專利名稱：一種栽培菊苣提取物用于肝保護(hù)或治療劑的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種栽培菊苣提取物用于肝保護(hù)或治療劑的用途。
背景技術(shù)：
栽培菊苣(Cichorium endivia L.)是菊科菊苣屬植物，又稱苦苣，或苦菊。其同屬植物菊苣和腺毛菊苣作為中藥材被列入我國藥典，它們具有清肝利膽的功效，可用于濕熱黃疸等癥狀的治療?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)它們具有護(hù)肝的作用(Ahmed B， et al. Antihepatotoxic activityof seeds of Cichorium intybus. Journal of Ethnopharmacology, 2003,87 (23) :237-240和艾尼瓦爾 塔利甫，等.維藥菊苣對小鼠急性化學(xué)性肝損傷的保護(hù)作用.中藥藥理與臨床，2006，22 (5) :34-35)。栽培菊苣含有許多與其同屬植物菊苣和腺毛菊苣相類似的活性成分，并具有很好的抗氧化活性，因此推斷栽培菊苣也可應(yīng)用于肝保護(hù)或治療的用途。

發(fā)明內(nèi)容
公開號CN 101869348A已經(jīng)公開了栽培菊苣提取物(KJ-I)提取方法及其在抗氧化領(lǐng)域的應(yīng)用。本發(fā)明人對其生物活性進(jìn)行進(jìn)一步的研究，發(fā)現(xiàn)KJ-I可用于肝保護(hù)或治療，并由此完成本發(fā)明。本發(fā)明的目的是提供肝保護(hù)或治療劑，本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的(I)將栽培菊苣于陰涼處晾干，粉碎后，加入濃度為20 100%的乙醇溶液進(jìn)行提取，提取比例I : 5 I : 30，提取I 4h，重復(fù)浸提4次，過濾。(2)提取液濃縮后，混懸于30 95%乙醇溶液中，用石油醚萃取I 6次(石油醚與混懸液的比例是I : I I : 10)。(3)將石油醚萃取后的水層揮干至無醇味，加水混懸，用乙酸乙酯萃取I 4次 (乙酸乙酯與混懸液的比例是I : I I : 10)。(4)乙酸乙酯萃取后的水層過大孔吸附樹脂，用水和20 95%乙醇洗脫，其中乙
醇層經(jīng)濃縮，真空干燥得到抗氧化活性物質(zhì)。本發(fā)明栽培菊苣提取物能有效抑制叔丁基過氧化氫(t-BHP)、過氧化氫(H2O2)和 2，2’ -偶氮-雙- (2-脒基丙烷)氯化二氫(AAPH)對人肝癌細(xì)胞系H印G2細(xì)胞的損傷，同時，KJ-I安全無毒，適合作為肝保護(hù)或治療劑的使用。
具體實(shí)施例方式I栽培菊苣提取物對t-BHP、H2O2和AAPH誘導(dǎo)的H印G2細(xì)胞損傷的保護(hù)作用采用含10%小牛血清的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)HepG2細(xì)胞，每2天換液I次，6天傳代 I次。取對數(shù)生長期的H印G2細(xì)胞，用0. 25%的胰酶消化液消化細(xì)胞后，用含血清的培養(yǎng)基將細(xì)胞懸液的濃度調(diào)至IX IO5個/ml，接種于96孔板內(nèi)，每孔IOOul。每組4個復(fù)孔，置于 37°C,5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)24h后換液，每孔加入液體的總體積為100 μ I。其中，空白對照組加人無血清DMEM培養(yǎng)液；模型組加入含t-BHP (終濃度為O. ImmoI/L) ,H2O2 (終濃度為lmmol/L)或AAPH(終濃度為lOmmol/L)的無血清培養(yǎng)基；模型加藥組為在加入相應(yīng)濃度的t-BHP、H2O2和AAPH后，再添加不同濃度的KJ-I。各組均置于37' C,5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。！fepG2細(xì)胞處理4h后加入MTT (終濃度為5mg/ml)，繼續(xù)培養(yǎng)4h，隨后棄上清加入 200 μ I DMSO,吹打均勻，在酶標(biāo)儀于波長545nm處測定OD值。細(xì)胞的存活率=試驗(yàn)組OD 值/空白對照組OD值X 100% (試驗(yàn)組即除空白對照組以外的其他各組)。結(jié)果栽培菊苣提取物有效抑制t-BHP、H202和AAPH誘導(dǎo)的H印G2細(xì)胞損傷，具有很好的肝保護(hù)作用。具體結(jié)果見表I表I.栽培菊苣提取物對t-BPH、H2O2和AAPH誘導(dǎo)的HepG2細(xì)胞毒性的保護(hù)作用
權(quán)利要求
1.一種栽培菊苣提取物用于肝保護(hù)或治療劑的用途，其特征在于其提取方法的步驟如下(1)粉碎干燥的栽培菊苣于，加入20 100%的乙醇溶液浸泡，提取比例I: 5 I 30，提取I 4h，重復(fù)浸提4次，過濾。(2)提取液濃縮后，混懸于30 95%乙醇溶液中，用石油醚萃取I 6次(石油醚與混懸液的比例是I : I I : 10)。(3)將石油醚萃取后的水層揮干至無醇味，加水混懸，用乙酸乙酯萃取I 4次(乙酸乙酯與混懸液的比例是I : I I : 10)。(4)乙酸乙酯萃取后的水層過大孔吸附樹脂，用水和20 95%乙醇洗脫，其中乙醇層經(jīng)濃縮，真空干燥。
2.如權(quán)利要求I所述的苦菊提取物，其用途為肝損傷的保護(hù)與治療。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種栽培菊苣提取物用于肝保護(hù)或治療劑的用途。該栽培菊苣提取物的制備方法是采用乙醇提取、石油醚和乙酸乙酯萃取純化、大孔吸附樹脂洗脫、濃縮干燥而成。栽培菊苣提取物能有效抑制叔丁基過氧化氫(t-BHP)、過氧化氫(H2O2)和2，2’-偶氮-雙-(2-脒基丙烷)氯化二氫(AAPH)對人肝癌細(xì)胞系HepG2細(xì)胞的損傷。同時，ICR小鼠灌胃栽培菊苣提取物的最大耐受量MTD＞5000g/kg，可認(rèn)為栽培菊苣安全無毒。
文檔編號A61K36/28GK102600223SQ201110026208
公開日2012年7月25日 申請日期2011年1月25日 優(yōu)先權(quán)日2011年1月25日
發(fā)明者王愛平, 王英明, 秦海林, 陳超杰, 靳洪濤, 魏金鋒 申請人:北京協(xié)和建昊醫(yī)藥技術(shù)開發(fā)有限責(zé)任公司, 王愛平, 秦海林