶液。按下述方法制備0.4LpH為2.5的檸檬酸緩沖液將0.168克的單水檸檬酸溶于0.4L注射用無菌水中，并用1.0N的HCl將pH調(diào)節(jié)至2.5。然后，將0.2克胰島素溶于該檸檬酸緩沖液中。最后，加入1.0N的氫氧化鈉(NaOH)，直到將pH調(diào)節(jié)至6.7。將1.2gDPPC溶于600mL乙醇(200proof，USP)中，制備有機溶液。在進行噴霧干燥之前，對水性溶液和有機溶液進行在線過濾(0.22微米過濾器)，然后在線加熱至50℃。將加熱后的水性溶液和加熱后的有機溶液進行在線靜態(tài)混合(staticmixing)，從而制得噴霧干燥的進料溶液。在進行混合時，應(yīng)使所得到的水性/有機進料溶液中含有最終體積組成為60％∶40％的乙醇∶水，其中溶質(zhì)濃度為2g/L。將進料溶液泵入噴霧干燥室的上部(1號Niro噴霧干燥器，ModelMobilMinor2000)，并將進料速率控制在45mL/min。在溶液進入噴霧干燥室之后，利用二液體噴霧器(LiquidCap2850andGasCap67147，SprayingSystemsInc)將溶液霧化為小液滴，其中，噴霧氣體的速率為21.5g/min。處理氣體，也就是灼熱氮氣，被引入干燥室的上部，其流速控制在90kg/hr。當小液滴與灼熱的氮氣相接觸時，液體被蒸發(fā)掉，多孔微粒形成。流入的干燥氣體(的溫度為130℃，流出的處理氣體的溫度為67.5℃。微粒隨著處理氣體離開干燥室，并進入下游的產(chǎn)品過濾器。產(chǎn)品過濾器將多孔微粒從處理氣體中分離出來。處理氣體從收集器的頂部流出，并被導(dǎo)入排氣系統(tǒng)。過濾器被周期性地施以反向脈沖，產(chǎn)品從產(chǎn)品過濾器的底部離開，并在粉末收集器中回收。所得到的微粒的振實密度為0.06g/cm3，通過標準方法測定；1巴壓力下的VMGD為7到8微米，通過RODOS測定；FPF＜3.3為35-40％，通過帶有濕屏蔽物的三平臺ACI分析得到，具體方法如前所述。將約12.4mg粉末裝入2號羥丙基甲基纖維素(HPMC)膠囊中，然后在Aclar-foilblistercards中進行包裝。將blistercards用鋁箔袋密封起來，其中包括一個小包裝的食品級干燥劑袋，用于防水。按重量計含15％胰島素的微粒的制備和包裝方法下面的實例描述了按重量計含15％胰島素的微粒(按重量計，DPPC/胰島素/檸檬酸，75/15/10)的制備。下面的步驟詳細描述了每批次為一升溶液的制備程序。按下述方法制備水溶液。按下述方法制備0.4LpH為2.5的檸檬酸緩沖液將1.26克的單水檸檬酸溶于0.4L注射用無菌水中，并用1.0N的HCl將pH調(diào)節(jié)至2.5。然后，將2.25克胰島素溶于該檸檬酸緩沖液中。最后，加入1.0N的氫氧化鈉(NaOH)，直到將pH調(diào)節(jié)至6.7。將11.25gDPPC溶于600mL乙醇(200proof，USP)中，制備有機溶液。在進行噴霧干燥之前，對水性溶液和有機溶液進行在線過濾(0.22微米過濾器)，然后在線加熱至50℃。將加熱后的水性溶液和加熱后的有機溶液進行在線靜態(tài)混合(staticmixing)，從而制得噴霧干燥的進料溶液。在進行混合時，應(yīng)使所得到的水性/有機進料溶液中含有最終體積組成為60％∶40％的乙醇∶水，其中溶質(zhì)濃度為15g/L。將進料溶液泵入噴霧干燥室的上部(1號Niro噴霧干燥器，ModelMobilMinor2000)，并將進料速率控制在50mL/min。在溶液進入噴霧干燥室之后，利用二液體噴霧器(LiquidCap2850andGasCap67147，SprayingSystemsInc)將溶液霧化為小液滴，其中，噴霧氣體的速率為62g/min。處理氣體，也就是灼熱氮氣，被引入干燥室的上部，其流速控制在110kg/hr。當小液滴與灼熱的氮氣相接觸時，液體被蒸發(fā)掉，多孔微粒形成。流入的干燥氣體(的溫度為128℃，流出的處理氣體的溫度為67.5℃。微粒隨著處理氣體離開干燥室，并進入下游的產(chǎn)品過濾器。產(chǎn)品過濾器將多孔微粒從處理氣體中分離出來。處理氣體從收集器的頂部流出，并被導(dǎo)入排氣系統(tǒng)。過濾器被周期性地施以反向脈沖，產(chǎn)品從產(chǎn)品過濾器的底部離開，并在粉末收集器中回收。所得到的微粒在1巴壓力下的VMGD為7到8微米，通過RODOS測定；FPF＜3.3為40-45％，通過帶有濕屏蔽物的三平臺ACI分析得到。將約8.0mg粉末裝入2號羥丙基甲基纖維素(HPMC)膠囊中，然后在Aclar-foilblistercards中進行包裝。將blistercards用鋁箔袋密封起來，其中包括一個小包裝的食品級干燥劑袋，用于防水。大鼠體內(nèi)胰島素試驗進行下述實驗，以測定在將含胰島素的干粉制劑通過肺部給藥給予大鼠后，胰島素吸收進入大鼠血流的速度和程度。給予胰島素的名義劑量為每只大鼠100μg。為了達到名義劑量，給予每只大鼠的粉末的總質(zhì)量在0.2mg到1mg之間，取決于每種粉末的組成。從TaconicFarms(Germantown，NY)獲得雄性Sprague-Dawley大鼠。在使用時，動物的平均體重為386g(±5gS.E.M.)。給予動物充足的食物和水。利用吹入器(PennCentury，Philadelphia，PA)向大鼠的肺部送入粉末。將粉末轉(zhuǎn)移至吹入器的樣品室。然后，將吹入器的給藥管通過口腔插入氣管，并往前送，直至給藥管的頂部離隆突(carina)(第一個分叉)約1厘米。來自吹入器樣品室的用于運送粉末的空氣體積為3mL，通過10mL注射器給予。為了盡可能多地將粉末運送至大鼠體內(nèi)，將注射器再次充滿并排出的操作多進行兩次，達到每劑量粉末總計排出三次空氣。通過皮下注射，將可注射的胰島素制劑HumulinL給予大鼠，注射體積為7.2μL，名義劑量為25μg胰島素。在給大鼠服藥的前一天，將導(dǎo)管插入大鼠的頸靜脈。在取樣的時候，將血樣從頸靜脈導(dǎo)管中取出，并立即轉(zhuǎn)移至EDTA包被的管子中。取樣時間為給予粉末后的0、0.25、0.5、1、2、4、6、8和24小時。在某些情況下，可以加入額外的取樣時間(12小時)，和/或省略24小時的時間點。離心后，從血樣中收集血漿。如果在收集后24小時內(nèi)進行分析的話，就將血漿樣品儲存在4℃；如果在收集后的24小時以后才進行分析的話，就將血漿樣品儲存在-75℃。按上述方法測定血漿胰島素濃度。表4中列出了通過上述分析方法得到的血漿胰島素水平。表4中的體內(nèi)釋放數(shù)據(jù)表明，例如，與包含胰島素和帶正電的脂類(DPePC和DSePC)的粉末制劑相比，包含胰島素和脂DPPC的粉末制劑(制劑1和制劑13)具有更快的釋放速度，而前面一種粉末制劑在6到8小時之間的水平持續(xù)較高。含胰島素制劑的體外分析含有胰島素的干粉制劑的體外釋放，是按照Gietzetal，inEur.J.Pharm.Biopharm.，45259-264(1998)中描述的方法進行的，其中做了幾處改進。簡單地說，向20mL的帶有螺旋帽的玻璃閃爍管(screw-cappedglassscintillationvial)中，加入約10mg的每一種下述粉末制劑或溶液HumulinR、HumulinL或HumulinU；并通過聚苯乙烯攪拌棒，與4mL熱的(37℃)1％瓊脂糖溶液進行混合。然后，將得到的混合物分散至1mL等分試樣(aliquot)中，并裝入一組(5個)潔凈的20mL玻璃閃爍管中。將干粉在瓊脂糖中的分散液放入閉光的干燥室中，室溫下冷卻使其凝膠化。在約37℃下，在旋轉(zhuǎn)搖床(orbitalshaker)上進行釋放研究。在預(yù)定的時間點上，除去每個管子中原來的釋放介質(zhì)(1.5mL)，并加入新鮮的釋放介質(zhì)(1.5mL)。這些研究中常用的時間點是5分鐘，以及1、2、4、6和24小時。所采用的釋放介質(zhì)由如下物質(zhì)構(gòu)成20mM4-(2-羥乙基)-哌嗪-1-乙磺酸(HEPES)，138mMNaCl，0.5％Pluronic(SynperoicPE/F68；防止胰島素在釋放介質(zhì)中纖維化)；pH7.4。使用Piece(Rockford，IL)蛋白質(zhì)分析試劑盒(參見Anal.Biochem.，15076-85(1985))，以控制胰島素在釋放介質(zhì)中的濃度，該試劑盒中采用了已知濃度的胰島素標準。表4大鼠的血漿胰島素水平表5胰島素的體外釋放釋放(t)＝釋放(int)*(1-e-k*t)用作對照制劑表5中總結(jié)了表2中包含胰島素的粉末制劑的體外釋放數(shù)據(jù)以及一級釋放常數(shù)。人體臨床試驗下面描述了對具有獨特空氣動力學(xué)性質(zhì)的新型吸入式工程化胰島素所進行的人體臨床試驗，研究了其藥代動力學(xué)(PD)性質(zhì)、安全性以及耐受性。研究中使用euglycaemicclamp評價通過吸入器給予受試者的胰島素的代謝活性。這種clamp可以將胰島素給予正常的志愿者或糖尿病患者，而不會產(chǎn)生低血糖的危險，下面的文獻中詳細地描述了該技術(shù)Heinemanneta1.，Metab.Res.，26579-583(1994)；以及Clemensetal.，Clin.Chem.，281899-1904(1982)。將吸入型胰島素的干粉制劑(60％DPPC，30％胰島素以及10％檸檬酸)與作用較快的賴脯胰島素(insulinlispro)的商品化皮下(s.c.)注射液以及作用較快的常規(guī)可溶性胰島素s.c.制劑進行比較。選擇賴脯胰島素是由于其起效迅速而且作用的持續(xù)時間較短。術(shù)語“吸入型胰島素”、“胰島素干粉”以及“AI”，在本文中是可以互換使用的。選擇吸入型胰島素臨床試驗的受試者下面所描述的臨床試驗是按照赫爾辛基-愛丁堡修訂本宣言2000(DeclarationofHelsinki，Edinburghrevision，2000)進行適當?shù)尼t(yī)學(xué)考慮后進行的，同時也符合ICHE6NoteforGuidanceonGoodClinicalPractice。在選擇吸入型胰島素臨床試驗的受試者時，采用了下面的標準。成年健康男性受試者，年齡在18到45歲之間，在最近的六個月內(nèi)不吸煙。被選中的受試者一秒鐘用力呼氣體積(FEV1)＞預(yù)測體積的80％，體重指數(shù)(bodymassindex)為21-27kg/m2。此外，被選中的受試者愿意在進行clamp程序之前的24小時內(nèi)停止劇烈的體育運動，并具有正常的(4.4-6.4％)糖基化血紅蛋白(HbAIC)。采用下面的標準來明確地排除某些受試者。具有肺病或糖尿病歷史或證據(jù)的受試者被排除在外?，F(xiàn)在或以前具有顯著的醫(yī)學(xué)病況(significantmedicalcondition)或治療的受試者也被排除在外。此外，在此前的90天內(nèi)曾參加過藥物研究的受試者，在ECG(心電圖)上表現(xiàn)出顯著的臨床異常的受試者，以及在常規(guī)實驗室血液檢測中表現(xiàn)出顯著的臨床異常的受試者也被明確地排除在外。臨床研究的設(shè)計對一個開放標記的(open-label)完全隨機化的人群，進行三劑量的吸入型胰島素交叉研究。在5個測試期(分別為3至14天)內(nèi)，通過euglycaemicclamp(clamplevel5.0mmol/L，連續(xù)i.v.輸注胰島素0.15mU/kg/min)12小時，對研究中的受試者進行藥代動力學(xué)性質(zhì)的評估。在120分鐘的基線期之后，給12名健康男性志愿者(不吸煙，年齡為28.9±5.9歲，BMI23.5±2.3kg/m2)服用AI(84、168以及294IU)、賴脯胰島素(IL)(15IU)或常規(guī)可溶性胰島素(RI)(15IU)。對受試者進行培訓(xùn)，使其可以利用單步的呼吸致動的吸入器，通過一次較深的舒適的吸氣進行吸入。當操作在自動euglycaemicclamp的受控環(huán)境中進行時，受試者沒有血糖過低的危險。通過臨床和實驗室評估，對安全性和耐受性進行評價。在服藥前會取出一部分血樣，在服藥后也會定期取出一部分血樣，通過與賴脯胰島素和常規(guī)可溶性胰島素進行對比，而對每一劑量藥物的藥代動力學(xué)進行評估。具體地說，從每一個受試者體內(nèi)取出三個血樣，用于常規(guī)安全性檢測，如表6所示。此外，在每一個治療日中，取出多達21個血樣，每個樣品的體積在2mL到3mL之間，用于葡萄糖、血清胰島素和C肽的檢測。C肽是胰島素的C鏈，對人體而言是內(nèi)源性的。外源胰島素中不含有C鏈。因此，通過測定受試者體內(nèi)的C肽，可以得到受試者體內(nèi)內(nèi)源胰島素的水平。在4周內(nèi)取出的血樣總體積不超過500mL。表6每次訪問所收集的血液體積*3mL中包括用于胰島素和C肽樣品的足夠的血液完整實驗室安全性圖譜(fulllaboratorysafetyprofile)中包括血液學(xué)檢測，其中包括血紅蛋白計數(shù)、紅細胞計數(shù)、總白細胞計數(shù)以及血小板計數(shù)。如果WBC(whitebloodcell)結(jié)果為超過正常范圍10％或更多，那么要進行白細胞區(qū)別計數(shù)。也要測定部分促凝血酶原激酶時間(PartialThromboplastinTime)以及國際標準化比例(InternationalNormalizedRatio，INR)。此外，也要進行生物化學(xué)檢測，包括電解質(zhì)(鈉、鉀)、肌酸、總蛋白質(zhì)、膽紅素、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、gammaGT、堿性磷酸酶、脲濃度等。研究程序總體時間表和情況受試者的時間表中包括同意，篩選(screening)，五個單元內(nèi)測試期，四個淘汰期(washoutperiods)(單元外)以及最終的評估。在被限制在單元內(nèi)時，以及在服藥前的24小時內(nèi)，不允許進行劇烈的體育活動、吸煙或同時服用藥物(除非醫(yī)學(xué)上要求如此)。從前一天的22:00點開始，直到每個測試期結(jié)束，受試者都需要禁食，而且從服藥前的12小時開始，直到每個測試期結(jié)束，受試者都不能喝咖啡。篩選和初始評估在訪問2之前的21天之內(nèi)，要對受試者進行篩選，以便確定參加研究的人選。在受試者表示同意的時候即進入研究。然后，給受試者分配一個受試者號碼并進行隨機化。在該評估中，要按照如下參數(shù)進行并記錄受試者的資格，從而對受試者的資格進行評估研究中可選/不可選的標準；人口統(tǒng)計學(xué)參數(shù)(生日、性別等)；常規(guī)既往病史；身體檢查結(jié)果，包括生命指征、身高和體重；ECG結(jié)果；血液學(xué)、生物化學(xué)和尿液分析結(jié)果；藥尿檢查；尿繼續(xù)檢查(urinecontinuetest)結(jié)果；HbA1C水平；同時服用的藥物(最近14天內(nèi)的處方藥(POM)以及最近2天內(nèi)的OTC)；不良事件；以及基線肺功能檢測。身體檢查由一般性檢查構(gòu)成，其中包括在初始評估中測定的體重以及身高。生命指征檢測包括仰臥血壓、心率、呼吸頻率以及耳溫，在仰臥位休息5分鐘后測定。對每位受試者的相關(guān)病史和手術(shù)史進行記錄。針對每種醫(yī)學(xué)病況是否正在進行也要做出指示。作為對進入研究的受試者篩選工作的另一個組成部分，篩選中要測定12導(dǎo)聯(lián)心電圖并進行評價，如果在臨床上認為合適的話。作為受試者篩選工作的一個組成部分，尿液分析也要進行。尿液分析涉及蛋白質(zhì)、血液、葡萄糖和酮類的半定量(dipstick)分析。作為受試者篩選工作的一個組成部分，也要對濫用藥物進行尿檢，其中包括大麻、巴比妥酸鹽、安非他明、苯二氮、吩噻嗪以及可卡因。尿檢中也包括檢測可鐵寧。通過IKFE(Mainz，Germany)進行胰島素和C肽樣品的分析。在FOCUSClinicalDrugDevelopment(GmbH，Neuss，Germany)進行常規(guī)安全性測試并檢測HbA1C(只在訪問1進行評價)。在Profil(Neuss，Germany)進行血糖檢測。使用手控肺活量計(SchillerSpirovitSP200)測定肺功能。對一秒鐘用力呼氣體積(FEV1)、用力肺活量(forcedvitalcapacity)(FVC)和用力呼氣中期流速(FEF25-75％)的實際值和預(yù)期值進行校正。吸入程序讓受試者練習(xí)吸入程序，以便使受試者熟悉該程序，在每次吸入胰島素之前，都要重復(fù)進行該練習(xí)。具體地說，對受試者進行培訓(xùn)，使其可以利用吸入器，通過一次較深的舒適的吸氣進行吸入。在馬上就要使用之前，研究人員從blistercard中取出一個膠囊，并將其放入吸入器中。對每中分配的藥劑進行吸入給藥的劑量時間進行記錄。測試期，包括給予所研究的藥物在將受試者與一個人工裝置(Biostator)相連接以建立euglycaemic葡萄糖壓片鉗之前的較短時間內(nèi)，進行下述基線評估參加篩選以來身體狀況以及生命指征(仰臥血壓、心率、呼吸頻率以及耳溫)的改變；血液學(xué)；自從上次訪問以來的不良事件以及肺功能測試。劑量給藥程序T＝-2小時時，測試期開始，此時受試者的血糖水平受到自動化euglycaemic葡萄糖壓片鉗的控制。該程序從T＝-2小時持續(xù)至T＝0。將受試者進行隨機化以接收吸入的胰島素。受試者在T＝-2小時至T＝0之間，按上面所描述的方法進行吸入程序。在時刻T＝0時，受試者根據(jù)隨機化的指示，接受皮下注射的15IU賴脯胰島素、常規(guī)可溶性胰島素或一劑吸入型胰島素。當受試者接受吸入型胰島素時，在馬上就要使用之前，研究人員從blistercard中取出一個膠囊(相當于42IU/膠囊)，并將其放入吸入器中。受試者必須已經(jīng)放松，并正常呼吸至少5次，以接受所研究的藥物的治療。在正常呼氣的末期，吸入器的吹口被放置在嘴中。受試者通過嘴吸氣，進行較深的、舒適的吸氣，直至他感到肺部已經(jīng)充滿。然后，該患者屏住呼吸約5秒鐘(通過慢慢數(shù)到5)。重復(fù)進行該程序，直到已經(jīng)吸入了正確數(shù)目的膠囊，以便獲得目標胰島素劑量(參見表7)。對每個膠囊只允許進行一次呼吸。從吸入第一個膠囊開始(T＝0)，至吸入最后一個膠囊為止，所用的時間應(yīng)進行記錄。表7預(yù)期劑量所需的膠囊數(shù)目在下列時刻提取血樣，用于檢測胰島素水平時刻T＝-2小時，-1小時，0(在給予胰島素之前)，5、10、20、30、45分鐘，1.0、1.5、2.0、2.5、3.0小時，然后每小時取一次，直到T＝12小時。在T＝-2、0、1、2、4、8和12小時提取血樣，用于檢測C肽。在離開單元之前，進行肺功能測試。如果臨床上需要，也可以進行心電圖以及對脲和電解質(zhì)提取血樣。不給予所研究的藥物情況下的測試期在不給予所研究的藥物的測試期內(nèi)，這些訪問的程序和評價都按照上述方法進行，但是其中不給予所研究的藥物。此外，用于測定胰島素水平的血樣不按上述方法收集，而是在下述時刻進行收集時刻T＝-2小時，-1小時，0小時(在給予所研究的藥物的測試期內(nèi)，在該時刻將給予胰島素)，然后每小時取一次，直到T＝12小時。在T＝-2、0、1、2、4、8和12小時提取血樣，用于檢測C肽。在該次訪問時不進行肺功能測試。最終檢測進行下述最終評估并進行記錄身體檢查和生命指征；血液學(xué)、生物化學(xué)和尿液分析結(jié)果；同時報告的不良事件匯總；同時服用的藥物；臨床上如果需要的話，ECG；肺功能測試；以及研究完成狀態(tài)。藥代動力學(xué)樣品處理按照下述方法處理用于胰島素和C肽檢測的樣品。采集血樣后，將血樣置于室溫使其凝結(jié)，放置至少30分鐘，但不超過1小時。在室溫下進行離心(2000g，10分鐘)，然后將血清冰凍儲存在帶有螺旋帽的聚丙烯管中。每一個具體受試者的樣品都儲存在專門用于該受試者的容器中。利用Coat-CoatTMInsulinRIAKIT(DiagnosticProductsCorporationTK1N2)，檢測每名受試者的胰島素水平。利用HumanC-peptideRIA(radio-immunoassay)Kit(LincoResearchInc.HCP20K)測定C肽水平。利用現(xiàn)有技術(shù)中公知的程序來表征血清中胰島素和C肽的濃度-時間曲線。所研究藥物的規(guī)定單位劑量研究中所用的藥物為吸入型胰島素粉末(相當于42IU/膠囊的重組人胰島素)；賴脯胰島素以及常規(guī)可溶性胰島素(1.5mL藥筒，每個藥筒中含有100IU/mL，其中0.150mL用于給藥)。用于吸入的胰島素由本申請人制造并提供，為膠囊形式，其中含有相當于42IU/膠囊的重組人胰島素粉末藥物。吸入型胰島素儲存于25以下。結(jié)果如圖1所示，接受吸入型胰島素的受試者的葡萄糖輸入速度是劑量依賴的。此外，圖2示出了接受168IU的吸入型胰島素、賴脯胰島素或常規(guī)可溶性胰島素的受試者的葡萄糖輸入速度。168IU吸入型胰島素的藥代動力學(xué)性質(zhì)與賴脯胰島素和常規(guī)可溶性胰島素的藥代動力學(xué)性質(zhì)是相當?shù)?。針對上述研究中所涉及的受試者，也評價了吸入型胰島素、賴脯胰島素和常規(guī)可溶性胰島素的起效(onsetaction)。針對每一個受試者都計算了起效，以Tmax50％(單位分鐘)來描述。如圖3所示，與賴脯胰島素和常規(guī)可溶性胰島素相比，各種劑量的吸入型胰島素制劑的Tmax50％都更低一些。具體地說，與皮下注射的胰島素制劑賴脯胰島素(IL)和常規(guī)可溶性胰島素(RI)相比，AI表現(xiàn)出更快的起效(早期Tmax50％[分鐘]29(84IU)，35(168IU)，33(294IU)，41(IL)和70(RI)[與RI相比，AI(各種劑量)的p＜0.01])。因此，這些結(jié)果表明，吸入型胰島素制劑具有更快的起效。此外，在研究中，針對每一名受試者都評估了GIR-AUC0-3小時。在給藥后的第一個三小時(與一頓飯有關(guān)的常見時間段)內(nèi)，84IU劑量的吸入型胰島素表現(xiàn)出與常規(guī)胰島素最為接近的GIR-AUC0-3小時，如圖4所示。將84IU吸入型胰島素的生物效能與賴脯胰島素和常規(guī)可溶性胰島素的生物效能進行比較。如圖5所示，在給藥后的前三小時內(nèi)，84IU吸入型胰島素的生物效能相對于常規(guī)可溶性胰島素為22％，相對于賴脯胰島素為14％。在給藥后八小時，吸入型胰島素(84IU)的生物效能相對于常規(guī)可溶性胰島素的生物效能為16％，相對于賴脯胰島素為18％。針對每種制劑也計算了GIR-AUC，作為時間的函數(shù)進行評估，如圖6所示。對三種不同濃度的吸入型胰島素(84IU、168IU和294IU的自然對數(shù))的效果也進行了評價，針對它們在時刻0到服藥后10小時這一時間段內(nèi)，對每一位受試者的葡萄糖輸入速度(GIR-AUC0-10小時的自然對數(shù))的影響進行評價。該分析揭示了在所研究的吸入型胰島素濃度范圍內(nèi)的線性劑量反應(yīng)，如圖7所示。最后，針對本研究中所給予的藥物的藥代動力學(xué)性質(zhì)在不同受試者之間的差異，也通過計算所給予的每種藥物的差異系數(shù)(variationcoefficient)進行了檢查。如表8所示，基于口腔吸入胰島素后的AUC0-10小時的受試者之間的差異表明，其差異系數(shù)(CV)與通過皮下注射給藥的胰島素很相似。此外，同一受試者對各種劑量的吸入型胰島素的CV的估計值為AUC0-3小時20％，AUC0-10小時19％。這些估計值是通過利用對數(shù)轉(zhuǎn)換的AUC數(shù)據(jù)的線性混合模型而得到的，其中，受試者為隨機效果(randomeffect)，吸入型胰島素的劑量為固定效果(fixedefiect)。表8藥物在不同受試者之間的差異盡管本發(fā)明是參照其優(yōu)選實施例來具體描述的，但本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)該理解，在不脫離由所附權(quán)利要求限定的本發(fā)明的范圍的情況下，可以對其進行形式和細節(jié)的各種修改。權(quán)利要求1.一種包含微粒的制劑，所述微粒中含有按重量計60％DPPC，30％胰島素以及10％檸檬酸鈉。2.一種包含微粒的制劑，所述微粒中含有按重量計40％DPPC，50％胰島素以及10％檸檬酸鈉。3.一種包含微粒的制劑，所述微粒中含有按重量計40％到60％DPPC，30％到50％胰島素以及10％檸檬酸鈉。4.一種包含微粒的制劑，所述微粒中含有按重量計80％DPPC，10％胰島素以及10％檸檬酸鈉。5.一種包含微粒的制劑，所述微粒中含有按重量計75％DPPC，15％胰島素以及10％檸檬酸鈉。6.一種包含微粒的制劑，所述微粒中含有按重量計75％到80％DPPC，10％到15％胰島素以及10％檸檬酸鈉。7.如權(quán)利要求6所述的制劑，其中所述微粒中含有質(zhì)量在約1.5mg到約20mg之間的胰島素。8.如權(quán)利要求6所述的制劑，其中所述微粒中含有質(zhì)量約為每容器1.5mg的胰島素。9.如權(quán)利要求6所述的制劑，其中所述微粒中含有質(zhì)量約為每容器5mg的胰島素。10.如權(quán)利要求6所述的制劑，其中所述微粒中含有劑量在約42IU到約540IU之間的胰島素。11.如權(quán)利要求10所述的制劑，其中所述微粒中含有劑量為約42IU的胰島素。12.如權(quán)利要求10所述的制劑，其中所述微粒中含有劑量在約84IU到約294IU之間的胰島素。13.如權(quán)利要求6所述的制劑，其中所述微粒的振實密度小于約0.4g/cm3。14.如權(quán)利要求13所述的制劑，其中所述微粒的振實密度小于約0.1g/cm3。15.如權(quán)利要求6所述的制劑，其中所述微粒的中值幾何直徑在約5微米到約30微米之間。16.如權(quán)利要求15所述的制劑，其中所述微粒的中值幾何直徑在約7微米到約8微米之間。17.如權(quán)利要求6所述的制劑，其中所述微粒的空氣動力學(xué)直徑在約1微米到約5微米之間。18.如權(quán)利要求17所述的制劑，其中所述微粒的空氣動力學(xué)直徑在約1微米到約3微米之間。19.如權(quán)利要求17所述的制劑，其中所述微粒的空氣動力學(xué)直徑在約3微米到約5微米之間。20.如權(quán)利要求6所述的制劑，其中所述微粒中還包含氨基酸。21.如權(quán)利要求20所述的制劑，其中所述的氨基酸為亮氨酸、異亮氨酸、丙氨酸、纈氨酸、苯丙氨酸或其任意組合。22.一種治療需要胰島素的人類患者的方法，包括通過肺部給藥，向需要治療的患者的呼吸道內(nèi)給予有效量的微粒，所述微粒中含有如下成分按重量計60％DPPC，30％胰島素以及10％檸檬酸鈉，其中，胰島素的釋放很迅速。23.一種治療需要胰島素的人類患者的方法，包括通過肺部給藥，向需要治療的患者的呼吸道內(nèi)給予有效量的微粒，所述微粒中含有如下成分按重量計40％DPPC，50％胰島素以及10％檸檬酸鈉，其中，胰島素的釋放很迅速。24.一種治療需要胰島素的人類患者的方法，包括通過肺部給藥，向需要治療的患者的呼吸道內(nèi)給予有效量的微粒，所述微粒中含有如下成分按重量計40％到60％DPPC，30％到50％胰島素以及10％檸檬酸鈉，其中，胰島素的釋放很迅速。25.一種治療需要胰島素的人類患者的方法，包括通過肺部給藥，向需要治療的患者的呼吸道內(nèi)給予有效量的微粒，所述微粒中含有如下成分按重量計80％DPPC，10％胰島素以及10％檸檬酸鈉，其中，胰島素的釋放很迅速。26.一種治療需要胰島素的人類患者的方法，包括通過肺部給藥，向需要治療的患者的呼吸道內(nèi)給予有效量的微粒，所述微粒中含有如下成分按重量計75％DPPC，15％胰島素以及10％檸檬酸鈉，其中，胰島素的釋放很迅速。27.一種治療需要胰島素的人類患者的方法，包括通過肺部給藥，向需要治療的患者的呼吸道內(nèi)給予有效量的微粒，所述微粒中含有如下成分按重量計75％到80％DPPC，10％到15％胰島素以及10％檸檬酸鈉，其中，胰島素的釋放很迅速。28.如權(quán)利要求27所述的方法，其中，所述需要治療的患者患有糖尿病。29.如權(quán)利要求27所述的方法，其中，所述微粒中含有質(zhì)量在約1.5mg到約20mg之間的胰島素。30.如權(quán)利要求27所述的方法，其中，所述微粒中含有質(zhì)量約為每容器1.5mg的胰島素。31.如權(quán)利要求27所述的方法，其中，所述微粒中含有質(zhì)量約為每容器5mg的胰島素。32.如權(quán)利要求27所述的方法，其中，所述微粒中含有劑量在約42IU到約540IU之間的胰島素。33.如權(quán)利要求32所述的方法，其中，所述微粒中含有劑量為約42IU的胰島素。34.如權(quán)利要求32所述的方法，其中，所述微粒中含有劑量在約84IU到約294IU之間的胰島素。35.如權(quán)利要求27所述的方法，其中，所述微粒的振實密度小于約0.4g/cm3。36.如權(quán)利要求35所述的方法，其中，所述微粒的振實密度小于約0.1g/cm3。37.如權(quán)利要求27所述的方法，其中，所述微粒的中值幾何直徑在約5微米到約30微米之間。38.如權(quán)利要求37所述的方法，其中，所述微粒的中值幾何直徑在約7微米到約8微米之間。39.如權(quán)利要求27所述的方法，其中，所述微粒的空氣動力學(xué)直徑在約1微米到約5微米之間。40.如權(quán)利要求39所述的方法，其中，所述微粒的空氣動力學(xué)直徑在約1微米到約3微米之間。41.如權(quán)利要求39所述的方法，其中，所述微粒的空氣動力學(xué)直徑在約3微米到約5微米之間。42.如權(quán)利要求27所述的方法，其中，所述通過肺部給藥給予微粒包括將所述微粒運送至肺部深處。43.如權(quán)利要求27所述的方法，其中，所述通過肺部給藥給予微粒包括將所述微粒運送至氣道中部。44.如權(quán)利要求27所述的方法，其中，所述通過肺部給藥給予微粒包括將所述微粒運送至氣道上部。45.如權(quán)利要求27所述的方法，其中，所述微粒中還包含氨基酸。46.如權(quán)利要求45所述的方法，其中，所述的氨基酸為亮氨酸、異亮氨酸、丙氨酸、纈氨酸、苯丙氨酸或其任意組合。47.一種將有效量的胰島素運送至肺系統(tǒng)的方法，包括a)提供大量微粒，所述微粒中含有按重量計60％DPPC，30％胰島素以及10％檸檬酸鈉；以及b)通過同時分散并吸入微粒，而向人類受試者的呼吸道內(nèi)給予所述微粒，所述微粒來自于裝有所述大量微粒的容器，其中，胰島素的釋放很迅速。48.一種將有效量的胰島素運送至肺系統(tǒng)的方法，包括a)提供大量微粒，所述微粒中含有按重量計40％DPPC，50％胰島素以及10％檸檬酸鈉；以及b)通過同時分散并吸入微粒，而向人類受試者的呼吸道內(nèi)給予所述微粒，所述微粒來自于裝有所述大量微粒的容器，其中，胰島素的釋放很迅速。49.一種將有效量的胰島素運送至肺系統(tǒng)的方法，包括a)提供大量微粒，所述微粒中含有按重量計40％到60％DPPC，30％到50％胰島素以及10％檸檬酸鈉；以及b)通過同時分散并吸入微粒，而向人類受試者的呼吸道內(nèi)給予所述微粒，所述微粒來自于裝有所述大量微粒的容器，其中，胰島素的釋放很迅速。50.一種將有效量的胰島素運送至肺系統(tǒng)的方法，包括a)提供大量微粒，所述微粒中含有按重量計80％DPPC，10％胰島素以及10％檸檬酸鈉；以及b)通過同時分散并吸入微粒，而向人類受試者的呼吸道內(nèi)給予所述微粒，所述微粒來自于裝有所述大量微粒的容器，其中，胰島素的釋放很迅速。51.一種將有效量的胰島素運送至肺系統(tǒng)的方法，包括a)提供大量微粒，所述微粒中含有按重量計75％DPPC，15％胰島素以及10％檸檬酸鈉；以及b)通過同時分散并吸入微粒，而向人類受試者的呼吸道內(nèi)給予所述微粒，所述微粒來自于裝有所述大量微粒的容器，其中，胰島素的釋放很迅速。52.一種將有效量的胰島素運送至肺系統(tǒng)的方法，包括a)提供大量微粒，所述微粒中含有按重量計75％到80％DPPC，10％到15％胰島素以及10％檸檬酸鈉；以及b)通過同時分散并吸入微粒，而向人類受試者的呼吸道內(nèi)給予所述微粒，所述微粒來自于裝有所述大量微粒的容器，其中，胰島素的釋放很迅速。53.如權(quán)利要求52所述的方法，其中，所述微粒中含有質(zhì)量在約1.5mg到約20mg之間的胰島素。54.如權(quán)利要求52所述的方法，其中，所述微粒中含有質(zhì)量約為每容器1.5mg的胰島素。55.如權(quán)利要求52所述的方法，其中，述微粒中含有質(zhì)量約為每容器5mg的胰島素。56.如權(quán)利要求52所述的方法，其中，所述微粒中含有劑量在約42IU到約540IU之間的胰島素。57.如權(quán)利要求56所述的方法，其中，所述微粒中含有劑量為約42IU的胰島素。58.如權(quán)利要求56所述的方法，其中，所述微粒中含有劑量在約84IU到約294IU之間的胰島素。59.如權(quán)利要求52所述的方法，其中，所述微粒的振實密度小于約0.4g/cm3。60.如權(quán)利要求59所述的方法，其中，所述微粒的振實密度小于約0.1g/cm3。61.如權(quán)利要求52所述的方法，其中，所述微粒的中值幾何直徑在約5微米到約30微米之間。62.如權(quán)利要求61所述的方法，其中，所述微粒的中值幾何直徑在約7微米到約8微米之間。63.如權(quán)利要求52所述的方法，其中，所述微粒的空氣動力學(xué)直徑在約1微米到約5微米之間。64.如權(quán)利要求63所述的方法，其中，所述微粒的空氣動力學(xué)直徑在約1微米到約3微米之間。65.如權(quán)利要求63所述的方法，其中，所述微粒的空氣動力學(xué)直徑在約3微米到約5微米之間。66.如權(quán)利要求52所述的方法，其中，運送至肺系統(tǒng)包括運送至肺部深處。67.如權(quán)利要求52所述的方法，其中，運送至肺系統(tǒng)包括運送至氣道中部。68.如權(quán)利要求52所述的方法，其中，運送至肺系統(tǒng)包括運送至氣道上部。69.如權(quán)利要求52所述的方法，其中，所述微粒中還包含氨基酸。70.如權(quán)利要求69所述的方法，其中，所述的氨基酸為亮氨酸、異亮氨酸、丙氨酸、纈氨酸、苯丙氨酸或其任意組合。71.如權(quán)利要求6所述的制劑，其中，所述微粒中還包含轉(zhuǎn)變溫度低的磷脂。72.如權(quán)利要求27所述的方法，其中，所述微粒中還包含轉(zhuǎn)變溫度低的磷脂。73.一種用于胰島素給藥的試劑盒，包括兩個或更多個容器，其中，所述容器中包含選自由如下微粒構(gòu)成的組的單位劑量a)含有按重量計60％DPPC，30％胰島素以及10％檸檬酸鈉的微粒；b)含有按重量計40％DPPC，50％胰島素以及10％檸檬酸鈉的微粒；c)含有按重量計40％到60％DPPC，30％到50％胰島素以及10％檸檬酸鈉的微粒；d)含有按重量計75％DPPC，15％胰島素以及10％檸檬酸鈉的微粒；e)含有按重量計80％DPPC，10％胰島素以及10％檸檬酸鈉的微粒；f)含有按重量計75％DPPC，15％胰島素以及10％檸檬酸鈉的微粒。74.如權(quán)利要求73所述的試劑盒，其中，所述試劑盒中還包括指導(dǎo)如何使用所述兩個或更多個容器的說明書。75.如權(quán)利要求73所述的試劑盒，其中，所述一個或更多個容器中包含單位劑量的微粒，所述微粒中含有按重量計40％到60％DPPC，30％到50％胰島素以及10％檸檬酸鈉；以及所述一個或更多個容器中包含單位劑量的微粒，所述微粒中含有按重量計75％到80％DPPC，10％到15％胰島素以及10％檸檬酸鈉。76.如權(quán)利要求73所述的試劑盒，其中，所述一個或更多個容器中包含單位劑量的微粒，所述微粒中含有按重量計60％DPPC，30％胰島素以及10％檸檬酸鈉；以及所述一個或更多個容器中包含單位劑量的微粒，所述微粒中含有按重量計80％DPPC，10％胰島素以及10％檸檬酸鈉。77.一種包含微粒的制劑，所述微粒中含有按重量計60％DPPC，30％胰島素以及10％檸檬酸鈉，其中，制備所述制劑的方法包括a)制備DPPC溶液；b)制備胰島素和檸檬酸鈉溶液；c)將步驟a)和步驟b)的溶液加熱至50℃；d)將步驟c)中加熱后的溶液進行組合，從而使得總?cè)苜|(zhì)濃度大于3克/升；以及e)對步驟d)中形成的溶液進行噴霧干燥，以制備微粒。78.如權(quán)利要求77所述的方法，其中，步驟d)中所述的溶質(zhì)濃度為15克/升。79.一種試劑盒，包括至少兩個容器，每個容器中都含有不同量的適于吸入的干粉胰島素。全文摘要本發(fā)明一般地涉及包含微粒的制劑及其肺部給藥，其中，所述微粒中含有磷脂、生物活性劑以及賦形劑。本發(fā)明公開了吸入型干粉胰島素制劑。還公開了改進的制劑，其中包含DPPC、胰島素和檸檬酸鈉，所述制劑對糖尿病的治療很有用。本發(fā)明還涉及生物活性劑的肺部給藥方法，包括向需要治療或診斷的病人的呼吸道內(nèi)給予有效量的微粒，所述微粒中包含生物活性劑或其任意組合，其中，藥劑能夠從所給予的微粒中迅速釋放。文檔編號A61K47/48GK1518441SQ02812566公開日2004年8月4日申請日期2002年6月24日優(yōu)先權(quán)日2001年6月22日發(fā)明者詹妮弗·L·施米特克,陳東浩,理查德·P·巴泰基,戴維·A·愛德華茲,杰弗里·S·赫凱奇,P巴泰基,S赫凱奇,A愛德華茲,詹妮弗L施米特克申請人:先進吸入藥劑研究公司