專利名稱：：玫瑰多酚制備方法及其在婦產(chǎn)科應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及婦女用保健品和婦產(chǎn)科藥品的開(kāi)發(fā)。
背景技術(shù)：
：玫瑰花(RosarugosaTh皿b.)原產(chǎn)我國(guó)，是一種薔薇科薔薇屬的叢生落葉灌木。玫瑰花集食用、藥用、觀賞于一身，維吾爾醫(yī)認(rèn)為玫瑰花甘溫微苦，氣香無(wú)毒，為一級(jí)寒性，二級(jí)干溫性，具有收斂干固之功，其藥效為理氣寬胸，清熱強(qiáng)心，消腫潤(rùn)便止血、行氣解郁潤(rùn)膚、斂膚、健脾和胃止痛，鎮(zhèn)靜安神。玫瑰花在維吾爾醫(yī)的臨床上可以作為單方或者復(fù)方應(yīng)用，主治胃痛，消化不良，肺結(jié)核咳血，外傷腫痛，婦科，腸炎下痢，風(fēng)濕痹痛，肝郁頭痛等。(中國(guó)民族醫(yī)藥雜志1999.7)我國(guó)是玫瑰花種植大國(guó)，具有豐富的玫瑰花資源，但我國(guó)玫瑰以粗加工和初級(jí)加工產(chǎn)品為主，加工的附加值很低，玫瑰花糖膏就是一例，它自古以來(lái)被維吾爾族民間用于婦女生理調(diào)節(jié)保健和治療婦科疾病，使用該產(chǎn)品后，對(duì)脾胃不和、心煩健忘、神志不安、陰虛體弱、月經(jīng)不調(diào)患者進(jìn)行臨床跟蹤研究，結(jié)果證明玫瑰花糖膏對(duì)胃不和患者總有效率可達(dá)98.7%;心煩健忘、神志不安患者總有效率達(dá)到97.3%;陰虛體弱、月經(jīng)不調(diào)患者達(dá)到98.1%;肝郁津滯患者總有效率達(dá)到78.52%。由于它確切的療效，深受廣大群眾的喜愛(ài)和信賴。目前，玫瑰花糖膏已收載在《中華人民共和國(guó)藥品標(biāo)準(zhǔn)——維吾爾藥分冊(cè)》中。玫瑰花糖膏療效好，但工藝傳統(tǒng)、粗陋，作用物質(zhì)和效應(yīng)強(qiáng)度不清楚。目前，各級(jí)政府在加大開(kāi)發(fā)綠色產(chǎn)品的力度，在整個(gè)世界呼吁保護(hù)環(huán)境、崇尚回歸自然、篤信天然藥品食品的大趨勢(shì)下，用人們普遍喜食的鮮花為原料，以"高療效，低成本，純天然，無(wú)公害"的優(yōu)勢(shì)，制成玫瑰花功能因子保健品和藥品，用于食品、保健品業(yè)和醫(yī)藥上，提高玫瑰花的附加值，意義深遠(yuǎn)。所以，本專利充分利用玫瑰花營(yíng)養(yǎng)特性和藥用特性，利用高新分離技術(shù)提取分離玫瑰花中含有的對(duì)婦女有益的功能成分，如酚酸、黃酮，應(yīng)用在婦女保健和婦產(chǎn)科藥品。隨著人們生活節(jié)奏的加快和對(duì)美好生活的向往，婦產(chǎn)科鎮(zhèn)痛和婦女產(chǎn)后的快速消炎、產(chǎn)后性器官迅速恢復(fù)，如子宮收縮增強(qiáng)收縮頻率，縮短收縮時(shí)間已受到大眾的關(guān)注。婦女產(chǎn)褥期胎盤(pán)娩出后的子宮需要恢復(fù)到未孕狀態(tài)，這個(gè)過(guò)程叫子宮復(fù)舊(它包括宮體肌纖維縮復(fù)和子宮內(nèi)膜再生)。產(chǎn)褥期婦女如發(fā)現(xiàn)子宮收縮乏力，要肌注子宮收縮劑(麥角新堿或催產(chǎn)素)或使用產(chǎn)復(fù)欣和產(chǎn)后康等中藥口服藥物。產(chǎn)后調(diào)理的中藥一般由復(fù)方組成，如菟絲子、枸杞子、北沙參、當(dāng)歸、白芍、阿膠、地骨皮、益母草、蒲黃和荊芥穗等，本發(fā)明所提供的玫瑰多酚功能因子組分是一個(gè)經(jīng)單方藥材提取純化、含量達(dá)到62%以上的婦科用保健品/藥品，經(jīng)藥理實(shí)驗(yàn)表明，明顯對(duì)子宮平滑肌收縮頻率增加，收縮張力增加，具有激動(dòng)大鼠離體子宮平滑肌自發(fā)收縮活動(dòng)的藥效作用。另處，對(duì)醋酸所致的小鼠扭體反應(yīng)有明顯的抑制作用，對(duì)二甲苯引發(fā)的小鼠外耳廓炎性腫脹有明顯的抑制作用，可以用于產(chǎn)褥期婦女子宮復(fù)舊和消炎鎮(zhèn)痛。婦女的更年期綜合癥由于肝郁血虛、虛火內(nèi)擾神明引起的心煩、健忘、心悸氣短、神志不安、血虛體弱等已經(jīng)成為一個(gè)社會(huì)問(wèn)題，困擾著中老年婦女及其家人；婦女月經(jīng)期間均有不同成度的不適反應(yīng)，有一些人甚至需要藥物治療；婦女經(jīng)前緊張癥急需舒肝解郁，寧心安神，活血化瘀、溫經(jīng)止痛、和血調(diào)經(jīng)的藥物調(diào)理。藥理實(shí)驗(yàn)證實(shí)玫瑰多酚功能因子組分對(duì)雌性大鼠陰虛癥狀的改善和行血縮短凝血時(shí)間的作用可以應(yīng)用于婦女經(jīng)期和經(jīng)前這些癥狀的緩解與消除。從最近10年國(guó)際植物化學(xué)發(fā)展趨勢(shì)看，脫離生物活性的純植物化學(xué)成分研究已經(jīng)日趨萎縮，圍繞重大疾病尋找生物活性成分和活性部位是今后研究的最主要趨勢(shì)，玫瑰花的研究正是基于這一思路開(kāi)展的。前期研究過(guò)玫瑰花有效部位(黃酮部分)對(duì)改善睡眠的保健品的研究(玫瑰花有效部位及其制備方法和用途，專利公開(kāi)號(hào)CN101002841A)。本發(fā)明深入研究用于婦產(chǎn)科的玫瑰多酚成分的制備方法，通過(guò)體內(nèi)外藥理學(xué)試驗(yàn)證明藥效作用和作用強(qiáng)度，形成本研究成果。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明目的在于提供一種玫瑰多酚制備方法及其在婦產(chǎn)科應(yīng)用，該方法是采用乙醇溫浸提取，經(jīng)大孔吸附樹(shù)脂分離方法，等度洗脫和梯度洗脫柱層析法獲得提取物，該提取物含總多酚以沒(méi)食子酸(:711605計(jì)為60.2%-68.3%，收率為13%。通過(guò)提取、分離與純化得到化合物十幾個(gè)，并對(duì)這十幾個(gè)化合物進(jìn)行了結(jié)構(gòu)測(cè)定，已鑒定出結(jié)構(gòu)的化合物有沒(méi)食子酸、原兒茶酸、槲皮素-3-0-P-D-半乳糖(2—l)-O-P-D-吡喃葡糖苷、山柰酚-3-0-P-D-吡喃葡萄糖(2—1)-0-P-D-吡喃葡糖苷、鞣花酸、山柰酚、廣寄生苷、胡桃苷、黃芪苷、苯乙醇-0-13-D-葡糖苷和金絲桃苷等。通過(guò)該方法獲得的玫瑰多酚提取物作為制備治療婦女經(jīng)期和經(jīng)前調(diào)養(yǎng)保健和產(chǎn)后子宮收縮的藥物的用途。本發(fā)明所述的玫瑰多酚的制備方法，采用乙醇溫浸提取，經(jīng)大孔吸附樹(shù)脂分離方法獲得的提取物含總多酚以沒(méi)食子酸C7H605計(jì)為60.2%-68.3%，具體操作按下列步驟進(jìn)行a、將干燥玫瑰花加10倍量濃度為20%-90%乙醇，在溫度30-6(TC溫浸1-2次，每次2-8小時(shí)，過(guò)濾，濾液減壓濃縮至無(wú)醇味，靜置24小時(shí)，傾出上清液；b、取上清液加入大孔吸附樹(shù)脂層析柱，然后分別用水，50X乙醇洗脫；c、將步驟b中50%乙醇洗脫部位減壓濃縮和真空干燥或冷凍干燥或噴霧干燥，得到玫瑰花提取物玫瑰多酚；d、將步驟c玫瑰花提取物按照常規(guī)制劑方法制成顆粒劑、硬膠囊、軟膠囊和片劑即可。所述步驟a溫浸用乙醇濃度為50%-75%。所述步驟b大孔吸附樹(shù)脂型號(hào)為HPD600或DA201或AB-8或NKA-9或D101或HPD750或D140或X-5。所述步驟a溫浸溫度優(yōu)選為40-50°C.所述溫浸時(shí)間優(yōu)選為3-4小時(shí)，所述方法獲得的玫瑰多酚提取物作為制備治療婦女經(jīng)期和產(chǎn)后子宮收縮的藥物的用途。所述方法獲得的玫瑰多酚提取物作為制備治療婦女經(jīng)前調(diào)養(yǎng)保健品用途。本發(fā)明所述的玫瑰多酚制備方法及其在婦產(chǎn)科應(yīng)用，該方法通過(guò)提取、分離與純化得到化合物十幾個(gè)，并對(duì)這十幾個(gè)化合物進(jìn)行了結(jié)構(gòu)測(cè)定，已鑒定出結(jié)構(gòu)的化合物有沒(méi)食子酸、原兒茶酸、槲皮素-3-0-!3-D-半乳糖(2—1)-0-P-D-吡喃葡糖苷、山柰酚-3-O-P-D-吡喃葡萄糖(2—l)-O-P-D-吡喃葡糖苷、鞣花酸、山柰酚、廣寄生苷、胡桃苷、黃芪苷、苯乙醇-0-13-D-葡糖苷和金絲桃苷等。其中多酚提取物中沒(méi)食子酸，原兒茶酸，鞣花酸，廣寄生苷，黃芪苷和胡桃苷的含量分別為6.48，7.61，32.41，18.54，23.78，9.25mgg-l，主成分為鞣花酸。圖1為本發(fā)明玫瑰多酚組分構(gòu)成圖，其中l(wèi)-沒(méi)食子酸，2-原兒茶酸，3-金絲桃苷，4-鞣花酸，5-廣寄生苷，6-黃芪苷，7-胡桃苷，8-槲皮素。具體實(shí)施方式實(shí)施例1將干燥玫瑰花100g，加1L濃度為70%乙醇，水浴溫浸50°C，提取2次，每次2小時(shí)，過(guò)濾，濾液減壓濃縮至無(wú)醇味，靜置24小時(shí)，傾出上清液；取上清液上樣于HPD600型大孔吸附樹(shù)酯層析柱，然后分別用水，50%乙醇，依次洗脫；將50%乙醇洗脫得到的部位減壓濃縮、真空干燥，粉碎，過(guò)80目篩，得玫瑰花提取物；將玫瑰花提取物，按照常規(guī)制劑方法制成顆粒劑、硬膠囊、軟膠囊或片劑。實(shí)施例2:將干燥玫瑰花100g，加1L濃度為60%乙醇，水浴溫浸60°C，提取1次，時(shí)間4小時(shí)，過(guò)濾，濾液減壓濃縮至無(wú)醇味，靜置24小時(shí)，傾出上清液；取上清液一樣于D101型大孔吸附樹(shù)酯層析柱，然后分別用水，50%乙醇，依次洗脫；將50%乙醇洗脫得到的部位減壓濃縮、噴霧干燥，過(guò)80目篩，得玫瑰花提取物；將玫瑰花提取物，按照常規(guī)制劑方法制成顆粒劑、硬膠囊、軟膠囊或片劑。實(shí)施例3:將干燥玫瑰花100g，加1L濃度為55%乙醇，水浴溫浸50°C，提取2次，每次2小時(shí)，過(guò)濾，濾液減壓濃縮至無(wú)醇味，靜置24小時(shí)，傾出上清液；取上清液上樣于AB-8型大孔吸附樹(shù)酯層析柱，然后分別用水，50%乙醇，依次洗脫；將50%乙醇洗脫得到的部位減壓濃縮、冷凍干燥，過(guò)80目篩，得玫瑰花提取物；將玫瑰花提取物，按照常規(guī)制劑方法制成顆粒劑、硬膠囊、軟膠囊或片劑。實(shí)施例4將干燥玫瑰花100g，加1L濃度為50%乙醇，水浴溫浸45°C，提取1次，每次4小時(shí)，過(guò)濾，濾液減壓濃縮至無(wú)醇味，靜置24小時(shí)，傾出上清液；取上清液上樣于NKA-9型大孔吸附樹(shù)酯層析柱，然后分別用水，50%乙醇，依次洗脫；5將50%乙醇洗脫得到的部位減壓濃縮、真空干燥，過(guò)80目篩，得玫瑰花提取物；將玫瑰花提取物，按照常規(guī)制劑方法制成顆粒劑、硬膠囊、軟膠囊或片劑。實(shí)施例5將干燥玫瑰花100g，加1L濃度為75%乙醇，水浴溫浸60°C，提取2次，每次4小時(shí)，過(guò)濾，濾液減壓濃縮至無(wú)醇味，靜置24小時(shí)，傾出上清液；取上清液上樣于D140型大孔吸附樹(shù)酯層析柱，然后分別用水，50%乙醇，依次洗脫；將50%乙醇洗脫得到的部位減壓濃縮、真空干燥，過(guò)80目篩，得玫瑰花提取物；將玫瑰花提取物，按照常規(guī)制劑方法制成顆粒劑、硬膠囊、軟膠囊或片劑。實(shí)施例6:干燥玫瑰花100g，加1L濃度為50%乙醇，水浴溫浸30°C，提取2次，每次3小時(shí)，過(guò)濾，濾液減壓濃縮至無(wú)醇味，靜置24小時(shí)，傾出上清液；取上清液一樣于HPD750型大孔吸附樹(shù)酯層析柱，然后分別用水，50%乙醇，依次洗脫；將50%乙醇洗脫得到的部位減壓濃縮、真空干燥，過(guò)80目篩，得玫瑰花提取物；將玫瑰花提取物，按照常規(guī)制劑方法制成顆粒劑、硬膠囊、軟膠囊或片劑。實(shí)施例7將干燥玫瑰花100g，加1L濃度為55%乙醇，水浴55。C溫浸，提取1次，時(shí)間2小時(shí)，過(guò)濾，濾液減壓濃縮至無(wú)醇味，靜置24小時(shí)，傾出上清液；取上清液上樣于DA201型大孔吸附樹(shù)酯層析柱，然后分別用水，50%乙醇，依次洗脫；將50%乙醇洗脫得到的部位減壓濃縮、真空干燥，過(guò)80目篩，得玫瑰花提取物；將玫瑰花提取物，按照常規(guī)制劑方法制成顆粒劑、硬膠囊、軟膠囊或片劑。實(shí)施例8將干燥玫瑰花100g，加1L濃度為60%乙醇，水浴溫浸45°C，提取2次，每次1.5小時(shí)，過(guò)濾，濾液減壓濃縮至無(wú)醇味，靜置24小時(shí)，傾出上清液；取上清液一樣于X-5型大孔吸附樹(shù)酯層析柱，然后分別用水，50X乙醇，依次洗脫；將50%乙醇洗脫得到的部位減壓濃縮、真空干燥，過(guò)80目篩，得玫瑰花提取物；將玫瑰花提取物，按照常規(guī)制劑方法制成顆粒劑、硬膠囊、軟膠囊或片劑。實(shí)施例9通過(guò)本發(fā)明所述方法獲得的玫瑰多酚提取物作為制備治療婦女經(jīng)期和經(jīng)前調(diào)養(yǎng)保健和產(chǎn)后子宮收縮的藥理作用試驗(yàn)。玫瑰多酚對(duì)小鼠凝血時(shí)間的影響昆明種小鼠50只，雌雄各半，體重18-22g，按性別體重隨機(jī)分成空白、陽(yáng)性、高劑量、中劑量、低劑量五組，高劑量0.6mg.10g-l、中劑量0.4mg.10g-l、低劑量0.2mg.10g-l、陽(yáng)性對(duì)照0.lg.10g-l體重灌胃給藥(ig)，空白對(duì)照組灌胃等量蒸餾水，一日給藥一次，連續(xù)灌胃一周，末次給藥后45min后，頸椎脫臼處死小鼠，取血2ml入枸櫞酸鈉抗凝采血管，使用血凝儀測(cè)定凝血時(shí)間(PT)。使用t檢驗(yàn)對(duì)比空白、陽(yáng)性對(duì)照組與玫瑰花各劑量組之間的差異，以P<0.05表示該劑量的被試藥物與各對(duì)照組比較，對(duì)小鼠凝血時(shí)間的影響有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)表l。表1玫瑰花提取物對(duì)小鼠凝血時(shí)間的影響(s)(X±SD)分組<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>與空白組對(duì)比**p<0.01;*p<0.05;與陽(yáng)性對(duì)照組對(duì)比##p<0.01;P<0.05。抗凝血時(shí)間試驗(yàn)中，玫瑰花中劑量組對(duì)比空白組，有延長(zhǎng)凝血時(shí)間的趨勢(shì)，結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其中雌性小鼠中，玫瑰花提取物的中、低劑量組有延長(zhǎng)凝血時(shí)間的趨勢(shì)，對(duì)比陽(yáng)性對(duì)照組，結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果提示玫瑰花提取物存在延長(zhǎng)凝血時(shí)間的藥效學(xué)作用。玫瑰多酚對(duì)小鼠耳廓微循環(huán)的影響昆明種小鼠50只，雌雄各半，體重18-22g，按性別體重隨機(jī)分成空白、陽(yáng)性、高劑量、中劑量、低劑量五組。小鼠20%烏拉坦麻醉(0.065ml.lOg-lip)，試驗(yàn)動(dòng)物左耳兩側(cè)均脫毛后，使用阿拉伯膠固定于載玻片上，置目鏡6X、物鏡40X光學(xué)顯微鏡下觀察，尋找毛細(xì)血管清晰、分支較多的部位照相并記錄，第二天開(kāi)始高劑量0.6mg.10g-l、中劑量0.4mg.10g-l、低劑量0.2mg.10g-l、陽(yáng)性對(duì)照0.lg.10g-l體重灌胃給藥(ig)，空白對(duì)照組灌胃等量蒸餾水，一日給藥一次，連續(xù)灌胃一周后，全體試驗(yàn)動(dòng)物再次麻醉，左耳雙側(cè)脫毛后使用同上方法，在同一個(gè)位置照相并記錄，統(tǒng)計(jì)同一位置微血管管徑和毛細(xì)血管網(wǎng)交點(diǎn)計(jì)數(shù)。毛細(xì)管管徑使用t檢驗(yàn)對(duì)比空白、陽(yáng)性對(duì)照組與玫瑰花各劑量組之間的差異，毛細(xì)血管網(wǎng)交點(diǎn)數(shù)使用x2檢驗(yàn)，以P<0.05表示該劑量的被試藥物與各對(duì)照組比較，對(duì)小鼠擴(kuò)張耳廓微循環(huán)管徑和增加毛細(xì)血管網(wǎng)交點(diǎn)的影響有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)表2。表2玫瑰花提取物對(duì)小鼠耳廓微循環(huán)的影響(X士SD)7分組數(shù)量毛細(xì)血管網(wǎng)交點(diǎn)計(jì)數(shù)微血管管徑給藥前給藥后給藥前給藥后空A對(duì)照103.2±0.79321■0791,68±0.441.73±0.51陽(yáng)性對(duì)照w3-5zir0,533.1±0.741.79±0.432.73±1.44**高劑量103,4土1,173,4±L171,67±0.372.87±1.77**中劑量103,3±0,673.3±0,671.77±0,512,38±0.81**低劑鬚103,1±0,883.1±0.881.79±0,422.53±1.34*承與空白組對(duì)比***p<0.01;*p<0.05;與陽(yáng)性對(duì)照組對(duì)比##p<0.01;P<0.05。觀察耳廓微循環(huán)試驗(yàn)中，玫瑰花各劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組和空白對(duì)照組比較，微血管管徑都有明顯增加，比較結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。結(jié)果提示玫瑰花提取物有擴(kuò)張毛細(xì)管管徑，增加微循環(huán)血流量的藥效學(xué)作用。玫瑰多酚對(duì)大鼠離體子宮的影響未孕、性成熟SD雌性大鼠20只，體重160-180g，試驗(yàn)前兩天每天ip苯甲酸雌二醇0.4mg每只活化子宮。試驗(yàn)當(dāng)天頸椎脫臼處死大鼠，游離卵巢及子宮分叉處之間中段子宮，沿系膜縱軸剖開(kāi)子宮，經(jīng)Kreb's緩沖液漂洗后，每側(cè)子宮依平滑肌纖維縱行方向取寬2mm的肌條，每只大鼠可制備4條子宮平滑肌條標(biāo)本。新鮮子宮平滑肌條分別置15ml，37°CKreb's液套管中，在lg前負(fù)荷下溫育lh，每20min更換一次新鮮Kreb's液，待自發(fā)活動(dòng)穩(wěn)定后再加入藥物，小劑量、中劑量、大劑量的終濃度分別是2、4、8g/L玫瑰花提取物，為藥物單用組；肌條自發(fā)活動(dòng)平穩(wěn)后分別加入苯海拉明(給藥終濃度2X10-6mo1.L_l)、酚妥拉明(給藥終濃度2X10-6mo1.L-l)、異搏定(給藥終濃度2X10-7mo1.L-1)、吲哚美辛(給藥終濃度2X10-5mo1.L-l)5min后，再加入玫瑰花提取物為受體拮抗劑+藥物組。記錄平滑肌條收縮波平均振幅和平均持續(xù)時(shí)間。離體子宮試驗(yàn)中，單用玫瑰花提取物，對(duì)比未使用藥物狀態(tài)，子宮平滑肌收縮頻率增加、張力增強(qiáng)，結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)，持續(xù)時(shí)間無(wú)明顯變化；加入Hl受體阻斷劑苯海拉明后，玫瑰花提取物對(duì)子宮平滑肌作用收縮頻率減弱，張力減小(P<0.01)，對(duì)持續(xù)時(shí)間無(wú)明顯改變；加入a受體阻斷劑酚妥拉明后，玫瑰花提取物增強(qiáng)了子宮平滑肌收縮力，減慢了收縮持續(xù)時(shí)間(P<0.05);加入抑制前列腺素合成酶吲哚美辛后，增強(qiáng)了子宮平滑肌收縮頻率(P<0.05);加入L型Ca2+通道阻斷劑異搏定后，玫瑰花提取物對(duì)子宮平滑肌收縮作用增強(qiáng)(P<0.01)。結(jié)果提示玫瑰花提取物可能具有激動(dòng)大鼠離體子宮平滑肌自發(fā)收縮活動(dòng)的藥效學(xué)作用。其作用可以被苯海拉明、酚妥拉明、異搏定影響。玫瑰多酚對(duì)陰虛內(nèi)熱癥大鼠子宮影響雌性SD大鼠50只，體重160-200g，按體重隨機(jī)均分成空白、陽(yáng)性、高劑量、中劑量、低劑量五組。除空白對(duì)照組外，ip甲狀腺素2.5mg'200g-l體重每天，制造雌性大鼠陰虛模型，連續(xù)造模3周后，觀察大鼠出現(xiàn)體重下降、脫毛、舌出現(xiàn)腫脹、陰道涂片角質(zhì)化細(xì)胞出現(xiàn)明顯增多即為陰虛證造模成功，停止造模給藥。高劑量3.0mg'100g-l、中劑量2.Omg'100g-l、低劑量l.Omg100g-l、陽(yáng)性對(duì)照0.5g100g-l體重灌胃給藥(ig)，空白對(duì)照組灌胃等量蒸餾水，一日給藥一次，連續(xù)ig—周，測(cè)定體重，頸椎脫臼后測(cè)量子宮重量與體重的比值、肛溫、陰道沖洗液角質(zhì)化上皮細(xì)胞計(jì)數(shù)。體重、子宮體重指數(shù)、肛溫采用t檢驗(yàn)，陰道沖洗液角質(zhì)化上皮細(xì)胞計(jì)數(shù)采用x2檢驗(yàn)，分析空白、陽(yáng)性對(duì)照組與各劑量給藥之間的差別，以P〈0.05表示該劑量的被試藥物與空白、陽(yáng)性對(duì)照組比較，對(duì)雌性大鼠陰虛癥狀的改善有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)表3。表3玫瑰花提取物對(duì)陰虛大鼠體征的影響(X±SD)分組數(shù)量肛溫C€)舌重系數(shù)肝重系數(shù)子宮重系數(shù)角質(zhì)化上皮1'~1"JR、、1038,0±0,48嵌0,2±0,024,80土0,220,3±0.0740,±31,8模型對(duì)廳1036.0±0,690,2±0.013.3±0,22**0.48±0.17*47.±24,3B3性對(duì)照1037,2土1,03觀0,2±0,043.32±0.38**0,32±0.1574~199高劑量1037,6±0,650,27±0.083.50±1,280.35士0.1432.3±5,03中劍量1037,6土0,38頭0,25±0.093.38±1,110.46土0.1928.3±13.7條劍量1037.9土0.56腿0.27土0,064.06±0,740.34±0.0964.8±46,4與空白組對(duì)比**p<0.01;*p<0.05;與陽(yáng)性對(duì)照組對(duì)比##p<0.01;P<0.05;與模型組對(duì)比※※p<0.01;※P<0.05。玫瑰花提取物可以改善陰虛模型大鼠的造模引起的低體溫，改善陰虛模型大鼠陰道上皮細(xì)胞角質(zhì)化現(xiàn)象。玫瑰多酚對(duì)小鼠醋酸所致扭體反應(yīng)的鎮(zhèn)痛效果昆明種小鼠50只，雌雄各半，體重1822g，按性別體重隨機(jī)分成空白、陽(yáng)性、高劑量、中劑量、低劑量五組，高劑量9mg.10g-l、中劑量3mg.10g-l、低劑量lmg.10g-l、陽(yáng)性對(duì)照0.lg.10g-l體重ig，空白對(duì)照組灌胃等量蒸餾水，一日給藥一次，連續(xù)一周灌胃給藥，末次給藥45min后，小鼠ip0.6%醋酸0.2ml/只，觀察15min，記錄小鼠扭體次數(shù)，使用t檢驗(yàn)對(duì)比給藥組與空白、陽(yáng)性對(duì)照組與玫瑰花各劑量組之間的差異，以P<0.05表示該劑量的被試藥物與各對(duì)照組比較，對(duì)小鼠的鎮(zhèn)痛影響有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)表4。表4玫瑰花提取物對(duì)0.6%醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的抑制作用(X士SD)分組數(shù)fi雄性額體次數(shù)雌性扭體次數(shù)共計(jì)擔(dān)體次數(shù)空白對(duì)照1029,6±17.723.2士21,326.4±18.8陽(yáng)性對(duì)照1027,8±8.7321.6±15.5243士12,6高劑fi106,00±13,2#*9,67±8.697,83±10,9f**中劑tt108,33士6,41濯象5.00±11.3#6,67±8.92#**低劑il;1018,17土14.96,80±9.5513,0±13,5#*與空白組對(duì)比**p<0.01;*p<0.05;與陽(yáng)性對(duì)照組對(duì)比##p<0.01;P<0.05。玫瑰花提取物高、中、低各劑量組與空白對(duì)照組比較，扭體次數(shù)有明顯減低，結(jié)果均具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，與陽(yáng)性對(duì)照組比較，扭體次數(shù)有明顯的減低，結(jié)果均具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。玫瑰多酚對(duì)小鼠二甲苯所致外耳廓炎性反應(yīng)的抗炎效果昆明種小鼠50只，雌雄各半，體重18-22g，按性別體重隨機(jī)分成空白、陽(yáng)性、高劑量、中劑量、低劑量五組，高劑量9mg10g-l、中劑量3mg10g-l、低劑量lmg10g-l、陽(yáng)性對(duì)照0.lg10g-l體重ig，空白對(duì)照組灌胃等量蒸餾水，一日給藥一次，連續(xù)一周以上灌胃給藥，末次給藥45min后，用含玫瑰花提取物濃度分別為lmg/ml、0.33mg/ml、0.12mg/ml、含陽(yáng)性對(duì)照藥lmg/ml的二甲苯溶液0.2ml/只涂抹該組小鼠右側(cè)外耳廓，空白對(duì)照組涂抹純二甲苯；觀察4h后，頸椎脫臼處死小鼠，使用打孔器在左右耳同一位置打下面積相同的耳片分別稱量，使用t檢驗(yàn)對(duì)比各組同一個(gè)體左右耳片重量差異，以P<0.05表示該劑量的被試藥物與各對(duì)照組比較，對(duì)小鼠的抗炎效果影響有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)表5。表5玫瑰花提取物對(duì)二甲苯致小鼠外耳廓炎性反應(yīng)的抑制作用(X士SD)分組數(shù)M:外耳廓腫脹度(g)腫脹抑制率(％)空白對(duì)照100,0025±0,0002_--陽(yáng)性對(duì)照100,0023士O,OO雄7.60被100.0018±0.001328,36中劑量雄0,0011±0,000謂**57,67低劑量100,OO懇iO,OOll29,33與空白組對(duì)比**p<0.01;*p<0.05;與陽(yáng)性對(duì)照組對(duì)比##p<0.01;P<0.05。玫瑰花中劑量組與空白對(duì)照組比較，外耳廓腫脹度有明顯減低，結(jié)果具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p〈0.01)，與陽(yáng)性對(duì)照組比較，外耳廓腫脹度有明顯減低，結(jié)果具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)，玫瑰花中劑量組腫脹抑制率達(dá)到57.67%。玫瑰花高、中、低各劑量對(duì)0.6%醋酸所引發(fā)的小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)均有明顯的抑制作用，結(jié)果提示玫瑰花提取物可能存在鎮(zhèn)痛藥物療效；在抗炎試驗(yàn)中，與空白對(duì)照組比較玫瑰花中劑量給藥組外耳廓腫脹度有明顯減低，腫脹抑制率達(dá)到57.67%，提示玫瑰花提取物對(duì)二甲苯引發(fā)的小鼠外耳廓炎性腫脹有明顯的抑制作用，存在潛在的藥用抗炎效果。玫瑰多酚功能因子組分活性本發(fā)明表現(xiàn)出了優(yōu)良的抗氧化活性。可用ABTS清除率表征總酚提取物的抗氧化能力，用ABTS清除率表征玫瑰花中多酚和黃酮單體的抗氧化能力。目前分析到的有效功能組分和功能因子有沒(méi)食子酸IC50低于1yg^L—1;鞣花酸IC50<4iig^L—1;胡桃苷IC50<0.04mgmL—1;黃芪苷IC50<0.04mgmL—1和廣寄生苷IC50<0.4mgmL—1參與藥效;玫瑰花瓣有效組分的總抗氧化效果可以達(dá)到IC500.004mgmL—1(ABTS)。從測(cè)定結(jié)果看到，提取物和單體對(duì)ABTS自由基均有較高的清除效果，且有劑量與效應(yīng)關(guān)系，隨著反應(yīng)體系有效組分濃度的增加，抑制作用明顯增加，最大抑制率達(dá)到99.8%;比較不同濃度不同組分/成分，其中抗氧化活性最高的單體沒(méi)食子酸IC50低于1iig/mL。藥效物質(zhì)的歸屬用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動(dòng)相為A[甲醇乙腈(i:i)]-B(o.oe%的三氟乙酸溶液)，程序梯度洗脫0至15分鐘，15%A升為35%A;15至38分鐘，35%A升為62%A;38至50分鐘，62%A升為100%A;檢測(cè)波長(zhǎng)254nm，柱溫為32°C。理論板數(shù)按廣寄生苷峰計(jì)算應(yīng)不低于10000。廣寄生苷和黃芪苷峰分離度應(yīng)符合要求。取本品81mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加甲醇適量，超聲使溶解，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，離心，取上清液，即得。精密稱取沒(méi)食子酸、原兒茶酸、鞣花酸、廣寄生苷、黃芪苷、金絲桃苷、槲皮素和胡桃苷對(duì)照品適量，置量瓶中，加甲醇制成每lml含沒(méi)食子酸40iig，原兒茶酸58iig，金絲桃苷25.8iig，鞣花酸58.4yg，廣寄生苷26yg，黃芪苷55yg、槲皮素10Pg和胡桃苷15g的溶液，即得。本發(fā)明所述婦女用保健品和婦產(chǎn)科藥品，其明確的功能因子成分已由上述指紋圖譜表征并分離純化獲得，它是由以鞣花酸為代表的多酚成分組成，總含量達(dá)到62.8%;劑型為顆粒劑，軟硬膠囊劑，口服液，片劑等?？偤繙y(cè)定對(duì)照品溶液和標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密稱取沒(méi)食子酸對(duì)照品適量，加甲醇制成102iig/ml的溶液。精密量取對(duì)照品溶液0.5ml，1.0ml，2.0ml，3.0ml，4.0ml，5.0ml和6.Oml，分別置50ml棕色容量瓶中，各加入磷鉬鴇酸試液2.0ml，再分別加水23.5ml，23.0ml，22.0ml，21.0ml，20.Oml，19.Oml，18.0ml，用29%碳酸鈉溶液定容至刻度，搖勻，放置30分鐘，以相應(yīng)的試劑為空白，照紫外-一可見(jiàn)分光光度法(中國(guó)藥典2005年版附錄VA)，在757nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。工藝過(guò)程控制所測(cè)標(biāo)準(zhǔn)曲線結(jié)果見(jiàn)表，￥=0.111X+0.0606，r=0.9982樣品測(cè)定經(jīng)大孔吸附樹(shù)脂的洗脫液，精密量取1.Oml置50ml棕色量瓶中，用蒸餾水定容至刻度，從中精密量取1.Oml照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項(xiàng)下的方法，自"加入磷鉬鎢酸試液2ml"起，加水23.Oml，依法測(cè)定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線中讀出洗脫液中沒(méi)食子酸的量(mg)，計(jì)算。權(quán)利要求一種玫瑰多酚的制備方法，其特征在于采用乙醇溫浸提取，經(jīng)大孔吸附樹(shù)脂分離方法獲得的提取物含總多酚以沒(méi)食子酸C7H6O5計(jì)為60.2％-68.3％，具體操作按下列步驟進(jìn)行a、將干燥玫瑰花加10倍量濃度為20％-90％的乙醇，在溫度30-60℃溫浸1-2次，每次2-8小時(shí)，過(guò)濾，濾液減壓濃縮至無(wú)醇味，靜置24小時(shí)，傾出上清液；b、取上清液加入大孔吸附樹(shù)脂層析柱，然后分別用水，50％乙醇洗脫；c、將步驟b中50％乙醇洗脫部位減壓濃縮和真空干燥或冷凍干燥或噴霧干燥，得到玫瑰花提取物玫瑰多酚；d、將步驟c玫瑰花提取物按常規(guī)藥物制劑方法制成顆粒劑、硬膠囊、軟膠囊和片劑即可。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟3溫浸用乙醇濃度為50%-75%。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟b大孔吸附樹(shù)脂型號(hào)為HPD600或DA201或AB-8或NKA-9或D101或HPD750或D140或X_5。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟a溫浸溫度優(yōu)選為40-50°C.5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是所述溫浸時(shí)間優(yōu)選為3-4小時(shí)，6.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法獲得的玫瑰多酚提取物作為制備治療婦女經(jīng)期和產(chǎn)后子宮收縮的藥物的用途。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法獲得的玫瑰多酚提取物作為制備治療婦女經(jīng)前調(diào)養(yǎng)保健品的用途。全文摘要本發(fā)明涉及玫瑰多酚制備方法及其在婦產(chǎn)科應(yīng)用，該方法是采用乙醇溫浸提取，經(jīng)大孔吸附樹(shù)脂分離方法，等度洗脫和梯度洗脫柱層析法獲得提取物，通過(guò)該方法獲得的玫瑰多酚提取物用于婦女經(jīng)前、經(jīng)期舒肝解郁，寧心安神，和血調(diào)經(jīng)，緩解女性經(jīng)前和經(jīng)期的不安、焦慮和心煩情緒及產(chǎn)后子宮收縮，增強(qiáng)收縮頻率，縮短收縮時(shí)間的藥物的用途。文檔編號(hào)A61P15/00GK101693059SQ20091011348公開(kāi)日2010年4月14日申請(qǐng)日期2009年10月16日優(yōu)先權(quán)日2009年10月16日發(fā)明者仲婕,阿吉艾克拜爾·艾薩,陳君,馬依努爾·拜克力申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院新疆理化技術(shù)研究所;