平臥菊三七提取物在制備防治肝臟損傷制劑中的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】，更具體涉及一種平臥菊三七提取物在制備治療或預(yù)防肝臟損傷制劑中的應(yīng)用。本發(fā)明將平臥菊三七的莖或葉提取物應(yīng)用于酒精、藥物或毒物引起的肝臟損傷的治療或預(yù)防，取得了顯著的效果，療效確定、無毒副作用，而且提取方法易于實施，應(yīng)用前景廣闊。
【專利說明】平臥菊三七提取物在制備防治肝臟損傷制劑中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】，更具體涉及一種平臥菊三七提取物在制備治療或預(yù)防肝臟損傷制劑中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]肝損傷是臨床常見的危害人類健康的病因之一。肝損傷是因肝臟受到外界傷害性因素的入侵，從而引起的肝臟受損。肝損傷分為病理性肝損傷和化學(xué)性肝損傷?；瘜W(xué)性肝損傷是由化學(xué)性肝毒性物質(zhì)所造成的肝損傷。這些化學(xué)物質(zhì)包括酒精、環(huán)境中的化學(xué)毒物及某些藥物。病源防不勝防，肝臟易受損傷，且難以發(fā)現(xiàn)。肝損傷若任其惡化發(fā)展，最終會轉(zhuǎn)變?yōu)楦斡不?，甚至惡化為肝癌，最終無法挽救。因此建議肝臟已受損人群應(yīng)早期控制病情，防止肝臟狀況繼續(xù)惡化；健康人群也應(yīng)提高警惕，積極預(yù)防。
[0003]平臥菊三七(GynuraProcumbens (Lour.)Merr)是菊科菊三七屬的植物。分布于越南、泰國、印度尼西亞和非洲以及中國的廣東、海南、貴州、云南、江西等地。在我國平臥菊三七被批準(zhǔn)為新資源食品(衛(wèi)生部公告2012年第8號)，可作為蔬菜食用；在馬來西亞，平臥菊三七是一種傳統(tǒng)食物和藥物，被稱為“sambung nyawa”，用于治療糖尿病、癌癥、腎病和高血壓。目前沒有將平臥菊三七用于治療肝損的相關(guān)報道。再者，平臥菊三七葉是傳統(tǒng)的藥用和使用部位，其莖在習(xí)慣上常被扔棄，而沒有被用作食物或藥物。
[0004]本發(fā)明將平臥菊三七用于肝損治療 ，開發(fā)了平臥菊三七的新用途，并且在效果上取得了成功，平臥菊三七可以有效防治酒精、藥物和毒物引起的肝臟損傷。本發(fā)明將滿足廣大病人的需要，預(yù)計會有很好的經(jīng)濟(jì)效益和社會效益。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足，本發(fā)明的目的在于開發(fā)中藥材平臥菊三七的新用途，提供一種平臥菊三七提取物在制備防治肝臟損傷制劑中的應(yīng)用。本申請的發(fā)明人多年來一直致力于肝損的臨床治療和植物活性成分的研究工作。長期的研究和大量的實驗結(jié)果證實，與現(xiàn)有的主流療法相比，平臥菊三七提取物對肝損的預(yù)防和治療具有效果好、無副作用、價格便宜等優(yōu)勢。本發(fā)明中，護(hù)肝制劑治療肝損的機(jī)制在于:①抗炎，降低炎癥引起的肝細(xì)胞凋亡和壞死程度；②加速肝細(xì)胞再生，促進(jìn)已經(jīng)受損的肝組織修復(fù)。上述兩種機(jī)制疊加在一起，有效地保護(hù)了肝臟。
[0006]本發(fā)明通過將平臥菊三七的莖或葉提取物作用多種經(jīng)典的肝損模型，實驗結(jié)果確證了本發(fā)明技術(shù)方案的可行性。
[0007]所述提取物的制備方法如下:取平臥菊三七的干燥莖或葉稱重后粉碎，每次加入7-10體積/重量(L/kg)倍的50-85v/v%乙醇，80-100°C下回流提取0.5_2h，共提取3次，合并提取液并濃縮干燥得干浸膏。
[0008]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)點和效果:
[0009]1、擴(kuò)展了平臥菊三七的新用途；[0010]2、變廢為寶，將習(xí)慣中不用于食用或藥用的平臥菊三七莖加以利用；
[0011]3、平臥菊三七保肝效果顯著，可以有效保護(hù)肝臟；
[0012]4、平臥菊三七使用中未發(fā)現(xiàn)毒副作用，源自天然，更易為患者接受。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0013]圖1平臥菊三七莖提取物降低DEN所致肝損小鼠的轉(zhuǎn)氨酶活性。
[0014]I±s, n=8，空白對照組，□ ;DEN模型組，;平臥菊三七治療組1，:平臥菊三七治
療組2，_與空白對照組相比，_P〈0.001 ;與DEN模型組比，##P〈0.01。與空白對照組相比，DEN模型組轉(zhuǎn)氨酶水平明顯升高(P〈0.001 )，說明造模成功。與DEN模型組相比，護(hù)肝制劑治療組的轉(zhuǎn)氨酶水平均有一定的降低，說明平臥菊三七莖提取物一定程度上保護(hù)了肝細(xì)胞免受DEN損傷。
[0015]圖2平臥菊三七莖提取物降低DEN引起的肝臟組織病理學(xué)改變。
[0016]HE染色，放大400倍，圖中標(biāo)尺的長度為50 μ m。A、B、C和D分別表示空白對照、DEN模型、平臥菊三七治療組I和2。DEN模型組肝臟可見大量的細(xì)胞壞死和脂肪空泡；而與DEN模型組相比，平臥菊三七治療組的肝臟細(xì)胞壞死和脂肪空泡程度均明顯減輕。
[0017]圖3平臥菊三 七莖提取物降低醋氨酚引起的肝臟病理學(xué)改變。
[0018]HE染色，放大200倍，圖中標(biāo)尺的長度為100 μ m。A、B、C、D和E分別表示空白對照、醋氨酚模型、平臥菊三七治療組1、2和3。醋氨酚模型組肝臟可見大面積肝細(xì)胞壞死；而與醋氨酚模型組相比，平臥菊三七治療組肝臟的肝細(xì)胞受損程度明顯減輕。
[0019]圖4平臥菊三七莖提取物降低酒精所致肝損小鼠的轉(zhuǎn)氨酶活性
[0020]i±Sj n=15，空白對照組，口 ；酒精模型組，.;平臥菊三七治療組1，_平臥菊三七
治療組2，I平臥菊三七治療組3，0與空白對照(100%)相比，酒精模型組小鼠血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性(168%，P〈0.001)顯著提高；而與酒精模型組相比，平臥菊三七治療組2和3中的谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性劑量降低，其中平臥菊三七治療組3中谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性顯著降低(126%，Ρ〈0.05)。
[0021]圖5平臥菊三七莖提取物降低酒精引起的肝臟病理學(xué)改變。
[0022]HE染色，放大400倍，圖中標(biāo)尺的長度為100 μ m。A、B、C、D和E分別表示空白對照、酒精模型、平臥菊三七治療組1、2和3。酒精模型組肝臟可見肝細(xì)胞壞死(一，細(xì)胞核溶解)和脂肪化(▲，肝細(xì)胞空泡);而與酒精模型組相比，平臥菊三七治療組的肝細(xì)胞壞死程度明顯減輕。
[0023]圖6平臥菊三七莖提取物降低酒精所致肝損小鼠的甘油三酯沉積
[0024]i±s, n=15，空白對照組，□;酒精模型組，平臥菊三七治療組1，;平臥菊三七
治療組2，畫平臥菊三七治療組3，H與空白對照(2.9mM/g蛋白)相比，酒精模型組肝臟甘油三酯明顯增加(7.0mM/g蛋白，P〈0.001);而與酒精模型組相比，平臥菊三七1、2和3治療組甘油三酯含量均降低，分別為4.8mM/g蛋白(P〈0.05),5.6mM/g蛋白(P=0.083),4.9mM/g蛋白(Ρ〈0.01)?！揪唧w實施方式】
[0025]下面 申請人:將結(jié)合具體的實施例對本發(fā)明的技術(shù)方案做進(jìn)一步的詳細(xì)說明。應(yīng)理解，以下內(nèi)容不應(yīng)以任何方式被理解為對本發(fā)明權(quán)利要求書請求保護(hù)范圍的限制。
[0026]實施例1提取物的制備
[0027]1、平臥菊三七莖提取物的制備:
[0028]平臥菊三七產(chǎn)自廣東，取干燥莖稱重后粉碎，每次加入10體積/重量倍(L/kg)的80v/v%乙醇，85°C下回流提取lh，共提取3次，合并提取液并濃縮干燥，干浸膏(密度1.40g/L)得率約為18.5%ο
[0029]2、平臥菊三七葉提取物的制備:
[0030]平臥菊三七產(chǎn)自廣東，取干燥葉稱重后粉碎，每次加入10體積/重量倍(L/kg)的50v/v%乙醇，90°C下回流提取0.5h，共提取3次，合并提取液并濃縮干燥，干浸膏(密度
1.40g/L)得率約為 17.1%。
[0031]以下為應(yīng)用實施例。
[0032]實施例2
[0033]實施例1制備的平臥菊三七莖提取物對二乙基亞硝胺(Diethylnitrosamine, DEN)誘導(dǎo)的小鼠肝臟損傷的治療作用:
[0034]雄性昆明小鼠，分為4組:空白對照組、DEN模型組、平臥菊三七治療組1、平臥菊三七治療組2，每組8只動物。DEN模型組、平臥菊三七治療組1、平臥菊三七治療組2，每周I次經(jīng)口給予DEN (165mg/kg)，共8周，造DEN模型，平臥菊三七治療組I和組2分別給予50mg/kg、200mg/kg實施例1制備的平臥菊三七莖提取物，每天I次，連續(xù)給一個星期后，眼球取血，處死動物后取肝臟。血樣離心制得血清，用于測定谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性，肝臟經(jīng)過10%福爾馬林固定，HE染色后，進(jìn)行病理組織形態(tài)學(xué)觀察。
[0035]與空白對照小鼠血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性(100%)相比，DEN模型組小鼠血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性顯著提高(239%，P〈0.001);而與DEN模型組相比，平臥菊三七治療組的谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性降低，其中200mg/kg平臥菊三七治療組降至135%(P〈0.01)，提示平臥菊三七莖提取物可以在一定程度上保護(hù)肝臟，減小DEN對肝細(xì)胞的損傷(結(jié)果見圖1);肝臟病理組織形態(tài)學(xué)的檢測結(jié)果也證實了這一點，與空白對照相比，DEN模型組肝臟可見大量的細(xì)胞壞死和脂肪空泡；而與DEN模型組相比，平臥菊三七治療組的肝臟細(xì)胞壞死和脂肪空泡程度均明顯減輕，再次提示平臥菊三七可以在一定程度上保護(hù)肝臟，減小DEN對肝臟的損傷(結(jié)果見圖2)。
[0036]實施例3
[0037]實施例1 制備的平臥菊三七莖提取物對醋氨酚誘導(dǎo)的小鼠肝臟損傷的治療作用:
[0038]雄性昆明小鼠，分為5組:空白對照組、醋氨酚模型組、平臥菊三七治療組1、平臥菊三七治療組2，平臥菊三七治療組3，每組8只動物。平臥菊三七治療組1、平臥菊三七治療組2，平臥菊三七治療組3分別灌胃給予50、100、200mg/kg的實施例1制備的平臥菊三七莖提取物，空白對照組、醋氨酚模型組給予等量的生理鹽水。灌胃后，醋氨酚模型組、平臥菊三七治療組1、平臥菊三七治療組2，平臥菊三七治療組3立即腹腔注射300mg/kg醋氨酚，空白對照組腹腔注射等量的生理鹽水；24h后眼球取血，處死動物后取肝臟。肝臟經(jīng)過10%福爾馬林固定，HE染色后，進(jìn)行病理組織形態(tài)學(xué)觀察。[0039]與空白對照相比，醋氨酚模型組肝臟可見大面積壞死；而與醋氨酚模型組相比，平臥菊三七治療組肝細(xì)胞受損程度明顯減輕，提示平臥菊三七可以在一定程度上保護(hù)肝臟，減小醋氨酚對肝臟的損傷(結(jié)果見圖3)。
[0040]實施例4
[0041]實施例1制備的平臥菊三七莖提取物對酒精誘導(dǎo)的急性小鼠肝臟損傷的治療作用:
[0042] 雄性昆明小鼠，分為5組:空白對照組、酒精模型組、平臥菊三七治療組1、平臥菊三七治療組2，平臥菊三七治療組3，每組15只動物。酒精模型組灌胃給予5g/kg的乙醇(乙醇來自56°白酒，北京紅星股份有限公司監(jiān)制)，平臥菊三七治療組1、平臥菊三七治療組2，平臥菊三七治療組3分別灌胃12.5、25、50mg/kg的實施例1制備的平臥菊三七莖提取物(干浸膏直接溶于56°白酒中給藥，白酒用量同酒精模型組)，空白對照組給予等量的生理鹽水。每12h灌I次，共3次，最后I次灌胃4h后，眼球取血，處死動物后取肝臟。血樣離心制得血清，用于測定谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性，部分肝臟勻漿，測定甘油三酯的含量，部分肝臟經(jīng)過10%福爾馬林固定，HE染色后，進(jìn)行病理組織形態(tài)學(xué)觀察。
[0043]與空白對照(100%)相比，酒精模型組小鼠血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性(168%，P〈0.001)顯著提高；而與酒精模型組相比，平臥菊三七治療組2和3中的谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性降低，其中平臥菊三七治療組3中谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性顯著降低(126%，P〈0.05)，提示平臥菊三七莖提取物可以在一定程度上保護(hù)肝臟，減輕乙醇對肝臟的損傷(結(jié)果見圖4);肝臟病理組織形態(tài)學(xué)的檢測結(jié)果也證實了這一點，與空白對照相比，酒精模型組肝臟可見大量肝細(xì)胞壞死(細(xì)胞核溶解)和脂肪化(肝細(xì)胞空泡)；而與酒精模型組相比，平臥菊三七治療組的肝細(xì)胞壞死程度明顯減輕，再次提示平臥菊三七可以在一定程度上保護(hù)肝臟，減輕乙醇對肝臟的損傷(結(jié)果見圖5)。脂肪化的程度可以從圖中6甘油三酯的結(jié)果加以分析，與空白對照(2.9mM/g蛋白)相比，酒精模型組肝臟甘油三酯明顯增加(7.0mM/g蛋白，P〈0.001);而與酒精模型組相比，平臥菊三七各治療組甘油三酯含量均降低，提示平臥菊三七莖提取物可以在一定程度阻止乙醇導(dǎo)致的脂肪肝。
[0044]實施例5
[0045]實施例1制備的平臥菊三七葉提取物對脂多糖誘導(dǎo)炎癥的抑制作用
[0046]35mm培養(yǎng)皿中培養(yǎng)從小鼠肝臟中分離的Kupffer細(xì)胞，給予10ng/mL脂多糖(LPS)刺激，并分別加入1、10、100μ g/mL的實施例1制備的平臥菊三七葉提取物。4h后提取細(xì)胞RNA，檢測TNF- a mRNA水平，用GAPDH作為內(nèi)參，結(jié)果發(fā)現(xiàn):與正常對照(100%)相t匕，LPS使得TNF-a mRNA水平顯著提高(212%，P〈0.001)，而與LPS模型對照組相比，1、10、100 μ g/mL的平臥菊三七葉提取物顯著抑制了 TNF-a mRNA水平，分別是183% (P〈0.05)、159% (P〈0.001)、107% (P〈0.001)。此結(jié)果表明，本發(fā)明中平臥菊三七葉提取物也具有抑制肝臟炎癥的作用。
【權(quán)利要求】
1.一種平臥菊三七提取物在制備治療或預(yù)防肝臟損傷制劑中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于:所述提取物為50-85v/v%乙醇提取物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的應(yīng)用，其特征在于:所述平臥菊三七取莖或葉。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于:所述肝臟損傷為酒精、藥物或毒物引起的肝臟損傷。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于:所述肝臟損傷為二乙基亞硝胺引起的肝臟損傷。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于:所述肝臟損傷為醋氨酚引起的肝臟損傷。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于:所述肝臟損傷為酒精引起的肝臟損傷。
8.根據(jù)權(quán)利要求 4所述的應(yīng)用，其特征在于:所述肝臟損傷為脂多糖引起的肝臟損傷。
【文檔編號】A61K36/28GK103520244SQ201310547821
【公開日】2014年1月22日 申請日期:2013年11月6日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月6日
【發(fā)明者】唐和斌, 李小軍, 李婷婷, 李玉桑 申請人:唐和斌