專利名稱：山楂葉提取物的制備方法
技術領域：
本發(fā)明屬于山楂葉提取領域；具體涉及山楂葉提取物的制備方法。
背景技術：
山g口十為!^蔽禾斗山g屬植物山里紅· Crataegus pinnatifida Bunge. var. major NE. Br.或山楂Crataegus pinnatifida Bge.的干燥葉，山楂葉用于活血化淤，理氣通脈。 早在東晉《肘后方》中就有山楂葉“莖葉煮汁，洗漆瘡”的記載，廣西、江西的地方藥材標準均載有山楂葉，2005年版《中國藥典》也正式收載山楂葉。隨著近年來被廣泛用于治療心血管疾病，山楂葉的藥理學研究有了較大的進展，現代藥理學認為山楂葉能防治心血管疾病， 具有擴張血管、增加冠脈血流量、改善心臟活力、興奮中樞神經系統、降低血壓和膽固醇、軟化血管及利尿和鎮(zhèn)靜作用；山楂葉黃酮還有強心作用，對老年性心臟病也有益處；山楂葉有活血化淤的功效，有助于解除局部淤血狀態(tài)，對跌打損傷有輔助療效?，F代藥物化學研究認為山楂葉總黃酮是山楂葉心腦血管藥理作用的物質基礎，隨著研究的不斷深入，山楂葉提取物已廣泛的適用于臨床。例如益心酮片等。現在應用的山楂葉總黃酮制備方法較多，多采用乙醇提取、濃縮，水沉淀再采用有機溶劑(如醋酸乙酯或正丁醇)萃取，或者采用大孔樹脂純化；或者幾種方法聯合使用， 工藝復雜，使用有機溶劑萃取，制造成本高，生成環(huán)境與設備要求高；使用大孔樹脂純化的提取物，提取物中的鞣質大分子物質難以完全去除，制備注射劑時，超濾技術雖能去除大分子物質，但提取物超濾處理后總黃酮含量大大降低難以符合注射劑的要求。另外，還有采用水溫浸提取，濃縮，乙醇沉淀，靜置并冷藏，回收乙醇，水洗，靜置并冷藏，過濾，過聚酰胺層析柱，可制備總黃酮大于80%的提取物。該工藝中乙醇處理對于大分子物質如蛋白、多糖效果較好，此類成分采用高濃度醇解吸樹脂柱時，同樣除去，但對于鞣質類物質效果并不好， 因此意義不大，可取消該步驟。同時聚酰胺對酸性物質吸附較好，但中性或堿性環(huán)境聚酰胺吸附均較差，大量的水洗脫即可使黃酮苷流失，水洗用α "萘酚濃硫酸試劑判定終點欠妥， 醛糖及苷類均顯陽性，極易導致黃酮苷類成分流失。現有山楂葉提取物的制備方法存在成本高、總黃酮含量低的技術問題。

發(fā)明內容
本發(fā)明要解決現有山楂葉提取物的制備方法存在成本高、總黃酮含量低的技術問題；而提供山楂葉提取物的制備方法。本發(fā)明中山楂葉提取物的制備方法是按下述步驟進行的步驟一、取IOOkg山楂葉，加入水，水的質量是山楂葉的16 20倍，然后煎煮1小時，過濾，收集煎煮液；步驟二、 向步驟一過濾后的濾渣中加水，水的用量是濾渣質量的12 16倍，然后煎煮1小時后過濾收集煎煮液，合并兩次煎煮液，再濃縮至200kg 250kg，放冷，得到濃縮提取液；步驟三、將步驟二獲得的濃縮提取液用鹽酸溶液調pH值至2 3，然后靜置12 24小時，取上清液后將殘渣離心，合并上清液；步驟四、將合并的上清液過聚酰胺樹脂柱，過聚酰胺樹脂柱的上樣流速為O. 5BV/h，再用去離子水以2. 5 3BV/h的流速進行洗脫，去離子水的洗脫量為 6BV，水洗液棄去后使用體積濃度為55% 85%的乙醇溶液以2 2. 5BV/h的流速洗脫樹脂柱，乙醇溶液的洗脫量為5BV，收集乙醇洗脫液；步驟五、對乙醇洗脫液進行減壓蒸餾回收乙醇，用氫氧化鈉溶液調pH值6. 0 6. 5，干燥，即得到山楂葉提取物。本發(fā)明方法采用水提取，較乙醇提取節(jié)約成本；同時取消乙醇沉淀的工藝和冷藏工序，提取濃縮液采用酸處理，此操作可有效去除鞣質和酸性大分子物質，酸處理后提取液直接過樹脂柱，同時酸性環(huán)境可盡可能確保黃酮類成分在聚酰胺樹脂上的吸附效果，保證總黃酮尤其是黃酮苷類成分不隨水洗而流失，采用較高濃度乙醇解吸，同樣可起到醇沉淀的效果，將部分聚酰胺樹脂吸附的醇不溶性大分子物質滯留于樹脂柱上。使用本發(fā)明方法制備的山楂葉提取物總黃酮含量大于90%，能夠有效的去除鞣質，符合中藥注射劑的技術要求。省去乙醇沉淀，冷藏的工藝步驟，不采用有機溶劑處理，制造方法更加簡單，更加節(jié)約制造成本。
具體實施例方式本發(fā)明技術方案不局限于以下所列舉具體實施方式
，還包括各具體實施方式
間的任意組合。
具體實施方式
一本實施方式中山楂葉提取物的制備方法是按下述步驟進行的步驟一、取IOOkg山楂葉，加入水，水的質量是山楂葉的16 20倍，然后煎煮1小時，過濾，收集煎煮液；步驟二、向步驟一過濾后的濾渣中加水，水的用量是濾渣質量的12 16倍，然后煎煮1小時后過濾收集煎煮液，合并兩次煎煮液，再濃縮至200kg 250kg，放冷，得到濃縮提取液；步驟三、將步驟二獲得的濃縮提取液用鹽酸溶液調pH值至2 3，然后靜置12 24小時，取上清液后將殘渣離心，合并上清液；步驟四、將合并的上清液過聚酰胺樹脂柱，過聚酰胺樹脂柱的上樣流速為0. 5BV/ h，再用去離子水以2. 5 3BV/h的流速進行洗脫，去離子水的洗脫量為6BV，水洗液棄去后使用體積濃度為55% 85%的乙醇溶液以2 2. 5BV/h的流速洗脫樹脂柱，乙醇溶液的洗脫量為5BV，收集乙醇洗脫液；步驟五、對乙醇洗脫液進行減壓蒸餾回收乙醇，用氫氧化鈉溶液調pH值6.0 6. 5，干燥，即得到山楂葉提取物。本實施方式所述方法制備的山楂葉提取物總黃酮含量大于90%。
具體實施方式
二 本實施方式與具體實施方式
一不同的是步驟三中所述鹽酸溶液的質量濃度為10%。其它步驟和參數與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
三本實施方式與具體實施方式
一或二不同的是步驟四所述乙醇溶液的體積濃度為60% 80%。其它步驟和參數與具體實施方式
一或二相同。
具體實施方式
四本實施方式與具體實施 方式一至或二不同的是步驟四所述的乙醇溶液的體積濃度為80%。其它步驟和參數與具體實施方式
一或二相同。
具體實施方式
五本實施方式與具體實施方式
一至四之一不同的是步驟五中所述氫氧化鈉溶液的質量濃度為10%。其它步驟和參數與具體實施方式
一至四之一相同。
具體實施方式
六本實施方式與具體實施方式
一至五之一不同的是步驟五中所述干燥系減壓干燥或冷凍干燥。 其它步驟和參數與具體實施方式
一至五之一相同。采用下述試驗驗證發(fā)明效果 試驗一方法如下山楂葉100kg，加水20倍量，煎煮1小時，收集煎煮液，再加水 16倍量，煎煮1小時，合并兩次煎煮液；濃縮至約230kg，放冷，用10 %鹽酸溶液調pH值至 2. 5，靜置12小時，取上清液，殘渣離心，收集上清液上清液合并，過聚酰胺(200kg濕重)樹脂柱，上樣流速0. 5BV/h,上樣完成用去離子水洗脫6BV，流速2. 5 3BV/h，水洗液棄去；使用55%乙醇溶液洗脫樹脂柱5BV，流速2 2. 5BV/h,收集乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，調pH 值6. 0-6. 5，濃縮至相對密度1. 20 1. 25，干燥，即得山楂葉提取物，山楂葉提取物總黃酮含量大于94. 8%，收率1.78%。試驗二 方法如下山山楂葉100kg，加水18倍量，煎煮1小時，收集煎煮液，再加水14倍量，煎煮1小時，合并兩次煎煮液；濃縮至約200kg，放冷，用10%鹽酸溶液調pH值至2.0，靜置12小時，取上清液，殘渣離心，收集上清液上清液合并，過聚酰胺(200kg濕重) 樹脂柱，上樣流速0. 5BV/h，上樣完成用去離子水洗脫6BV，流速2. 5 3BV/h，水洗液棄去； 使用70%乙醇溶液洗脫樹脂柱5BV，流速2 2. 5BV/h，收集乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，調 pH值6. 0-6. 5，濃縮至相對密度1. 20 1. 25，干燥，即得山楂葉提取物，山楂葉提取物總黃酮含量大于92. 5%，收率2. 10%。試驗三方法如下山楂葉100kg，加水16倍量，煎煮1小時，收集煎煮液，再加水 12倍量，煎煮1小時，合并兩次煎煮液；濃縮至約250kg，放冷，用10%鹽酸溶液調pH值至 3.0，靜置12小時，取上清液，殘渣離心，收集上清液上清液合并，過聚酰胺(200kg濕重)樹脂柱，上樣流速0. 5BV/h,上樣完成用去離子水洗脫6BV，流速2. 5 3BV/h，水洗液棄去；使用85%乙醇溶液洗脫樹脂柱5BV，流速2 2. 5BV/h,收集乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，調pH 值6. 0-6. 5，濃縮至相對密度1. 20 1. 25，干燥，即得山楂葉提取物，山楂葉提取物總黃酮含量大于95. 2%，收率1. 95%。試驗四方法如下山楂葉100kg，加水20倍量，煎煮1小時，收集煎煮液，再加水 16倍量，煎煮1小時，合并兩次煎煮液；濃縮至約200kg，放冷，用10 %鹽酸溶液調pH值至 2. 5，靜置12小時，取上清液，殘渣離心，收集上清液上清液合并，過聚酰胺(200kg濕重)樹脂柱，上樣流速0. 5BV/h,上樣完成用去離子水洗脫6BV，流速2. 5 3BV/h，水洗液棄去；使用80%乙醇溶液洗脫樹脂柱5BV，流速2 2. 5BV/h,收集乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，調pH 值6. 0 .5，濃縮至相對密度1. 20 1. 25，干燥，即得山楂葉提取物，山楂葉提取物總黃酮含量大于94. 8 %，收率2. 34%。
權利要求
1.山楂葉提取物的制備方法，其特征在于山楂葉提取物的制備方法是按下述步驟進行的步驟一、取IOOkg山楂葉，加入水，水的質量是山楂葉的16 20倍，然后煎煮1小時， 過濾，收集煎煮液；步驟二、向步驟一過濾后的濾渣中加水，水的用量是濾渣質量的12 16倍，然后煎煮 1小時后過濾收集煎煮液，合并兩次煎煮液，再濃縮至200kg 250kg，放冷，得到濃縮提取液；步驟三、將步驟二獲得的濃縮提取液用鹽酸溶液調pH值至2 3，然后靜置12 24小時，取上清液后將殘渣離心，合并上清液；步驟四、將合并的上清液過聚酰胺樹脂柱，過聚酰胺樹脂柱的上樣流速為每小時0. 5 柱體積，再用去離子水以每小時2. 5 3柱體積的流速進行洗脫，去離子水的洗脫量為6倍柱體積，水洗液棄去后使用體積濃度為55% 85%的乙醇溶液以每小時2 2. 5柱體積的流速洗脫樹脂柱，乙醇溶液的洗脫量為5倍柱體積，收集乙醇洗脫液；步驟五、對乙醇洗脫液進行減壓蒸餾回收乙醇，用氫氧化鈉溶液調pH值6. 0 6. 5，干燥，即得到山楂葉提取物。
2.根據權利要求1所述的山楂葉提取物的制備方法，其特征在于步驟三中所述鹽酸溶液的質量濃度為10%。
3.根據權利要求2所述的山楂葉提取物的制備方法，其特征在于步驟四所述乙醇溶液的體積濃度為60% 80%。
4.根據權利要求2所述的山楂葉提取物的制備方法，其特征在于步驟四所述的乙醇溶液的體積濃度為80%。
5.根據權利要求1 4任一項權利要求所述的山楂葉提取物的制備方法，其特征在于步驟五中所述氫氧化鈉溶液的質量濃度為10%。
6.根據權利要求5所述的山楂葉提取物的制備方法，其特征在于步驟五中所述干燥系減壓干燥或冷凍干燥。
全文摘要
山楂葉提取物的制備方法，它屬于山楂葉提取領域。本發(fā)明要解決現有山楂葉提取物的制備方法存在成本高、總黃酮含量低的技術問題。方法如下步驟一、取山楂葉，加入水，然后煎煮，過濾；步驟二、向濾渣中加水，然后煎煮后過濾，合并兩次煎煮液，濃縮，放冷；步驟三、調pH值至2～3，靜置，合并上清液；步驟四、過聚酰胺樹脂柱，用去離子水進行洗脫，乙醇溶液洗脫；步驟五、減壓回收乙醇，調pH值6.0～6.5，干燥，即得到山楂葉提取物。本發(fā)明方法制備的山楂葉提取物總黃酮含量大于90％。省去乙醇沉淀，冷藏的工藝步驟，不采用乙醇以外的有機溶劑處理，制造方法更加簡單，更加節(jié)約制造成本。
文檔編號A61K127/00GK102349951SQ20111032595
公開日2012年2月15日 申請日期2011年10月24日 優(yōu)先權日2011年10月24日
發(fā)明者付饒, 單鈺毓, 呂曉霞, 崔仁海, 李文春, 李殿明, 李長新, 王英新, 蘇德龍, 裴福成, 解黎雯 申請人:哈藥集團中藥二廠