專利名稱：蛹蟲草子實體提取物在制備促進乳腺癌患者白細胞增生功能保健品或藥品中的應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及蛹蟲草子實體提取物的新用途。
背景技術：
腫瘤已逐漸取代心腦血管疾病成為全球頭號殺手，近二十年以來全球腫瘤的發(fā)病率和死亡率節(jié)節(jié)攀升。由于惡性腫瘤有轉移播散趨勢,腫瘤的化療越來越被人們重視，同時化療的毒副作用越來越引起醫(yī)務人員和患者的關注。乳腺癌是危害婦女健康的主要惡性腫瘤，占女性惡性腫瘤的32%。其發(fā)病原因是乳腺導管上皮細胞在各種內(nèi)外致瘤因素的作用 下，細胞失去正常特性出現(xiàn)異常增生，以致超過自我修復的限度而發(fā)生的惡性腫瘤。乳腺癌的臨床表現(xiàn)以出現(xiàn)乳腺腫塊為主，具有發(fā)病率高、侵襲性大、病程長為特點。其發(fā)病率在美國、新西蘭、北歐、加拿大等國居首位，且有全球上升趨勢。在20世紀的最后10年里，我國京、津、滬等大城市的乳腺癌發(fā)病率已居女性惡性腫瘤第2位，尤其晚期乳腺癌的治療尤為困難。化學治療是乳腺癌重要的治療方法之一。但目前常用化療方案一般都為以蒽環(huán)類及含紫杉類藥物為主，對骨髓造血細胞的影響均較大。骨髓造血細胞的損害往往是造成患者不能按時足量完成化療的重要原因。治療上現(xiàn)代醫(yī)學多采用粒細胞集落刺激因子(G-CSF)或粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(GM-SF)，雖然近期療效確切，但維持時間短，對紅細胞及血小板療效不理想，還可能會加重骨髓細胞損害，且會引起骨痛、發(fā)熱等副反應，及刺激某些惡性細胞生長。其中造成白細胞嚴重減少，病人出現(xiàn)炎癥、病情反復、持續(xù)低燒不退等癥狀。因此如何提升乳腺癌患者的白細胞數(shù)量，是癌癥病人是否能夠繼續(xù)治療以及能否抑制癌細胞發(fā)展、擴散的重要措施。白細胞下降是化療最常見的毒副作用之一，多表現(xiàn)為外周血粒細胞減少。嚴重者往往使化療無法如期進行，甚至導致感染等并發(fā)癥，降低了患者的生活質(zhì)量。目前，乳腺癌患者的化療輔助藥物中，升白細胞藥物占到10. 62%(王偉蘭，癌癥患者化療輔助用藥臨床應用情況分析，中國藥物應用與監(jiān)測，2010. 4 (7):95-96)。其中中藥制劑升白湯、地榆升白片、升白沖劑等在臨床應用中都得到良好的效果。梅學偉等通過臨床觀察證明，中藥冬蟲夏草對于腫瘤放、化療所致的白細胞減少有明顯的提升作用，一般廣2即可見效，而且藥效持久，無不良反應(梅學偉，中藥冬蟲夏草對白細胞減少癥的療效分析，中國實用醫(yī)藥，2009. 4
(9):159-160)。而作為冬蟲夏草理想替代品的蛹蟲草一直沒見到相關的研究和報道。蛹蟲草、Cordyc印s mi H tar is)又名北冬蟲夏草、北蟲草、蛹草,隸屬真菌門、子囊菌亞門、麥角菌目、麥角菌科、蟲草屬，與冬蟲夏草同屬蟲草屬。天然野生蛹蟲草始載于《新華本草綱要》，記載其味甘、性平，有“益肺腎、補精髓、止血化痰”的功效；現(xiàn)代中醫(yī)學巨著《中華藥?！酚涊d“蛹草，別名北冬蟲夏草，性味甘、平，入肺、腎二經(jīng)”。蛹蟲草含有蟲草多糖、蟲草素、核苷類物質(zhì)、麥角留醇、蟲草酸等多種有效成分?，F(xiàn)代藥理學研究表明，蛹蟲草具有良好的有抗腫瘤活性。吳洪臻等發(fā)現(xiàn)蟲草素對小鼠S180瘤的抑制率，蛹蟲草子實體同樣具有顯著地抗腫瘤作用(吳洪臻，蟲草素對小鼠S180瘤抑制作用研究，時珍國醫(yī)國藥，2000. 11(10) :873)，劉潔等發(fā)現(xiàn)蛹蟲草子實體對S180和Lewis肺癌的抑制率為61%和65%，對荷肝癌(H22)小鼠也有抑制作用(劉潔，蠶蛹蟲草抗腫瘤作用的研究，白求恩醫(yī)科大學學報，1992. 18 (5):423 425)。這些利用體外實驗和體內(nèi)動物實驗獲得了蛹蟲草具有抗癌活性的依據(jù)，但這些研究缺乏臨床試驗結果的支持，尤其是免疫低下人群的臨床試驗結果。另外，也未見到關于蛹蟲草提取物對促進白細胞增生功能的相關文獻集專利報道。在已有的與蛹蟲草相關的保健品和藥品中，多以調(diào)節(jié)免疫功能、增強免疫力為主，其功效和作用比較籠統(tǒng)。中國專利200910028488. 8中，將蛹蟲草添加到一種復方，以增強免疫功能和改善消化功能。專利200510007734. 3中 ，提取了蛹蟲草中核苷類活性物質(zhì)，用于抑制腫瘤細胞。其應用的活性成分單一，而蛹蟲草中具有蟲草素、蟲草酸、多糖、麥角甾醇等未得到充分協(xié)調(diào)利用。在相關的文獻記載中未發(fā)現(xiàn)有關蛹蟲草提取物促進腫瘤患者白細胞增生功能的應用和產(chǎn)品。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供蛹蟲草子實體提取物在制備促進乳腺癌患者白細胞增生功能保健品或藥品中的應用。為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術方案
一種蛹蟲草子實體提取物的提取方法，采用水或乙醇溶液對蛹蟲草子實體進行提取。在上述提取方法中，所述水的用量為蛹蟲草子實體重量的8 30倍體積。在上述提取方法中，所述乙醇溶液為409Γ95%乙醇溶液(V/V，體積百分比)。上述提取方法具體包括如下步驟
(1)篩選菌種，經(jīng)過子實體培養(yǎng)生產(chǎn)出蛹蟲草子實體；
(2)將蛹蟲草子實體粉碎，過2(Γ60目篩；
(3)水或乙醇溶液提取1-6小時；
(4)提取液離心，過濾，得到澄清提取液，澄清提取液經(jīng)減壓真空濃縮，回收乙醇，濃縮過程控制藥液溫度不超過60°C，得提取物浸膏；
(5)將提取物浸膏經(jīng)減壓真空干燥或噴霧干燥，即得蛹蟲草子實體提取物。在上述提取方法中，所述篩選菌種為從野生蛹蟲草經(jīng)篩選、選育和復壯得到抗雜菌污染好、生長能力強、生長周期短、遺傳穩(wěn)定性好的菌種。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)上述提取方法得到的蛹蟲草子實體提取物具有促進乳腺癌患者白細胞增生功能，能用于制備促進乳腺癌患者白細胞增生的藥物組合物。上述所得蛹蟲草子實體提取物經(jīng)粉碎，按常規(guī)方法制成片劑、膠囊劑、咀嚼片或口服液。與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明具有如下有益效果
本發(fā)明所制備的蛹蟲草子實體提取物充分保留了蛹蟲草中的活性成分，并通過人群臨床試驗驗證，具有顯著地促進癌癥患者白細胞增生功能。具有如下優(yōu)勢
(O能治療和預防白細胞減少癥，且能使中性粒細胞和淋巴細胞數(shù)有效提高；
(2)能使血細胞緩慢持續(xù)上升，維持時間長，且不易反彈；(3)與粒細胞集落刺激因子合用，避免了粒細胞增殖過快而致骨髓空虛，長期應用效果更好；
(4)無發(fā)熱、過敏等副反應；
(5)制成沖劑、膠囊等常規(guī)劑型，服用方便，價格低廉。
具體實施方式

下面結合具體實施方式
對本發(fā)明作進一步詳細說明。實施例I
從吉林長白山的野生蛹蟲草經(jīng)嚴格篩選、選育和復壯得到抗雜菌污染好、生長能力強、生長周期短、遺傳穩(wěn)定性好的菌種，經(jīng)固體培養(yǎng)基的配制以及60天的子實體培養(yǎng)，經(jīng)采收、干燥得到蛹蟲草子實體。所得蛹蟲草子實體蟲草素含量大于3. 80mg/g、蟲草酸含量大于45. 00 mg/g、蟲草多糖含量大于5. 50%、腺苷含量大于I. 60 mg/g、麥角留醇含量大于3. 10mg/g以及總氨基酸大于9. 00%，多批蛹蟲草子實體指紋圖譜相似值大于O. 950。將干燥的蛹蟲草子實體300kg粉碎，過60目篩，用25倍純水提取4小時。提取液離心，過濾，得澄清提取液，提取液減壓真空濃縮，濃縮控制藥液溫度不超過60°C，將濃縮浸膏減壓真空干燥，粉碎得99kg蛹蟲草水提物。按常規(guī)的膠囊充填方法，制備成蛹蟲草子實體原粉膠囊或提取物膠囊，每粒200mgo上述所得蛹蟲草子實體提取物有效成分含量見表I :
表I蛹蟲草子實體提取物有效成分含量
有效成分含量(%)
蟲草素 20. 36蟲草酸 30. 42~
多糖一15.37 -腺苷 ^ 2. 63尿苷 —O. 10甾醇 |8. 16
實施例2 蛹蟲草菌種的選育和子實體栽培過程同實施例I。將干燥的蛹蟲草子實體200kg粉碎，過20目篩，用15倍(V/W)85%(V/V)乙醇溶液提取2小時，再用10倍(V/W)85%(V/V)乙醇溶液提取2小時。提取液離心，過濾，得澄清提取液，提取液減壓真空濃縮，回收乙醇后，控制濃縮溫度不超過60°C，將濃縮浸膏減壓真空干燥，粉碎得44kg蛹蟲草醇提物。按常規(guī)的膠囊充填方法，制備成蛹蟲草子實體原粉膠囊或提取物膠囊，每粒200mgo實施例3蛹蟲草子實體水提取物功能實驗
利用人群臨床試驗考察了蛹蟲草子實體提取物對腫瘤化療病人的升高白細胞數(shù)作用。實驗采用2X2交叉設計。運用隨機數(shù)字表，入選的71例乳腺癌病人按1:1比例隨機分入兩組YN (實施例I的蛹蟲草子實體提取物)組和NY (不服食蛹蟲草子實體提取物)組。所有病人在確診乳腺癌后均進行兩次化療。YN組在第一次化療的同時服食蛹蟲草子實體提取物膠囊，第二次化療時不服食，NY組在第二次化療的同時服食蛹蟲草子實體提取物膠囊，第一次化療時不服食。服食蛹蟲草子實體提取物膠囊的劑量為每日早、中、晚各一次，每次400mg。兩組病人均在第一次化療前、第一次化療結束第二次化療前、第二次化療結束三個時間點采血，分析血液學指標。71例入選的病人中，34例隨機進入YN組，37例隨機進入NY組。兩組治療前的平均年齡和血液學指標均有良好的可比性。在服食蛹蟲草子實體膠囊過程中，密切觀察臨床不良反應，如不適或敏感者停用。實驗結果見表2。表2治療各階段兩組白細胞、中性粒細胞、淋巴細胞數(shù)土s)X109/L
權利要求
1.一種蛹蟲草子實體提取物的提取方法，其特征在于采用水或乙醇溶液對蛹蟲草子實體進行提取。
2.如權利要求I所述的提取方法，其特征在于所述水的用量為蛹蟲草子實體8 25倍體積。
3.如權利要求I所述的提取方法，其特征在所述乙醇溶液為409Γ95%乙醇溶液(體積百分比)。
4.如權利要求I所述的提取方法，其特征在于包括如下步驟 (1)篩選菌種，經(jīng)過子實體培養(yǎng)生產(chǎn)出蛹蟲草子實體； (2)將蛹蟲草子實體粉碎，過2(Γ60目篩； (3)水或乙醇溶液回流提取I一 6小時； (4)提取液離心，過濾，得到澄清提取液，澄清提取液經(jīng)減壓真空濃縮，回收乙醇，濃縮過程控制溫度，藥液溫度不超過60°C，得提取物浸膏； (5)將提取物浸膏經(jīng)減壓真空干燥或噴霧干燥，即得蛹蟲草子實體提取物。
5.如權利要求4所述的提取方法，其特征在于所述篩選菌種為從野生蛹蟲草經(jīng)篩選、選育和復壯得到抗雜菌污染好、生長能力強、生長周期短、遺傳穩(wěn)定性好的菌種。
6.權利要求I所述提取方法得到的蛹蟲草子實體提取物在制備促進乳腺癌患者白細胞增生功能保健品或藥品中的應用。
7.一種用于促進乳腺癌患者白細胞增生的藥物組合物，其特征在于含有權利要求I所述提取方法得到的蛹蟲草子實體提取物。
全文摘要
本發(fā)明公開了蛹蟲草子實體提取物在制備促進乳腺癌患者白細胞增生功能保健品或藥品中的應用。蛹蟲草子實體提取物的提取方法為采用水或乙醇溶液對蛹蟲草子實體進行提取。經(jīng)乳腺癌化療患者的臨床試驗證明，本提取物具有較好的促進化療病人白細胞增生作用，可用于制備輔助治療腫瘤的保健食品和藥品。本發(fā)明揭示了蛹蟲草子實體在升高乳腺癌患者化療后白細胞的臨床新用途，對促進蛹蟲草的綜合利用開發(fā)具有積極作用。
文檔編號A61K36/068GK102614226SQ20121012128
公開日2012年8月1日 申請日期2012年4月24日 優(yōu)先權日2012年4月24日
發(fā)明者吳更余, 吳美蘭, 姚磊, 李秋洋, 鄭令文, 鐘美嬋, 黃杏云 申請人:珠海市先康生物科技有限公司