一種艾葉的乙酸乙酯提取物及其制備、檢測(cè)方法和用途
【專利摘要】本發(fā)明涉及艾葉提取物、方法和應(yīng)用，具體涉及一種艾葉的乙酸乙酯提取物及其制備、檢測(cè)方法和用途，其有效成分是黃酮類和甾醇類。本發(fā)明提供了艾葉提取物在制備抗腫瘤的藥物中的應(yīng)用，并提供了應(yīng)用超高液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)機(jī)分析技術(shù)及結(jié)果構(gòu)建艾葉提取物指紋圖譜分析方法。該方法包括艾葉提取物的超高液相色譜-質(zhì)譜分析條件、色譜峰的特征。色譜組分的質(zhì)譜提供的化合物結(jié)構(gòu)信息等。本發(fā)明公開(kāi)的指紋圖譜及其技術(shù)可用于艾葉的品種鑒別及艾葉提取物的質(zhì)量監(jiān)控。
【專利說(shuō)明】一種艾葉的乙酸乙酯提取物及其制備、檢測(cè)方法和用途
[【技術(shù)領(lǐng)域】][0001]本發(fā)明涉及艾葉提取物、方法和應(yīng)用，具體涉及一種艾葉的乙酸乙酯提取物及其制備、檢測(cè)方法和用途。
[【背景技術(shù)】]
[0002]艾葉為菊科植物艾Artemisia argyi Levi, et Vant.的干燥葉。具有溫經(jīng)止血，散寒止痛的功效，臨床用于吐血、衄血、少腹冷痛、經(jīng)寒不調(diào)、宮冷不孕、外用治皮膚瘙癢。主要含揮發(fā)油、黃酮類、三萜類、鞣質(zhì)等成分。具有止血、抗菌抗病毒、抗腫瘤、清除自由基、鎮(zhèn)痛等多種生理活性。
[0003]國(guó)內(nèi)發(fā)明200810052604.5公開(kāi)了用乙酸乙酯和乙醇混合物作為溶劑對(duì)艾葉進(jìn)行提取；提取液經(jīng)過(guò)色譜柱層析得洗脫液用制備液相色譜梯度洗脫得到的洗脫液，流動(dòng)相為水和乙腈，收集40.0分鐘洗脫液得到有效組分。
[0004]國(guó)內(nèi)發(fā)明201110131147.0公開(kāi)了從艾葉中提取倍半萜內(nèi)酯類化合物ChlOToklotzchin的提取方法，首先用乙醇提取，經(jīng)大孔吸附樹(shù)脂、聚酰胺樹(shù)脂和硅膠柱層析分離。最后利用乙醇重結(jié)晶，得到了高純度的化合物。
[0005]國(guó)內(nèi)發(fā)明201210117611.5公開(kāi)了一種艾葉提取物，將艾葉用乙酸乙酯浸泡，然后回流，回流結(jié)束后固液分離，所得液體濃縮后，經(jīng)干燥即得。用于制備抗乙肝病毒藥物。
[0006]本方法較200810052604.5及201110131147.0制備時(shí)間短、方法操作簡(jiǎn)單。其主要抗腫瘤成分為黃酮類和留醇類，200810052604.5及201110131147.0抗腫瘤成分為揮發(fā)油類成分。201210117611.5為抗乙肝病毒藥物，此發(fā)明只做顏色反應(yīng)并未確定其具體成分。
[
【發(fā)明內(nèi)容】
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[0007]為了提取一種能夠治療腫瘤的艾葉有效成分，本發(fā)明提供了一種艾葉的乙酸乙酯提取物及其制備、檢測(cè)方法和用途。
[0008]為實(shí)現(xiàn)上述目的，設(shè)計(jì)一種艾葉的乙酸乙酯提取方法，包括以下步驟:
[0009]a.艾葉用石油醚浸泡18~36h，每100g艾葉需要300~800ml的石油醚，然后滲濾回收殘?jiān)?br> [0010]b.所述的殘?jiān)?0~90%的乙醇提取濃縮，濃縮后的濃縮液相對(duì)于于乙醇的密度為 1.15 ~1.20，
[0011]c.將所述的濃縮液用乙酸乙酯進(jìn)行萃取，收集乙酸乙酯層的萃取液。
[0012]上述提取方法還具有如下優(yōu)化的方案:
[0013]所述的步驟(b)中，乙醇提取的次數(shù)為2次，每次提取時(shí)間為2小時(shí)，合并2次提取液進(jìn)行所述的濃縮。
[0014]所述的步驟(b)中，乙醇的濃度為80%。
[0015]步驟(a)中，所述的艾葉先經(jīng)過(guò)粉碎，粉碎后的粒徑為250~850 μ m。
[0016]步驟(a)中，所述的浸泡，需要的時(shí)間為24h。[0017]一種用上述方法提取得到的艾葉乙酸乙酯提取物，主要成分為黃酮類和留醇類。具體為芹菜素、棕矢車(chē)菊素、木犀草素、異澤蘭黃素、β -谷留醇和槲皮素。
[0018]一種藥物制劑，由上述的姜黃的乙酸乙酯提取物和藥學(xué)上可接受的載體組成。
[0019]所述的制劑為片劑、散劑、片劑、膠囊或口服液。
[0020]一種檢測(cè)上述艾葉的乙酸乙酯提取物的方法，用超高效液相色譜-電噴霧串聯(lián)質(zhì)儀對(duì)所述艾葉提取物進(jìn)行分析，以獲得艾葉乙酸乙酯提取物的UPLC-Q-T0F-MS圖譜，
[0021]a.質(zhì)譜條件為:ESI離子源，正離子模式檢測(cè)；霧化器N2壓力為50psi ;干燥氣N2流速為15L/min ;質(zhì)量掃描范圍50~1200 ;自動(dòng)3級(jí)質(zhì)譜；
[0022]b.色譜分析條件為:色譜柱:Waters ACQUITY UPLC? BEHC18Column (5(tomX 2.I謹(jǐn).i d., 1.7 μ m) ;二元梯度洗脫，A相為0.1%甲酸水溶液；B相為乙腈，流速為0.3mL/min,梯度洗脫的程序如下:90%A相,逐漸減少A相比例,至14min時(shí)A相比例為O,保持2min,流速:0.3mL/min ;進(jìn)樣量3 μ L。
[0023]本發(fā)明首次提供了艾葉提取物在制備腫瘤的藥物中的應(yīng)用，并且提供了應(yīng)用超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)機(jī)分析技術(shù)及結(jié)果構(gòu)建艾葉提取物指紋圖譜的方法。該方法包括艾葉提取物的UPLC-MS分析條件。色譜峰的特征、色譜組分的質(zhì)譜提供的化合物結(jié)果信息等。本發(fā)明公開(kāi)的指紋圖譜及其技術(shù)可用于艾葉的品種鑒別及艾葉提取物的質(zhì)量監(jiān)控。
[【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】]·[0024]圖1為艾葉UPLC-Q-T0F/MS正離子模式下總離子流圖。
[【具體實(shí)施方式】]
[0025]為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。本申請(qǐng)中的生產(chǎn)設(shè)備都是本領(lǐng)域的常用設(shè)備，應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
[0026]實(shí)施例1:
[0027]艾葉的乙酸乙酯提取物
[0028]由以下方法制備:艾葉粉碎，過(guò)35目篩得到粒徑為250 μ m的艾葉顆粒，稱取艾葉顆粒500g，用2000ml石油醚滲濾，先用石油醚浸泡18h，至滲漉液顏色變淺(滲濾液約為2500ml )，回收殘?jiān)?，揮干殘?jiān)械氖兔?，?0%乙醇提取2次，每次乙醇用量為2500ml，每次提取時(shí)間為2小時(shí)，合并提取液，將其減壓濃縮至無(wú)醇味，相對(duì)密度為1.15-1.20，用乙酸乙酯萃取，收集上層萃取液，蒸干后得乙酸乙酯提取物。
[0029]實(shí)施例2
[0030]艾葉的乙酸乙酯提取物
[0031]由以下方法制備:取艾葉粉碎，過(guò)20目篩得到粒徑為850 μ m的艾葉顆粒，稱取艾葉顆粒500g，用1500ml石油醚浸泡24h，得到殘?jiān)蜐B濾液(滲濾液體積約為2000)，將殘?jiān)鼡]干石油醚，濃度為80%的乙醇提取2次，每次乙醇用量為1500ml，每次提取時(shí)間為2小時(shí)，合并兩次提取液，減壓濃縮至相對(duì)密度1.15-1.20，得乙醇濃縮液，用乙酸乙酯萃取，得到上層乙酸乙酯萃取液，烘干后得乙酸乙酯提取物。
[0032]實(shí)施例3[0033]艾葉的乙酸乙酯提取物
[0034]由以下方法制備::取艾葉粉碎，過(guò)30目篩得到粒徑為450 μ m的艾葉顆粒，艾葉用石油醚滲濾，先用2000ml石油醚浸泡36h，得到殘?jiān)蜐B濾液(滲濾液體積約為2500ml)，揮干殘?jiān)械氖兔?，?0%乙醇提取，提取3次，每次乙醇用量為2000ml，提取時(shí)間為3小時(shí)，合并提取液，然后濃縮至無(wú)醇味，相對(duì)密度為1.15-1.20，用乙酸乙酯萃取，取上層的乙酸乙酯萃取液，烘干后得乙酸乙酯提取物，干燥后所得的艾葉提取物為棕黑色。
[0035]本發(fā)明所得的艾葉提取物對(duì)腫瘤有預(yù)防和治療作用。可以按照常規(guī)制劑工藝，將本發(fā)明所述的艾葉提取物制備成任何一種適合于臨床使用的制劑，例如散劑、片劑。膠囊、口服液等。
[0036]實(shí)施例4
[0037]艾葉的乙酸乙酯提取物的顆粒劑
[0038]1、組成:艾葉的乙酸乙酯提取物(實(shí)施例2的方法制備)50g，淀粉15g，微晶纖維素20g，硬脂酸鎂6g。
[0039]2、制備方法:按照配比稱取原輔料，按照等量遞加法混合均勻，直接壓片。
[0040]實(shí)施例5
[0041]對(duì)艾葉抗腫瘤的藥物的檢測(cè):
[0042]用超高效液相色譜-電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜對(duì)實(shí)施例1的艾葉乙酸乙酯提取物進(jìn)行分析以獲得提取物的指紋圖譜。其色譜分析條件為:Waters ACQUITY UPLC? BEHC18Column(50mmX2.lmm.1 d.，1.7μm)柱；二元梯度洗脫，A相為0.1%甲酸水溶液，B相為乙腈流速0.3mL/min;進(jìn)樣量3 μ L。
[0043]優(yōu)選的色譜條件:
[0044]
【權(quán)利要求】
1.一種艾葉的乙酸乙酯提取方法，其特征在于包括以下步驟: a.艾葉用石油醚浸泡18~36h，每100g艾葉需要300~800ml的石油醚，然后滲濾回收殘?jiān)? b.所述的殘?jiān)?0~90%的乙醇提取濃縮，濃縮后的濃縮液相對(duì)于于乙醇的密度為1.15 ~1.20， c.將所述的濃縮液用乙酸乙酯進(jìn)行萃取，收集乙酸乙酯層的萃取液。
2.如權(quán)利要求1所述的艾葉的乙酸乙酯提取方法，其特征在于所述的步驟(b)中，乙醇提取的次數(shù)為2次，每次提取時(shí)間為2小時(shí)，合并2次提取液進(jìn)行所述的濃縮。
3.如權(quán)利要求1所述的艾葉的乙酸乙酯提取方法，其特征在于所述的步驟(b)中，乙醇的濃度為80%。
4.如權(quán)利要求1所述的艾葉的乙酸乙酯提取方法，其特征在于步驟(a)中，所述的艾葉先經(jīng)過(guò)粉碎，粉碎后的粒徑為250~850 μ m。
5.如權(quán)利要求1所述的艾葉的乙酸乙酯提取方法，其特征在于步驟(a)中，所述的浸泡，需要的時(shí)間為24h。
6.一種用權(quán)利要求1方法提取得到的艾葉乙酸乙酯提取物，其特征在于所述的艾葉乙酸乙酯提取物主要成分為黃酮類和留醇類。
7.如權(quán)利要求6所述的艾葉乙酸乙酯提取物，其特征在于所述的艾葉乙酸乙酯提取物的主要成分為芹菜素、棕矢車(chē)菊素、木犀草素、異澤蘭黃素、β -谷留醇和槲皮素。
8.—種藥物制劑，由權(quán)利要求6或7所述的姜黃的乙酸乙酯提取物和藥學(xué)上可接受的載體組成。
9.如權(quán)利要求8所述的藥物制劑，其特征在于所述的制劑為片劑、散劑、片劑、膠囊或口服液。
10.一種檢測(cè)權(quán)利要求6所述艾葉的乙酸乙酯提取物的方法，用超高效液相色譜-電噴霧串聯(lián)質(zhì)儀對(duì)所述艾葉提取物進(jìn)行分析，以獲得艾葉乙酸乙酯提取物的UPLC-Q-TOF-MS圖譜，其特征在于: a.質(zhì)譜條件為:ESI離子源，正離子模式檢測(cè)；霧化器N2壓力為50psi;干燥氣N2流速為15L/min ;質(zhì)量掃描范圍50~1200 ;自動(dòng)3級(jí)質(zhì)譜； b.色譜分析條件為:色譜柱:WatersACQUITY UPLC? BEH C18Column(50mmX2.lmm.1d.，1.7 μ m) ;二元梯度洗脫，A相為0.1%甲酸水溶液；B相為乙腈，流速為0.3mL/min，梯度洗脫的程序如下:90%A相，逐漸減少A相比例，至14min時(shí)A相比例為0，保持2min，流速:0.3mL/min ;進(jìn)樣量 3 μ L。
【文檔編號(hào)】A61K36/282GK103705559SQ201310680696
【公開(kāi)日】2014年4月9日 申請(qǐng)日期:2013年12月12日 優(yōu)先權(quán)日:2013年1月7日
【發(fā)明者】陳士林, 黃林芳, 任偉光, 林森森, 徐宏喜, 楊大堅(jiān), 卞兆祥, 陳新滋 申請(qǐng)人:中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所, 香港浸會(huì)大學(xué)