專(zhuān)利名稱(chēng)：用于治療骨髓增生性疾病和其他增生性疾病的激酶抑制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于治療多種疾病的新型激酶抑制劑和調(diào)節(jié)劑化合物。更具體地，本 發(fā)明涉及所述化合物、激酶/化合物加合物、治療疾病的方法和合成所述化合物的方法。優(yōu) 選地，所述化合物用于調(diào)節(jié)C-Abl、c-Kit、HER家族、FGFR、VEGFR、PDGFR、Flt_3、Raf激酶家 族和其引起疾病的多形體(polymorphs)的激酶活性。
背景技術(shù)：
蛋白激酶家族的數(shù)個(gè)成員已經(jīng)明確地牽涉于多種增生性疾病和骨髓增生性疾病 的發(fā)病機(jī)制，并且因此代表治療這些疾病的重要靶點(diǎn)。與本發(fā)明相關(guān)的增生性疾病中的一 些包括癌癥、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、動(dòng)脈粥樣硬化和視網(wǎng)膜病。已經(jīng)表明引起或?qū)е逻@些疾病 發(fā)病的激酶的重要實(shí)例包括C-Abl激酶和致癌融合蛋白bcr-Abl激酶；c-Kit激酶、FGFR、 PDGF受體激酶、VEGF受體激酶、Flt-3激酶、HER家族和Raf激酶家族。C-Abl激酶是與細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)有關(guān)的重要的非受體酪氨酸激酶。一旦被包括生長(zhǎng) 因子的上游信號(hào)因子、氧化性應(yīng)激、整聯(lián)蛋白刺激和電離輻射活化，這一普遍表達(dá)的激酶定 位于細(xì)胞質(zhì)膜、細(xì)胞核和包括肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架的其他細(xì)胞區(qū)室(Van Etten,Trends Cell Biol. (1999)9 ； 179)。有兩種正常的Abl激酶的同種型:Abl_lA和Abl-IB。c_Abl激酶的N 端這半部分對(duì)激酶結(jié)構(gòu)域的催化活性的自身抑制作用很重要(Pluk等人，Cell (2002) 108 247)。最近，這一自身抑制作用的機(jī)理方面的細(xì)節(jié)已經(jīng)公開(kāi)(Nagar等人，Cell (2003) 112 859)。已經(jīng)表明Abl-1B的N端的十四?；被釟埢肿觾?nèi)占據(jù)由激酶結(jié)構(gòu)域C葉中的 a螺旋形成的疏水袋。這樣的分子內(nèi)結(jié)合誘導(dǎo)新型的結(jié)合區(qū)域，其用于將SH2結(jié)構(gòu)域和 SH3結(jié)構(gòu)域分子內(nèi)對(duì)接于激酶結(jié)構(gòu)域，從而改變和抑制激酶的催化活性。因此，激酶活性的 復(fù)雜的分子內(nèi)負(fù)調(diào)節(jié)是由c-Abl激酶的這些N端區(qū)域引起的。c-Abl的異常的失調(diào)形式是 由稱(chēng)為費(fèi)城染色體的染色體易位事件形成(P.C.Nowell等人，Science (1960) 132 1497 ； J. D. Rowley, Nature (1973) 243 290)。這一異常的染色體易位導(dǎo)致Abl激酶基因和斷裂點(diǎn) 叢集區(qū)(BCR)基因之間的異?；蛉诤?，因此編碼稱(chēng)為bcr-Abl的異常蛋白(G.Q.Daley 等人，Science (1990) 247 824 ；M. L. Gishizky 等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1993) 90 3755 ；S.Li等人，J. Exp. Med. (1999) 189 :1399)。bcr-Abl融合蛋白并不包含調(diào)節(jié)十四酰化 (myristolylation)位點(diǎn)(B. Nagar等人，Cell (2003) 112 :859)，并且因此作為引起慢性髓 細(xì)胞樣白血病(CML)的癌蛋白質(zhì)起作用。CML是多能造血干細(xì)胞的惡性腫瘤。在95%的 CML患者和20%的急性淋巴細(xì)胞性白血病患者中觀察到p210形式的bcr-Abl，并且將其通過(guò)序列例如el4a2和el3a2舉例說(shuō)明。也已鑒定了由序列ela2示例的相應(yīng)的pl90形式。 還已公開(kāi)P185形式并且其與多達(dá)10%的急性淋巴細(xì)胞性白血病患者的致病原因相關(guān)。本 領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)該理解“P210形式”、“pl90形式” “pl85形式”各自描述一密切相關(guān)的 融合蛋白組，并且文中所用的序列ID僅僅是各形式的代表，并不意味著將范圍僅僅限制至 所述序列。C-KIT(Kit，⑶117，干細(xì)胞因子受體)是145kDa的跨膜酪氨酸激酶蛋白，其為III 型受體(Pereira等人，J Carcin. (2005)，4 19)。位于染色體4qll_21的c-KIT原癌基因 編碼c-KIT受體，c-KIT受體的配體是干細(xì)胞因子(SCF、steel因子、kit配體、肥大細(xì)胞生 長(zhǎng)因子，Morstyn G 等人，Oncology (1994) 51 (2) 205 ；Yarden Y 等人，Embo J(1987)6(ll) 3341)。該受體具有酪氨酸-蛋白激酶活性，并且配體的結(jié)合引起KIT的自磷酸化作用和其 與底物例如磷脂酰肌醇3-激酶(Pi3K)的關(guān)聯(lián)。由蛋白酪氨酸激酶引起的酪氨酸磷酸化在 細(xì)胞信號(hào)系統(tǒng)中是特別重要的，并能介導(dǎo)大多細(xì)胞過(guò)程例如增殖、分化、凋亡、附著和遷移 的信號(hào)。KIT的缺陷是斑駁病的起因，斑駁病是以缺乏黑素細(xì)胞的白色皮膚和毛發(fā)上的先天 性斑為特征的常染色體顯性遺傳性色素沉著發(fā)育異常。已發(fā)現(xiàn)在大多數(shù)胃腸間質(zhì)腫瘤和肥 大細(xì)胞增多癥中c-KIT基因的功能獲得突變和磷酸化的KIT的表達(dá)。此外，幾乎所有的生 殖腺精原細(xì)胞瘤/無(wú)性細(xì)胞瘤表現(xiàn)KIT膜的染色，并且?guī)讉€(gè)報(bào)告已闡明有些(10-25% )具 有c-KIT基因突變(Sakuma，Y等人，Cancer Sci (2004)95 :9，716)。KIT缺陷還與睪丸腫瘤 包括生殖細(xì)胞瘤(GCT)和睪丸生殖細(xì)胞瘤(TGCT)有關(guān)。c-kit表達(dá)的作用已在血液學(xué)腫瘤和實(shí)體腫瘤例如急性白血病(Cortes J.等 人，Cancer (2003) 97 (11) 2760)和胃腸間質(zhì)腫瘤(GIST, Fletcher C. D.等人，Hum Pathol (2002) 33 (5) 459)中進(jìn)行了研究。在惡性腫瘤中c_kit表達(dá)的臨床重要性依 賴(lài)于對(duì)Gleevee (甲磺酸伊馬替尼，STI571，諾華制藥(Novartis Pharma AG),巴塞 爾，瑞士)的研究，Gleevee ;特異性抑制酪氨酸激酶受體(Lefevre G.等人，J Biol Chem(2004)279(30) :31769)。此外，臨床上相關(guān)的突破是發(fā)現(xiàn)該化合物在GIST中的抗腫瘤 作用，GIST被認(rèn)為是對(duì)常規(guī)化療普遍耐受的一類(lèi)腫瘤(de Silva CM, Re id R :Pathol Oncol Res (2003) 9 (1) : 13-19)。GIST經(jīng)常變得對(duì)Gleevee耐受，并且靶向于c-KIT突變的分子靶 向的小分子治療仍然難以找到。c-MET是獨(dú)特的受體酪氨酸激酶(RTK)，其位于染色體7p并且通過(guò)它的天 然配體肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子激活。發(fā)現(xiàn)c-MET在多種實(shí)體腫瘤中突變(Ma P. C.等人， Cancer Metastasis (2003) 22 309) 0在酪氨酸激酶域的突變與遺傳性乳頭狀腎細(xì)胞癌 有關(guān)(Schmidt L 等人，Nat. Genet. (1997) 16 68 ；Schmidt L 等人，Oncogene (1999) 18 2343)，而在小細(xì)胞肺癌中經(jīng)常發(fā)現(xiàn)在sema域和近膜域的突變(SCLC;Ma P. C.等人， Cancer Res (2003) 63 6272)。在乳腺癌中還發(fā)現(xiàn)許多激活突變(Nakopoulou等人， Histopath(2000)36(4) :313)。c_Met介導(dǎo)的生長(zhǎng)已經(jīng)牽涉到許多腫瘤類(lèi)型，表明這是適于 被特異性c-MET小分子抑制劑調(diào)控的理想靶點(diǎn)。TPR-MET癌基因是c_MET RTK的轉(zhuǎn)化變體，并且其最初是在治療被化學(xué)致癌 物N-甲基-N'-硝基-N-亞硝基胍轉(zhuǎn)化的人成骨肉瘤細(xì)胞系后鑒定的(Park M.等人， Cell (1986)45 895)。TPR-MET融合癌蛋白是染色體易位的結(jié)果，即將c_MET基因的部分的 染色體1上游區(qū)的TPR3基因座置于僅編碼細(xì)胞質(zhì)區(qū)的染色體7上。研究表明在實(shí)驗(yàn)性癌癥中TPR-MET是可檢測(cè)的(例如Yu J.等人，Cancer (2000) 88 1801)。通過(guò)被IPR編碼的亮 氨酸拉鏈結(jié)構(gòu)引起的M, 65, 000 TPR-MET癌蛋白的二聚化致使c-MET激酶組成性激活(Zhen Z.等人，Oncogene (1994) 9 1691)。TPR-MET作用于激活的野生型c_MET RTK，并能激活關(guān) 鍵的細(xì)胞生長(zhǎng)通路，包括Ras通路(Aklilu F.等人，Am J Physiol (1996) 271 :E277)和磷 脂酰肌醇 3-激酶(PI3K)/AKT 通路(Ponzetto C.等人，Mol Cell Biol (1993) 13 :4600)。 反之，與c-MET RTK相比，TPR-MET是非配體依賴(lài)的，在c_MET的近膜區(qū)缺少CBL結(jié)合位點(diǎn)， 并且主要是細(xì)胞質(zhì)的。c-Met免疫組織化學(xué)表達(dá)看起來(lái)與異常的β-連環(huán)蛋白表達(dá)相關(guān)，并 且其在乳腺癌患者中提供優(yōu)良的預(yù)后性和預(yù)測(cè)性因子。

已表明，已報(bào)道的大部分小分子激酶抑制劑以三種方式之一進(jìn)行結(jié)合。大多數(shù)報(bào) 道的抑制劑與活性位點(diǎn)的ATP結(jié)合結(jié)構(gòu)域相互作用，并通過(guò)與ATP的占據(jù)進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)而發(fā) 揮它們的效應(yīng)。已表明其他抑制劑結(jié)合到稱(chēng)為“Dre-內(nèi)-構(gòu)象(Dre-in-conformation) ” 口袋的蛋白質(zhì)的獨(dú)立疏水區(qū)，其中抑制劑的此種結(jié)合模式致使激酶采取“DTO-外” 構(gòu)象，并且還已表明其它抑制劑結(jié)合到ATP結(jié)構(gòu)域和“DTO-內(nèi)-構(gòu)象” 口袋，致使 激酶采取“Dre-外”構(gòu)象。Raf激酶的抑制劑的具體實(shí)例可參見(jiàn)Lowinger等人， CurrentPharmaceutical Design(2002)8 2269-2278 ；Dumas, J.等人，CurrentOpiniori in Drug Discovery&Development(2004)7 600 ；Dumas, J.等人，WO 2003068223 Al (2003)； Dumas, J.等人，WO 9932455 Al (1999)和 Wan, P. Τ. C.等人，Cell (2004) 116 :855。就生理學(xué)而言，激酶通過(guò)普通的活化/滅活機(jī)制來(lái)調(diào)節(jié)，其中激酶蛋白的特異性 活化環(huán)序列結(jié)合到同一蛋白質(zhì)上的稱(chēng)作開(kāi)關(guān)控制口袋的特異性口袋中。當(dāng)活化環(huán)的特定的 氨基酸殘基例如通過(guò)磷酸化、氧化或亞硝基化被修飾時(shí)，發(fā)生所述結(jié)合?；罨h(huán)結(jié)合到開(kāi)關(guān) 口袋引起蛋白質(zhì)的構(gòu)象向其活性形式變化(Huse,M. ^P Kuriyan, J. Cell (109) 275) 0發(fā)明概述本發(fā)明的化合物用于治療哺乳動(dòng)物癌癥且特別是人類(lèi)癌癥，其包括但不限于惡性 腫瘤(malignant)、黑素瘤、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肺癌、乳腺癌、腎癌、 宮頸癌、原發(fā)性腫瘤部位的轉(zhuǎn)移、骨髓增生性疾病、白血病、乳頭狀甲狀腺癌、非小細(xì)胞肺 癌、間皮瘤、嗜酸細(xì)胞增多綜合征、胃腸道間質(zhì)腫瘤、結(jié)腸癌、包括多種視網(wǎng)膜病的以引起失 明的過(guò)度增生為特征的眼病、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、哮喘、慢性阻塞性肺部病癥、肥大細(xì)胞增多 癥(mastocyctosis)、肥大細(xì)胞白血?。挥蒫_Abl激酶、其致癌形式、其異常融合蛋白及其多 形體引起的疾?。换蛴蒖af激酶、其致癌形式、其異常融合蛋白及其多形體引起的疾病。第1部分-優(yōu)選實(shí)施方案的描述以下描述涉及多種化合物及其基團(tuán)。環(huán)烷基指選自環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚烷基、環(huán)辛烷基的單環(huán)飽和碳 環(huán)；芳基指特征為至少一個(gè)碳環(huán)的環(huán)碳原子共享離域π電子(芳香性)的單環(huán)或稠 合雙環(huán)體系；優(yōu)選的芳基環(huán)選自苯基、萘基、四氫萘基、茚基和茚滿基；雜芳基指特征為至少一個(gè)碳環(huán)或雜環(huán)的環(huán)碳或包括氮、氧或硫的雜原子共享 離域η電子(芳香性)的單環(huán)或稠合雙環(huán)體系；雜芳基環(huán)選自但不限于吡咯基、呋 喃基、噻吩基、噁唑基、噻唑基、異噁唑基、異噻唑基、咪唑基、吡唑基、噁二唑基、噻二唑 基、三唑基、四唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、噠嗪基、三嗪基、吲哚基、二氫吲哚基、異吲哚基、異二氫吲哚基、吲唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并噻唑基、苯并噻唑酮基 (benzothiazolonyl)、苯并噁唑基、苯并噁唑酮基、苯并異噁唑基、苯并異噻唑基、苯并咪 唑基、苯并咪唑酮基、苯并三唑基、咪唑并吡啶基、吡唑并吡啶基、咪唑酮并吡啶基、噻唑并 吡啶基、噻唑酮并吡啶基、噁唑并吡啶基、噁唑酮并吡啶基、異噁唑并吡啶基、異噻唑并吡 啶基、三唑并吡啶基、咪唑并嘧啶基、吡唑并嘧啶基、咪唑酮并嘧啶基、噻唑并嘧啶基、噻 唑酮并嘧啶基、噁唑并嘧啶基、噁唑酮并嘧啶基、異噁唑并嘧啶基、異噻唑并嘧啶基、三唑 并嘧啶基、二氫嘌呤酮基(dihydropurinonyl)、吡咯并嘧啶基、嘌呤基、吡唑并嘧啶基、鄰 苯二甲酰亞氨基(phthalimidyl)、苯并[c]吡咯酮基(phthalimidinyl)、吡嗪基吡啶基 (pyrazinylpyridinyl)、吡啶并嘧啶基、嘧啶并嘧啶基、噌啉基、喹喔啉基、喹唑啉基、喹啉 基、異喹啉基、2，3- 二氮雜萘基、苯并二氧雜環(huán)戊烯基(benzodioxyl)、苯并異噻唑啉-1，1， 3-三酮基、二氫喹啉基、四氫喹啉基、二氫異喹啉基、四氫異喹啉基、苯并氮雜革.基、苯并二 氮雜革基、苯并氧雜革基(benzoxapinyl)和苯并氧氮雜革,基(benzoxaz印inyl)。 雜環(huán)基指含有碳和選自氧、氮或硫的雜原子的單環(huán)，并且其中在環(huán)碳或雜原子間 沒(méi)有共享的離域η電子(芳香性)；雜環(huán)基環(huán)包括但不限于氧雜環(huán)丁烷基、氮雜環(huán)丁烷基 (azetadinyl)、四氫呋喃基、批咯烷基、噁唑啉基、噁唑烷基、噻唑啉基、噻唑烷基、批喃基、 噻喃基、四氫吡喃基、二氧戊環(huán)基(dioxalinyl)、哌啶基、嗎啉基、硫代嗎啉基、硫代嗎啉基 S-氧化物、硫代嗎啉基S- 二氧化物、哌嗪基、氮雜革.基、氧雜革基(ox印inyl)、二氮雜革 基、托烷基和高托烷基(homotropanyl)；聚芳基指兩個(gè)或更多個(gè)特征為至少一個(gè)碳環(huán)的環(huán)碳原子共享離域π電子(芳香 性)的單環(huán)或稠合芳基雙環(huán)體系，其中包含于該體系中的環(huán)任選地被連接到一起；聚雜芳基指兩個(gè)或更多個(gè)特征為至少一個(gè)碳環(huán)或雜環(huán)的環(huán)碳或包括氮、氧或硫的 雜原子共享離域η電子(芳香性)的單環(huán)或稠合雙環(huán)體系，其中包含于該體系中的環(huán)任選 地被連接到一起，其中聚雜芳基體系的單環(huán)或稠合雙環(huán)中的至少一個(gè)選自如上所廣泛定義 的雜芳基，并且其它環(huán)選自如上所廣泛定義的芳基、雜芳基或雜環(huán)基；聚雜環(huán)基指兩個(gè)或更多個(gè)含有碳和選自氧、氮或硫的雜原子且其中環(huán)碳或雜原子 間沒(méi)有共享的離域η電子(芳香性)的單環(huán)或稠合雙環(huán)體系，其中包含于該體系中的環(huán)任 選地被連接，其中聚雜芳基體系的單環(huán)或稠合雙環(huán)中的至少一個(gè)選自如上所廣泛定義的雜 環(huán)基并且其它環(huán)選自如上所廣泛定義的芳基、雜芳基或雜環(huán)基；烷基指直鏈的或支鏈的C1-C6烷基；鹵素指氟、氯、溴和碘；烷氧基指-0-(烷基)，其中烷基是如上所定義的；烷氧基烷基指_(烷基)-0-(烷基)，其中烷基是如上所定義的；烷氧基羰基指-C(0)0_(烷基)，其中烷基是如上所定義的；羧基C1-C6烷基指-(C1-C6烷基)CO2H,其中烷基是如上所定義的；與基團(tuán)(moiety)有關(guān)的取代指以下事實(shí)進(jìn)一步的取代基可在所述基團(tuán)的任何 可接受的位置連接到所述基團(tuán)。術(shù)語(yǔ)鹽包括通常用于形成游離酸的堿金屬鹽和用于形成游離堿的加成鹽的藥學(xué) 上可接受的鹽。鹽的性質(zhì)并不重要，條件是它是藥學(xué)上可接受的。合適的藥學(xué)上可接受的酸加成鹽可從無(wú)機(jī)酸或從有機(jī)酸制備。這樣的無(wú)機(jī)酸的實(shí)例是鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、硝酸、碳 酸、硫酸和磷酸。合適的有機(jī)酸可選自脂肪族、脂環(huán)族、芳香族、芳基脂肪族和含有雜環(huán)基的 羧酸和磺酸，所述有機(jī)酸的實(shí)例是甲酸、乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、葡糖酸、乳酸、蘋(píng)果酸、 酒石酸、檸檬酸、抗壞血酸、葡糖醛酸、馬來(lái)酸、富馬酸、丙酮酸、天冬氨酸、谷氨酸、苯甲酸、 鄰氨基苯甲酸、甲磺酸、硬脂酸、水楊酸、對(duì)羥基苯甲酸、苯乙酸、扁桃酸、撲酸(雙羥萘酸)、 甲烷磺酸、乙烷磺酸、苯磺酸、泛酸、甲苯磺酸、2-羥基乙烷磺酸、磺胺酸、環(huán)己基氨基磺酸、 海藻酸(algeniC)、3-羥基丁酸、粘酸和半乳糖醛酸。含有游離酸的式I化合物的合適的藥 學(xué)上可接受的鹽包括金屬鹽和有機(jī)鹽。更優(yōu)選的金屬鹽包括但不限于合適的堿金屬(第Ia 族)鹽、堿土金屬(第IIa族)鹽和其他的生理學(xué)上可接受的金屬鹽。這樣的鹽可由鋁、鈣、 鋰、鎂、鉀、鈉和鋅制備。優(yōu)選的有機(jī)鹽可由伯胺、仲胺、叔胺和季銨鹽制備，包括(部分地) 氨基丁三醇、二乙胺、四-N-甲銨、N，N' -二芐基乙二胺、氯普魯卡因、膽堿、二乙醇胺、乙二 胺、葡甲胺(N-甲基葡糖胺)和普魯卡因。術(shù)語(yǔ)前藥指體內(nèi)復(fù)原為活性形式的活性化合物的衍生物。例如，活性藥物的 羧酸形式可被酯化以產(chǎn)生前藥，并且所述酯隨后在體內(nèi)轉(zhuǎn)化以復(fù)原成所述羧酸形式。 參見(jiàn) Ettmayer 等人，J. Med. Chem. (2004)，47 2393 和 Lorenzi 等人，J. Pharm. Exp. Therpeutics (2005)，883，作為參考。結(jié)構(gòu)、化學(xué)和立體化學(xué)的定義廣泛地選自IUPAC推薦，并且更具體地講選自 P. MUller總結(jié)的物理有機(jī)化學(xué)中所用的術(shù)語(yǔ)匯編(Glossary ofTerms used in Physical Organic Chemistry)(IUPAC 推薦 1994), Pure Appl.Chem. ，66，1077-1184(1994)禾口 G. P. Moss 總結(jié)的立體化學(xué)基本術(shù)語(yǔ)(BasicTerminology of Stereochemistry) (IUPAC推薦 1996), Pure and AppliedChemistry，68，2193-2222 (1996)。具體的定義如下將阻轉(zhuǎn)異構(gòu)體定義為構(gòu)象異構(gòu)體的一個(gè)亞類(lèi)，其可以作為單獨(dú)的化學(xué)物種分離得 至IJ，并且其由單鍵的受限旋轉(zhuǎn)產(chǎn)生。將區(qū)域異構(gòu)體或結(jié)構(gòu)異構(gòu)體定義為包括不同排列的相同原子的異構(gòu)體。將對(duì)映體定義為互為鏡像且不可重疊的一對(duì)分子實(shí)體之一。將非對(duì)映體或非對(duì)映異構(gòu)體定義為對(duì)映體以外的立體異構(gòu)體。非對(duì)映體或非對(duì)映 異構(gòu)體是不互為鏡像的立體異構(gòu)體。非對(duì)映體的特征為物理性質(zhì)不同，并且面對(duì)無(wú)手性試 劑及手性試劑其化學(xué)行為有一些差異。將互變異構(gòu)現(xiàn)象定義成下面通式的異構(gòu)現(xiàn)象，
G-X-Y = Z = = = X = Y-Z-G其中異構(gòu)體(稱(chēng)作互變異構(gòu)體)是可容易地相互轉(zhuǎn)化的；連接基團(tuán)X、Y、Z的原子 通常是C、H、0或S中的任何一個(gè)，并且G是異構(gòu)化期間成為離電體或離核體的基團(tuán)。當(dāng)離 電體是H+時(shí)，還稱(chēng)作“質(zhì)子轉(zhuǎn)移”。將互變異構(gòu)體定義為產(chǎn)生自互變異構(gòu)的異構(gòu)體，不管該異構(gòu)體是否是可分離的。1.本發(fā)明的第一方面_化合物、方法、制劑和加合物本發(fā)明包括式Ia的 化合物 其中Q1和Q2各自單獨(dú)地并獨(dú)立地選自N和CH，并且其中Q1和Q2中至少一個(gè)是 N；并且其中含有Q1和Q2的環(huán)可以任選地被一個(gè)或多個(gè)R20基團(tuán)取代；每個(gè)D單獨(dú)地選自C、CH、C-R20、N_Z3、N、0和S，從而得到的環(huán)選自吡唑基、三唑
基、異噁唑基、異噻唑基、噁唑基和噻二唑基；其中E選自苯基、吡啶基和嘧啶基；當(dāng)Q1和Q2都是N時(shí)，A環(huán)選自環(huán)戊基、環(huán)己基、G1、G2和G3 ；當(dāng)僅Q1和Q2之一是N時(shí)，A環(huán)選自環(huán)戊基、環(huán)己基、G1、G2、G3和G4 ；G1是選自以下基團(tuán)的雜芳基吡咯基、呋喃基、噻吩基、噁唑基、噻唑基、異噁 唑-4-基、異噁唑-5-基、異噻唑基、咪唑基、吡唑基、噁二唑基、噻二唑基、三唑基和四唑 基；G2是選自以下基團(tuán)的稠合雙環(huán)雜芳基噴哚基、二氫吲哚基、異吲哚基、異二氫吲 哚基、吲唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并噻唑基、苯并噻唑酮基、苯并噁唑基、苯并噁唑 酮基、苯并異噁唑基、苯并異噻唑基、苯并咪唑基、苯并咪唑酮基、苯并三唑基、咪唑并吡啶 基、吡唑并吡啶基、咪唑酮并吡啶基、噻唑并吡啶基、噻唑酮并吡啶基、噁唑并吡啶基、噁唑 酮并吡啶基、異噁唑并吡啶基、異噻唑并吡啶基、三唑并吡啶基、咪唑并嘧啶基、吡唑并嘧啶 基、咪唑酮并嘧啶基、噻唑并嘧啶基、噻唑酮并嘧啶基、噁唑并嘧啶基、噁唑酮并嘧啶基、異 噁唑并嘧啶基、異噻唑并嘧啶基、三唑并嘧啶基、二氫嘌呤酮基、吡咯并嘧啶基、嘌呤基、吡 唑并嘧啶基、鄰苯二甲酰亞氨基、苯并[c]吡咯酮基、吡嗪基吡啶基、吡啶并嘧啶基、嘧啶并 嘧啶基、噌啉基、喹喔啉基、喹唑啉基、喹啉基、異喹啉基、2，3-二氮雜萘基、苯并二氧雜環(huán)戊 烯基、苯并異噻唑啉-1，1，3-三酮基、二氫喹啉基、四氫喹啉基、二氫異喹啉基、四氫異喹啉 基、苯并氮雜革.基、苯并二氮雜革基、苯并氧雜革基和苯并氧氮雜革,基；G3是選自以下基團(tuán)的雜環(huán)基氧雜環(huán)丁烷基、氮雜環(huán)丁烷基、四氫呋喃基、吡咯烷 基、噁唑啉基、噁唑烷基、咪唑酮基、吡喃基、噻喃基、四氫吡喃基、二氧戊環(huán)基、哌啶基、嗎啉 基、硫代嗎啉基、硫代嗎啉基S-氧化物、硫代嗎啉基s-二氧化物、哌嗪基、氮雜革基、氧雜革 基、二氮雜革基、托烷基和高托烷基；G4選自苯基、萘基、吡嗪基、噠嗪基、三嗪基、吡啶基和嘧啶基；A環(huán)被一個(gè)-(X1-A1)基團(tuán)或一個(gè)A1基團(tuán)取代，并且可以任選地被一個(gè)或兩個(gè)R2 基團(tuán)取代；當(dāng)A是苯基且E是苯基時(shí)，則Z1不能是-0(012)#5、-(012)1)-63或-(012)1^5 ；A1 選自苯基、G1、G3 和 G4;XI 選自連接 A 和 A1 環(huán)的直接的鍵、-(CH2) n (0) r (CH2) n_、- (CH2) n (NR3) r (CH2) n-、-(CH2)n(S)r(CH2)n-、-(CH2)n(C(0))r(CH2)n-、- (CH2) n(C (0) NR3) r (CH2) n-和-(CH2) n(S02NR3),(CH2)n-，其中任何亞烷基可以是直鏈或支鏈；當(dāng)XI是直接的鍵時(shí)，E被一個(gè)或兩個(gè)R16基團(tuán)取代；
當(dāng)Xl不是直接的鍵時(shí)，E任選地被一個(gè)或兩個(gè)R16基團(tuán)取代；X2 選自-0-、-S (CH2) n_、-N (R3) (CH2) n_、- (CH2) p-，并且其中X2 的-(CH2) n_、- (CH2) p-的碳原子可以被氧代或者一個(gè)或多個(gè)C1-C6烷基基團(tuán)進(jìn)一步取代；當(dāng)Α、Al、GU G2、G3或G4含有一個(gè)或多個(gè)可取代的sp2_雜化的碳原子時(shí)，每個(gè) sp2-雜化的碳原子分別可以任選地被Zl取代基取代；當(dāng)A、A1、G1、G2或G3含有一個(gè)或多個(gè)可取代的sp3_雜化的碳原子時(shí)，每個(gè)sp3_雜 化的碳原子分別可以任選地被Z2取代基取代；當(dāng)A、Al、Gl、G2或G3含有一個(gè)或多個(gè)可取代的氮原子時(shí)，每個(gè)氮原子分別可以任 選地被Z4取代基取代；每個(gè)Zl獨(dú)立地并單獨(dú)地選自C1_C6烷基、支鏈C3-C7烷基、C3-C8環(huán)烷 基、鹵素、其中烷基部分可被部分或完全氟化的氟代C1-C6烷基、氰基、C1-C6烷 氧基、其中烷基部分可被部分或完全氟化的氟代C1-C6烷氧基、-(CH2)n0H、氧代、 C1-C6 烷氧基 C1-C6 烷基、(R4)2N(CH)n-、(R3)2N(CH)n-、(R4) 2N(CH2) qN(R4) (CH2)n-, (R4)2N (CH2) ,O(CH2)n-. (R3)2NC(0)-、(R4)2NC(0)-、(R4) 2NC (0) C1—C6 烷基-、-(R4) NC (0) R8、C1-C6烷氧基羰基-、_羧基C1-C6烷基、C1-C6烷氧基羰基C1-C6烷基-、 (R3)2NS02-、-S0R3、(R4)2NS02-、_N(R4)S02R5、_N(R4)S02R8、-0 (CH2) q0Cl-C6 烷基、-O(CH2) qR5、-S02R3、-S0R4、-S (0) 2R5、- (CH2) nC (0) R5、-C (0) R8、-C (0) R6、-C ( = NOH) R6、-C ( = N0R3) R6、- (CH2) nN (R4) C (0) R8、- (CH2) n_Gl、- (CH2) n-G4、苯氧基、-(CH2) n0 (CH2) n_Gl、- (CH2) p0 (CH2) n-G4、-N(R3) (CH2)qO-烷基、_N(R3) (CH2) qN(R4)2, _N(R3) (CH2) qR5, - (CH2)nN(R3) (CH2)n-芳 基、-(CH2)nN(R3) (CH2)n-GU - (CH2)nN(R3) (CH2)n_G4、硝基、-(CH2)nNHC(O) (CH2)nR5、-(CH2) nNHS (O)2 (CH2) nR5、-(CH2)nC(O) NH (CH2) qR5, - (CH2) n0C (0) R5、-CH(OH) (CH2) PR5、-CH(OH) CH (OH) R4、- (CH2) nR5、-C ( = NH) R5、-C ( = NH) N (R4) 2、-C ( = N0R3) R5、-C ( = N0R3) N (R4) 2 禾口 -NHC ( = NH) R8 ；在Zl含有烷基或亞烷基部分(moiety)的情況下，所述部分可被一個(gè)或多個(gè)C1-C6 烷基進(jìn)一步取代；每個(gè)Z2獨(dú)立地并單獨(dú)地選自芳基、C1-C6烷基、C3-C8環(huán)烷基、支鏈的C3-C7烷 基、羥基、羥基 C1-C6 烷基-、氰基、(R3)2N-、(R4)2N-、(R4)2NC1-C6 烷基-、(R4)2NC2_C6 烷 基 N (R4) (CH2) n-、(R4) 2NC2-C6 烷基 0 (CH2) n-、(R3) 2NC (0) -、(R4) 2NC (0) -、(R4) 2NC (0) -C1-C6 烷基_、羧基、-羧基C1-C6烷基、C1-C6烷氧基羰基_、C1-C6烷氧基羰基C1-C6烷基-、 (R3)2NS02-、(R4)2NS02-、-S02R5、_S02R8、- (CH2) nN (R4) C (0) R8, -C(0)R8、= 0、= NOH、= N (0R6)、- (CH2) n_Gl、_ (CH2) n_G4、_ (CH2) n0 (CH2) n_Gl、_ (CH2) n0 (CH2) n_G4、_ (CH2) nN (R3) (CH2) n-芳基、_ (CH2)nN(R3) (CH2)n-GU - (CH2)nN(R3) (CH2)n_G4、-(CH2)nNHC(O) (CH2)nR5、-(CH2) nNHS (0) 2 (CH2) nR5、- (CH2) nC (0) NH (CH2) qR5、- (CH2) nC (0) R5、- (CH2) n0C (0) R5 和-(CH2) nR5 ；在Z2含有烷基或亞烷基部分的情況下，所述部分可被一個(gè)或多個(gè)C1-C6烷基進(jìn)一 步取代；每個(gè)Z3獨(dú)立地并單獨(dú)地選自H、C1-C6烷基、支鏈的C3-C7烷基、C3-C8環(huán)烷基、 其中烷基部分可被部分或完全氟化的氟代C1-C6烷基、羥基C2-C6烷基-、C1-C6烷氧基羰 基-、-C(0)R8、R5C(0) (CH2)n-, (R4)2NC(0)-、(R4) 2NC (0) C1-C6 烷基-、R8C(0)N(R4) (CH2)q-, (R3) 2NS02-、(R4) 2NS02-、- (CH2) qN (R3) 2 和-(CH2) qN (R4) 2 ；
每個(gè)Z4獨(dú)立地并單獨(dú)地選自C1_C6烷基、支鏈的C3-C7烷基、羥基C2-C6烷基-、 C1-C6 烷氧基 C2-C6 烷基-、(R4)2N-C2-C6 烷基-、(R4)2N_C2_C6 燒基 N (R4)-C2-C6 烷基-、 (R4)2N-C2-C6 烷基-0-C2-C6 烷基-、(R4) 2NC (0) C1-C6 烷基-、羧基 C1-C6 烷基、C1-C6 烷 氧基羰基 C1-C6 烷基 _、-C2-C6 ^^N(R4)C(0) R8, R8_C( = NR3)-、_S02R8、-C0R8、-(CH2) n-Gl、-(CH2)n-G4、-(CH2)q0(CH2)n-Gl、- (CH2) q0 (CH2) n_G4、- (CH2) qNR3 (CH2) n_Gl、_(CH2) qNR3 (CH2) n-G4、- (CH2) qNHC (0) (CH2) nR5、- (CH2) qC (0) NH (CH2) qR5、- (CH2) qC (0) R5、- (CH2) q0C (0) R5、- (CH2) qR5、- (CH2) qNR4 (CH2) qR5 和-(CH2) q0 (CH2) qR5 ；在Z4含有烷基或亞烷基部分的情況下，所述部分可被一個(gè)或多個(gè)C1-C6烷基進(jìn)一 步取代；每個(gè)R2選自H、R17_取代的芳基-、R17_取代的G1、R17_取代的G4、C1_C6烷基、 支鏈的C3-C8烷基、R19取代的C3-C8環(huán)烷基_、其中烷基被完全或部分氟化的氟代C1-C6 烷基、鹵素、氰基、C1-C6烷氧基-和其中烷基基團(tuán)被完全或部分氟化的氟代C1-C6烷氧基、 羥基取代的C1-C6烷基_、羥基取代的支鏈的C3-C8烷基_、氰基取代的C1-C6烷基-、氰基 取代的支鏈的C3-C8烷基-、(R3) 2NC (0) C1-C6烷基-、(R3) 2NC (0) C3-C8支鏈的烷基-；其中每個(gè)R3獨(dú)立地并單獨(dú)地選自H、C1_C6烷基、支鏈的C3-C7烷基和C3-C8環(huán)烷 基；每個(gè)R4獨(dú)立地并單獨(dú)地選自H、C1-C6烷基、羥基C1-C6烷基_、二羥基C1-C6烷 基_、C1-C6烷氧基C1-C6烷基_、支鏈的C3-C7烷基_、支鏈的羥基C1-C6烷基-、支鏈的 C1-C6 烷氧基 C1-C6 烷基 _、支鏈的二羥基 C1-C6 烷基-、_(CH2)pN(R7)2、-(CH2)pR5、-(CH2) pC(0)N(R7)2、-(CH2)nC(0)R5、-(CH2)nC(0)0R3、R19 取代的 C3-C8 環(huán)烷基-；每個(gè)R5獨(dú)立地并單獨(dú)地選自 并且其中符號(hào)(##)是連接至各個(gè)含有R5基團(tuán)的R4、R7、R8、Z2、Z3或Z4基團(tuán)的 位點(diǎn)；每個(gè)R6獨(dú)立地并單獨(dú)地選自C1-C6烷基、支鏈的C3-C7烷基、R19取代的C3-C8環(huán) 烷基-、苯基、G1和G3 ；每個(gè)R7獨(dú)立地并單獨(dú)地選自H、C1-C6烷基、羥基C2-C6烷基_、二羥基C2-C6烷 基-、C1-C6烷氧基C2-C6烷基_、支鏈的C3-C7烷基、支鏈的羥基C2-C6烷基-、支鏈的C1-C6 烷氧基 C2-C6 烷基 _、支鏈的二羥基 C2-C6 烷基 _、_(CH2)qR5、_(CH2)nC(0)R5、_(CH2)nC(0) 0R3、R19 取代的 C3-C8 環(huán)烷基-和 _(CH2)nR17 ；每個(gè)R8獨(dú)立地并單獨(dú)地選自C1_C6烷基、支鏈的C3-C7烷基、其中烷基部分被部 分或完全氟化的氟代C1-C6烷基-、R19取代的C3-C8環(huán)烷基-、苯基、苯基C1-C6烷基-、 Gl-、G1-C1-C6 烷基-、G4- (CH2) n-、OH、C1-C6 烷氧基、-N (R3) 2、-N (R4) 2 和 R5 ；每個(gè)R10 獨(dú)立地并單獨(dú)地選自-C02H、-C02C1-C6 烷基、_C (0) N (R4) 2、OH、C1-C6 烷 氧基和-N(R4)2 ；
每個(gè)R16獨(dú)立地并單獨(dú)地選自C1_C6烷基、支鏈的C3-C7烷基、R19取代的C3-C8 環(huán)烷基_、鹵素、其中烷基部分可被部分或完全氟化的氟代C1-C6烷基_、氰基、羥基、C1-C6 烷氧基、其中烷基部分可被部分或完全氟化的氟代C1-C6烷氧基-、-N(R3)2、-N(R4)2、R3取 代的C2-C3炔基-和硝基；每個(gè)R17獨(dú)立地并單獨(dú)地選自H、C1-C6烷基、支鏈的C3-C7烷基、R19取代的 C3-C8環(huán)烷基-、鹵素、其中烷基部分可被部分或完全氟化的氟代C1-C6烷基_、氰基、羥基、 C1-C6烷氧基、其中烷基部分可被部分或完全氟化的氟代C1-C6烷氧基-、-N(R3)2、-N(R4)2 和硝基；每個(gè)R19獨(dú)立地并單獨(dú)地選自H、OH和C1-C6烷基；每個(gè)R20獨(dú)立地并單獨(dú)地選自C1_C6烷基、支鏈的C3-C7烷基、R19取代 的C3-C8環(huán)烷基-、鹵素、其中烷基部分可被部分或完全氟化的氟代C1-C6烷基-、 氰基、羥基、C1-C6烷氧基、其中烷基部分可被部分或完全氟化的氟代C1-C6烷氧 基-、-N (R3) 2、-N (R4) 2、-N (R3) C (0) R3、-C (0) N (R3) 2 和硝基；其中兩個(gè)R4基團(tuán)獨(dú)立地并單獨(dú)地選自C1_C6烷基、支鏈的C3-C6烷基、羥基烷 基_和烷氧基烷基，并且連接到同一個(gè)氮雜原子，可以環(huán)化形成C3-C7雜環(huán)基環(huán)；k 是 0 或 1 ;n 是 0-6 ;p 是 1-4 ；q 是 2-6 ;r 是 0 或 1 ;t 是 1-3 ;v 是 1 或 2 ;x 是 0-2 ；上述化合物的立體異構(gòu)體、區(qū)域異構(gòu)體和互變異構(gòu)體；并且前提是Al是G3、咪唑基或吡唑基時(shí)，則Xl不是直接的鍵。1. 1例示優(yōu)選的下式結(jié)構(gòu)的式Ia化合物 在式Ia化合物的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述化合物具有優(yōu)選的—KoY其選 其中符號(hào)Γ*)表示連接至芳香環(huán)的位點(diǎn)。1. 1. 1例示優(yōu)選的El和Χ3基團(tuán)的式Ia化合物在式Ia化合物的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述化合物具有式Ib的結(jié)構(gòu) 其中A是吡唑的任何可能的異構(gòu)體。1. 1. 2例示優(yōu)選的A、D環(huán)和R16基團(tuán)的式Ib化合物在式Ib化合物的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述化合物具有式Ic的結(jié)構(gòu) 1. 1. 3例示優(yōu)選的A、D環(huán)和R16基團(tuán)的式Ib化合物在式Ib化合物的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述化合物具有式Id的結(jié)構(gòu)





1. 1. 4例示優(yōu)選的A、D環(huán)和R16基團(tuán)的式lb化合物
在式lb化合物的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述化合物具有式Ie的結(jié)構(gòu)
1. 1. 5例示優(yōu)選的A基團(tuán)的式la化合物
在式la化合物的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述化合物具有式If的結(jié)構(gòu)
其中A選自苯基、吡啶和嘧啶的任何可能的異構(gòu)體。
1. 1. 6例示優(yōu)選的A、D環(huán)和R16基團(tuán)的式If化合物
在式If化合物的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述化合物具有式Ig的結(jié)構(gòu)
1. 1. 7例示優(yōu)選的A、D環(huán)和R16基團(tuán)的式If化合物
在式If 化合物的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述化合物具有式Ih的結(jié)構(gòu) 1. 1. 8例示優(yōu)選的A、D環(huán)和R16基團(tuán)的式If化合物在式If化合物的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述化合物具有式Ii的結(jié)構(gòu) 1. 1. 29最優(yōu)選的式Ia化合物l-(3-叔 丁基-1-苯基-IH-吡唑-5-基)-3_(2_ 氟 _4-(2_(1-甲基-IH-批 唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1- (1- (3-氰基苯基)-3-異丙基-IH-吡唑 _5_ 基)~3~ (2~ 氟 _4_ (2_ (1_ 甲 基-IH-吡唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(4- (2- (1H-吡唑_4_基)吡啶 _4_基氧基)_2_氟苯基)_3_ (3_叔丁基 (3_氰 基苯基)-IH-吡唑-5-基)脲，乙酸4-(3-叔丁基-5-(3-(2-氟-4-(2-(1-甲基-IH-吡唑 _4_ 基)吡啶 _4_ 基 氧基)苯基)脲基)-IH-吡唑-1-基)芐基酯，1-(3-叔 丁基-1-(3-氰基苯基)-1Η-吡唑 _5_ 基)-3_(2_ 氟 _4-(2-(1_ 甲 基-IH-吡唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(3-叔丁基-1- (4-氟苯基)-IH-吡唑 _5_ 基)~3~ (2~ 氟 _4_ (2_ (1_ 甲基-IH-吡 唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲1- (1- (3-氰基-4-氟苯基)-3-異丙基-IH-吡唑 _5_ 基)~3~ (2~ 氟 _4_ (2_ (1_ 甲 基-IH-吡唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(3-叔 丁基-1-(4-氰基苯基)-1Η-吡唑 _5_ 基)_3_(2-氟 _4-(2_(1-甲 基-IH-吡唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1- (1- (4-氰基苯基)-3-異丙基-IH-吡唑 _5_ 基)~3~ (2~ 氟 _4_ (2_ (1_ 甲 基-IH-吡唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，3-(3-叔丁基-5-(3-(2-氟-4-(2-(1-甲基-IH-吡唑 _4_ 基)吡啶 _4_ 基氧基) 苯基)脲基)-IH-吡唑-1-基)苯甲酸乙酯，1-(3-叔丁基-1-(3-(羥基甲基)苯基)-IH-吡唑-5-基)-3-(2-氟-4-(2-(1-甲 基-IH-吡唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，3-(3-叔丁基-5-(3-(2-氟-4-(2-(1-甲基-IH-吡唑 _4_ 基)吡啶 _4_ 基氧基) 苯基)脲基)-IH-吡唑-1-基)苯甲酸，1-(3-叔丁基-1-(4-(羥基甲基)苯基)-IH-吡唑-5-基)-3-(2-氟-4-(2-(1-甲 基-IH-吡唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(1-(3-氰基苯基)-3-乙基-IH-吡唑 _5_基)_3_(2-氟 _4_(2~(1~ 甲基-IH-批 唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(2-叔丁基-4-苯基嘧啶-5-基)-3- (2~ 氟 _4_ (2~(1~ 甲基-IH-吡唑 _4_ 基) 吡啶-4-基氧基)苯基)脲，
1- (1- (3-氰基-4-甲基苯基)-3-異丙基-IH-吡唑 _5_基)_3_ (2_ 氟 _4_ (2_ (1_ 甲基-IH-吡唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1- (1- (3-氰基苯基)-3-異丙基-IH-吡唑 _5_ 基)~3~ (2~ 氟 _3_ 甲基 _4_ (2_ (1_ 甲 基-IH-吡唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(1-(3-氰基苯基)-3-異丙基-IH-吡唑 _5_ 基)-3_(2，3_ 二氟 _4-(2_(1-甲 基-IH-吡唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(2-氟-4-(2-(1-甲基-IH-吡唑-4-基)吡啶_4_基氧基)苯基)-3-(2-甲 基-4-苯基嘧啶-5-基)脲，1- (1- (3-氰基苯基)-3-乙基-IH-吡唑 _5_ 基)_3_ (2_ 氟 _4_ (2_ (1_ 丙基-IH-吡 唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(1-(3-氰基苯基)-3_ 異丙基-IH-吡唑 _5_ 基)_3_(3-氟 _4-(2_(1-甲 基-IH-吡唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(1-(3-氰基苯基)-3_ 乙基-IH-吡唑 _5_ 基)_3_(2-氟 _4-(2_(1-異丙 基-IH-吡唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(1-(3_ 氰基苯基)-3_ 乙基-IH-吡唑-5-基)-3-(4-(2-(1-乙基-IH-吡 唑-4-基)吡啶-4-基氧基)-2-氟苯基)脲，1-(3-乙基-1-(4-(羥基甲基)苯基)-IH-吡唑-5-基)-3-(2-氟-4-(2-(1-甲 基-IH-吡唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(2-氟-4-(2-(1-甲基-IH-吡唑-4-基)吡啶_4_基氧基)苯基)-3_(1_異丙 基-5-苯基-IH-吡唑-4-基)脲，1-(2-氟-4-(2-(1-甲基-IH-吡唑-4-基)吡啶_4_基氧基)苯基)-3_(1_異丙 基-3-苯基-IH-吡唑-4-基)脲，1- (1-乙基-5-苯基-IH-吡唑-4-基)~3~ (2~ 氟 _4_ (2~(1~ 甲基-IH-吡唑-4-基) 吡啶-4-基氧基)苯基)脲， 1- (1-乙基-3-苯基-IH-吡唑-4-基)~3~ (2~ 氟 _4_ (2~(1~ 甲基-IH-吡唑-4-基) 吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(3-乙基-1-(3-(羥基甲基)苯基)-IH-吡唑 _5_ 基)_3_ (2_ 氟 ~4~ (2_ (1_ 甲 基-IH-吡唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(1-(3-氰基苯基)-3-甲基-IH-吡唑 _5_基)_3_(2-氟 _4_(2~(1~ 甲基-IH-批 唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(3- (3-氰基苯基)-1-異丙基-IH-吡唑 _4_ 基)~3~ (2~ 氟 _4_ (2_ (1_ 甲 基-IH-吡唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(2-氟-4-(2-(1-甲基-IH-吡唑-4-基)吡啶_4_基氧基)苯基)_3_ (1_ (3_氟 苯基)-3-異丙基-IH-吡唑-5-基)脲，1-(3-叔丁基-1-苯基-IH-吡唑-5-基)~3~ (2，3_ 二氟 ~4~ (2~(1~ 甲基-IH-批 唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(2，3- 二氟-4-(2-(l-甲基-IH-吡唑_4_基)吡啶4-基氧基)苯 基)-3- (3- (2-氟苯基)-1-甲基-IH-吡唑-5-基)脲，1- (1，3- 二苯基-IH-吡唑-5-基)~3~ (2~ 氟 ~4~ (2~(1~ 甲基-IH-吡唑 ~4~ 基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(2，3-二氟-4-(2-(1-甲基_111-吡唑-4-基)吡啶 _4_ 基氧基)苯基)_3_(1， 3- 二苯基-1H-吡唑-5-基)脲和1-(5-氯-2-苯基苯基)-3- (2-氟-4- (2_ (1_甲基_1H_吡唑_4_基)吡啶_4_基 氧基)苯基)脲。1.2 方法1.2a蛋白質(zhì)調(diào)節(jié)的方法本發(fā)明包括調(diào)節(jié)多種激酶的激酶活性的方法，所述激酶諸如C-Abl激酶、bcr-Abl 激酶、VEGFR-2 激酶突變體、c-Met、HER 家族的激酶、FGFR、Flt_3、c_Kit、PDGFR a、PDGFR3 和Raf家族的激酶。所述激酶可以是野生型激酶、其致癌形式、其異常融合蛋白或前述中的 任一種的多形體。所述方法包括使激酶物類(lèi)(species)接觸本發(fā)明的化合物且特別是第1 部分所示出的那些化合物的步驟。激酶物類(lèi)可以是活化的或未活化的，且所述物類(lèi)可通過(guò) 磷酸化、硫酸化、脂肪酸?；腔?、亞硝基化、胱氨酸基化(cystinylation)(即激酶中最 接近的半胱氨酸殘基相互反應(yīng)以形成二硫鍵)或氧化來(lái)調(diào)節(jié)。激酶活性可選自催化磷酸 基轉(zhuǎn)移反應(yīng)；通過(guò)另一種酶抑制所述激酶的磷酸化、氧化或亞硝基化；通過(guò)另一種酶增強(qiáng) 所述激酶的去磷酸化、還原或去亞硝基化；激酶細(xì)胞定位；和通過(guò)調(diào)節(jié)激酶構(gòu)象將其他蛋 白質(zhì)募集到信號(hào)復(fù)合體(signaling complex)。1.2b治療方法本發(fā)明的方法還包括治療患有選自癌癥、過(guò)度增生性疾病、代謝疾病、神經(jīng)變性疾 病或特征為血管發(fā)生的疾病的疾患的個(gè)體。這些方法包括向所述個(gè)體施用本發(fā)明的化合 物，且特別是第1部分的那些化合物，所述疾病包括但不限于實(shí)體腫瘤、惡性黑素瘤、成膠 質(zhì)細(xì)胞瘤、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肺癌、乳腺癌、腎癌、肝癌、宮頸癌、原發(fā)腫瘤部位的轉(zhuǎn) 移、骨髓增生性癥病、慢性髓細(xì)胞性白血病、白血病、乳頭狀甲狀腺癌、非小細(xì)胞肺癌、間皮 瘤、嗜酸細(xì)胞增多綜合征、胃腸道間質(zhì)腫瘤、結(jié)腸癌、以引起失明的過(guò)度增生為特征的眼病 包括多種視網(wǎng)膜病、糖尿病性視網(wǎng)膜病和年齡相關(guān)性黃斑變性、和嗜酸細(xì)胞增多綜合征、類(lèi) 風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、哮喘、慢性阻塞性肺病、肥大細(xì)胞增多癥、肥大細(xì)胞白血??；由c-Abl激酶、 其致癌形式、其異常融合蛋白及其多形體引起的疾病；由c-Kit激酶、其致癌形式、其異常 融合蛋白及其多形體引起的疾??；由c-Met激酶、其致癌形式、其異常融合蛋白及其多形體 引起的疾?。换蛴蒖af激酶、其致癌形式、其異常融合蛋白及其多形體引起的疾病。施用方 法并不重要，并且可選自口服、胃腸外、吸入和皮下施用。1.3藥物制劑本發(fā)明的化合物特別是第1部分的那些化合物可通過(guò)使一種或多種所述化合物 和藥學(xué)上可接受的載體組合而構(gòu)成藥物組合物的一部分。此外，組合物可包含選自輔助劑、 賦形劑、稀釋劑和穩(wěn)定劑的添加劑。第2部分本發(fā)明的化合物的合成本發(fā)明的化合物可通過(guò)以下方法獲得作為參考引入的W02006/071940的方法和 教導(dǎo)，以及以下流程和伴隨的實(shí)施例所闡述的通用合成方法。如流程1所示，通過(guò)聯(lián)合通式1的胺和異氰酸酯^或異氰酸酯代替物i (氨基甲酸 三氯乙酯)或互(氨基甲酸異丙烯酯)，可容易地制備通式丄的脲。制備通式丄的化合物的優(yōu)選條件包括在50°C到100°C之間的溫度下、在諸如二甲基甲酰胺、二甲基亞砜、四氫呋喃 或1，4_二氧六環(huán)的溶劑中、在諸如二異丙基乙胺、三乙胺或N-甲基吡咯烷的叔堿的存在下 將4或互禾P之的溶液加熱1小時(shí)至2天。
流程1如流程2中所示，異氰酸酯^可由胺A_NH2 g和光氣或光氣等價(jià)物諸如雙光氣、三 光氣或N，N-二羰基咪唑來(lái)制備。通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員熟悉的標(biāo)準(zhǔn)條件，通過(guò)用氯甲酸三氯 乙酯或氯甲酸異丙烯酯酰化胺A-NH2I§1，可容易地制備氨基甲酸三氯乙酯1和氨基甲酸異 丙烯酯互。制備1和3的優(yōu)選條件包括在諸如二氯甲烷的非質(zhì)子溶劑中在吡啶存在下或在 兩相的水/乙酸乙酯溶劑系統(tǒng)中在含水(aqueous)氫氧化物或碳酸鹽存在下，用合適的氯 甲酸酯處理化合物互。 流程2此外，如流程3所示，還可由羧酸Z通過(guò)反應(yīng)中間原位產(chǎn)生的酰疊氮類(lèi)(Curtius 重排)，制備式丄的化合物。流程3的優(yōu)選條件包括在諸如三乙胺的堿的存在下將酸Z與胺 2和疊氮化磷酸二苯酯混合于諸如1，4_ 二氧六環(huán)或二甲基甲酰胺的溶劑中，并將反應(yīng)的溫 度升高至約80°C -120°C以實(shí)現(xiàn)Curtius重排。 流程3根據(jù)A-基團(tuán)的性質(zhì)，存在制備胺A_NH2 g和酸A-C02H Z的許多方法。許多這樣的 方法已詳細(xì)描述在W0 2006/071940中，并在此將其引入作為參考。對(duì)于其中A是1-取代 的_吡唑(任選地被R2取代)，或A和A1通過(guò)C-C鍵連接的非限制性實(shí)例，以下方案概述 了優(yōu)選的合成方法。
如流程4中所示，A1取代的吡唑胺邊(A_NH2 &的優(yōu)選方面，流程2)可通過(guò)縮合胼 §和酮腈2獲得。這一轉(zhuǎn)化的優(yōu)選條件是在HC1的乙醇溶液中加熱。而胼§可通過(guò)使 胺11重氮化然后還原獲得，或可選地通過(guò)水解腙叢獲得，腙叢通過(guò)鈀介導(dǎo)的二苯甲酮腙 與式A1-X 11化合物的偶聯(lián)獲得，其中X表示鹵素或三氟甲磺酸酯基團(tuán)。
流程4
將用于形成Al-取代的吡唑類(lèi)的另一個(gè)優(yōu)選方法通過(guò)吡唑酸叢(流程5) (A-C02H
Z(流程3)的一個(gè)方面)的通用制備來(lái)舉例說(shuō)明。如流程5所示，吡唑5-羧酸酯H與A1-X 叢(其中X代表適于與吡唑li進(jìn)行直接過(guò)渡金屬催化偶聯(lián)的鹵化物、三氟甲磺酸酯或硼 酸)聯(lián)合得到A1-取代的吡唑酯類(lèi)叢。用于所述轉(zhuǎn)化的優(yōu)選條件包括在加熱或不加熱的 情況下，在碾碎的分子篩存在下，將硼酸12[X = B(0H)2]和在二氯甲烷中的乙基酯類(lèi)、芐基 酯類(lèi)或叔丁酯類(lèi)11與乙酸酮和吡啶混合。接著，用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟悉的條件能將酯邊 轉(zhuǎn)化成酸邊。 流程5通用流程5的非限制性示例見(jiàn)于流程6，其中在乙酸酮(II)和吡啶存在下，將吡唑 酯11與硼酸叢混合，得到N-芳基吡唑邊。使用氫氧化鋰或其它等同方法皂化酯19得到 酸巡，即上述通用中間體7的示例。 流程6流程7顯示了用于形成其中A和A1通過(guò)C-C鍵連接的式丄的化合物的中間體的 通用合成。在這一情況中，A1-X叢與互補(bǔ)成分豇或絲的鈀催化反應(yīng)(例如Suzuki或Stille反應(yīng))分別產(chǎn)生化合物型或M，即通用中間體A_NH2互或A-C02H Z的實(shí)例。在這 一合成序列中，反應(yīng)物叢和11或絲上的X基團(tuán)是進(jìn)行過(guò)渡金屬催化的交叉偶聯(lián)反應(yīng)的基 團(tuán)，例如商化物或三氟甲磺酸酯和硼酸或硼酸酯、錫烷類(lèi)、硅烷類(lèi)、有機(jī)鋅類(lèi)或本領(lǐng)域技術(shù) 人員所知的為所述過(guò)程的合適底物的其他有機(jī)金屬基團(tuán)。流程7中的X基團(tuán)是交叉偶聯(lián)過(guò) 程的互補(bǔ)基團(tuán)，使得當(dāng)A1-X 11是鹵化物或三氟甲磺酸酯時(shí)，A-X 11或A-X絲將是互補(bǔ)的 有機(jī)金屬例如錫烷等或者硼酸或硼酸酯。同樣地，如果A1-X 11是有機(jī)金屬試劑或者硼酸 或硼酸酯，那么A-X將是鹵化物或三氟甲磺酸酯。
流程7在流程7中，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，11和絲的Y基團(tuán)有另外的合成等價(jià)物，該 合成等價(jià)物通過(guò)增加額外的轉(zhuǎn)化步驟可與NH2和C02H互換使用。例如，11的Y基團(tuán)還可以 是保護(hù)的氨基如N-Boc或替代的氨基如硝基，其分別在酸水解或還原后產(chǎn)生式型化合物。 相似地，應(yīng)當(dāng)認(rèn)識(shí)到，絲的Y基團(tuán)還可以是通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)合成方法可水解成式M的酸的酯。通過(guò)以上通用中間體A-C02HZ的實(shí)例即化合物巡的制備來(lái)闡明流程7的非限制 性實(shí)例。因此，在鈀催化劑的存在下，碘代酯巡可與苯基硼酸巡結(jié)合以產(chǎn)生化合物叢。酯 27的皂化產(chǎn)生酸巡，即以上通用中間體A-C02H 7的實(shí)例。 流程8與以上的流程1和2類(lèi)似，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)認(rèn)識(shí)到還可以通過(guò)胺A-NH2 6與 異氰酸酯巡(流程9)的聯(lián)合來(lái)制備式丄化合物?？梢酝ㄟ^(guò)標(biāo)準(zhǔn)合成方法由通用的胺2制 備異氰酸酯巡。合適的方法例如包括2與光氣或光氣等同物如雙光氣、三光氣或N，N-二 羰基咪唑反應(yīng)。除了上述將胺2轉(zhuǎn)化成為異氰酸酯巡的方法外，還可以通過(guò)Curtius重排 及其變體原位制備異氰酸酯巡。本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)該進(jìn)一步認(rèn)識(shí)到異氰酸酯巡不需分 離，而是可以在原位簡(jiǎn)單地生成。因此，在分離或不分離巡的情況下，都能將酸巡轉(zhuǎn)化成 式丄化合物。用于將酸巡直接轉(zhuǎn)化成式丄化合物的優(yōu)選條件包括在非質(zhì)子溶劑如二氧六 環(huán)中，混合酸巡、胺A-NH2 5、疊氮化磷酸二苯酯和適當(dāng)?shù)膲A如二異丙基乙胺。加熱該混合 物至80-120°C，得到式1化合物。
流程9此外，還可以通過(guò)首先制備穩(wěn)定的異氰酸酯等同物如氨基甲酸酯類(lèi)，由胺2制備 式1化合物(流程10)。特別優(yōu)選的氨基甲酸酯類(lèi)包括氨基甲酸三氯乙基酯類(lèi)(叢)和氨 基甲酸異丙烯基酯類(lèi)(型)，使用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟悉的標(biāo)準(zhǔn)條件，通過(guò)分別用氯甲酸三氯 乙基酯或氯甲酸異丙烯基酯進(jìn)行?；?，從胺2能容易地制備所述氨基甲酸三氯乙基酯(SD 和氨基甲酸異丙烯基酯(勁。氨基甲酸酯肚或型與胺A-NH2 &進(jìn)一步反應(yīng)得到式丄化合 物。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該進(jìn)一步認(rèn)識(shí)到某些氨基甲酸酯類(lèi)還可以通過(guò)Curtius重排并用醇 共溶劑捕獲而由酸巡制備。例如，在升高的溫度下用疊氮化磷酸二苯酯和三氯乙醇處理酸 迎(流程9)得到式丑的氨基甲酸酯類(lèi)。 流程10根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員普遍已知的方法，可合成用于本發(fā)明的胺1如以下的非限 制性流程所闡明，通式2的胺含有3個(gè)環(huán)，并可以通過(guò)3個(gè)單環(huán)亞單位的逐步連接來(lái)制備。 流程11舉例說(shuō)明了一種構(gòu)建模式，其中含有E的亞單位迎與含有中心六元環(huán)的亞單位M 結(jié)合，得到雙環(huán)的中間體迎。在流程11的一方面，衛(wèi)的“M”基團(tuán)表示參加與單環(huán)巡的芳 香親核取代反應(yīng)的X2聯(lián)結(jié)體上的雜原子的氫原子。堿(例如叔丁醇鉀)的存在可有利于 所述反應(yīng)，因此M還可以表示醇鹽、硫化物或酰胺(amide)基團(tuán)中的適當(dāng)?shù)目购怆x子(例如鉀、鈉、鋰或銫)?；蛘?，“M”基團(tuán)可表示能進(jìn)行過(guò)渡金屬介導(dǎo)的與單環(huán)巡的偶聯(lián)的X2基團(tuán) 的碳原子上的金屬種類(lèi)(例如銅、硼、錫、鋯、鋁、鎂、鋰、硅等)。單環(huán)類(lèi)迎的“Y”基團(tuán)是胺或胺代替物，例如被保護(hù)基掩蔽的胺(在式巡中的 “P”)、硝基或者能用于通過(guò)已知重排制備胺的羧酸或酯。合適的保護(hù)基“P”的示例包括但 不限于叔丁氧羰基(Boc)、芐氧羰基(Cbz)和乙酰胺。在中間體迎的“Y”基團(tuán)不是胺的情 況中，流程11的產(chǎn)物應(yīng)該是通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員熟悉的脫保護(hù)、還原或重排(例如Curtius 重排)能轉(zhuǎn)化成胺1的胺代替物例如巡或丑。在上述情況中，單環(huán)巡的“LG”表示在親核取代反應(yīng)中能被直接取代的基團(tuán)(在 有或沒(méi)有額外活化的情況下)或者能參與過(guò)渡-介導(dǎo)的與片段迎的結(jié)合的基團(tuán)。單環(huán)M 或雙環(huán)迪的w基團(tuán)表示可使5-元雜環(huán)連接的基團(tuán)。在一方面，“W”基團(tuán)表示參與過(guò)渡金 屬介導(dǎo)的與預(yù)形成的雜環(huán)試劑(例如硼酸或硼酸酯或者雜芳基錫烷)偶聯(lián)以形成胺2的鹵 素原子。在另一方面，M和迪的“W”基團(tuán)表示能通過(guò)成環(huán)反應(yīng)轉(zhuǎn)化成5元雜環(huán)的官能團(tuán)。 上述方法的非限制性示例應(yīng)該包括氰基、甲?；Ⅳ然?、乙酰基或炔基部分向5元雜環(huán)的轉(zhuǎn) 化。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，上述成環(huán)反應(yīng)事際上可以是反應(yīng)序列，并且在流程11中的 反應(yīng)箭頭可表示單一反應(yīng)或反應(yīng)序列。此外，迎的“W”基團(tuán)可以表示能被吡唑或三唑環(huán)上 的親核氮原子取代的離去基團(tuán)(鹵素或三氟甲磺酸酯)。 流程11在下面流程中舉例說(shuō)明通用流程11的一些非限制性示例。流程12舉例說(shuō)明吡唑 型(通用胺2的示例)的制備。在流程12中，市售的3-氟-4-氨基苯酚與叔丁醇鉀和2， 4- 二氯吡啶迎反應(yīng)，得到氯代吡啶迎。用于所述轉(zhuǎn)化的優(yōu)選溶劑是80-100°C之間的溫度 的二甲基乙酰胺。隨后，在鈀催化劑優(yōu)選四(三苯基膦)合鈀存在下，氯代吡啶迎與市售 的吡唑-4-硼酸頻哪醇酯11結(jié)合，得到胺型。 流程12流程13舉例說(shuō)明通用胺1的另一示例胺M的制備。在該示例中，氯代吡啶M代 表通用中間體M(流程11)，其中M的“W”基團(tuán)是叔-丁氧羰基基團(tuán)。氯代吡啶型與苯酚巡結(jié)合得到醚M，即通用中間體迪(流程11)的示例。引入芐基氨基甲酸酯(Cbz)保 護(hù)基得到化合物型。用二異丁基氫化鋁可以將酯型還原，得到醛巡，即通用中間體迪(流 程11)的另一示例。通過(guò)用對(duì)甲基苯磺酰甲基異腈和碳酸鉀處理來(lái)完成醛巡至異噁唑丑 的轉(zhuǎn)化。異噁唑丑是通用中間體巡的示例(其中“Y”基團(tuán)是-NH-Cbz)。氫化得到胺 巡，通用胺2的一個(gè)示例。
流程13流程14舉例說(shuō)明通過(guò)首先將5-元雜環(huán)連結(jié)至中間6-元環(huán)(巡)來(lái)制備胺2的另 一通用方法。如上所述，單環(huán)的M的“LG”表示在親核取代反應(yīng)中能被直接置換的基團(tuán)(在 有或沒(méi)有額外活化的情況下)或者能參與過(guò)渡-介導(dǎo)的與片段迎結(jié)合的基團(tuán)。單環(huán)巡的 “W”基團(tuán)表示可使5-元雜環(huán)連結(jié)的基團(tuán)。在一方面，“W”基團(tuán)表示參與過(guò)渡金屬介導(dǎo)的與 預(yù)形成的雜環(huán)試劑(例如硼酸或酯或者雜芳基錫烷)的偶聯(lián)以形成胺2的鹵素原子。在 另一方面，M的“W”基團(tuán)表示能通過(guò)成環(huán)反應(yīng)轉(zhuǎn)化成5元雜環(huán)的官能團(tuán)。巡轉(zhuǎn)化成型后， “LG”基團(tuán)可被連接在E-亞單位的“X2”置換已得到三環(huán)的胺&如上面在流程11中所述。 本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該認(rèn)識(shí)到胺1可以直接由巡和迎的結(jié)合產(chǎn)生或者如前所述，胺^可以 通過(guò)中間體性的巡或丑間接產(chǎn)生。 流程14通過(guò)在流程15中的胺迪的制備來(lái)舉例說(shuō)明流程14的一具體實(shí)例。如此，市售的 嘧啶迎(通用中間體M的示例)與市售的吡唑硼酸酯虹的進(jìn)行鈀催化的偶聯(lián)，得到雙環(huán)迪，即通用中間體巡的一個(gè)示例。用間氯過(guò)氧苯甲酸氧化迪的硫化物部分(通用中間體 巡的“LG”基團(tuán))就親核置換而言進(jìn)一步活化該基團(tuán)，并產(chǎn)生中間體迎。在堿存在下，用苯 酚M處理砜迎得到三環(huán)胺迪，即通用胺1的一個(gè)示例。用于后一轉(zhuǎn)化的優(yōu)選堿包括在諸 如二甲基甲酰胺或二甲基乙酰胺的極性非質(zhì)子溶劑中的碳酸鉀和叔丁醇鉀。 流程15可以按照流程16所示，制備式的通用胺的另一示例。就此，與流程12類(lèi)似， 經(jīng)鈀_介導(dǎo)的Stille-偶聯(lián)，通過(guò)與三丁基錫烷巡(參見(jiàn)=Cheng等人，Biorg. Med. Chem Lett. ,2006,2076)或巡(市售的，Aldrich)反應(yīng)，可以將通用中間體迎轉(zhuǎn)化成為噁唑近或 590用類(lèi)似的方式，使用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟悉的標(biāo)準(zhǔn)條件通過(guò)Suzuki反應(yīng)可以將市售的硼 酸M (Anichem)轉(zhuǎn)化成為噁唑紅。類(lèi)似地，通過(guò)鈀-催化的迎與4-異噁唑硼酸頻哪醇酯 盤(pán)(市售的，F(xiàn)rontier Scientific)或三丁基錫燒M(參見(jiàn)Sakamoto 等人，Tetrahedron， 1991,5111)的反應(yīng)，可以得到異噁唑迎和迎。 流程16作為流程11、12和16的延伸，含有異噻唑環(huán)的通式2的胺也可以通過(guò)以上所述 的方法制備。流程17顯示一個(gè)非限制性示例，其中三甲基錫烷巡(參見(jiàn)=Wentland等人， J. Med. Chem.，1993，1580)與巡的鈀-催化的Stille反應(yīng)提供異噻唑位。以類(lèi)似的方式，迎和硼酸酯M (參見(jiàn)=Blackaby等人，US 7030128)的鈀-催化的Suzuki-交叉偶聯(lián)產(chǎn)生
異噻唑胺迎。 流程17流程18舉例說(shuō)明流程11的非限制性示例，其中“W”基團(tuán)是親核芳香取代的離去基 團(tuán)。如此，通過(guò)與吡唑(巡)或三唑(II和互)反應(yīng)，可以由通用中間體迎制備其中5-元 雜環(huán)是氮連結(jié)的吡唑(ZS)或三唑(M-II)的通式2的一些胺。用于所述轉(zhuǎn)化的優(yōu)選條件 包括在非親核性堿如碳酸鉀、氫化鈉、1，8_ 二氮雜-二環(huán)[5，4，0]十一-7-烯(DBU)等存 在下，使用極性的非質(zhì)子溶劑例如1-甲基-2-吡咯烷酮、二甲基乙酰胺或二甲基亞砜。用 于所述轉(zhuǎn)化的優(yōu)選溫度是室溫最多至約250°C，并可以任選地包括使用微波輻射或超聲處 理。 流程18流程19舉例說(shuō)明含有C-連接的1，2，3-三唑的式^的通用胺的一個(gè)非限制性示 例即胺的制備。通過(guò)與三甲基硅烷基乙炔的Sonogashira交叉-偶聯(lián)，接著水解三甲基 硅烷基基團(tuán)，可以使氯代吡啶迎轉(zhuǎn)化成為炔巡。炔巡與疊氮三甲基硅烷在升高的溫度下 反應(yīng)，經(jīng)水處理后，得到三唑參見(jiàn)例如Kallander等人，J Med. Chem.，2005，5644和其
中的參考文獻(xiàn))。 流程19本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該認(rèn)識(shí)到在流程16-19中公開(kāi)的用于將中間體迎轉(zhuǎn)化成為通 用胺2的具體方法通過(guò)流程15的反應(yīng)序列適用于將中間體迎轉(zhuǎn)化成為通用胺^的另外示 例。用于制備式丄化合物的另外的合成方法可見(jiàn)于下面的實(shí)施例中。第3部分實(shí)施例通用方法A 在0°C,向原料吡唑胺(lea(當(dāng)量))的EtOAc溶液中加入2，2，2_三 氯乙基氯甲酸酯(1. leq)和飽和的NaHC03(2-3eq)。在室溫?cái)嚢?h后，分離各層并用EtOAc 萃取水層。將合并的有機(jī)萃取物用鹽水洗滌，干燥(Na2S04)，并于真空下濃縮以得到吡唑胺 的TR0C氨基甲酸酯粗品。向在DMS0中的上述氨基甲酸酯(leq)中加入二異丙基乙胺(2eq)、適當(dāng)?shù)陌?(2eq)，并將混合物在60°C攪拌16h或直到所有的原料氨基甲酸酯耗盡。將水加入到混合 物，并將產(chǎn)物用Et0Ac(2X25mL)萃取。將合并的有機(jī)萃取物用鹽水洗滌，干燥(Na2S04)，并 濃縮以得到粗產(chǎn)物，將粗產(chǎn)物經(jīng)柱色譜法純化，得到目標(biāo)化合物。通用方法B 向胺(通常0. 67mmol)的EtOAc (2mL)混懸液中加入INNaOH水溶液。 將反應(yīng)混合物冷卻至0°C，并用氯甲酸異丙烯酯(0. lmL,0. 94mmol)處理30秒鐘。將反應(yīng)混 合物在0°C攪拌15min并在室溫?cái)嚢鑜h。將反應(yīng)物傾入到THF_Et0Ac (1 1 ；40mL)中，并用 H20(2X10mL)和鹽水(2X10mL)洗滌。將有機(jī)物干燥(Na2S04)，濃縮，并將殘留物經(jīng)柱色譜 法或重結(jié)晶純化，得到目標(biāo)物(丙-1-烯-2-基)氨基甲酸酯。在60°C向所述氨基甲酸酯 (通常0. 26mmol)加入適當(dāng)?shù)脑赥HF(2mL)中的胺(通常0. 26mmol)和1-甲基吡咯烷(催 化量)，反應(yīng)18h。將混合物用CH2Cl2(2mL)和己烷(0. 5mL)溶液稀釋?zhuān)嚢鑜Omin。將得 到的固體物過(guò)濾并干燥。通用方法C 在室溫向攪拌的羧酸(0. 24mmol)和TEA (1. 2mmol)的1，4_ 二氧六 環(huán)(4. 5mL)溶液中加入DPPA(0. 29mmol)。在室溫?cái)嚢?. 5h后，加入適當(dāng)?shù)陌?0. 71mmol), 并將反應(yīng)物在100°C加熱條件下攪拌2h。將反應(yīng)物冷卻至室溫，用鹽水(15mL)稀釋?zhuān)⒂?Et0Ac(3X30mL)萃取。將合并的有機(jī)層干燥(MgS04)并濃縮。將殘留物經(jīng)色譜法純化，得 到目標(biāo)化合物。通用方法D:在室溫向胺(6.53mmol)的乙酸乙酯(20mL)溶液中加入碳酸氫鈉 (11.90mmol)的水(20mL)溶液和氯甲酸異丙烯酯(9. 79mmol)。將得到混合物在室溫?cái)嚢?h。分離有機(jī)層。并將水層用乙酸乙酯萃取一次。將合并的有機(jī)萃取物用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)并于真空濃縮。殘留物不需進(jìn)一步純化或者經(jīng)重結(jié)晶或色譜法純化后，得到相應(yīng)的 氨基甲酸丙-1-烯-2-基酯。實(shí)施例Al 將3-氟-4-氨基苯酚(8. 0g，63. Ommol)在二甲基乙酰胺(80mL)中 的混懸液在真空中脫氣并用叔丁醇鉀(7.3g，65mmol)處理。將得到的混合物在室溫?cái)?拌30min。加入2，4-二氯吡啶(88，54讓01)，并將混合物加熱至801，反應(yīng)1211。在減壓 下除去溶劑，得到殘留物，將殘留物在水和Et0Ac(3X100mL)間分配。將有機(jī)層用飽和的 鹽水洗滌，干燥(MgSO4)，真空濃縮并經(jīng)硅膠柱色譜純化，得到4-(2_氯-吡啶-4-基氧 基)-2_ 氟-苯胺(llg，產(chǎn)率 86 % )。1H NMR(300MHz，DMS0-d6)，δ 8. 24(d, J = 5. 7Hz, 1H) ,7. 00 (dd, J = 9. 0，2. 7Hz，1H)，6. 89-6. 73(m，4H)，5. 21 (br s，2H) ；MS(ESI)m/z 239. 2(M+H)+。向4-(2-氯-吡啶-4-基氧基)-2-氟苯胺(3g，12. 6mmol)、1_ 甲基 _3_(4，4，5， 5-四甲基 _[1，3，2] 二氧硼雜環(huán)戊烷-2-基)-IH-吡唑(5. 2g，25. 2mmol)和 Na2C03(2. 7g， 25. 2mmol)的 DME(18mL)和水(6mL)溶液充入氮?dú)?20min)。加入 Pd (PPh3) 4 (729mg， 0.63mmol)，并將得到的混合物加熱到100°C，反應(yīng)16h。減壓除去溶劑，并將粗產(chǎn)物混懸于 水中，用EtOAc萃取。將有機(jī)層用鹽水洗滌，干燥(Na2SO4),過(guò)濾并真空濃縮。將殘留物通過(guò) 硅膠色譜純化，得到2-氟-4-(2-(l-甲基-IH-吡唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯胺(2g， 56 %產(chǎn)率)。1H 匪R (300MHz，DMS0-d6)，δ 8. 31 (d，J = 5. 7Hz，1H)，8. 21 (s，1H)，7. 92 (s，1H)， 7. 12 (d, J = 2. 4Hz, 1H)，6· 96 (m, 1H)，6· 85-6. 72(m，2H)，6· 56 (m, 1H)，5. 15(s，2H)，3· 84 (s， 3H) ；MS (ESI)m/z :285· 0 (M+H)+。實(shí)施例A2在-10°C將 1,3-二氟-2-甲基-苯(15g，0. 12mol)的H2SO4 (IOOmL)溶液 通過(guò)滴加65% HNO3 (11. 4g，0. 12mol)進(jìn)行處理，并將得到的混合物攪拌約30min。將混合物 倒入到冰水中，并用乙酸乙酯(3X200mL)萃取。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，干燥(Na2SO4) 并真空濃縮，得到1，3_ 二氟-2-甲基-4-硝基-苯(16g，78%產(chǎn)率)。1H NMR(400MHz, CDCl3) δ 7. 80 (m, 1H)，6. 95 (m, 1H)，2. 30 (s, 3H)。將1，3-二氟-2-甲基-4-硝基-苯(16g，0.092mol)、芐醇(10g,0. 092mol)禾口 K2CO3(25. 3g，0. 18mol)混合于DMF(300mL)中，并加熱至100°C，過(guò)夜。將混合物倒入到水 中，并用乙酸乙酯(3X200mL)萃取。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，干燥(Na2SO4)，真空濃 縮，并經(jīng)硅膠色譜純化，得到1-芐基氧基-3-氟-2-甲基-4-硝基-苯(8g，33%產(chǎn)率)。1H NMR(400MHz, DMS0_d6) δ 8. 04 (t, J = 8. 8Hz, 1H)，7· 30-7. 46 (m，5Η)，7· 08 (d, J = 9. 2Hz, 1Η)，5. 28(s，2H)，2. 13(s，3H)。利用與實(shí)施例A3類(lèi)似的方法，將1-芐基氧基-3-氟_2_甲基_4_硝基-苯 (8g，0. 031mol)氫化，得到4-氨基-3-氟-2-甲基-苯酚(4. 2g，96 %產(chǎn)率)。1H NMR(300MHz, DMS0_d6) δ 8. 61 (s, 1H), 6. 36 (m, 2H), 4. 28 (s, 2H), 1. 96 (s, 3Η) ；MS (ESI)m/z 142. 1[M+H]+。將叔丁醇鉀(3. 5g,31mmol)加到4_氨基_3_氟_2_甲基-苯酚(4. 2g,30mmol)的 二甲基乙酰胺溶液中。將混合物在室溫?cái)嚢?0min。加入2，4_ 二氯吡啶(4. 38g，30mmol) 的二甲基乙酰胺溶液，并將混合物在100°C加熱過(guò)夜。將反應(yīng)混合物真空濃縮，并將得到的 殘留物溶解于乙酸乙酯(200mL)中，并通過(guò)硅膠過(guò)濾。將濾餅用乙酸乙酯洗滌，并將合并的濾液真空濃縮，經(jīng)硅膠色譜純化，得到4- (2-氯-吡啶-4-基氧基)-2-氟-3-甲基-苯胺 (3. 2g，42%產(chǎn)率)O1H NMR(400MHz,DMS0-d6) δ 8. 21(d,J = 6. 4Hz, 1H)，6· 84(d，J = 2· OHz， lH)，6.81(dd，J = 5.6，2.4Hz，lH)，6.67-6.65(m，2H)，5· 13(s，2H)，1.91(s，3H) ；MS (ESI) m/z 253. 2[M+H]+。
利用與實(shí)施例A3類(lèi)似的方法，將4- (2-氯-吡啶_4_基氧基)_2_氟_3_甲 基-苯胺(1.0g，3. 3mmol)、l-甲基_4-(4，4，5，5_四甲基_[1，3，2] 二氧硼雜環(huán)戊 燒-2-基)-IH-吡唑(lg，4. 8mmol) ,Na2CO3 (0. 84g, 6. 6mmol)和 Pd (PPh3) 4 (0. 25g, 0. 2mmol) 混合，得到2-氟-3-甲基-4-[2-(l-甲基-IH-吡唑-4-基)-吡啶-4-基氧基]-苯胺 (0.748，75%產(chǎn)率)。1H NMR (400MHz，DMS0-d6) δ 8. 27 (d, J = 6. 4Hz, 1H) ,8. 18 (s, 1H), 7. 90(s，1Η)，7· 07(s，1Η)，6· 68-6. 61 (m，2H)，6· 45(dd，J = 5. 6，2. 4Hz，1Η)，5. 06 (s，2Η)， 3. 82(s，3H)，1. 95(s，3H) ；MS (ESI) m/z :299. 2 [M+H]+。實(shí)施例A3 將 1, 2, 3-三氟 _4_ 硝基-苯(30g，0. 17mol)、芐醇(18. 4g,0. 17mol) 和K2CO3 (35g，0. 25mol)混合于DMF (300mL)中，并在室溫?cái)嚢?h。加入水(300mL)，并將混合 物用Et0Ac(3X500mL)萃取。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)，真空濃縮，并經(jīng)硅 膠柱色譜純化，得到1-芐氧基-2，3-二氟-4-硝基-苯(16g，36%產(chǎn)率)。1HNMR(400MHz， DMS0-d6) δ 8. 06 (m, 1H)，7. 49-7. 30 (m, 6H)，5. 37 (s, 2H)。在氫氣氣氛(30psi)下，將1-芐氧基-2，3_ 二氟_4_硝基-苯(14g，52. 8mmol) 的Me0H(200mL)溶液和Pd/C(10%，1. 4g，1. 3mmol) —起攪拌2h。經(jīng)過(guò)濾除去催化劑，并將 濾液真空濃縮，得到4-氨基-2，3-二氟苯酚(7g，92. 1%產(chǎn)率)。1H NMR (400MHz, DMS0-d6) 5 9. 05(s,lH),6. 45 (t, J = 8. 8Hz，1H)，6. 34 (t，J = 9. 2Hz，1H)，4. 67 (s，2H) ；MS (ESI) m/z 146. 1[M+H]+。將4-氨基-2，3- 二氟苯酚(6g，41. 4mmol)和叔丁醇鉀(4. 9g，43. 5mmol)混懸于 DMAc (200mL)中，并在Ar氣氛下于室溫?cái)嚢?0min。加入2，4-二氯吡啶(6. Ig, 41. 4mmol), 并將得到的混合物加熱至70°C，反應(yīng)8h。將反應(yīng)混合物過(guò)濾，真空濃縮并經(jīng)硅膠色譜純 化，得到4-(2-氯-吡啶-4-基氧基)-2，3-二氟-苯胺(7g，66%產(chǎn)率)。1H NMR(400MHz, DMS0-d6) δ 8. 27 (d, J = 6. OHz, 1H) ,7. 05 (s, 1H) ,6. 95 (m, 1H) ,6. 92 (m, 1H) ,6. 62 (m, 1H), 5. 60(s，2H) ；MS (ESI) m/z 257. 1[M+H] +。將氮?dú)馔ㄈ?-(2-氯-吡啶-4-基氧基)-2，3_ 二氟-苯胺(2g，7. 8mmol)、 1-甲基-4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2] 二氧硼雜環(huán)戊烷_(kāi)2_基)-IH-吡唑(1. 6g， 7. 8mmol)和 Na2CO3(1. 65g，15. 6mmol)的 DME(12mL)禾PH20(4mL)溶液中，通氣 20min。加入 Pd (PPh3) 4 (450mg, 0. 4mmol)，然后將得到的混合物真空脫氣，用氮?dú)飧采w，并加熱至70 V， 保持16h。在減壓下，將反應(yīng)物濃縮至干燥。將粗產(chǎn)物混懸于水中，并用EtOAc (3 X IOmL) 萃取。將有機(jī)層用鹽水洗滌，干燥(Na2SO4),真空濃縮，并經(jīng)硅膠柱色譜純化，得到2，3-二 氟-4-[2-(l-甲基-IH-吡唑-4-基)-吡啶-4-基氧基]-苯胺(1.38，55%產(chǎn)率)。1H NMR (400MHz, DMS0_d6) δ 8. 40 (d, J = 6. 0Hz，1H)，8· 32 (s, 1Η)，8· 02 (s, 1Η)，7· 26 (s, 1Η) ,6. 96 (t, J = 8· 8Ηζ，1Η)，6· 71-6. 68(m，2H)，5· 62(s，2H)，3· 92(s，3H) ；MS (ESI) m/z 303. 2[M+H]+。實(shí)施例A4 根據(jù)Lohse等人(Synlett. 1999，1，45-48)的方法，將來(lái)自實(shí)施例Al 的 4- (2-氯吡啶-4-基氧基)-2-氟苯胺(0. 842g，3. 53mmol)、1-丙基-4- (4，4，5，5-四甲基-[1，3，2] 二 氧硼雜環(huán)戊烷-2-基)-1Η-吡唑(1. OOg, 4. 24mmol)、K2CO3 (1. 317g， 9. 53mmol)和 Pd (PPh3) 4 (0. 204g, 0. 176mmol)混合于 DME (4. 0ml) /H2O (4. 80ml)中。用 Ar 除 去頂空中的氣體，進(jìn)行l(wèi)Omin。然后，將反應(yīng)物加熱并在90°C攪拌過(guò)夜。將完成的反應(yīng)冷卻 至室溫，用EtOAc稀釋?zhuān)⒔?jīng)硅藻土過(guò)濾以除去Pd。將濾液用鹽水(2X)洗滌，干燥(MgSO4), 真空濃縮，并經(jīng)快速柱色譜(100%己烷至100% EtOAc)純化，得到2-氟-4-(2-(1-丙 基-IH-吡唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯胺(1.21g，110%產(chǎn)率)，作為被Et0AC污染的稠 油狀物，但以得到的形式使用。1H NMR(400MHz, DMS0-d6) δ 8. 32—8. 31 (m，1H)，8. 27 (s，1H)， 7. 95 (brs, 1H)，7. 64-7. 52 (m, 2H)，7. 14 (brs, 1H)，6. 98-6. 95 (m 1H)，6. 84-6. 79 (m, 1H)， 6. 76-6. 73 (m, 1H)，6. 58-6. 56 (m, 1H)，5. 17 (s，2H)，4. 05-3. 99 (m, 2H)，1. 83-1. 74 (m, 2H)， 0. 83-0. 79 (m, 3H) ；MS (ESI) m/z :313. 2 [M+H] +。 實(shí)施例A5 利用與實(shí)施例Al類(lèi)似的方法,將2-氟_4_氨基苯酚(2. 6g，24mmol) 和2,4- 二氯吡啶(2. 88g，20mol)混合，得到4_(2_氯吡啶-4-基氧基)_3_氟苯胺(3. 2g， 67%產(chǎn)率)。1HNMR(400MHz, DMS0-d6) δ 8. 25(d, J = 5. 6Hz, 1H)，6· 99 (m, 1Η)，6· 90 (m, 2Η)，
6.50 (d，J= 1.6Ηζ，1Η)，6. 41(d，J = 10. 4Hz，1Η)，5. 51 (s，2Η) ；MS (ESI)m/z :239. 1[M+H]+。
利用與實(shí)施例Al類(lèi)似的方法，將4- (2-氯吡啶-4-基氧基)_3_氟苯胺(3g， 11. 6mmol)、1-甲基-4- (4，4，5，5-四甲基-1，3，2 二氧硼雜環(huán)戊烷 _2_ 基)-IH-吡唑(3. 4g， 16. 4mmol) ,Na2CO3 (2. 7g, 25. 2mmol)和Pd(Ph3)4 (1. 5g, 0. leq)混合，得到 3-氟-4-(2~(1~ 甲 基-IH-吡唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯胺(1. lg，34 %產(chǎn)率)。1H NMR(400MHz, DMS0-d6) δ (8. 31 (d, J = 5. 6Hz，1H)，8· 22 (s，1H)，7· 93 (s，1H)，7· 14 (s，1Η)，6· 98 (m, 1Η)，6· 55-6. 49(m，2H)，6· 42(d，J = 7· 2Hz，1Η)，5· 44 (s，2Η)，3· 86 (s，3Η) ；MS (ESI) m/z 285. 2[M+H]+。實(shí)施例A6 將吡嗶-4-硼酸頻哪醇酷(0. 85g，4.38_ο1)、K2CO3粉末(1. 816g， 13. 14mmol)和 2-碘代丙燒(0. 547ml, 5. 48mmol)混合在 MeCN(IOOml)中，并在 80°C 加熱 條件下攪拌。18h后，將反應(yīng)物用另外的2-碘代丙烷(0.547ml，5. 48mmol)處理，并繼續(xù) 在80°C加熱。再48h后，將反應(yīng)物冷卻至室溫，并經(jīng)燒結(jié)玻璃過(guò)濾以除去固體物。將濾 液濃縮成殘留物，將殘留物用EtOAc稀釋?zhuān)俅卧跓Y(jié)玻璃上過(guò)濾并濃縮。將粗產(chǎn)物經(jīng)快 速柱色譜(EtOAc/己烷)純化，得到1-異丙基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼雜 環(huán)戊烷-2-基)-1Η-吡唑(0.37g，36% 產(chǎn)率)，為蠟狀固體。1H NMR(400MHz, DMS0-d6) δ 7. 95 (s，1Η)，7· 56 (s, 1H)，4· 53-4. 46 (m, 1Η)，1. 39-1. 37(m，6H)，1. 23 (s, 12H) ；MS (ESI) m/ ζ 237. 3[M+H] +。利用與實(shí)施例Al類(lèi)似的方法，將來(lái)自實(shí)施例Al的4- (2_氯吡啶_4_基氧 基)-2_ 氟苯胺(0. 310g，l. 299mmol)、l-異丙基-4_(4，4，5，5-四甲基 _1，3，2_ 二 氧硼雜環(huán)戊燒-2-基)-1Η-吡唑(0. 368g，1. 559mmol)、K2C03(0· 485g，3. 51mmol) 和 Pd (PPh3) 4(0· 075g，0. 065mmol)混合，并經(jīng)快速柱色譜(EtOAc/CH2Cl2)純化，得到 2-氟-4-(2-(1-異丙基-IH-吡唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯胺(0. 388，94%產(chǎn)率)， 為被 EtOAc 污染的油狀物。1H NMR (400MHz，DMS0-d6) δ 8. 32-8. 30 (m，2H)，7. 94 (s，1H)，
7.18-7. 17 (m, 1H)，6. 98-6. 94 (m, 1H)，6. 84-6. 80 (m, 1H)，6. 76-6. 75 (m, 1H)，6. 57-6. 55 (m, 1H), 5. 15 (s，1H), 4. 54-4. 47 (m, 1H)，1. 43-1. 41(m，6H) ；MS (ESI)m/z :313· 2 [M+H]+。實(shí)施例A7 利用與實(shí)施例Al類(lèi)似的方法，將來(lái)自實(shí)施例Al的4_ (2-氯吡啶_4_基氧基)-2_氟苯胺(2g，8.4mmol)、l-乙基-4-(4，4，5，5-四甲基_1，3，2-二氧硼雜環(huán)戊燒-2-基)-IH-吡唑(3. 7g, 16. 8mmol) ,Na2CO3 (1. 8g, 16. 8mmol)和 Pd (PPh3) 4 (0. 48g)混合， 得到4-(2-(1-乙基-IH-吡唑-4-基)吡啶-4-基氧基)-2-氟苯胺(2. lg，84%產(chǎn)率)。1H NMR (400MHz, DMS0_d6) δ 8. 37 (d, J = 6. 0Hz，1H)，8· 33 (s，1H)，8· 00 (s，1H)，7· 21 (s，1H)， 7. 02 (dd, J = 12. 0,2. 8Hz, 1H)，6· 91-6. 79(m，2H)，6· 63 (dd, J = 5. 6,2. 4Hz, 1Η)，5· 22 (s, 2Η)，4. 19 (q, J = 7. 2Ηζ，2Η)，1. 44 (t, J = 7. 2Ηζ，3Η) ；MS (ESI) m/z 299. 1[Μ+Η] +。實(shí)施例Α8 向?qū)嵤├鼳2(l. 5g，4. 96mmol)在乙酸乙酯(20ml)和水(20. 00ml)中的 雙相混合物中加入NaHCO3 (1. 3g，15mmol)和氯甲酸異丙烯酯(0. 6mL)。將反應(yīng)在室溫?cái)嚢? 小時(shí)。分離有機(jī)層，并用鹽水洗滌，干燥并蒸發(fā)，得到2-氟-4-(2-(l-甲基-IH-吡唑-4-基) 吡啶-4-基氧基)苯基氨基甲酸丙-1-烯-2-基酯，將其用于下一步反應(yīng)(0.92g，48%產(chǎn) 率)。MS (ESI) m/z :387· 1[M+H]+。實(shí)施例A9 將來(lái)自實(shí)施例Al的4_ (2_氯-吡啶_4_基氧基)_2_氟苯胺(0. 597g，
2.5mmol)、4-(4，4，5，5-四甲基 _1，3，2-二 氧硼雜環(huán)戊烷-2-基)-IH-吡唑(0. 728g，
3.75mmol) ,Cs2CO3 (3. 10g，9. 5mmol)和 Pd (PPh3) 4 (0. 289g，0. 25mmol)混合在 DMF/H20 (20mL) 中。將反應(yīng)混合物脫氣，用N2覆蓋，并在90°C加熱過(guò)夜。將完成的反應(yīng)用壓0(5!^)稀釋?zhuān)?并用Et0Ac(3X50mL)萃取。將合并的有機(jī)物用鹽水(20mL)洗滌、干燥(MgSO4)、真空濃縮 并經(jīng)色譜純化，得到4-(2-(1Η-吡唑-4-基)吡啶-4-基氧基)-2-氟苯胺(0. 56g,83% 產(chǎn)率)，作為淺黃色固體。1H NMR(400MHz，DMS0-d6) δ 13. 01 (s, 1Η), 8. 38 (d, J = 5. 6Hz, 1H), 8. 35 (s, 1H), 8. 06 (s, 1Η), 7. 29 (d, J = 2· 4Hz，1Η)，7· 03 (dd，J = 11. 6,2. 4Hz, 1Η),
6.89 (t, J = 8. 8Hz, 1Η)，6. 84 (m, J = 8. 4Hz, 1Η)，6. 60 (m, 1Η)，5. 20(s，2H) ；MS (ESI) m/z 271. 0[Μ+Η]+。實(shí)施例AlO 將氯甲酸甲酷(77. 3g，0.82mol)滴加到-10°C的2_氯_4_氟苯酚 (100g，0.68mol)和氫氧化鈉(32. 8g,0. 82mol)的水(550mL)溶液中。全部加入后，將沉淀 的固體物通過(guò)過(guò)濾收集，并用水洗滌，得到碳酸2-氯-4-氟苯酯甲酯(11(^，79%收率)。 1H NMR(300MHz, DMS0_d6) δ 7. 62 (dd, J = 8. 1,2. 7Hz, 1H)，7· 50 (dd, J = 9. 0,5. 4Hz, 1H)，
7.30 (td, J = 8. 1,3. OHz, 1Η)，3. 86(s，3H) ；MS (ESI) m/z :205. 2 [M+H]+。向碳酸2-氯-4-氟苯酯甲酯(110g，0. 54mol)的濃H2SO4(50mL)混懸液中緩慢加入 由濃H2SO4(40mL)和發(fā)煙HNO3(40. 8mL，0. 89mol)組成的混合物。將得到的混合物在0°C攪 拌30min。將反應(yīng)混合物倒入到冰水中，并將沉淀的固體物通過(guò)過(guò)濾收集，用水洗滌，得到碳 酸 2-氯-4-氟-5-硝基苯酯甲酯(120g，90%收率)。1H NMR(400MHz,DMS0-d6) δ 8. 45 (d, J = 7. 2Hz, 1H)，8. 12 (d, J = 10. 8Hz, 1H)，3. 89(s，3H) ；MS (ESI) m/z -.250. 1[M+H] +。將碳酸2-氯-4-氟-5-硝基苯酯甲酯(120g, 0. 48mol)與氫氧化鈉(22. 7g， 0. 57mol)的水(300mL)溶液混合，將得到的混合物回流4h。通過(guò)過(guò)濾除去不溶的固 體物，并用稀釋的HCl酸化濾液。將沉淀的固體物通過(guò)過(guò)濾收集，并用水洗滌，得到 2_ 氯-4-氟-5-硝基苯酚(90g，98%產(chǎn)率)。1H 匪R(400MHz，DMS0-d6) δ 11. 18 (s, 1H),
8.10 (d, J = 10. 4Hz, 1H)，7· 62 (d, J = 7. 2Hz, 1H) ；MS (ESI) m/z -.192. 1[M+H] +。將2-氯-4-氟-5-硝基苯酚(85g，0. 45mol)和 10% Pd/C(25g，0. 023mol)混合在 EtOH中，并氫化(50psi)12h。過(guò)濾反應(yīng)混合物。將濾液真空濃縮，并經(jīng)硅膠色譜純化，得到 3_ 氨基-4-氟苯酚(4(^，70%收率)。1H WR(400MHz，DMS0-d6) δ 8. 87 (s, 1H) ,6. 70 (dd,J= 11. 2，8. 8Hz，1H)，6. 14 (dd，J = 7. 8，2. 4Hz，1H)，5. 84 (m，1H)，4. 92 (s，2H) ；MS (ESI)m/z 128. 2[M+H]+。將4-氯-2-甲硫基-嘧啶(1.4g，8. 8mmol)、l-甲基 _4_ (4，4，5，5_ 四甲基-[1，3， 2] 二氧硼雜環(huán)戊烷-2-基)-IH-吡唑(2. Og, 1. leq) ,Na2CO3 (2. 8g，3eq)和 Pd (PPh3) 4 (500mg， 0. 43mmol)混合在由甲苯/Et0H/H20(4/4/1，20mL)組成的溶劑中。將反應(yīng)混合物用氬氣沖 洗，并加熱至100°C，過(guò)夜。將反應(yīng)物過(guò)濾以除去不溶物，并將濾液真空濃縮。將殘留物經(jīng) 硅膠色譜純化，得到被三苯膦氧化物污染的4-(1-甲基-IH-吡唑-4-基)-2-(甲硫基)嘧 啶(2. Og, > 100% 的收率)。1H NMR(300MHz,DMS0-d6) δ 8. 49(d, J = 5. 1Hz, 1H) ,8. 46 (s, 1H)，8· 12 (s，1Η)，7· 38 (d, J = 5. IHz, 1Η)，3· 89(s，3H)，2· 52(s，3H )。將4-(1-甲基-IH-吡唑-4-基)-2-(甲硫基)嘧啶(2. Og粗品，8. 8mmol)的二氯 甲烷(20mL)溶液在室溫下分次地用m-CPBA(3. Og, 17. 4mmol)處理。將反應(yīng)物攪拌2h，并用 飽和的NaS2SO3 (3mL)水溶液淬滅。將混合物用飽和的Na2CO3水溶液進(jìn)行分配，并將有機(jī)物用 鹽水洗滌，干燥(Na2SO4)，濃縮，得到摩爾比率1 0. 3的2-甲磺酰基_4-(1_甲基-IH-吡 唑-4-基)-嘧啶和2-甲烷亞磺?；?4-(1-甲基-IH-吡唑-4-基)-嘧啶的混合物(2. Og)。 1H NMR(400MHz, DMS0_d6) δ 8. 83 (d, J = 5. 2Hz, 1H)，8· 82 (d, J = 5. 2Ηζ，0· 24Η)，8· 57 (s, 1Η)，8. 57(s，0. 24Η)，8. 21(s，lH)，8. 21(s，0. 23Η)，7. 80(d，J = 5. 6Hz，1Η)，7. 80 (d，J =
5.6Ηζ，0. 25Η)，3. 48(s，3H)，2. 88(s，0. 7Η)。將在DMF (IOmL)中的上述2_甲磺?；鵢4_ (1_甲基-IH-吡唑_4_基)-嘧啶 和2-甲烷亞磺?；?4-(l-甲基-IH-吡唑-4-基)_嘧啶的混合物(lg，4. 2mmol)、4_氨 基-3-氟-苯酚(1. Ig, 8. 6mmol)和 K2CO3 (1. 2g，8. 6mmol)在 100°C加熱 12h。將反應(yīng)物在 H2O 和Et0Ac(3X50mL)間進(jìn)行分配。將合并的有機(jī)物干燥(Na2SCM)，真空濃縮并色譜分離得到 2-氟-5-(4-(1-甲基-IH-吡唑-4-基)嘧啶-2-基氧基)苯胺(402mg)。1H NMR(400MHz, DMS0-d6) δ 8. 44 (d, J = 5. 2Hz，1H)，8· 39 (s，1H)，8· 07 (s，1H)，7· 41 (d，J = 5·2Ηζ，1Η)，
6.98(t, J = 9. 6Hz, 1Η)，6· 53(dd, J = 5. 6,2. OHz, 1Η)，6· 28(d, J = 8. 4Hz, 1Η)，5. 25 (br s, 2Η)，3· 88(s，3H)。MS (ESI) m/z :286· 2 [Μ+Η] +。實(shí)施例All 將4-氟-2-甲基-苯酚(25g，0. 2mol)加到氫氧化鈉(9. 7g， 0. 24mol)的水(160mL)溶液中，并將得到的溶液冷卻到0 °C。在0 °C滴加氯甲酸甲酯 (24. 2g，0. 26mol)。當(dāng)反應(yīng)完全，用飽和的Na2CO3水溶液將pH調(diào)至pH 8，然后用乙酸乙 酯(3X300mL)萃取混合物。將合并的有機(jī)萃取物用水和鹽水洗滌，干燥(MgSO4)并減壓 濃縮，得到碳酸4-氟-2-甲基-苯酯甲酯(30g，82%收率)。1H NMR(300MHz, DMS0-d6) δ 7. 22-7. 13 (m, 2H)，7. 05 (m, 1H)，3. 81 (s，3H)，2. 12 (s, 3H)。在0°C向碳酸4-氟-2-甲基-苯酯甲酯(15g，81.5mm0l)的濃硫酸(IOOmL)溶 液中分幾次加入KNO3粉末(8. 3g，82. 2mmol)。將反應(yīng)混合物在0°C攪拌1小時(shí)，然后倒入 到冰水中，并用乙酸乙酯(3X100mL)萃取。將萃取物用水和鹽水洗滌，干燥(MgSO4)，真空 濃縮并經(jīng)硅膠色譜純化，得到碳酸4-氟-2-甲基-5-硝基-苯酯甲酯(2. 0g，11 %收率)。 1H NMR (300MHz, DMS0_d6) δ 8. 14 (d, J = 6· 9，1Η)，7· 60 (d, J = 12. OHz, 1Η)，3· 86(s，3H)， 2. 25(s，3H)。向氫氧化鈉水溶液(1. 2N, 20mL, 24mmol)中加入4_氟_2_甲基_5_硝基-苯酯甲 酯(2. Og, 8. 7mmol)，然后將得到的混合物回流2小時(shí)。將反應(yīng)物冷卻到室溫，并在EtOAc和水之間進(jìn)行分配。將有機(jī)層用水和鹽水洗滌，干燥(MgSO4)，并真空濃縮，得到4-氟-2-甲 基-5-硝基-苯酚(1. 4g，93%產(chǎn)率)。1H 匪R(300MHz，DMS0-d6) δ 10. 33 (s, 1H), 7. 45 (d, J = 6. 6，1H)，7. 32 (d, J = 12. 3Hz, 1H)，2. 19 (s, 3H)。將4-氟-2-甲基-5-硝基-苯酚(1.4g,8. 2mmol) ^P 10%Pd/C(0. 3g,20%/w)在 MeOH(SOmL)中的混合物于H2 (30psi)氣氛下攪拌2h。經(jīng)過(guò)濾除去Pd/C，并將濾液濃縮，得到 5_ 氨基-4-氟-2-甲基-苯酚(0. 68g，62%產(chǎn)率)。1H 匪R(300MHz，DMS0-d6) δ 8. 75 (s, 1H)，6. 62 (d, J = 12. 0Hz，1H)，6. 21 (d，J = 8. 1Ηζ，1Η)，4. 69 (s，2H)，1. 93 (s，3H)。利用與實(shí)施例AlO類(lèi)似的方法，將來(lái)自實(shí)施例AlO的2_甲磺酰基_4-(1_甲 基-IH -吡唑-4-基)-嘧啶和2-甲烷亞磺?；?4- (1-甲基-IH-吡唑-4-基)-嘧啶的混 合物(lg，4. 2mmol)、5-氨基-4-氟-2-甲基苯酚(1.2g，8. 5mmol)和 K2CO3 (1. 2g，8. 6mmol) 混合在DMF (IOmL)中，得到2-氟_4_甲基-5- (4- (1-甲基-IH-吡唑-4-基)嘧啶-2-基 氧基)苯胺(420mg)。1H NMR(400MHz, DMS0_d6) δ 8. 42 (d, J = 5. 2Hz, 1H)，8· 39 (s, 1H)， 8. 07 (s，1H)，7· 40 (d, J = 5. 2Hz, 1H)，6· 90 (d, J = 9. 6Hz, 1H)，6· 47 (d, J = 8. 4Hz, 1H)，
5.02 (br s，2H)，3. 88(s，3H)，1. 88(s，3H) ；MS (ESI)m/z :300. 2 [M+H]+。實(shí)施例Bl 根據(jù)文獻(xiàn)方法，使苯胼和4，4- 二甲基_3_氧代戊腈反應(yīng)，得到3_叔丁 基-1-苯基-IH-吡唑-5-胺。參見(jiàn) WO 2006/071940。實(shí)施例B2 將金屬鈉(13. 8g，0. 5mol)分批加到冰冷的無(wú)水EtOH (700mL)中。Na完 全溶解后，滴加3-甲基丁-2-酮(100g，l. 16mol)和草酸二乙酯(77ml, 0. 5mol)的混合物。 將反應(yīng)混合物在冰鹽浴中攪拌，并且直到TLC顯示反應(yīng)完全。加入乙酸(38. lml，0.5mol)， 并將混合物在室溫?cái)嚢杓s30min。將反應(yīng)混合物在冰鹽浴中冷卻，并用水合胼(29. 4g，
0.5mol)處理。完全加入后，將混合物升至室溫，并攪拌至通過(guò)TLC判斷反應(yīng)完全。將反 應(yīng)混合物減壓濃縮，并再次溶解于EtOAc中。將EtOAc溶液用NaHCO3、鹽水和水洗滌，干燥 (MgSO4)，并真空濃縮。用冰冷的石油醚洗滌得到的固體以得到3-異丙基-IH-吡唑-5-甲 酸乙酯(90g，42%產(chǎn)率，兩步)，作為灰白色固體。1H NMR(300MHz,CDCl3) δ 12. 00 (s，1H)，
6.57 (s，1H)，4. 30 (q, J = 7. 2Hz，2H)，3. 00 (m, 1H)，1. 46 (t, J = 7. 2Hz，3H)，1. 28 (d, J = 6. 8Hz，6H) ；MS (ESI)m/z :183. 3(M+H+)。將3-氰基苯基硼酸(0. 423g，2. 88mmol)、Cu(0Ac)2(0. 498g，2. 74mmol)和 3-異 丙基-IH-吡唑-5-甲酸乙酯(0. 500g,2. 74mmol)在吡啶(4.0ml)中的混合物在80°C加熱 4.5h。用壓0(301^)淬滅反應(yīng)，并用EtOAc (3X40mL)萃取。將合并的有機(jī)層用鹽水(30mL) 洗滌，干燥(MgSO4)，并濃縮。將粗產(chǎn)物經(jīng)色譜純化，得到1-(3-氰基苯基)-3-異丙基-IH-吡 唑-5-甲酸乙酯(0. 3267g，42% 產(chǎn)率)，為白色固體。MS (ESI) m/z :284. 0 [M+H] +。在22°C向攪拌的1-(3-氰基苯基)-3-異丙基-IH-吡唑-5-甲酸乙酯(0. 3267g，
1.15mmol) 1 1 lTHF/Et0H/H20 (18ml)溶液中加入 LiOH · H2O (0. 242g，5. 765mmol)。將 反應(yīng)在室溫?cái)嚢?h。減壓除去溶劑。將殘留物用水(3ml)稀釋?zhuān)⒂肊t2O(5mL)洗滌。用 3M HCl調(diào)節(jié)pH至 4。用Et0Ac(2X30mL)萃取水溶液。將合并的有機(jī)層用鹽水(15mL) 洗滌，干燥(MgSO4)，并濃縮，得到1-(3-氰基苯基)-3-異丙基-IH-吡唑-5-甲酸(0. 275g， 94%產(chǎn)率)，為白色固體。MS(ESI)m/z :256· 0[M+H]+。實(shí)施例B3 將金屬鈉(13. 8g，0. 5mol)分次加到冰冷的無(wú)水Et0H(700mL)中。Na 完全溶解后，滴加3，3-二甲基丁-2-酮(50g,0. 5mol)和草酸二乙酯(77ml, 0. 5mol)的混合物。將反應(yīng)混合物在冰鹽浴中攪拌，并且直到TLC顯示反應(yīng)完全。加入乙酸(38.1ml， 0. 5mol)，并將混合物在室溫?cái)嚢?0min。將反應(yīng)混合物在冰鹽浴中攪拌，并用水合胼 (29. 4g,0. 5mol)處理。完全加入后，將混合物升至室溫，并且攪拌到通過(guò)TLC判斷反應(yīng)完 全。將反應(yīng)混合物減壓濃縮，并再次溶解于EtOAc中。將EtOAc溶液用NaHCO3、鹽水和水 洗滌，干燥(MgSO4)并真空濃縮。用冰冷的石油醚洗滌得到的固體，得到3-叔丁基-IH-吡 唑-5-甲酸乙酯(49g，50%產(chǎn)率，歷經(jīng)兩步)，為白色的固體。1H NMR (400MHz，CDCl3) 5 6. 65(s,lH),4. 38(q,J = 6. 8Hz，2H)，1· 39 (t，J = 6. 8Hz,3H), 1. 35 (s, 1H) ；MS (ESI)m/z 197. 2[M+H]+。
按照實(shí)施例B5的方法，將3-氰基苯基硼酸(5.0g，34mmOl，1.00eq)、3-叔丁 基-IH-吡唑-5-甲酸乙酯(6. 68g，34mmol，1. OOeq)、Cu (OAc)2 (6. 18g，34mmol，1. OOeq)、 4A MS (IOg)和吡啶(34mmol，1. OOeq, 2. 80mL)混合在 CH2Cl2 (300mL)中，得到 5-叔 丁 基-2-(3-氰基-苯基)-2H-吡唑-3-甲酸乙酯(3. 5g，35%產(chǎn)率)。咕 NMR(400MHz,DMS0-d6) δ 8. 05 (m, 1H)，7. 92 (m, 1H)，7. 83 (m, 1H)，7. 68 (m, 1H)，7. 06 (s, 1H)，4. 20 (m, 2H)，1. 30 (s, 9H), 1. 19(m，3H) ；MS (ESI) m/z :298. 0 [M+H] +。按照實(shí)施例B5的方法，將3-叔丁基-l-(3-氰基苯基)-1Η-吡唑-5-甲酸乙 酉旨(3. 5g, 11. 8mmol, 1. OOeq)禾口 LiOH · H2O (2. 5g，60mmol，5. OOeq)混合，得到 5_ 叔 丁 基-2-(3-氰基-苯基)-2!1-吡唑-3-甲酸(2.98，91%產(chǎn)率)。1H NMR(400MHz, DMS0-d6) δ 8. 02 (m, 1H)，7. 89 (m, 1H)，7. 82 (m, 1H)，7. 66 (t，J = 8. OHz, 1H)，7. 00 (s, 1H)，1. 30 (s, 9H) ；MS (ESI) m/z :270· 2 [M+H] +。實(shí)施例B4 將5-溴-2-氟-芐腈(5g，25mmol)、1-( 二苯基亞甲基)胼(5g， 25mmol)、Pd (OAc) 2 (0. 2g, 0. 9mmol)、dppf (0. 69g, 1. 25mmol)禾口 Cs2CO3 (16g, 50mmol)混合 在甲苯(500mL)中。將得到的混合物真空脫氣，用氮?dú)飧采w，然后加熱回流過(guò)夜。通過(guò) 硅膠過(guò)濾冷卻的反應(yīng)混合物，并將濾餅用EtOAc(IOOmL)洗滌。真空濃縮合并的濾液，得 到 5-(2-( 二苯基亞甲基)胼基)-2_ 氟芐腈(6. 7g，86%產(chǎn)率)。1H NMR(300MHz, DMS0) δ 9. 12 (s，1Η)，7. 60 (m, 5H)，7. 46 (m, 2H)，7. 35 (m, 6H)。向5-(2-(二苯基亞甲基)胼基)-2-氟芐腈(3. 5g，llmmol)的Et0H(50mL)溶液中 加入4-甲基-3-氧代戊腈(1. 22g，llmmol)和濃HCl (5mL,60mmol)。將得到的混合物加熱 回流過(guò)夜。減壓濃縮反應(yīng)混合物，將殘留物倒入到水中并用EtOAc (4X IOOmL)洗滌。用碳酸 鈉溶液中和水層至PH 8，并用EtOAc (3 X IOOmL)萃取得到的混懸液。將合并的有機(jī)層真空 濃縮并經(jīng)硅膠色譜純化，得到5-(5-氨基-3-異丙基-IH-吡唑-1-基)-2_氟芐腈(2. 3g， 86 %產(chǎn)率)。1H 匪R (400MHz，DMS0-d6) δ 8. 02 (m，1H)，7. 94 (m，1H)，7. 57 (t，J = 6. 6Hz，1H)， 5. 57(s，2H) ,5. 44 (s，1H)，2. 74 (m, 1H)，1. 14 (d, J = 6. 8Hz，6H) ；MS (ESI) m/z :245. 2 [M+H] +。實(shí)施例B5 將4-氰基苯基硼酸(5. 0g, 34mmol, 1. 00eq)、來(lái)自實(shí)施例B3的3_叔丁 基-IH-吡唑-5-甲酸乙酯(6. 68g，34mmol)、Cu (OAc)2 (6. 18g，34mmol)、4人MS (IOg)和吡啶 (2. 80mL,34mmol)混合在CH2Cl2 (300mL)中，并在室溫、與空氣接觸的條件下攪拌48h。經(jīng)過(guò) 濾除去固體，并依次用H2OUM HCl水溶液、飽和的NaHCO3水溶液和鹽水洗滌。將有機(jī)物干 燥(MgSO4)、真空濃縮并經(jīng)硅膠色譜純化，得到3-叔丁基-1- (4-氰基苯基)-IH-吡唑-5-甲 酸乙酯(4. 0g，40%產(chǎn)率)。1H NMR(400MHz，DMS0-d6) δ 7. 98-7. 95 (m, 2H), 7. 72-7. 70 (m, 2H)，7· 06 (s，1Η)，4· 20 (m, 2H)，1. 30(s，9H)，1. 19(m，3H) ；MS (ESI)m/z :298· 0 [M+H]+。
將3-叔丁基-1- (4-氰基苯基)-IH-吡唑_5_甲酸乙酯(4. Og, 13. 5mmol)的 THF/Et0H/H20 混合溶劑(IOOmL, 1 1 1)的溶液用 LiOH · H2O (2. 85g, 68. 4mmol)處 理，并將得到的混合物在室溫?cái)嚢?h。用IM HCl水溶液稀釋反應(yīng)混合物至pH 3，然后 用Et0Ac(2X50mL)萃取混合物。將合并的有機(jī)物用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)并真空濃縮， 得到 3-叔丁基-l-(4-氰基苯基)-1Η-吡唑-5-甲酸(3. 3g，92% )。1H NMR(400MHz, DMS0-d6) δ 7. 95-7. 92(m，2H)，7· 69-7. 67 (m，2Η)，7· 03 (s, 1H)，1. 30(s，9H) ；MS (ESI)m/z 270. 16[M+H]+。實(shí)施例B6 在0°C向間氨基苯甲酸(200g，1. 46mmol)的濃HCl (200mL)溶液中加 入NaNO2 (102g，1. 46mmol)的水溶液(250mL)，并將反應(yīng)混合物攪拌lh。然后在0°C加入 SnCl2-2H20(662g,2. 92mmol)的濃HCl (2L)溶液。 將反應(yīng)溶液在室溫再攪拌2h。過(guò)濾沉淀 物，并用EtOH和乙醚洗滌，得到3-胼基苯甲酸鹽酸鹽，為白色固體，其未經(jīng)進(jìn)一步純化即用 于下一反應(yīng)。1H 匪R(400MHz，DMS0-d6) δ 10. 8 (s, 3Η), 8. 46 (s, 1H)，7. 53 (s, 1H)，7. 48 (d, J =7. 6Hz, 1H)，7. 37 (m, 1H)，7. 21 (d, J = 7. 6Hz, 1H)。將3-胼基苯甲酸鹽酸鹽(200g，1. 06mol)和4，4_ 二甲基_3_氧代戊腈(146g， 1. 167mol)在Et0H(2L)中的混合物加熱回流過(guò)夜。將反應(yīng)溶液減壓蒸發(fā)。殘留物經(jīng)柱色譜 純化，得到白色固體狀的3-(5-氨基-3-叔丁基-吡唑-1-基)-苯甲酸乙酯(116g，40% 產(chǎn)率)以及3-(5_氨基-3-叔丁基-吡唑-1-基)-苯甲酸(93g，36%產(chǎn)率)。3_(5_氨 基-3-叔丁基-吡唑-1-基)_ 苯甲酸和乙酯=1HNMR(400MHz，DMS0_d6) δ 8. 14(s，1H)， 7. 86-7. 80(m，2H)，7· 57 (t, J = 8. OHz, 1Η)，5· 40 (s, 1Η)，5· 26(s，2H)，4· 33 (q, J = 7. 2Ηζ, 2Η),1. 31 (t, J = 7. 2Ηζ，3Η)，1. 20(s，9H) ；MS (ESI)m/z :288. 0 [Μ+Η]+。實(shí)施例Β7 利用與實(shí)施例Β16類(lèi)似的方法，4-(3-叔丁基_5_氨基-IH-吡 唑-1-基)-苯甲酸乙酯(3.67mmol)可從4-胼基苯甲酸乙酯和新戊?；译嬷苽?。1H NMR(400MHz, DMS0_d6) δ 799 (d, J = 8. 8Hz,2H) ,7. 76 (d, J = 8. 8Hz,2H) ,5. 43 (s, 1H), 5. 38 (br s，2H)，4. 30 (q, J = 7. 2Hz，2H)，l. 31 (t, J = 7. 2Hz，3H)，l. 20(s，9H) ；MS (ESI)m/ ζ :288. 3[M+H] +。實(shí)施例B8 將丙酸乙酯(50g，0. 49mol)和乙腈(30mL，0. 59mol)在 THF(50mL)中 的混合物滴加到NaH(29.4g，0. 74mol)在THF(800mL)的混合物中。完全加入后，將得到的 混合物加熱回流10h。真空濃縮反應(yīng)物，用水稀釋并用Et0Ac(3X400mL)進(jìn)行分配。將有機(jī) 相用鹽水洗滌，干燥(Na2SO4)并濃縮，得到3-氧代-戊腈(39g，82%產(chǎn)率)。1H NMR(400Hz, DMS0-d6) δ 3. 99(s，2H)，2· 50 (q, J = 7. 2Ηζ，2Η)，0· 93 (t, J = 7. 2Ηζ，3Η)。向3-溴-芐腈(25g，138mmol)的甲苯(200mL)混懸液中加入1_( 二苯基亞甲基) 胼(30g, 153mmol)、Pd (OAc) 2 (lg，4. 46mmol)、dppf(3. 5g，6. 3mmol)和 CsCO3 (80g, 245mmol)。 將混合物排空空氣，返充N(xiāo)2,然后加熱回流過(guò)夜。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，并經(jīng)硅膠過(guò) 濾。用Et0Ac(200mL)洗滌濾餅，并將合并的濾液濃縮，得到3_(2_( 二苯基亞甲基)胼 基)芐腈(40g，98%產(chǎn)率)。1H NMR(400MHz，DMS0-d6) δ 9. 24 (s，1H)，7. 54-7. 59 (m，5H)， 7. 42-7. 43 (m, 2H)，7. 12-7. 37 (m, 6H)，7. 12 (d, J = 6. 4Hz, 1H)。將濃HCl (8mL, 96mmol)加到 3_ (2- ( 二苯基亞甲基)胼基)芐腈(5. Og, 16. 8mmol) 和3-氧代-戊腈(2.5g，25.2mmol)的乙醇(SOmL)溶液中。在N2氣氛下將得到的混合物 加熱回流10h。真空除去溶劑，并將殘留物混懸于水中。用飽和的NaHCO3溶液調(diào)節(jié)堿度至pH 8，并用EtOAc萃取混合物。將合并的有機(jī)物用鹽水洗滌，干燥(Na2SO4),真空濃縮，并經(jīng)硅膠色譜純化，得到3-(5_氨基-3-乙基-IH-吡唑-1-基)芐腈(2g，56 %產(chǎn)率)。 1H NMR(400Hz, DMS0_d6) δ 7. 98 (s, 1H)，7· 92 (d, J = 8. 8Hz, 1H)，7· 68 (d, J = 7. 6Hz, 1H)， 7. 61 (t, J = 7. 6Hz, 1H)，5. 45 (s, 2H)，5. 37 (s, 1H)，2. 42 (q, J = 7. 6Hz,2H)，1. 12 (t, J = 7. 6Hz，3H) ；MS (ESI)m/z :213. 2 [M+H] +。實(shí)施例B9 將2-叔丁基-4-氯嘧啶_5_甲酸甲酯(2. 71g，11. 85mmol)和苯基硼 酸(2.88g，23. 7mmol)溶解于飽和的碳酸氫鈉甲苯乙醇(1 2 1) (20mL)的混合物 中，并向該混合物中加入四(三苯基膦)鈀(0)(300mg)。在75°C和Ar氣氛下將反應(yīng)物攪 拌過(guò)夜。用乙酸乙酯(75mL)和水(75mL)稀釋后，將混合物經(jīng)硅藻土過(guò)濾，并分離有機(jī)相。 將有機(jī)相用5%檸檬酸(75mL)和鹽水(75mL)洗滌，干燥(Na2SO4)，并減壓蒸發(fā)，得到半固 體/油狀物。經(jīng)色譜法(乙酸乙酯/己烷)純化所述固體，得到澄清的濃稠油狀物，將該油 狀物固化成白色固體，該白色固體被鑒定為2-叔丁基-4-苯基嘧啶-5-甲酸甲酯(2. 58g， 81 % 產(chǎn)率)。1H NMR (300MHz，DMS0-d6) δ 1. 39 (s，9H)，3. 70 (s，3H)，7. 49-7. 52 (m，3H)， 7. 61-7. 63(m，2H)，9· 04(s，1H) ；MS(ESI)m/z :271· 3[M+H]+。將2-叔丁基-4-苯基嘧啶-5-甲酸甲酯(2. 58g，9. 54mmol)和氫氧化鋰水合物 (1. 20g，28. 6mmol)放入到甲醇二氧六環(huán)水(15mL)的1 1 1混合物中。將溶液在 室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。用乙酸乙酯(70mL)稀釋上述混合物，并用5%檸檬酸(IOOmL)洗滌。將有 機(jī)相用鹽水洗滌，干燥(Na2SO4)并減壓蒸發(fā)，得到白色固體，其被鑒定為2-叔丁基-4-苯基 嘧啶-5-甲酸(2. 31g，94% 產(chǎn)率)。1H NMR (300MHz, DMS0-d6) δ 1. 38(s，9H)，7· 48-7. 50 (m, 3H)，7· 64-7. 67(m，2H)，9· 01 (s, 1Η)，12. 75 (s, 1Η) ；MS (ESI)m/z :257· 3 [M+H]+。實(shí)施例BlO 將5-氨基-2-甲基-芐腈(3g，22. 7mmol)的濃HCl (60mL)混懸液冷 卻至0°C，并以反應(yīng)物溫度上升不高于5°的速率用亞硝酸鈉(1. 6g，22. 7mmol)的水(IOmL) 溶液處理。持續(xù)攪拌30min。還以反應(yīng)物溫度上升不高于5°的速率向上述的混合物中滴 iJP SnCl2 (10. 2g,45. 4mmol)的濃HCl (IOmL)溶液。加入后，將得到的混合物在0°C攪拌lh， 并于室溫再攪拌lh。經(jīng)過(guò)濾收集沉淀物，用乙酸乙酯洗滌，并真空干燥，得到5-胼基-2-甲 基芐腈鹽酸鹽(3. 6g，87%產(chǎn)率)，其不經(jīng)進(jìn)一步純化即可用于下一步驟。將5-胼基-2-甲基芐腈的鹽酸鹽(3.6g，19.7mmol)、4-甲基_3_氧代-戊腈 (2. 6g，23. 6mmol)和濃 HCl (5mL，60mmol)的 Et0H(50mL)溶液在 80°C、N2 氣氛下加熱 8h。 真空除去溶劑，并將粗固體用乙酸乙酯洗滌。將上述固體混懸于H2O中，并將該混合物用 飽和的NaHCO3溶液中和，用EtOAc萃取。將有機(jī)萃取物用鹽水洗滌，干燥(Na2SO4)并真空 濃縮，得到5-(5_氨基-3-異丙基-IH-吡唑-1-基)-2-甲基芐腈(3. 4g，72%產(chǎn)率)。1H NMR (400Hz, DMS0-d6) δ 7. 92 (d, J = 2. 4Hz, 1H)，7· 81 (dd, J = 8. 4,2. 4Hz, 1H)，7· 52 (d, J =8. 8Hz, 1H)，5. 44 (br s，2H)，5. 38 (s, 1H)，2. 75 (m, 1H)，2. 49(s，3H)，1. 16 (d, J = 6. 8Hz, 6H) ；MS (ESI)m/z :241. 2 [M+H] +。實(shí)施例Bll 將來(lái)自實(shí)施例B8的3_ (2- (二苯基亞甲基)胼基)芐腈(20g，67mmol) 的 Et0H(500mL)混懸液用濃 HCl (5. 5mL,66mmol)和 4-甲基-3-氧代-戊腈(llg，0. Imo 1) 處理。將反應(yīng)混合物加熱回流過(guò)夜。將反應(yīng)混合物減壓濃縮，溶解于水(300mL)中，并用 EtOAc (3 X 300mL)洗滌。將水層用NaHCO3溶液中和至pH = 8，并用EtOAc (2 X 300mL)萃取。 將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，干燥(Na2SO4)，并蒸發(fā)，得到3-(5-氨基-3-異丙基-IH-吡唑-1-基)芐腈(8. 2§，54%產(chǎn)率)。^-WR(400MHz，DMS0-d6) 8 7. 99 (s, 1H)，7. 92 (m, 1H)， 7. 69 (d, J = 6. 4Hz 1H)，7. 60 (t, J = 7. 2Hz, 1H)，5. 44(s，2H)，5. 38 (s, 1H)，2. 74 (m, 1H)， 1. 16 (d, J = 7. 6Hz，6H) ；MS (ESI)m/z :227. 2 [M+H]+。實(shí)施例B12 將苯甲?；宜峥?2. 88g，15. Ommol)和原甲酸三乙酯(4. 51g， 30. 45mmol)攪拌到乙酸酐(10mL)中，并升至130°C，反應(yīng)3h。將反應(yīng)物真空濃縮，并與甲苯 (2X10mL)共沸，得到(Z)-2-苯甲?；?3-乙氧基丙烯酸乙酯。將21 %乙醇鈉的乙醇溶液(4. 86g，14. 98mmol)加到乙脒鹽酸鹽(2. 047g, 14. 98mmol)的乙醇(20mL)溶液中，并將反應(yīng)物在室溫?cái)嚢?5min。將粗(z)_2_苯甲酰 基-3-乙氧基丙烯酸乙酯(3. 72g，14. 98mmol)的乙醇(20mL)溶液加到反應(yīng)物中。在室溫 攪拌過(guò)夜后，將反應(yīng)物升溫，回流lh，冷卻至室溫，并真空濃縮。殘留物用水(50mL)稀釋?zhuān)?用乙酸(pH =3)酸化，伴隨有沉淀物的形成。將混合物用乙酸乙酯(2X50mL)萃取。合 并的有機(jī)相用鹽水洗滌，干燥(Na2S04)并真空濃縮，得到半固體狀的泥狀物。將泥狀物用乙 醚(40mL)研磨，過(guò)濾以除去固體，并將乙醚相真空濃縮，得到2-甲基-4-苯基嘧啶-5-甲 酸乙酯( 70%純度)。MS(ESI)m/z :243. 0[M+H] +。將粗的2-甲基-4-苯基嘧啶-5-甲酸乙酯(2. 46g，7. llmmol)和氫氧化鋰水合物 (1. 193mg,28. 4mmol)的乙醇水二氧六環(huán)(1:1: l，24mL)溶液在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。將 混合物用水(40mL)、lN Na0H(5mL)和乙醚(40mL)洗滌。水相用6N HCl(pH =3)酸化，并 用乙酸乙酯(2X25mL)萃取。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，干燥(Na2S04)并真空濃縮，得到 2-甲基-4-苯基嘧啶-5-甲酸(1.478，97%產(chǎn)率)，為黃色固體。NMR (400MHz，DMS0_d6) 8 2. 69(s，3H)，7. 44-7. 50 (m，3H)，7. 60(d，2H)，8. 97 (s, 1H)，13. 49 (s，1H) ；MS (ESI)m/z 215. 0[M+H]+。實(shí)施例B13 向4-肼基苯甲酸(10g，65. 8mmol)的Et0H(200mL)溶液中加入濃 HC1(12M，54. 8mL,658mmol)和來(lái)自實(shí)施例B8的3-氧代-戊腈(12. 7g，0. 13mol)。將得到的 混合物加熱回流過(guò)夜。真空濃縮反應(yīng)混合物，并將殘留物溶解于水中，用Et0Ac(4X200mL) 洗滌。將水層用飽和的NaHCOyK溶液進(jìn)行堿化(pH 8)，并用Et0Ac(2X200mL)萃取。有機(jī) 萃取物用鹽水洗滌，干燥(Na2S04)，并真空濃縮，得到4- (5-氨基-3-乙基-吡唑-1-基)-苯 甲酸乙酯(9. 0§，53%產(chǎn)率)。^-WR (400MHz，DMS0-d6) 8 7. 98(d, J = 7. 2Hz，2H)，7. 73 (d, J = 7. 2Hz，2H)，5. 42(s，2H)，5. 36 (s, 1H)，4. 29(q, J = 7. 2Hz，2H)，2. 41(q，J = 7. 6Hz，2H)， 1. 30 (t, J = 7. 2Hz，3H)，1. 11 (t，J = 7. 6Hz，3H) ；MS (ESI)m/z -.260. 1[M+H] +。實(shí)施例B14 將3-氧代-3-苯基丙酸乙酷(3. 00g，15. 61mmol)和原甲酸三乙酯 (3. 89mL)的乙酸酐(4.42mL)溶液升至120°C，保持4h，并真空濃縮，得到(E)_2_苯甲酰 基-3-乙氧基丙烯酸乙酯(3. 40g，88%產(chǎn)率)。MS (ESI)m/z :217. 0 [M+H] +。在0°C將水合胼(823mg，16. 4mmol)的乙醇(5mL)溶液滴加到(E) -2-苯甲酰 基-3-乙氧基丙烯酸乙酯(3. 40g，13. 7mmol)的乙醇(20mL)溶液中。將混合物升至室溫， 攪拌24h，然后真空濃縮，得到3個(gè)組分的混合物。把混合物溶解于乙酸乙酯(30mL)中，用 5%檸檬酸(25mL)、飽和的碳酸氫鈉(25mL)和鹽水(25mL)洗滌，干燥(Na2S04)，真空濃縮， 并經(jīng)柱色譜純化(乙酸乙酯/己烷)，得到淺黃色固體(1.37g)。LC和LCMS顯示為甲酯和 乙酯的 1 1 混合物。MS(ESI)m/z 203. 0 和 217. 0[M+H] +。在0°C將IN六甲基二硅基氨基鋰(5.09mL，5.09mmol)加到酯混合物(1. 00g， 4. 62mmol)的THF(5mL)溶液中。0. 5h后，加入異丙基碘(2. 358g，13. 87mmol)，并將反應(yīng)緩 慢升至室溫。3h后，將反應(yīng)物升溫至回流并攪拌過(guò)夜。加入異丙基碘(1. 5mL)和碳酸銫 (lg)，并且升溫持續(xù)過(guò)夜。將反應(yīng)物用另外的異丙基碘(1.5mL)處理并在80°C攪拌過(guò)夜。 將反應(yīng)物用另外的異丙基碘(1.5mL)處理并在80°C攪拌過(guò)夜。將反應(yīng)物用另外的異丙基 碘(1.5mL)處理并在80°C攪拌過(guò)夜。冷卻反應(yīng)物至室溫并過(guò)濾除去不溶物。將濾液用乙酸 乙酯(50mL)稀釋?zhuān)?%檸檬酸(40mL)、飽和的碳酸氫鈉(40mL)和鹽水(40mL)洗滌，干燥 (Na2S04)，真空濃縮并經(jīng)柱色譜純化(乙酸乙酯/己燒)，得到1-異丙基-3-苯基-1H-吡 唑-4-甲酸乙酯和1-異丙基-5-苯基-1H-吡唑-4-甲酸乙酯，作為油狀的甲酯和乙酯的 混合物(470mg)。MS(ESI)m/z 259. 0 和 245. 0[M+H]+。將上述酯(470mg， 1. 819mmol)和氫氧化鋰(305mg，7. 28mmol)的乙醇水二 氧六環(huán)(1 1 l，6mL)溶液升至40°C并攪拌過(guò)夜。冷卻反應(yīng)物至室溫，并用水(30mL) 和乙醚(20mL)稀釋。除去乙醚，并將水相用6N HCl(pH =2，濕的石蕊)進(jìn)行酸化，并用 乙酸乙酯(2X25mL)萃取。合并的乙酸乙酯層用鹽水(25mL)洗滌，干燥(Na2S04)并真空 濃縮，得到白色的固體，1"異丙基-3-苯基-1H-吡唑-4-甲酸(主要異構(gòu)體)和1-異丙 基-5-苯基-1H-吡唑-4-甲酸(381mg，91%產(chǎn)率)。咕NMR(300MHz，DMS0-d6，主要異構(gòu)體) 8 1. 50 (d, 6H)，3. 38 (s,3H) ,4. 61 (hp, 1H)，7. 39-7. 45 (m, 3H)，7. 77-7. 79 (m, 2H)，8. 38 (s, 1H)，12. 21(s，lH) ；MS (ESI)m/z :231. 0 [M+H] +。利用通用方法C，將1-異丙基-3-苯基-1H-吡唑-4-甲酸和1-異丙基_5_苯 基-1H-吡唑-4-甲酸(381mg, 1. 655mmol)、三乙胺(193mg, 1. 903mmol)、2，2，2-三氯 乙醇(494mg，3. 31mmol)和DPPA(524mg，1. 903mmol)混合，并經(jīng)柱色譜(乙酸乙酯/己 烷)純化，得到1-異丙基-3-苯基-1H-吡唑-4-基氨基甲酸2，2，2_三氯乙酯(較快的 洗脫物，340mg)，為濃稠油狀物，1H NMR (300MHz, DMS0_d6) 8 1. 51(d，6H)，4. 55(hp，lH)， 4. 95(s，2H)，7. 35-7. 46(m，3H)，7. 75-7. 77(m，2H)，7. 95 (s, 1H)，9. 35 (s，1H) ；MS (ESI)m/z 378. 0 [M+H] +和1-異丙基-5-苯基-1H-吡唑-4-基氨基甲酸2，2，2-三氯乙酯(較慢的洗 脫物，79mg)，為泡末狀物，咕 NMR(300MHz, DMS0_d6) 8 1. 40 (d，6H)，4. 42 (hp, 1H)，4. 88 (s， 2H)，7. 43-7. 60(m，6H)，9. 15 (s，1H) ；MS (ESI)m/z :378. 0 [M+H]+。實(shí)施例B15 對(duì)于1-異丙基-3-苯基-1H-吡唑-4-基氨基甲酸2,2,2-三氯乙酯 的制備參見(jiàn)實(shí)施例B14。實(shí)施例B16 將來(lái)自實(shí)施例B14 (1. 051g, 4. 86mmol)的3-苯基-1H-吡唑-4-甲酸 乙酯(1. 051g,4. 86mmol)、碳酸鉀粉末(5. 37g，38. 9mmol)和碘乙燒(2. 274g, 14. 58mmol)在 乙腈(20mL)中的漿狀物升溫，回流5h，然后冷卻至室溫。將反應(yīng)物過(guò)濾，用乙腈(2X20mL) 洗滌固體。將濾液真空濃縮并在乙酸乙酯(30mL)和水(30mL)之間進(jìn)行分配。有機(jī)相用鹽 水洗滌，干燥(Na2S04)并真空濃縮，得到油狀物。LC、LCMS和NMR與乙基異構(gòu)體的2 1混 合物一致(1. 066g，90%產(chǎn)率)。MS (ESI)m/z :245. 0 [M+H] +。利用與實(shí)施例B14類(lèi)似的方法，將異構(gòu)體酯的2 1混合物(1. 066g，4. 36mmol) 和氫氧化鋰(732mg，17.45mmol)合并，得到為乙基異構(gòu)體的2 1混合物的羧酸，為濃稠油 狀物。LC 和 LCMS 與指定的結(jié)構(gòu)一致。MS(ESI)m/z :217. 0[M+H]+。利用通用方法C，將異構(gòu)體酸的混合物(877mg，4. 06mmol)、三乙胺(472mg， 4. 66mmol)、2，2，2_三氯乙醇(1. 515g, 10. 14mmol)和DPPA(1. 284g，4. 66mmol)混合，經(jīng)色譜純化(乙酸乙酯/己燒)，得到1-乙基-3-苯基-1H-吡唑-4-基氨基甲酸2，2，2-三氯乙 酯(較快的洗脫物，261mg，>99% 純度)/H NMR (300MHz, DMS0-d6) 8 1. 53(t，3H)，4. 26 (q, 2H)，5. 01 (s，2H)，7. 40-7. 52 (m, 3H)，7. 81-7. 83 (m, 2H)，7. 99 (s, 1H)，9. 43 (s, 1H) ；MS (ESI) m/z 364. 0 [M+H] +和1-乙基-5-苯基_1H_吡唑-4-基氨基甲酸2，2，2-三氯乙酯(較慢的洗 脫物，261mg，> 99%純度)/H NMR(300MHz，DMS0_d6) 8 1. 37(t,3H) ,4. 13(q，2H)，4. 94 (s， 2H), 7. 52-7. 64 (m, 6H), 9. 24 (s，1H) ；MS (ESI) m/z :364. 0 [M+H]+。實(shí)施例B17 對(duì)于1-乙基-3-苯基-1H-吡唑-4-基氨基甲酸2，2，2-三氯乙酯的 制備參見(jiàn)實(shí)施例B16。實(shí)施例B18 將 3-氟苯基硼酸(0. 5g，3. 57mmol)、Cu(0Ac)2(l. 0g，5. 36mmol)和 來(lái)自實(shí)施例B2的3-異丙基-1H-吡唑-5-甲酸乙酯(0. 71g,3. 93mmol)的混合物在吡啶 (15ml)中于室溫?cái)嚢?6h。將反應(yīng)物用水(40mL)稀釋?zhuān)⒂靡宜嵋阴?3X20ml)萃取。 將合并的有機(jī)層洗滌，干燥，真空濃縮并經(jīng)色譜(乙酸乙酯/己烷)純化，得到1-(3_氟 苯基)_3_異丙基-1H-吡唑-5-甲酸乙酯，為無(wú)色的油狀物(0.42§，43%產(chǎn)率)。 NMR (400MHz, DMS0_d6.) S 7. 50 (m，1H)，7. 40 (m，1H)，7. 31 (m，2H)，6. 98 (s，1H)，4. 20 (q，J =6Hz，2H)，3. 00 (m, 1H)，1. 25 (d, J = 6Hz，6H)，1. 18 (d, J = 6Hz，3H) ；m/z :277. 0 [M+H]+。將1-(3-氟苯基)-3-異丙基-1H-吡唑-5-甲酸乙酯(0. 50g, 1. 8mmol)和氫氧化 鋰一水合物(0. 37g，8. 8mmol)的混合物在(THF 乙醇水-2 1 1,20ml)中攪拌lh。蒸 發(fā)除去反應(yīng)混合物中的揮發(fā)物，并將殘留物用水(50mL)稀釋。在攪拌下用HC1酸化溶液至 pH 2。將固體過(guò)濾，用水洗滌并干燥，得到1- (3-氟苯基)-3-異丙基-1H-吡唑-5-甲酸， 為白色晶狀固體(0. 35g，78%產(chǎn)率)。匪R(400MHz，DMS0-d6) 8 7. 50 (m, 1H), 7. 37(dd, J =10. 2,2. 4Hz, 1H), 7. 31-7. 25(m，2H)，6. 92 (s, 1H)，2. 96 (m, 1H)，1. 24 (d, J = 7Hz，6H) ；m/ z :249[M+H] +。實(shí)施例B19 在0°C向填加有KOtBu (4g, 36mmol)和乙醚(100mL，干燥的)的燒瓶 中滴加2-氟芐腈(2. lg，17. 5mmol)和MeCN(0. 738g，18mmol)的混合物。加入后，將混合物 在室溫?cái)嚢?天。加入水，用乙醚(3X100mL)萃取反應(yīng)物。將有機(jī)層混合，用鹽水洗滌，干 燥(Na2S04)并真空濃縮，得到黃色油狀物，將其溶解于CH2C12中，用3M HC1酸化溶液。在室 溫將溶液攪拌2小時(shí)后，將溶液用二氯甲烷(3X200mL)萃取。將有機(jī)層混合，用鹽水洗滌 并干燥(Na2S04)并真空濃縮，得到3-(2-氟-苯基)-3-氧代-丙腈(2g，70 %產(chǎn)率)，為黃 色固體。屯匪R(300MHz，DMS0-d6) 8 7. 99-7. 92 (m, 1H), 7. 70-7. 58 (m, 1H), 7. 35-7. 14 (m, 2H)，4. 09 (m, 2H)。向3-(2-氟苯基)-3-氧代丙腈(0. 501g,3. 07mmol)的Et0H(5mL)溶液中加入 甲基胼(0. 141g，3. 07mmol)和濃HC1 (2滴)，并將混合物在80°C攪拌16h。除去溶劑；加 入飽和的NaHC03溶液(35mL)，并用EtOAc (2 X 30mL)萃取產(chǎn)物。將合并的有機(jī)物用鹽水 洗滌、干燥(Na2S04)并濃縮，得到粗產(chǎn)物，將其經(jīng)柱色譜(甲醇/DCM)純化，得到3_(2_氟 苯基)-1_甲基-1H-吡唑-5-胺，為濃稠的殘留物(0.3g，52%產(chǎn)率)。NMR (400MHz, DMS0-d6) 8 7. 83 (t, J = 7. 2Hz, 1H)，7. 19-7. 13 (m, 3H)，5. 75 (d, J = 4. 4Hz, 1H)，5. 27 (s, 2H), 3. 56(s，3H) ；MS (ESI) m/z :192. 1[M+H] +。實(shí)施例1 利用通用方法B，將實(shí)施例B1 (0. 0898g，0. 30mmol)、THF(1. OmL)、實(shí)施 例A1(0. 0853g，0. 30mmol)和1-甲基吡咯烷(0. 00312mL)混合，并將得到的產(chǎn)物經(jīng)柱色譜純化，得到1-(3_叔丁基-1-苯基-1H-吡唑-5-基)-3-(2_氟-4-(2-(l-甲基-1H-吡 唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲(0. 125g，79%產(chǎn)率)，為白色泡末狀物質(zhì)。咕 NMR(DMS0-d6) 8 9. 10 (d, J = 1. 6Hz，1H)，8. 89 (s，1H)，8. 60-8. 57 (m，2H)，8. 28-8. 23 (m， 2H)，7. 68 (d, J = 2. 0Hz, 1H)，7. 56-7. 49 (m，3H)，7. 44-7. 38 (m，2H)，7. 17-7. 11 (m，2H)，
6.39 (s, 1H)，3. 92 (s, 3H)，2. 31 (s，3H)，1. 26 (s,9H) ；MS (ESI)m/z :526. 2 [M+H] +。實(shí)施例2 利用通用方法C，將實(shí)施例B2(0. 060g，0. 24mmol)和實(shí)施例A1(0. 200g, 0. 71mmol)混合，并將得到的產(chǎn)物經(jīng)柱色譜純化，得到1_(1_(3-氰基苯基)-3-異丙 基-1H-吡唑-5-基)-3-(2-氟-4-(2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶_4_基氧基)苯 基)脲(0.077g，61% 產(chǎn)率)，為白色固體。NMR(DMS0-d6) 8 9. 06 (d, J = 1. 6Hz, 1H), 8. 95 (s, 1H) ,8. 55-8. 54(m，2H)，8. 22 (s, 1H) ,8. 18 (t, J = 9. 2Hz, 1H) ,8. 03 (t, J = 1. 2Hz, 1H)，7. 91-7. 86(m，2H)，7. 73(t，J = 8. 0Hz，1H)，7. 61 (s，1H)，7. 39 (dd，J = 11. 2,2. 4Hz, 1H)，7. 12-7. 07 (m, 2H)，6. 38 (s, 1H)，3. 90 (s,3H)，2. 89 (m, 1H)，2. 29 (s, 3H)，1. 22 (d, J = 6.4Hz，6H) ；MS (ESI)m/z :537. 3 [M+H] +。實(shí)施例3 利用通用方法C,將實(shí)施例B3 (lOOmR, 0. 370mmol)、三乙胺(43mg， 0. 426mmol)、實(shí)施例 A9 (lOOmg，0. 370mmol)和 DPPA(117mg，0. 426mmol)混合，并經(jīng)色譜(甲 醇/乙酸乙酯)純化，得到殘留物，將其用4N HC1/ 二氧六環(huán)(0. 4mL)處理并攪拌5min。 經(jīng)過(guò)濾收集固體，并將其鑒定為l-(4-(2-(lH-吡唑-4-基)吡啶-4-基氧基)-2_氟 苯基)-3-(3_叔丁基-l-(3-氰基苯基)-lH-吡唑-5-基)脲鹽酸鹽(1311^，6%產(chǎn)率)。
NMR (300MHz, DMS0_d6) 8 1. 27(s，9H)，6. 42 (s，1H)，7. 00-7. 12(m，2H)，7. 38 (d, 1H)，
7.50-7. 60 (m, 2H)，7. 73 (t, 2H)，7. 86-7. 91 (m, 2H)，8. 03 (s, 1H)，8. 17 (t, 1H)，8. 50-8. 53 (m, 2H)，9.01(s，lH)，9. 10 (s, 1H) ；MS (ESI)m/z :537. 3 [M+H]+。實(shí)施例4 利用通用方法C，將實(shí)施例B3 (152mg, 0. 563mmol)、三乙胺(66mg， 0. 648mmol)、實(shí)施例 A1 (150mg,0. 563mmol)和 DPPA(178mg，0. 648mmol)混合，并經(jīng)柱色譜 (甲醇/乙酸乙酯)純化，得到白色泡末狀物質(zhì)。將該泡末狀物質(zhì)溶解于乙腈(4mL)中， 并用4N HC1/二氧六環(huán)(0.3mL)處理，真空濃縮并凍干，得到1_ (3-叔丁基-1-(3-氰基苯 基)-lH-吡唑-5-基)-3-(2_氟-4-(2-(l-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶_4_基氧基)苯 基)脲鹽酸鹽(129mg，41%產(chǎn)率)。NMR(300MHz,DMS0-d6) 8 1. 27(s,9H) ,3. 92(s,3H),
6.41 (s, 1H)，7. 12-7. 14 (m, 2H)，7. 42-7. 45 (m, 1H)，7. 50-7. 60 (m, 1H)，7. 70-7. 74 (m, 2H)，
7.84-7. 92 (m, 2H)，8. 04 (s, 1H)，8. 15-8. 20 (m, 1H)，8. 49 (s, 1H)，8. 52-8. 53 (m, 1H)，8. 81 (s， 1H)，9. 27(s，lH)，9. 31(s，lH) ；MS (ESI)m/z :551. 2 [M+H]+。實(shí)施例5 將實(shí)施例B4(249mg，1. 02mmol)的THF(2mL)溶液冷卻至_78°C，并用 雙(三甲基硅基)氨基鋰(1.0M的THF溶液)(2. 12mL，2. 12mmol)處理。將得到的溶液 在_78°C攪拌20min。快速加入氯甲酸異丙烯酯(0. 12mL, 1. llmmol)，并將反應(yīng)物在-78°C 攪拌lOmin，通過(guò)加入2M HC1水溶液(1. 2mL, 2. 4mmol)來(lái)淬滅。將混合物升溫至室溫，并在 EtOAc和水之間進(jìn)行分配。將有機(jī)物用鹽水洗滌，干燥(Na2S04)并真空濃縮，得到1_(3_氰 基-4-氟苯基)-3-異丙基-1H-吡唑-5-基氨基甲酸丙-1-烯-2-基酯(341mg，100 %產(chǎn) 率)。咕匪R (400MHz，DMS0-d6) 8 9. 89 (br s，1H)，8. 04 (dd，J = 5. 6，2. 8Hz，1H)，7. 88 (ddd， J = 9. 2,4. 8,2. 8Hz, 1)，7. 68 (t, J = 9. 2Hz, 1H)，6. 30 (s, 1H)，4. 70 (br s, 1H)，4. 62 (br s, lH)，2.88(m，lH)，1.81(br s，3H)，1. 21 (d，J = 7. 2Hz,6H) ；MS (ESI)m/z :329. 0 [M+H] +。
將1- (3-氰基-4-氟苯基)-3-異丙基-1H-吡唑-5-基氨基甲酸丙烯_2_基 酯(95mg，0.29mmol)、實(shí)施例 Al(80mg，0.28mmol)和 N-甲基吡咯燒(2. 5mg,0. 029mmol) 混合在THF(2mL)中，并在具塞燒瓶中加熱至55°C，保持60h。將反應(yīng)混合物經(jīng)硅膠色 譜和重結(jié)晶(丙酮_乙腈)純化，得到1-(1_(3-氰基-4-氟苯基)-3_異丙基-1H-吡 唑-5-基)-3- (2-氟-4- (2- (1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲(49mg， 30 % 產(chǎn)率)。NMR (400MHz, DMS0_d6) 8 8. 93 (s, 1H) ,8. 89 (s, 1H) ,8. 36 (d, J = 5. 7Hz, 1H) ,8. 25 (s, 1H) ,8. 16(dd, J = 5. 8,2. 8Hz, 1H)，8. 09(t, J = 9. 1Hz, 1H)，7. 98-7. 93 (m, 2H)，
7.71 (t, J = 9. 0Hz，lH)，7. 26-7. 21(m，2H)，6. 99(m，lH)，6. 65(dd，J = 5. 7，2. 6Hz，1H)， 6. 37 (s, 1H), 3. 84(s，3H)，2. 88 (m, 1H)，1. 22 (d, J = 6. 8Hz，6H) ；MS (ESI)m/z :555. 0 [M+H]+。實(shí)施例6 利用通用方法C，將實(shí)施例B5(0. 100g,0. 371匪ol)、TEA (0. 259mL，
I.857mmol)、DPPA (0. 10mL,0. 464mmol)和實(shí)施例 A1 (0. 211g，0. 743mmol)混合，并經(jīng)色譜 純化，得到1- (3-叔丁基-1- (4-氰基苯基)-1H-吡唑-5-基)-3- (2-氟-4- (2- (1-甲 基-1H-吡唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲(0. 116g，57%產(chǎn)率)，為白色泡末狀物 質(zhì)。通過(guò)與MsOH(l.Oeq)反應(yīng)，將其轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的甲磺酸鹽。屮NMR(400MHz, DMS0-d6) 8 9. 10(s，lH)，9.01(s，lH)，8.60-8.57(m，2H)，8.27(s，lH)，8. 18(t, J = 9.6Hz，lH)，
8.01 (d, J = 8. 4Hz,2H)，7. 78 (d, J = 8. 8Hz,2H)，7. 68 (d, J = 2. 0Hz, 1H)，7. 42 (dd, J =
II.6,2. 8Hz，2H)，7. 16-7. 10(m，2H)，6. 44 (s，1H)，3. 92(s，3H)，2. 32(s，3H)，1. 28(s，9H)； MS(ESI)m/z :551. 2[M+H] + 0實(shí)施例7 利用通用方法A，將實(shí)施例B6(l. 50g，5. 22mmol)轉(zhuǎn)化成為3_(3_叔丁 基-5-((2，2，2-三氯乙氧基)羰基)-lH-吡唑-1-基)苯甲酸乙酯(2. 79g，116%產(chǎn)率)， 為濃稠油狀物。1H 匪 R (300MHz，DMS0-d6) 8 1. 26(s，9H)，1. 32(t，3H)，4. 32(q，2H)，4. 82 (s, 2H)，6. 32 (s, 1H)，7. 59-7. 63 (m, 1H)，7. 72-7. 74 (m, 1H)，7. 89-7. 92 (m, 1H)，8. 01 (s，1H)， 10. 10 (s, 1H) ；MS (ESI)m/z :464. 0 [M+H] +。利用通用方法A，將實(shí)施例Al(300mg，1.055mmol)、二異丙基乙胺堿(682mg，
5.28mmol)和3-(3-叔丁基-5-((2，2，2-三氯乙氧基)羰基)_1H_吡唑-1-基)苯甲 酸乙酯(488mg，1. 055mmol)混合，并經(jīng)柱色譜(甲醇/乙酸乙酯)純化，得到3-(3-叔 丁基-5-(3-(2-氟-4-(2-(l-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶_4_基氧基)苯基)脲 基)-lH-吡唑-1-基)苯甲酸乙酯(250mg，39%產(chǎn)率)，為白色泡末狀物。NMR(300MHz, DMS0-d6) 8 1. 27(s,9H),l. 31(t,3H),3. 84(s,3H),4. 31 (q, 2H)，6. 40 (s, 1H)，6. 65 (m, 1H)，
6.97-7. 00 (m, 1H)，7. 21 (s, 1H)，7. 24 (s, 1H)，6. 68 (t, 1H)，7. 81-7. 84 (m, 1H)，7. 95-8. 12 (m, 4H), 8. 24 (s，1H) ,8. 35 (d, 1H) ,8. 86 (s, 1H) ,8. 93 (s, 1H) ；MS (ESI)m/z :598. 2 [M+H]+。將3-(3-叔丁基-5-(3-(2-氟-4-(2-(1-甲基 _1H_ 吡唑 _4_ 基)吡啶 _4_ 基氧 基)苯基)脲基)-lH-吡唑-1-基)苯甲酸乙酯(192mg，0. 321mmol)置于四氫呋喃(5mL) 中，并冷卻至 0C。向上述溶液中加入1M LiAlH4/THF(0. 321mL，0. 321mmol)。lh后，在 0C 將反應(yīng)小心地用水(10mL)淬滅，并用乙酸乙酯(20mL)稀釋。有機(jī)相用鹽水(10mL)洗滌，干 燥(Na2S04)并真空濃縮，得到泡沫狀物。LC分析顯示原料。將該泡沫狀物溶解在THF(5mL) 中，并冷卻至0°C。將其用1M LiAlH4/THF(321uL)處理，并在0°C攪拌1小時(shí)。然后將反應(yīng) 用水(10mL)淬滅，并用乙酸乙酯(20mL)稀釋?zhuān)名}水(10mL)洗滌，干燥(Na2S04)并真空濃 縮，得到1- (3-叔丁基-1- (3-(羥基甲基)苯基)-1H-吡唑-5-基)-3- (2-氟-4- (2- (1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲(146mg，82%產(chǎn)率)，為泡末狀物。將該泡末 狀物溶解于乙醇(4mL)中，用對(duì)甲苯磺酸(50mg，0. 263mmol)處理，真空濃縮，用乙醚(10mL) 研磨并過(guò)濾，得到固體狀物，其被鑒定為1-(3_叔丁基-1-(3-(羥基甲基)苯基)-lH-吡 唑-5-基)-3-(2-氟-4-(2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶_4_基氧基)苯基)脲對(duì)甲苯 磺酸(133mg)。屮匪R(300MHz，DMS0-d6) 8 1. 26 (s, 9H), 2. 27 (s, 3H), 3. 90 (s, 3H), 4. 58 (s, 2H)，6. 38 (s, 1H)，7. 07-7. 10 (m, 4H)，7. 35-7. 39 (m, 3H)，7. 44-7. 48 (m, 4H)，7. 55 (br s，1H)， 8. 20-8. 25(m，2H)，8. 53-8. 55(m，2H)，8. 87 (s, 1H)，9. 07 (s, 1H)，0H 和 S03H 缺失；MS (ESI) m/ z :556. 3[M+H] +。實(shí)施例8 利用通用方法D,將實(shí)施例B7 (0. 31g, 1. 079mmol)轉(zhuǎn)化成為4-(3-叔丁 基-5_((丙-1-烯-2-基氧基)羰基)-lH-吡唑-1-基)苯甲酸乙酯(0. 35g，87%產(chǎn)率)，為 灰白色固體。屯 NMR(400MHz，丙酮-d6) 8 8. 12 (d，J = 8. 4Hz，2H)，6. 76 (d，J = 8. 4Hz，2H)，
6.38 (s, 1H)，4. 62(brs,2H) ,4. 37 (q, J = 7. 2Hz，2H)，1. 96(brs,3H)，1. 37 (t, J = 7. 2Hz, 3H)，1. 33(s，9H) ；MS (ESI)m/z :372. 3 [M+H] +。向4-(3_叔丁基-5_((丙-1-烯-2-基氧基)羰基)_1H_吡唑基)苯甲酸乙 酯(0. 201g,0. 541mmol)的 THF(2ml)溶液中加入實(shí)施例 A1 (0. 154g，0. 541mmol)和催化量 的1-甲基吡咯烷，并將混合物在60°C攪拌2h。除去溶劑，并將粗產(chǎn)物經(jīng)柱色譜(乙酸乙酯/ 己烷)純化，得到4- (3-叔丁基-5- (3- (2-氟-4- (2- (1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-4-基 氧基)苯基)脲基)-lH-吡唑-1-基)苯甲酸乙酯(0. 176g，54%產(chǎn)率)，作為無(wú)色泡末狀 物。屮匪R(400MHz，DMS0-d6) 8 8. 96 (s, 1H) ,8. 93 (s, 1H) ,8. 36(d, J = 5. 6Hz, 1H) ,8. 25 (s, 1H)，8. 10-8. 07 (m, 3H)，7. 95 (s, 1H)，7. 71 (d，J = 8. 8Hz,2H)，7. 25-7. 71 (m, 2H)，6. 98 (dt, J =9. 2Hz,l. 2Hz，1H)，6. 66 (dd，J = 5. 6Hz，2. 4Hz，1H)，6. 43 (s，1H)，4. 33 (q，J = 6. 8Hz，2H)， 3. 84(s，3H)，1. 32 (t, J = 6. 8Hz，3H)，1. 27(s，9H) ；MS (ESI)m/z :598. 2 [M+H] +。在 0°C 向 4- (3-叔丁基-5- (3- (2_氟 _4_ (2_ (1_ 甲基 _1H_ 吡唑 _4_基)吡啶 _4_基 氧基)苯基)脲基)-lH-吡唑-1-基)苯甲酸乙酯(0. 175g，0. 293mmol)的THF(2ml)溶液中 加入1M LiAlH4/THF(0. 9ml, 0. 878mmol)，并將混合物在室溫?cái)嚢?h。小心地加入飽和Na2S04 溶液來(lái)淬滅反應(yīng)混合物，并將得到的溶液在室溫?cái)嚢?h。將淬滅的混合物經(jīng)硅藻土層過(guò) 濾，用EtOAc(2X3mL)洗滌，并將合并的濾液真空濃縮，經(jīng)柱色譜(甲醇/CH2C12)純化，得到 1-(3-叔丁基-1-(4-(羥基甲基)苯基)-1H-吡唑-5-基)-3- (2-氟-4- (2- (1-甲基-1H-吡 唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲(0.086，53%產(chǎn)率)，為白色固體。將其轉(zhuǎn)化成為相 應(yīng)的甲苯磺酸鹽。1H 匪R(400MHz，DMS0-d6) 8 9. 07 (s, 1H)，8. 85 (s, 1H)，8. 52-8. 49 (m, 2H)， 8. 24(t, J = 5. 2Hz, 1H)，8. 18 (s，1H)，7. 54 (s，1H)，7. 48-7. 43(m，6H)，7. 35(dd, J = 11. 6Hz, 2. 4Hz, 1H)，7. 09 (d, J = 8. 0Hz，3H)，7. 01(brs, 1H)，6. 38 (s, 1H)，4. 56(s，2H)，3. 89(s，3H)， 2. 27(s，3H)，1. 26(s，9H) ；MS (ESI)m/z :556. 3 [M+H]+。實(shí)施例9 利用通用方法D，將實(shí)施例B8 (0. 250g, 1. 18mmol)轉(zhuǎn)化成為1_(3_氰基 苯基)-3_乙基-1H-吡唑-5-基氨基甲酸丙-1-烯-2-基酯，并通過(guò)重結(jié)晶(己烷)純化， 分離得到無(wú)色的半固體(0. 350g, 100%產(chǎn)率)。NMR(400MHz,DMS0-d6) 8 9. 87(brs, 1H)，
7.9-7. 65 (m,4H)，6. 26 (s, 1H)，4. 61 (m, 2H)，2. 53 (q, J = 6Hz,2H)，1. 76 (s, 3H), 1. 14(t, J = 6Hz，3H) ；MS (ESI)m/z :297. 0 [M+H] +。在N-甲基吡咯烷(0. 013g，0. 155mmol)存在下，使1_(3-氰基苯基)_3_乙基-1H-吡唑-5-基氨基甲酸2,2,2-三氯乙酯(0. 300g, 0. 774mmol)與實(shí)施例A1 (0. 220g， 0. 774mmol)在二氧六環(huán)(5mL)中、于70°C反應(yīng)14小時(shí)。完全除去溶劑，并將殘留物重結(jié) 晶(乙腈)，得到1- (1- (3-氰基苯基)-3-乙基-1H-吡唑-5-基)-3- (2-氟-4- (2- (1-甲 基-1H-吡唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲(0.3038，75%產(chǎn)率)。NMR(400MHz, DMS0-d6) 8 8. 91 (s, 1H), 8. 88 (m, 2H), 8. 48 (d, J = 9Hz，1H)，8. 31 (d，J = 5. 5Hz，lH)， 8. 2(s, 1H) ,8. 04 (t, J = 9Hz, 1H)，7. 99 (m, 1H)，7. 91 (s, 1H)，7. 84 (m, 1H)，7. 69 (t, J = 8Hz, 1H)，7. 19 (dd, J = 12. 0,2. 6Hz, 1H)，7. 17 (d, J = 2. 60Hz, 1H)，6. 95(brd, J = 9Hz, 1H)， 6. 61 (d, J = 5. 5,2. 5Hz, 1H) ,6. 32 (s, 1H)，3. 80(s，3H)，2. 52 (q, J = 6Hz，2H)，1. 15 (d, J = 6Hz，3H) ；MS (ESI)m/z :523. 0 [M+H] +。實(shí)施例10 利用通用方法 C，在 DPPA(57 u L,0. 23mmol)禾P (36 u L,0. 23mmol) 存在下，將實(shí)施例B9 (60mg, 0. 23mmol)和實(shí)施例A1 (67mg, 0. 23mmol)混合，并將得 到的產(chǎn)物經(jīng)柱色譜純化(EtOAc/己烷)，得到1-(2_叔丁基-4-(吡啶-3-基)嘧 啶-5-基)-3-(2-氟-5-(8-甲基-2-(甲基氨基)-7-氧代-7，8-二氫吡啶并[2，3_d]嘧 啶-6-基)苯基)脲(68mg，54%產(chǎn)率)。NMR(400MHz，DMS0_d6，主要異構(gòu)體)8 9. 05 (s, 1H) ,9. 02(brs, 1H)，8. 58 (s, 1H)，8. 34 (d, J = 5. 6Hz, 1H)，8. 23 (s, 1H)，8. 15 (t，J = 9. 2Hz, 1H), 7. 94 (s，1H), 7. 74(m，2H)，7. 53 (m，3H)，7. 22 (dd, J = 2. 4，和 11. 6Hz, 1H)，7. 19 (d, J =2. 4Hz, 1H)，6. 99 (m, 1H)，6. 65 (dd, J = 2. 4，和 5. 6Hz, 1H)，3. 83(s，3H)，1. 36(s，9H)； MS (ESI)m/z :538. 3[M+H] + 0實(shí)施例11 在0°C向?qū)嵤├鼴10(0. 15g，0. 624mmol)的CH2C12 (lOmL)溶液中加入吡 啶(0. 102ml, 1. 248mmol)和氯甲酸 2，2，2-三氯乙酯(0. 103ml，0. 749mmol)。在室溫?cái)嚢?2h后，加入2M HC1，分離有機(jī)層，并將水層用CH2Cl2(lX20mL)萃取。合并的有機(jī)物用鹽水 洗滌，干燥(Na2S04)并濃縮，得到白色泡末狀物。將實(shí)施例A1(0. 177g，0.624mmol)、DIPEA(0.081g，0.624mmol)和 DMS0(2mL) 加到上述泡末狀物中，并將混合物加熱至65°C，反應(yīng)5h。加入水(40mL)，并將產(chǎn)物用 EtOAc (2X35ml)萃取。將合并的有機(jī)物用鹽水洗滌，干燥(Na2S04)并濃縮，得到粗產(chǎn)物，將 其經(jīng)柱色譜(EtOAc/CH2Cl2)純化，得到1-(1_(3-氰基-4-甲基苯基)-3-異丙基-1H-吡 唑-5-基)-3-(2-氟-4-(2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶_4_基氧基)苯基)脲(71mg， 20%產(chǎn)率，2 步)，作為灰白色固體。NMR(400MHz, DMS0-d6) 8 8. 96 (s, 1H) ,8. 88 (s, 1H), 8. 38 (d, J = 6. 0Hz, 1H)，8. 26 (s, 1H)，8. 12 (t，J = 9. 2Hz, 1H)，7. 97(s，2H)，7. 80-7. 77 (m, 1H)，7. 64(d，J = 8. 4Hz，lH)，7. 27-7. 23(m，2H)，7. 01(d，J = 8. 4Hz，1H)，6. 68 (dd，J = 6. 0Hz，2. 0Hz, 1H) ,6. 38 (s，1H) ,3. 86(s，3H)，2. 93-2. 86 (m, 1H)，2. 55(s，3H)，1. 24 (d, J = 6. 4Hz，6H) ；MS (ESI)m/z :551. 0 [M+H] +。實(shí)施例12 將根據(jù)通用方法D由實(shí)施例Bll制備的1-(3_氰基苯基)_3_異 丙基-1H-吡唑-5-基氨基甲酸丙-1-烯-2-基酯(63mg, 0. 20mmol)、實(shí)施例A2 (57mg， 0. 19mmol)和N-甲基吡咯烷(1. 627mg，0. 019mmol)混合在THF(0. 4mL)中，并加熱至 55°C過(guò)夜。將反應(yīng)混合物通過(guò)色譜法純化得到1-(1_(3-氰基苯基)-3_異丙基-1H-吡 唑-5-基)-3-(2-氟-3-甲基-4-(2-(l-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶_4_基氧基)苯基) 脲(58mg，55% 產(chǎn)率。屯匪 R (400MHz，DMS0-d6)，8 8. 96(s,2H) ,8. 36 (d, J = 5. 8Hz, 1H), 8. 27 (s, 1H)，8. 06 (s, 1H)，8. 00-7. 88(m，4H)，7. 76 (t, J = 8. 0Hz, 1H)，7. 20 (d, J = 1. 9Hz,1H)，6. 97(d，J = 9. 2Hz, 1H) ,6. 59 (dd, J = 5. 6，2. 1Hz，1H)，6. 40 (s，1H)，3. 87 (s，3H)，
2.91 (m, 1H), 2. 07 (s, 3H), 1. 25 (d, J = 7. lHz，6H) ；MS (ESI)m/z :551. 2 (M+H+)。實(shí)施例13:將桉照通用方法D由實(shí)施例B11制備的1-(3_氰基苯基)_3_異丙 基-1H-吡唑-5-基氨基甲酸丙-1-烯-2-基酯(73mg，0. 235mmol)、實(shí)施例A3 (68mg， 0. 225mmol)和N-甲基吡咯烷(1. 9mg，0. 022mmol)的溶液混合在THF(0. 6mL)中，并加熱 至55°C，過(guò)夜。將反應(yīng)混合物經(jīng)色譜純化，得到1-(1_(3-氰基苯基)-3_異丙基-1H-吡 唑-5-基)-3-(2，3-二氟-4-(2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶_4_基氧基)苯基)脲 (77mg，62 % 產(chǎn)率)。NMR(400MHz, DMS0_d6) 8 9. 18 (s, 1H) ,8. 99 (s, 1H) ,8. 39 (d, J = 5. 6Hz, 1H) ,8. 29 (s, 1H) ,8. 05 (m, 1H), 7. 99 (s, 1H), 7. 94-7. 87 (m, 3H), 7. 74 (t, J = 8.0Hz， 1H)，7. 28(d，J = 2. 4Hz, 1H) ,7. 18 (m, 1H) ,6. 74 (dd, J = 5. 8，2. 2Hz，1H)，6. 40 (s，1H)，
3.85(s，3H)，2. 90 (m, 1H)，1. 23 (d, J = 7. 0Hz，6H) ；MS (ESI)m/z :555. 2 [M+H] +。實(shí)施例14 桉照通用方法C,將實(shí)施例B12 (75mg, 0. 352mmol)、三乙胺(41mg，
0.405mmol)、實(shí)施例 A1 (100mg，0. 352mmol)禾P DPPA(lllmg，0. 405mmol)混合，并經(jīng)柱 色譜(甲醇/乙酸乙酯)純化，得到1-(2_氟-4-(2-(l-甲基-1H-吡唑-4-基)吡 啶-4-基氧基)苯基)-3-(2_甲基-4-苯基嘧啶-5-基)脲(41!1^，23%產(chǎn)率)，為白色 泡末狀物。屯匪R(300MHz，DMS0-d6) 8 2. 62 (s, 3H), 3. 86 (s, 3H), 6. 65 (s, 1H), 6. 99 (d, 1H)，7. 18-7. 24 (m, 2H)，7. 50-7. 53 (m, 3H)，7. 66-7. 69 (m, 2H)，7. 94 (s, 1H)，8. 13-8. 18 (m, 1H) ,8. 23 (s，1H) ,8. 30-8. 35 (m, 1H) ,8. 55 (br s, 1H) ,9. 03-9. 05 (m, 2H) ；MS (ESI)m/z 496. 0[M+H]+。實(shí)施例15 在 0 °C 向?qū)嵤├?B8(0. 300g, 1. 413mmol)禾P Troc-Cl (0. 233ml,
1.696mmol)的 Et0Ac(7ml)溶液中加入 3M Na0H(0. 707ml，2. 120mmol)。將反應(yīng)物在 0°C 攪拌30min,然后在室溫?cái)嚢?h。用飽和的NaHC03 (2-3ml)和更多的Troc-Cl (0. lml)處 理反應(yīng)，并在室溫?cái)嚢琛?0min后，分離雙相反應(yīng)的各層，并將有機(jī)層用H20(2x)、鹽水 (lx)洗滌，干燥(MgS04)，真空濃縮，并經(jīng)快速柱色譜(EtOAc/己烷)純化，得到1-(3_氰 基苯基)-3_乙基-1H-吡唑-5-基氨基甲酸2，2，2-三氯乙酯(0.47§，86%產(chǎn)率)，為無(wú) 色油狀物。屯匪 R (400MHz，DMS0-d6) 8 10. 18 (brs, 1H), 7. 92 (s, 1H), 7. 85-7. 82 (m, 2H), 7. 70-7. 66 (m, 1H)，6. 29 (s, 1H)，4. 86 (s, 2H)，2. 61-2. 56 (m, 2H)，1. 21-1. 18 (m, 3H) ；MS (ESI) m/z :387. 0[M+H]+，389. 0[M+2+H]+。將l-(3_氰基苯基)-3_乙基-1H-吡唑-5-基氨基甲酸2，2，2_三氯乙酯(0. 156g， 0. 402mmol)、實(shí)施例 A4 和 iPr2NEt (0. 154ml, 0. 885mmol)混合在 DMSO(4ml)中，并在 70°C 加熱條件下攪拌。18h后，將完成的反應(yīng)冷卻至室溫，用鹽水稀釋并用Et0Ac(3x)萃取。 合并的有機(jī)物用鹽水洗滌(2x)，干燥(MgS04)，真空濃縮并經(jīng)反相色譜純化，接著凍干，得 到I- (1- (3-氰基苯基)-3-乙基-1H-吡唑-5-基)-3- (2-氟-4- (2- (1-丙基-1H-吡 唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲(60mg，27%產(chǎn)率)，為白色固體。NMR (400MHz， DMS0-d6) 8 9. 03(s, 1H)，8. 96 (s, 1H)，8. 51 (brs，2H)，8. 18-8. 13 (m, 2H)，8. 04 (brs, 1H)， 7. 92-7. 87 (m, 2H)，7. 87-7. 74 (m 1H)，7. 52 (brs, 1H)，7. 37-7. 36 (m, 1H)，7. 09-7. 07 (m, 1H)，6. 96 (brs, 1H)，6. 37 (s, 1H)，4. 13-4. 09 (m，2H)，2. 61-2. 55 (m, 2H)，1. 83-1. 77(m，2H)， 1.24-1. 18(m，3H)，0. 84-0. 81(m，3H) ；MS (ESI) m/z :551. 2 [M+H]+。實(shí)施例16 將利用通用方法D由實(shí)施例B11制備的丙-1-烯-2-基1_(3_氰基苯基)-3_ 異丙基-1H-吡唑-5-基(90mg，0. 290mmol)、實(shí)施例 A5 (78mg，0. 273mmol)和 N-甲基 吡咯烷(2. 3mg,0. 027mmol)的溶液混合在THF(0. 6mL)中，并加熱至55°C，反應(yīng)40h。將反應(yīng) 混合物經(jīng)色譜純化，并將得到的固體重結(jié)晶(丙酮-己烷)，得到1-(1_(3-氰基苯基)-3_異 丙基-1H-吡唑-5-基)-3- (3-氟-4- (2- (1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯 基)脲(93mg，63%產(chǎn)率)。NMR(400MHz，DMS0_d6) 8 9. 40 (s, 1H), 8. 71 (s, 1H), 8. 40 (d, J =5. 6Hz, 1H)，8. 31 (s, 1H)，8. 08(t, J = 1. 8Hz, 1H)，8. 01(d，J = 0. 5Hz, 1H)，7. 96(ddd, J = 8. 2，2. 2，1. 1Hz, 1H)，7. 92 (dt, J = 8. 0，1. 2Hz, 1H)，7. 78 (t, J = 8. 0Hz, 1H)，7. 69 (dd, J = 13. 3,2. 4Hz, 1H)，7. 34 (t, J = 9. 1Hz, 1H)，7. 26 (d, J = 2. 6Hz, 1H)，7. 24 (m, 1H)，6. 66 (dd, J =5. 8,2. 6Hz, 1H) ,6. 43 (s, 1H)，3. 90(s，3H)，2. 96 (m, 1H)，1. 29(d, J = 6. 9Hz，6H) ；MS (ESI) m/z :537. 3[M+H] +。實(shí)施例17 將來(lái)自實(shí)施例15的1-(3_氰基苯基)_3_乙基_1H_吡唑_5_基 氨基甲酸 2，2，2-三氯乙酯(0. 156g, 0. 402mmol)、實(shí)施例 A6 (0. 126g, 0. 402mmol)和 iPr2NEt(0. 154ml,0. 885mmol)混合在DMS0(4ml)中，并在70°C加熱條件下攪拌。18h后，將 完成的反應(yīng)冷卻至室溫，并直接經(jīng)反相色譜純化，凍干后，得到1-(1-(3-氰基苯基)-3_乙 基-1H-吡唑-5-基)-3- (2-氟-4- (2- (1-異丙基-1H-吡唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯 基)脲(87mg，39% 產(chǎn)率)，為白色固體。屯 NMR (400MHz, DMS0-d6) 8 9. 10(brs, 1H) ,9. 03 (s, 1H)，8. 66 (s, 1H)，8. 60-8. 58 (m, 1H)，8. 27-8. 20 (m, 2H)，8. 10 (brs, 1H)，7. 98-7. 93 (m, 2H)， 7. 82-7. 80 (m, 1H)，7. 66 (s, 1H)，7. 45-7. 42 (m, 1H)，7. 17-7. 15 (m, 1H)，7. 08-7. 07 (m, 1H)，
6.43 (s, 1H)，4. 63-4. 60 (m, 1H)，2. 67-2. 61)m，2H)，1. 50-1. 49 (m, 6H)，1. 28-1. 25(m，3H)； MS (ESI) m/z :551. 2[M+H] + 0實(shí)施例18 將來(lái)自實(shí)施例15的1-(3_氰基苯基)_3_乙基_1H_吡唑_5_基 氨基甲酸 2，2，2-三氯乙酯(0. 156g, 0. 402mmol)、實(shí)施例 A7 (0. 120g, 0. 402mmol)和 iPr2NEt(0. 154ml, 0. 885mmol)混合在 DMS0(4ml)中，并在 70°C 加熱下攪拌。18h 后，將 完成的反應(yīng)冷卻至室溫，并將粗產(chǎn)物直接經(jīng)反相色譜純化，凍干后，得到1-(1_(3-氰基 苯基)-3_乙基-1H-吡唑-5-基)-3-(4-(2-(1_乙基-1H-吡唑-4-基)吡啶_4_基氧 基)-2_ 氟苯基)脲(78mg，36% 產(chǎn)率)，為白色固體。力匪 R (400MHz，DMS0_d6) 8 9. 05 (s, 1H) ,8. 97 (s，1H) ,8. 54-8. 51 (m，2H)，8. 19-8. 16(m，2H)，8. 04 (brs, 1H) ,7. 92-7. 87(m，2H)，
7.76-7. 72 (m, 1H)，7. 55 (s, 1H)，7. 39-7. 38 (m, 1H)，7. 36-7. 35 (m, 1H)，7. 00 (brs, 1H)， 6. 37 (s, 1H)，4. 22-4. 17 (m, 2H)，2. 59-2. 53 (m, 2H)，1. 41-1. 38 (m, 3H)，1. 22-1. 19 (m, 3H)； MS (ESI) m/z :537. 3[M+H] + 0實(shí)施例19 利用通用方法D，將實(shí)施例B13(0. 301g, 1. 161mmol)轉(zhuǎn)化成為4_(3_乙 基-5_((丙-1-烯-2-基氧基)羰基)-lH-吡唑-1-基)苯甲酸乙酯(0. 4g，100%)，為濃 稠的殘留物。NMR (400MHz, DMS0-d6) 8 9. 99 (brs, 1H)，8. 12(d, J = 8. 4Hz，2H)，7. 73 (d, J =8. 4Hz,2H)，6. 35 (s, 1H)，4. 72 (brs, 2H)，4. 39 (q, J = 7. 2Hz,2H)，2. 65 (q, J = 7. 6Hz,2H)， 1. 87(brs,3H)，1. 39(t, J = 7. 2Hz，3H)，1. 26(t, J = 7. 6Hz，3H) ；MS (ESI)m/z :344. 0 [M+H]+。在DBU(1滴)存在下，將4-(3-乙基-5_((丙-1-烯-2-基氧基)羰基)_1H-吡 唑-1-基)苯甲酸乙酯(0. 2g，0. 58mmol)的THF溶液和實(shí)施例A1 (0. 16g，0. 58mmol)混合， 得到4- (3-乙基-5- (3- (2-氟-4- (2- (1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯基) 脲基)-lH-吡唑-1-基)苯甲酸乙酯(0. 117g，35%產(chǎn)率)，為白色固體。NMR(400MHz,DMS0-d6) δ 9. 05(brs,2H) ,8. 46 (d, J = 5. 6Hz, 1H)，8· 34 (s，1H)，8· 22-8. 17(m，3H)，
8.05 (s，1H)，7. 81 (d，J = 8. 4Hz,2H)，7. 35-7. 31 (m, 2H)，7. 09 (d, J = 8. 8Hz, 1H)，6. 76 (dd, J =5. 6Hz,2. 4Hz, 1H)，6. 47 (s, 1H)，4. 43 (q, J = 7. 2Hz,2H)，3. 94 (s, 3H)，2. 68 (q, J = 7. 6Hz, 2H)，1. 42 (t, J = 7. 2Hz，3H)，1. 30 (t, J = 7. 6Hz，3H) ；MS (ESI)m/z :570. 2 [M+H] +。利用與實(shí)施例8類(lèi)似的方法，將4-(3-乙基-5-(3-(2-氟_4-(2_(1-甲 基-IH-吡唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲基)-1Η-吡唑-1-基)苯甲酸乙 酯(0. 115g，0. 202mmol)轉(zhuǎn)化成為1_(3_乙基-1_(4_(羥基甲基)苯基)_1Η_吡 唑-5-基)-3-(2-氟-4-(2-(1-甲基-IH-吡唑-4-基)吡啶_4_基氧基)苯基)脲(0. 096g, 90%產(chǎn)率)，并通過(guò)柱色譜(甲醇/CH2Cl2)純化后，作為白色固體分離得到。1H NMR(400MHz, DMS0-d6) δ 9. 07 (s，1Η)，8· 92 (s, 1H)，8· 45 (d, J = 5. 6Hz, 1H)，8· 33 (s, 1H)，8· 24 (t, J =
9.2Hz, 1Η)，8· 04 (s，1Η)，7. 56-7. 52(m，4H)，7· 33-7. 29 (m，2Η)，7. 09 (dt, J = 8. 8Ηζ, 1. 6Ηζ, 1Η) ,6. 75 (dd, J = 5. 6Ηζ，2. 4Hz，1Η)，6. 41 (s，1Η)，5. 41 (t，J = 5. 6Hz，1Η)，4. 65 (d，J = 5· 6Ηζ，2Η)，3· 93(s，3H)，2· 64(q，J = 7· 6Hz，2Η)，1· 27 (t，J = 7·6Ηζ，3Η) ；MS(ESI)m/z 528. 3[M+H]+。實(shí)施例20 將實(shí)施例 B14(79mg,0. 210mmol)、DIEA(81mg,0. 629mmol)和實(shí)施例 Al(60mg,0. 210mmol)的DMS0(2mL)溶液升溫至80°C，過(guò)夜，然后升至110°C，過(guò)夜。冷卻 反應(yīng)物至室溫，用水(30mL)稀釋?zhuān)⒂靡宜嵋阴?30mL)萃取。將合并的有機(jī)相用鹽水 (30mL)洗滌，干燥(Na2SO4),真空濃縮并經(jīng)柱色譜(乙酸乙酯/己烷一甲醇/乙酸乙酯) 純化，得到不純的泡末狀物(21mg)。將該泡末狀物經(jīng)反相色譜(乙腈/水/0. TFA)純 化，凍干，并溶解于水(5mL)、飽和的碳酸氫鈉(5mL)和乙酸乙酯(15mL)的混合物中。分 離有機(jī)相，用鹽水(IOmL)洗滌，干燥(Na2SO4),真空濃縮，溶解于乙腈/水中并凍干，得到 1-(2-氟-4- (2- (1-甲基-IH-吡唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯基)-3- (1-異丙基-5-苯 基-IH-吡唑-4-基)脲(llmg, 10% 產(chǎn)率)。1HNMR (300MHz，DMS0-d6) δ 1. 45(d，6H)，3· 97 (s, 3H)，4. 41 (hp, 1H)，6. 77-6. 79 (m, 1H)，7. 08-7. 11 (m, 1H)，7. 30-7. 34 (m, 2H)，7. 53-7. 55 (m, 2H)，7. 64-7. 73 (m, 3H)，7. 94 (s, 1H)，8. 08 (s, 1H)，8. 27 (s, 1H)，8. 32-8. 37 (m, 2H)，8. 47 (d, 1H) ,8. 84 (s，1H) ；MS (ESI) m/z :512· 2 [M+H] +。實(shí)施例21 用與實(shí)施例20類(lèi)似的方法，將實(shí)施例B15 (200mg,0. 531mmol)、 DIEA(206mg, 1. 593mmol)和實(shí)施例Al (151mg，0. 531mmol)混合，并經(jīng)柱色譜(乙酸乙酯/ 己烷)和反相色譜(乙腈/水/0. 1 % TFA)純化，得到1-(2_氟-4-(2-(l-甲基-IH-吡 唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯基)-3-(1_異丙基-3-苯基-IH-吡唑-4-基)脲(38mg， 13%產(chǎn)率)。1H WR(300MHz，DMS0-d6) δ 1. 56 (d, 6H), 3. 97 (s, 3H), 4. 61 (hp, 1H), 6. 79 (m, 1H)，7. 09-7. 12 (m, 1H)，7. 33 (s, 1H)，7. 34-7. 37 (m, 1H)，7. 47-7. 49 (m, 1H)，7. 56-7. 60 (m, 2H)，7. 76-7. 78 (m, 2H)，8. 08 (s, 1H)，8. 13 (s，1H)，8. 35-8. 37 (m, 2H)，8. 48 (d, 1H)，8. 52 (s, 1H), 9. 00 (br s, 1H) ；MS (ESI)m/z :512· 2 [M+H]+。實(shí)施例22 將實(shí)施例 B16(261mg，0. 720mmol)、DIEA (372mg, 2. 88mmol)和實(shí)施例 Al(205mg,0. 720mmol)的DMS0(5mL)溶液升溫至75°C，并攪拌過(guò)夜。將混合物用乙酸乙酯 (30mL)萃取。有機(jī)相用鹽水(30mL)洗滌，干燥(Na2SO4)，真空濃縮并經(jīng)柱色譜(甲醇/ 二氯 甲烷)純化，得到薄膜狀物。將薄膜狀物用4N HCl/二氧六環(huán)處理，得到1-(1_乙基-5-苯 基-IH-吡唑-4-基)-3-(2-氟-4-(2-(1-甲基-IH-吡唑-4-基)吡啶_4_基氧基)苯基)脲鹽酸鹽(2911^，8%產(chǎn)率)。NMR(300MHz，DMS0-d6) 8 1. 21 (t, 3H), 3. 93(s,3H), 3. 98 (q, 2H)，7. 05-7. 08 (m, 2H)，7. 35-7. 60 (m, 6H)，7. 75 (s, 1H)，7. 80 (s, 1H)，8. 30-8. 30 (m, 2H)，8. 47 (s, 1H)，8. 51 (d, 1H)，8. 80 (s, 1H)，8. 90 (brs, 1H) ；MS (ESI)m/z :498. 2 [M+H] +。實(shí)施例23 將實(shí)施例 B17(250mg,0. 689mmol)、DIEA (356mg, 2. 76mmol)和實(shí)施例 Al(196mg,0. 689mmol)的DMS0(5mL)溶液升溫至75°C，并攪拌過(guò)夜。將溫度升至100°C 并繼續(xù)攪拌過(guò)夜。將混合物冷卻至室溫，并用乙酸乙酯(25mL)和水(25mL)稀釋。有機(jī) 相用鹽水(20mL)洗滌，干燥(Na2S04)，真空濃縮并經(jīng)柱色譜(甲醇/ 二氯甲烷)純化，得 到薄膜狀物。將薄膜狀物用4N HC1/二氧六環(huán)處理，得到1-(1_乙基-3-苯基-1H-吡 唑-4-基)-3-(2_氟-4-(2-(l-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶_4_基氧基)苯基)脲鹽酸 鹽(95mg，27%產(chǎn)率)。NMR(300MHz，DMS0_d6) 8 1. 40 (t, 3H), 3. 93 (s, 3H), 4. 15 (q, 2H), 7. 10-7. 18 (m, 2H)，7. 31-7. 48 (m, 4H)，7. 62-7. 68 (m, 2H)，7. 75 (s, 1H)，7. 99 (s, 1H)，8. 32 (m, 1H) ,8. 48 (s，1H) ,8. 54 (d，1H) ,8. 59 (s, 1H) ,8. 80 (s, 1H) ,9. 10 (br s, 1H) ；MS (ESI)m/z 498. 2[M+H]+。實(shí)施例24 向攪拌著的實(shí)施例 B18(0. 09g，0. 363mmol)禾P TEA (0. 076mL, 0. 544mmol)的二氧六環(huán)(3. OmL)溶液中加入 DPPA(0. 117mL,0. 544mmol)。在室溫?cái)嚢?0. 5h 后，加入實(shí)施例A1(0. 103g，0. 363mmol)，并將反應(yīng)在100°C加熱3h。將水(15mL)加到反應(yīng) 化合物中，并經(jīng)過(guò)濾收集得到的沉淀物。將粗產(chǎn)物經(jīng)色譜純化，得到1-(2-氟-4-(2-(1_甲 基-1H-吡唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯基)-3-(1-(3_氟苯基)-3_異丙基-1H-吡 唑-5-基)脲(0.097g，50% 產(chǎn)率)，為白色固體。力匪 R(400MHz，DMS0-d6) S 9. 00(s， 1H) ,8. 92 (s, 1H) ,8. 38 (d, J = 5. 6Hz, 1H) ,8. 27 (s, 1H) ,8. 14 (t，J = 9. 2Hz, 1H)，7. 97 (s, 1H)，7. 59 (q, J = 6. 8Hz, 1H)，7. 45-7. 41 (m, 2H)，7. 31-7. 23 (m, 3H)，7. 01 (d，J = 8. 8Hz, 1H)，
6.68 (dd, J = 5. 6,2. 4Hz, 1H)，6. 38 (s, 1H)，3. 86(s，3H)，2. 90 (m, 1H)，1. 24 (d, J = 6. 8Hz, 6H) ；MS (ESI)m/z :530. 2 [M+H] +。實(shí)施例25:利用通用方法B，在N-甲基吡咯燒(催化量)存在下，將實(shí)施 例 A8(0. 083g，0. 21mmol)和實(shí)施例 B19 (0. 04g，0. 21mmol)混合，得到 1_(2，3_ 二 氟-4-(2-(l-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯基)-3-(3-(2_氟苯基)-1_甲 基-1H-吡唑-5-基)脲(0. 059g, 53 % 產(chǎn)率)，為白色固體。NMR(400MHz, DMS0_d6) 8 9. 16 (s，1H)，9. 12 (s，1H)，8. 38 (d, J = 5. 6Hz, 1H)，8. 28 (s，1H)，8. 02-7. 98(m，2H)，
7.90 (t, J = 8. 0Hz，1H)，7. 34-7. 18(m，5H)，6. 74(d，J = 5. 6Hz，1H)，6. 65-6. 64 (m，1H)， 3. 84(s，3H)，3. 77(s，3H) ；MS (ESI)m/z -.520. 1[M+H]+。實(shí)施例26 利用通用方法C，在三乙胺(0. 08g，0. 79mmol)和DPPA (0. 14g， 0. 52mmol)存在下，將實(shí)施例 B3 (0. 085g,0. 31mmol)、實(shí)施例 A10(0. 075g,0. 26mmol)混合， 得到1- (3-叔丁基-1- (3-氰基苯基)-1H-吡唑-5-基)-3- (2-氟-5- (4- (1-甲基-1H-吡 唑-4-基)嘧啶-2-基氧基)苯基)脲(0.099§，68%產(chǎn)率)，為白色固體。咕NMR(400MHz, DMS0-d6) 8 9. 06 (d, J = 2. 0Hz，1H)，8. 97 (s，1H)，8. 46 (d，J = 5. 2Hz，1H)，8. 42 (s，1H)，
8.08 (s, 1H) ,8. 02 (t, J = 2. 0Hz, 1H), 7. 96 (dd, J = 6. 8Hz，2. 8Hz，1H)，7. 89—7. 84 (m， 2H)，7. 72 (t, J = 8. 0Hz, 1H)，7. 45 (d, J = 5. 2Hz, 1H)，7. 28 (dd, J = 10. 8Hz，8. 8Hz, 1H)， 6. 87-6. 83 (m, 1H) ,6. 39 (s, 1H)，3. 87(s，3H)，1. 24(s，9H) ；MS (ESI)m/z :552. 3 [M+H]+。實(shí)施例27 利用通用方法C，將實(shí)施例B3(0. 088g，0. 32mmol)、實(shí)施例All (0. 075g,0. 25mmol)、三乙胺(0. 076g, 0. 75mmol)和 DPPA (0. 14g, 0. 5mmol)混合，得到 1_ (3-叔 丁 基-1- (3_氰基苯基)-1H-吡唑-5-基)-3- (2-氟-4-甲基-5- (4- (1-甲基-1H-吡唑-4-基) 嘧啶-2-基氧基)苯基)脲(0. 108g，76%產(chǎn)率)，為白色固體。NMR(400MHz, DMS0-d6) 8 8. 96 (d, J = 1. 6Hz, 1H)，8. 91 (s, 1H)，8. 44 (d, J = 5. 2Hz, 1H)，8. 42 (s, 1H)，8. 08 (s, 1H)， 8. 02 (t, J = 1.6Hz，lH)，7. 88-7. 82 (m，3H)，7.71 (t，J = 8. 0Hz，1H)，7. 44 (d，J = 4. 8Hz, 1H)，7. 21 (d，J = 12. 0Hz, 1H)，6. 38 (s, 1H)，3. 87 (s, 3H)，2. 01 (s，3H)，1. 24 (s,9H) ；MS (ESI) m/z :566. 3[M+H] +。利用文中所述的合成步驟和方法以及本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法，制備下列化合 物1-(5-氯-2-苯基苯基)-3- (2-氟_4_ (2_ (1_甲基_1H_吡唑_4_基)吡啶_4_基 氧基)苯基)脲，乙酸4-(3-叔丁基-5-(3-(2-氟-4-(2-(1-甲基 _1H_ 吡唑 _4_ 基)吡啶 _4_ 基 氧基)苯基)脲基)-lH-吡唑-1-基)芐基酯，1-(3-叔丁基-1- (4-氟苯基)-1H-吡唑-5-基)~3~ (2~ 氟 _4_ (2_ (1_ 甲基-1H-吡 唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1- (1- (4-氰基苯基)-3-異丙基-1H-吡唑-5-基)~3~ (2~ 氟 _4_ (2_ (1_ 甲 基-1H-吡唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，3-(3-叔丁基-5-(3-(2-氟-4-(2-(1-甲基 _1H_ 吡唑 _4_ 基)吡啶 _4_ 基氧基) 苯基)脲基)-lH-吡唑-1-基)苯甲酸乙酯，3- (3-叔丁基-5- (3- (2_ 氟 _4_ (2_ (1_ 甲基 _1H_ 吡唑 _4_ 基)吡啶 _4_ 基氧基) 苯基)脲基)-lH-吡唑-1-基)苯甲酸，1-(3-乙基-1-(3-(羥基甲基)苯基)-1H-吡唑-5-基)_3_ (2_ 氟 ~4~ (2_ (1_ 甲 基-1H-吡唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1- (1- (3-氰基苯基)-3-甲基-1H-吡唑-5-基)~3~ (2~ 氟 _4_ (2~(1~ 甲基 _1H_ 吡 唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(3- (3-氰基苯基)-1-異丙基-1H-吡唑-4-基)~3~ (2~ 氟 _4_ (2_ (1_ 甲 基-1H-吡唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(3-叔丁基-1-苯基)-1H-吡唑-5-基)-3- (2，3_ 二氟 ~4~ (2~(1~ 甲基-1H-吡 唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(1，3_ 二苯基-1H-吡唑-5-基)-3-(2_ 氟 ~4-(2-(1~ 甲基 _1H_ 吡唑 ~4~ 基) 吡啶-4-基氧基)苯基)脲和1-(2，3-二氟-4-(2-(1-甲基_111-吡唑-4-基)吡啶 _4_ 基氧基)苯基)_3_(1， 3- 二苯基-1H-吡唑-5-基)脲。利用文中所述的合成步驟和方法以及本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法，制備下列化合 物1-(4- (2- (1H-吡唑-4-基)吡啶 _4_基氧基)_2_氟苯基)_3_ (3_叔丁基 (4_氰 基-3-氟苯基)-1H-吡唑-5-基)脲， 1-(3-叔丁基-1-(4-氰基-3-氟苯基)-1H-吡唑-5-基)~3~ (2~ 氟 _4_ (2_ (1_ 甲 基-1H-吡唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，
1-(4- (2- (1H-吡唑_4_基)吡啶-4-基氧基)_3_甲基苯基)_3_ (3_叔丁 基-1- (4-氰基-3-氟苯基)-IH-吡唑-5-基)脲，1-(3-叔丁基-1- (4-氰基-3-氟苯基)-IH-吡唑 _5_基)~3~ (3~ 甲基 _4_ (2_ (1_ 甲 基-IH-吡唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(4- (2- (1H-吡唑_4_基)吡啶 _4_基氧基)_2_氟苯基)_3_ (3_叔丁基 (4_氰 基苯基)-IH-吡唑-5-基)脲，1-(3-叔 丁基-1- (4-氰基苯基)-IH-吡唑 _5_ 基)~3~ (2~ 氟 _4_ (2_ (1_ 甲 基-IH-吡唑-3-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(4- (2- (1H-吡唑_3_基)吡啶 _4_基氧基)_2_氟苯基)_3_ (3_叔丁基 (4_氰 基苯基)-IH-吡唑-5-基)脲，1-(3-叔 丁基-1- (4-氰基苯基)-IH-吡唑 _5_ 基)~3~ (2~ 氟 _4_ (2_ (1_ 甲 基-IH-吡唑-5-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(4- (2- (1H-吡唑_5_基)吡啶 _4_基氧基)_2_氟苯基)_3_ (3_叔丁基 (4_氰 基苯基)-IH-吡唑-5-基)脲，1-(3-叔 丁基-1- (4-氰基苯基)-IH-吡唑 _5_ 基)_3_ (2_ 氟 _4_ (2_ (異噁 唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(3-叔 丁基-1- (4-氰基苯基)-IH-吡唑 _5_ 基)~3~ (2~ 氟 _4_ (2_ (4_ 甲 基-4H-1，2，4-三唑-3-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(1-叔 丁基-3-(3-氰基苯基)-1Η-吡唑 _4_ 基)-3_(2_ 氟 _4-(2-(1_ 甲 基-IH-吡唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(3- (3-氰基苯基)-1-異丙基-IH-吡唑 _4_ 基)_3_ (2_ 氟 _4_ (2_ (1_ 甲 基-IH-吡唑-3-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1- (1-叔 丁基-3- (3-氰基苯基)-IH-吡唑 _4_ 基)~3~ (2~ 氟 _4_ (2_ (1_ 甲 基-IH-吡唑-3-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(3- (3-氰基苯基)-1-異丙基-IH-吡唑 _4_ 基)~3~ (2~ 氟 _4_ (2_ (1_ 甲 基-IH-吡唑-5-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1- (1-叔 丁基-3- (3-氰基苯基)-IH-吡唑 _4_ 基)~3~ (2~ 氟 _4_ (2_ (1_ 甲 基-IH-吡唑-5-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(3-叔 丁基-1- (3-氰基苯基)-IH-吡唑 _5_ 基)~3~ (3~ 甲基 _4_ (2~(1~ 甲 基-IH-吡唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(3-叔 丁基-1- (3-氰基苯基)-IH-吡唑 _5_ 基)~3~ (3~ 甲基 _4_ (2~(1~ 甲 基-IH-吡唑-5-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(3-叔 丁基-1- (3-氰基苯基)-IH-吡唑 _5_ 基)~3~ (3~ 甲基 _4_ (2~(1~ 甲 基-IH-吡唑-3-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(3-叔 丁基-1- (3-氰基苯基)-IH-吡唑 _5_ 基)~3~ (2~ 氟 _4_ (2_ (2_ 甲 基-2H-1，2，3-三唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(3-叔 丁基-1- (3-氰基苯基)-IH-吡唑 _5_ 基)~3~ (2~ 氟 _4_ (2_ (1_ 甲 基-IH-吡唑-3-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(3-叔 丁基-1-(3-氰基苯基)-1Η-吡唑 _5_ 基)-3_(2_ 氟 _4-(2-(1_ 甲
53基-1H-吡唑-5-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(3-叔丁基-1-(3-氰基苯基)-1H-吡唑-5-基)~3~ (2~ 氟 _4_ (2_ (5_ 甲基 _1， 2,4-噻二唑-3-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(3-叔 丁基-1- (3-氰基苯基)-1H-吡唑-5-基)~3~ (2~ 氟 _4_ (2_ (4_ 甲 基-4H-1，2，4-三唑-3-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(3-叔 丁基-1- (3-氰基苯基)-1H-吡唑-5-基)~3~ (2~ 氟 _4_ (2_ (3_ 甲 基-3H-1，2，3-三唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(3-叔 丁基-1- (3-氰基苯基)-1H-吡唑-5-基)_3_ (2_ 氟 _4_ (2_ (異噁 唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(3-叔 丁基-1- (3-氰基苯基)-1H-吡唑-5-基)_3_ (2_ 氟 _4_ (2_ (異噁 唑-3-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1- (1- (4-氰基苯基)-3-異丙基-1H-吡唑-5-基)~3~ (2~ 氟 _4_ (2_ (1_ 甲 基-1H-吡唑-3-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1- (1- (4-氰基苯基)-3-異丙基-1H-吡唑-5-基)~3~ (2~ 氟 _4_ (2_ (1_ 甲 基-1H-吡唑-5-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(1-叔丁基-3-(3-(羥基甲基)苯基)-lH_ 吡唑-4-基)-3-(2_ 氟-4-(2_(l-甲 基-1H-吡唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，l-(4-(2-(lH-吡唑-4-基)吡啶 _4_ 基氧基)_2_ 氟苯基)_3_(1-叔 丁 基-3-(3-(羥基甲基)苯基)-lH-吡唑-4-基)脲， 1- (1-叔丁基-3- (3-(羥基甲基)苯基)-1H-吡唑-4-基)-3- (2_ 氟 _4_ (2_ (1_ 甲 基-1H-吡唑-3-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，l-(4-(2-(lH-吡唑-3-基)吡啶 _4_ 基氧基)_2_ 氟苯基)-3_(1_ 叔 丁 基-3-(3-(羥基甲基)苯基)-lH-吡唑-4-基)脲，1-(1-叔丁基-3-(3-(羥基甲基)苯基)-lH_ 吡唑-4-基)-3-(2_ 氟-4-(2_(l-甲 基-1H-吡唑-5-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，l-(4-(2-(lH-吡唑-5-基)吡啶 _4_ 基氧基)_2_ 氟苯基)_3_(1-叔 丁 基-3-(3-(羥基甲基)苯基)-lH-吡唑-4-基)脲，1-(1_ 叔丁基 _3-(3-(羥基甲基)苯基)-lH_ 吡唑-4-基)-3-(2_ 氟 _4-(2-(異 噁唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(3-叔丁基-1-(3-(羥基甲基)苯基)-lH_ 吡唑-5-基)-3-(2_ 氟-4-(2_(l-甲 基-1H-吡唑-3-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，l-(4-(2-(lH-吡唑-4-基)吡啶 _4_ 基氧基)_2_ 氟苯基)-3_(3_ 叔 丁 基-1-(3-(羥基甲基)苯基)-lH-吡唑-5-基)脲，l-(4-(2-(lH-吡唑-3-基)吡啶 _4_ 基氧基)_2_ 氟苯基)-3_(3_ 叔 丁 基-1-(3-(羥基甲基)苯基)-lH-吡唑-5-基)脲，1-(3-叔丁基-1-(3-(羥基甲基)苯基)-lH_ 吡唑-5-基)-3-(2_ 氟-4-(2_(l-甲 基-1H-吡唑-5-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(3-叔丁基-1-(3-(羥基甲基)苯基)-lH_ 吡唑-5-基)-3-(2_ 氟 _4-(2-(異 噁唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，
1-(3-叔丁基-1-(3-(羥基甲基)苯基)-lH_ 吡唑-5-基)-3-(2_ 氟 _4-(2-(異 噁唑-3-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(3-叔丁基-1-(3_ 氰基苯基)-lH_ 吡唑-5-基)-3_(2_ 氟-4_(2_(4-甲基噁 唑-2-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(3-叔丁基-1-(3-氰基苯基)-1H-吡唑-5-基)~3~ (2~ 氟 _4_ (2_ (3_ 甲基 _1， 2,4-噻二唑-5-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(3-叔 丁基-1- (3-氰基苯基)-1H-吡唑-5-基)_3_ (2_ 氟 _4_ (2_ (異噁 唑-5-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，l-(4-(2-(4H_l，2，4-三唑-4-基)吡啶 _4_ 基氧基)_2_ 氟苯基)-3_(3_ 叔丁 基-1_(3-氰基苯基)-lH-吡唑-5-基)脲，1-(3-叔 丁基-1- (3-氰基苯基)-1H-吡唑-5-基)_3_ (2_ 氟 _4_ (2_ (異噻 唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(3-叔 丁基-1- (3-氰基苯基)-1H-吡唑-5-基)~3~ (2~ 氟 _4_ (2_ (3_ 甲 基-1H-1，2，4-三唑-1-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(3-叔 丁基-1- (3-氰基苯基)-1H-吡唑-5-基)_3_ (2_ 氟 _4_ (2_ (異噻 唑-3-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(3-叔 丁基-1- (3-氰基苯基)-1H-吡唑-5-基)~3~ (2~ 氟 _4_ (2_ (3_ 甲 基-1H-吡唑-1-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(3-叔 丁基-1-(3-氰基苯基)-lH-吡唑-5-基)-3-(2-氟 _4-(2_(異噻 唑-5-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲， 1-(3-叔 丁基-1- (3-氰基苯基)-1H-吡唑-5-基)-3- (2-氟 _4_ (2_ (4-甲 基-2H-1，2，3-三唑-2-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1- (1- (3-氰基苯基)-3-異丙基-1H-吡唑-5-基)-3- (2_ 氟 _4_ 甲基 _5_ (4_ (1_ 甲 基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基氧基)苯基)脲，1- (1- (4-氰基苯基)-3-異丙基-1H-吡唑-5-基)-3- (2~ 氟 _4_ 甲基 _5_ (4_ (1_ 甲 基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基氧基)苯基)脲，1-(2-氟-4-甲基-5-(4-(1_甲基-1H-吡唑_4_基)嘧啶_2_基氧基)苯 基)-3-(1-(4-(羥基甲基)苯基)-3_異丙基-1H-吡唑-5-基)脲，1-(2-氟-4-甲基-5-(4-(1_甲基-1H-吡唑_4_基)嘧啶_2_基氧基)苯 基)-3-(1-(3-(羥基甲基)苯基)-3_異丙基-1H-吡唑-5-基)脲，1- (1- (3-氰基-4-甲基苯基)-3-異丙基-1H-吡唑-5-基)_3_ (2-氟_4_甲 基-5- (4- (1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基氧基)苯基)脲，1- (1- (3-氰基-4-氟苯基)-3-異丙基-1H-吡唑-5-基)~3~ (2~氟_4_甲 基-5- (4- (1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基氧基)苯基)脲，1- (1- (3-氰基苯基)-3-異丙基-1H-吡唑-5-基)-3- (2-氟 _5_ (4_ (1_ 甲 基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基氧基)苯基)脲，1- (1- (4-氰基苯基)-3-異丙基-1H-吡唑-5-基)-3- (2-氟 _5_ (4_ (1_ 甲 基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基氧基)苯基)脲，1-(2-氟-5-(4-(1-甲基_111-吡唑-4-基)嘧啶 _2_基氧基)苯基)-3-(1-(4_(羥基甲基)苯基)-3_異丙基-1H-吡唑-5-基)脲， 1-(2-氟-5- (4- (1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶 _2_基氧基)苯基)_3_ (1_ (3_ (羥 基甲基)苯基)-3_異丙基-1H-吡唑-5-基)脲，1- (1- (3-氰基-4-甲基苯基)-3-異丙基-1H-吡唑 _5_基)_3_ (2_ 氟 _5_ (4_ (1_ 甲 基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基氧基)苯基)脲，1- (1- (3-氰基-4-氟苯基)-3-異丙基-1H-吡唑 _5_ 基)~3~ (2~ 氟 _5_ (4_ (1_ 甲 基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基氧基)苯基)脲，1-(5- (4- (1H-吡唑-4-基)嘧啶_2_基氧基)_2_氟_4_甲基苯基)_3_ (3_叔丁 基-1- (3-氰基-4-甲基苯基)-1H-吡唑-5-基)脲，1-(5- (4- (1H-吡唑-4-基)嘧啶_2_基氧基)_2_氟_4_甲基苯基)_3_ (3_叔丁 基-1- (3-氰基-4-氟苯基)-1H-吡唑-5-基)脲，1-(3-叔丁基-1- (3-氰基-4-甲基苯基)-1H-吡唑_5_基)_3_ (2_氟 _5_ (4_ (1_ 甲 基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基氧基)苯基)脲，1-(5- (4- (1H-吡唑-4-基)嘧啶 _2_基氧基)_2_氟苯基)_3_ (3_叔丁基 (3_氰 基-4-甲基苯基)-1H-吡唑-5-基)脲，1-(5- (4- (1H-吡唑-4-基)嘧啶 _2_基氧基)_2_氟苯基)_3_ (3_叔丁基 (3_氰 基-4-氟苯基)-1H-吡唑-5-基)脲，1-(3-叔丁基-1-(3-氰基-4-氟苯基)-1H-吡唑 _5_ 基)~3~ (2~ 氟 _5_ (4_ (1_ 甲 基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基氧基)苯基)脲，1-(1-(3-氰基苯基)-3-(1_羥基-2-甲基丙-2-基)_1H-吡 唑-5-基)-3- (2-氟-4- (2- (1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，
1- (1- (3-氰基苯基)-3- (1-羥基乙基)-1H-吡唑-5-基)-3- (2_ 氟 _4_ (2_ (1_ 甲 基-1H-吡唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1- (1- (3-氰基苯基)-3-(2_ 輕基丙-2-基)_1H_ 吡 唑-5-基)-3- (2-氟-4- (2- (1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(3-叔丁基-1- (4-氰基苯基)-1H-吡唑-5-基)~3~ (2~ 氟 _4_ (2_ (噁唑 _5_ 基) 吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(3-叔丁基-1- (3-氰基苯基)-1H-吡唑-5-基)~3~ (2~ 氟 _4_ (2_ (噁唑 _4_ 基) 吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(3-叔丁基-1-(4-(羥基甲基)苯基)-1H-吡唑-5-基)_3_ (2_ 氟 _4_ (2_ (噁 唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(3-叔丁基-1-(3-(羥基甲基)苯基)-1H-吡唑-5-基)_3_ (2_ 氟 _4_ (2_ (噁 唑-5-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(3-芐基-1-苯基-1H-吡唑-5-基)-3- (2~ 氟 _4_ (2~(1~ 甲基 _1H_ 吡唑 _4_ 基) 吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(2，3_ 二氟-4-(2-(1_甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶_4_基氧基)苯基)-3_(3_苯 基異噁唑-5-基)脲，1-(2，3_ 二氟-4-(2-(1_甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶_4_基氧基)苯基)-3_(1_甲 基-3-苯基-1H-吡唑-5-基)脲，
1-(2，3_ 二氟-4-(2_(l-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶_4_基氧基)苯基)_3_(5_苯 基吡啶-3-基)脲， 1-(3-叔丁基-1- (4-氰基-3-氟苯基)-1H-吡唑-5-基)_3_ (2_ 氟 _4_ (2_ (異噻 唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(3-叔丁基-1- (4-氰基-3-氟苯基)-1H-吡唑 _5_ 基)_3_ (2_ 氟 _4_ (2_ (異噻 唑-3-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(4- (2- (1H-吡唑-4-基)吡啶 _4_基氧基)_2_氟苯基)_3_ (3_叔丁基 (4_氰 基-3-氟苯基)-1H-吡唑-5-基)脲，1-(3-叔丁基-1-(4-氰基-3-氟苯基)-1H-吡唑 _5_ 基)~3~ (2~ 氟 _4_ (2_ (1_ 甲 基-1H-吡唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(4- (2- (1H-吡唑-4-基)吡啶-4-基氧基)_3_甲基苯基)_3_ (3_叔丁 基-1- (4-氰基-3-氟苯基)-1H-吡唑-5-基)脲，1-(3-叔丁基-1- (4-氰基-3-氟苯基)-1H-吡唑 _5_ 基)~3~ (3~ 甲基 _4_ (2_ (1_ 甲 基-1H-吡唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(4- (2- (1H-吡唑-4-基)吡啶 _4_基氧基)_2_氟苯基)_3_ (3_叔丁基 (4_氰 基苯基)-lH-吡唑-5-基)脲，1-(3-叔 丁基-1- (4-氰基苯基)-1H-吡唑-5-基)~3~ (2~ 氟 _4_ (2_ (1_ 甲 基-1H-吡唑-3-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(4- (2- (1H-吡唑-3-基)吡啶 _4_基氧基)_2_氟苯基)_3_ (3_叔丁基 (4_氰 基苯基)-lH-吡唑-5-基)脲，1-(3-叔 丁基-1- (4-氰基苯基)-1H-吡唑-5-基)~3~ (2~ 氟 _4_ (2_ (1_ 甲 基-1H-吡唑-5-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲， 1- (4- (2- (1H-吡唑-5-基)吡啶-4-基氧基)_2_氟苯基)_3_ (3_叔丁基 (4_氰 基苯基)-lH-吡唑-5-基)脲，1-(3-叔 丁基-1- (4-氰基苯基)-1H-吡唑-5-基)_3_ (2_ 氟 _4_ (2_ (異噁 唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(3-叔 丁基-1- (4-氰基苯基)-1H-吡唑-5-基)~3~ (2~ 氟 _4_ (2_ (4_ 甲 基-4H-1，2，4-三唑-3-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1- (1-叔 丁基-3- (3-氰基苯基)-1H-吡唑-4-基)~3~ (2~ 氟 _4_ (2_ (1_ 甲 基-1H-吡唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(3- (3-氰基苯基)-1-異丙基-1H-吡唑-4-基)~3~ (2~ 氟 _4_ (2_ (1_ 甲 基-1H-吡唑-3-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1- (1-叔 丁基-3- (3-氰基苯基)-1H-吡唑-4-基)~3~ (2~ 氟 _4_ (2_ (1_ 甲 基-1H-吡唑-3-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(3- (3-氰基苯基)-1-異丙基-1H-吡唑-4-基)~3~ (2~ 氟 _4_ (2_ (1_ 甲 基-1H-吡唑-5-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1- (1-叔 丁基-3- (3-氰基苯基)-1H-吡唑-4-基)~3~ (2~ 氟 _4_ (2_ (1_ 甲 基-1H-吡唑-5-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(3-叔 丁基-1- (3-氰基苯基)-1H-吡唑-5-基)_3_ (3_ 甲基 ~4~ (2~(1~ 甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(3-叔 丁基-1- (3-氰基苯基)-1H-吡唑-5-基)~3~ (3~ 甲基 ~4~ (2~(1~ 甲 基-1H-吡唑-5-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(3_ 叔丁基-1-(3_ 氰基苯基)-lH_ 吡唑-5-基)-3-(3_ 甲基 _4-(2-(1_ 甲 基-1H-吡唑-3-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(3-叔 丁基-1- (3-氰基苯基)-1H-吡唑-5-基)~3~ (2~ 氟 _4_ (2_ (2_ 甲 基-2H-1，2，3-三唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(3-叔 丁基-1- (3-氰基苯基)-1H-吡唑-5-基)~3~ (2~ 氟 _4_ (2_ (1_ 甲 基-1H-吡唑-3-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(3-叔 丁基-1- (3-氰基苯基)-1H-吡唑-5-基)~3~ (2~ 氟 _4_ (2_ (1_ 甲 基-1H-吡唑-5-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(3-叔丁基-1-(3-氰基苯基)-1H-吡唑-5-基)~3~ (2~ 氟 _4_ (2_ (5_ 甲基 _1， 2,4-噻二唑-3-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(3-叔 丁基-1- (3-氰基苯基)-1H-吡唑-5-基)~3~ (2~ 氟 _4_ (2_ (4_ 甲 基-4H-1，2，4-三唑-3-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(3-叔 丁基-1- (3-氰基苯基)-1H-吡唑-5-基)~3~ (2~ 氟 _4_ (2_ (3_ 甲 基-3H-1，2，3-三唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(3-叔 丁基-1- (3-氰基苯基)-1H-吡唑-5-基)_3_ (2_ 氟 _4_ (2_ (異噁 唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(3-叔 丁基-1- (3-氰基苯基)-1H-吡唑-5-基)_3_ (2_ 氟 _4_ (2_ (異噁 唑-3-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1- (1- (4-氰基苯基)-3-異丙基-1H-吡唑-5-基)~3~ (2~ 氟 _4_ (2_ (1_ 甲 基-1H-吡唑-3-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲， 1- (1- (4-氰基苯基)-3-異丙基-1H-吡唑-5-基)-3- (2_ 氟 _4_ (2_ (1_ 甲 基-1H-吡唑-5-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(1-叔丁基-3-(3-(羥基甲基)苯基)-lH_ 吡唑-4-基)-3-(2_ 氟-4-(2_(l-甲 基-1H-吡唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，l-(4-(2-(lH-吡唑-4-基)吡啶 _4_ 基氧基)_2_ 氟苯基)_3_(1-叔 丁 基-3-(3-(羥基甲基)苯基)-lH-吡唑-4-基)脲，1-(1-叔丁基-3-(3-(羥基甲基)苯基)-lH_ 吡唑-4-基)-3-(2_ 氟-4-(2_(l-甲 基-1H-吡唑-3-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，l-(4-(2-(lH-吡唑-3-基)吡啶 _4_ 基氧基)_2_ 氟苯基)_3_(1-叔 丁 基-3-(3-(羥基甲基)苯基)-lH-吡唑-4-基)脲，1-(1-叔丁基-3-(3-(羥基甲基)苯基)-lH_ 吡唑-4-基)-3-(2_ 氟-4-(2_(l-甲 基-1H-吡唑-5-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，l-(4-(2-(lH-吡唑-5-基)卩比啶_4_基氧基)_2_氟苯基)_3_(1-叔丁 基-3-(3-(羥基甲基)苯基)-lH-吡唑-4-基)脲，1-(1_ 叔丁基 _3-(3-(羥基甲基)苯基)-lH_ 吡唑-4-基)-3-(2_ 氟 _4-(2-(異 噁唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，
1-(3-叔丁基-1-(3-(羥基甲基)苯基)-lH_ 吡唑-5-基)-3-(2_ 氟-4-(2_(l-甲 基-1H-吡唑-3-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，l-(4-(2-(lH-吡唑-4-基)吡啶 _4_ 基氧基)_2_ 氟苯基)-3_(3_ 叔 丁 基-1-(3-(羥基甲基)苯基)-lH-吡唑-5-基)脲，l-(4-(2-(lH-吡唑-3-基)吡啶-4-基氧基)_2_ 氟苯基)-3_(3_ 叔 丁 基-1-(3-(羥基甲基)苯基)-lH-吡唑-5-基)脲，1-(3-叔丁基-1-(3-(羥基甲基)苯基)-lH_ 吡唑-5-基)-3-(2_ 氟-4-(2_(l-甲 基-1H-吡唑-5-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(3-叔丁基-1-(3-(羥基甲基)苯基)-lH_ 吡唑-5-基)-3-(2_ 氟 _4-(2-(異 噁唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(3-叔丁基-1-(3-(羥基甲基)苯基)-lH_ 吡唑-5-基)-3-(2_ 氟 _4-(2-(異 噁唑-3-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(3-叔丁基-l-(3-氰基苯基)-lH_ 吡唑-5-基)-3_(2_ 氟 _4-(2-(4_ 甲基噁 唑-2-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(3-叔丁基-1-(3-氰基苯基)-1H-吡唑-5-基)~3~ (2~ 氟 _4_ (2_ (3_ 甲基 _1， 2,4-噻二唑-5-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(3-叔 丁基-1- (3-氰基苯基)-1H-吡唑-5-基)_3_ (2_ 氟 _4_ (2_ (異噁 唑-5-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，l-(4-(2-(4H_l，2，4-三唑-4-基)吡啶 _4_ 基氧基)_2_ 氟苯基)-3_(3_ 叔丁 基-1_(3-氰基苯基)-lH-吡唑-5-基)脲，1-(3-叔 丁基-1- (3-氰基苯基)-1H-吡唑-5-基)_3_ (2_ 氟 _4_ (2_ (異噻 唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(3-叔 丁基-1- (3-氰基苯基)-1H-吡唑-5-基)~3~ (2~ 氟 _4_ (2_ (3_ 甲 基-1H-1，2，4-三唑-1-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲， 1-(3-叔 丁基-1- (3-氰基苯基)-1H-吡唑-5-基)-3- (2_ 氟 _4_ (2_ (異噻 唑-3-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(3-叔 丁基-1- (3-氰基苯基)-1H-吡唑-5-基)~3~ (2~ 氟 _4_ (2_ (3_ 甲 基-1H-吡唑-1-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(3-叔 丁基-1- (3-氰基苯基)-1H-吡唑-5-基)_3_ (2_ 氟 _4_ (2_ (異噻 唑-5-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(3-叔 丁基-1- (3-氰基苯基)-1H-吡唑-5-基)~3~ (2~ 氟 _4_ (2_ (4_ 甲 基-2H-1，2，3-三唑-2-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1- (1- (3-氰基苯基)-3- (1-羥基乙基)-1H-吡唑-5-基)_3_ (2_ 氟 _5_ (2_ (1_ 甲 基-1H-吡唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1- (1- (3-氰基苯基)-3-(2_ 輕基丙-2-基)_1H_ 吡 唑-5-基)-3- (2-氟-5- (2- (1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(3-叔 丁基-1- (3-氰基苯基)-1H-吡唑-5-基)~3~ (2~ 氟 _5_ (2_ (1_ 甲 基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-4-基氧基)苯基)脲，1-(5- (2- (1H-吡唑-4-基)嘧啶 _4_基氧基)_2_氟苯基)_3_ (3_叔丁基 (3_氰基苯基)-lH_吡唑-5-基)脲，1- (1- (3-氰基苯基)-3-異丙基-1H-吡唑-5-基)~3~ (2~ 氟 _5_ (2_ (1_ 甲 基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-4-基氧基)苯基)脲，l-(5-(2_(lH-吡唑-4-基)嘧啶-4-基氧基)_2_氟苯基)-3-(1-(3_氰基苯 基)-3-異丙基-1H-吡唑-5-基)脲， 1- (5- (4- (1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基氧基)_2_氟苯基)_3_ (3_叔丁基 (3-氰 基苯基)-lH-吡唑-5-基)脲，l-(5-(4_(lH-吡唑-4-基)嘧啶_2_基氧基)_2_氟苯基)_3_(1_(3_氰基苯 基)-3-異丙基-1H-吡唑-5-基)脲，1-(3-氟-4- (2- (1-甲基-1H-吡唑_4_基)吡啶_4_基氧基)苯基)~3~ (6~ (4~氟 苯氧基)苯并[d]噻唑-2-基)脲，1-(3-氟-4- (2- (1-甲基-1H-吡唑_4_基)吡啶_4_基氧基)苯基)_3_ (6_苯氧 基苯并M噻唑-2-基)脲，1-(3-氟-4- (2- (1-甲基-1H-吡唑_4_基)吡啶_4_基氧基)苯基)_3_ (6_苯氧 基苯并M噁唑-2-基)脲，1-(3-氟-4- (2- (1-甲基-1H-吡唑_4_基)吡啶_4_基氧基)苯基)_3_ (2_苯氧 基喹啉-6-基)脲，1-(3_氟-4-(2_(l-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶_4_基氧基)苯基)-3_(2_氧 代-5-苯氧基二氫吲哚-3-基)脲，1-(3-氟-4- (2- (1-甲基-1H-吡唑_4_基)吡啶_4_基氧基)苯基)_3_ (5_苯氧 基-1H-吲唑-3-基)脲，1-(3-氟-4- (2- (1-甲基-1H-吡唑_4_基)吡啶_4_基氧基)苯基)_3_ (6_苯氧 基-1H-吲唑-3-基)脲，1-(3_氟-4-(2-(l-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶_4_基氧基)苯基)-3-(6_ (4_氟 苯氧基)苯并[d]噁唑-2-基)脲， 1-(3-氟-4- (2- (1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-4-基氧基)苯基)~3~ (2~ (4-氟 苯氧基)喹啉-6-基)脲，1-(3-氟-4- (2- (1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶_4_基氧基)苯基)~3~ (5_ (4_氟 苯氧基)-2-氧代二氫吲哚-3-基)脲，1-(3-氟-4- (2- (1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶_4_基氧基)苯基)~3~ (5_ (4_氟 苯氧基)-lH-吲唑-3-基)脲，1-(3_氟-4-(2_(l-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶_4_基氧基)苯基)_3_ (6_ (4_氟 苯氧基)-lH-吲唑-3-基)脲，1-(4- (2- (1H-吡唑-4-基)吡啶-4-基氧基)_3_氟苯基)_3_ (3_ (4_氟苯氧基) 苯基)脲，1-(4- (2- (1H-吡唑-4-基)吡啶-4-基氧基)-3-氟苯基)_3_ (3_ (4_氟苯氧 基)-5-甲基苯基)脲，1-(4- (2- (1H-吡唑-4-基)吡啶-4-基氧基)~3~氟苯基)~3~ (3~氯_5_ (4_氟苯 氧基)苯基)脲，
1-(4- (2- (1H-吡唑-4-基)吡啶-4-基氧基)-3-氟苯基)_3_ (3_ (4_氟苯氧 基)-5_(三氟甲基)苯基)脲，1-(3-氟-4- (2- (1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶_4_基氧基)苯基)~3~ (3~ (4~氟 苯氧基)苯基)脲，1-(3-氟-4- (2- (1-甲基-1H-吡唑_4_基)吡啶_4_基氧基)苯基)~3~ (3~ (4~氟 苯氧基)-5-甲基苯基)脲，1-(3-氯-5-(4-氟苯氧基)苯基)-3-(3_ 氟-4-(2_(l-甲基-1H-吡唑-4-基) 吡啶-4-基氧基)苯基)脲和1-(3-氟-4- (2- (1-甲基-1H-吡唑_4_基)吡啶_4_基氧基)苯基)~3~ (3~ (4~氟 苯氧基)-5-(三氟甲基)苯基)脲。第4部分生物學(xué)數(shù)據(jù)Abl 激酶(SEQ ID NO 1)測(cè)定通過(guò)追隨經(jīng)由與丙酮酸激酶/乳酸脫氫酶體系偶聯(lián)的激酶反應(yīng)的ADP產(chǎn)生，來(lái)確 定 Abl 激酶(SEQ ID NO 1)的活性(例如 Schindler 等人.Science (2000) 289，1938-1942)。 在這一測(cè)定中，用分光光度法連續(xù)地監(jiān)測(cè)NADH的氧化(因此在A34(tam處降低)。反應(yīng)混合 物(100 ill)包含在含有0. 2%辛基葡糖苷和3. 5% DMS0的90mM Tris緩沖液(pH 7. 5) 中的 Abl 激酶(InM,來(lái)自 deCode Genetics 的 Abl)、肽底物(EAIYAAPFAKKK, 0. 2mM)、 MgCl2(10mM)、丙酮酸激酶(4單位)、乳酸脫氫酶(0.7單位)、磷酸烯醇丙酮酸(ImM)和 NADH(0. 28mM)。將測(cè)試化合物與Abl (SEQ ID NO 1)和其它反應(yīng)試劑在30°C下孵育2小時(shí) 然后加入ATP(500iiM)以啟動(dòng)反應(yīng)。在30°C下，在Polarstar Optima平板讀取器(BMG)上， 連續(xù)監(jiān)測(cè)340nm處的吸收，監(jiān)測(cè)2小時(shí)。使用1. 0小時(shí)至2. 0小時(shí)的時(shí)間范圍(time frame) 計(jì)算反應(yīng)速率。通過(guò)將反應(yīng)速率與對(duì)照(即沒(méi)有測(cè)試化合物)的反應(yīng)速率相比較，獲得抑 制百分比。使用如GraphPad Prism軟件包執(zhí)行的軟件程序，由在一定抑制劑濃度范圍內(nèi)所 確定的一系列抑制百分比值來(lái)計(jì)算IC5(I值。Abl 激酶(SEQ ID NO 1)GTSMDPSSPNYDKWEMERTDITMKHKLGGGQYGEVYEGVWKKYSLTVAVKTLKEDTMEVEEFLKEAAVMKEIKHPNLVQLLGVCTREPPFYIITEFMTYGNLLDYLRECNRQEVNAVVLLYMATQISSAMEYLEKKNFIHRDLAARNCLVGENHLVKVADFGLSRLMTCDTYTAHAGAKFPIKWTAPESLAYNKFSIKSDVWAFGVLLWEIATYGMSPYPGIDLSQVYELLEKDYRMERP
EGCPEKVYELMRACWQWNPSDRPSFAEIHQAFETMFQEAbl 激酶(SEQ ID NO 2)測(cè)定通過(guò)追隨經(jīng)由與丙酮酸激酶/乳酸脫氫酶體系偶聯(lián)的激酶反應(yīng)的ADP產(chǎn)生，來(lái) 確定 T315I Abl 激酶(SEQ ID NO :2)的活性(例如 Schindler 等人 Science (2000) 289， 1938-1942)。在這一測(cè)定中，用分光光度法連續(xù)地監(jiān)測(cè)NADH的氧化(因此在A34(lnm處降低)。 反應(yīng)混合物(100 Pi)包含在含有0. 2%辛基葡糖苷和DMS0的90mM Tris緩沖液(pH 7.5)中的 Abl 激酶(4. 4nM，來(lái)自 deCode Genetics 的 M315I Abl)、肽底物(EAIYAAPFAKKK， 0. 2mM)、MgCl2(10mM)、丙酮酸激酶(4單位)、乳酸脫氫酶(0. 7單位)、磷酸烯醇丙酮酸(ImM) 和NADH(0. 28mM)。將測(cè)試化合物與T315I Abl (SEQID NO 2)和其它反應(yīng)試劑在30°C下孵 育1小時(shí)，然后加入ATP(500iiM)以啟動(dòng)反應(yīng)。在30°C下，在Polarstar Optima平板讀取器(BMG)上，連續(xù)監(jiān)測(cè)340nm處的吸收，監(jiān)測(cè)2小時(shí)。采用1. 0小時(shí)至2. 0小時(shí)的時(shí)間范圍 計(jì)算反應(yīng)速率。通過(guò)將反應(yīng)速率與對(duì)照(即沒(méi)有測(cè)試化合物)的反應(yīng)速率相比較，獲得抑 制百分比。使用如GraphPad Prism軟件包執(zhí)行的軟件程序，由在一定抑制劑濃度范圍內(nèi)所 確定的一系列抑制百分比值來(lái)計(jì)算IC5(I值。Abl T315I 激酶(SEQ ID NO 2)GTSMDPSSPNYDKWEMERTDITMKHKLGGGQYGEVYEGVWKKYSLTVAVKTLKEDTMEVEEFLKEAAVMKEIKHPNLVQLLGVCTREPPFYIIIEFMTYGNLLDYLRECNRQEVNAVVLLYMATQISSAMEYLEKKNFIHRDLAARNCLVGENHLVKVADFGLSRLMTCDTYTAHAGAKFPIKWTAPESLAYNKFSIKSDVWAFGVLLWEIATYGMSPYPGIDLSQVYELLEKDYRMERPEGCPEKVYELMRACWQWNPSDRPSFAEIHQAFETMFQEBCR-Abl p210~el4a2(SEQ ID NO :3)MVDPVGFAEAWKAQFPDSEPPRMELRSV⑶IEQELERCKASIRRLEQEVNQERFRMIYLQTLLAKEKKSYDRQRWGFRRAAQAPDGASEPRASASRPQPAPADGADPPPAEEPEARPDGEGSPGKARPGTARRPGAAASGERDDRGPPASVAALRSNFERIRKGHGQPGADAEKPFYVNVEFHHERGLVKVNDKEVSDRISSLGSQAMQMERKKSQHGAGSSV⑶ASRPPYRGRSSESSCGVD⑶YEDAELNPRFLKDNLIDANGGSRPPWPPLEYQPYQSIYVGGIMEGEGKGPLLRSQSTSEQEKRLTWPRRSYSPRSFEDCGGGYTPDCSSNENLTSSEEDFSSGQSSRVSPSPTTYRMFRDKSRSPSQNSQQSFDSSSPPTPQCHKRHRHCPVVVSEATIVGVRKTGQIWPNDDEGAFHGDADGSFGTPPGYGCAADRAEEQRRHQDGLPYIDDSPSSSPHLSSKGRGSRDALVSGALKSTKASELDLEKGLEMRKWVLSGILASEETYLSHLEALLLPMKPLKAAATTSQPVLTSQQIETIFFKVPELYEIHKESYDGLFPRVQQWSHQQRV⑶LFQKLASQLGVYRAFVDNYGVAMEMAEKCCQANAQFAEISENLRARSNKDAKDPTTKNSLETLLYKPVDRVTRSTLVLHDLLKHTPASHPDHPLLQDALRISQNFLSSINEEITPRRQSMTVKKGEHRQLLKDSFMVELVEGARKLRHVFLFTDLLLCTKLKKQSGGKTQQYDCKWYIPLTDLSFQMVDELEAVPNIPLVPDEELDALKIKISQIKSDIQREKRANKGSKATERLKKKLSEQESLLLLMSPSMAFRVHSRNGKSYTFLISSDYERAEWRENIREQQKKCFRSFSLTSVELQMLTNSCVKLQTVHSIPLTINKEDDESPGLYGFLNVIVHSATGFKQSSKALQRPVASDFEPQGLSEAARWNSKENLLAGPSENDPNLFVALYDFVASGDNTLSITKGEKLRVLGYNHNGEWCEAQTKNGQGWVPSNYITPVNSLEKHSWYHGPVSRNAAEYPLSSGINGSFLVRESESSPSQRSISLRYEGRVYHYRINTASDGKLYVSSESRFNTLAELVHHHSTVADGLITTLHYPAPKRNKPTVYGVSPNYDKWEMERTDITMKHKLGGGQYGEVYEGVWKKYSLTVAVKTLKEDTMEVEEFLKEAAVMKEIKHPNLV
QLLGVCTREPPFYIITEFMTYGNLLDYLRECNRQEVNAVVLLYMATQISSAMEYLEKKNFIHRDLAARNCLVGENHLVKVADFGLSRLMTCDTYTAHAGAKFPIKWTAPESLAYNKFSIKSDVWAFGVLLWEIATYGMSPYPGIDRSQVYELLEKDYRMKRPEGCPEKVYELMRACWQffNPSDRPSFAEIHQAFETMFQESSISDEVEKELGKQGVRGAVTTLLQAPELPTKTRTSRRAAEHRDTTDVPEMPHSKGQGESDPLDHEPAVSPLLPRKERGPPEGGLNEDERLLPKDKKTNLFSALIKKKKKTAPTPPKRSSSFREMDGQPERRGAGEEEGRDISNGALAFTPLDTADPAKSPKPSNGAGVPNGALRESGGSGFRSPHLWKKSSTLTSSRLATGEEEGGGSSSKRFLRSCSVSCVPHGAKDTEWRSVTLPRDLQSTGRQFDSSTFGGHKSEKPALPRKRAGENRSDQVTRGT
62
VTPPPRLVKKNEEAADEVFKDIMESSPGSSPPNLTPKPLRRQVTVAPASGLPHKEEAWKGSALGTPAAAEPVTPTSKAGSGAPRGTSKGPAEESRVRRHKHSSESPGRDKGKLSKLKPAPPPPPAASAGKAGGKPSQRPGQEAAGEAVLGAKTKATSLVDAVNSDAAKPSQPAEGLKKPVLPATPKPHPAKPSGTPISPAPVPLSTLPSASSALA⑶QPSSTAFIPLISTRVSLRKTRQPPERASGAITKGVVLDSTEALCLAISGNSEQMASHSAVLEAGKNLYTFCVSYVDSIQQMRNKFAFREAINKLENNLRELQICPASAGSGPAATQDFSKLLSSVKEISDIVQRBCR-Abl p210~el3a2(SEQ ID NO :4)MVDPVGFAEAWKAQFPDSEPPRMELRSV⑶IEQELERCKASIRRLEQEVNQERFRMIYLQTLLAKEKKSYDRQRWGFRRAAQAPDGASEPRASASRPQPAPADGADPPPAEEPEARPDGEGSPGKARPGTARRPGAAASGERDDRGPPASVAALRSNFERIRKGHGQPGADAEKPFYVNVEFHHERGLVKVNDKEVSDRISSLGSQAMQMERKKSQHGAGSSV⑶ASRPPYRGRSSESSCGVD⑶YEDAELNPRFLKDNLIDANGGSRPPWPPLEYQPYQSIYVGGIMEGEGKGPLLRSQSTSEQEKRLTWPRRSYSPRSFEDCGGGYTPDCSSNENLTSSEEDFSSGQSSRVSPSPTTYRMFRDKSRSPSQNSQQSFDSSSPPTPQCHKRHRHCPVVVSEATIVGVRKTGQIWPNDDEGAFHGDADGSFGTPPGYGCAADRAEEQRRHQDGLPYIDDSPSSSPHLSSKGRGSRDALVSGALKSTKASELDLEKGLEMRKWVLSGILASEETYLSHLEALLLPMKPLKAAATTSQPVLTSQQIETIFFKVPELYEIHKESYDGLFPRVQQWSHQQRV⑶LFQKLASQLGVYRAFVDNYGVAMEMAEKCCQANAQFAEISENLRARSNKDAKDPTTKNSLETLLYKPVDRVTRSTLVLHDLLKHTPASHPDHPLLQDALRISQNFLSSINEEITPRRQSMTVKKGEHRQLLKDSFMVELVEGARKLRHVFLFTDLLLCTKLKKQSGGKTQQYDCKWYIPLTDLSFQMVDELEAVPNIPLVPDEELDALKIKISQIKSDIQREKRANKGSKATERLKKKLSEQESLLLLMSPSMAFRVHSRNGKSYTFLISSDYERAEWRENIREQQKKCFRSFSLTSVELQMLTNSCVKLQTVHSIPLTIN
KEEALQRPVASDFEPQGLSEAARWNSKENLLAGPSENDPNLFVALYDFVASGDNTLSITKGEKLRVLGYNHNGEWCEAQTKNGQGWVPSNYITPVNSLEKHSWYHGPVSRNAAEYPLSSGINGSFLVRESESSPSQRSISLRYEGRVYHYRINTASDGKLYVSSESRFNTLAELVHHHSTVADGLITTLHYPAPKRNKPTVYGVSPNYDKWEMERTDITMKHKLGGGQYGEVYEGVWKKYSLTVAVKTLKEDTMEVEEFLKEAAVMKEIKHPNLVQLLGVCTREPPFYIITEFMTYGNLLDYLRECNRQEVNAVVLLYMATQISSAMEYLEKKNFIHRDLAARNCLVGENHLVKVADFGLSRLMTCDTYTAHAGAKFPIKWTAPESLAYNKFSIKSDVWAFGVLLWEIATYGMSPYPGIDRSQVYELLEKDYRMKRPEGCPEKVYELMRACWQWNPSDRPSFAEIHQAFETMFQESSISDEVEKELGKQGVRGAVTTLLQAPELPTKTRTSRRAAEHRDTTDVPEMPHSKGQGESDPLDHEPAVSPLLPRKERGPPEGGLNEDERLLPKDKKTNLFSALIKKKKKTAPTPPKRSSSFREMDGQPERRGAGEEEGRDISNGALAFTPLDTADPAKSPKPSNGAGVPNGALRESGGSGFRSPHLWKKSSTLTSSRLATGEEEGGGSSSKRFLRSCSVSCVPHGAKDTEWRSVTLPRDLQSTGRQFDSSTFGGHKSEKPALPRKRAGENRSDQVTRGTVTPPPRLVKKNEEAADEVFKDIMESSPGSSPPNLTPKPLRRQVTVAPASGLPHKEEAWKGSALGTPAAAEPVTPTSKAGSGAPRGTSKGPAEESRVRRHKHSSESPGRDKGKLSKLKPAPPPPPAASAGKAGGKPSQRPGQEAAGEAVLGAKTKATSLVDAVNSDAAKPSQPAEGLKKPVLPATPKPHPAKPSGTPISPAPVPLSTLPSASSALA ⑶ QPSSTAFIPLISTRVSLRKTRQPPERASGAITKGWLDSTEALCLAIS
GNSEQMASHSAVLEAGKNLYTFCVSYVDSIQQMRNKFAFREAINKLENNLRELQICPASAGSGPAATQDFSKLLSSVKEISDIVQRBCR-Abl pl90~ela2(SEQ ID NO 5)MVDPVGFAEAWKAQFPDSEPPRMELRSV⑶IEQELERCKASIRRLEQEVNQERFRMIYLQTLLAKEKKSYDRQRWGFRRAAQAPDGASEPRASASRPQPAPADGADPPPAEEPEARPDGEGSPGKARPGTARRPGAAASGERDDRGPPASVAALRSNFERIRKGHGQPGADAEKPFYVNVEFHHERGLVKVNDKEVSDRISSLGSQAMQMERKKSQHGAGSSV⑶ASRPPYRGRSSESSCGVD⑶YEDAELNPRFLKDNLIDANGGSRPPWPPLEYQPYQSIYVGGIMEGEGKGPLLRSQSTSEQEKRLTWPRRSYSPRSFEDCGGGYTPDCSSNENLTSSEEDFSSGQSSRVSPSPTTYRMFRDKSRSPSQNSQQSFDSSSPPTPQCHKRHRHCPVVVSEATIVGVRKTGQIWPNDDEGAFHGDAEALQRPVASDFEPQGLSEAARWNSKENLLAGPSENDPNLFVALYDFVASGDNTLSITKGEKLRVLGYNHNGEWCEAQTKNGQGWVPSNYITPVNSLEKHSWYHGPVSRNAAEYPLSSGINGSFLVRESESSPSQRSISLRYEGRVYHYRINTASDGKLYVSSESRFNTLAELVHHHSTVADGLITTLHYPAPKRNKPTVYGVSPNYDKWEMERTDITMKHKLGGGQYGEVYEGVWKKYSLTVAVKTLKEDTMEVEEFLKEAAVMKEIKHPNLVQLLGVCTREPPFYIITEFMTYGNLLDYLRECNRQEVNAVVLLYMATQISSAMEYLEKKNFIHRDLAARNCLVGENHLVKVADFGLSRLMTCDTYTAHAGAKFPIKWTAPESLAYNKFSIKSDVWAFGVLLWEIATYGMSPYPGIDRSQVYELLEKDYRMKRPEGCPEKVYELMRACWQWNPSDRPSFAEIHQAFETMFQESSISDEVEKELGKQGVRGAVTTLLQAPELPTKTRTSRRAAEHRDTTDVPEMPHSKGQGESDPLDHEPAVSPLLPRKERGPPEGGLNEDERLLPKDKKTNLFSALIKKKKKTAPTPPKRSSSFREMDGQPERRGAGEEEGRDISNGALAFTPLDTADPAKSPKPSNGAGVPNGALRESGGSGFRSPHLWKKSSTLTSSRLATGEEEGGGSSSKRFLRSCSVSCVPHGAKDTEWRSVTLPRDLQSTGRQFDSSTFGGHKSEKPALPRKRAGENRSDQVTRGTVTPPPRLVKKNEEAADEVFKDIMESSPGSSPPNLTPKPLRRQVTVAPASGLPHKEEAWKGSALGTPAAAEPVTPTSKAGSGAPRGTSKGPAEESRVRRHKHSSESPGRDKGKLSKLKPAPPPPPAASAGKAGGKPSQRPGQEAAGEAVLGAKTKATSLVDAVNSDAAKPSQPAEGLKKPVLPATPKPHPAKPSGTPISPAPVPLSTLPSASSALA ⑶ QPSSTAFIPLISTRVSLRKTRQPPERASGAITKGWLDSTEALCLAISGNSEQMASHSAVLEAGKNLYTFCVSYVDSIQQMRNKFAFREAINKLENNLRELQICPASAGSGPAATQDFSKLLSSVKEISDIVQRBCR-Abl p210~el4a2 T315I(SEQ ID NO :6)MVDPVGFAEAWKAQFPDSEPPRMELRSV⑶IEQELERCKASIRRLEQEVNQERFRMIYLQTLLAKEKKSYDRQRWGFRRAAQAPDGASEPRASASRPQPAPADGADPPPAEEPEARPDGEGSPGKARPGTARRPGAAASGERDDRGPPASVAALRSNFERIRKGHGQPGADAEKPFYVNVEFHHERGLVKVNDKEVSDRISSLGSQAMQMERKKSQHGAGSSV⑶ASRPPYRGRSSESSCGVD⑶YEDAELNPRFLKDNLIDANGGSRPPWPPLEYQPYQSIYVGGIMEGEGKGPLLRSQSTSEQEKRLTWPRRSYSPRSFEDCGGGYTPDCSSNENLTSSEEDFSSGQSSRVSPSPTTYRMFRDKSRSPSQNSQQSFDSSSPPTPQCHKRHRHCPVVVSEATIVGVRKTGQIWPNDDEGAFHGDADGSFGTPPGYGCAADRAEEQRRHQDGLPYIDDSPSSSPHLSSKGRGSRDALVSGALKSTKASELDLEKGLEMRKWVLSGILASEETYLSHLEALLLPMKPLKAAATTSQPVLTS
QQIETIFFKVPELYEIHKESYDGLFPRVQQWSHQQRV⑶LFQKLASQLGVYRAFVDNYGVAMEMAEKCCQANAQFAEISENLRARSNKDAKDPTTKNSLETLLYKPVDRVTRSTLVLHDLLKHTPASHPDHPLLQDALRISQNFLSSINEEITPRRQSMTVKKGEHRQLLKDSFMVELVEGARKLRHVFLFTDLLLCTKLKKQSGGKTQQYDCKWYIPLTDLSFQMVDELEAVPNIPLVPDEELDALKIKISQIKSDIQREKRANKGSKATERLKKKLSEQESLLLLMSPSMAFRVHSRNGKSYTFLISSDYERAEWRENIREQQKKCFRSFSLTSVELQMLTNSCVKLQTVHSIPLTINKEDDESPGLYGFLNVIVHSATGFKQSSKALQRPVASDFEPQGLSEAARWNSKENLLAGPSENDPNLFVALYDFVASGDNTLSITKGEKLRVLGYNHNGEWCEAQTKNGQGWVPSNYITPVNSLEKHSWYHGPVSRNAAEYPLSSGINGSFLVRESESSPSQRSISLRYEGRVYHYRINTASDGKLYVSSESRFNTLAELVHHHSTVADGLITTLHYPAPKRNKPTVYGVSPNYDKWEMERTDITMKHKLGGGQYGEVYEGVWKKYSLTVAVKTLKEDTMEVEEFLKEAAVMKEIKHPNLVQLLGVCTREPPFYIIIEFMTYGNLLDYLRECNRQEVNAVVLLYMATQISSAMEYLEKKNFIHRDLAARNCLVGENHLVKVADFGLSRLMTCDTYTAHAGAKFPIKWTAPESLAYNKFSIKSDVWAFGVLLWEIATYGMSPYPGIDRSQVYELLEKDYRMKRPEGCPEKVYELMRACWQffNPSDRPSFAEIHQAFETMFQESSISDEVEKELGKQGVRGAVTTLLQAPELPTKTRTSRRAAEHRDTTDVPEMPHSKGQGESDPLDHEPAVSPLLPRKERGPPEGGLNEDERLLPKDKKTNLFSALIKKKKKTAPTPPKRSSSFREMDGQPERRGAGEEEGRDISNGALAFTPLDTADPAKSPKPSNGAGVPNGALRESGGSGFRSPHLWKKSSTLTSSRLATGEEEGGGSSSKRFLRSCSVSCVPHGAKDTEWRSVTLPRDLQSTGRQFDSSTFGGHKSEKPALPRKRAGENRSDQVTRGTVTPPPRLVKKNEEAADEVFKDIMESSPGSSPPNLTPKPLRRQVTVAPASGLPHKEEAWKGSALGTPAAAEPVTPTSKAGSGAPRGTSKGPAEESRVRRHKHSSESPGRDKGKLSKLKPAPPPPPAASAGKAGGKPSQRPGQEAAGEAVLGAKTKATSLVDAVNSDAAKPSQPAEGLKKPVLPATPKPHPAKPSGTPISPAPVPLSTLPSASSALA⑶QPSSTAFIPLISTRVSLRKTRQPPERASGAITKGVVLDSTEALCLAISGNSEQMASHSAVLEAGKNLYTFCVSYVDSIQQMRN
KFAFREAINKLENNLRELQICPASAGSGPAATQDFSKLLSSVKEISDIVQRBCR-Abl p210~el3a2 T315I(SEQ ID NO :7)MVDPVGFAEAWKAQFPDSEPPRMELRSV⑶IEQELERCKASIRRLEQEVNQERFRMIYLQTLLAKEKKSYDRQRWGFRRAAQAPDGASEPRASASRPQPAPADGADPPPAEEPEARPDGEGSPGKARPGTARRPGAAASGERDDRGPPASVAALRSNFERIRKGHGQPGADAEKPFYVNVEFHHERGLVKVNDKEVSDRISSLGSQAMQMERKKSQHGAGSSV⑶ASRPPYRGRSSESSCGVD⑶YEDAELNPRFLKDNLIDANGGSRPPWPPLEYQPYQSIYVGGIMEGEGKGPLLRSQSTSEQEKRLTWPRRSYSPRSFEDCGGGYTPDCSSNENLTSSEEDFSSGQSSRVSPSPTTYRMFRDKSRSPSQNSQQSFDSSSPPTPQCHKRHRHCPVVVSEATIVGVRKTGQIWPNDDEGAFHGDADGSFGTPPGYGCAADRAEEQRRHQDGLPYIDDSPSSSPHLSSKGRGSRDALVSGALKSTKASELDLEKGLEMRKWVLSGILASEETYLSHLEALLLPMKPLKAAATTSQPVLTSQQIETIFFKVPELYEIHKESYDGLFPRVQQWSHQQRV⑶LFQKLASQLGVYRAFVDNYGVAMEMAEKCCQANAQFAEISENLRARSNKDAKDPTTKNSLETLLYKPVDRVTRSTLVLHDLLKHTPASHPDHPLLQDALRISQNFLSSINEEITPRRQSMTVKKGEHRQLLKDSFMVELVEGARKLRHVFLFTDLLLCTKLKKQSGGKTQQYDCKWYIPLTDLSFQMVDELEAVPNIPLVP
DEELDALKIKISQIKSDIQREKRANKGSKATERLKKKLSEQESLLLLMSPSMAFRVHSRNGKSYTFLISSDYERAEWRENIREQQKKCFRSFSLTSVELQMLTNSCVKLQTVHSIPLTINKEEALQRPVASDFEPQGLSEAARWNSKENLLAGPSENDPNLFVALYDFVASGDNTLSITKGEKLRVLGYNHNGEWCEAQTKNGQGWVPSNYITPVNSLEKHSWYHGPVSRNAAEYPLSSGINGSFLVRESESSPSQRSISLRYEGRVYHYRINTASDGKLYVSSESRFNTLAELVHHHSTVADGLITTLHYPAPKRNKPTVYGVSPNYDKWEMERTDITMKHKLGGGQYGEVYEGVWKKYSLTVAVKTLKEDTMEVEEFLKEAAVMKEIKHPNLVQLLGVCTREPPFYIIIEFMTYGNLLDYLRECNRQEVNAVVLLYMATQISSAMEYLEKKNFIHRDLAARNCLVGENHLVKVADFGLSRLMTCDTYTAHAGAKFPIKWTAPESLAYNKFSIKSDVWAFGVLLWEIATYGMSPYPGIDRSQVYELLEKDYRMKRPEGCPEKVYELMRACWQWNPSDRPSFAEIHQAFETMFQESSISDEVEKELGKQGVRGAVTTLLQAPELPTKTRTSRRAAEHRDTTDVPEMPHSKGQGESDPLDHEPAVSPLLPRKERGPPEGGLNEDERLLPKDKKTNLFSALIKKKKKTAPTPPKRSSSFREMDGQPERRGAGEEEGRDISNGALAFTPLDTADPAKSPKPSNGAGVPNGALRESGGSGFRSPHLWKKSSTLTSSRLATGEEEGGGSSSKRFLRSCSVSCVPHGAKDTEWRSVTLPRDLQSTGRQFDSSTFGGHKSEKPALPRKRAGENRSDQVTRGTVTPPPRLVKKNEEAADEVFKDIMESSPGSSPPNLTPKPLRRQVTVAPASGLPHKEEAWKGSALGTPAAAEPVTPTSKAGSGAPRGTSKGPAEESRVRRHKHSSESPGRDKGKLSKLKPAPPPPPAASAGKAGGKPSQRPGQEAAGEAVLGAKTKATSLVDAVNSDAAKPSQPAEGLKKPVLPATPKPHPAKPSGTPISPAPVPLSTLPSASSALA ⑶ QPSSTAFIPLISTRVSLRKTRQPPERASGAITKGWLDSTEALCLAISGNSEQMASHSAVLEAGKNLYTFCVSYVDSIQQMRNKFAFREAINKLENNLRELQICPASAGSGPAATQDFSKLLSSVKEISDIVQRBCR-Abl pl90~ela2(SEQ ID NO 8)MVDPVGFAEAWKAQFPDSEPPRMELRSV⑶IEQELERCKASIRRLEQEVNQERFRMIYLQTLLAKEKKSYDRQRWGFRRAAQAPDGASEPRASASRPQPAPADGADPPPAEEPEARPDGEGSPGKARPGTARRPGAAASGERDDRGPPASVAALRSNFERIRKGHGQPGADAEKPFYVNVEFHHERGLVKVNDKEVSDRISSLGSQAMQMERKKSQHGAGSSV⑶ASRPPYRGRSSESSCGVD⑶YEDAELNPRFLKDNLIDANGGSRPPWPPLEYQPYQSIYVGGIMEGEGKGPLLRSQSTSEQEKRLTWPRRSYSPRSFEDCGGGYTPDCSSNENLTSSEEDFSSGQSSRVSPSPTTYRMFRDKSRSPSQNSQQSFDSSSPPTPQCHKRHRHCPVVVSEATIVGVRKTGQIWPNDDEGAFHGDAEALQRPVASDFEPQGLSEAARWNSKENLLAGPSENDPNLFVALYDFVASGDNTLSITKGEKLRVLGYNHNGEWCEAQTKNGQGWVPSNYITPVNSLEKHSWYHGPVSRNAAEYPLSSGINGSFLVRESESSPSQRSISLRYEGRVYHYRINTASDGKLYVSSESRFNTLAELVHHHSTVADGLITTLHYPAPKRNKPTVYGVSPNYDKWEMERTDITMKHKLGGGQYGEVYEGVWKKYSLTVAVKTLKEDTMEVEEFLKEAAVMKEIKHPNLVQLLGVCTREPPFYIIIEFMTYGNLLDYLRECNRQEVNAVVLLYMATQISSAMEYLEKKNFIHRDLAARNCLVGENHLVKVADFGLSRLMTCDTYTAHAGAKFPIKWTAPESLAYNKFSIKSDVWAFGVLLWEIATYGMSPYPGIDRSQVYELLEKDYRMKRPEGCPEKVYELMRACWQWNPSDRPSFAEIHQAFETMFQESSISDEVEKELGKQGVRGAVTTLLQAPELPTKTRTSRRAAEHRDTTDVPEMPHSKGQGESDPLDHEPAVSPLLPRKERGPPEGGLNEDERLLPKDKKTNLFSALIKKKKKTAPTPPKRSSS
FREMDGQPERRGAGEEEGRDISNGALAFTPLDTADPAKSPKPSNGAGVPNGALRESGGSGFRSPHLWKKSSTLTSSRLATGEEEGGGSSSKRFLRSCSVSCVPHGAKDTEWRSVTLPRDLQSTGRQFDSSTFGGHKSEKPALPRKRAGENRSDQVTRGTVTPPPRLVKKNEEAADEVFKDIMESSPGSSPPNLTPKPLRRQVTVAPASGLPHKEEAWKGSALGTPAAAEPVTPTSKAGSGAPRGTSKGPAEESRVRRHKHSSESPGRDKGKLSKLKPAPPPPPAASAGKAGGKPSQRPGQEAAGEAVLGAKTKATSLVDAVNSDAAKPSQPAEGLKKPVLPATPKPHPAKPSGTPISPAPVPLSTLPSASSALA ⑶ QPSSTAFIPLISTRVSLRKTRQPPERASGAITKGWLDSTEALCLAISGNSEQMASHSAVLEAGKNLYTFCVSYVDSIQQMRNKFAFREAINKLENNLRELQICPASAGSGPAATQDFSKLLSSVKEISDIVQRC-Kit 激酶(SEQ ID NO 9)測(cè)定通過(guò)追隨經(jīng)由與丙酮酸激酶/乳酸脫氫酶體系偶聯(lián)的激酶反應(yīng)的ADP產(chǎn)生， 來(lái)確定 C-Kit 激酶(SEQ ID NO 9)的活性(例如 Schindler 等人 Science (2000) 289， 1938-1942)。在這一測(cè)定中，用分光光度法連續(xù)地監(jiān)測(cè)NADH的氧化(因此在A340nm處 降低)。反應(yīng)混合物(100 u 1)包含在含有0. 2%辛基葡糖苷和1 % DMS0的90mM Tris緩 沖液(pH 7.5)中的 c-Kit(cKIT 殘基 T544-V976，來(lái)自 ProQinase，5.4nM)、polyE4Y(lmg/ ml)、MgCl2(10mM)、丙酮酸激酶(4單位)、乳酸脫氫酶(0. 7單位)、磷酸烯醇丙酮酸(ImM) 和NADH(0. 28mM)。將測(cè)試化合物與C_Met (SEQ ID NO :9)和其它反應(yīng)試劑在22°C下孵育 < 2min，然后加入ATP(200iiM)以啟動(dòng)反應(yīng)。在30°C下，在Polarstar Optima平板讀取器 (BMG)上，連續(xù)監(jiān)測(cè)340nm處的吸收，監(jiān)測(cè)0. 5小時(shí)。使用0小時(shí)至0. 5小時(shí)的時(shí)間范圍計(jì) 算反應(yīng)速率。通過(guò)將反應(yīng)速率與對(duì)照(即沒(méi)有測(cè)試化合物)的反應(yīng)速率相比較，獲得抑制 百分比。使用如GraphPad Prism軟件包執(zhí)行的軟件程序，由在一定抑制劑濃度范圍內(nèi)所確 定的一系列抑制百分比值來(lái)計(jì)算IC50值。具有N-末端 GST 融合的 c_Kit (SEQ ID NO 9)LGYWKIKGLVQPTRLLLEYLEEKYEEHLYERDE⑶KWRNKKFELGLEFPNLPYYID⑶VKLTQSMAIIRYIADKHNMLGGCPKERAEISMLEGAVDIRYGVSRIAYSKDFETLKVDFLSKLPEMLKMFEDRLCHKTYLNGDHVTHPDFMLYDALDVVLYMDPMCLDAFPKLVCFKKRIEAIPQIDKYLKSSKYIWPLQGWQATFGG⑶HPPKSDLVPRHNQTSLYKKAGSAAAVLEENLYFQGTYKYLQKPMYEVQWKVVEEINGNNYVYIDPTQLPYDHKWEFPRNRLSFGKTLGAGAFGKVVEATAYGLIKSDAAMTVAVKMLKPSAHLTEREALMSELKVLSYLGNHMNIVNLLGACTIGGPTLVITEYCCY⑶LLNFLRRKRDSFICSKQEDHAEAALYKNLLHSKESSCSDSTNEYMDMKPGVSYVVPTKADKRRSVRIGSYIERDVTPAIMEDDELALDLEDLLSFSYQVAKGMAFLASKNCIHRDLAARNILLTHGRITKICDFGLARDIKNDSNYVVKGNARLPVKWMAPESIFNCVYTFESDVWSYGIFLWELFSLGSSPYPGMPVDSKFYKMIKEGFRMLSPEHAPAEMYDIMKTCWDADPLKRPTFKQIVQLIEKQISESTNHIYSNLANCSPNRQKPVVDHSVRINSVGSTASSSQPLLVHDDVC-Met 激酶(SEQ ID NO: 10)測(cè)定通過(guò)追隨經(jīng)由與丙酮酸激酶/乳酸脫氫酶體系偶聯(lián)的激酶反應(yīng)的ADP產(chǎn)生，來(lái) 確定 C-Met 激酶(SEQ ID NO 10)的活性(例如 Schindler 等人 Science (2000) 289， 1938-1942)。在這一測(cè)定中，用分光光度法連續(xù)地監(jiān)測(cè)NADH的氧化(因此在A340nm處減少)。反應(yīng)混合物(100 u 1)包含在含有0. 25mM DTT、0. 2%辛基葡糖苷和DMS0的90mM Tris 緩沖液(pH7. 5)中的 C_Met (c_Met 殘基956_1390，來(lái)自 Invitrogen，目錄號(hào) #PV3143， 6nM)、polyE4Y(lmg/ml)、MgCl2(10mM)、丙酮酸激酶(4單位)、乳酸脫氫酶(0. 7單位)、磷 酸烯醇丙酮酸(ImM)和NADH(0. 28mM)。將測(cè)試化合物與C_Met (SEQ ID NO 10)和其它反 應(yīng)試劑在22°C下孵育0. 5h，然后加入ATP(lOOiiM)以啟動(dòng)反應(yīng)。在30°C下，在Polarstar Optima平板讀取器(BMG)上，連續(xù)監(jiān)測(cè)340nm處的吸收，監(jiān)測(cè)2小時(shí)。使用1. 0小時(shí)至2. 0 小時(shí)的時(shí)間范圍計(jì)算反應(yīng)速率。通過(guò)將反應(yīng)速率與對(duì)照(即沒(méi)有測(cè)試化合物)的反應(yīng)速率 相比較，獲得抑制百分比。使用如GraphPad Prism軟件包執(zhí)行的軟件程序，由在一定抑制 劑濃度范圍內(nèi)所確定的一系列抑制百分比值來(lái)計(jì)算IC5(I值。cMet 激酶(SEQ ID NO 10)MSYYHHHHHHDYDIPTTENLYFQGAMLVPRGSPWIPFTMKKRKQIKDLGSELVRYDARVHTPHLDRLVSARSVSPTTEMVSNESVDYRATFPEDQFPNSSQNGSCRQVQYPLTDMSPILTSGDSDISSPLLQNTVHIDLSALNPELVQAVQHVVIGPSSLIVHFNEVIGRGHFGCVYHGTLLDNDGKKIHCAVKSLNRITDIGEVSQFLTEGIIMKDFSHPNVLSLLGICLRSEGSPLVVLPYMKHGDLRNFIRNETHNPTVKDLIGFGLQVAKGMKYLASKKFVHRDLAARNCMLDEKFTVKVADFGLARDMYDKEYYSVHNKTGAKLPVKWMALESLQTQKFTTKSDVWSFGVLLWELMTRGAPPYPDVNTFDITVYLLQGRRLLQPEYCPDPLYEVMLKCWHPKAEMRPSFSELVSRISAIFSTFIGEHYVHVNATYVNVKCVAPYPSLLSSEDNADDEVDTRPASFWETSB-Raf (V600E)激酶測(cè)定通過(guò)追隨經(jīng)由與丙酮酸激酶/乳酸脫氫酶體系偶聯(lián)的激酶反應(yīng)的ADP產(chǎn)生，來(lái)確 定 B-Raf (V600E)激酶(SEQ ID NO 11)的活性(例如 Schindler 等人.Science (2000) 289， 1938-1942)。在這一測(cè)定中，用分光光度法連續(xù)地監(jiān)測(cè)NADH的氧化(因此A34(lnm處的減少)。 反應(yīng)混合物(100 ill)包含在含有0. 13%辛基葡糖苷和3. 5% DMS0的60mM Tris緩沖液 (pH 7.5)中的B-Raf (V600E)激酶(0. 34nM的標(biāo)稱(chēng)濃度，SEQ ID NO :11)、未磷酸化的、全 長(zhǎng) MEKl(42nM，SEQ ID NO :12)、MgCl2(13mM)、丙酮酸激酶(3. 5 單位)、乳酸脫氫酶(5. 5 單 位)、磷酸烯醇丙酮酸(ImM)和NADH(0. 28mM)。在30°C，將測(cè)試化合物與反應(yīng)混合物一起孵 育lh。經(jīng)加入ATP (0. 2mM，終濃度)來(lái)啟動(dòng)反應(yīng)。在30°C下，在Polarstar Optima平板讀 取器(BMG)上，連續(xù)監(jiān)測(cè)340nm處的吸收，監(jiān)測(cè)3小時(shí)。使用0. 5小時(shí)至1. 5小時(shí)的時(shí)間范 圍計(jì)算反應(yīng)速率。通過(guò)將反應(yīng)速率與對(duì)照(即沒(méi)有測(cè)試化合物)的反應(yīng)速率相比較，獲得 抑制百分比。使用如GraphPad Prism軟件包執(zhí)行的軟件程序，由在一定抑制劑濃度范圍內(nèi) 所確定的一系列抑制百分比值來(lái)計(jì)算IC5(I值。BRaf V600E 激酶(SEQ ID NO: 11)MDRGSHHHHHHGSEDRNRMKTLGRRDSSDDWEIPDGQITVGQRIGSGSFGTVYKGKWHGDVAVKMLNVTAPTPQQLQAFKNEVGVLRKTRHVNILLFMGYSTKPQLAIVTQWCEGSSLYHHLHIIETKFEMIKLIDIARQTAQGMDYLHAKSIIHRDLKSNNIFLHEDLTVKI⑶FGLATEKSRWSGSHQFEQLSGSILWMAPEVIRMQDKNPYSFQSDVYAFGIVLYELMTGQLPYSNINNRDQIIFMVGRGYLSPDLSKVRSNCPKAMKRLMAECLKKKRDERPLFPQILASIELLARSLPKIHRMEK1 激酶(SEQ ID NO :12)
MELKDDDFEKISELGAGNGGVVFKVSHKPSGLVMARKLIHLEIKPAIRNQIIRELQVLHECNSPYIVGFYGAFYSDGEISICMEHMDGGSLDQVLKKAGRIPEQILGKVSIAVIKGLTYLREKHKIMHRDVKPSNILVNSRGEIKLCDFGVSGQLIDSMANSFVGTRSYMSPERLQGTHYSVQSDIWSMGLSLVEMAVGRYPIPPPDAKELELMFGCQVE⑶AAETPPRPRTPGRPLSSYGMDSRPPMAIFELLDYIVNEPPPKLPSGVFSLEFQDFVNKCLIKNPAERADLKQLMVHAFIKRSDAEEVDFAGWLCSTIGLNQPSTPTHAAGV表1 生物學(xué)數(shù)據(jù)總結(jié)式I化合物的生物化學(xué)IC5Q值 +++ =< 0. 1 uM ；++ =< 1. OuM ；+ =< 10uM ；4< 100 u M ;n/a =未能得到本文公開(kāi)的其它化合物對(duì)于Abl酶的生物化學(xué)IC5(1值為至少10 u M。細(xì)胞培養(yǎng)BaF3細(xì)胞(親本或用下列轉(zhuǎn)染的野生型p210BCR_Abl和T315I p210BCR_Abl獲 自 Richard Van Etten 教授(新英格蘭醫(yī)學(xué)中心(New EnglandMedical Center),Boston, MA)。簡(jiǎn)單來(lái)講，使細(xì)胞在補(bǔ)加有10%優(yōu)等(characterized)胎牛血清(HyClone，Logan, UT)的RPMI 1640中在37°C、5% C02、95%濕度條件下生長(zhǎng)。允許細(xì)胞擴(kuò)展直至達(dá)到80% 飽和，此時(shí)將它們傳代培養(yǎng)或收獲用于測(cè)定使用。
細(xì)胞增殖測(cè)定將系列稀釋的測(cè)試化合物分配到96孔黑色透明底平板(Corning，Corning, NY) 中。對(duì)于每一細(xì)胞系，將細(xì)胞以每孔三千個(gè)細(xì)胞加至完全培養(yǎng)基中。將板在37°C、5%C02、 95%濕度條件下孵育72小時(shí)。在孵育期結(jié)束之時(shí)，將Cell Titer Blue (Promega,Madison, WI)加至每孔中，并在37°C、5% C02、95%濕度條件下再孵育4. 5小時(shí)。然后采用544nM激 發(fā)和 612nM 發(fā)射，在 BMG Fluostar Optima (BMG, Durham, NC)上對(duì)板進(jìn)行讀數(shù)。采用 Prism 軟件(Graphpad, San Diego, CA)分析數(shù)據(jù)，計(jì)算 IC50 值。表2:生物學(xué)數(shù)據(jù)總結(jié)式I化合物的全細(xì)胞抗增殖的IC5Q值 +++ = < 0. 1 u M ；++ = < 1. 0 u M ；+ = < 10uM 100 u M ;n/a =未能得到
權(quán)利要求
式Ia的化合物其中Q1和Q2各自單獨(dú)地并獨(dú)立地選自N和CH，并且其中Q1和Q2中至少一個(gè)是N；并且其中含有Q1和Q2的環(huán)可以任選地被一個(gè)或多個(gè)R20基團(tuán)取代；每個(gè)D單獨(dú)地選自C、CH、C-R20、N-Z3、N、O和S，從而得到的環(huán)選自吡唑基、三唑基、異噁唑基、異噻唑基、噁唑基和噻二唑基；其中E選自苯基、吡啶基和嘧啶基；當(dāng)Q1和Q2都是N時(shí)，A環(huán)選自環(huán)戊基、環(huán)己基、G1、G2和G3；當(dāng)僅Q1和Q2之一是N時(shí)，A環(huán)選自環(huán)戊基、環(huán)己基、G1、G2、G3和G4；G1是選自以下基團(tuán)的雜芳基吡咯基、呋喃基、噻吩基、噁唑基、噻唑基、異噁唑基-4-基、異噁唑基-5-基、異噻唑基、咪唑基、吡唑基、噁二唑基、噻二唑基、三唑基和四唑基；G2是選自以下基團(tuán)的稠合雙環(huán)雜芳基吲哚基、二氫吲哚基、異吲哚基、異二氫吲哚基、吲唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并噻唑基、苯并噻唑酮基、苯并噁唑基、苯并噁唑酮基、苯并異噁唑基、苯并異噻唑基、苯并咪唑基、苯并咪唑酮基、苯并三唑基、咪唑并吡啶基、吡唑并吡啶基、咪唑酮并吡啶基、噻唑并吡啶基、噻唑酮并吡啶基、噁唑并吡啶基、噁唑酮并吡啶基、異噁唑并吡啶基、異噻唑并吡啶基、三唑并吡啶基、咪唑并嘧啶基、吡唑并嘧啶基、咪唑酮并嘧啶基、噻唑并嘧啶基、噻唑酮并嘧啶基、噁唑并嘧啶基、噁唑酮并嘧啶基、異噁唑并嘧啶基、異噻唑并嘧啶基、三唑并嘧啶基、二氫嘌呤酮基、吡咯并嘧啶基、嘌呤基、吡唑并嘧啶基、鄰苯二甲酰亞氨基、苯并[c]吡咯酮基、吡嗪基吡啶基、吡啶并嘧啶基、嘧啶并嘧啶基、噌啉基、喹喔啉基、喹唑啉基、喹啉基、異喹啉基、2，3-二氮雜萘基、苯并二氧雜環(huán)戊烯基、苯并異噻唑啉-1，1，3-三酮基、二氫喹啉基、四氫喹啉基、二氫異喹啉基、四氫異喹啉基、苯并氮雜基、苯并二氮雜基、苯并氧雜基和苯并氧氮雜基；G3是選自以下基團(tuán)的雜環(huán)基氧雜環(huán)丁烷基、氮雜環(huán)丁烷基、四氫呋喃基、吡咯烷基、噁唑啉基、噁唑烷基、咪唑酮基、吡喃基、噻喃基、四氫吡喃基、二氧戊環(huán)基、哌啶基、嗎啉基、硫代嗎啉基、硫代嗎啉基S-氧化物、硫代嗎啉基S-二氧化物、哌嗪基、氮雜基、氧雜基、二氮雜基、托烷基和高托烷基；G4選自苯基、萘基、吡嗪基、噠嗪基、三嗪基、吡啶基和嘧啶基；A環(huán)被一個(gè)-(X1-A1)基團(tuán)或一個(gè)A1基團(tuán)取代，并且可以任選地被一個(gè)或兩個(gè)R2基團(tuán)取代；當(dāng)A是苯基且E是苯基時(shí)，則Z1不能是-O(CH2)qR5、-(CH2)p-G3或-(CH2)pR5；A1選自苯基、G1、G3和G4；X1選自連接A和A1環(huán)的直接的鍵、-(CH2)n(O)r(CH2)n-、-(CH2)n(NR3)r(CH2)n-、-(CH2)n(S)r(CH2)n-、-(CH2)n(C(O))r(CH2)n-、-(CH2)n(C(O)NR3)r(CH2)n-和-(CH2)n(SO2NR3)r(CH2)n-，其中任何亞烷基可以是直鏈或支鏈的；當(dāng)X1是直接的鍵時(shí)，E被一個(gè)或兩個(gè)R16基團(tuán)取代；當(dāng)X1不是直接的鍵時(shí)，E任選地被一個(gè)或兩個(gè)R16基團(tuán)取代；X2選自-O-、-S(CH2)n-、-N(R3)(CH2)n-、-(CH2)p-，并且其中X2的-(CH2)n-、-(CH2)p-的碳原子可以被氧代或者一個(gè)或多個(gè)C1-C6烷基基團(tuán)進(jìn)一步取代；當(dāng)A、A1、G1、G2、G3或G4含有一個(gè)或多個(gè)可取代的sp2-雜化的碳原子時(shí)，每個(gè)sp2-雜化的碳原子分別可以任選地被Z1取代基取代；當(dāng)A、A1、G1、G2或G3含有一個(gè)或多個(gè)可取代的sp3-雜化的碳原子時(shí)，每個(gè)sp3-雜化的碳原子分別可以任選地被Z2取代基取代；當(dāng)A、A1、G1、G2或G3含有一個(gè)或多個(gè)可取代的氮原子時(shí)，每個(gè)氮原子分別可以任選地被Z4取代基取代；每個(gè)Z1獨(dú)立地并單獨(dú)地選自C1-C6烷基、支鏈C3-C7烷基、C3-C8環(huán)烷基、鹵素、其中烷基部分可被部分或完全氟化的氟代C1-C6烷基、氰基、C1-C6烷氧基、其中烷基部分可被部分或完全氟化的氟代C1-C6烷氧基、-(CH2)nOH、氧代、C1-C6烷氧基C1-C6烷基、(R4)2N(CH)n-、(R3)2N(CH)n-、(R4)2N(CH2)qN(R4)(CH2)n-、(R4)2N(CH2)qO(CH2)n-、(R3)2NC(O)-、(R4)2NC(O)-、(R4)2NC(O)C1-C6烷基-、-(R4)NC(O)R8、C1-C6烷氧基羰基-、-羧基C1-C6烷基、C1-C6烷氧基羰基C1-C6烷基-、(R3)2NSO2-、-SOR3、(R4)2NSO2-、-N(R4)SO2R5、-N(R4)SO2R8、-O(CH2)qOC1-C6烷基、-O(CH2)qR5、-SO2R3、-SOR4、-S(O)2R5、-(CH2)nC(O)R5、-C(O)R8、-C(O)R6、-C(＝NOH)R6、-C(＝NOR3)R6、-(CH2)nN(R4)C(O)R8、-(CH2)n-G1、-(CH2)n-G4、苯氧基、-(CH2)nO(CH2)n-G1、-(CH2)pO(CH2)n-G4、-N(R3)(CH2)qO-烷基、-N(R3)(CH2)qN(R4)2、-N(R3)(CH2)qR5、-(CH2)nN(R3)(CH2)n-芳基、-(CH2)nN(R3)(CH2)n-G1、-(CH2)nN(R3)(CH2)n-G4、硝基、-(CH2)nNHC(O)(CH2)nR5、-(CH2)nNHS(O)2(CH2)nR5、-(CH2)nC(O)NH(CH2)qR5、-(CH2)nOC(O)R5、-CH(OH)(CH2)pR5、-CH(OH)CH(OH)R4、-(CH2)nR5、-C(＝NH)R5、-C(＝NH)N(R4)2、-C(＝NOR3)R5、-C(＝NOR3)N(R4)2和-NHC(＝NH)R8；在Z1含有烷基或亞烷基部分的情況下，所述部分可被一個(gè)或多個(gè)C1-C6烷基進(jìn)一步取代；每個(gè)Z2獨(dú)立地并單獨(dú)地選自芳基、C1-C6烷基、C3-C8環(huán)烷基、支鏈的C3-C7烷基、羥基、羥基C1-C6烷基-、氰基、(R3)2N-、(R4)2N-、(R4)2NC1-C6烷基-、(R4)2NC2-C6烷基N(R4)(CH2)n-、(R4)2NC2-C6烷基O(CH2)n-、(R3)2NC(O)-、(R4)2NC(O)-、(R4)2NC(O)-C1-C6烷基-、羧基、-羧基C1-C6烷基、C1-C6烷氧基羰基-、C1-C6烷氧基羰基C1-C6烷基-、(R3)2NSO2-、(R4)2NSO2-、-SO2R5、-SO2R8、-(CH2)nN(R4)C(O)R8、-C(O)R8、＝O、＝NOH、＝N(OR6)、-(CH2)n-G1、-(CH2)n-G4、-(CH2)nO(CH2)n-G1、-(CH2)nO(CH2)n-G4、-(CH2)nN(R3)(CH2)n-芳基、-(CH2)nN(R3)(CH2)n-G1、-(CH2)nN(R3)(CH2)n-G4、-(CH2)nNHC(O)(CH2)nR5、-(CH2)nNHS(O)2(CH2)nR5、-(CH2)nC(O)NH(CH2)qR5、-(CH2)nC(O)R5、-(CH2)nOC(O)R5和-(CH2)nR5；在Z2含有烷基或亞烷基部分的情況下，所述部分可被一個(gè)或多個(gè)C1-C6烷基進(jìn)一步取代；每個(gè)Z3獨(dú)立地并單獨(dú)地選自H、C1-C6烷基、支鏈的C3-C7烷基、C3-C8環(huán)烷基、其中烷基部分可被部分或完全氟化的氟代C1-C6烷基、羥基C2-C6烷基-、C1-C6烷氧基羰基-、-C(O)R8、R5C(O)(CH2)n-、(R4)2NC(O)-、(R4)2NC(O)C1-C6烷基-、R8C(O)N(R4)(CH2)q-、(R3)2NSO2-、(R4)2NSO2-、-(CH2)qN(R3)2和-(CH2)qN(R4)2；每個(gè)Z4獨(dú)立地并單獨(dú)地選自C1-C6烷基、支鏈的C3-7烷基、羥基C2-C6烷基-、C1-C6烷氧基C2-C6烷基-、(R4)2N-C2-C6烷基-、(R4)2N-C2-C6烷基N(R4)-C2-C6烷基-、(R4)2N-C2-C6烷基-O-C2-C6烷基-、(R4)2NC(O)C1-C6烷基-、羧基C1-C6烷基、C1-C6烷氧基羰基C1-C6烷基-、-C2-C6烷基N(R4)C(O)R8、R8-C(＝NR3)-、-SO2R8、-COR8、-(CH2)n-G1、-(CH2)n-G4、-(CH2)qO(CH2)n-G1、-(CH2)qO(CH2)n-G4、-(CH2)qNR3(CH2)n-G1、-(CH2)qNR3(CH2)n-G4、-(CH2)qNHC(O)(CH2)nR5、-(CH2)qC(O)NH(CH2)qR5、-(CH2)qC(O)R5、-(CH2)qOC(O)R5、-(CH2)qR5、-(CH2)qNR4(CH2)qR5和-(CH2)qO(CH2)qR5；在Z4含有烷基或亞烷基部分的情況下，所述部分可被一個(gè)或多個(gè)C1-C6烷基進(jìn)一步取代；每個(gè)R2選自H、R17-取代的芳基-、R17-取代的G1、R17-取代的G4、C1-C6烷基、支鏈的C3-C8烷基、R19取代的C3-C8環(huán)烷基-、其中烷基被完全或部分氟化的氟代C1-C6烷基、鹵素、氰基、C1-C6烷氧基-和其中烷基基團(tuán)被完全或部分氟化的氟代C1-C6烷氧基、羥基取代的C1-C6烷基-、羥基取代的支鏈的C3-C8烷基-、氰基取代的C1-C6烷基-、氰基取代的支鏈的C3-C8烷基-、(R3)2NC(O)C1-C6烷基-、(R3)2NC(O)C3-C8支鏈的烷基-；其中每個(gè)R3獨(dú)立地并單獨(dú)地選自H、C1-C6烷基、支鏈的C3-C7烷基和C3-C8環(huán)烷基；每個(gè)R4獨(dú)立地并單獨(dú)地選自H、C1-C6烷基、羥基C1-C6烷基-、二羥基C1-C6烷基-、C1-C6烷氧基C1-C6烷基-、支鏈的C3-C7烷基-、支鏈的羥基C1-C6烷基-、支鏈的C1-C6烷氧基C1-C6烷基-、支鏈的二羥基C1-C6烷基-、-(CH2)pN(R7)2、-(CH2)pR5、-(CH2)pC(O)N(R7)2、-(CH2)nC(O)R5、-(CH2)nC(O)OR3、R19取代的C3-C8環(huán)烷基-；每個(gè)R5獨(dú)立地并單獨(dú)地選自并且其中符號(hào)(##)是連接至各個(gè)含有R5基團(tuán)的R4、R7、R8、Z2、Z3或Z4基團(tuán)的位點(diǎn)；每個(gè)R6獨(dú)立地并單獨(dú)地選自C1-C6烷基、支鏈的C3-C7烷基、R19取代的C3-C8環(huán)烷基-、苯基、G1和G3；每個(gè)R7獨(dú)立地并單獨(dú)地選自H、C1-C6烷基、羥基C2-C6烷基-、二羥基C2-C6烷基-、C1-C6烷氧基C2-C6烷基-、支鏈的C3-C7烷基、支鏈的羥基C2-C6烷基-、支鏈的C1-C6烷氧基C2-C6烷基-、支鏈的二羥基C2-C6烷基-、-(CH2)qR5、-(CH2)nC(O)R5、-(CH2)nC(O)OR3、R19取代的C3-C8環(huán)烷基-和-(CH2)nR17；每個(gè)R8獨(dú)立地并單獨(dú)地選自C1-C6烷基、支鏈的C3-C7烷基、其中烷基部分被部分或完全氟化的氟代C1-C6烷基、R19取代的C3-C8環(huán)烷基-、苯基、苯基C1-C6烷基-、G1-、G1-C1-C6烷基-、G4-(CH2)n-、OH、C1-C6烷氧基、-N(R3)2、-N(R4)2和R5；每個(gè)R10獨(dú)立地并單獨(dú)地選自-CO2H、-CO2C1-C6烷基、-C(O)N(R4)2、OH、C1-C6烷氧基和-N(R4)2；每個(gè)R16獨(dú)立地并單獨(dú)地選自C1-C6烷基、支鏈的C3-C7烷基、R19取代的C3-C8環(huán)烷基-、鹵素、其中烷基部分可被部分或完全氟化的氟代C1-C6烷基-、氰基、羥基、C1-C6烷氧基、其中烷基部分可被部分或完全氟化的氟代C1-C6烷氧基-、-N(R3)2、-N(R4)2、R3取代的C2-C3炔基-和硝基；每個(gè)R17獨(dú)立地并單獨(dú)地選自H、C1-C6烷基、支鏈的C3-C7烷基、R19取代的C3-C8環(huán)烷基-、鹵素、其中烷基部分可被部分或完全氟化的氟代C1-C6烷基-、氰基、羥基、C1-C6烷氧基、其中烷基部分可被部分或完全氟化的氟代C1-C6烷氧基-、-N(R3)2、-N(R4)2和硝基；每個(gè)R19獨(dú)立地并單獨(dú)地選自H、OH和C1-C6烷基；每個(gè)R20獨(dú)立地并單獨(dú)地選自C1-C6烷基、支鏈的C3-C7烷基、R19取代的C3-C8環(huán)烷基-、鹵素、其中烷基部分可被部分或完全氟化的氟代C1-C6烷基-、氰基、羥基、C1-C6烷氧基、其中烷基部分可被部分或完全氟化的氟代C1-C6烷氧基-、-N(R3)2、-N(R4)2、-N(R3)C(O)R3、-C(O)N(R3)2和硝基；其中兩個(gè)R4基團(tuán)獨(dú)立地并單獨(dú)地選自C1-C6烷基、支鏈的C3-C6烷基、羥基烷基-和烷氧基烷基，并且連接到同一個(gè)氮雜原子，可以環(huán)化形成C3-C7雜環(huán)基環(huán)；k是0或1；n是0-6；p是1-4；q是2-6；r是0或1；t是1-3；v是1或2；x是0-2；上述化合物的立體異構(gòu)體、區(qū)域異構(gòu)體和互變異構(gòu)體；并且前提是A1是G3、咪唑基或吡唑基時(shí)，則X1不是直接的鍵。F2008800085252C00011.tif,F2008800085252C00021.tif,F2008800085252C00022.tif,F2008800085252C00023.tif,F2008800085252C00024.tif,F2008800085252C00025.tif,F2008800085252C00026.tif,F2008800085252C00027.tif,F2008800085252C00051.tif
2.權(quán)利要求1的化合物，其中其中符號(hào)(* * )表示連接到芳香環(huán)的位點(diǎn)。
3.權(quán)利要求2的化合物，所述化合物具有式lb 其中A是吡唑的任何可能的異構(gòu)體。
4.權(quán)利要求3的化合物，所述化合物具有式Ic
5.權(quán)利要求3的化合物，所述化合物具有式Id
6.權(quán)利要求3的化合物，所述化合物具有式Ie
7.權(quán)利要求2的化合物，所述化合物具有式If 其中A選自苯基、吡啶和嘧啶的任何可能的異構(gòu)體。
8.權(quán)利要求7的化合物，所述化合物具有式Ig
9.權(quán)利要求7的化合物，所述化合物具有式Ih
10.權(quán)利要求7的化合物，所述化合物具有式Ii
11.治療哺乳動(dòng)物疾病的方法，其中疾病的病因或惡化至少部分是由c-Abl激酶、 bcr-Abl 激酶、Flt-3 激酶、VEGFR-2 激酶突變體、c-Met、HER-l、HER-2、HER-3、HER_4、FGFR、 c-Kit、Raf激酶、PDGFRa激酶和PDGFR0激酶、其致癌形式、其異常融合蛋白及任何一種上 述激酶的多形體的激酶活性介導(dǎo)的，所述方法包括將權(quán)利要求1的化合物施用至哺乳動(dòng)物 的步驟。
12.權(quán)利要求11的方法，其中所述激酶選自bcr-Abl融合蛋白激酶p210、bcr-Abl融 合蛋白激酶P190、在p210的Abl激酶域帶有T315I看門(mén)突變的bcr-Abl融合蛋白激酶、在 P190的Abl激酶域帶有T315I看門(mén)突變的bcr-Abl融合蛋白激酶和任何上述激酶的其它 bcr-Abl多形體。
13.權(quán)利要求12的方法，其中所述bcr-Abl融合蛋白激酶p210具有SEQID NO :3和 SEQ ID NO :4 ；其中所述bcr-Abl融合蛋白激酶pl90具有SEQ ID NO :5 ；其中所述在Abl激 酶域帶有T315I突變的bcr-Abl融合蛋白激酶p210具有SEQ ID NO 6和SEQ IDN0 7 ；且 其中所述在Abl激酶域帶有T315I突變的bcr-Abl融合蛋白激酶pl90具有SEQ ID NO :8。
14.權(quán)利要求11的方法，其中所述激酶選自cKit蛋白激酶、PDGFR-a激酶和任何前述 激酶的任何融合蛋白、突變體和多形體。
15.權(quán)利要求11的方法，其中所述激酶選自B-RafV600E蛋白激酶和任何前述激酶的 任何融合蛋白、突變體和多形體。
16.權(quán)利要求11的方法，其中所述激酶選自c-Met蛋白激酶和任何前述激酶的任何融 合蛋白、突變體和多形體。
17.藥物組合物，所述藥物組合物包含權(quán)利要求1的化合物和藥學(xué)上可接受的載體，任 選地包含選自輔助劑、賦形劑、稀釋劑和穩(wěn)定劑的添加劑。
18.治療患有疾病的個(gè)體的方法，所述疾病選自癌癥、過(guò)度增生性疾病、代謝疾病、神 經(jīng)變性疾病或特征為血管發(fā)生的疾病，例如實(shí)體腫瘤、黑素瘤、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、卵巢癌、胰腺 癌、前列腺癌、肺癌、乳腺癌、腎癌、肝癌、宮頸癌、原發(fā)腫瘤部位的轉(zhuǎn)移、骨髓增生性癥病、慢 性髓細(xì)胞性白血病、白血病、乳頭狀甲狀腺癌、非小細(xì)胞肺癌、間皮瘤、嗜酸細(xì)胞增多綜合 征、胃腸道間質(zhì)腫瘤、結(jié)腸癌、以引起失明的過(guò)度增生為特征的眼病包括視網(wǎng)膜病、糖尿病 性視網(wǎng)膜病、年齡相關(guān)性黃斑變性和嗜酸細(xì)胞增多綜合征、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、哮喘、慢性阻塞性肺病、肥大細(xì)胞增多癥、肥大細(xì)胞白血病，或由c-Kit激酶、其致癌形式、其異常融合蛋 白及其多形體引起的疾病，所述方法包括將權(quán)利要求1的化合物施用至所述個(gè)體的步驟。
19.權(quán)利要求18的方法，將所述化合物通過(guò)選自口服、胃腸外、吸入和皮下的方法施用。
全文摘要
本發(fā)明的化合物用于治療哺乳動(dòng)物癌癥且特別是人類(lèi)癌癥，包括但不限于惡性黑素瘤、實(shí)體腫瘤、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肺癌、乳腺癌、腎癌、肝癌、宮頸癌、原發(fā)性腫瘤部位的轉(zhuǎn)移、骨髓增生性疾病、慢性髓細(xì)胞性白血病、白血病、乳頭狀甲狀腺癌、非小細(xì)胞肺癌、間皮瘤、嗜酸細(xì)胞增多綜合征、胃腸道間質(zhì)腫瘤、結(jié)腸癌、以引起失明的過(guò)度增生為特征的眼病包括多種視網(wǎng)膜病、糖尿病性視網(wǎng)膜病、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、哮喘、慢性阻塞性肺部病癥、肥大細(xì)胞增多癥、肥大細(xì)胞白血?。挥蒫-Abl激酶、其致癌形式、其異常融合蛋白及其多形體引起的疾??；由c-Kit激酶、其致癌形式、其異常融合蛋白及其多形體引起的疾?。缓陀蒫-Met激酶、其致癌形式、其異常融合蛋白及其多形體引起的疾??；或由Raf激酶、其致癌形式、其異常融合蛋白及其多形體引起的疾病。
文檔編號(hào)A61K31/519GK101878031SQ200880008525
公開(kāi)日2010年11月3日 申請(qǐng)日期2008年4月18日 優(yōu)先權(quán)日2007年4月20日
發(fā)明者D·L·弗林, M·D·考夫曼, P·A·派提羅 申請(qǐng)人:迪賽孚爾制藥有限公司