專利名稱：5-氨基酮戊酸或其代謝產(chǎn)物在制備醫(yī)用超聲敏感劑中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及5-氨基酮戊酸或其代謝產(chǎn)物的用途，尤其涉及在制藥領(lǐng)域中的用途， 具體涉及在制備以聲動(dòng)力法治療動(dòng)脈粥樣硬化所用的超聲敏感劑中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
5-氨基酮戊酸作為光敏劑的光動(dòng)力治療(Wiotodynamic Therapy,PDT)已經(jīng)廣泛用于皮膚、眼科、癌癥及腫瘤等疾病的治療中，也可用于動(dòng)脈粥樣硬化的治療(Maier A et al. ， Comparison of 5-aminolaevulinic acid and porphyrin photosensitization for photodynamic therapy of malignant bronchial stenosis -.a clinical pilot study. Lasers Surg Med. 2002 ；30(1) :12-17 ；Waksman R et al. , PhotoPoint photodynamic therapy promotes stabilization of atherosclerotic plaques and inhibits plaque progression. J Am Coll Cardiol. 2008,52(12) : 1024—1032 ；禾口 Peng C et al.， Detection and photodynamic therapy of inflamed atherosclerotic plaques in the carotid artery of rabbits. J Photochem Photobiol B. 2010, doi :10. 1016/ j. jphotobiol. 2010. 09. 001.)。其作用機(jī)理是5-氨基酮戊酸在體內(nèi)經(jīng)5-氨基酮戊酸脫水酶及一系列酶促作用，轉(zhuǎn)化成具有強(qiáng)光敏作用的物質(zhì)原卟啉IX(Protoporphyrin IX， PpIX)，如圖1所示。原卟啉IX在420 630納米的光照下，發(fā)生能量轉(zhuǎn)移，生成單線態(tài)氧， 單線態(tài)氧可以誘導(dǎo)靶細(xì)胞凋亡(Henderson Bff et al. ,Dougherty,How does photodynamic therapy work ？ Photochem Photobiol. 1992,55(1) :145-157)。但由于激光在組織中的穿透力比較低，光動(dòng)力治療僅限于體表疾病的治療，所以， 對(duì)于人體深部病變的治療，光動(dòng)力治療很難達(dá)到理想的效果。因此，在光動(dòng)力治療的基礎(chǔ)上，1989年，toemura提出了聲動(dòng)力治療的概念，最早用于聲動(dòng)力治療的超聲敏感劑是血卟啉，目前，聲動(dòng)力治療在腫瘤治療方面應(yīng)用廣泛。聲動(dòng)力治療與光動(dòng)力治療相比，有很多優(yōu)點(diǎn)聲動(dòng)力治療對(duì)深部腫瘤的治療無需通過內(nèi)鏡，操作簡(jiǎn)便，患者無痛苦，可做重復(fù)性治療；聲動(dòng)力治療對(duì)腫瘤有選擇性的殺傷作用。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，聲動(dòng)力治療與光動(dòng)力治療聯(lián)合治療，可明顯抑制腫瘤的發(fā)展，甚至能夠完全清除腫瘤細(xì)胞。Suzuki等發(fā)現(xiàn)化療藥物對(duì)聲動(dòng)力治療有增效作用。目前已知5-氨基酮戊酸作為超聲敏感劑的聲動(dòng)力治療已經(jīng)用于治療腫瘤(Liu Q et al. ， Sonodynamic antitumor effect of protoporphyrin IX disodium salt on S 180solid tumor. Chemotherapy. 2007, 53(6) :429-436)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供5-氨基酮戊酸或其代謝產(chǎn)物的新用途，即在制藥中的新應(yīng)用。本發(fā)明提供了 5-氨基酮戊酸或其代謝產(chǎn)物在制備以聲動(dòng)力法治療動(dòng)脈粥樣硬化所用的超聲敏感劑中的應(yīng)用。具體的，所述代謝產(chǎn)物是原卟啉IX。所述5-氨基酮戊酸是采用磷酸鹽緩沖液或生理鹽水溶解配制成濃度為1 500 毫克/毫升的溶液，優(yōu)選的濃度為100毫克/毫升。所述原卟啉IX是采用RPMI-1640培養(yǎng)液溶解配制成濃度為1 50微克/毫升的溶液，優(yōu)選的濃度為20微克/毫升。本發(fā)明進(jìn)一步提供含有治療有效量的5-氨基酮戊酸或其代謝產(chǎn)物的藥物組合物，在制備以聲動(dòng)力法治療動(dòng)脈粥樣硬化所用的超聲敏感劑中的應(yīng)用。其中，所述5-氨基酮戊酸或其代謝產(chǎn)物作為活性成分，在該藥物組合物中的重量含量為0. 1 99. 5%。其中，所述藥物組合物還含有一種或多種藥學(xué)上可接受的藥用輔料。本發(fā)明通過5-氨基酮戊酸或其代謝產(chǎn)物原卟啉IX作為超聲敏感劑的藥理實(shí)驗(yàn)及結(jié)果，證實(shí)了 5-氨基酮戊酸或原卟啉IX介導(dǎo)的聲動(dòng)力治療能夠減小并穩(wěn)定動(dòng)脈粥樣硬化斑塊，驗(yàn)證了其在制備聲動(dòng)力治療超聲敏感劑中的應(yīng)用。


圖1為5-氨基酮戊酸在體內(nèi)轉(zhuǎn)化成原卟啉IX的示意圖。圖2為超聲作用于原卟啉IX后的巨噬細(xì)胞存活率的變化圖。圖3為巨噬細(xì)胞凋亡率和壞死率與超聲作用時(shí)間和原卟啉IX濃度的關(guān)系圖。圖4為5-氨基酮戊酸介導(dǎo)的聲動(dòng)力治療組和對(duì)照組分別在1周和4周后的斑塊面積、管腔面積和斑塊狹窄率圖。圖5為5-氨基酮戊酸介導(dǎo)的聲動(dòng)力治療后血管斑塊中巨噬細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、增殖期細(xì)胞、基質(zhì)金屬蛋白酶和基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子的變化圖。圖6為5-氨基酮戊酸介導(dǎo)的聲動(dòng)力治療后不同超聲強(qiáng)度與斑塊破裂數(shù)的關(guān)系圖。
具體實(shí)施例方式為了更好地理解本發(fā)明的實(shí)質(zhì)，下面采用原卟啉IX或5-氨基酮戊酸介導(dǎo)的聲動(dòng)力治療的藥理實(shí)驗(yàn)及結(jié)果來說明其在制藥領(lǐng)域中的新用途。1、原卟啉IX介導(dǎo)的聲動(dòng)力治療對(duì)巨噬細(xì)胞的作用原卟啉IX(美國(guó)Sigma公司)用RPMI-1640培養(yǎng)液溶解，是按照1 50微克/毫升的終濃度添加到培養(yǎng)液中，孵育2小時(shí)。然后使用1兆赫茲、1. 6瓦/平方厘米的超聲作用于培養(yǎng)的巨噬細(xì)胞，6小時(shí)后使用MTT [3-G，5- 二甲基噻唑-2)-2，5- 二苯基四氮唑溴鹽] 法檢測(cè)細(xì)胞活力。如圖2可見，隨著超聲作用的增加及原卟啉IX濃度的增加，細(xì)胞活力都下降。聲動(dòng)力治療誘導(dǎo)了巨噬細(xì)胞的凋亡和壞死。如圖3所示，凋亡率在超聲治療5分鐘之前和原卟啉IX濃度在20微克/毫升以下時(shí)持續(xù)增加，而壞死率則在整個(gè)過程中持續(xù)增加。當(dāng)作用時(shí)間為5分鐘和原卟啉IX濃度為20微克/毫升時(shí)，細(xì)胞凋亡率/壞死率的比值達(dá)到峰值。2,5-氨基酮戊酸介導(dǎo)的聲動(dòng)力治療對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的作用
采用中國(guó)西安天豐生物科技有限公司提供的5-氨基酮戊酸(純度> 99% )進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。通過球囊損傷配合高脂飲食的方式制備兔動(dòng)脈粥樣硬化斑塊模型。實(shí)驗(yàn)分為四組空白對(duì)照組、單純5-氨基酮戊酸組、單純超聲組和聲動(dòng)力治療組。其中單純5-氨基酮戊酸組和聲動(dòng)力治療組是將5-氨基酮戊酸用磷酸鹽緩沖液溶解，溶解后的濃度為100毫克 /毫升，按照60毫克/千克體重的劑量將溶解后的藥物靜脈注射到家兔體內(nèi)。而空白對(duì)照組和單純超聲組的家兔不注射5-氨基酮戊酸。聲動(dòng)力治療組在5-氨基酮戊酸注射2小時(shí)后，用1兆赫茲、1.6瓦/平方厘米的超聲進(jìn)行聲動(dòng)力治療。單純超聲組采用同樣強(qiáng)度的超聲進(jìn)行照射。結(jié)果顯示單純5-氨基酮戊酸組、單純超聲組與空白對(duì)照組之間沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差
已如圖4所示，對(duì)照組在4周后斑塊明顯增大，管腔縮小。而聲動(dòng)力治療組1周后和4 周后與相應(yīng)對(duì)照組相比斑塊面積明顯減小，管腔面積明顯增大，狹窄面積百分比明顯減小。 如圖5所示，聲動(dòng)力治療后斑塊中巨噬細(xì)胞、增殖期細(xì)胞和基質(zhì)金屬蛋白酶含量減少，平滑肌細(xì)胞和基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子增加，表明斑塊穩(wěn)定性增加。3,5-氨基酮戊酸介導(dǎo)的聲動(dòng)力治療對(duì)斑塊破裂的影響5-氨基酮戊酸用磷酸鹽緩沖液溶解，溶解后的濃度為100毫克/毫升，給藥濃度均為60毫克/千克體重，根據(jù)超聲的功率分為四組進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，分別為聲動(dòng)力治療1組(0. 75 瓦/平方厘米)，聲動(dòng)力治療2組(1. 00瓦/平方厘米)，聲動(dòng)力治療3組(1. 50瓦/平方厘米)和聲動(dòng)力治療4組(2. 00瓦/平方厘米)。如圖6所示，以5-氨基酮戊酸為超聲敏感劑的聲動(dòng)力治療，隨著治療強(qiáng)度的增加， 易損斑塊破裂數(shù)逐漸減少，說明5-氨基酮戊酸作為超聲敏感劑的聲動(dòng)力治療還具有穩(wěn)定斑塊的作用，能夠降低動(dòng)脈粥樣硬化斑塊破裂和血栓形成的機(jī)會(huì)。通過以上實(shí)驗(yàn)可以證明，本發(fā)明對(duì)已知化合物5-氨基酮戊酸發(fā)掘了新的醫(yī)藥用途，即在制備以聲動(dòng)力法治療動(dòng)脈粥樣硬化疾病所用的超聲敏感劑中的用途。以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明而言僅僅是說明性的，而非限制性的。本專業(yè)技術(shù)人員理解，在本發(fā)明權(quán)利要求所限定的精神和范圍內(nèi)可對(duì)其進(jìn)行許多改變， 修改，甚至等效，但都將落入本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.5-氨基酮戊酸或其代謝產(chǎn)物在制備以聲動(dòng)力法治療動(dòng)脈粥樣硬化所用的超聲敏感劑中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，所述代謝產(chǎn)物是原卟啉IX。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，所述5-氨基酮戊酸是采用磷酸鹽緩沖液或生理鹽水溶解配制成濃度為1 500毫克/毫升的溶液，優(yōu)選的濃度為100毫克/毫升。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，所述原卟啉IX是采用RPMI-1640培養(yǎng)液溶解配制成濃度為1 50微克/毫升的溶液，優(yōu)選的濃度為20微克/毫升。
5.含有治療有效量的5-氨基酮戊酸或其代謝產(chǎn)物的藥物組合物在制備以聲動(dòng)力法治療動(dòng)脈粥樣硬化所用的超聲敏感劑中的應(yīng)用。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其中所述5-氨基酮戊酸或其代謝產(chǎn)物作為活性成分， 在該藥物組合物中的重量含量為0. 1 99. 5%。
7.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的應(yīng)用，其中所述代謝產(chǎn)物是原卟啉IX。
8.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的應(yīng)用，其中，所述藥物組合物還含有一種或多種藥學(xué)上可接受的藥用輔料。
全文摘要
本發(fā)明提供了5-氨基酮戊酸(5-aminolevulinic acid，ALA)或其代謝產(chǎn)物在制藥中的新用途，具體是在制備以聲動(dòng)力法治療動(dòng)脈粥樣硬化所用的超聲敏感劑中的應(yīng)用。
文檔編號(hào)A61K45/00GK102247596SQ201110119359
公開日2011年11月23日 申請(qǐng)日期2011年5月10日 優(yōu)先權(quán)日2011年5月10日
發(fā)明者孫鑫, 曹文武, 田野 申請(qǐng)人:哈爾濱醫(yī)科大學(xué)