專利名稱：復(fù)合菌制劑及其在幼禽畜增重及防治下痢中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及復(fù)合菌制劑及其在幼禽畜增重及防治下痢中 的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
濫用抗生素引起的藥物殘留，使得人類在食用有藥物殘留的食品后，經(jīng)常出現(xiàn)過 敏、致畸、致殘、致癌、中毒等急性或慢性疾病。隨著人們生活水平的提高及對(duì)綠色健康食品 需求的增加，使用抗生素引起的藥物殘留問題越來越受到重視。無藥殘、無污染且能提高經(jīng) 濟(jì)效益的飼用微生態(tài)制劑成為國(guó)內(nèi)外研究的熱點(diǎn)。飼用微生態(tài)制劑是一類專用于添加在動(dòng) 物飼料內(nèi)，以提高畜禽產(chǎn)品的生產(chǎn)性能和經(jīng)濟(jì)效益，同時(shí)又能代替?zhèn)鹘y(tǒng)抗生素添加劑，兼有 抗病、無藥殘、無污染特性的一類制劑，是實(shí)現(xiàn)綠色養(yǎng)殖和生產(chǎn)綠色動(dòng)物產(chǎn)品的有效、可靠 途徑。蠟樣芽孢桿菌(學(xué)名bacillus cereus)，又稱仙人掌桿菌，為芽孢桿菌屬，是一 種地方性，土壤生活的，革蘭氏陽性的桿狀細(xì)菌，(1)蠟樣芽孢桿菌在生長(zhǎng)過程中產(chǎn)生多種 活性物質(zhì)對(duì)致病菌或條件致病菌有明顯的抑制任用；同時(shí)蠟樣芽孢桿菌能迅速消耗消化道 內(nèi)環(huán)境中的游離氧，形成腸道低氧環(huán)境，促進(jìn)有益厭氧菌生長(zhǎng)，并產(chǎn)生乳酸等有機(jī)酸類，降 低腸道PH值，間接抑制其他致病菌的生長(zhǎng)；(2)蠟樣芽孢桿菌能刺激動(dòng)物免疫器官的生長(zhǎng) 發(fā)育，激活淋巴細(xì)胞，提高免疫球蛋白和抗體水平，增強(qiáng)細(xì)胞免疫和體液免疫功能，提高群 體免疫力.(3)蠟樣芽孢桿菌能分泌各種蛋白酶.淀粉酶.脂肪酶.纖維酶等，在消化道 中與內(nèi)源酶共同發(fā)揮作用，提高飼料消化率，同時(shí)蠟樣芽孢桿菌能合成多種維生素，提高動(dòng) 物體內(nèi)干擾素和巨噬細(xì)胞的活性.該菌能調(diào)節(jié)動(dòng)物腸道菌群平衡，改善腸道微生物生態(tài)環(huán) 境，有效維持動(dòng)物機(jī)體健康狀況，提高動(dòng)物對(duì)飼料的消化利用率并能提高機(jī)體免疫力，抗應(yīng) 激能力；凈化牲畜生長(zhǎng)環(huán)境，減少發(fā)病誘因，有效減少有害氣體的排放，極大地降低因有害 氣體引起的呼吸道疾病發(fā)生率；是天然的綠色飼料添加劑產(chǎn)品。糞鏈球菌(E. faecalis)和屎鏈球菌(E. feacium)均屬腸球菌屬(Enterococcus)， 為人和動(dòng)物腸道正常菌群，我國(guó)批準(zhǔn)可作為飼料添加劑。這兩株菌可用于防治幼畜苗禽因 腸道菌群失調(diào)引起的下痢，具有調(diào)節(jié)腸道正常菌群失調(diào)和促進(jìn)生長(zhǎng)的作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是防治幼畜禽下痢，可通過提供復(fù)合菌劑完成，所述復(fù) 合菌劑含有芽孢桿菌屬菌及腸球菌屬菌。在本發(fā)明一個(gè)優(yōu)選的方面，所述芽孢桿菌屬菌選自蠟狀芽孢桿菌種的一個(gè)菌株或 不同菌株的組合物。所述蠟樣芽孢桿菌種可購(gòu)自海南山城醫(yī)藥貿(mào)易有限公司，石家莊諾亞威生物技 術(shù)有限公司，也可從中國(guó)普通微生物菌種保藏管理中心獲得，其保藏號(hào)為1. 1626,1. 126， 1. 1483，1. 984，1. 932，1. 895，1. 447，1. 352，1. 348，1. 260，1. 230，1. 229，1. 2238，1. 2224，1. 2223，1. 196，1. 195，1. 189，1. 173，1. 1846，1. 1689，1. 1688，1. 1687 或 1. 1686。再更優(yōu)選地，所述芽孢桿菌屬菌為保藏于中國(guó)普通微生物菌種保藏管理中心，保 藏號(hào)為1. 1626的蠟樣芽孢桿菌菌種。該保藏號(hào)為1. 1626的菌種記載于歐洲生物化學(xué)雜志(Eur. J. Biochem. ) 1980年 112 卷 273-281 頁。在本發(fā)明一個(gè)優(yōu)選的方面，所述腸球菌屬菌為糞腸球菌種的一個(gè)菌株或不同菌株 的組合物。所述糞腸球菌可購(gòu)自湖北綠天地生物科技有限公司，山東寶來利來生物工程股份 有限公司，山東信宜生物工程有限公司，廣州市微盾生物科技有限公司，北京百林康源生 物技術(shù)有限責(zé)任公司，也可從中國(guó)普通微生物菌種保藏管理中心獲得，其保藏號(hào)為1. 131， 1. 130，1. 125，1. 101，1. 100，1. 595，1. 2135 或 1. 2024。再更優(yōu)選地，所述腸球菌屬菌為保藏于中國(guó)普通微生物菌種保藏管理中心，保藏 號(hào)為1. 100或1. 125的糞鏈球菌菌株的組合物。在本發(fā)明的一個(gè)更優(yōu)選的方面，所述復(fù)合菌制劑中含有保藏于中國(guó)普通微生物菌 種保藏管理中心，保藏號(hào)為1. 1626的蠟樣芽孢桿菌菌種，保藏號(hào)為1. 100或1. 125的糞鏈 球菌。所述糞鏈球菌1. 100株可購(gòu)自位于漢川市經(jīng)濟(jì)開發(fā)區(qū)北橋科技工業(yè)園的湖北綠 天地生物科技有限公司。所述糞鏈球菌1. 125株可購(gòu)自位于山東省泰安市泰山區(qū)的山東寶來利來生物工 程股份有限公司，所述蠟樣芽孢桿菌1. 1626株可購(gòu)自位于海南省?？谑械暮Ｄ仙匠轻t(yī)藥貿(mào)易有限 公司?？蛇x地，該復(fù)合菌制劑還包括賦形劑，所述賦形劑可選自普通的石粉、碳酸鈣粉、 麩皮、糠的組，或其組合物。所述石粉優(yōu)選為碳酸鈣粉。本發(fā)明還提供所述菌株的培養(yǎng)方法腸球菌屬菌以乳酸菌培養(yǎng)基，芽孢桿菌屬菌以普通肉湯，按通常方法進(jìn)行培養(yǎng)。每克培養(yǎng)得到的腸球菌屬菌單一菌培養(yǎng)物中糞鏈球菌菌數(shù)為IOki IO12Cfu,芽孢 桿菌屬菌單一菌培養(yǎng)物中菌數(shù)為3 X IO8 IX IO11Cft所述菌株均采用平板法計(jì)數(shù)。本發(fā)明還提供制備所述復(fù)合菌制劑的方法，包括以下步驟1)將菌株培養(yǎng)物與賦形劑制成干粉，其中菌株培養(yǎng)基與賦形劑的質(zhì)量比為1 30 1，優(yōu)選為 10 1。2)將腸球菌屬菌劑干粉與芽孢桿菌屬菌劑干粉按質(zhì)量比1 0. 5 2的比例混 合制成復(fù)合菌制劑。再優(yōu)選為腸球菌屬菌為糞鏈球菌的保藏號(hào)為1. 125的菌株及糞鏈球菌 的保藏號(hào)為1. 100的菌株的組合物，芽孢桿菌屬菌為保藏號(hào)為1. 1626的蠟樣芽孢桿菌。糞 鏈球菌的保藏號(hào)為1. 125的菌株干粉，糞鏈球菌的保藏號(hào)為1. 100的菌株干粉及保藏號(hào)為 1.1626的蠟樣芽孢桿菌劑干粉按質(zhì)量比1 0.8 1.2 1. 8 2. 2的比例制成復(fù)合菌制 齊IJ，優(yōu)選為1 1 2。本發(fā)明還提供所述復(fù)合菌制劑用于抵御幼禽畜疾病相關(guān)病菌的應(yīng)用，包括雞白痢 沙門氏菌和仔豬黃、白痢大腸桿菌，白痢致病性大腸桿菌。
本發(fā)明還提供所述復(fù)合菌制劑用于防治幼禽畜疾病的應(yīng)用，包括仔雞白痢、仔豬 黃、白痢。本發(fā)明還提供所述復(fù)合菌制劑用于動(dòng)物增重方面的用途，主要用于仔豬、仔雞。本發(fā)明涉及的復(fù)合菌制劑用于抵御幼禽畜疾病相關(guān)病 菌或防治幼禽畜疾病及 動(dòng)物增重方面的用途時(shí)，可以飼料添加劑的形式使用，飼料添加劑的用量為飼料重量的 0. 5% 1%。本發(fā)明涉及的菌株及其組成的復(fù)合菌制劑具有以下的優(yōu)點(diǎn)1)通過在飼料中添加本發(fā)明涉及的復(fù)合菌制劑，可以有效地防治幼禽畜下痢疾 病，提高幼禽畜成活率，節(jié)約幼禽畜疫病治療防控成本，提高養(yǎng)殖效益。2)在禽畜養(yǎng)殖過程中，通過使用本發(fā)明涉及的復(fù)合菌制劑，可以避免使用抗生素 類藥物，可以有效降低出欄成體禽畜及其制品中的抗生素含量，是實(shí)現(xiàn)綠色養(yǎng)殖和生產(chǎn)綠 色動(dòng)物產(chǎn)品的有效、可靠途徑。3)本發(fā)明涉及的復(fù)合菌制劑無毒副作用，有助于避免由于使用抗生素帶來的潛在 副作用風(fēng)險(xiǎn)。4)在禽畜養(yǎng)殖過程中，通過使用本發(fā)明涉及的復(fù)合菌制劑，可以促進(jìn)禽畜增重，節(jié) 約養(yǎng)殖飼料，提高養(yǎng)殖效益。5)本發(fā)明可以有效控制仔豬下痢，比單一使用乳酸菌等制劑效果好且更為穩(wěn)定。
具體實(shí)施例方式以下參照具體的實(shí)施例來說明本發(fā)明。本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠理解，這些實(shí)施例僅 用于說明本發(fā)明，其不以任何方式限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例1、菌劑的制備制備了含有糞鏈球菌1. 100株及糞鏈球菌1. 125、蠟樣芽孢桿菌1. 1626株的復(fù)合 菌制劑.所述糞鏈球菌1. 100株可購(gòu)自位于漢川市經(jīng)濟(jì)開發(fā)區(qū)北橋科技工業(yè)園的湖北綠 天地生物科技有限公司。所述糞鏈球菌1. 125株可購(gòu)自位于山東省泰安市泰山區(qū)的山東寶來利來生物工 程股份有限公司，所述蠟樣芽孢桿菌1. 1626株可購(gòu)自位于海南省海口市的海南山城醫(yī)藥貿(mào)易有限 公司。其制備方法為1，將三種菌株培養(yǎng)基與碳酸鈣粉制成干粉，其中菌株培養(yǎng)基與碳酸鈣粉的質(zhì)量比 為 10 1 ；2，將糞鏈球菌1. 100株干粉，糞鏈球菌1. 125干粉與蠟樣芽孢桿菌1. 1626株干粉 按質(zhì)量比1 1 2的比例混合，制成復(fù)合菌制劑。實(shí)施例2、對(duì)仔豬增重的影響增重方面，根據(jù)哺乳仔豬從20日齡開始補(bǔ)食，45日齡斷乳的情況，我們?cè)谶@一時(shí) 期用含有本發(fā)明涉及的復(fù)合菌制劑的飼料進(jìn)行飼喂試驗(yàn)。本實(shí)施例中，采用了三元雜交豬，二花臉豬，姜曲海豬及新淮豬，均購(gòu)于江蘇省句容市灣山農(nóng)場(chǎng)，其中三元雜交豬是由蘇南本地二花臉母豬與約克夏公豬生出的雜交一代母 豬再與巴克夏公豬雜交所產(chǎn)下的雜交二代。對(duì)以上品種的豬幼仔進(jìn)行了 6次試驗(yàn)，結(jié)果見表2。試驗(yàn)組平均比對(duì)照組多增重 27. 87%，遠(yuǎn)高于國(guó)外用益生菌作為飼料添加劑仔豬增重的報(bào)道(平均在10%左右)。(見 表2)本實(shí)施例中使用的瘤胃粗酶制劑與乙酸鈉可購(gòu)自南京農(nóng)業(yè)大學(xué)生理教研組。需 氧蠟樣芽胞桿菌菌劑，可以購(gòu)自四川農(nóng)業(yè)大學(xué)。表1、6次實(shí)驗(yàn)情況
①括號(hào)內(nèi)數(shù)字為仔豬窩數(shù)，如52(5)即52頭仔豬分屬5窩，下同。②飼料中加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)的瘤胃粗酶和2%的乙酸鈉。③飼料中加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)需氧蠟樣芽胞桿菌菌劑。表2、6次實(shí)驗(yàn)增重情況 實(shí)施例3、防治仔豬下痢在防治仔豬下痢方面，試驗(yàn)表明(見表3)，使用本發(fā)明可以控制仔豬下痢，并且比 單一使用乳酸菌等制劑效果好，更為穩(wěn)定。表3、復(fù)合菌制劑防治仔豬下痢效果 *括號(hào)外數(shù)為仔豬白痢，括號(hào)內(nèi)數(shù)字為仔豬黃痢。實(shí)施例4、防治仔雞下痢和對(duì)仔雞增重的影響仔雞選用紅波羅和星波羅，可購(gòu)自南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院附屬試驗(yàn)?zāi)翀?chǎng)。每次 試驗(yàn)所使用的仔雞數(shù)量及品種如表4所示。每次試驗(yàn)所使用的菌劑如表5所示。所使用的 復(fù)合菌制劑為實(shí)施例1中所制備的復(fù)合菌制劑。1、用復(fù)合菌制劑飼喂1-30日齡仔雞(見表6)，比對(duì)照組提高增重15. 66%，高于 本試驗(yàn)中其他二種制劑，也高于國(guó)外用益生素提高仔雞增重的報(bào)道(平均在10%左右)。2、用復(fù)合菌制劑提高仔雞的成活率，在7次試驗(yàn)中(見表7)的效果較為明顯，平 均達(dá)94. 47%，明顯高于對(duì)照組的平均81. 88%，這可能與復(fù)合菌制劑增強(qiáng)機(jī)體抵抗力有關(guān)。3、多次試驗(yàn)表明(見表7)，復(fù)合菌制劑防治仔雞白痢有明顯效果，用其作為飼料 添加劑可控制仔雞白痢，對(duì)防治仔雞球蟲病亦有明顯效果。由此可見，經(jīng)長(zhǎng)期大量實(shí)驗(yàn)和使用證明，本發(fā)明對(duì)仔雞白痢、仔豬黃、白痢等的防 治有顯著效果，并有增重效果。表4、試驗(yàn)雞分組情況 表5、試驗(yàn)菌劑使用情況 *指菌劑占飼料的質(zhì)量百分比表6、仔雞七次試驗(yàn)增重情況^ um^m.rm'Mmmmf
權(quán)利要求
一種復(fù)合菌制劑，包含芽孢桿菌屬菌及腸球菌屬菌。
2.如權(quán)利要求1所述的復(fù)合菌制劑，其中所述芽孢桿菌屬菌為蠟狀芽孢桿菌種菌的一 個(gè)菌株或不同菌株的組合物。
3.如權(quán)利要求1或2所述的復(fù)合菌制劑，其中所述芽孢桿菌屬菌為保藏地點(diǎn)為中國(guó)普 通微生物菌種保管理中心，保藏號(hào)1. 1626的蠟樣芽孢桿菌。
4.如權(quán)利要求1所述的復(fù)合菌制劑，其中所述腸球菌屬菌為糞腸球菌種菌的一個(gè)菌株 或不同菌株的組合物。
5.如權(quán)利要求1或4所述的復(fù)合菌制劑，其中所述腸球菌屬菌為保藏地點(diǎn)為中國(guó)普通 微生物菌種保管理中心，保藏號(hào)為1. 100和1. 125的兩種糞鏈球菌。
6.如權(quán)利要求1所述的復(fù)合菌制劑，其中所述復(fù)合菌制劑中含有保藏于中國(guó)普通微生 物菌種保藏管理中心，保藏號(hào)為1. 1626的蠟樣芽孢桿菌，及保藏號(hào)為1. 100和1. 125的兩 種糞鏈球菌。
7.如權(quán)利要求1所述的制劑，其中復(fù)合菌制劑使用菌數(shù)為每克10"1 1012cfu的腸球 菌屬菌單一菌培養(yǎng)物及菌數(shù)為每克3X 108 1 X 10ncfu的芽孢桿菌屬菌培養(yǎng)物制備。
8.如權(quán)利要求1所述的制劑，其中還包括賦形劑。
9.如權(quán)利要求8所述的制劑，其中賦形劑可選自石粉，麩皮，糠或其組合物。
10.如權(quán)利要求9所述的制劑，其中石粉優(yōu)選為碳酸鈣粉。
11.制備權(quán)利要求8所述的制劑的方法，其中包括以下步驟1)將腸球菌屬菌與芽孢桿菌屬菌的菌株培養(yǎng)物分別與賦形劑制成干粉。2)將菌株培養(yǎng)物制成的干粉混合制成復(fù)合菌制劑。
12.如權(quán)利要求11的方法，其中菌株培養(yǎng)物與賦形劑的質(zhì)量比為1 30 1。
13.如權(quán)利要求11的方法，其中菌株培養(yǎng)物與賦形劑的質(zhì)量比為10 1。
14.如權(quán)利要求11所述的方法，其中步驟2)中，腸球菌屬菌劑干粉與芽孢桿菌屬菌劑 干粉按質(zhì)量比1 0.5 2的比例混合制成復(fù)合菌制劑。
15.如權(quán)利要求11所述的方法，其中腸球菌屬菌為糞鏈球菌的保藏號(hào)為1.125的菌株 及糞鏈球菌的保藏號(hào)為1. 100的菌株的組合物，芽孢桿菌屬菌為保藏號(hào)為1. 1626的蠟樣芽 孢桿菌，糞鏈球菌的保藏號(hào)為1. 125的菌株干粉，糞鏈球菌的保藏號(hào)為1. 100的菌株干粉及 保藏號(hào)為1. 1626的蠟樣芽孢桿菌劑干粉按質(zhì)量比1 0.8 1.2 1.8 2. 2的比例制 成復(fù)合菌制劑。
16.如權(quán)利要求15所述的方法，其中所述糞鏈球菌的保藏號(hào)為1.125的菌株干粉，糞 鏈球菌的保藏號(hào)為1. 100的菌株干粉及保藏號(hào)為1. 1626的蠟樣芽孢桿菌劑干粉按質(zhì)量比 1:1:2比例制成復(fù)合菌制劑。
17.權(quán)利要求1所述的制劑用于防治幼禽畜疾病的應(yīng)用，其中所述幼禽畜疾病包括仔 雞白痢、仔豬黃痢、仔豬白痢。
18.權(quán)利要求1所述的制劑用于抵御幼禽畜疾病相關(guān)病菌的應(yīng)用，其中所述幼禽畜疾 病相關(guān)病菌包括白痢致病性大腸桿菌。
19.如權(quán)利要求18所述的應(yīng)用，其中所述幼禽畜可選自仔豬，仔雞。
20.權(quán)利要求1所述的制劑用于動(dòng)物增重方面的用途，其中所述的動(dòng)物可選自仔豬，仔雞。
21.如權(quán)利要求17-20任一所述的應(yīng)用，其中所述制劑以飼料添加劑形式使用，其用量 為飼料重量的0.5% 1%。
全文摘要
本發(fā)明涉及復(fù)合菌制劑，及其在幼禽畜增重及防治下痢中的應(yīng)用。通過在飼料中添加本發(fā)明涉及的復(fù)合菌制劑，可以有效地防治幼禽畜下痢疾病，提高幼禽畜成活率，節(jié)約幼禽畜疫病治療防控成本，提高養(yǎng)殖效益?？梢杂行Ы档统鰴诔审w禽畜及其制品中的抗生素含量，是實(shí)現(xiàn)綠色養(yǎng)殖和生產(chǎn)綠色動(dòng)物產(chǎn)品的有效、可靠途徑。
文檔編號(hào)A61P1/12GK101874812SQ201010175469
公開日2010年11月3日 申請(qǐng)日期2010年5月14日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月14日
發(fā)明者方銀兵, 薛恒平 申請(qǐng)人:寧波市特圣生物飼料有限公司