專利名稱：脈絡(luò)寧酯及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及脈絡(luò)寧酯及其制備方法和用途。該脈絡(luò)寧酯化學(xué)名為(E) -(5-formylfuran-2-yl) -methyl-3-(3, 4-dihydroxyphenyl) -acrylate,是從脈絡(luò)寧注射液中提取分離得到的一種酯類新化合物。
背景技術(shù)：
心血管系統(tǒng)疾病嚴(yán)重威脅著人們的生命和健康，在臨床上已成為死亡的第一殺手，世界各國都高度重視防治心血管藥的研發(fā)。中藥復(fù)方制劑脈絡(luò)寧注射液是在著名醫(yī)方“四妙勇安湯”臨床應(yīng)用的基礎(chǔ)上研究開發(fā)出來的、具有自立知識(shí)產(chǎn)權(quán)的，并于1985年正式批準(zhǔn)生產(chǎn)的中藥復(fù)方靜脈注射劑，由中藥石斛、玄參、牛膝、金銀花經(jīng)科學(xué)提取精制而成。具有活血化淤、行氣止痛、養(yǎng)陰通絡(luò)和補(bǔ)益肝腎的功效，主要用于治療缺血性中風(fēng)急性期、血栓閉塞性脈管炎、下肢深靜脈血栓形成、動(dòng)脈硬化性閉塞癥、腦梗塞、心絞痛、心肌梗死、血液循環(huán)障礙及其后遺癥等疾病，總有效率可達(dá)94. 5%，與同類藥品比較具有見效快、療效高、療程短、價(jià)格低廉、副作用少、安全性高等優(yōu)點(diǎn)。脈絡(luò)寧注射液在市場(chǎng)上經(jīng)受近30年的考驗(yàn)，深受廣大醫(yī)生和患者的歡迎，已成為全國名優(yōu)中成藥。2009年7月入選國家新醫(yī)改基本藥物目錄基層版307種，為僅有的3個(gè)中藥注射劑品種之一，醫(yī)改給脈絡(luò)寧注射液帶來了新的成長(zhǎng)契機(jī)，是一個(gè)走向更廣闊市場(chǎng)的極好機(jī)會(huì)，顯示著很強(qiáng)的生命力和廣闊的應(yīng)用前景。由于中醫(yī)藥的復(fù)雜性和特殊性，中藥現(xiàn)代化進(jìn)程中仍存在不少問題,針對(duì)重大疾病的優(yōu)勢(shì)品種開發(fā)不足，大部分處于低水平重復(fù)的狀況嚴(yán)重，同時(shí)，針對(duì)農(nóng)村地區(qū)的適合我國國情的質(zhì)優(yōu)價(jià)廉的中藥品種開發(fā)不足，要解決這些問題，必須采用國際先進(jìn)技術(shù)和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，提高我國中藥的研發(fā)水平，尤其是對(duì)中藥進(jìn)行二次開發(fā)。把開展中藥新的藥用成分或部位和新臨床適應(yīng)癥的研究作為中藥二次開發(fā)的重點(diǎn)研究課題，通過嚴(yán)格的科學(xué)實(shí)驗(yàn)，提供充足的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，提升原有品種的檔次，可以起到創(chuàng)新的效果，對(duì)提升我國醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)的創(chuàng)新性、開發(fā)具有獨(dú)立核心知識(shí)產(chǎn)權(quán)的中藥產(chǎn)品，都具有劃時(shí)代意義。中藥現(xiàn)代化發(fā)展的重要推動(dòng)力是創(chuàng)新，而中藥二次開發(fā)又是我國中藥創(chuàng)新藥物研發(fā)的重要源泉，是積極發(fā)展中醫(yī)藥的一種新途徑和新方法。中藥復(fù)方制劑脈絡(luò)寧注射液成分復(fù)雜，其中未知成分占有相當(dāng)比例，有效成分尚不明確、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)不夠合理等關(guān)鍵科學(xué)問題，是脈絡(luò)寧注射劑研發(fā)的核心技術(shù)問題。這些瓶頸問題一直困擾著企業(yè)生產(chǎn)，影響產(chǎn)品聲譽(yù)和銷售，國家食品藥品監(jiān)督管理局在2007年頒布的《中藥、天然藥物注射劑基本技術(shù)要求》中規(guī)定了 “有效成分制成的注射劑，單一成分含量不得低于90% ;多成分制成的中藥注射劑，總固體中結(jié)構(gòu)明確成分的含量不得少于60%，所測(cè)成分應(yīng)大于80%”。因此，對(duì)脈絡(luò)寧注射液的二次開發(fā)顯得格外重要，迫在眉睫。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種從脈絡(luò)寧注射液中提取的酯類新化合物——脈絡(luò)寧酯((E)-(5-formylfuran-2-yl)-methyl-3-(3, 4-dihydroxyphenyl)-acrylate)。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供上述化合物的制備方法。本發(fā)明還有一個(gè)目的是提供上述化合物在制備治療心血管疾病的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的目的是通過下列技術(shù)措施實(shí)現(xiàn)的本發(fā)明公開了該化合物的結(jié)構(gòu)式如式I O
i7UQ
2 h H0Z 4,4
OH
式I分子式為=C15H12O6,分子量288。命名為脈絡(luò)寧酯(化學(xué)名為(E)-(5-formylfuran_2-yl)-methyl-3-(3，4-dihydroxyphenyl)-acrylate )。所述脈絡(luò)寧酯的制備方法，該方法以脈絡(luò)寧注射液為原料，采用硅膠柱、凝膠柱、大孔樹脂柱、反相柱中的一種或多種經(jīng)過多次層析分離提純得到。所述的制備方法，其中娃膠柱采用200 300目娃膠；凝膠柱為SephadexLH-20 ;大孔樹脂為D101、AB-8、HP-20或MCI ;反相柱為0DS。所述的制備方法，該方法以脈絡(luò)寧注射液為原料，經(jīng)S印hadex LH-20凝膠柱，采用甲醇、乙醇、2(Γ80%的甲醇-水、或者2(Γ80%的乙醇-水進(jìn)行等度洗脫，洗脫液再經(jīng)ODS反相柱，采用5 95%乙醇-水或5 95%甲醇-水進(jìn)行梯度洗脫，洗脫液再經(jīng)硅膠柱，采用石油醚-乙酸乙酯-丙酮溶劑系統(tǒng)、氯仿-甲醇、或者二氯甲烷-甲醇進(jìn)行洗脫，洗脫液再經(jīng)Sephadex LH-20凝膠柱，采用甲醇、乙醇進(jìn)行洗脫，洗脫液采用重結(jié)晶分離提純，得到脈絡(luò)寧酯。所述的脈絡(luò)寧酯與藥學(xué)上可接受的藥用輔料組成的藥物制劑。所述的藥物制劑，其劑型為片劑、膠囊劑、顆粒劑或注射劑。所述的脈絡(luò)寧酯在制備治療心血管疾病的藥物中的應(yīng)用。所述的應(yīng)用，其中心血管疾病為導(dǎo)致心肌缺血和/或缺氧的疾病，尤其是心肌梗塞、心肌炎、心肌肥大、冠心病。本發(fā)明有益效果本發(fā)明提供的脈絡(luò)寧配是從脈絡(luò)寧注射液中提取分離得到的一種酯類新化合物，該化合物能夠減少LDH從心肌細(xì)胞胞漿中漏出，降低MDA含量，提高SOD活性，調(diào)節(jié)心肌細(xì)胞內(nèi)iNOS表達(dá)及NO的合成，明顯提高H2O2及缺氧/復(fù)氧損傷心肌細(xì)胞的存活率，對(duì)心肌細(xì)胞具有保護(hù)作用，可用于制備治療心血管疾病的藥物中的應(yīng)用。


圖I、化合物I的1H-NMR譜。圖2、化合物I的13C-NMR譜。圖3、化合物I的1H-1H COSY的譜。圖4、化合物I的HMQC譜。圖5、化合物I的HMBC譜。圖6、化合物I的ESI-MS譜。圖7、脈絡(luò)寧酯(化合物I )制備工藝流程圖。
具體實(shí)施方式
結(jié)合具體實(shí)施方式
對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明，但本發(fā)明的內(nèi)容并不僅僅限于所列舉的實(shí)施方式。實(shí)施例I.從脈絡(luò)寧注射液中分離和鑒定化合物II、儀器與材料質(zhì)譜用PackardllOOMSD質(zhì)譜檢測(cè)器(ESI-MS70V)測(cè)定；核磁共振譜用BrukerAV-300型核磁共振儀(TSM內(nèi)標(biāo))測(cè)定；熔點(diǎn)用Reichert型微量熔點(diǎn)儀測(cè)定；S^hadexLH-20為Pharmacia公司產(chǎn)品，正相柱層析及薄層層析硅膠均為青島海洋化工廠產(chǎn)品，反相柱材料為YMCAA12S50，所用試劑均為分析純。高效液相分析柱為Nova-PakC18柱(3. 9 X 150mm,粒徑5 μ m, Waters公司),高效液相所用試劑為色譜純；2、藥品脈絡(luò)寧注射液，金陵藥業(yè)股份有限公司提供(批號(hào)為20110467，部頒標(biāo)準(zhǔn))。3、制備方法開啟脈絡(luò)寧注射液700 支約 7000mL,經(jīng) Sephadex LH-20 柱(7. 5X 120cm), 50%乙醇洗脫，共收集10個(gè)流份,流份6反復(fù)經(jīng)ODS反相柱、娃膠柱、SephadexLH-20柱層析(如流分6經(jīng)ODS反相柱，采用5-95%甲醇-水溶劑體系進(jìn)行梯度洗脫，洗脫液再經(jīng)硅膠柱(200目)，采用二氯甲烷-甲醇進(jìn)行洗脫，洗脫液再經(jīng)Sephadex LH-20凝膠柱，采用甲醇、乙醇進(jìn)行洗脫，洗脫液采用重結(jié)晶分離提純)，分離提純過程中全程采用高效液相色譜監(jiān)測(cè)，選擇特征吸收峰比較大的流分進(jìn)行下一級(jí)分離，從脈絡(luò)寧注射液中提純分離得到多個(gè)單體化合物，經(jīng)化學(xué)、波譜方法鑒定分別為5_羥甲基糠醛(MLN-1)、肉桂酸(MLN-2)、綠原酸(MLN-3),6, 7- 二羥基香豆素(MLN-4)、琥珀酸(MLN-5)、長(zhǎng)鏈脂肪烴(MLN-6)、脈絡(luò)寧酯(MLN-7 )、3，5- 二咖啡?？鼘幩?MLN-8 )、對(duì)羥基肉桂酸(MLN-9 )、隱綠原酸(MLN-10 )、原兒茶酸(MLN-11 )、竹節(jié)參皂苷(MLN-14)，其中脈絡(luò)寧酯(化學(xué)名為(E) - (5-formylfuran-2-yl)-methyl-3-(3, 4-dihydroxyphenyl)-acrylate)是新化合物。4、化合物I (脈絡(luò)寧酯)結(jié)構(gòu)經(jīng)核磁共振譜鑒定如下化合物I :黃色針晶(氯仿-甲醇)，易溶于氯仿甲醇混合溶液。254nm有吸收，12蒸汽顯褐色、噴FeCl3M色劑顯藍(lán)色，5%-香草醛濃硫酸顯黑色。ESI-MS (m/z) 287 (M-H) _，311 (M+Na)+，分子量為288，結(jié)合氫譜、碳譜推測(cè)分子式為C15H1206。氫譜顯示12個(gè)質(zhì)子信號(hào)，其中I個(gè)醛基氫質(zhì)子Sh9.60(1H，s)，4個(gè)烯氫質(zhì)子，其中 2 個(gè)反式烯氫質(zhì)子 δΗ6. 34(1Η, d, J=15. 9Hz)和 δ Η7· 54(1H，d，J=15. 9Hz)、2 個(gè)順式烯氫質(zhì)子 δ Η6· 84 (1Η, d, J=3. 5Ηζ)和 δ Η7· 53 (1Η, d, J=3. 5Hz)，I 個(gè)亞甲基 δ Η5· 27 (2Η, s)，3 個(gè) ABX 系統(tǒng)的芳?xì)滟|(zhì)子信號(hào) δ η7· 08 (1Η, d, J=L 8Hz)、δ Η6· 77 (1Η, d, J = 8. IHz)和δ η7· 03 (1Η, dd, J=L 8，8. IHz)，2 個(gè)羥基質(zhì)子信號(hào) 3_ΟΗ, 4-ΟΗ δ Η5_9 (2Η, brs)。碳譜顯示15個(gè)碳信號(hào)，其中I個(gè)醛基碳信號(hào)δ^78.5，1個(gè)酯羰基碳信號(hào)δε166. 0，10個(gè)芳碳信號(hào)，2個(gè)反式烯碳信號(hào)δε146. 3和δ c121. 8，I個(gè)亞甲基δ c57. 4。在1H-1H COSY相關(guān)譜中可以找到3組有相關(guān)關(guān)系的質(zhì)子，即第一組δΗ7. 08(1H, d, J=L 8Ηζ), δ H6. 77 (1H, d, J = 8. 1Hz)和 δΗ7. 03(1H, dd, J=L 8, 8. 1Hz)；第二 組δ Η6· 34(1H，d，J=15. 9Hz)和 δ Η7· 54 (1H，d，J=15. 9Hz);第三組δ η6· 84 (1H, d, J=3. 5Hz)和 δ Η7· 53 (1Η, d, J=3. 5Hz)，結(jié)合 HMQC 譜可以推出以下 3 個(gè)簡(jiǎn)單小
片段
權(quán)利要求
1.一種脈絡(luò)寧酯，其特征在于該化合物的化學(xué)名為(E)-(5-formylfuran-2-yl)methyl-3-(3，4-dihydroxyphenyl) acrylate,結(jié)構(gòu)式為
2.權(quán)利要求I所述脈絡(luò)寧酯的制備方法，其特征在于以脈絡(luò)寧注射液為原料，采用硅膠柱、凝膠柱、大孔樹脂柱、反相柱中的一種或多種經(jīng)過多次層析分離提純得到。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于硅膠柱采用20(Γ300目硅膠；凝膠柱為S印hadex LH-20 ;大孔樹脂為D101、AB-8、HP-20或MCI ;反相柱為ODS。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于該方法以脈絡(luò)寧注射液為原料，經(jīng)Sephadex LH-20凝膠柱，采用甲醇、乙醇、20 80%的甲醇-水、或者20 80%的乙醇-水進(jìn)行等度洗脫，洗脫液再經(jīng)ODS反相柱，采用5、5%乙醇-水或5 95%甲醇-水進(jìn)行梯度洗脫，洗脫液再經(jīng)硅膠柱，采用石油醚-乙酸乙酯-丙酮溶劑系統(tǒng)、氯仿-甲醇、或者二氯甲烷-甲醇進(jìn)行洗脫，洗脫液再經(jīng)S印hadex LH-20凝膠柱，采用甲醇、乙醇進(jìn)行洗脫，洗脫液采用重結(jié)晶分離提純，得到脈絡(luò)寧酯。
5.權(quán)利要求I所述的脈絡(luò)寧酯與藥學(xué)上可接受的藥用輔料組成的藥物制劑。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的藥物制劑，其劑型為片劑、膠囊劑、顆粒劑或注射劑。
7.權(quán)利要求I所述的脈絡(luò)寧酯在制備治療心血管疾病的藥物中的應(yīng)用。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于心血管疾病為導(dǎo)致心肌缺血和/或缺氧的疾病，尤其是心肌梗塞、心肌炎、心肌肥大、冠心病。
全文摘要
本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，公開了脈絡(luò)寧酯及其制備方法和應(yīng)用。該脈絡(luò)寧酯的化學(xué)名為(E)-(5-formylfuran-2-yl)methyl-3-(3,4-dihydroxyphenyl)acrylate，結(jié)構(gòu)式為該脈絡(luò)寧酯對(duì)心肌細(xì)胞具有保護(hù)作用，可用于制備治療心血管疾病的藥物。
文檔編號(hào)A61P9/00GK102838570SQ201210292520
公開日2012年12月26日 申請(qǐng)日期2012年8月17日 優(yōu)先權(quán)日2012年8月17日
發(fā)明者馮煦, 湯衛(wèi)國, 王奇志, 徐向陽, 王鳴, 蔡瑩, 陳雨, 趙友誼, 張蕙, 印敏 申請(qǐng)人:金陵藥業(yè)股份有限公司