專利名稱：一種藥物組合物及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥物領(lǐng)域，特別是涉及一種中藥組合物及其在神經(jīng)元保護(hù)的用途。
背景技術(shù)：
益智,又名益智仁、益智子,為姜科植物益智Alpinia oxyphyl la Miq.的 干燥成熟果實。夏、秋間果實由綠變紅時采收，曬干或低溫干燥。產(chǎn)地廣東、海南、廣西、云南、福建等地。性味辛，溫。歸脾，腎經(jīng)。本品呈橢圓形，兩端略尖，長I. 2 2cm，直徑I I. 3cm。表面棕色或灰棕色，有縱向凹凸不平的突起棱線13 20條，頂端有花被殘基，基部常殘存果梗。果皮薄而稍韌，與種子緊貼，種子集結(jié)成團(tuán)，中有隔膜將種子團(tuán)分為3瓣，每瓣有種子6 11粒。種子呈不規(guī)則的扁圓形，略有鈍棱，直徑約3mm，表面灰褐色或灰黃色，外被淡棕色膜質(zhì)的假種皮；質(zhì)硬，胚乳白色。有特異香氣，味辛，微苦。三七，又名山漆、金不換、血參。五加科植物三七Panax notoginseng (Burk.)F.H.Chen的干燥根。秋季花開前采挖，洗凈，分開主根、支根及莖基，干燥。支根習(xí)稱“筋條”，莖基習(xí)稱“剪口”。味甘；微苦；性濕。歸肝、胃、心、肺、大腸經(jīng)。天麻,又名赤箭芝、獨(dú)搖芝,為蘭科植物天麻Gastrodia elata BI.的干燥塊莖。立冬后至次年清明前采挖，立即洗凈，蒸透，敞開低溫干燥。甘平，歸肝經(jīng)?，F(xiàn)代研究證實，天麻素(天麻甙)治療神經(jīng)衰弱和神經(jīng)衰弱綜合癥病人，有效率分別為89. 44%和86. 87%。且能抑制咖啡因所致的中樞興奮作用，還有加強(qiáng)戊巴比妥納的睡眠時間效應(yīng)。尼莫地平是一種親水性Ca2+通道阻滯劑，容易透過血腦屏障，主要作用是與L-型Ca2+通道結(jié)合，減少細(xì)胞膜Ca2+通道開放數(shù)目，從而限制Ca2+進(jìn)入細(xì)胞。基礎(chǔ)研究提示，抑制Ca2+內(nèi)流能保護(hù)神經(jīng)元免受一系列損害的影響，表明尼莫地平具有神經(jīng)保護(hù)潛能，特別是抵抗短暫缺血和缺氧的影響。在下丘腦、尾狀核和大腦皮質(zhì)特定區(qū)域，尼莫地平的結(jié)合位點(diǎn)數(shù)量眾多，這對學(xué)習(xí)與記憶發(fā)揮重要作用。在神經(jīng)元和腦血管細(xì)胞中也存在尼莫地平結(jié)合位點(diǎn)，尼莫地平通過影響神經(jīng)傳導(dǎo)和腦血流而發(fā)揮作用。與其他Ca2+通道阻滯劑不同的是，由于尼莫地平可直接作用于大腦局部血流的細(xì)小動脈平滑肌細(xì)胞，因此低劑量尼莫地平具有抗血管收縮和抗缺血效應(yīng)。隨著人均壽命的延長，老年人已成為當(dāng)今社會的龐大群體，神經(jīng)退行性疾病，例如癡呆的患病率也隨之增加。其中，阿爾茨海默病和血管性癡呆最為常見，根據(jù)不同統(tǒng)計資料，阿爾茨海默病約占所有癡呆的50%-70%，而血管性癡呆占10%-25%。我國是世界上人口老齡化基數(shù)最大的國家，根據(jù)2005年北京協(xié)和醫(yī)院牽頭的一項跨省市流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果估計，我國65歲以上老年人的癡呆患病率約為7. 8%。阿爾茨海默病是一組病因未明的原發(fā)性退行性腦變性疾病。多起病于老年期，潛隱起病，病程緩慢且不可逆，臨床上以智能損害為主。病理改變主要為皮質(zhì)彌漫性萎縮，溝回增寬，腦室擴(kuò)大，神經(jīng)元大量減少，并可見老年斑，神經(jīng)原纖維結(jié)等病變，膽堿乙?；讣耙阴Ｄ憠A含量顯著減少。起病在65歲以前者稱老年前期癡呆，或早老性癡呆，多有同病家族史，病情發(fā)展較快，顳葉及頂葉病變較顯著，常有失語。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明解決的技術(shù)問題是提供一種保護(hù)神經(jīng)元的藥物組合物，特別是提供一種中藥組合物用于保護(hù)神經(jīng)元。具體來說，本發(fā)明是通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)的一種保護(hù)神經(jīng)元或抑制神經(jīng)元損傷的藥物組合物，包含益智、三七和天麻。優(yōu)選地，一種保護(hù)神經(jīng)元或抑制神經(jīng)元損傷的藥物組合物，包含益智5-15重量份三七4-12重量份天麻3_10重量份。優(yōu)選為益智8-12重量份三七7-12重量份天麻5_9重量份； 更優(yōu)選為益智10重量份三七8重量份天麻7重量份。其中，所述的神經(jīng)元損傷是Glu損傷。一種保護(hù)神經(jīng)元或抑制神經(jīng)元損傷的藥物制劑，其采用所述的藥物組合物和藥學(xué)上可接受的輔料或載體制成。其中，所述藥物制劑為片劑、膠囊、顆粒劑、注射劑、丸劑、控釋制劑或口服液體制劑。一種保護(hù)神經(jīng)元或抑制神經(jīng)元損傷的藥物制劑單元，其中，每單元采用所述的總重量12-37g的藥物組合物和藥學(xué)上可接受的輔料或載體制成，優(yōu)選采用所述總重量20-30g的藥物組合物和藥學(xué)上可接受的輔料或載體制成。每個藥物制劑單元是臨床上的一次服用劑量，一般以一日兩次進(jìn)行服用。該劑量也適用于其他的單位制劑中，即每單位制劑采用總重量12_37g的所述的藥物組合物和適當(dāng)量的藥學(xué)上接受的輔料或載體制成。該單位制劑中含有的藥物組合物是通過本發(fā)明中的實驗確定，通過本發(fā)明中的效果實施例1-3可以看出在中高劑量時，具有很好保護(hù)神經(jīng)元和抑制神經(jīng)元損傷的效果，根據(jù)實驗結(jié)果判定，并考慮到毒性的問題，證明在中劑量的范圍內(nèi)的本發(fā)明藥物組合物在人體具有很好的保護(hù)神經(jīng)元和抑制神經(jīng)元損傷的作用，并可以達(dá)到治療神經(jīng)退行性疾病的效果。一種保護(hù)神經(jīng)元或抑制神經(jīng)元損傷的試劑盒，其特征在于含有1-3個所述的試劑單元。所述的藥物組合物、藥物制劑和/或藥物制劑單元在制備保護(hù)神經(jīng)元或抑制神經(jīng)元損傷的藥物中的應(yīng)用；優(yōu)選所述神經(jīng)元損傷是Glu的損傷。所述藥物組合物、藥物制劑和/或藥物制劑單元在制備治療神經(jīng)退行性疾病的藥物中的應(yīng)用。其中，所述的神經(jīng)退行性疾病包含阿爾茨海默病、血管性癡呆、共濟(jì)失調(diào)毛細(xì)血管擴(kuò)張癥、小腦萎縮癥、帕金森氏病、原發(fā)性側(cè)索硬化癥和/或脊髓性肌萎縮癥的藥物中的應(yīng)用。


圖I :各組皮層神經(jīng)元在MTT測定中的OD值。其中A為正常組；B為模型組；C為西藥組；D、E、F為益智仁低、中、高劑量組；G、H、I為合方低、中、高劑量組(本發(fā)明低、中、高劑量組)。
圖2:丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)曲線。圖3 :各組皮層神經(jīng)元在LDH漏出率檢測中的OD值。其中A為正常組；B為模型組；C為西藥組；D、E、F為益智仁低、中、高劑量組；G、H、I為合方低、中、高劑量組(本發(fā)明低、中、高劑量組)。
具體實施例方式關(guān)于益智，歷代醫(yī)家及本草論著都說益智能補(bǔ)腎壯陽，固精縮尿，溫脾止泄，悅色延年，提高記憶力。而且是“久服輕身”，是一味補(bǔ)腎防衰良藥。據(jù)現(xiàn)代藥理研究證實，益智含有多種化合物、微量生物及結(jié)晶性中性物質(zhì)等營養(yǎng)成分，其水煎劑和乙醇浸出物能夠增 強(qiáng)陽虛動物的脾臟和增加胸腺重量，說明它對特異性細(xì)胞免疫功能也有促進(jìn)作用，并能改善陽虛動物的營養(yǎng)、體重和耐受力等，對陽虛怕冷的病人有明顯的強(qiáng)壯和治療作用。益智中所含的苯丙基糖甙類化合物能明顯提高男性的性功能和記憶力。日本醫(yī)學(xué)家研究也發(fā)現(xiàn)，益智的提取化合物可以作為性功能障礙和健忘的治療劑，并認(rèn)為這對身心疾病也具有預(yù)防和治療作用，屬于安全有效的功能改善藥。無怪乎中醫(yī)說益智溫而不熱，暖而不燥，補(bǔ)而不峻，澀而不泄，有緩和之性，很適合長期從事腦力勞動者和體質(zhì)虛弱者作為鍵腦益智和延緩衰老，益壽延年之品服用。關(guān)于三七，發(fā)明人經(jīng)過研究發(fā)現(xiàn)，三七具有抗腦缺血作用，靜脈注射PNS(三七總皂甙)可明顯擴(kuò)張麻醉小鼠軟腦膜微血管，加快血流速度，增加局部血流量。對家兔雙側(cè)頸總動脈及股動脈快速放血后造成不完全性腦缺血，PNS靜脈注射，能顯著緩解因缺血所致的腦電波低平，顯著降低大腦皮層組織水、鈉、鈣含量及腦靜脈血中CPK (肌酸磷酸激酶)和(乳酸脫氫酶LDH)的活性。三七抗腦缺血作用，除與擴(kuò)張腦血管，增加局部血流量有關(guān)外，尚與延緩缺血組織ATP的分解，改善能量代謝，以及抑制脂質(zhì)過氧化，提高腦組織中SOD (超過氧化物歧化酶)活性，清除氧自由基等作用有關(guān)。同時，其成分具有擴(kuò)張血管、降低血壓，改善微循環(huán)，增加血流量，預(yù)防和治療心腦組織缺血、缺氧癥；促進(jìn)蛋白質(zhì)、核糖核酸(RNA)JA氧核糖核酸(DNA)合成，強(qiáng)身健體；促進(jìn)血液細(xì)胞新陳代謝，平衡調(diào)節(jié)血液細(xì)胞；雙向調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)，提高腦力，增強(qiáng)學(xué)習(xí)和記憶能力；增強(qiáng)機(jī)體免疫功能，抗腫瘤；延緩衰老等功效。關(guān)于天麻，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)其具有明目和顯著增強(qiáng)記憶力的作用。天麻對人的大腦神經(jīng)系統(tǒng)具有明顯的保護(hù)和調(diào)節(jié)作用，能增強(qiáng)視神經(jīng)的分辨能力，目前已用作高空飛行人員的腦保健食品或腦保健藥物。上述三個藥材單獨(dú)在保護(hù)神經(jīng)元損傷，特別是作為治療神經(jīng)退行性疾病都還沒有報道。本發(fā)明通過研究本發(fā)明組合物在保護(hù)神經(jīng)元損傷上最終用于治療神經(jīng)退行性疾病。關(guān)于神經(jīng)元損傷的保護(hù)方面，發(fā)明人經(jīng)過總結(jié)發(fā)現(xiàn)，谷氨酸對神經(jīng)元的損傷作用主要是通過激活相應(yīng)受體主要包括KA/AMPA，NMDA(N-甲基-D-天(門)冬氨酸)和mGluR，mGluRl和mGluR5介導(dǎo)的，導(dǎo)致Ca2+超載。神經(jīng)元內(nèi)Ca2+超載激發(fā)損傷級聯(lián)反應(yīng)主要有以下兩種方式( I)激活各種酶類，進(jìn)而損傷神經(jīng)元細(xì)胞結(jié)構(gòu)，最終使細(xì)胞損傷和凋亡，其中所述激活的酶類包括①磷脂酶A (PLA)和磷脂酶C(PLC);②鈣依賴性蛋白酶calpain 核酸內(nèi)切酶一氧化氮合酶；⑤蛋白激酶。(2)導(dǎo)致線粒體損傷，其中鈣離子超載，造成線粒體腫脹，最終導(dǎo)致線粒體釋放更多的Ca2+，同時釋放細(xì)胞色素C和自由基，后移位至胞漿內(nèi)，最終導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。阿爾茨海默病主要表現(xiàn)為腦細(xì)胞的廣泛死亡，特別是基底節(jié)區(qū)的腦細(xì)胞。正常情況下，基底節(jié)區(qū)發(fā)出的纖維投射到大腦與記憶和認(rèn)知有關(guān)的皮質(zhì)，它釋放乙酰膽堿。短期記憶的形成必須有乙酰膽堿的參與，患者與正常人相比乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶的含量比正常人減少90%。經(jīng)解剖發(fā)現(xiàn)，患者腦中有廣泛的神經(jīng)元纖維纏結(jié)，軸突纏結(jié)形成老年斑。老年斑中含有壞死的神經(jīng)細(xì)胞碎片、鋁、異常的蛋白，阿爾茨海默病患者腦內(nèi)β -淀粉樣蛋白過度積聚。目前公認(rèn)的發(fā)病機(jī)制主要有兩種I、由于淀粉樣前蛋白的異常導(dǎo)致蛋白成分漏出細(xì)胞膜，導(dǎo)致神經(jīng)元纖維纏結(jié)和細(xì)胞死亡，基因位于21號染色體。

2、與載脂蛋白E (ΑΡ0-Ε4)的基因有關(guān)，ΑΡ0-Ε4的增多能對抗ΑΡ0-Ε2或ΑΡ0-Ε3的功能。ΑΡ0-Ε4使神經(jīng)細(xì)胞膜的穩(wěn)定性降低，導(dǎo)致神經(jīng)元纖維纏結(jié)和細(xì)胞死亡。APO-基因純合子比雜合子患病幾率高。通過上述神經(jīng)元損傷的機(jī)理以及神經(jīng)退行性疾病的機(jī)制，作為本領(lǐng)域常識，可以通過保護(hù)神經(jīng)元，達(dá)到減少神經(jīng)元損傷，進(jìn)而治療本發(fā)明所述的疾病，其中所述的疾病可以是各種神經(jīng)退行性疾病，如阿爾茨海默病、血管性癡呆、共濟(jì)失調(diào)毛細(xì)血管擴(kuò)張癥、小腦萎縮癥、帕金森氏病、原發(fā)性側(cè)索硬化癥和脊髓性肌萎縮癥。近年來的研究表明，中樞高濃度的Glu水平會導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞的死亡。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，腦缺血/再灌注可以導(dǎo)致海馬的Glu濃度上升，細(xì)胞外的Glu富集，可能通過改變突觸后NMDA受體的活性上調(diào)，引起大量Ca2+內(nèi)流引起急性的滲透性損傷和慢性的氧化損傷，而導(dǎo)致海馬神經(jīng)細(xì)胞的丟失，海馬的形態(tài)學(xué)損傷。因此，腦缺血/再灌注引起的海馬內(nèi)Glu濃度的升高，這可能造成海馬神經(jīng)細(xì)胞的興奮性毒性損傷，也可能是海馬損傷的基礎(chǔ)，是海馬依賴的學(xué)習(xí)記憶能力下降的神經(jīng)內(nèi)分泌學(xué)基礎(chǔ)。而現(xiàn)在的機(jī)制研究均已經(jīng)證明保護(hù)神經(jīng)元和抑制神經(jīng)元損傷可以治療神經(jīng)退行性疾病，如阿爾茨海默病、血管性癡呆、共濟(jì)失調(diào)毛細(xì)血管擴(kuò)張癥、小腦萎縮癥、帕金森氏病、原發(fā)性側(cè)索硬化癥和脊髓性肌萎縮癥。腦缺血、阿爾茨海默病、亨廷頓病等疾病的一個共同特點(diǎn)是谷氨酸產(chǎn)生的過度興奮，這可能損傷到海馬神經(jīng)元，所以保護(hù)神經(jīng)元，減少神經(jīng)元纖維纏結(jié)可以有效地防治神經(jīng)退行性疾病，如阿爾茨海默病、血管性癡呆、共濟(jì)失調(diào)毛細(xì)血管擴(kuò)張癥、小腦萎縮癥、帕金森氏病、原發(fā)性側(cè)索硬化癥和脊髓性肌萎縮癥。實施例首先，對下面效果實施例和制備實施例中所用的測定裝置和測定方法進(jìn)行說明如下益智、三七、天麻均購于同仁堂醫(yī)藥公司；大鼠購于北京維通利華實驗動物有限公司PBS成分為購于上海優(yōu)寧維生物科技有限公司酶標(biāo)儀購于貝克曼商貿(mào)(中國)有限公司(BECKMAN COULTER)型號AD340STriton-X-100 :即聚乙二醇辛基苯基醚，購于上海優(yōu)寧維生物科技有限公司丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)品購于上海優(yōu)寧維生物科技有限公司
尼莫地平購于北京中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院東直門醫(yī)院輔酶I :成分為煙酰胺腺嘌呤二核苷，購于上海優(yōu)寧維生物科技有限公司。B27 :購于北京賽諾科為生物科技有限公司其他培養(yǎng)基、維持液、試劑和設(shè)備均是市售的可以達(dá)到本發(fā)明要求的常規(guī)試劑。制備實施例實施例I益智浸膏的制備取益智藥材100g，將其放在煎煮鍋內(nèi)，第一次加入8倍于藥材重量的水，煎煮I小時；第二次給予6倍于藥材重量的水，煎煮I小時，合并兩次煎液，并濾過。在70°C條件下， 將濾液濃縮成相對密度為I. 30，后在60°C條件下，經(jīng)抽真空干燥處理，經(jīng)100目過篩，制成浸膏14. Ig0合方藥物浸膏的制備 取生藥材益智50g,三七40g,天麻35g,將其放在煎煮鍋內(nèi)，第一次給予8倍于藥材重量的水，煎煮I小時；第二次給予6倍于藥材重量的水，煎煮I小時，合并兩次煎液，并濾過。在70°C條件下，將濾液濃縮成相對密度為I. 30，后在60°C條件下，經(jīng)抽真空干燥處理，經(jīng)100目過篩，得到浸膏29. 25g，出膏率23. 4%。實施例2使用益智150g，三七40g，天麻30g，按照實施例I相同的方法制備藥物浸膏24. Sg,出膏率11. 3%。將得到的浸膏12. 4g噴霧干燥成干浸膏粉，后加入適量的糊精和蔗糖共5. Ig,混合攪拌均勻，加入膠囊中，制成膠囊50粒，每膠囊O. 35g，每次5粒，每日兩次。實施例3使用的益智50g，三七40g，天麻30g，按照實施例I相同的方法制備藥物浸膏18g，出膏率15%。取得到的浸膏9g，加入淀粉4. 0g，硬脂酸鎂O. 5g混合攪拌均勻，后進(jìn)行壓片，壓成45片，制成片劑，每片O. 30g,每次3片，每日三次。實施例4使用的益智80g，三七120g，天麻90g，按照實施例I相同的方法制備藥物浸膏52. Sg,出膏率18. 2%。取浸膏26. 4g在60°C條件下，經(jīng)抽真空干燥處理，經(jīng)100目過篩，制成粉末，加入30g煉蜜和3. 6g紅糖,混合攪拌均勻,后進(jìn)行塑型成圓形,制成10丸,每丸6g,每日兩次，每次I丸。實施例5取生藥材益智IOg,三七8g,天麻7g,將其放在煎煮鍋內(nèi)，第一次給予8倍于藥材重量的水，煎煮I小時；第二次給予6倍于藥材重量的水，煎煮I小時，合并兩次煎液，并濾過，制成水煎劑，將得到煎液的等分為兩份，每次服用一份，每日服用兩次。實施例6 取生藥材益智60g，三七35g，天麻25g，按照實施例5的方法制成水煎劑后，將得到煎液的等分為兩份，每次服用一份，每日服用兩次。實施例7取生藥材益智仁IOg,三七8g,天麻7g,遠(yuǎn)志8g,胡桃肉10g。按照實施例5的方法制成水煎劑后，將得到煎液的等分為兩份，每次服用一份，每日服用兩次。
效果實施例II.實驗用藥單味益智浸膏實施例I制備的益智浸膏本發(fā)明藥物組合物的浸膏實施例I制備的本發(fā)明藥物組合物的浸膏。2.含藥血清的制備取健康雄性SD (Sprague Dawley)大鼠90只，體重200± IOg,隨機(jī)分為9組,每組10只。即正常組(等體積的蒸餾水)，模型組(等體積的蒸餾水)，西藥組(尼莫地平8. Img/kg),益智仁高劑量組(I. 8g/kg)(簡稱益高組)，益智仁中劑量組(O. 9g/kg)(簡稱益中組)，益智仁低劑量組(O. 45g/kg)(簡稱益低組)，合方高劑量組(本發(fā)明藥物組合物I. 05g/kg)(簡稱合高組)，合方中劑量組(本發(fā)明藥物組合物O. 53g/kg)(簡稱合中組)，合方低劑量組(本發(fā)明藥物組合物O. 26g/kg)(簡稱合低組)。灌胃給藥，I次/d，連續(xù)7d。末次給藥 后，動物禁食，次日10%水合氯醛麻醉(O. 35ml/100g)，腹主動脈取血，室溫靜置2h后，4°C，3000r/min,離心IOmin,分離血清,經(jīng)56°C, 30min水浴滅活,O. 22 μ m濾膜過濾滅菌,凍存管分裝，-80°C保存?zhèn)溆谩?.皮層神經(jīng)元的原代培養(yǎng)24h內(nèi)新生SD大鼠4只，頭部75%酒精消毒后，取腦組織，分離皮層，用解剖液清洗2次，顯微鏡下去除血管、腦膜等結(jié)締組織，在平皿中剪成Imm3碎塊，加入與平皿中解剖液等體積的EDTA (終濃度O. 02%)/胰酶(終濃度為O. 125%)混合液，37°C消化25min，中間輕搖兩次。吸出組織塊于15ml離心管，加入接種液終止消化，4°C、1000r/min、離心5min，棄上清液。加入約IOml接種液吹打、靜置、取上清液，用200目濾網(wǎng)過濾，上述吹打步驟反復(fù)進(jìn)行，直到組織完全溶解。收集細(xì)胞懸液，取20 μ I滴入細(xì)胞計數(shù)板，進(jìn)行活細(xì)胞計數(shù)，調(diào)整細(xì)胞密度至1*106個/ml，均勻接種在事先O. 001%多聚賴氨酸包被過的2塊96孔培養(yǎng)板和3塊24孔培養(yǎng)板中，靜置在37°C、5%C02飽和濕度CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24h，后全部換成維持液，后每隔2d將維持液的一半進(jìn)行換液I次，并在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況，準(zhǔn)備待用。培養(yǎng)液組成接種液79. 5%DMEM (達(dá)爾伯克(氏)必須基本培養(yǎng)基)+10%馬血清+10%胎牛血清+0. 5%青鏈霉素維持液96. 5%NBM (邁內(nèi)特(氏)基底核神經(jīng)細(xì)胞誘導(dǎo)培養(yǎng)基，英文全稱Neurobasal A Medium) +2%B27 (是神經(jīng)元無血清培養(yǎng)的常用添加劑，在N2添加劑的硒、腐胺、鐵傳遞蛋白和孕酮等成分的基礎(chǔ)上進(jìn)一步添加了激素、抗氧化劑等成分)+1%NGF (神經(jīng)生長因子)+0. 5%青鏈霉素4.皮層神經(jīng)元給藥細(xì)胞培養(yǎng)至第10d，棄去維持液，向上述2塊96孔培養(yǎng)板和3塊24孔培養(yǎng)板中加入等量預(yù)熱的含藥物血清的培養(yǎng)液，其中各板的分組情況根據(jù)測定方法不同而不同，具體見測定方法時的分組情況，其中關(guān)于分組主要分為9組空白組，模型組，西藥組，益智仁高劑量組，益智仁中劑量組，益智仁低劑量組，本發(fā)明藥物組合物高劑量組，本發(fā)明藥物組合物中劑量組，本發(fā)明藥物組合物低劑量組，將上述給藥后的神經(jīng)元細(xì)胞在37°C下培養(yǎng)24h，待用。其中含藥培養(yǎng)液組成
5%含藥血清+5%馬血清+0. 5%青鏈霉素+89. 5%DMEM5.皮層神經(jīng)元谷氨酸損傷模型制備藥物作用24h后，除正常組加入等量的DMEM外，各組加入DMEM配制的Glu (Glu終濃度為200 μ mol/L)，在37°C下培養(yǎng)20min，棄上清液，用預(yù)熱的D-Hanks液洗2次，加入DMEM，37°C 培養(yǎng) 24h。6.檢測6. I MTT 檢測6. I. I MTT 檢測原理MTT名為噻唑藍(lán)，為淡黃色，MTT試驗是用于分析活的、具有代謝活性的哺乳動物細(xì)胞活力的一種方法?；罴?xì)胞線粒體內(nèi)的琥珀酸脫氫酶能作用于MTT的四氮唑環(huán)，使其斷 裂，形成蘭紫色結(jié)晶物-甲瓚衍生物，沉積在細(xì)胞內(nèi)。該結(jié)晶可被二甲基亞砜(DMSO)溶解，在560-610nm處有一個較寬的最大吸收峰，用酶標(biāo)儀可定量測定570nm處光密度值(OD)。由于甲瓚生成量與線粒體琥珀酸脫氫酶活性呈正相關(guān)，可用OD值大小反映琥珀酸脫氫酶的活性，從而間接反映活細(xì)胞數(shù)量?；罴?xì)胞越多，紫色產(chǎn)物越多，則OD值越高。MTT代謝率實際上是反映線粒體內(nèi)膜脫氫酶的活性，即反線粒體的功能，而線粒體為細(xì)胞能量供應(yīng)的工廠，故MTT代謝率降低，意味著細(xì)胞代謝活力降低。在細(xì)胞的病理變化中，線粒體被認(rèn)為是細(xì)胞受損最靈敏的指標(biāo)，因此MTT法能夠十分靈敏地反映細(xì)胞毒性程度。6. I. 2 MTT 檢測步驟將一塊96孔板中上清液棄去，每孔加入100 μ 1DMEM，再加入20 μ IMTT (PBS配為5mg/ml)，混勻，37°C孵育4h。棄上清液，每孔加入150 μ 1DMS0,室溫振蕩lOmin，用酶標(biāo)儀測定570nm的OD值。細(xì)胞存活率=(各組吸光度值/空白組吸光度值)X 100%。其中96孔板分組如表I所示，共有12列，每列8個復(fù)孔。表I 96孔板的分組情況表
權(quán)利要求
1.一種保護(hù)神經(jīng)元或抑制神經(jīng)元損傷的藥物組合物，包含益智、三七和天麻。
2.如權(quán)利要求I所述保護(hù)神經(jīng)元或抑制神經(jīng)元損傷的藥物組合物，包含 益智5-15重量份三七4-12重量份天麻3-10重量份。
3.如權(quán)利要求I或2所述保護(hù)神經(jīng)元或抑制神經(jīng)元損傷的藥物組合物，包含 益智8-12重量份三七7-12重量份天麻5-9重量份； 優(yōu)選為益智10重量份三七8重量份天麻7重量份。
4.如權(quán)利要求1-3任一項所述的保護(hù)神經(jīng)元或抑制神經(jīng)元損傷藥物組合物，其中所述的神經(jīng)元損傷是Glu損傷。
5.一種保護(hù)神經(jīng)元或抑制神經(jīng)元損傷的藥物制劑，其采用權(quán)利要求1-4任一項所述的藥物組合物和藥學(xué)上可接受的輔料或載體制成。
6.如權(quán)利要求5所述保護(hù)神經(jīng)元或抑制神經(jīng)元損傷的藥物制劑，所述藥物制劑為片劑、膠囊、顆粒劑、注射劑、丸劑、控釋制劑或口服液體制劑。
7.一種保護(hù)神經(jīng)元或抑制神經(jīng)元損傷的藥物制劑單元，其中，每單元采用權(quán)利要求1-4任一項所述總重量12-37g的藥物組合物和藥學(xué)上可接受的輔料或載體制成，優(yōu)選采用利要求1-4任一項所述總重量20-30g的藥物組合物和藥學(xué)上可接受的輔料或載體制成。
8.一種保護(hù)神經(jīng)元或抑制神經(jīng)元損傷的試劑盒，其特征在于含有1-3個權(quán)利要求7所述的試劑單元。
9.權(quán)利要求1-4任一項所述的藥物組合物、權(quán)利要求5-6所述的藥物制劑和/或權(quán)利要求7藥物制劑單元在制備保護(hù)神經(jīng)元或抑制神經(jīng)元損傷的藥物中的應(yīng)用；優(yōu)選所述神經(jīng)元損傷是Glu的損傷。
10.權(quán)利要求1-4任一項所述的藥物組合物、權(quán)利要求5-6所述的藥物制劑和/或權(quán)利要求7藥物制劑單元在制備治療神經(jīng)退行性疾病的藥物中的應(yīng)用。
11.如權(quán)利要求10所述的藥物組合物在制備藥物中的應(yīng)用，所述的神經(jīng)退行性疾病包含阿爾茨海默病、血管性癡呆、共濟(jì)失調(diào)毛細(xì)血管擴(kuò)張癥、小腦萎縮癥、帕金森氏病、原發(fā)性側(cè)索硬化癥和/或脊髓性肌萎縮癥的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種藥物組合物及其用途，具體來說，本發(fā)明涉及一種保護(hù)神經(jīng)元或抑制神經(jīng)元損傷的藥物組合物，該藥物組合物包含以下組分益智5-15重量份，三七4-12重量份，天麻3-10重量份。本發(fā)明還涉及一種保護(hù)神經(jīng)元或抑制神經(jīng)元損傷的藥物制劑，以及一種藥物制劑單元及試劑盒。本發(fā)明還提供了所述的藥物組合物在制備保護(hù)神經(jīng)元的藥物中的應(yīng)用；優(yōu)選在制備治療神經(jīng)退行性疾病的藥物中的應(yīng)用；更優(yōu)選在制備治療阿爾茨海默病、血管性癡呆、共濟(jì)失調(diào)毛細(xì)血管擴(kuò)張癥、小腦萎縮癥、帕金森氏病、原發(fā)性側(cè)索硬化癥和脊髓性肌萎縮癥的藥物中的應(yīng)用。
文檔編號A61P25/16GK102813868SQ201210270268
公開日2012年12月12日 申請日期2012年7月31日 優(yōu)先權(quán)日2012年7月31日
發(fā)明者李傅堯, 馬捷, 李峰, 劉曉萌, 景昊 申請人:李峰