專利名稱：一種治療肺癌的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種治療肺癌的藥物組合物。
背景技術(shù)：
肺癌是全世界范圍內(nèi)最常見的惡性腫瘤之一，病死率高，多數(shù)患者在明確診斷時(shí)即有轉(zhuǎn)移，5年生存率維持在15%左右。常規(guī)化療藥物治療肺癌毒性大，容易導(dǎo)致腫瘤復(fù)發(fā)，尋找低毒性、特異型殺傷肺癌細(xì)胞的藥物和方法具有重要意義。近年研究表明，抗瘧疾藥物青蒿素及其衍生物具有顯著的抗腫瘤作用，其藥理學(xué)作用研究受到廣泛關(guān)注。蒿甲醚為青蒿素的主要衍生物之一，抗瘧疾作用優(yōu)于青蒿素。近年來越來越多的實(shí)驗(yàn)證明青蒿素類藥物有更廣泛的藥理作用，尤其重要的是它不僅可以選擇性抑制和/或殺滅多種腫瘤細(xì)胞，而且不良反應(yīng)極少，甚至不產(chǎn)生耐藥性。青蒿素類藥物的抗腫瘤作用已經(jīng)得到多方面的證實(shí)，其主要的作用機(jī)制有以下幾個(gè)方面1、鐵離子介導(dǎo)的細(xì)胞損傷惡性腫瘤細(xì)胞中Fe含量要比正常細(xì)胞大得多，青蒿素類藥物可以通過鐵離子介導(dǎo)形成內(nèi)過氧化橋，并產(chǎn)生活性氧離子(ROS)和以碳為核心的自由基，后者使細(xì)胞發(fā)生巨大的分子損傷和細(xì)胞死亡；2、細(xì)胞周期阻滯青蒿琥酯可以使Kaposi’ s肉瘤細(xì)胞周期時(shí)間明顯縮短，二氫青蒿素可以使人乳腺癌MCF-7細(xì)胞阻滯在G0+G1期；3、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡青蒿琥酯可以誘導(dǎo)Kaposi’ s肉瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡，并呈現(xiàn)出劑量依賴性，而并不能誘導(dǎo)正常細(xì)胞發(fā)生凋亡。青蒿素可以誘導(dǎo)人紅白血病K562細(xì)胞跨膜電位下降而發(fā)生凋亡；4、抗血管生成作用青蒿素類藥物可以通過抑制VEGF和KDR/flk-Ι的表達(dá)從而阻止腫瘤新生血管的形成；5、青蒿素類藥物可以調(diào)節(jié)腫瘤相關(guān)基因的表達(dá)，從而實(shí)現(xiàn)抗腫瘤的活性[；6、其它，如青蒿琥酯還具有對(duì)抗多藥耐藥的能力；青蒿素可以抑制星形細(xì)胞瘤 T67細(xì)胞中的核因子NF-κ B的合成。不僅如此，蒿甲醚可以引起嗜鉻細(xì)胞瘤(PC12)細(xì)胞的線粒體損傷，線粒體腫脹、嵴斷裂、減少、消失，并抑制線粒體呼吸鏈復(fù)合酶I和IV的活性， 從而導(dǎo)致細(xì)胞死亡。順鉬是治療肺癌中最常用的化療藥物之一，屬于細(xì)胞周期非特異性藥物，主要作用靶點(diǎn)是增殖細(xì)胞的DNA，有類似烷化劑雙功能基團(tuán)的作用，可和細(xì)胞內(nèi)的堿基結(jié)合，使 DNA分子鏈內(nèi)和鏈間交叉鍵聯(lián)，從而使DNA失去功能。不能復(fù)制；高濃度時(shí)也抑制DNA和蛋白質(zhì)的合成。順鉬除了與核DNA相互作用外，線粒體DNA(mtDNA)也是其重要的作用靶點(diǎn)。順鉬可引起肺腺癌A549細(xì)胞凋亡已被證實(shí)，并且試驗(yàn)結(jié)果表明經(jīng)順鉬作用后肺腺癌A549細(xì)胞中細(xì)胞色素氧化酶亞單位I (CoxI)、核糖體12SrRNA基因以及半胱氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)RNA(tRNA、 CyS)、天冬酰胺轉(zhuǎn)運(yùn)RNA(tR-NAAsa)基因表達(dá)顯著上調(diào)，由此推測(cè)線粒體氧化磷酸化功能的增強(qiáng)是癌細(xì)胞對(duì)化療藥物的自然反應(yīng)過程。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種治療肺癌的藥物組合物，所述藥物組合物的毒副作用少，療效好。為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案一種治療肺癌的藥物組合物，包含蒿甲醚和順鉬。作為優(yōu)選，本發(fā)明所述藥物組合物還包含藥學(xué)上可接受的輔料。更優(yōu)選地，蒿甲醚與順鉬的重量比為1 0.01 1 0. 1，其中蒿甲醚與順鉬的重量比為1 0.02 1 0.05時(shí)，治療肺癌的效果最佳。本發(fā)明還提供包含根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物的各種臨床制劑。本領(lǐng)域技術(shù)人員可通過常規(guī)方法直接或間接加入藥學(xué)上可接受的輔料，制備臨床需要的各種劑型。經(jīng)試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)蒿甲醚與順鉬聯(lián)用對(duì)體外培養(yǎng)的小鼠肺癌3LL細(xì)胞株有抑制作用。蒿甲醚與順鉬聯(lián)用或單用的效應(yīng)均呈濃度、時(shí)間依賴關(guān)系，兩藥聯(lián)用的中效濃度明顯小于單用的中效濃度，兩藥高濃度合用時(shí)合用指數(shù)CI < 1(表示協(xié)同)；倒置顯微鏡下可觀察至IJ 3LL細(xì)胞典型的凋亡形態(tài)；流式細(xì)胞術(shù)顯示兩藥聯(lián)用時(shí)3LL細(xì)胞出現(xiàn)明顯的凋亡峰，細(xì)胞周期被阻滯在G0/G1期，S期、G2/M期細(xì)胞數(shù)減少，兩藥聯(lián)用凋亡率高于單用順鉬或蒿甲醚， 且兩藥聯(lián)用的IC5tl值顯著低于單用順鉬或蒿甲醚，說明本發(fā)明所述藥物組合物不僅可減輕化療的毒副反應(yīng)，減少用藥劑量，并能提高療效。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)，蒿甲醚與順鉬聯(lián)用表現(xiàn)出較好的抑瘤作用，均較單用順鉬或蒿甲醚強(qiáng)。


圖1為本發(fā)明所述藥物組合物的量效曲線；圖2為本發(fā)明所述藥物組合物與對(duì)照藥物給藥過程中模型小鼠體重變化曲線；圖3為本發(fā)明所述藥物組合物與對(duì)照藥物給藥過程中模型小鼠腫瘤體積變化曲線。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明公開了一種治療肺癌的藥物組合物，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以借鑒本文內(nèi)容， 適當(dāng)改進(jìn)工藝參數(shù)實(shí)現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動(dòng)對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發(fā)明。本發(fā)明的產(chǎn)品及應(yīng)用已經(jīng)通過較佳實(shí)施例進(jìn)行了描述，相關(guān)人員明顯能在不脫離本發(fā)明內(nèi)容、精神和范圍內(nèi)對(duì)本文所述的方法和應(yīng)用進(jìn)行改動(dòng)或適當(dāng)變更與組合，來實(shí)現(xiàn)和應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)。下面結(jié)合實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明實(shí)施例1 測(cè)定蒿甲醚和順鉬單用與聯(lián)用對(duì)3LL細(xì)胞的抑制作用實(shí)驗(yàn)材料DMEM/F12培養(yǎng)基購自美國Hyclone公司；胎牛血清購自杭州四季青生物工程材料有限公司；噻唑藍(lán)(MTT)購自美國AMRESC0公司。主要儀器二氧化碳培養(yǎng)箱(美國Forma3164型)、酶標(biāo)儀(美國Bio-Rad公司550 型)。細(xì)胞株及細(xì)胞培養(yǎng)小鼠肺癌細(xì)胞株3LL，用含10%胎牛血清、青霉素和鏈霉素 (各100u/ml)的DMEM/F12培養(yǎng)基，在37°C、5% C02孵箱中常規(guī)培養(yǎng)。
藥物蒿甲醚(Artemether，ART)由昆明制藥集團(tuán)股份有限公司提供；順鉬(DDP) 購自山東省德州制藥廠實(shí)驗(yàn)方法四甲基偶氮唑鹽法(MTT法)取對(duì)數(shù)生長期的3LL細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度為2 XlO5Ail，每孔100 μ 1接種于96 孔板，CO2培養(yǎng)箱中孵育24小時(shí)。設(shè)單用ART組、單用DDP組、兩藥聯(lián)用組、對(duì)照組(加生理鹽水)，實(shí)驗(yàn)組各設(shè) 6 個(gè)濃度梯度(ART :500、250、125、62. 5,31. 25、15. 625 μ g/ml，DDP :20、 10、5、2. 5、1.25、0. 625yg/ml)，每個(gè)濃度設(shè)3個(gè)復(fù)孔，每孔加藥100μ 1，兩藥聯(lián)用按1 1 比例各加藥50 μ 1，對(duì)照組加生理鹽水。分別繼續(xù)培養(yǎng)24h、48h、72、96h后，每孔加入5mg/ ml的MTT20 μ 1，培養(yǎng)4小時(shí)，棄上清液，每孔加入150 μ 1 DMSO,置37°C培養(yǎng)箱中15分鐘， 使結(jié)晶充分溶解，在酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀上測(cè)定490nm處各孔的吸光值(OD)，并計(jì)算各組細(xì)胞抑制率(抑制率=1-實(shí)驗(yàn)組OD值/對(duì)照組OD值)。兩藥聯(lián)用時(shí)間先后次系依賴關(guān)系設(shè)同時(shí)給藥組、先給ART24小時(shí)后再給DDP組、先給DDP24小時(shí)后再給ART組，共培養(yǎng)48小時(shí)，490nm測(cè)吸光值。中效原理判定兩藥聯(lián)用效應(yīng)根據(jù)中效方程式fa/fu = (D/Dm)m，兩邊取對(duì)數(shù)得 lgfa/fu = mlgD-mlgDm。設(shè) Y = lgfa/fu，X = lgD，a = _mlgDm，b = m，帶入上述方程式中得Y = bX+a。其中fa為細(xì)胞抑制率=1-實(shí)驗(yàn)組平均OD值/對(duì)照組平均OD值；fu為細(xì)胞生存率=實(shí)驗(yàn)組平均OD值/對(duì)照組平均OD值；D為藥物濃度；Dm為中效濃度即IC5(1。兩藥聯(lián)用時(shí)在各種效應(yīng)時(shí)的合用指數(shù)CI = Dl/DXl+D2/DX2+a (D1D2/DX1DX2)(注D1、D2為合用時(shí)產(chǎn)生X效應(yīng)時(shí)兩藥各自濃度，DX1、DX2為兩藥單獨(dú)使用時(shí)各自所需濃度)當(dāng)α =0為兩種相互排斥性藥物，α = 1為兩種相互非排斥性藥物。CI < 1協(xié)同，CI = 1相加，CI > 1拮抗。實(shí)驗(yàn)結(jié)果兩藥單用及聯(lián)用時(shí)不同濃度的效應(yīng)兩藥單用及聯(lián)用時(shí)隨著藥物濃度增加對(duì)細(xì)胞抑制率也增加，見表1。表1、不同濃度的藥物單用及聯(lián)用對(duì)3LL細(xì)胞的抑制率(48h)
權(quán)利要求
1.一種治療肺癌的藥物組合物，包含蒿甲醚和順鉬。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，還包含藥學(xué)上可接受的輔料。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的藥物組合物，其特征在于，蒿甲醚與順鉬的重量比為 1 0. Ol 1 0. 1。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的藥物組合物，其特征在于，蒿甲醚與順鉬的重量比為 1 0. 02 1 0. 05。
5.包含根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物的臨床制劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，具體公開了一種治療肺癌的藥物組合物，包含蒿甲醚和順鉑。細(xì)胞試驗(yàn)顯示蒿甲醚與順鉑聯(lián)用可協(xié)同抑制小鼠肺癌3LL細(xì)胞株生長，兩藥單用和聯(lián)用的效應(yīng)均呈濃度、時(shí)間依賴關(guān)系，兩藥高濃度合用時(shí)CI＜1；倒置顯微鏡下可觀察到3LL細(xì)胞典型的凋亡形態(tài)；流式細(xì)胞術(shù)顯示兩藥聯(lián)用時(shí)3LL細(xì)胞出現(xiàn)明顯凋亡峰，兩藥聯(lián)用凋亡率高于單用蒿甲醚或順鉑。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，蒿甲醚與順鉑聯(lián)用表現(xiàn)出較好的抑瘤作用，均較單用順鉑或蒿甲醚強(qiáng)。
文檔編號(hào)A61K31/357GK102247404SQ20101018257
公開日2011年11月23日 申請(qǐng)日期2010年5月19日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月19日
發(fā)明者劉一丹, 劉國光, 楊兆祥, 楊旭娟, 陳云建 申請(qǐng)人:昆明制藥集團(tuán)股份有限公司