專利名稱：5-氨基酮戊酸在制備治療hpv病毒感染的藥物的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及5-氨基酮戊酸的用途，尤其是5-氨基酮戊酸及其藥學(xué)上可接受的鹽 在制備治療HPV病毒感染的藥物中的用途。
背景技術(shù)：
人乳頭瘤病毒(human papillomavirus, HPV)是一組無包膜的小DNA病毒，屬乳頭 瘤病毒科，可感染人的皮膚及黏膜上皮組織，誘發(fā)產(chǎn)生疣狀增生乃至引發(fā)良惡性腫瘤。目前已分離鑒定出118種HPV病毒亞型，根據(jù)感染部位的不同將可HPV分為嗜皮 膚組和嗜黏膜組兩大類。嗜黏膜組又根據(jù)感染后誘發(fā)病變的良惡性不同，分為a.誘發(fā)上 皮組織惡性增生的高危型HPV，包括HPV-16，-18，-45，-52等15種型別，高危型HPV感染與 宮頸癌及癌前病變的發(fā)生密切相關(guān)，此外還與陰道、肛門、陰唇、陰莖及口咽癌及癌前病變 的發(fā)生相關(guān)；b.誘發(fā)上皮組織良性增生的低危型，包括HPV-6，-11，-42，-54等12種型別， 其中HPV-6和-11的感染與90%以上的生殖器疣和宮頸低級(jí)鱗狀上皮增生病變的發(fā)生密切 相關(guān)。1972年德國科學(xué)家Harald zur Hausen首次提出宮頸癌由HPV感染引起，此后許 多流行病學(xué)和分子學(xué)研究均毫無疑問的證實(shí)了 HPV與宮頸癌的病因?qū)W聯(lián)系，也就是說，宮 頸癌及宮頸癌前病變的治愈與復(fù)發(fā)情況與HPV感染的情況密切相關(guān)。Bosch和Manos等通 過收集來自22個(gè)國家的宮頸癌活檢標(biāo)本作PCR檢測，發(fā)現(xiàn)99. 7%的腫瘤中都可以檢測到 HPV DNA，而且各國間無顯著差異。這是迄今為止所報(bào)道人類腫瘤致病因素中的最高檢出百 分?jǐn)?shù)，同時(shí)表明HPV感染與宮頸癌的相關(guān)具有普遍意義。1995年WHO和IARC將HPV確定為 是宮頸癌的病因。Hausen因發(fā)現(xiàn)人乳頭瘤病毒(HPV)導(dǎo)致子宮頸癌，與另外兩位科學(xué)家共 享了 2008年的諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)。通過對HPV感染人群的跟蹤分析，發(fā)現(xiàn)約50% 90%的HPV感染可在感染后的數(shù) 月至2年內(nèi)被免疫系統(tǒng)清除，感染的平均持續(xù)時(shí)間為8 12個(gè)月。如果在間隔一年以上的 時(shí)間連續(xù)兩次檢測出同一高危型的HPV DNA被認(rèn)為是持續(xù)性感染。只有慢性持續(xù)性高危型 HPV才會(huì)最終演變?yōu)閷m頸癌。此外，不同HPV病毒滴度的患者最后轉(zhuǎn)成宮頸癌前病變甚至宮 頸癌的比例也有所不同。HPV病毒載量越高，病灶轉(zhuǎn)化為宮頸癌的可能性也越大。根據(jù)感染組織的病理學(xué)特征，從發(fā)現(xiàn)感染HPV病毒(陽性)發(fā)展到宮頸癌，通常會(huì) 經(jīng)歷宮頸上皮內(nèi)增生1級(jí)(CIN I)、宮頸上皮內(nèi)增生2級(jí)(CIN II)、宮頸上皮內(nèi)增生3級(jí) (CIN III)三個(gè)階段，藍(lán)春燕等人人乳頭狀瘤病毒感染及病毒載量與宮頸病變的相關(guān)性研 究，[J]中華腫瘤防治雜志2007，14(1) :5-8通過第二代雜交捕獲技術(shù)(HC2 HPV)對宮頸 脫落細(xì)胞的HPV-DNA進(jìn)行定量檢測，分析不同程度宮頸病變的HPV感染情況，并根據(jù)HPV病 毒載量將所有檢測對象分為四組，陰性(RLU/C0 < 1. 0)、低載量(1. 0 ( RLU/C0 < 10)、中 載量(10彡RLU/C0 < 100)、高載量(RLU/C0彡100 ；研究得出結(jié)論宮頸高危型HPV病毒載 量是影響宮頸病變嚴(yán)重程度的危險(xiǎn)因素。黃志宏等人人乳頭狀瘤病毒負(fù)荷量與宮頸癌及 宮頸癌前病變的相關(guān)研究[J]中國婦幼保健2006，21 1557-1559則發(fā)現(xiàn)，當(dāng)HPV DNA定量> 100時(shí)，宮頸癌前病變的發(fā)生明顯增加，當(dāng)HPV DNA定量> 500時(shí)，宮頸癌的發(fā)生明顯增 加(P < 0. 01)。對于HPV感染，通常采用物理治療、藥物治療、免疫治療等手段。物理治療包括冷 凍、激光、電灼和外科切除等，這些方法只針對可見的疣體或病變局部進(jìn)行治療，而周邊組 織中通常還潛伏有亞臨床感染的HPV病毒，因此治療后HPV感染的再發(fā)生率高，且術(shù)后易形 成疤痕，常伴有并發(fā)癥。女性外陰、陰道及宮頸HPV感染局部用藥主要包括5%的5-Fu軟
膏、鬼白毒素、三氯醋酸等。5-Fu是限制HPV的DNA和RNA合成的細(xì)胞毒性藥物，局部注射收效顯著，但它可能 造成化學(xué)性陰道炎，長期使用還可導(dǎo)致陰道粘膜的損傷，甚至陰道狹窄。近年來醫(yī)師更多的 采用免疫藥物治療HPV病毒感染，最常用的是干擾素，其他還有白介素12等，此類治療部分 需要注射給藥，治療周期通常較長，最重要的是，其對HPV病毒并無明顯特異性，且任何治 療都不能解決HPV復(fù)發(fā)的情況，最終療效不能讓患者滿意。綜上所述，針對高危型HPV病毒持續(xù)感染，且病毒載量較高的患者，臨床急須一種 可有效降低HPV病毒載量、乃至病毒轉(zhuǎn)陰的治療方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明涉及5-氨基酮戊酸或其藥學(xué)上可接受的鹽或含有他們中任一種的藥物組 合物在制備治療HPV病毒感染的藥物中的用途，其特征是用于治療 高危型HPV病毒持 續(xù)感染，且病毒載量> 10的患者。所述的5-氨基酮戊酸藥學(xué)上可接受的鹽包括鹽酸鹽、硫酸鹽、琥珀酸鹽等，優(yōu)選 鹽酸5-氨基酮戊酸。本發(fā)明所述的5-氨基酮戊酸是常用具有光動(dòng)力治療效果的化合物，進(jìn)入人體后 轉(zhuǎn)化為血卟啉(ProtorphyrinIX，PpIX)并滯留體內(nèi)，經(jīng)特定波長的光照后即產(chǎn)生活性氧如 單線態(tài)氧和其他自由基并殺死致病細(xì)胞(癌細(xì)胞、HPV和HSV感染的細(xì)胞)，而鄰近的正常 組織細(xì)胞不受任何影響。所述的5-氨基酮戊酸或其藥學(xué)上可接受的鹽可以與藥學(xué)上可接受的載體按照本 領(lǐng)域常規(guī)方法制成溶液劑、散劑、凝膠劑、乳劑等。本發(fā)明所述的病毒載量測定采用的是HC2 二代雜交捕獲技術(shù)。本發(fā)明所述的高危型HPV病毒持續(xù)感染，且病毒載量> 10的患者是指采用HC2 二代雜交捕獲技術(shù)，間隔一年或以上的時(shí)間連續(xù)兩次檢測出高危型的HPV DNA，且病毒載量 彡10的患者。本發(fā)明5-氨基酮戊酸或其藥學(xué)上可接受的鹽或含有他們中任一種的藥物組合物 在制備治療HPV病毒感染的藥物中的用途，優(yōu)選治療高危型HPV病毒持續(xù)感染，且病毒載量 彡10的患者。經(jīng)過大量的臨床研究，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)高危型HPV病毒持續(xù)感染，且病毒載量> 10 的患者在治療過程中存在很大的難度，無論是手術(shù)或是藥物，都很難一次性清除，感染時(shí)間 越長，病毒的耐藥性越強(qiáng)，治療越是困難，復(fù)發(fā)率也相當(dāng)高。而且患者也不能耐受多次的手 術(shù)清除，更加加大了治療的難度?，F(xiàn)有技術(shù)中公開了 ALA治療CIN，但是已有的結(jié)果顯示，ALA在治療未限定型的HPV感染的疾病時(shí)存在著很大的不穩(wěn)定和不確定性Hillemanns Peter等人(Gynecologic oncology (2006)，100 (2)，271-5)研究HPV感染的VIN患者經(jīng)過5-氨基酮戊酸的光動(dòng)力治 療后復(fù)發(fā)率高達(dá) 48.1% ；—項(xiàng)雙盲試驗(yàn)顯示(International Journal of Cancer (2003), 103 (6)，829-832)治療CIN雙盲試驗(yàn)則顯示，治療1年后僅有33%痊愈，而25%甚至發(fā)展 到CIN2或CIN3，說明治療對于HPV的清除率不高，且復(fù)發(fā)明顯；Lasers in surgery and medicine, (2002，31 (4) 289-293)中記載5-氨基酮戊酸治療40名CIN2和CIN3患者，治 療第4、8、12個(gè)月的治愈率為51%、46%和31%，可見隨著治療后時(shí)間延長，HPV感染有明 顯復(fù)發(fā)趨勢。雖然也有文獻(xiàn)公開氨基酮戊酸治療HPV感染取得較好效果，比如Ekonjo等人 (Internet Journal of Gynecology and Obstetrics (2006)，5 (2))就研究發(fā)現(xiàn)經(jīng)過 5 個(gè)療 程的治療后，HPV高危感染患者的治愈率達(dá)到16/20，但其研究者并未對患者進(jìn)一步隨訪， 未能了解到患者的復(fù)發(fā)情況和預(yù)后。這種有些矛盾的現(xiàn)有技術(shù)使本領(lǐng)域技術(shù)人員有理由相 信5-氨基酮戊酸類化合物并不是治療任何類型HPV感染都廣泛有效的，很難確定5-氨基 酮戊酸或其藥學(xué)可接受的鹽對于治療哪一種具體的HPV感染更加有效，更加不能確定5-氨 基酮戊酸或其藥學(xué)可接受的鹽一次性治療HPV感染的有效性。因此實(shí)際上給治療本身增加 了盲目性，無形中增加了患者的精神和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。本發(fā)明人在經(jīng)過大量創(chuàng)造性的勞動(dòng)，經(jīng)過具體的臨床實(shí)驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析，發(fā)現(xiàn)，針對至 少持續(xù)一年，且病毒載量> 10的HPV感染，只需經(jīng)過一次上述藥物光動(dòng)力治療，約80%的患 者HPV病毒檢測結(jié)果轉(zhuǎn)為陰性，約95%以上的患者達(dá)到基本治愈的目的。而采用常規(guī)的抗 病毒治療，如干擾素，治愈率明顯低于上述光動(dòng)力治療，且復(fù)發(fā)率較高。本發(fā)明用途5-氨基酮戊酸或其藥學(xué)上可接受的鹽或含有他們中任一種的藥物組 合物治療高危型HPV病毒感染的治療方案是1)將含有5-氨基酮戊酸或其藥學(xué)上可接受的鹽或含有他們中任一種的藥物組合 物的制劑按照本領(lǐng)域技術(shù)人員常規(guī)方法局部用于病灶部位如所述制劑為散劑，使用前配 成濃度為5 50% (重量/體積比g/ml)的溶液或凝膠，優(yōu)選15-30% (重量/體積比g/ ml)的溶液或凝膠其中所述的溶液中的溶劑可以是水或生理鹽水，所述的凝膠基質(zhì)可以是 泊洛沙姆407、卡波姆、殼聚糖衍生物或羥乙基纖維素等；如所述制劑為常規(guī)乳劑、膏劑等 可以直接擦涂在病灶部位。2)敷藥操作應(yīng)盡量在避光環(huán)境中進(jìn)行，給藥后2 6小時(shí)再用激光實(shí)施治療，期間 敷藥處應(yīng)避免強(qiáng)光照射。3)采用波長為500 700nm的光照射病灶部位，治療光斑應(yīng)完全覆蓋病灶，照射能 量密度應(yīng)彡60J/cm2，照射時(shí)間為5 60分鐘。使用5-氨基酮戊酸或其藥學(xué)上可接受的鹽或含有他們中任一種的藥物組合物光 動(dòng)力治療HPV感染，對高危型HPV病毒持續(xù)感染，且病毒載量> 10的患者，實(shí)施治療時(shí)非常 安全，治療過程不出血、無需麻醉，可選擇性破壞病變組織，保留正常宮頸組織結(jié)構(gòu)，不影響 患者生殖功能，可重復(fù)治療，藥物代謝快，無光毒性，無需避光。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1鹽酸-5-氨基酮戊酸治療持續(xù)感染，病毒載量> 10感染的方法患者入選方式患者通過HC2 二代雜交捕獲技術(shù)檢測，至少經(jīng)過一年進(jìn)行第二次檢測，兩次檢測期間患者未經(jīng)鹽酸-5-氨基酮戊酸的光動(dòng)力治療。兩次均為陽性者入選。用藥方法使用500mg/次鹽酸_5_氨基酮戊酸散劑，將藥粉倒入溫敏凝膠(2ml) 內(nèi)，輕輕攪拌使之混合均勻，或溶于無菌水溶液中配制成濃度23%的溶液劑。臨床治療86 例高危型HPV感染患者，所有患者的HPV感染時(shí)間均持續(xù)1年以上，病毒載量大于10。在避光狀態(tài)下將凝膠或溶液均勻涂在患者的陰道宮頸部位，給藥后保持3個(gè)小時(shí) 左右；將光纖放置在陰道宮頸處，設(shè)定輸出功率為lOOOmw，開始照射，照射時(shí)間為20分鐘。1次治療后1個(gè)月隨訪并進(jìn)行HPV檢測。3個(gè)月后再次隨訪并進(jìn)行HPV檢測。實(shí)施例2干擾素治療持續(xù)感染，病毒載量> 10的HPV感染的方法另有30例高危型HPV感染患者采用干擾素治療作為對照，所有患者的入選方式同 上，均為HPV感染時(shí)間均持續(xù)1年以上，病毒載量> 10。治療方案為重組干擾素a _2a栓 劑，6X 104IU/粒，非經(jīng)期陰道給藥，將藥栓置于陰道后穹窿，1粒/次，隔天1次。6次為1 個(gè)療程，連續(xù)使用2個(gè)療程。待治療結(jié)束后1個(gè)月和3個(gè)月分別進(jìn)行隨訪并進(jìn)行HPV檢測。實(shí)施例3鹽酸-5-氨基酮戊酸及干擾素治療持續(xù)感染的HPV的隨訪結(jié)果1)、5_氨基酮戊酸組共86例患者，脫落7例，剩余79例。第一次隨訪，有46例 患者HPV病毒檢測由陽性轉(zhuǎn)為陰性(病毒滴度低于1)，占比58. 2%, 71例患者HPV病毒檢 測數(shù)值下降至10以下，占比89. 87% ；其余8例患者HPV檢測數(shù)值有所降低，但下降不明 顯。第二次隨訪，有67例患者病毒檢測轉(zhuǎn)陰，占比84. 8%，77例患者病毒滴度低于10，占比 97. 5%。一年后隨訪觀察轉(zhuǎn)陰后再次復(fù)發(fā)的患者人數(shù)為零。鹽酸5-氨基酮戊酸光動(dòng)力治療一次后對不同病毒滴度效果比較 2)干擾素對照組共30例患者。第一次隨訪，有12例患者HPV病毒檢測由陽性 轉(zhuǎn)為陰性，占比40%，17例患者HPV病毒檢測數(shù)值下降至10以下，占比56. 7%。第二次隨 訪，有14例患者病毒檢測轉(zhuǎn)陰，占比46. 7%,19例患者病毒滴度低于10，占比63. 3%。一 年后隨訪觀察轉(zhuǎn)陰后再次復(fù)發(fā)的患者有2例，復(fù)發(fā)率達(dá)14%。經(jīng)過2個(gè)療程12次給干擾素治療不同病毒滴度效果比較
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實(shí)施例4鹽酸5-氨基酮戊酸治療低病毒滴度HPV病例入選患者經(jīng)過檢測HPV陽性且病毒滴度< 10入選，不需考察感染時(shí)間。按照上述方式入選的10名患者經(jīng)過鹽酸5-氨基酮戊酸(給藥量和方式同實(shí)施例 1)，經(jīng)過1個(gè)月、3個(gè)月、1年隨訪，結(jié)果顯示1個(gè)月后4人HPV病毒檢測由陽性轉(zhuǎn)為陰性，其 余患者HPV下降幅度不大；第二次隨訪9人轉(zhuǎn)陰，1名患者病毒載量升高；1年后隨訪1人復(fù) 發(fā)。結(jié)果顯示出治療的不確定性。
權(quán)利要求
5-氨基酮戊酸或其藥學(xué)上可接受的鹽或含有他們中任一種的藥物組合物在制備治療HPV病毒感染的藥物的用途，其特征是用于治療高危型HPV病毒持續(xù)感染，且病毒載量≥10的患者。
2.如權(quán)利要求1所述的用途，其特征是用于治療高危型HPV病毒持續(xù)感染，且病毒載量 ≥100的患者。
3.如權(quán)利要求1或2所述的用途，其中所述的5-氨基酮戊酸藥學(xué)上可接受的鹽是鹽酸 鹽、硫酸鹽或琥珀酸鹽。
4.如權(quán)利要求3所述的用途，其所述的5-氨基酮戊酸使用時(shí)濃度為5 50%g/ml。
5.如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于所述的治療是結(jié)合光動(dòng)力方法治療。
6.如權(quán)利要求1所述的用途，其所述HPV病毒感染的臨床癥狀包括尖銳濕疣、宮頸上 皮瘤樣變或慢性宮頸炎。
全文摘要
本發(fā)明涉及5-氨基酮戊酸或其藥學(xué)上可接受的鹽或含有他們中任一種的藥物組合物在制備治療HPV病毒感染的藥物中的用途，其特征是用于治療高危型HPV病毒持續(xù)感染，且病毒載量≥10的患者。實(shí)施治療時(shí)非常安全，治療過程不出血、無需麻醉，可選擇性破壞病變組織，保留正常宮頸組織結(jié)構(gòu)，不影響患者生殖功能，可重復(fù)治療，藥物代謝快，無光毒性，無需避光。
文檔編號(hào)A61P31/20GK101874795SQ20091005015
公開日2010年11月3日 申請日期2009年4月28日 優(yōu)先權(quán)日2009年4月28日
發(fā)明者任曉嵐, 宗良飛, 曹峰, 蘇勇 申請人:上海復(fù)旦張江生物醫(yī)藥股份有限公司