專利名稱：一株頭棒束孢霉及其應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一株頭棒束孢霉及其應用。
背景技術：
目前世界在治療腫瘤方面行之有效的方法就是手術，還有手術之后的化療與放療，但是如果僅憑手術治療腫瘤，這樣治好的腫瘤，在以后腫瘤復發(fā)率是相當高的，還得需要進行食療來輔助，而且化療放療對人體的副作用是非常高的，給患者帶來很大的痛苦，所以實際呢在某些時候在放化療之后患者生存的時間比沒有比化療放療前生存的時間更長，所有現(xiàn)代醫(yī)學開始進行綜合治療方案，什么是綜合治療呢？所謂綜合治療就是在手術前后，進行放化療手術的同時服用具有能夠緩解抵抗放化療之后對身體的傷害與疼痛的保健食品。所以，開發(fā)能夠緩解抵抗放化療之后對身體的傷害與疼痛的保健食品對腫瘤的治療具有重要的意義。

發(fā)明內容
本發(fā)明的一個目的是提供一株頭棒束孢霉及其應用。本發(fā)明所提供的頭棒束孢霉菌株是頭棒束孢霉(Isaria cretacea) A_01,其在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心的登記入冊編號為CGMCC No. 6204。該菌種已于2012年06月07日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCOo頭棒束孢霉(Isaria cretacea) A-01是蔡春于1987年8月從中國四川阿壩地區(qū)采集的蟲草蝙蝠蛾幼蟲(Hepialius armoricanus)上分離的菌種(其培養(yǎng)特征及形態(tài)特征如下在蛋白胨葡萄糖培養(yǎng)基25°C培養(yǎng)，菌落呈白色，絨毛狀，有淺皺，培養(yǎng)三四天菌絲出現(xiàn)束狀，后編結明顯，兩至三周，散生和叢生的白色孢梗束生長旺盛，下部有柄，上端稍扁，呈分枝狀，孢梗束長達2. 5-4. 5厘米，直徑為O. 6-2. O毫米。孢梗束由許多平行及交錯的菌絲體編結組成，周圍呈粉末狀，孢梗束外周布滿大量分生孢子及散生菌絲。該菌菌絲透明、有隔、分枝，直徑2. 2-2. 8微米，瓶梗從菌絲或從一短梗上長出，無色透明，單生、互生或對生，中上部稍膨大，頂端收縮。分生孢子呈卵形或橢圓形，大小為2. 5-3. 5X2. 2-2. 8微米，無色光滑透明，聚生于瓶梗頂部。本發(fā)明的另一個目的是提供一種微生物菌劑。本發(fā)明所提供的微生物菌劑，它的活性成分是頭棒束孢霉(Isaria cretacea)A-01,具體可為頭棒束孢霉(Isaria cretacea) A-Ol的分生孢子和/或菌絲體。該菌劑具有下述至少一種作用I)對X射線照射的動物骨髓和小腸具有保護作用；2)對動物染色體損傷具有保護作用；3)增強射線對腫瘤殺傷的作用；4)細胞免疫調節(jié)作用；
5)體液免疫調節(jié)作用；6)治療心悸；7)治療氣短；8)治療乏力；9)治療胸悶；10)治療納差；11)治療便秘；
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12)治療失眠；13)治療多夢。該菌劑可按照包括以下步驟的方法制備將頭棒束孢霉(Isaria cretacea) A-Ol接入PDA培養(yǎng)基中，在16-20°C，每天24小時黑暗條件下培養(yǎng)14天，將培養(yǎng)容器內的所有培養(yǎng)物干燥粉碎得到所述菌劑。實施例2-6的實驗證明，頭棒束孢霉(Isaria cretacea) A_01及以其為活性成分的菌劑可用于制備具有下述至少一種功能的產品I)對X射線照射的動物骨髓和小腸具有保護作用；2)對動物染色體損傷具有保護作用；3)增強射線對腫瘤殺傷的作用；4)細胞免疫調節(jié)作用；5)體液免疫調節(jié)作用；6)治療心悸；7)治療氣短；8)治療乏力；9)治療胸悶；10)治療納差；11)治療便秘；12)治療失眠；13)治療多夢。所述產品具體可為藥物或保健品。囷種名稱頭棒束抱霉拉丁名Isariacretacea菌株編號A-01保藏機構中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏機構簡稱CGMCC地址北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號保藏日期2012年06月07日保藏中心登記入冊編號CGMCC No. 6204下面結合具體實施例詳細描述本發(fā)明，這些實施例用于理解而不是限制本發(fā)明。


圖I為頭棒束孢霉(Isaria Cretacea) A_0ICGMCC No. 6204的菌種袋培養(yǎng)物照片。
具體實施例方式下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。下述實施例中的培養(yǎng)基每IL蛋白胨葡萄糖培養(yǎng)基由如下物質制成蛋白胨10g、葡萄糖10g、瓊脂20g和水。其中，用水將培養(yǎng)基定容至1000ml。每IL PD培養(yǎng)基由如下物質制成200g 土豆、20. Og葡萄糖和水。其中，用水將培 養(yǎng)基定容至1000ml。每IL PDA培養(yǎng)基由如下物質制成200g土豆、20.(^葡萄糖、2(^瓊脂和水。其中，用水將培養(yǎng)基定容至1000ml。ro培養(yǎng)基的配制方法如下將切成小塊的去皮土豆煮沸半小時，然后用紗布過濾，在濾液中，加入葡萄糖，用水定容至IOOOmL,得到H)培養(yǎng)液，再把ro培養(yǎng)液150ml裝入300ml三角瓶中，121 °C濕熱滅菌30min得到H)培養(yǎng)基。秈米培養(yǎng)基的配制方法如下先將150g秈米裝于準備好的菌種袋中，加入75ml未滅菌的ro培養(yǎng)液，用棉塞封口，再用牛皮紙包扎好，高溫滅菌制備。其中高溫滅菌條件I. lkPa，121°C條件下，濕熱滅菌半個小時。PDA培養(yǎng)基的配制方法如下將切成小塊的去皮土豆煮沸半小時，然后用紗布過濾，在濾液中，加入葡萄糖和瓊脂，用水定容至IOOOmL,再121 °C濕熱滅菌30min得到PDA培養(yǎng)基。蛋白胨葡萄糖培養(yǎng)基的配制方法如下將瓊脂放入水中煮熔，再加入蛋白胨和葡萄糖后攪拌溶解，調pH值至6. 5 7，用水定容至IOOOmL,再121 °C濕熱滅菌30min得到蛋
白胨葡萄糖培養(yǎng)基。實施例I、頭棒束抱霉(Isaria Cretacea)A_0ICGMCC No. 6204 菌種的制備將頭棒束孢霉(Isaria Cretacea)A_0ICGMCC No. 6204接種于PDA培養(yǎng)基的斜面上，在18 °C,黑暗條件下培養(yǎng)14天，得到頭棒束孢霉(Isaria Cretacea) A-OICGMCCNo. 6204 菌種。實施例2、頭棒束抱霉(Isaria Cretacea) A_0ICGMCC No. 6204菌絲粉的制備I、菌種液的制備將頭棒束抱霉(Isaria Cretacea)A~0ICGMCC No. 6204菌種接種于ro培養(yǎng)基中，在22°C，轉速150rpm，黑暗條件下進行振蕩培養(yǎng)72小時得到菌種液。2、制備菌絲粉將滅菌好的秈米培養(yǎng)基,隔著菌種袋揉碎,每袋在無菌條件下接種入菌種液15ml，繼續(xù)無菌操作，用棉塞封好口，隔著菌種袋揉勻后，放入培養(yǎng)室，在培養(yǎng)架上以不接觸棉塞為標準盡量攤平擺放培養(yǎng)。在黑暗條件下，18°C環(huán)境中，培養(yǎng)21天。21天后，將菌種袋內的所有培養(yǎng)物(如圖I，包括培養(yǎng)基、分生孢子和菌絲)在80°C條件下烘干72小時，干燥后粉碎后過120目篩，得到頭棒束孢霉(Isaria Cretacea)A-OICGMCC No. 6204菌絲粉。實施例3、頭棒束孢霉(Isaria Cretacea) A_0ICGMCC No. 6204對X射線照射小鼠的骨髓和小腸具有保護作用
本實施例采用脾結節(jié)形成法觀察BALB/c小鼠服用實施例2的頭棒束孢霉(IsariaCretacea) A-OICGMCC No. 6204菌絲粉后受不同劑量X線照射后骨髓干細胞的存活情況，以單純受照射及正常小鼠為對照；以小腸隱窩細胞再生法觀察BALB/c和KM小鼠在服用實施例2的頭棒束孢霉(Isaria Cretacea) A-OICGMCC No. 6204菌絲粉不同時間受不同劑量X線照射后的小腸隱窩細胞再生情況與單純照射組相比較。材料與方法I、脾克隆(脾結節(jié))形成實驗
小鼠供體小鼠及受體小鼠均為BALB/c純系小鼠,雌、雄各半,體重18-22克，。照射條件實驗采用SL75-20直線加速器，8MeV_X線，SSD :80cm，劑量率468cGy/min.照射前進行劑量校準，照射時將小鼠置于有機玻璃盒內，表現(xiàn)覆蓋2cm臘塊，作全身照射。實驗方法供體鼠BALB/c純系小鼠120只(雌、雄各半)，均分兩大組單純照射組(對照組)和加藥組。加藥組用如下含藥料喂養(yǎng)在普通飼料中加入實施例2的頭棒束孢霉(IsariaCretacea)A-OICGMCC No. 6204菌絲粉制成含藥料，該含藥料中的頭棒束孢霉(IsariaCretacea) A-OICGMCC No. 6204菌絲粉的含量使每只小鼠的給藥量達3g菌絲粉/kg體重。單純照射組用普通飼料喂養(yǎng)。喂養(yǎng)10天后，將加藥組和單純照射組的各60只小鼠均分為6小組，分六個劑量點(0Gy、lGy、2Gy、3Gy、4. 5Gy和6Gy)于清醒狀態(tài)下分別進行全身照射。照射后2小時內斷頸處死小鼠。無菌情況下剝離股骨，用O. 9%生理鹽水灌注到骨髓腔內，反復沖洗三次，將同一劑量組的骨髓混合制成單細胞懸液。顯微鏡下計數有核細胞數并根據不同照射劑量將細胞稀釋到所需濃度，低溫保存?zhèn)溆?。受體鼠BALB/c純系小鼠120只(雌、雄各半)，全身照射8.5Gy后，分成與供體鼠實驗條件相對應的12組，每組10只小鼠。于照射后，2小時內行尾靜脈注射上述待用的供體小鼠(注射的細胞數量依照射劑量而定)。照射后用普通飼料喂養(yǎng)9天，然后斷頸處死小鼠，取脾,!^!!![!!^液固定三天^軍剖鏡下進行脾克隆形成單位丨⑶]^]!}^。； ^]^ unit of spleen,CFU )計數。結果如表1-3所示,表明在照射前服用實施例2的頭棒束孢霉(Isaria Cretacea)A-OICGMCC No. 6204菌絲粉的小鼠，受l_3Gy照射后，骨髓干細胞存活數均高于單純照射組。在未照射的小鼠中，服用實施例2的頭棒束孢霉(Isaria Cretacea)A-OICGMCC No. 6204菌絲粉也能使骨髓干細胞的活性有一定提高。如以細胞存活曲線的形式表示骨髓干細胞的存活情況，可見l_3Gy照射時加藥組的骨髓干細胞存活情況均較單純照射組為高。以Dq比的保護作用(防護系數)為1.677。說明在較低劑量時(即放射治療時每分次照射劑量范圍內)實施例2的頭棒束孢霉(Isaria Cretacea) A-OICGMCC No. 6204菌絲粉對骨髓干細胞有顯著的保護作用。表I.小鼠脾克隆計數
權利要求
1.頭棒束孢霉Isariacretacea),其特征在于所述頭棒束孢霉Isaria cretacea)的菌株號為A-01，其在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心的登記入冊編號為CGMCC No. 6204。
2.權利要求I所述的頭棒束孢霉(Isariacretacea)在生產分生孢子中的應用。
3.權利要求I所述的頭棒束孢霉(Isariacretacea)在生產菌絲體中的應用。
4.微生物菌劑，它的活性成分是權利要求I所述的頭棒束孢霉(Isariacretacea)。
5.根據權利要求4所述的菌劑,其特征在于所述頭棒束孢霉(Isariacretacea)為分生孢子和/或菌絲體。
6.根據權利要求4所述的菌劑，其特征在于所述菌劑具有下述至少一種作用 1)對X射線照射的動物骨髓和小腸具有保護作用； 2)對動物染色體損傷具有保護作用； 3)增強射線對腫瘤殺傷的作用； 4)細胞免疫調節(jié)作用； 5)體液免疫調節(jié)作用； 6)治療心悸； 7)治療氣短； 8)治療乏力； 9)治療胸悶； 10)治療納差； 11)治療便秘； 12)治療失眠； 13)治療多夢。
7.根據權利要求4、5或6所述的菌劑，其特征在于所述菌劑按照包括以下步驟的方法制備將權利要求I所述的頭棒束孢霉(Isaria cretacea)接入PDA培養(yǎng)基中，在16-20°C，每天24小時黑暗條件下培養(yǎng)14天，將培養(yǎng)容器內的所有培養(yǎng)物干燥粉碎得到所述菌劑。
8.權利要求4、5或6所述的菌劑的制備方法，其特征在于所述方法包括以下步驟將權利要求I所述的頭棒束孢霉(Isaria cretacea)接入PDA培養(yǎng)基中,在16_20°C,每天24小時黑暗條件下培養(yǎng)14天，將培養(yǎng)容器內的所有培養(yǎng)物干燥粉碎得到所述菌劑。
9.權利要求I所述的頭棒束孢霉(Isariacretacea)、權利要求4、5或6所述的菌劑，在制備具有下述至少一種功能的廣品中的應用 1)對X射線照射的動物骨髓和小腸具有保護作用； 2)對動物染色體損傷具有保護作用； 3)增強射線對腫瘤殺傷的作用； 4)細胞免疫調節(jié)作用； 5)體液免疫調節(jié)作用； 6)治療心悸； 7)治療氣短； 8)治療乏力；9)治療胸悶；10)治療納差；11)治療便秘； 12)治療失眠；13)治療多夢。
全文摘要
本發(fā)明公開了一株頭棒束孢霉及其應用。該頭棒束孢霉菌株是頭棒束孢霉(Isaria cretacea)A-01，其在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心的登記入冊編號為CGMCC No.6204。頭棒束孢霉(Isaria cretacea)A-01及以其為活性成分的菌劑可用于制備具有下述至少一種功能的產品1)對X射線照射的動物骨髓和小腸具有保護作用；2)對動物染色體損傷具有保護作用；3)增強射線對腫瘤殺傷的作用；4)細胞免疫調節(jié)作用；5)體液免疫調節(jié)作用；6)治療心悸；7)治療氣短；8)治療乏力；9)治療胸悶；10)治療納差；11)治療便秘；12)治療失眠；13)治療多夢。
文檔編號A61K36/06GK102776129SQ20121027013
公開日2012年11月14日 申請日期2012年7月31日 優(yōu)先權日2012年7月31日
發(fā)明者蔡凡, 蔡春 申請人:蔡凡, 蔡春