專利名稱：一種快速組織工程皮膚構建修復皮膚缺損的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及醫(yī)療方法領域，特別是一種快速組織工程皮膚構建修復皮膚缺損的方法。
背景技術：
各種原因引起的大面積皮膚缺損如燒傷、創(chuàng)傷是燒傷外科、整形修復外科面臨的主要問題。為了有效解決皮源和修復后效果的問題，新的技術與方法不斷出現(xiàn)。皮片移植、 皮瓣移植、郵票皮片移植、微粒皮移植、網(wǎng)狀皮移植、復合皮移植等。組織工程皮膚的研究也在不斷的深入，目前的組織工程皮膚包括自體或異體表皮片真皮替代物及含表皮和真皮雙層結(jié)構的皮膚替代物3種，而最佳的替代物依然是自體表皮片真皮替代物，因為其余的大多數(shù)僅顯效于慢性潰瘍和燒傷的患者，同時它們也都不同程度的存在切取困難、易于感染、 免疫排斥和過敏等。培養(yǎng)表皮片由于缺乏真皮成分的支持，對機械損傷高度敏感，移植后易形成創(chuàng)面收縮和瘢痕增生，而且由于缺乏真皮，沒有實現(xiàn)真正的皮膚重建。然而，自體表皮片真皮替代物由于缺乏表皮，無活細胞，易感染，移植后易降解、收縮，在創(chuàng)面邊緣易形成瘢痕。
雖然新的方法都在一定程度上改善與推進了創(chuàng)面修復的治療水平，但也都存在著各自的不足之處，無法克服皮片存活率低，產(chǎn)品周期長的缺點。發(fā)明內(nèi)容
一種快速組織工程皮膚構建修復皮膚缺損的方法，由刃厚皮片、細胞縣液結(jié)合復合皮移植的方法組成，其中應用取皮刀切取自體刃厚的皮片備用，皮片面積應大于需修復的創(chuàng)面面積約10%左右；將脫細胞異體真皮基質(zhì)覆蓋于所需覆蓋的創(chuàng)面，其表面再覆蓋上之前所取的自體刃厚的皮片，修剪出多余的皮片；再將細胞懸液注射或噴灑到前面進行的復合皮植皮區(qū)內(nèi)，經(jīng)皮片邊緣將細胞懸液注射到皮片與脫細胞異體真皮基質(zhì)之間；再按復合皮移植的方法進行術后處理。
作為本發(fā)明的進一步改進所述細胞懸液由皮片制成，將皮片置于已加熱至37度的O. 2%胰蛋白酶溶液浸泡消化15 20分鐘，使表皮和真皮分離；消化時間可能因皮片厚度、 室溫等因素有所不同而定；用無菌鑷從胰蛋白酶溶液中取出皮片，使用兩把鑷子，嘗試剝離表皮和真皮；如果分離不易實現(xiàn)，把皮片重新置于已加熱的胰蛋白酶溶液中，再孵育5 10 分鐘；用兩把鑷子將消化后的皮片完全分離成真皮和表皮兩層，這樣可顯露真皮-表皮結(jié)合部，用鑷子固定皮片層，用無菌解剖刀從真皮與表皮結(jié)合部表面刮削細胞，應用復方林格氏液沖洗收集刮下的基底層細胞制成細胞懸液。
作為本發(fā)明的進一步改進所述的消化時間以15分鐘為最少，總的消化時間不超過60分鐘。
與現(xiàn)有技術相 比，本發(fā)明的有益效果是促進創(chuàng)面愈合、提高皮片成活率、改善愈后皮膚色澤質(zhì)地。
具體實施方式
本發(fā)明人在修復體表缺損時應用異體脫細胞真皮與自體薄皮片的復合皮移植積累了豐富的經(jīng)驗，取得了較好的臨床效果。但同時也存在著成活率未能達到理想的要求、成活后皮片質(zhì)地、色澤及皮膚功能與正常皮膚仍有差距的問題。近期，本發(fā)明人將一種快速獲得皮膚基底細胞懸液的方法應用于臨床，該細胞懸液在促進創(chuàng)面愈合、提高皮片成活率、改善愈后皮膚色澤質(zhì)地等方面都有良好的效果。經(jīng)過初步的研究該種細胞懸液中含有基底細胞、朗格罕斯細胞、黑色素細胞和成纖維細胞以及表皮干細胞，豐富的活性細胞群落是其產(chǎn)生臨床效果的原因。表皮干細胞是目前作為種子細胞應用于皮膚組織工程研究的熱點之一，而脫細胞異體真皮作為支架也被證實為是理想的組織工程皮膚材料，將這兩種技術結(jié)合在一起應用，得到一種快捷、有效的構建出有完整功能皮膚的方法。
一種快速組織工程皮膚構建修復皮膚缺損的方法，由刃厚皮片、細胞縣液結(jié)合復合皮移植的方法組成，其中應用取皮刀切取自體刃厚的皮片備用，皮片面積應大于需修復的創(chuàng)面面積約10%左右；將脫細胞異體真皮基質(zhì)覆蓋于所需覆蓋的創(chuàng)面，其表面再覆蓋上之前所取的自體刃厚的皮片，修剪出多余的皮片；由于理想的人工皮膚包含表皮和真皮兩層結(jié)構并且兩者之間連接緊密；具有柔韌性和一定的機械強度，移植到創(chuàng)面后很快即與創(chuàng)面良好貼附；安全、不攜帶病毒；表皮與真皮成分能盡快完成自身增殖、分化和功能成熟， 形成更接近于生理的永久性的皮膚替代物等；于是，再將細胞懸液注射或噴灑到前面進行的復合皮植皮區(qū)內(nèi)，經(jīng)皮片邊緣將細胞懸液注射到皮片與脫細胞異體真皮基質(zhì)之間；再按復合皮移植的方法進行術后處理。
所述細胞懸液由皮片制成，將皮片置于已加熱至37度的O. 2%胰蛋白酶溶液浸泡消化15 20分鐘，使表皮和真皮分離；消化時間可能因皮片厚度、室溫等因素有所不同而定；用無菌鑷從胰蛋白酶溶液中取出皮片，使用兩把鑷子，嘗試剝離表皮和真皮；如果分離不 易實現(xiàn)，把皮片重新置于已加熱的胰蛋白酶溶液中，再孵育5 10分鐘；用兩把鑷子將消化后的皮片完全分離成真皮和表皮兩層，這樣可顯露真皮-表皮結(jié)合部，用鑷子固定皮片層，用無菌解剖刀從真皮與表皮結(jié)合部表面刮削細胞，應用復方林格氏液沖洗收集刮下的基底層細胞制成細胞懸液；按上述方法制細胞懸液時總量不要過大，當細胞數(shù)量一定時懸液總量越多細胞濃度越低。
所述的消化時間以15分鐘為最少，皮片較厚、室溫較低時消化的時間越長，但總的消化時間不超過60分鐘。
病例I 吳某，男，5歲。因診為“先天性右上肢巨大黑色素細胞痣”入院求治。入院查體見患兒右上肢大部皮膚呈黑色，稍增生，大部分黑色皮膚處有增粗毛發(fā)生長。入院后完善術前常規(guī)檢查未見明顯手術禁忌。于氣管內(nèi)麻下行“右上肢巨大黑毛痣切除+大腿取皮右上肢快速組織工程皮膚植皮術”。術中完整切除右上肢黑痣(術后病理確診為黑色素細胞痣)。電動取皮刀于患兒雙側(cè)大腿處切取O. 25mm厚刃厚皮片備用。將所取皮片中約6cm2應用胰蛋白酶于37度消化15分鐘。將消化之皮片表皮層與真皮層分離后收集位于基底層的細胞制備成細胞懸液約4ml備用。將Iml細胞懸液噴灑于雙側(cè)大腿供皮區(qū)后創(chuàng)面覆蓋紗士林油紗后加壓包扎。右上肢黑痣切除區(qū)域格覆蓋異體脫細胞真皮基質(zhì)后將基質(zhì)細胞懸液噴灑于手術區(qū)，再覆蓋自體刃厚皮片，植皮區(qū)加壓包扎固定。術后常規(guī)抗炎補液等治療。患兒右上肢植皮區(qū)于術后7天拆除外敷料，見絕大部分植皮區(qū)成活良好。術后三個月復診見植皮區(qū)皮膚色澤質(zhì)地良好，接近正常皮膚，彈性良好，關節(jié)功能正常。
綜上所述 ，本領域的普通技術人員閱讀本發(fā)明文件后，根據(jù)本發(fā)明的技術方案和技術構思無需創(chuàng)造性腦力勞動而作出其他各種相應的變換方案，均屬于本發(fā)明所保護的范圍。
權利要求
1.一種快速組織工程皮膚構建修復皮膚缺損的方法，由刃厚皮片、細胞縣液結(jié)合復合皮移植的方法組成，其特征在于應用取皮刀切取自體刃厚的皮片備用，皮片面積應大于需修復的創(chuàng)面面積約10%左右；將脫細胞異體真皮基質(zhì)覆蓋于所需覆蓋的創(chuàng)面，其表面再覆蓋上之前所取的自體刃厚的皮片，修剪出多余的皮片；再將細胞懸液注射或噴灑到前面進行的復合皮植皮區(qū)內(nèi)，經(jīng)皮片邊緣將細胞懸液注射到皮片與脫細胞異體真皮基質(zhì)之間；再按復合皮移植的方法進行術后處理。
2.按照權利要求1所述的一種快速組織工程皮膚構建修復皮膚缺損的方法，其特征在于所述細胞懸液由皮片制成，將皮片置于已加熱至37度的O. 2%胰蛋白酶溶液浸泡消化 15 20分鐘，使表皮和真皮分離；消化時間可能因皮片厚度、室溫等因素有所不同而定；用無菌鑷從胰蛋白酶溶液中取出皮片，使用兩把鑷子，嘗試剝離表皮和真皮；如果分離不易實現(xiàn)，把皮片重新置于已加熱的胰蛋白酶溶液中，再孵育5 10分鐘；用兩把鑷子將消化后的皮片完全分離成真皮和表皮兩層，這樣可顯露真皮-表皮結(jié)合部，用鑷子固定皮片層，用無菌解剖刀從真皮與表皮結(jié)合部表面刮削細胞，應用復方林格氏液沖洗收集刮下的基底層細胞制成細胞懸液。
3.按照權利要求2所述的一種快速組織工程皮膚構建修復皮膚缺損的方法其特征在于所述的細胞懸液的消化時間以15分鐘為最少，總的消化時間不超過60分鐘。
全文摘要
一種快速組織工程皮膚構建修復皮膚缺損的方法法屬于醫(yī)療方法領域，克服了傳統(tǒng)醫(yī)療方法的皮片成活率低，周期長的缺點；其中由刃厚皮片、細胞縣液結(jié)合復合皮移植的方法組成；一種快速組織工程皮膚構建修復皮膚缺損的方法法能夠促進創(chuàng)面愈合、提高刃厚皮片成活率、改善愈后皮膚色澤質(zhì)地等方面都有良好的效果，能夠更有效地醫(yī)療因各種原因引起的皮膚缺損，如外傷、手術等。
文檔編號A61B17/322GK103054628SQ20131003521
公開日2013年4月24日 申請日期2013年1月30日 優(yōu)先權日2013年1月30日
發(fā)明者朱家源 申請人:朱家源