一種蛹蟲草中蟲草素的提取方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，尤其是涉及一種蛹蟲草中蟲草素的提取方法。
【背景技術(shù)】
[0002]冬蟲夏草，又名中華蟲草，也稱為夏草冬蟲，簡稱蟲草。是中國傳統(tǒng)的名貴中藥材，它是由肉座菌目麥角菌科蟲草屬的冬蟲夏草菌寄生于高山草甸土中的蝠蛾幼蟲，使幼蟲僵化，在適宜條件下，夏季由僵蟲頭端抽生出長棒狀的子座而形成(即冬蟲夏草菌的子實(shí)體與僵蟲菌核(幼蟲尸體)構(gòu)成的復(fù)合體)。然而，世界性冬蟲夏草分布天然資源數(shù)量很少，在我國，冬蟲夏草種類雖然很多，達(dá)數(shù)百種，但是入藥的就只有兩種:冬蟲夏草菌，北冬蟲夏草菌。蟲草素是一種天然來源的藥物，具有抗腫瘤、抗菌抗病毒、免疫調(diào)節(jié)、清除自由基等多種藥理作用外，有良好的臨床應(yīng)用前景。由于受原料、純化過程等因素的影響，其價(jià)格一直居高不下，高昂的價(jià)格已經(jīng)成為制約蟲草素開發(fā)利用的瓶頸。因此研宄蟲草素的提取工藝和提高其得率具有重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值和廣闊的市場(chǎng)應(yīng)用潛力。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種蛹蟲草中蟲草素的提取方法。
[0004]本發(fā)明采用的技術(shù)方案是:一種蛹蟲草中蟲草素的提取方法，包括以下步驟:
[0005]步驟一，將蛹蟲草培養(yǎng)基或菌體樣品充分粉碎，加水混合，真空條件下超聲提取，將混合液過濾后得到粗提液。
[0006]步驟二，將粗提液進(jìn)行沉降處理，收集上清液，經(jīng)過微孔濾膜進(jìn)行精濾，得濾液。
[0007]步驟三，將濾液經(jīng)反相ODS填料柱吸附，而后依次用水、甲醇水溶液和甲醇洗脫，同時(shí)使柱子再生，對(duì)洗脫液進(jìn)行HPLC檢測(cè)，收集檢測(cè)有蟲草素的洗脫液，得提純液。
[0008]步驟四，對(duì)提純液進(jìn)行真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，得蒸發(fā)濃縮液，將蒸發(fā)濃縮液置于I?5°C下結(jié)晶，抽濾后將得到的晶體溶于純化水中，進(jìn)行重結(jié)晶，得蟲草素晶體，最后將蟲草素晶體經(jīng)低溫冷凍干燥后即可。
[0009]優(yōu)選的，步驟一中水的pH值為4-5，蛹蟲草培養(yǎng)基或菌體樣品與水的體積比為I: 8-30 ο
[0010]優(yōu)選的，步驟一超聲次數(shù)為2-5次，每次超聲間隔10-15分鐘。
[0011]優(yōu)選的，步驟二中微孔濾膜的孔徑為3-5 μπι。
[0012]優(yōu)選的，步驟三濾液經(jīng)反相ODS填料柱吸附，每升濾液添加20_60g的填料，而后依次用5-15個(gè)柱體積的水、5-15個(gè)柱體積的甲醇水溶液和甲醇洗脫，同時(shí)使柱子再生；DS填料粒徑小于等于150 μπι。
[0013]本發(fā)明具有的優(yōu)點(diǎn)和積極效果是:由于采用上述技術(shù)方案，提高蟲草素提取效率，減少提取時(shí)間；對(duì)蟲草素的提取和純化工藝進(jìn)行了優(yōu)化，工藝步驟與選用的設(shè)備簡單，可操作性強(qiáng)，能耗低。
【具體實(shí)施方式】
[0014]下面通過具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行進(jìn)一步說明。
[0015]實(shí)施例1:
[0016]步驟一，將蛹蟲草培養(yǎng)基或菌體樣品充分粉碎，加pH值為4-5的水混合，蛹蟲草培養(yǎng)基或菌體樣品與水的體積比為1: 8，真空條件下超聲提取，超聲提取2次，間隔10分鐘，將混合液過濾后得到粗提液。
[0017]步驟二，將粗提液進(jìn)行沉降處理，收集上清液，經(jīng)過孔徑為3-5 μ m微孔濾膜進(jìn)行精濾，得濾液。
[0018]步驟三，將濾液經(jīng)反相ODS填料柱吸附，DS填料粒徑小于等于150 μ m，每升濾液添加20g的填料，而后依次用5個(gè)柱體積的水、5個(gè)柱體積的甲醇水溶液和甲醇洗脫，同時(shí)使柱子再生，對(duì)洗脫液進(jìn)行HPLC檢測(cè)，收集檢測(cè)有蟲草素的洗脫液，得提純液。
[0019]步驟四，對(duì)提純液進(jìn)行真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，得蒸發(fā)濃縮液，將蒸發(fā)濃縮液置于4°C下結(jié)晶，抽濾后將得到的晶體溶于純化水中，進(jìn)行重結(jié)晶，得蟲草素晶體，最后將蟲草素晶體經(jīng)低溫冷凍干燥后即可。
[0020]實(shí)施例2:
[0021 ] 步驟一，將蛹蟲草培養(yǎng)基或菌體樣品充分粉碎，加pH值為4-5的水混合，蛹蟲草培養(yǎng)基或菌體樣品與水的體積比為1: 30，真空條件下超聲提取，超聲提取5次，間隔15分鐘，將混合液過濾后得到粗提液。
[0022]步驟二，將粗提液進(jìn)行沉降處理，收集上清液，經(jīng)過孔徑為3-5 μ m微孔濾膜進(jìn)行精濾，得濾液。
[0023]步驟三，將濾液經(jīng)反相ODS填料柱吸附，DS填料粒徑小于等于150 μ m，每升濾液添加60g的填料，而后依次用15個(gè)柱體積的水、15個(gè)柱體積的甲醇水溶液和甲醇洗脫，同時(shí)使柱子再生，對(duì)洗脫液進(jìn)行HPLC檢測(cè)，收集檢測(cè)有蟲草素的洗脫液，得提純液。
[0024]步驟四，對(duì)提純液進(jìn)行真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，得蒸發(fā)濃縮液，將蒸發(fā)濃縮液置于4°C下結(jié)晶，抽濾后將得到的晶體溶于純化水中，進(jìn)行重結(jié)晶，得蟲草素晶體，最后將蟲草素晶體經(jīng)低溫冷凍干燥后即可。
[0025]以上對(duì)本發(fā)明做了示例性的描述，應(yīng)該說明的是，在不脫離本發(fā)明的核心的情況下，任何簡單的變形、修改或者其他本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠不花費(fèi)創(chuàng)造性勞動(dòng)的等同替換均落入本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種蛹蟲草中蟲草素的提取方法，其特征在于:包括以下步驟: 步驟一，將蛹蟲草培養(yǎng)基或菌體樣品充分粉碎，加水混合，真空條件下超聲提取，將混合液過濾后得到粗提液； 步驟二，將所述粗提液進(jìn)行沉降處理，收集上清液，經(jīng)過微孔濾膜進(jìn)行精濾，得濾液； 步驟三，將所述濾液經(jīng)反相ODS填料柱吸附，而后依次用水、甲醇水溶液和甲醇洗脫，同時(shí)使柱子再生，對(duì)洗脫液進(jìn)行HPLC檢測(cè)，收集檢測(cè)有蟲草素的洗脫液，得提純液； 步驟四，對(duì)所述提純液進(jìn)行真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，得蒸發(fā)濃縮液，將蒸發(fā)濃縮液置于I?5°C下結(jié)晶，抽濾后將得到的晶體溶于純化水中，進(jìn)行重結(jié)晶，得蟲草素晶體，最后將所述蟲草素晶體經(jīng)低溫冷凍干燥后即可。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蛹蟲草中蟲草素的提取方法，其特征在于:所述步驟一中水的PH值為4-5，所述蛹蟲草培養(yǎng)基或所述菌體樣品與水的體積比為1: 8-30。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蛹蟲草中蟲草素的提取方法，其特征在于:所述步驟一超聲次數(shù)為2-5次，每次超聲間隔10-15分鐘。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蛹蟲草中蟲草素的提取方法，其特征在于:所述步驟二中微孔濾膜的孔徑為3-5 μ m。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蛹蟲草中蟲草素的提取方法，其特征在于:所述步驟三濾液經(jīng)反相ODS填料柱吸附，每升所述濾液添加20-60g的填料，而后依次用5-15個(gè)柱體積的水、5-15個(gè)柱體積的甲醇水溶液和甲醇洗脫，同時(shí)使柱子再生，所述甲醇水溶液為體積百分比5-30%的甲醇水溶液，DS填料粒徑小于等于150 μ m。
【專利摘要】本發(fā)明提供一種蛹蟲草中蟲草素的提取方法，蟲草素是一種天然來源的藥物，具有抗腫瘤、抗菌抗病毒、免疫調(diào)節(jié)、清除自由基等多種藥理作用外，有良好的臨床應(yīng)用前景，但總是受原料、純化過程等因素影響，本發(fā)明通過將蛹蟲草培養(yǎng)基或菌體樣品充分粉碎，水溶后超聲以提高蟲草素溶出量，過濾得粗濾液，再通過對(duì)濾液的富集、提純，濾液經(jīng)反相ODS填料柱吸附，洗脫，濃縮后可得到純凈的蟲草素晶體。本發(fā)明具有的有益效果是：這種方法能夠提高蟲草素提取效率，減少提取時(shí)間；對(duì)蟲草素的提取和純化工藝進(jìn)行了優(yōu)化，工藝步驟與選用的設(shè)備簡單，可操作性強(qiáng)，能耗低。
【IPC分類】C07H1-08, C07H19-16
【公開號(hào)】CN104592336
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201410842829
【發(fā)明人】季延濱, 李濤
【申請(qǐng)人】芝圣（天津）生物科技有限公司
【公開日】2015年5月6日
【申請(qǐng)日】2014年12月30日