專利名稱：益母草及其制劑的質量控制方法
Ms^m其制劑的質量控帶, 發(fā)明領域
本發(fā)明涉及益母草及其制劑的質量控制方法，特別涉及益母草及其制劑的含量 測定方法。
背景技術：
益母草，別名茺蔚、坤草，是一種草本植物。性微寒，味苦辛，可去瘀生新， 活血調經，利尿消腫，是歷代醫(yī)家用來治療婦科疾病之要藥?，F(xiàn)代醫(yī)學研究證明， 益母草含益母草堿、鹽酸水蘇堿、益母草定、益母草寧等多種生物堿及苯甲酸、氯 化鉀等。據(jù)現(xiàn)代臨床及動物實施證明，益母草浸膏及煎劑對子宮有強而持久的興奮 作用，不但能增強其收縮力，同時能提高其緊張度和收縮率。
關于益母草的質量控制方法，在現(xiàn)有技術中也公開很多，中國藥典2005年版一 部中的益母草及益母草膏標準均采用薄層掃描法測定鹽酸水蘇堿的含量，但該方法 操作煩瑣、檢測靈敏度低、重復性不好，誤差較大；有報道采用高效液相色譜法測 定藥材或制劑中鹽酸水蘇堿的含量，采用了磺酸基鍵合硅膠柱、陽離子交換樹脂柱、 氨基鍵合硅膠柱等色譜柱及紫外檢測的方法法進行測定，這些方法中所使用的柱子 穩(wěn)定性較差，紫外波長選擇末端吸收作為測定波長，噪音大，干擾較嚴重，從而使 整個方法重現(xiàn)性不好。本發(fā)明突破原有文獻公開的質量控制方法，含量測定方法依 據(jù)試驗結果表明其精密度、穩(wěn)定性、重現(xiàn)性良好，能夠更有效地控制益母草及其制 劑的產品質量。

發(fā)明內容
本發(fā)明目的在于提供一種益母草含量測定方法。本發(fā)明另一 目的在于提供一種 益母草制劑含量測定方法。
益母草的含量測定方法如下
益母草的含量測定方法應用高效液相色譜-蒸發(fā)光散射測定法(HPLC-ELSD)。 高效液相色譜-蒸發(fā)光散射測定法包括色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗，對照品溶液
的制備，供試品溶液的制備和鹽酸水蘇堿的含量測定步驟。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八垸基或辛垸基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以
1-10:99-90的乙腈-水或2-12:98-88的甲醇-水為流動相；蒸發(fā)光散射檢測器檢測。對照品溶液的制備取干燥至恒重的鹽酸水蘇堿對照品適量，加流動相制成每 lml分別含0.05mg、 0.15mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備取益母草粉末0.2-lg,置具塞錐形瓶中，加入乙醇50ml， 密塞，稱定重量，加熱回流0.5-3小時，放冷，再稱定重量，加乙醇補足減失的重量， 搖勻，濾過。量取續(xù)濾液20ml，水浴蒸干，殘渣加流動相使溶解，轉移至10ml量 瓶并稀釋至刻度，搖勻，用0.45pm的微孔濾膜濾過，即得。
測定法分別吸取上述兩種濃度的對照品溶液各20pl，供試品溶液5 2(Hd，注 入液相色譜儀，測定，用外標兩點法對數(shù)方程計算，即得。
流動相的流速為每分鐘0.1-lml;蒸發(fā)光散射檢測器檢測的漂移管溫度60-130 。C，空氣流速1.5-3.2L/min。
益母草制劑的含量測定方法如下
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八垸基或辛垸基硅垸鍵合硅膠為填充劑；以 1-10:99-90的乙腈-水或2-12:98-88的甲醇-水為流動相；蒸發(fā)光散射檢測器檢測。
對照品溶液的制備取干燥至恒重的鹽酸水蘇堿對照品適量，精密稱定，加流 動相制成每lml分別含0.05mg、 0.15mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備取益母草制劑內容物，研細，混勻，精密稱取或量取適量， 置100ml燒杯中，加熱水10-50ml使溶解，用稀鹽酸調pH值至1 3，通過已處理 好的強酸性陽離子交換樹脂柱，用水50 400ml洗脫，棄去水液，再用70:30的甲 醇-氨水50 400ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加流動相溶解，并轉移至10ml 量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，用0.45pm的微孔濾膜濾過，即得。
測定法分別精密吸取上述兩種濃度的對照品溶液各2(^1，供試品溶液5 20W，注入液相色譜儀，測定，用外標兩點法對數(shù)方程計算，即得。
流動相的流速為每分鐘0.1-lml;蒸發(fā)光散射檢測器檢測的漂移管溫度60-130
。C，空氣流速1.5-3.2L/min。
強酸性陽離子交換樹脂柱的內徑1 2cm，柱高5 10cm。
制劑的取樣量為益母草顆粒取0.1-2g，益母草片及膠囊取0.05-0.5g，益母草
流浸膏取2-10g，益母草膏取0.2-1.5§，益母草口服液量取0.5-5ml，益母草注射液量
取O.l-lml，其他益母草制劑取樣量按含益母草生藥量0.1-4g而定取樣量。
本發(fā)明中所述的益母草制劑是指益母草作為原料藥或原料藥之一，按照現(xiàn)有的制備方法制成的制劑，包括片劑，膠囊劑，顆粒劑，滴丸劑，口服液，煎膏劑、口 含片、丸劑、散劑、栓劑、噴霧劑、滴劑、貼劑、注射液等臨床或藥學上可接受的 常用劑型。
樹脂預處理方法將樹脂浸泡在水中1 2天，使充分膨脹，裝入層析柱，先用 樹脂柱體積10倍量的2mol/L鹽酸以3ml/min流速進行交換，使其變?yōu)闅湫停儆?水洗至流出液呈中性，接著用樹脂柱體積IO倍量的lmol/L氫氧化鈉溶液進行交換， 使其恢復鈉型，然后再用水洗至流出液呈中性，接著再用樹脂柱體積10倍量的 lmol/L鹽酸進行交換，使其變?yōu)闅湫停詈笥盟粗亮鞒鲆撼手行浴?br> 本發(fā)明與公開的方法進行了對比對比方法1)用高效液相色譜法測定益母草 顆粒中的鹽酸水蘇堿含量，采用氨基柱或磺基柱、紫外檢測器檢測，選用的波長為 紫外末端吸收，基線不穩(wěn)定，干擾嚴重，且氨基柱或磺基柱易水解，使柱效降低， 影響分離效果，見附圖l;對比方法2)用氨基柱、蒸發(fā)光散射檢測器對鹽酸水蘇堿 含量進行測定，但氨基柱易水解，導致實驗過程中基線難以平穩(wěn)，見附圖2。本發(fā) 明的方法選用穩(wěn)定性好的十八烷基硅烷鍵合硅膠反相色譜柱，采用HPLC-ELSD法對 益母草及其制劑中的鹽酸水蘇堿進行含量測定研究，結果基線穩(wěn)定，分離度好，見 附圖3。方法學驗證表明，該法分離效果良好，方法線性、穩(wěn)定性、重復性、加樣 回收率等方法學考察均符合定量測定的要求。


附圖l氨基柱，紫外檢測器測定圖譜
附圖2氨基柱，蒸發(fā)光散射檢測器測定圖譜
附圖3十八烷基硅烷鍵合硅膠柱，蒸發(fā)光散射檢測器測定圖譜
下面實施例用于進一步說明本發(fā)明的技術方案和技術效果。 實施例1 :益母草藥材含量測定
儀器日本島津LC-10Atvp高效液相色譜儀，威瑪龍色譜工作站;美國奧泰ELSD 2000ES蒸發(fā)光散射檢測器；梅特勒-托利多AB265-S電子天平。
試藥鹽酸水蘇堿化學對照品(含量測定用，批號110716-200306，中國藥品 生物制品檢定所)，純度經檢查符合含量測定用化學對照品的技術要求，含量為
799.15%;乙腈(色譜純)，水(自制雙蒸水)，乙醇(分析純)。 樣品益母草(批號080701)。
對照品溶液的制備精密稱取五氧化二磷干燥至恒重的鹽酸水蘇堿對照品
19.85mg，置10ml量瓶中，加流動相使溶解并稀釋至刻度，搖勻(1.985mg/ml);精 密量取0.6ml、 2ml分別置25ml量瓶，加流動相至刻度，搖勻，即得(47.64嗎/ml、 158.8嗎/ml)。
供試品溶液的制備取益母草粉末(過三號篩)約0.5g，精密稱定，置具塞錐 形瓶中，精密加入乙醇50ml，密塞，稱定重量，加熱回流1.5小時，放冷，再稱定 重量，加乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液20ml，水浴蒸干，殘 渣加流動相使溶解，轉移至10ml量瓶并稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45pm) 濾過，即得。
試驗條件色譜柱十八烷基硅垸鍵合硅膠色譜柱Agilent ZORBAX SB-Aq 5nm 4.6x250mm;流動相乙腈-水(5:95)，流速0.3ml/min;漂移管溫度75°C，空氣 流速2.2L/min;柱溫室溫。
分別精密吸取上述兩種濃度的對照品溶液各20pl，供試品溶液l(Hil，注入液相 色譜儀。此條件下鹽酸水蘇堿與其它組分達到基線分離，分離度R〉1.5，理論塔板 數(shù)按鹽酸水蘇堿計算大于10000，鹽酸水蘇堿保留時間約為IO分鐘，見表l。
表1理論塔板數(shù)、分離度、保留時間數(shù)據(jù)
理論塔板數(shù)146461440514170141241489314170
分離度2.422.462.322.252.342.31
保留時間(分)10.2810.2810.2810.2710.2810.28
考察了甲醇一水和乙腈-水等不同的流動相比例及不同的流動相流速，結果流動
相為乙腈-水(1-10:99-90)或甲醇一水(2-12:98-88)，流速為每1分鐘O.lml至lml， 鹽酸水蘇堿均能分離；以流動相為乙腈-水(2-8:98-92)或甲醇一水(4-8:96-92)， 流速為每1分鐘0.2ml至0.8ml，效果更優(yōu)。
線性關系考察得回歸方程為LnA=1.58LnC+13.84， r=0.9992。表明鹽酸水蘇 堿進樣量在0.4004 4.004pg范圍內線性關系良好，可用外標兩點法對數(shù)方程進行測 定和計算。精密度試驗重復進樣5次，鹽酸水蘇堿峰面積的相對標準偏差為0.52%， 表明精密度較好。穩(wěn)定性試驗對照品溶液計算相對標準偏差，平均值為899675， RSD為1.69%，表明對照品溶液在71h內穩(wěn)定性較好；供試品溶液計算相對標準偏
8差，日內差平均值為260766 ，RSD為1.18%，日間差平均值為2590279， RSD為1.22%， 表明供試品溶液在95h內穩(wěn)定性較好。重復性試驗計算鹽酸水蘇堿的含量平均值 為0.978%，相對標準偏差RSD為1.56%，表明方法重復性較好。加樣回收率試驗 平均回收率為103.67%， RSD為1.68%。 實施例2:益母草顆粒含量測定
儀器日本島津LC-10Atvp高效液相色譜儀，威瑪龍色譜工作站；美國奧泰ELSD 2000ES蒸發(fā)光散射檢測器；梅特勒-托利多AB265-S電子天平。
試藥鹽酸水蘇堿化學對照品(含量測定用，批號110716-200306，中國藥品 生物制品檢定所)，純度經檢查符合含量測定用化學對照品的技術要求，含量為 99.07%;甲醇(色譜純)，乙腈(色譜純)，水(自制雙蒸水)，氨水(分析純)，732 型強酸性陽離子交換樹脂(國藥集團化學試劑有限公司)。
樣品益母草顆粒(批號1508001)及缺益母草藥材的陰性對照樣品，廣西靈 峰藥業(yè)有限公司。
對照品溶液的制備精密稱取五氧化二磷干燥至恒重的鹽酸水蘇堿對照品 lO.Olmg，置10ml量瓶中，加流動相使溶解并稀釋至刻度，搖勻(l.OOlmg/ml);精 密量取0.5ml、 1.5ml分別置10ml量瓶，加流動相至刻度，搖勻，即得(50.05pg/ml、 150.15pg/ml)。
供試品溶液的制備取益母草顆粒，混勻，研細，取約0.7g，精密稱定，置100ml 燒杯中，加熱水15ml使溶解，用稀鹽酸調pH值至1 3,通過已處理好的強酸性陽 離子交換樹脂柱(內徑1.5cm，柱高5cm)，用水200ml洗脫，棄去水液，再用甲醇 -氨水(70:30) 100ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加流動相溶解，并轉移至10ml 量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45pm)濾過，即得。
陰性樣品溶液的制備陰性樣品溶液是按處方比例稱取除益母草外其余輔料， 按制法制成益母草陰性樣品，再取此陰性樣品按上述"供試品溶液的制備"方法制 備不含益母草的陰性樣品溶液。
試驗條件色譜柱十八烷基硅垸鍵合硅膠色譜柱Agilent ZORBAX SB-Aq 5pm4.6x250mm色譜柱；流動相乙腈-水(5:95)，流速0.3ml/min;漂移管溫度 75°C，空氣流速2.2L/min;柱溫室溫。
分別精密吸取上述兩種濃度的對照品溶液各2(Hd，供試品溶液及不含益母草的陰性樣品溶液各20^1，注入液相色譜儀。此條件下鹽酸水蘇堿與其它組分達到基線 分離，分離度RH.5，理論塔板數(shù)按鹽酸水蘇堿計算大于10000，鹽酸水蘇堿保留時 間約為10分鐘，見表2。陰性樣品溶液在色譜在相應位置無吸收峰，可見陰性無干 擾。
表2理論塔板數(shù)、分離度、保留時間數(shù)據(jù)
理論塔板數(shù)130701328013457134951371513941
分離度1.971.971.991.951.941.95
保留時間(分)10.2010.2010.3510.2010.2010.20
考察了甲醇一水和乙腈-水等不同的流動相比例及不同的流動相流速，結果流動
相為乙腈-水(l-10:99-卯)或甲醇一水(2-12:98-88)，流速為每1分鐘O.lml至lml， 鹽酸水蘇堿均能分離；以流動相為乙腈-水(2-8:98-92)或甲醇一水(4-8:96-92)， 流速為每1分鐘0.2ml至0.8ml，效果更優(yōu)。
對照品純度檢查含量為99.07%，符合含量測定要求，計算時按100%計算。 線性關系考察回歸方程為LnA=1.58LnC+13.84， r=0.9992。表明鹽酸水蘇堿進樣 量在0.4004 4.004昭范圍內線性關系良好。精密度試驗平均值為3245634， RSD 為0.52%，表明精密度較好。穩(wěn)定性試驗表明供試品溶液在72h內穩(wěn)定性較好。 重復性試驗平均值為19.58 mg/袋，RSD為0.97。/。，表明方法重復性較好。加樣回 收率試驗平均回收率為99.82%， RSD為1.00。/c)，表明方法回收率較好。
實施例3:益母草制劑含量測定
按技術方案中益母草制劑的含量測定項下依法測定各制劑樣品，以外標兩點法 對數(shù)方程計算樣品中鹽酸水蘇堿的含量，結果見表3。
表3樣品測定結果
第嚌賺含量平均RSD
益母草顆粒19.2mg/袋19.6 mg/袋19.4 mg/袋1.46%
益母草片6.35mg/片6.42mg/片6.38 mg/片0.78%
益母草膠囊2.13mg/粒2.19mg/粒2.16 mg/粒1.97%
益母草流浸膏0.247%0.251%0.249%1.14%
益母草膏4.15mg/g4.25mg/g4.2mg/g1.69%
益母草滴丸1.05 mg/粒1.09 mg/粒1.07 mg/粒2.65%
益母草口服液0.42mg/ml0.43mg/ml0.42mg/ml1.67%
益母草注射液6.8mg/支6.6mg/支6.7 mg/支2.12%
說明本發(fā)明的方法適合于各種益母草制劑的含量測定。具體實施例如下
實施例1益母草藥材含量測定方法
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水 (4:96)為流動相；流速為每分鐘0.4ml;蒸發(fā)光散射檢測器檢測(漂移管溫度80 °C，空氣流速2.4L/min)。
對照品溶液的制備取五氧化二磷干燥至恒重的鹽酸水蘇堿對照品適量，加流 動相制成每lml分別含0.05mg、 0.2mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備取益母草粉末0.2§，置具塞錐形瓶中，加入乙醇50ml，密 塞，稱定重量，加熱回流0.5小時，放冷，再稱定重量，加乙醇補足減失的重量， 搖勻，濾過。量取續(xù)濾液20ml，水浴蒸干，殘渣加流動相使溶解，轉移至10ml量 瓶并稀釋至刻度，搖勻，用0.45pm的微孔濾膜濾過，即得。
測定法分別吸取上述兩種濃度的對照品溶液各20ti1，供試品溶液5 20pl，注 入液相色譜儀，測定，用外標兩點法對數(shù)方程計算，即得。
實施例2益母草顆粒含量測定方法
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水 (6:94)為流動相；流速為每分鐘0.5ml;蒸發(fā)光散射檢測器檢測(漂移管溫度90°C， 空氣流速2.8L/min)。
對照品溶液的制備取五氧化二磷干燥至恒重的鹽酸水蘇堿對照品適量，精密 稱定，加流動相制成每lml分別含0.05mg、 0.15mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備取益母草顆粒，研勻，取0.8g，精密稱定，置100ml燒杯 中，加熱水20ml使溶解，用稀鹽酸調pH值至1 3，通過已處理好的強酸性陽離子 交換樹脂柱(內徑lcm，柱高5cm)，用水200ml洗脫，棄去水液，再用甲醇-氨水 (70:30) 200ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加流動相溶解，并轉移至10ml量 瓶中，加流動相至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45pm)濾過，即得。
測定法分別精密吸取上述兩種濃度的對照品溶液各2(HU，供試品溶液5 20nl，注入液相色譜儀，測定，用外標兩點法對數(shù)方程計算，即得。實施例3益母草片含量測定方法
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以辛烷基硅垸鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水(8: 92)為流動相；流速為每分鐘0.1ml;蒸發(fā)光散射檢測器檢測(漂移管溫度70°C， 空氣流速1.8L/min。
對照品溶液的制備取五氧化二磷干燥至恒重的鹽酸水蘇堿對照品適量，精密 稱定，加流動相制成每lml分別含0.1mg、 0.2mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備取益母草片，除去包衣，研細，混勻，取0.2g，精密稱定， 置100ml燒杯中，加熱水10ml使溶解，用稀鹽酸調pH值至1 3，通過已處理好的 強酸性陽離子交換樹脂柱(內徑lcm，柱高5cm)，用水100ml洗脫，棄去水液，再 用甲醇-氨水(70:30) 50ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加流動相溶解，并轉移 至10ml量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45pm)濾過，即得。
測定法分別精密吸取上述兩種濃度的對照品溶液各20^1，供試品溶液5 20pl，注入液相色譜儀，測定，用外標兩點法對數(shù)方程計算，即得。 實施例4益母草膠囊含量測定方法
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八垸基硅垸鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水 (2:98)為流動相；流速為每分鐘0.2ml;蒸發(fā)光散射檢測器檢測(漂移管溫度95 °C，空氣流速1.9L/min)。
對照品溶液的制備取鹽酸水蘇堿對照品適量，精密稱定，加流動相制成每lml 分別含0.03mg、 0.15mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備取益母草膠囊內容物，研細，混勻，取0.2g，精密稱定， 置100ml燒杯中，加熱水10ml使溶解，用稀鹽酸調pH值至1 3，通過已處理好的 強酸性陽離子交換樹脂柱(內徑lcm，柱高5cm)，用水100ml洗脫，棄去水液，再 用甲醇-氨水(70:30) 80ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加流動相溶解，并轉移 至10ml量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45pm)濾過，即得。
測定法分別精密吸取上述兩種濃度的對照品溶液各20^1，供試品溶液5 20^1，注入液相色譜儀，測定，用外標兩點法對數(shù)方程計算，即得。
實施例5益母草流浸膏含量測定方法
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八垸基硅垸鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水(7:93)為流動相；流速為每分鐘0.2ml;蒸發(fā)光散射檢測器檢測(漂移管溫度90 °C，空氣流速2.8L/min)。
對照品溶液的制備取五氧化二磷干燥至恒重的鹽酸水蘇堿對照品適量，精密 稱定，加流動相制成每lml分別含0.08mg、 0.16mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備取益母草流浸膏，混勻，取5g，精密稱定，置100ml燒杯 中，加熱水50ml使溶解，用稀鹽酸調pH值至1 3,通過已處理好的強酸性陽離子 交換樹脂柱(內徑2cm，柱高10cm)，用水400ml洗脫，棄去水液，再用甲醇-氨水 (70:30) 400ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加流動相溶解，并轉移至10ml量 瓶中，加流動相至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45pm)濾過，即得。
測定法分別精密吸取上述兩種濃度的對照品溶液各20W，供試品溶液5 20W，注入液相色譜儀，測定，用外標兩點法對數(shù)方程計算，即得。
實施例6益母草膏含量測定方法
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以辛烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水 (IO:卯)為流動相；流速為每分鐘0.2ml;蒸發(fā)光散射檢測器檢測(漂移管溫度 ll(TC，空氣流速3.0L/min)。
對照品溶液的制備取五氧化二磷干燥至恒重的鹽酸水蘇堿對照品適量，精密 稱定，加流動相制成每lml分別含0.03mg、 0.18mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備取益母草膏，混勻，取1.5g，精密稱定，置100ml燒杯中， 加熱水30ml使溶解，用稀鹽酸調pH值至1 3，通過已處理好的強酸性陽離子交換 樹脂柱(內徑1.5cm,柱高6cm)，用水150ml洗脫，棄去水液，再用甲醇-氨水(70:30) 100ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加流動相溶解，并轉移至10ml量瓶中，加流 動相至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45pm)濾過，即得。
測定法分別精密吸取上述兩種濃度的對照品溶液各20^1，供試品溶液5 2(^1，注入液相色譜儀，測定，用外標兩點法對數(shù)方程計算，即得。
實施例7益母草滴丸含量測定方法
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以辛烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水
(4:96)為流動相；流速為每分鐘0.8ml;蒸發(fā)光散射檢測器檢測(漂移管溫度110°C,空氣流速2.9L/min)。
對照品溶液的制備取五氧化二磷干燥至恒重的鹽酸水蘇堿對照品適量，精密 稱定，加流動相制成每lml分別含0.04mg、 0.08mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備取益母草滴丸內容物，混勻，取0.5g，精密稱定，置100ml 燒杯中，加熱水20ml使溶解，用稀鹽酸調pH值至1 3，通過已處理好的強酸性陽 離子交換樹脂柱(內徑lcm，柱高5cm)，用水100ml洗脫，棄去水液，再用甲醇-氨水(70:30) 150ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加流動相溶解，并轉移至10ml 量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45pm)濾過，即得。
測定法分別精密吸取上述兩種濃度的對照品溶液各2(^1，供試品溶液5 20pl，注入液相色譜儀，測定，用外標兩點法對數(shù)方程計算，即得。
實施例8益母草口服液含量測定方法
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅垸鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水 (6:94)為流動相；流速為每分鐘0.3ml;蒸發(fā)光散射檢測器檢測(漂移管溫度95 °C，空氣流速2.6L/min)。
對照品溶液的制備取105'C干燥至恒重的鹽酸水蘇堿對照品適量，精密稱定， 加流動相制成每lml分別含0.7mg、 0.14mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備取益母草口服液，混勻，精密量取2ml，置100ml燒杯中， 加熱水15ml稀釋，用稀鹽酸調pH值至1 3，通過已處理好的強酸性陽離子交換樹 脂柱(內徑lcm，柱高5cm)，用水50ml洗脫，棄去水液，再用甲醇-氨水(70:30) 50 200ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加流動相溶解，并轉移至10ml量瓶中， 加流動相至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45pm)濾過，即得。
測定法分別精密吸取上述兩種濃度的對照品溶液各2(^1，供試品溶液5 20pl，注入液相色譜儀，測定，用外標兩點法對數(shù)方程計算，即得。
實施例9益母草注射液含量測定方法
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以辛烷基硅垸鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水 (3:97)為流動相；流速為每分鐘0.8ml;蒸發(fā)光散射檢測器檢測(漂移管溫度120 °C，空氣流速3L/min)。對照品溶液的制備取105'C干燥至恒重的鹽酸水蘇堿對照品適量，精密稱定， 加流動相制成每lml分別含0.05mg、 O.lmg的溶液，即得。
供試品溶液的制備取益母草注射液，混勻，精密量取0.5ml，置100ml燒杯中， 加水10ml稀釋，用稀鹽酸調pH值至1 3，通過已處理好的強酸性陽離子交換樹脂 柱(內徑lcm，柱高5cm)，用水50ml洗脫，棄去水液，再用甲醇-氨水(70:30) 50ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加流動相溶解，并轉移至10ml量瓶中，加流 動相至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45pm)濾過，即得。
測定法分別精密吸取上述兩種濃度的對照品溶液各20W，供試品溶液5 20^1，注入液相色譜儀，測定，用外標兩點法對數(shù)方程計算，即得。
實施例10益母草藥材含量測定方法
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水 (1:99)為流動相；流速為每分鐘lml;蒸發(fā)光散射檢測器檢測(漂移管溫度130
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對照品溶液的制備取五氧化二磷干燥至恒重的鹽酸水蘇堿對照品適量，加流
動相制成每lml分別含0.05mg、 0.2mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備取益母草粉末lg，置具塞錐形瓶中，加入乙醇50ml，密塞， 稱定重量，加熱回流3小時，放冷，再稱定重量，加乙醇補足減失的重量，搖勻， 濾過。量取續(xù)濾液20ml，水浴蒸干，殘渣加流動相使溶解，轉移至10ml量瓶并稀 釋至刻度，搖勻，用0.45pm的微孔濾膜濾過，即得。
測定法分別吸取上述兩種濃度的對照品溶液各20pl，供試品溶液5 20til，注 入液相色譜儀，測定，用外標兩點法對數(shù)方程計算，即得。
權利要求
1. 一種益母草及含益母草制劑的含量測定方法，包括測定鹽酸水蘇堿的步驟，其特征在于，測定鹽酸水蘇堿的方法采用的是高效液相色譜-蒸發(fā)光散射測定法。
2. 如權利要求1的含量測定方法，其特征在于，所述的高效液相色譜-蒸發(fā)光散射 測定法包括色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗，對照品溶液的制備，供試品溶液的制備 和鹽酸水蘇堿的含量測定步驟。
3. 如權利要求1或2的含量測定方法，其特征在于，所述的益母草制劑是以益母草 作為原料藥或原料藥之一，按照現(xiàn)有的制備方法制成的制劑，包括片劑，膠囊劑， 顆粒劑，滴丸劑，口服液，煎膏劑、口含片、丸劑、散劑、栓劑、噴霧劑、滴劑、 貼劑、注射液、臨床或藥學上接受的劑型。
4. 如權利要求3的含量測定方法，其特征在于，所述的色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 是用十八烷基硅烷鍵合硅膠或辛烷基硅垸鍵合硅膠為填充劑；流動相為 1-10:99-90的乙腈-水或2-12:98-88的甲醇一水；蒸發(fā)光散射檢測器檢測。
5. 如權利要求3的含量測定方法，其特征在于，流動相的流速為每分鐘O.l-lml; 蒸發(fā)光散射檢測器檢測的漂移管溫度60-13(TC，空氣流速1.5-3.2L/min。
6. 如權利要求3的含量測定方法，其特征在于，所述的對照品溶液的制備方法是， 取干燥至恒重的鹽酸水蘇堿對照品加流動相制成進樣量在線性范圍0.4004 4.004嗎內的兩種濃度的對照品溶液。
7. 如權利要求3的含量測定方法，其特征在于，所述的供試品溶液的制備方法為取益母草粉末0.2-lg，置具塞錐形瓶中，加入乙醇50ml，密塞，稱定重量，加 熱回流0.5-3小時，放冷，再稱定重量，加乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過；量取 續(xù)濾液20ml，水浴蒸干，殘渣加流動相使溶解，轉移至10ml量瓶并稀釋至刻度， 搖勻，用0.45nm的微孔濾膜濾過，即得。
8. 如權利要求3的含量測定方法，其特征在于，所述的供試品溶液的制備方法包 括以下步驟取益母草制劑內容物，研細，混勻，精密稱取或量取含生藥量0.1 4g的樣品， 置100ml燒杯中，加熱水10-50ml使溶解，用稀鹽酸調pH值至1 3，通過已處理 好的強酸性陽離子交換樹脂柱，用水50 400ml洗脫，棄去水液，再用70:30的甲醇-氨水50 400ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加流動相溶解，并轉移至10ml 量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，用0.45pm微孔濾膜濾過，即得。
9. 如權利要求8的含量測定方法，其特征在于，所述的強酸性陽離子交換樹脂柱的 內徑為1 2cm，柱高為5 10cm。
10. 如權利要求3的含量測定方法，其特征在于，含量測定的步驟包括如下 益母草的含量測定方法色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基或辛垸基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以 1-10:99-90的乙腈-水或2-12:98-88的甲醇-水為流動相；流速為每分鐘O.l-lml;蒸發(fā) 光散射檢測器檢測，漂移管溫度60-130'C，空氣流速1.5-3.2L/min;對照品溶液的制備取干燥至恒重的鹽酸水蘇堿對照品適量，加流動相制成每 lml分別含0.05mg、 0.15mg的溶液，即得；供試品溶液的制備取益母草粉末0.2-lg，置具塞錐形瓶中，加入乙醇50ml， 密塞，稱定重量，加熱回流0.5-3小時，放冷，再稱定重量，加乙醇補足減失的重量， 搖勻，濾過；量取續(xù)濾液20ml，水浴蒸干，殘渣加流動相使溶解，轉移至10ml量 瓶并稀釋至刻度，搖勻，用0.45pm的微孔濾膜濾過，即得；測定法分別吸取上述兩種濃度的對照品溶液各20pl，供試品溶液5 20pl，注入液相色譜儀，測定，用外標兩點法對數(shù)方程計算，即得； 益母草制劑的含量測定方法色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基或辛烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑以 l-10:99-卯的乙腈-水或2-12:98-88的甲醇-水為流動相；流速為每分鐘O.l-lml;蒸發(fā) 光散射檢測器檢測，漂移管溫度60-130'C，空氣流速1.5-3.2L/min;對照品溶液的制備取干燥至恒重的鹽酸水蘇堿對照品適量，精密稱定，加流 動相制成每lml分別含0.05mg、 0.15mg的溶液，即得；供試品溶液的制備取益母草制劑內容物，研細，混勻，精密稱取或量取適量， 置100ml燒杯中，加熱水10-50ml使溶解，用稀鹽酸調pH值至1 3，通過已處理 好內徑1 2cm，柱高5 10cm的強酸性陽離子交換樹脂柱，用水50 400ml洗脫， 棄去水液，再用70:30的甲醇-氨水50 400ml洗脫，收集洗脫液，蒸千，殘渣加流 動相溶解，并轉移至10ml量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，用0.45^n微孔濾膜濾 過，即得；測定法分別精密吸取上述兩種濃度的對照品溶液各2(Hd，供試品溶液5 20^1，注入液相色譜儀，測定，用外標兩點法對數(shù)方程計算，即得。
全文摘要
本發(fā)明公開一種益母草及其制劑的質量控制方法，是采用高效液相色譜-蒸發(fā)光散射測定法，此方法精密度、穩(wěn)定性、重現(xiàn)性良好，能夠有效地控制益母草及其制劑的產品質量。
文檔編號A61K36/533GK101474249SQ20091011382
公開日2009年7月8日 申請日期2009年1月19日 優(yōu)先權日2009年1月19日
發(fā)明者梁月釗, 莫少紅, 陳曉軍, 園 黃 申請人:廣西匯科藥物研究有限責任公司