專利名稱：腎上腺素受體阻斷藥在拮抗水母毒素心臟毒性中的應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術領域，具體是指不同類型腎上腺素受體阻斷藥能夠拮抗水母毒素心臟毒性，進一步地，不同類型腎上腺素受體阻斷藥在制備預防或治療水母蜇傷藥物中的應用。
背景技術：
水母蜇傷是全球范圍內最常見的海洋生物致傷，水母蜇傷后可以產生局部劇痛、 炎癥與壞死等癥狀，嚴重者出現(xiàn)全身肌肉痙攣、呼吸和循環(huán)抑制甚至休克、死亡。水母毒素是一類結構新穎、毒性極強的肽類毒素，具有心血管、溶血、神經、呼吸等多種生物活性，其中心血管毒性成分引起的急性循環(huán)衰竭被認為是水母蜇傷致死的主要原因。盡管存在溶血、肌肉、神經等其他多種毒性成分，但心血管毒性成分是水母毒素中引起死亡的主要致病因素(Xiao L, Liu GS, Wang QQ, et al.，The lethality of tentacle-only extract from jellyfish Cyanea capillata is primarily attributed to cardiotoxicity in anaesthetized SD rats[J]. Toxicon. 2010,55(4) :838-845)。因此，要深入研究水母蜇傷致死的防治方法，必須首先研究水母毒素中心血管毒性成分的作用機理及其拮抗藥物的干預效果，以利于開發(fā)水母蜇傷的預防或治療藥物。心血管毒性成分的作用可能與其引起心肌細胞鈣超載有關，除通過細胞膜上鈣通道作用外，水母毒素心血管毒性成分通過腎上腺素受體-蛋白激酶A通路過度激活也是心血管毒性成分引起鈣超載的重要原因。此外，水母毒素引起冠脈血管收縮導致心臟組織缺血缺氧也是其損傷心臟的可能原因之一。因此，應用不同類型的腎上腺素受體阻斷藥一方面可以防止腎上腺素受體-蛋白激酶A過度激活以降低心肌細胞鈣超載的發(fā)生(如β受體阻斷劑)，另一方面則可以通過擴張冠脈血管防止心臟組織缺血缺氧而發(fā)揮保護心臟的作用(如α受體阻斷劑)。腎上腺素受體阻斷藥按照其對α和β腎上腺素受體選擇性的不同，可以分為α 受體阻斷藥、β受體阻斷藥以及α、β受體阻斷藥(如拉貝洛爾)三大類。其中α受體阻斷藥又分為非選擇性α受體阻斷藥(如酚妥拉明)、選擇性h受體阻斷藥(如哌唑嗪) 以及選擇性α 2受體阻斷藥(如育亨賓)三類；β受體阻斷藥則分為分非選擇性β受體阻斷藥(如普萘洛爾)以及選擇性β ！受體阻斷藥(如阿替洛爾、艾司洛爾等)。至今未見任何類型的腎上腺素受體阻斷劑應用于拮抗水母毒素心臟毒性的報道。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的在于提供腎上腺素受體阻斷藥新的適應癥，具體是指不同類型腎上腺素受體阻斷藥在制備預防或治療水母蜇傷藥物中的應用，特別是在制備水母毒素心臟毒性拮抗藥物中的應用。本實驗室前期研究從整體動物心功能、離體心臟以及心肌細胞三個層面闡述了水母毒素的心臟及心肌細胞毒性，證明水母毒素具有直接的心臟毒性，心肌收縮力下降引起的急性全心衰竭是毒素導致大鼠死亡的主要原因(Xiao L，Liu GS, Wang QQ, et al.，The lethality of tentacle-only extract from jellyfish Cyanea capillata is primarily attributed to cardiotoxicity in anaesthetized SD rats[J]. Toxicon.2010,55 (4) 838-84 。進一步從整體動物水平發(fā)現(xiàn)TOE可以導致心臟組織鈣含量增高，而激光掃描共聚焦顯微技術發(fā)現(xiàn)水母毒素可以導致細胞外液無鈣的心肌細胞鈣超載，提示水母毒素可能通過作用于心肌細胞膜上的腎上腺素受體，激活腺苷酸環(huán)化酶，產生cAMP，繼而激活蛋白激酶A，進一步使心肌細胞肌漿網上鈣釋放通道RyR2受體磷酸化而開放，肌漿網內鈣離子大量釋放到胞漿，從而產生鈣超載。本發(fā)明人設想，采用不同類型的腎上腺素受體阻斷藥，通過抑制水母毒素與心肌細胞膜上腎上腺素受體的結合，可以有效地拮抗水母毒素心血管成分引起的心肌細胞鈣超載，從而拮抗水母毒素引起的心臟毒性作用。此外，我們也觀察到水母毒素可以引起大鼠心電圖缺血缺氧性改變，而離體血管環(huán)實驗則表明水母毒素可以引起血管持續(xù)性的收縮反應，提示水母毒素可能還能夠通過持續(xù)性收縮冠脈血管，引起心肌缺血缺氧性改變，從而加重水母毒素引起的心臟損傷，通過使用腎上腺素受體阻斷藥(如α受體阻斷藥酚妥拉明)， 擴張冠脈血管，可以有效改善水母毒素引起的心肌缺血缺氧損傷，從而發(fā)揮拮抗水母毒素心臟毒性的作用。本發(fā)明提供了不同類型腎上腺素受體阻斷藥在制備預防或治療水母蜇傷藥物中的應用。本發(fā)明還提供了不同類型腎上腺素受體阻斷藥在制備水母毒素心臟毒性拮抗藥物中的應用。不同類型腎上腺素受體阻斷藥，是指非選擇性β受體阻斷劑，具體是指普萘洛爾(Propranolol)。不同類型腎上腺素受體阻斷藥，是指選擇性長效β 1受體阻斷劑，具體是指阿替洛爾(Atenolol)。不同類型腎上腺素受體阻斷藥，是指選擇性短效β 1受體阻斷劑，具體是指艾司洛爾(Esmolol)。不同類型腎上腺素受體阻斷藥，是指非選擇性短效α 1受體阻斷劑，具體是指酚妥拉明(Phentolamine)。本發(fā)明的具體技術方案如下1.制備水母粗毒提取液1)采樣采集鮮活水母，迅速剪下其觸手，立即將觸手干冰冷凍，運回后置于_70°C超低溫冰箱凍存?zhèn)溆谩?)制備水母粗毒提取液將凍存觸手用自配海水于4°C自溶4天，磁力攪拌器攪拌，收集觸手自溶液體，10000 X g離心15min，上清液即水母粗毒提取液。2.不同種類腎上腺素受體阻斷藥拮抗水母毒素心臟毒性實驗(以普萘洛爾為代表)1)在心肌細胞水平，腎上腺素受體阻斷藥普萘洛爾拮抗水母毒素心肌細胞毒性體外培養(yǎng)的乳鼠心肌細胞預先給予不同濃度的普萘洛爾(0、20、50、100、200μΜ)作用 30min后，給予40μ g/ml上述制備的水母粗毒提取液作用12h，采用CCK-8法檢測細胞活力。發(fā)現(xiàn)給予普萘洛爾θ0、50、100、200μΜ)的心肌細胞存活率顯著高于未給予普萘洛爾的心肌細胞，表明在乳鼠心肌細胞水平，普萘洛爾對水母毒素具有拮抗作用。2)在離體心臟水平，腎上腺素受體阻斷藥普萘洛爾拮抗水母毒素心臟毒性采用含有0. 1 μ M普萘洛爾KH液灌注Langendorff離體心臟模型，穩(wěn)定30min后側管給予0. 18mg 上述提取的水母粗毒提取液，觀察30min，發(fā)現(xiàn)給予0. 1 μ M普萘洛爾灌注的離體心臟心功能各項指標(心率、冠脈流量、左心室發(fā)展壓、左心室內壓最大上升/下降速率以及左心室舒張末壓)都要顯著優(yōu)于未給普萘洛爾的中毒組，表明在離體心臟水平，普萘洛爾可以拮抗水母毒素心臟毒性。3)在整體動物水平，腎上腺素受體阻斷藥普萘洛爾拮抗水母毒素心臟毒性采用麻醉Sprague-DawIey(SD)大鼠，預先通過頸外靜脈注射0. 75mg/kg普萘洛爾(30min注射完)，然后靜脈給予lmg/kg上述提取的水母粗毒提取液，監(jiān)測大鼠動脈血壓變化。發(fā)現(xiàn)給予0. 75mg/kg普萘洛爾的大鼠動脈血壓要明顯高于未給予普萘洛爾的對照組，表明在整體動物水平，普萘洛爾可以拮抗水母毒素心臟毒性。本發(fā)明在培養(yǎng)的乳鼠心肌細胞、離體心臟以及整體動物三個層面，分別預先給予一定量的不同種類的腎上腺素受體阻斷藥，然后再給予水母毒素，觀察腎上腺素受體阻斷藥拮抗水母毒素心臟毒性的效果。其中乳鼠心肌細胞水平包括α、β受體阻斷藥拉貝洛爾QO、50、100、200 μ Μ)、非選擇性α受體阻斷藥酚妥拉明(0. 5、1、2、5 μ Μ)、選擇性、受體阻斷藥哌唑嗪(2、5、10、20μΜ)、選擇性α 2受體阻斷藥育亨賓(5、10、20、50 μ Μ)、非選擇性β受體阻斷藥普萘洛爾(20、50、100、200μΜ)、選擇性β i受體阻斷藥阿替洛爾(20、50、 100,200 μ M)與艾司洛爾00、50、100、200μΜ)；離體心臟水平包括非選擇性β受體阻斷藥普萘洛爾(0. ΙμΜ)、非選擇性α受體阻斷藥酚妥拉明(ΙμΜ)、選擇性β工受體阻斷藥阿替洛爾(ΙμΜ)與艾司洛爾(ΙμΜ)；整體動物水平包括非選擇性β受體阻斷藥普萘洛爾 (0. 75mg/kg)、選擇性β ！受體阻斷藥艾司洛爾(0. 8mg/kg)。結果表明，不同種類腎上腺素受體阻斷藥在乳鼠心肌細胞、離體心臟以及整體動物三個層面上具有拮抗水母毒素心臟毒性的效應，但其拮抗效應間有差異其中在乳鼠心肌細胞水平，普萘洛爾OO、50、100、200 μ M)、阿替洛爾00、50、100、200μΜ)以及艾司洛爾 (20,50,100,200 μ Μ)具有明顯的拮抗水母毒素心肌細胞毒性的作用；在離體心臟水平，普萘洛爾(0. ΙμΜ)、酚妥拉明(ΙμΜ)以及阿替洛爾(ΙμΜ)具有明顯的拮抗水母毒素心臟毒性的效應；而在整體動物水平，普萘洛爾(0. 75mg/kg, i. ν)藥物干預后血壓下降明顯減少。 說明不同種類腎上腺素受體阻斷藥可以有效地拮抗水母毒素心臟毒性，適用于開發(fā)水母蜇傷的預防或治療藥物。本發(fā)明為開發(fā)水母蜇傷的預防或治療藥物提供了一種有效的候選藥物。


圖1在乳鼠心肌細胞水平，不同腎上腺素受體阻斷藥拮抗水母毒素心肌細胞毒性實驗結果。其中圖1-1在乳鼠心肌細胞水平，普萘洛爾能夠明顯拮抗水母毒素心肌細胞毒性圖1-2在乳鼠心肌細胞水平，拉貝洛爾對水母毒素無明顯拮抗效應圖1-3在乳鼠心肌細胞水平，酚妥拉明對水母毒素無明顯拮抗效應
圖1-4在乳鼠心肌細胞水平，哌唑嗪對水母毒素無明顯拮抗效應圖1-5在乳鼠心肌細胞水平，育亨賓對水母毒素無明顯拮抗效應圖1-6在乳鼠心肌細胞水平，阿替洛爾對水母毒素具有明顯拮抗效應圖1-7在乳鼠心肌細胞水平，艾司洛爾對水母毒素具有明顯拮抗效應
圖2在離體心臟水平，不同腎上腺素受體阻斷藥拮抗水母毒素心臟毒性實驗結果。其中圖2-1A在離體心臟水平，普萘洛爾能夠拮抗水母毒素心臟毒性(心率)圖2-1B在離體心臟水平，普萘洛爾能夠拮抗水母毒素心臟毒性(左心室發(fā)展壓)圖2-1C在離體心臟水平，普萘洛爾能夠拮抗水母毒素心臟毒性(左心室內壓最大上升速率)圖2-1D在離體心臟水平，普萘洛爾能夠拮抗水母毒素心臟毒性(左心室內壓最大下降速率)圖2-1E在離體心臟水平，普萘洛爾能夠拮抗水母毒素心臟毒性(冠脈流量)圖2-1F在離體心臟水平，普萘洛爾能夠拮抗水母毒素心臟毒性(左心室舒張末壓)圖2-2A在離體心臟水平，酚妥拉明對水母毒素的心臟毒性具有拮抗作用(心率)圖2-2B在離體心臟水平，酚妥拉明對水母毒素的心臟毒性具有拮抗作用(左心室發(fā)展壓)圖2-2C在離體心臟水平，酚妥拉明對水母毒素的心臟毒性具有拮抗作用(左心室內壓最大上升速率)圖2-2D在離體心臟水平，酚妥拉明對水母毒素的心臟毒性具有拮抗作用(左心室內壓最大下降速率)圖2-2E在離體心臟水平，酚妥拉明對水母毒素的心臟毒性具有拮抗作用(冠脈流量)圖2-2F在離體心臟水平，酚妥拉明對水母毒素的心臟毒性具有拮抗作用(左心室舒張末壓)圖2-3A在離體心臟水平，阿替洛爾對水母毒素的心臟毒性具有拮抗作用(心率)圖2- 在離體心臟水平，阿替洛爾對水母毒素的心臟毒性具有拮抗作用(左心室發(fā)展壓)圖2-3C在離體心臟水平，阿替洛爾對水母毒素的心臟毒性具有拮抗作用(左心室內壓最大上升速率)圖2-3D在離體心臟水平，阿替洛爾對水母毒素的心臟毒性具有拮抗作用(左心室內壓最大下降速率)圖2-3E在離體心臟水平，阿替洛爾對水母毒素的心臟毒性具有拮抗作用(冠脈流量)圖2-3F在離體心臟水平，阿替洛爾對水母毒素的心臟毒性具有拮抗作用(左心室舒張末壓)圖2-4A在離體心臟水平，艾司洛爾未見明顯拮抗水母毒素心臟毒性的效應(心率)圖2-4B在離體心臟水平，艾司洛爾未見明顯拮抗水母毒素心臟毒性的效應(左心室發(fā)展壓)圖2-4C在離體心臟水平，艾司洛爾未見明顯拮抗水母毒素心臟毒性的效應(左心室內壓最大上升速率)圖2-4D在離體心臟水平，艾司洛爾未見明顯拮抗水母毒素心臟毒性的效應(左心室內壓最大下降速率)圖2-4E在離體心臟水平，艾司洛爾未見明顯拮抗水母毒素心臟毒性的效應(冠脈流量)圖2-4F在離體心臟水平，艾司洛爾未見明顯拮抗水母毒素心臟毒性的效應(左心室舒張末壓)圖3在整體動物水平，不同腎上腺素受體阻斷藥拮抗水母毒素心臟毒性實驗結^ ο其中圖3-1在整體動物水平，普萘洛爾能夠拮抗水母毒素心臟毒性圖3-2在整體動物水平，艾司洛爾可見部分拮抗水母毒素心臟毒性的效應
具體實施例方式下面結合本發(fā)明的實施例和附圖對本發(fā)明的實施作詳細說明，以下實施例是在以本發(fā)明技術方案為前提下進行實施，給出了詳細的實施方式和具體的操作過程，但本發(fā)明的保護范圍不限于下述的實施例。實施例1.制備水母粗毒提取液發(fā)形霞水母(Cyanea capillata)于2010年8月采自浙江省三門灣海域，取觸手 10g，加入等體積3. 34%自配海水10ml，自溶4天，磁力攪拌器每日攪拌2次，每次lOmin。 100目細胞篩網過濾3次，濾液IOOOOXg離心3次，每次15min，收集上清即水母粗毒提取液(TOE，tentacle-only extract)。采用 Bradford 法測定蛋白濃度為 1.2mg/ml。自配海水配方:NaCl 28g, MgCl2 · 6H20 5g, KC10. 8g, CaCl2 1. 033g，加水至 1000ml。所有操作都在冰水或4°C條件下進行。使用前采用0. Olmol/L、pH 7. 4 PBS透析 8h。實施例2.在乳鼠心肌細胞、離體心臟以及整體動物三個層面，非選擇性β受體阻斷藥普萘洛爾拮抗水母毒素心臟毒性實驗實驗用普萘洛爾原料藥購自上海華藍化學科技有限公司，為白色粉末狀固體。2. 1在乳鼠心肌細胞水平，普萘洛爾能夠明顯拮抗水母毒素心肌細胞毒性取新生SD乳鼠15只，無菌條件下開胸取心，立即用冰冷的D-hanks液(NaCl 8. Og ；KCl 0. 4g ；KH2PO4 0. 06g ；NaHCO3 0. 35g ；Na2HPO2 ·12Η20 :0. 06g，加三蒸水至 1000ml, 0. 22 μ m濾器過濾)洗去殘血，剪成Imm3大小碎片，采用II型膠原酶消化及Percoll密度梯度離心法獲取乳鼠心肌細胞，調整細胞密度至1 X IO6個/ml，每孔200 μ 1接種到96孔培養(yǎng)板上，置入37°C、5% CO2飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，于接種4 后更換正常培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)心肌細胞活力采用 CCK-8 法(Hou G, Xue L, Lu Z, et al. An activated mTOR/ p70S6K signaling pathway in esophageal squamous cell carcinoma cell lines and inhibition of the pathway by rapamycin and siRNA against mTOR[J]. CancerLett. 2007,253(2) =236-248)測定，實驗分空白對照組、TOE染毒組、普萘洛爾藥物干預組 (20、50、100及200ymol/L)及相應普萘洛爾藥物內參組(20、50、100及200 μ mol/L)共 10組，每組η = 8，其中空白對照組既不加普萘洛爾，也不加水母毒素，TOE染毒組為僅加 TOE (40 μ g/ml)，普萘洛爾藥物干預各組分別給予不同濃度的普萘洛爾作用30min后再給予TOE (40 μ g/ml)，而普萘洛爾藥物內參組則給予相應濃度的普萘洛爾但不給TOE。TOE作用1 后加入CCK-8試劑顯色，450nm波長測各孔吸光值(其中Al孔加入200 μ 1 PBS所測吸光值為本底)。細胞活力(％)=[(實驗A45Q)_(本底A45Q)]/[(陰性對照A45Q)_(本底 A450)] X 100%比較普萘洛爾干預組細胞活力與相應的空白對照組細胞活力(Τ0Ε%/ Control %)，從而判斷普萘洛爾是否在乳鼠心肌細胞水平具有拮抗水母毒素的效應。結果表明普萘洛爾在20、50、100、20(^!1101/1濃度時，均能夠顯著提高經水母毒素處理的乳鼠心肌細胞的存活率，說明在心肌細胞水平，普萘洛爾具有明顯的拮抗心肌細胞毒性的效應 (見表1，圖1-1)。2. 2在離體心臟水平，普萘洛爾能夠拮抗水母毒素心臟毒性雄性SD大鼠對只(第二軍醫(yī)大學動物中心提供，下同)，體重280 320g，用25% 烏拉坦(1.2g/kg)和肝素生理鹽水GOOIU/kg)混合液腹腔麻醉后，迅速開胸取心，按經典的Langendorff方法(H. G.沃格爾(德)，W. H.沃格爾(美).編著；杜冠華，李學軍，張永祥，等譯.藥理學實驗指南.科學出版社.2001. 2，A. 3. 1:108-112)，經升主動脈逆行插入灌注管，使其置于主動脈瓣上方，以利于冠狀動脈灌注。采用KH液進行平衡灌注，于灌注前 30min及灌注時充以混合氣體(95% 02+5% CO2)，使平衡灌注的KH液充分達到氧飽和，pH 值維持在7. 35 7. 45，保持灌注溫度為37. 0 37. 5°C，灌注壓力60mmHg。實驗過程中全程記錄心率(HR)、左心室發(fā)展壓(LVDP)、左心室舒張末壓(LVEDP)、左心室內壓最大上升速率(+dp/dtmax)、左心室內壓最大下降速率(_dp/dtmax)以及冠脈流量(CF)等各項心功能指標。24只SD大鼠隨機分為普萘洛爾藥物內參組(普萘洛爾+生理鹽水)、Τ0Ε染毒組 (生理鹽水+Τ0Ε)和普萘洛爾藥物干預組(普萘洛爾+T(E)共3組，每組各8只。其中普萘洛爾通過KH液灌注給藥(0. 1 μ M)，TOE通過側管給藥(0. 18mg)，給藥后觀察離體心臟各心功能指標的變化。結果表明普萘洛爾藥物干預組HR、LVDP, dp/dt以及CF等心功能指標均優(yōu)于TOE染毒組，說明在離體心臟水平，普萘洛爾具有明顯的拮抗水母毒素心臟毒性的效應(圖2-1)。2. 3在整體動物水平，普萘洛爾能夠拮抗水母毒素心臟毒性雄性SD大鼠M只，體重200 士 20g，隨機分為普萘洛爾藥物內參組(普萘洛爾+生理鹽水)、TOE染毒組(生理鹽水+Τ0Ε)和普萘洛爾藥物干預組(普萘洛爾+Τ0Ε)共3組， 每組各8只。25%烏拉坦腹腔注射麻醉，麻醉劑量1.2g/kg。左側股動脈插管連接壓力感受器，生物信號分析系統(tǒng)(MPA-2000，奧爾科特，上海)監(jiān)測并記錄大鼠股動脈血壓的變化。 左側頸外靜脈置管按體重給予普萘洛爾(0. 75mg/kg,30min內注射完)，右側頸外靜脈置管按體重給予T0E(lmg/kg)，觀察大鼠血壓變化。結果表明，給予普萘洛爾藥物干預組血壓下降幅度明顯低于TOE染毒組，說明在整體動物水平，普萘洛爾可以明顯拮抗水母毒素的心臟毒性(圖3-1)。實施例3.在乳鼠心肌細胞層面，α、β受體阻斷藥拉貝洛爾拮抗水母毒素心肌細胞毒性實驗實驗用拉貝洛爾原料藥購自上海華藍化學科技有限公司，為白色粉末狀固體。3. 1在乳鼠心肌細胞水平，拉貝洛爾對水母毒素無明顯拮抗效應拉貝洛爾濃度為20、50、100、200μΜ，實驗方法如實施例2. 1。結果表明，拉貝洛爾在乳鼠心肌細胞層面，對水母毒素拮抗作用不明顯(見表1，圖1-2)。實施例4.在心肌細胞、離體心臟層面，非選擇性α受體阻斷藥酚妥拉明拮抗水母毒素心臟毒性實驗實驗用酚妥拉明為甲磺酸酚妥拉明注射液，購自上海旭東海普藥業(yè)有限公司，為無色或微黃色的澄明液體。4. 1在乳鼠心肌細胞水平，酚妥拉明對水母毒素無明顯拮抗效應酚妥拉明濃度為0.5、1、2、511|1，實驗方法如實施例2.1。結果表明，酚妥拉明在乳鼠心肌細胞水平未見明顯拮抗水母毒素心肌細胞毒性的效應(見表1，圖1-3)。4. 2在離體心臟水平，酚妥拉明對水母毒素的心臟毒性具有拮抗作用酚妥拉明濃度采用1 μ Μ,實驗方法如實施例2. 2。結果表明，酚妥拉明藥物干預組 HR、LVDP, dp/dt、LVEDP以及CF等心功能指標均顯著優(yōu)于中毒對照組，說明在離體心臟水平，酚妥拉明具有拮抗水母毒素心臟毒性的作用(圖2-2)。實施例5.在乳鼠心肌細胞層面，選擇性α工受體阻斷藥哌唑嗪拮抗水母毒素心肌細胞毒性實驗實驗用哌唑嗪原料藥購自上海華藍化學科技有限公司，為白色粉末狀固體。5. 1在乳鼠心肌細胞水平，哌唑嗪對水母毒素無明顯拮抗效應哌唑嗪濃度為2、5、10、20μΜ，實驗方法如實施例2. 1。結果表明，哌唑嗪在乳鼠心肌細胞水平未見明顯拮抗水母毒素心肌細胞毒性的效應(見表1，圖1-4)。實施例6.在乳鼠心肌細胞層面，選擇性α 2受體阻斷藥育亨賓拮抗水母毒素心肌細胞毒性實驗實驗用育亨賓原料藥購自上海華藍化學科技有限公司，為白色粉末狀固體。6. 1在乳鼠心肌細胞水平，育亨賓對水母毒素無明顯拮抗效應育亨賓濃度為5、10、20、50μΜ，實驗方法如實施例2. 1。結果表明，育亨賓在乳鼠心肌細胞水平未見明顯拮抗水母毒素心肌細胞毒性的效應(見表1，圖1-5)。實施例7.在乳鼠心肌細胞、離體心臟層面，選擇性β ！受體阻斷藥阿替洛爾拮抗水母毒素心臟毒性實驗實驗用阿替洛爾原料藥購自上海華藍化學科技有限公司，為白色粉末狀固體。7. 1在心肌細胞水平，阿替洛爾對水母毒素具有明顯拮抗效應阿替洛爾濃度為20、50、100、200 μ Μ,實驗方法如實施例2. 1。結果表明，阿替洛爾在20、50、100、200μΜ濃度時，可以明顯拮抗水母毒素心肌細胞毒性(見表1，圖1_6)。7. 2在離體心臟水平，阿替洛爾對水母毒素的心臟毒性具有拮抗作用阿替洛爾濃度采用1 μ Μ,實驗方法如實施例2. 2。結果表明，阿替洛爾藥物干預組 HR、LVDP, dp/dt、LVEDP以及CF等心功能指標均優(yōu)于中毒對照組，說明在離體心臟水平，阿替洛爾具有拮抗水母毒素心臟毒性的作用(圖2-3)。實施例8.在乳鼠心肌細胞、離體心臟以及整體動物層面，選擇性β ！受體阻斷藥艾司洛爾拮抗水母毒素心臟毒性實驗實驗用艾司洛爾原料藥購自上海華藍化學科技有限公司，為白色粉末狀固體。8. 1在乳鼠心肌細胞水平，艾司洛爾對水母毒素具有明顯拮抗效應艾司洛爾濃度為20、50、100、20(^11，實驗方法如實施例2.1。結果表明，艾司洛爾在20、50、100、20(^11濃度時，對水母毒素具有明顯拮抗效應(見表1，圖1-7)。8. 2在離體心臟水平，艾司洛爾未見明顯拮抗水母毒素心臟毒性的效應艾司洛爾濃度采用1 μ Μ，實驗方法如實施例2. 2。結果表明，艾司洛爾藥物干預組 HR、LVDP、dp/dt、LVEDP以及CF等心功能指標與TOE中毒組均無明顯差異，說明在離體心臟水平，艾司洛爾無明顯拮抗水母毒素心臟毒性的作用(圖2-4)。8. 3在整體動物水平，艾司洛爾對水母毒素心臟毒性具有部分拮抗作用艾司洛爾濃度為0. 8mg/kg, 30min內注射完，實驗方法如實施例2. 3。結果表明，給予艾司洛爾藥物干預組血壓下降幅度比TOE染毒組略少，說明在整體動物水平，艾司洛爾具有部分拮抗水母毒素心臟毒性的作用(見圖3-2)。表1腎上腺素受體阻斷藥對TOE心肌細胞毒性的干預效果(TOE :40 μ g/ml)
權利要求
1.腎上腺素受體阻斷藥在制備預防或治療水母蜇傷藥物中的應用。
2.根據權利要求1所述的腎上腺素受體阻斷藥在制備預防或治療水母蜇傷藥物中的應用，該應用是指腎上腺素受體阻斷藥在制備水母毒素心臟毒性拮抗藥物中的應用。
3.根據權利要求1或2所述的腎上腺素受體阻斷藥在制備預防或治療水母蜇傷藥物中的應用，其特征在于其中的腎上腺素受體阻斷藥是指非選擇性β受體阻斷劑。
4.根據權利要求3所述的腎上腺素受體阻斷藥在制備預防或治療水母蜇傷藥物中的應用，其特征在于其中的腎上腺素受體阻斷藥是指普萘洛爾。
5.根據權利要求1或2所述的腎上腺素受體阻斷藥在制備預防或治療水母蜇傷藥物中的應用，其特征在于其中的腎上腺素受體阻斷藥是指選擇性長效β 1受體阻斷劑。
6.根據權利要求5所述的腎上腺素受體阻斷藥在制備預防或治療水母蜇傷藥物中的應用，其特征在于其中的腎上腺素受體阻斷藥是指阿替洛爾。
7.根據權利要求1或2所述的腎上腺素受體阻斷藥在制備預防或治療水母蜇傷藥物中的應用，其特征在于其中的腎上腺素受體阻斷藥是指選擇性短效β 1受體阻斷劑。
8.根據權利要求7所述的腎上腺素受體阻斷藥在制備預防或治療水母蜇傷藥物中的應用，其特征在于其中的腎上腺素受體阻斷藥是指艾司洛爾。
9.根據權利要求1或2所述的腎上腺素受體阻斷藥在制備預防或治療水母蜇傷藥物中的應用，其特征在于其中的腎上腺素受體阻斷藥是指非選擇性α受體阻斷劑。
10.根據權利要求9所述的腎上腺素受體阻斷藥在制備預防或治療水母蜇傷藥物中的應用，其特征在于其中的腎上腺素受體阻斷藥是指酚妥拉明。
全文摘要
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術領域。水母蜇傷是全球范圍內最常見的海洋生物致傷，水母毒素中的心血管毒性成分引起的急性循環(huán)衰竭被認為是水母蜇傷致死的主要原因。本發(fā)明還提供了不同類型腎上腺素受體阻斷藥在制備水母毒素心臟毒性拮抗藥物中的應用，不同類型腎上腺素受體阻斷藥是指α受體阻斷藥、β受體阻斷藥以及α、β受體阻斷藥，特別是指非選擇性α受體阻斷劑、非選擇性β受體阻斷劑、選擇性長效β1受體阻斷劑、選擇性短效β1受體阻斷劑。本發(fā)明在培養(yǎng)的乳鼠心肌細胞、離體心臟以及整體動物三個層面，發(fā)現(xiàn)不同類型腎上腺素受體阻斷藥能夠有效地拮抗水母毒素心臟毒性，可以開發(fā)為水母蜇傷的預防或治療藥物。
文檔編號A61K31/417GK102258782SQ20111018862
公開日2011年11月30日 申請日期2011年7月7日 優(yōu)先權日2011年7月7日
發(fā)明者張博, 張 林, 張黎明, 溫小娟, 王倩倩, 王濤, 王蓓蕾, 聶菲, 肖良, 賀茜, 陸佳 申請人:中國人民解放軍第二軍醫(yī)大學