用于獲得植物提取物和級(jí)分的方法、藥物組合物及其用圖
【專利說(shuō)明】用于獲得植物提取物和級(jí)分的方法、藥物組合物及其用途 發(fā)明領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明描述一種用于獲得提取物和植物級(jí)分的方法。更具體地，來(lái)自紅蔥 (Eleutherine plicata)的乙醇提取物中的富含萘醌的二氯甲焼級(jí)分^本發(fā)明包括這種級(jí) 分的獲得方法以及一種萘醌的鑒定。分析所述萘醌并且它展示抗瘧原蟲(chóng)活性、特別地對(duì)抗 耐氯喹的惡性皰原蟲(chóng)（Plasmodium falciparum)(克隆W2) 〇 現(xiàn)有技術(shù)
[0002] 紅蔥（E. Plicata)是美洲（包括巴西亞馬遜的干旱田野）熱帶天然植物，俗稱 瑪魯巴茲諾（marupazinho)、瑪魯巴利（marupari)、巴姆梅林亞（palmeirinha)、扣奎因 紐（coquinho)、瑪魯派伊（marupai)、瑪魯博（marupaii)、瑪魯巴比蘭戈（marupdi-piranga) 和麗魯福里阿德巴姆梅拉（lirio-folha-de-palmeira) D沿途植物調(diào)查在美里河口 縣（PA，巴西）通過(guò)半結(jié)構(gòu)化采訪進(jìn)行并證實(shí)紅蔥（marupazinho)的用途D來(lái)自這 個(gè)地區(qū)的人使用由其鱗莖制成的茶治療腹瀉、阿米巴病、腸道感染、肝病、出血和貧 血(PINTO, L. N. Plantas medicinais utilizadas em comunidades do municlpio de Igarape-Miri/PA:etnofarmacia do Municlpio de Igarape-Miri/PA. 2008. 98f. Master thesis-Programa de Pos- graduagSo em Ciencias Farmaceuticasj Universidade Federal do Pardi，Par02008(PINT0，LN.在 Igarap6_Miri/PA 用于市政社區(qū)的藥用植物： etnofarmdicia城市Igarap6，Miri/PA. 2008. 98f.碩士論文-醫(yī)藥科學(xué)研究生項(xiàng)目，帕拉州 聯(lián)邦大學(xué)，帕拉州2008年））。
[0003] 從紅蔥屬（Eleutherine)諸物種分離萘醌，其中來(lái)自這個(gè)類別的物質(zhì)已經(jīng)展 示抗瘧活性。有效抗瘧原蟲(chóng)的活性萘醌的例子是阿托伐醌（atovacona)，結(jié)構(gòu)上與黃 鐘花醌（一種在黃鐘木屬（Tabebuia)(包括ipgs的屬，南美洲存在的樹(shù)）諸物種中常 見(jiàn)的異戊烯基萘醌）相關(guān)的合成萘醌（MIRAGLIA，M.C.M. Estudo quimico de Tabebuia serratifolia(Vahl.) Nichols (Bignoniaceae) e slntese de piranonaftoquinonas, fura nonaftoquinonas e antraquinonas.1991.326p. (MIRAGLIA，M.C.M.尼科爾斯（紫葳科） 的Tabebuia serratifolia(Vahl.)的化學(xué)研究以及吡喃萘醌、咲喃萘醌和蒽醌的合成 1991 第 326 頁(yè)）Tese (Doutorado. Departamento de Quimica), Universidade Federal de Minas Gerais，Minas Gerais.，1991(博士論文，化學(xué)系，米納斯吉拉斯州聯(lián)邦大學(xué)，巴西， 1991))。阿托伐醌抑制在寄生蟲(chóng)中催化尿苷單磷酸合成的二氫乳酸脫氫酶（diidroorotate desidrogenase)〇
[0004] 值得注意的是許多萘醌，例如從紅蔥分離的一種萘醌，尚未在惡性瘧原蟲(chóng)中評(píng) 價(jià)D已經(jīng)從紅蔥分離紅蔥甲素（eleuterol)和紅蔥丙素（isoeleutherine) (MALHEIR0S，L C. S. Isoeleutherol and Isoeleutherine:oeleuteroI e IsoeIeuterina:Potenciais marcadores qulmicos da tintura de Eleutherine plicata Herb. (Iridaceae) e atividades microbiologica e antioxidante Master thesis-Programa de Pos- gradua^So em Ciencias Farmaceuticasj Universidade Federal do Pardi，Par02008(MALHEIR0S，L.C.S·異艾植腦和紅蔥丙素：對(duì)紅蔥 Eleutherine plicata Herb.浸提物（鳶尾科）潛在的化學(xué)指標(biāo)以及微生物活性和抗氧化活性碩士論文-醫(yī)藥科 學(xué)的研宄生項(xiàng)目，帕拉州聯(lián)邦大學(xué)，2008年帕拉））。然而，乙醇提取物和其級(jí)分的抗瘧原蟲(chóng) 活性首次由Edinilza Borges的碩士論文評(píng)價(jià)，并且它非常有前景。
[0005] 從紅蔥鱗莖獲得的乙醇提取物及其級(jí)分通過(guò)HRP-II技術(shù)（N0EDL等人，2002)接 受抗瘧原蟲(chóng)活性檢驗(yàn)。在瓊脂上的擴(kuò)散分析中，濃度500 μ g/mL的乙醇提取物和二氯甲 烷級(jí)分及乙酸乙酯級(jí)分在金黃色葡萄球菌（S. aureus)中有活性。在另一方面，甲醇級(jí)分 在任何細(xì)菌（金黃色葡萄球菌，銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa)和大腸桿菌 (Escherichia coli))以及真菌（白假絲酵母（Candida albicans))中沒(méi)有活性?；钚蕴?取物和級(jí)分接受微量稀釋檢驗(yàn)，乙醇提取物的抑制濃度（MIC)是500 μ g/ml，乙酸乙酯級(jí)分 的MIC是250 μ g/ml并且二氯甲烷級(jí)分的MIC是125 μ g/ml。因此，分級(jí)改善抗微生物活 性，二氯甲烷級(jí)分是最有有活性的級(jí)分并富含萘醌。為了評(píng)估潛在殺細(xì)菌劑，提取物和級(jí)分 接受微量稀釋檢驗(yàn)，隨后進(jìn)行傳代培養(yǎng)，其中最低殺細(xì)菌濃度（MBC)高于1000 μ g/ml，顯示 其抗微生物活性屬于抑菌類型。
[0006] 從紅蔥鱗莖獲得的乙醇提取物接受鹵蟲(chóng)（A. salina)毒性測(cè)定法，計(jì)數(shù)活動(dòng)物和 死動(dòng)物。在24小時(shí)后，Probitos分析法用來(lái)獲得LD5tl值及其置信區(qū)間（MEYER等人，1982)， 產(chǎn)生以下結(jié)果（1000 μ g/mL>LD5(l)，這表明這種提取物在鹵蟲(chóng)中具有低毒性。鹵蟲(chóng)中的毒性 檢驗(yàn)是一項(xiàng)廣泛使用的生物檢驗(yàn)，因?yàn)樗焖佟⒖煽?、成本低并且顯示與多種生物活性的良 好相關(guān)性（MEYER等人，1982)。
[0007] 專利申請(qǐng) JP20080020163 20080131 (A61K31/708 ;國(guó)際分類：A61P35/00 ; C07H1704 ;A61K36/18)描述了分離紅蔥狗尾草（Eleutherine palmifolia)(鸞尾科 (Iridaceae))的甲醇提取物的刺五加苷A。該化合物可用于治療癌癥。
[0008] 專利申請(qǐng) CN20051119690 20051128(國(guó)際分類：A61K36/28 ;A61K36/748 ; A61P19/00 ;A61P29/00 ;C12G3/02)描述了紅蔥對(duì)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕性 休眠 （rheumatic dormancy)和肌痛、軟組織挫傷和創(chuàng)傷損傷的活性。
[0009] 專利申請(qǐng) JP20050153747 20050526(國(guó)際分類：A23L1/30 ;A61K36/00 ; A61K36/18 ;A61K36/81 ;A61P25/00 ;A61P3/02)提供一種新的疲勞恢復(fù)劑，其特征在于 存在至少一個(gè)紅蔥屬植物物種（鸞尾科（Iridaceae))、前屬（Solanum)植物物種（前 科（Solanaceae))、桉屬（Eucalyptus)植物物種（桃金娘科（Myrtaceae))、黃鐘木屬 (Tabebuia)植物物種（紫葳科（Bignoniaceae))和/或該植物的提取物作為有效成分。
[0010] 專利申請(qǐng) JP20040071888 20040315/ 申請(qǐng) TO 2005JP04415 20050314(國(guó)際分 類：A23L1/30 ;A61K36/00 ;A61K36/185 ;A61K36/47 ;A61K36/48 ;A61K36/53 ;A61K36/77 ; A61K36/85 ；A61K36/88 ；A61P13/08 ；A61P43/00 ；C12N9/99 ； (IPC1-7) ：A23Ll/30 ； A61K35/78 ;A61P13/08 ;A61P43/00 ;C12N9/99 以及歐洲分類：A23L1/30B ;A61K36/185 ; A61K36/47 ;A61K36/48 ;A61K36/53 ;A61K36/77 ;A61K36/85 ;A61K36/88)意在提供一種新 的睪酮5-α -還原酶抑制劑和一種用于抑制前列腺肥大的組合物。這種產(chǎn)品必須含有一 種或多種屬于以下屬的植物：異木患屬（Allophylus)、猴耳環(huán)屬（Archidendron)、紫礦屬 (Butea)、山菅屬（Dianella)、紅蔥屬、風(fēng)吹楠屬（Horsfieldia)、泡花樹(shù)屬（Meliosma)、雞 腳參屬（Orthosiphon)、葉下珠屬（Phyllanthus)、五層龍屬（Salacia)和牡荊屬（Vitex)。
[0011] 專利申請(qǐng) JP20020266273 20020912(國(guó)際分類：A23L1/30 ;A23L2/38 ;A23L2/52 ; A61K36/00 ；A61K36/02 ；A61K36/18 ；A61K36/81 ；A61P3/04 ； (IPC1-7) ：A23Ll/30 ； A23L2/38 ;A23L2/52 ;A61K35/78 ;A61K35/80 ;A61P3/04)旨在提供一種用于減少植物脂肪 的有效預(yù)防和治療肥胖癥和相關(guān)疾病的食品和飲料。這種食品由藻類、植物或提取物（黃 鐘木屬、紅蔥屬、茄屬、桃金娘科和桉屬）組成。
[0012] 除這些文獻(xiàn)之外，還值得提到的是，紅蔥位列國(guó)家公共衛(wèi)生體系（巴西）藥用植物 名錄中，但是不存在常規(guī)用于瘧疾和發(fā)熱疾病的主張。
[0013] 來(lái)自現(xiàn)有技術(shù)的問(wèn)題
[0014] 惡性瘧原蟲(chóng)已經(jīng)迅速獲得針對(duì)可用藥物的抗性。氯喹廣泛用于治療惡性瘧疾并且 使用氯喹的理由是：該藥物具有低毒性并且是經(jīng)濟(jì)可行的。
[0015] 歸因于寄生體對(duì)氯喹的抗性日益增長(zhǎng)，必需引入新藥物，如青蒿