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一種抗癌活性肽變體及其應(yīng)用的制作方法

文檔序號(hào):11095809閱讀:259來源:國(guó)知局

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域,具體地說,本發(fā)明涉及抗癌活性肽變體。



背景技術(shù):

多肽抗癌藥物是近年來抗癌藥物研發(fā)的熱點(diǎn)?,F(xiàn)有技術(shù)中,專利申請(qǐng)ZL200710035478.8從新疆穴居狼蛛粗毒中分離純化獲得的抗癌活性肽,為24肽。這種多肽能誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡殺滅多種癌細(xì)胞,并能抑制癌細(xì)胞增殖,但對(duì)正常細(xì)胞和動(dòng)物毒性較弱;同時(shí)還可抑制低氧誘導(dǎo)因子HIFα轉(zhuǎn)錄活性,從而抑制腫瘤組織血管再生,有效的抑制實(shí)體瘤生長(zhǎng);其抗癌活性具有高效低毒的特點(diǎn),對(duì)于開發(fā)治療肺癌、肝癌、子宮頸癌等實(shí)體瘤的藥物有著較好的應(yīng)用前景。

現(xiàn)有技術(shù)中,為了提高多肽的活性,針對(duì)多肽序列進(jìn)行特異性的改變,從而尋找活性更高的變體是常規(guī)的做法。為了進(jìn)一步提高該多肽的生物活性,申請(qǐng)人通過大量的實(shí)驗(yàn),針對(duì)該申請(qǐng)獲得的多肽進(jìn)行了氨基酸的改變,從而獲得了比原始多肽本身具有更高抑制活性的變體。

發(fā)明詳述

本發(fā)明涉及的多肽,序列如下:

NB:RKGWFKAMKSIAKFIAKEKLKEHL;

(NB1):RKGWFKAMKSTAKFIAKEKLKEHL;

(NB 2):RKGWFKAMKSTAKFIAKEKLKEHLS;

(NB 3):SRKGWFKAMKSTAKFIAKEKLKEHLSS;

(NB 4):SRKGWFKAMKSTAKFIAKEKEKEHLS;

(NB 5):SRKGWFKAMKSTAKFIAKEKSKEHLSS;

(NB 6):SRKGSFKAMKSTAKFIAKEKSKEHLS;

(NB 7):SRKGFKAMKSTAKFIAKEKSKEHLSS;

(NB 8):SRKGFKAMKSTAKFIAKEKSKEHLS;

(NB 9):RKGWAKAMKSTAKFIAKEKLKEHL;

(NB 10):RKGWAKAMKSFAKFIAKEKLKEHL;

(NB 11):RKGWIKAMKSFAKFIAKEKLKEHL;

(NB 12):RKGWIKAMKSFAKFIAKEKLKEHLS;

(NB 13):RKGWWKAMKSTAKFIAKEKLKEHLS;

(NB 14):RKGWWKAMKSTAKFIAKEKLKEHL;

對(duì)照1:RKGWFKAMKSWAKFIAKEKLKEHL;

對(duì)照2:RKGWSKAMKSIAKFIAKEKLKEHL。

本發(fā)明的多肽合成后,可以做成游離態(tài)形式,也可以做成陽離子鹽,如:TFA鹽(三氟乙酸鹽),HCl鹽(鹽酸鹽),醋酸鹽形式。

本發(fā)明的多肽,可以選擇和一種或多種藥物載體組合,制成多種藥物劑型,用于治療。這些藥物劑型涵蓋:注射溶液、片劑、霜?jiǎng)⒛z囊、軟膏、洗劑、舌含片等劑型局部或全身給藥。劑量?jī)?yōu)選在10-5~10-2mg/kg體重的范圍內(nèi),以0.1%-0.5%的較高濃度全身或局部給藥。對(duì)于具體治療的最佳劑量的確定是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1:本發(fā)明多肽的人工化學(xué)合成

通過常規(guī)的合成方法,合成了本發(fā)明多肽,經(jīng)質(zhì)譜鑒定顯示純度較高,與設(shè)定序列的多肽分子結(jié)構(gòu)相同。

實(shí)施例2:多肽殺滅癌細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

通過MTT分析法測(cè)定了本發(fā)明多肽對(duì)Hela、CNE1和JB6 3種細(xì)胞株的毒性。作用濃度為40微摩爾本發(fā)明多肽。為了進(jìn)一步驗(yàn)證,采用溶血實(shí)驗(yàn)檢測(cè)本發(fā)明多肽對(duì)于正常細(xì)胞的毒性,結(jié)果顯示200微摩爾本發(fā)明多肽只能裂解約15%的紅細(xì)胞,說明本發(fā)明多肽對(duì)于正常細(xì)胞毒性較弱。在整體動(dòng)物水平,我們也檢測(cè)了本發(fā)明多肽的毒性,以200毫克/kg體重皮下注射小鼠沒有出現(xiàn)明顯的毒性反應(yīng)(48小時(shí)內(nèi)),表明本發(fā)明多肽毒性較低,對(duì)于癌細(xì)胞具有較強(qiáng)的選擇性。

采用Annexin V-異硫氰酸熒光素/碘化丙啶雙染法檢測(cè)了本發(fā)明多肽殺滅癌細(xì)胞的機(jī)制,發(fā)現(xiàn)本發(fā)明多肽可誘導(dǎo)Hela細(xì)胞凋亡,未經(jīng)藥物處理的Hela細(xì)胞凋亡較少,說明本發(fā)明多肽通過誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡殺滅癌細(xì)胞。

本發(fā)明多肽對(duì)3中細(xì)胞株的殺滅結(jié)果

實(shí)施例3本發(fā)明多肽抑制裸鼠荷瘤生長(zhǎng)

上述實(shí)驗(yàn)表明本發(fā)明多肽具有較強(qiáng)的抑制癌細(xì)胞作用,但仍需要確定本發(fā)明多肽是否具有在體抗實(shí)體瘤的作用,采用裸鼠荷瘤模型開展研究。實(shí)驗(yàn)結(jié)果示本發(fā)明多肽可明顯抑制實(shí)體瘤生長(zhǎng)。在給藥前(0天),對(duì)照組(生理鹽水)和給藥組的實(shí)體瘤體積大小相似,而在藥物干預(yù)的時(shí)間內(nèi),生理鹽水對(duì)照組的腫瘤體積快速增大,表明其腫瘤持續(xù)生長(zhǎng),而給藥組中NB和NB1-14的腫瘤體積沒有明顯變化,說明腫瘤生長(zhǎng)被抑制。在第10天給藥完成,對(duì)照組(生理鹽水)的腫瘤體積是給藥組的5倍,而給藥為對(duì)照1和對(duì)照2的肽其腫瘤大小與給藥為生理鹽水的對(duì)照組結(jié)果相似,腫瘤大小相當(dāng)。上述結(jié)果表明本發(fā)明多肽可有效的抑制腫瘤生長(zhǎng)。

序列表

<110> 李露青

<120> 一種抗癌活性肽變體變體及其應(yīng)用

<160> 17

<210> 1

<211> 24

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 1

RKGWFKAMKSIAKFIAKEKLKEHL;

<210> 2

<211> 24

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 2

RKGWFKAMKSTAKFIAKEKLKEHL;

<210> 3

<211> 25

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 3

RKGWFKAMKSTAKFIAKEKLKEHLS

<210> 4

<211> 27

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 4

SRKGWFKAMKSTAKFIAKEKLKEHLSS;

<210> 5

<211> 26

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 5

SRKGWFKAMKSTAKFIAKEKEKEHLS;

<210> 6

<211> 27

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 6

SRKGWFKAMKSTAKFIAKEKSKEHLSS;

<210> 7

<211> 26

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 7

SRKGSFKAMKSTAKFIAKEKSKEHLS;

<210> 8

<211> 27

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 8

SRKGFKAMKSTAKFIAKEKSKEHLSS;

<210> 9

<211> 26

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 9

SRKGFKAMKSTAKFIAKEKSKEHLS;

<210> 10

<211> 24

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 10

RKGWAKAMKSTAKFIAKEKLKEHL;

<210> 11

<211> 24

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 11

RKGWAKAMKSFAKFIAKEKLKEHL;

<210> 12

<211> 24

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 12

RKGWIKAMKSFAKFIAKEKLKEHL;

<210> 13

<211> 25

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 13

RKGWIKAMKSFAKFIAKEKLKEHLS;

<210> 14

<211> 25

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 14

RKGWWKAMKSTAKFIAKEKLKEHLS;

<210> 15

<211> 24

<212> PRT

<213> 人工序列

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<210> 16

<211> 24

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 16

RKGWFKAMKSWAKFIAKEKLKEHL;

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<211> 24

<212> PRT

<213> 人工序列

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