一種從羊肚菌子實(shí)體中提取水溶性β葡聚糖的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種從羊肚菌子實(shí)體中提取水溶性β葡聚糖的方法及其產(chǎn)品。屬于中藥的活性成分提取領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]本發(fā)明涉及一種從羊肚菌子實(shí)體中提取水溶性β葡聚糖的方法及其產(chǎn)品。屬于中藥的活性成分提取領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0003]羊肚菌又名羊肚菜、羊肚蘑、編笠菌，為羊肚菌科真菌羊肚菌、小頂羊肚菌、尖頂羊肚菌、粗柄羊肚菌、小羊肚菌等的子實(shí)體。是一種珍貴貴的食用菌和藥用菌。其結(jié)構(gòu)與盤菌相似，上部呈褶皺網(wǎng)狀，既像個蜂巢，也像個羊肚，因而得名。
[0004]羊肚菌的營養(yǎng)相當(dāng)豐富，據(jù)測定，羊肚菌含粗蛋白20%、粗脂肪26%、碳水化合物38.1%，還含有多種氨基酸，特別是谷氨酸含量高達(dá)1.76%。因此，有人認(rèn)為是“十分好的蛋白質(zhì)來源”，并有“素中之葷”的美稱。人體中的蛋白質(zhì)是由20種氨基酸搭配而組成的，而羊肚菌就含有18種，其中8種氨基酸是人體不能制造的，但在人體營養(yǎng)上顯得格外重要，所以被稱之為“必需氨基酸”。另外，據(jù)測定羊肚菌至少含有8種維生素:維生素Β1、維生素Β2、維生素Β12、煙酸、泛酸、吡噦醇、生物素、葉酸等。羊肚菌的營養(yǎng)成份，可與牛乳、肉和魚粉相當(dāng)。因此，國際上常稱它為“健康貪品”之一。
[0005]羊肚菌含抑制腫瘤的多糖，抗菌、抗病毒的活性成分，具有增強(qiáng)機(jī)體免疫力、抗疲勞、抗病毒、抑制腫瘤等諸多作用；日本科學(xué)家發(fā)現(xiàn)羊肚菌提取液中含有酪氨酸酶抑制劑，可以有效地抑制脂褐質(zhì)的形成。羊肚菌所含豐富的砸是人體紅細(xì)胞谷胱甘肽過氧化酶的組成成分，可運(yùn)輸大量氧分子來抑制惡性腫瘤，使癌細(xì)胞失活；另方面能加強(qiáng)維生素Ε的抗氧化作用。砸的抗氧化作用能改變致癌物的代方向，并通過結(jié)合而解毒，從而減少或消除致癌的危險。
[0006]隨著羊肚菌的應(yīng)用越來越廣泛，羊肚菌的活性成分提取成為了一個比較熱門的課題。羊肚菌多糖是羊肚菌的主要活性成分之一，對于羊肚菌多糖的提取液已經(jīng)有了一些報道，比如在實(shí)驗(yàn)室條件下魏蕓，張?zhí)煊拥难蚨蔷嗵堑姆蛛x純化及組成結(jié)構(gòu)分析，植物資源與環(huán)境學(xué)報，2000 ;賈建會等的深層發(fā)酵羊肚菌多糖的提取、分離及純化研究，食品科學(xué)，2002等都對羊肚菌多糖的提取進(jìn)行了研究，提取方法表述的也各不相同。
[0007]但是這些文獻(xiàn)都只是實(shí)驗(yàn)室條件下對羊肚菌總多糖的提取，距離實(shí)際生產(chǎn)還有一定的差距。羊肚菌多糖在羊肚菌中以α和β兩種構(gòu)型共存，目前對于羊肚菌總多糖的工藝研究的文獻(xiàn)都沒有提到這兩種構(gòu)型的分離，僅僅是從提取總多糖本身入手。多糖分子量從幾千到幾百萬不等，分子量越大其水溶性越差，羊肚菌多糖也不例外。羊肚菌多糖大分子量部分水溶性較差，在分離提取中用水做溶劑很難提取完全，即使使用堿液提取，雖然提取率高，但是干燥后得到多糖產(chǎn)品應(yīng)用時仍然不溶解于水。人體對于這種大分子羊肚菌多糖吸收不好。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]本發(fā)明主要解決的技術(shù)問題為:1、羊肚菌子實(shí)體中提取β葡聚糖的工業(yè)化生產(chǎn)問題。現(xiàn)有技術(shù)提取通常提取的是總多糖，而本發(fā)明的方法提取得到了 β葡聚糖，并可應(yīng)用于工業(yè)生產(chǎn)。2，解決β葡聚糖的水溶性問題，更有利于羊肚菌β葡聚糖的吸收利用和產(chǎn)品開發(fā)。分子量大的葡聚糖不溶于水本發(fā)明利用酸水解技術(shù)降低了大分子量羊肚菌多糖的分子量。提高了羊肚菌多糖的收率，增加了水溶性，更有利于人體吸收。
[0009]為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的目的在于提供一種從羊肚菌菇子實(shí)體中提取水溶性β葡聚糖的方法。
[0010]—種從羊肚菌子實(shí)體中提取水溶性β葡聚糖的方法，其特征在于:包括以下步驟:
步驟1、制備羊肚菌粗多糖:
取羊肚菌子實(shí)體，粉碎得到粉末，粉末用堿液浸提，過濾除去殘渣，濾液中加入乙醇，靜置，過濾得到沉淀，得羊肚菌粗多糖；
步驟2、制備羊肚菌β葡聚糖:
取羊肚菌粗多糖，干燥后加水?dāng)嚢?，加入α淀粉酶水解，水解液過濾，棄去濾液，得到殘渣，得羊肚菌β葡聚糖；
步驟3、制備水溶性β葡聚糖:
取羊肚菌β葡聚糖，加堿液攪拌提取，提取液調(diào)酸堿度至ΡΗ2.0-6.8，加熱水解，水解液過濾，濾液中加入乙醇，靜置，分離沉淀并干燥，得到水溶性β葡聚糖。
[0011]所述步驟1中，將羊肚菌子實(shí)體粉碎后過50目的篩，得到粉末。
[0012]所述步驟1中，向粉末中加入5-20倍重量的堿液浸提取1-10小時，所用堿液的濃度優(yōu)選是0.1-1.0摩爾/升。
[0013]所述步驟1中，過濾采用濾布進(jìn)行過濾，其中濾布孔徑為0.5-5微米。
[0014]所述步驟1或步驟3中，向?yàn)V液中加入1-4倍體積的無水乙醇靜置2小時。
[0015]所述步驟2中，羊肚菌粗多糖干燥后加5-10倍重量的水?dāng)嚢?，充分溶解?br>[0016]所述步驟3中，堿液濃度是0.1-0.4摩爾/升；所述的加熱水解優(yōu)選為加熱至80_100°C，水解時間為1-4小時。
[0017]本發(fā)明的提取方法的具體描述:
羊肚菌子實(shí)體粉碎得到粉末，粉末用堿液浸提，過濾除渣，濾液中加入乙醇，靜置，過濾得到沉淀；此沉淀即羊肚菌粗多糖。羊肚菌β葡聚糖是羊肚菌粗多糖的一部分，其相當(dāng)一部分位于真菌的細(xì)胞壁上，為了最大限度的提取羊肚菌β葡聚糖，本發(fā)明選擇堿液提取，堿液加量為原料重量的5-20倍，堿液的濃度選取0.1-1.0摩爾/升中任一濃度均可，提取時間1-10小時。堿液可以用氫氧化鈉，氫氧化鉀，氫氧化鋅，有機(jī)堿等配制，考慮到成本問題，堿液一般選取氫氧化鈉溶液。提取液過濾除去殘渣，濾液加1-4倍體積的無水乙醇，靜置2小時后過濾得沉淀即羊肚菌粗糖。
[0018]沉淀干燥后加水?dāng)嚢?，而后加α淀粉酶水解，水解液過濾，棄去濾液得殘渣。
[0019]此步的殘渣即羊肚菌β葡聚糖但水溶性較差。此步驟采用上一步中的沉淀(羊肚菌粗多糖)為原料，加α淀粉酶(因?yàn)椴煌瑥S家產(chǎn)品酶活力不一樣，加量相差巨大，本領(lǐng)域技術(shù)人員可根據(jù)實(shí)際情況和酶的活力確定加入α淀粉酶的用量；用量多一點(diǎn)或者少一點(diǎn)不影響本發(fā)明的效果)將水不溶解的α構(gòu)型多糖水解變?yōu)榭扇?，棄去水解液，同時水解液也溶解了粗多糖中的大部分殘留單糖和寡糖，起到純化的作用，雖然水解液中也可能存在少量β葡聚糖，但是考慮到回收成本，故舍去。僅對殘渣中的大量β葡聚糖進(jìn)行下一步處理使其變?yōu)榭扇芙?。α淀粉酶選取市售的各種型號均可。水解條件，酶用量依據(jù)各廠家不同型號的α淀粉酶說明書。
[0020]殘渣加堿液攪拌提取，提取液調(diào)酸度至ρΗ2.0-6.8，加熱水解，水解液過濾，濾液中加入乙醇，靜置，分離沉淀并干燥，即得。
[0021]采用步驟b)的殘渣為原料，加堿液提取，堿液加量為原料重量的5-20倍，提取液調(diào)酸堿至PH2.0-6.8，80-100°C加熱水解1_4小時，水解液過濾，濾液加1_4倍體積的無水乙醇進(jìn)行沉淀，分離沉淀干燥后即本發(fā)明產(chǎn)物，也就是羊肚菌菇水溶性β葡聚糖。
[0022]堿堿液可以用氫氧化鈉，氫氧化鉀，氫氧化鋅，有機(jī)堿等配制，優(yōu)選氫氧化鈉，液濃度選取0.1-1.0摩爾/升中任一濃度均可。pH可以用鹽酸、醋酸、硫酸、乙酸等。pH2.0-6.8中任何一個值均可，只是不同的pH，水解強(qiáng)度不同，水解后所得最終產(chǎn)物重均分子量不同。
[0023]現(xiàn)有技術(shù)中雖然有對羊肚菌菇的某一種構(gòu)型進(jìn)行了分離并且進(jìn)一步純化得到了高純度多糖，但是其分離方法與本發(fā)明有本質(zhì)區(qū)別，在經(jīng)過常規(guī)的水提醇沉后現(xiàn)有方法多使用柱層析對粗多糖分離，截去粗多糖中某一特定部分得到高純度的羊肚菌多糖以用于科學(xué)研究，這和本發(fā)明的工業(yè)化方法有顯著區(qū)別，并且本發(fā)明除了對羊肚菌多糖的β構(gòu)型進(jìn)行分離提取外，還通過對羊肚菌多糖的分子量控制提高了其水溶性。本發(fā)明通過酸水解，水復(fù)溶的方法控制羊肚菌多糖的分子量在一定范圍內(nèi)增強(qiáng)了羊肚菌多糖的水溶性，提高了羊肚菌多糖大分子量段的收率，有利于工業(yè)化生產(chǎn)羊肚菌β水溶性多糖。
[0024]本發(fā)明提取方法所得到羊肚菌子實(shí)體多糖是除去了 α構(gòu)型多糖的β葡聚糖，并且種β葡聚糖具有良好的水溶性。紅外光譜顯示本發(fā)明產(chǎn)物為β葡聚糖，硫酸苯酚法檢測多