專利名稱：兼具疏水和偶極協(xié)同作用的吸附樹脂制備方法及在長(zhǎng)春花總生物堿純化中的應(yīng)用的制作方法
兼具i^K^偶極協(xié)同作用的吸,謝備雄及在長(zhǎng)春花姓物鵬化中的卿技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中^W^成分的提取和分離技術(shù)領(lǐng)域，特別是長(zhǎng)春花總生物堿的提取方法，及i^^法中所〗頓的吸,脂的制備。背景技術(shù)1長(zhǎng)春花(CatharanthusroseusL.)為夾徹話斗長(zhǎng)春^ja植物。原f^3^H，我國(guó) 海南、貴州一帶有栽培。長(zhǎng)春花作為一種傳統(tǒng)的民間藥用植物，常Mffl來(lái)治療^、腹瀉、糖尿 病、高血壓、i5M及何絲氏病。近代研究表明，長(zhǎng)春花中含有多種生物堿，而且部分生物堿 具有明顯的拋中瘤活性，因而長(zhǎng)春花成為國(guó)內(nèi)夕卜顧的拋中瘤植物資源。長(zhǎng)^(vinblastine)是從長(zhǎng)春花中提取的一種具有明顯的拋中瘤活性的二聚(l引哚類生物堿。它 對(duì)何綠病及非小細(xì)胞倒中瘤、惡性淋EB中瘤雜顯著療效?？嶗胍褟V泛用于臨床30辨， 迄今仍駐要的拋中瘤用藥之一。長(zhǎng)春質(zhì)喊cathearanthine清一定降血糖作用，文多靈(vindoline)W,和利尿的功效。更為， 的是長(zhǎng)春質(zhì)繊口文多靈齢成長(zhǎng)鎌的前體。長(zhǎng)春堿、長(zhǎng)春質(zhì)堿和文多靈的分子結(jié)構(gòu)如下式1長(zhǎng)# 的^結(jié)構(gòu) 式3文多靈的分子結(jié)構(gòu)長(zhǎng)春花總生物鵬長(zhǎng)春花中重要的吲哚類生物堿的總稱，主要包括長(zhǎng)# 、長(zhǎng)春質(zhì)繊文多 靈等具有顯著的藥用價(jià)值的生物堿。目前，長(zhǎng)春花總生物堿的獲得主要是從長(zhǎng)春花植株中提取。然而，長(zhǎng)春花總生物 長(zhǎng)春花中#*極低，且長(zhǎng)春花植株中其它雜質(zhì)種類多、數(shù)量大、結(jié)構(gòu)未 知，因此粒一種高效、簡(jiǎn)捷的長(zhǎng)春花總生物堿的提取方法顯得尤為重要?，F(xiàn)有的關(guān)^:春花總生物堿的提t(yī)e魏翻幌取法和柱色譜法。李曉蕾，任其龍等，砌中 瘤藥長(zhǎng) 的提鵬化與分析方法的研究概況中國(guó)醫(yī)藥X^志2004年第35巻第4期其中， 翻IJ靴法步驟繁瑣，糊大量激U，柱色譜法則多用苯、石油醚、氯仿韓機(jī)^MM，艦 得產(chǎn)品，不高，制備量小，不適合擴(kuò)^fe^。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是解決現(xiàn)有長(zhǎng)春花總生物鵬取技術(shù)中存在成本高，耗用大量有 機(jī)^R]的問題，麟一種兼具船柳偶極協(xié)同作用的吸附樹月識(shí)j備方法及在長(zhǎng)春花總生物鵬化 中的應(yīng)用。本發(fā)明根據(jù)長(zhǎng)春花植株中長(zhǎng)春花總生物Wl其它雜質(zhì)的含量待點(diǎn)，利用生物WI雜質(zhì)間的極 性不同，合成了一種兼具M(jìn)7j^l偶極助、同作用的吸附樹脂，fflil調(diào)控樹月諧架中的tt部分和弱 極性部分的比例，使吸附對(duì)脂頓長(zhǎng) 、長(zhǎng)春質(zhì)堿、文多靈和對(duì)長(zhǎng)春花中其它雜質(zhì)的吸附能力 上體現(xiàn)出較強(qiáng)的選擇性，從而利用梯度洗脫的方法，只經(jīng)一步"吸附一欲脫"的工藝流程，即可 除去雜質(zhì)，制備高鵬長(zhǎng)春花總生物堿。本發(fā)明麟的兼具疏冰作用和偶極作用的吸附樹脂的制備方法，艦以下步驟實(shí)現(xiàn) 第一、常溫下，將分散劑聚乙烯麟解于水中，1^量濃度為0.5%~2%的7以"@;第二、由丙烯酸甲酯和二乙烯苯Mm合反應(yīng)的單體相，其中丙烯酸甲酯的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為單體相總質(zhì)量的30~50%,，為二乙烯苯；同時(shí)，量比為2: 1的甲，長(zhǎng)鏈蹤烴作混合致孔劑，致孔劑總量為單m目總質(zhì)量的100%~150% ，以偶it:異丁腈作引發(fā)劑，其用量為單體相總質(zhì)量的1~3%，將i^a分混合均勻后配成油相；第三、g開始前，先將zKM到入三口瓶中，并加熱至30-50'C后，將油相加入三口瓶中，水 相和油相的體積比為3:1;開動(dòng)攪拌，由t穀峽調(diào)節(jié)^I度，至油滴尺寸在0.3-1.0mm后開始升 溫，魅60-8(TC反應(yīng)2^6小時(shí)，再繼續(xù)升魅85。C鵬6小時(shí)，停ihS應(yīng)，靜SM^溫，最后經(jīng) 過濾、洗滌艦得到所需吸附樹脂。i^fc^法制備的吸附樹脂的應(yīng)用，用于從長(zhǎng)春花全株中制備高純度長(zhǎng)春花總生物堿，具體歩驟如下第一步、將長(zhǎng)春花草粉溶于0.5°/".5%的硫m7jC溶液中，其中長(zhǎng)春花草粉和硫^*溶液的質(zhì) 量比為1:3-1:7， 6(TC回流2 3小時(shí)，重復(fù)提取2-3次；第二步、將戰(zhàn)提取艦濾，離A得到澄清水溶液，以此澄清水溶液作上柱液；第三步、將戰(zhàn)方法制備的吸附樹月im吸附柱中，吸附ttS:徑與柱長(zhǎng)比為1:5-1:20;室溫下， 將上柱液以0.5 1.5BV/小時(shí)的流^I3iM脂吸附柱；第四步、水洗樹脂吸附輕流出液為中性，分別用#^只百始量為40~50%， 70~80%的乙1^ 水溶液，、m，將70~80%的 液,、 千燥即得高，的長(zhǎng)春花總生物堿(包括長(zhǎng)#^、 長(zhǎng)春質(zhì)堿和文多靈)。以上千燥制得的固體中長(zhǎng)春花總生物堿的質(zhì)量百始SiiilJ 15~30% 。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和積極鄉(xiāng)本發(fā)明根 :春堿、長(zhǎng)春質(zhì)堿和文多靈的結(jié)構(gòu)特征，利用長(zhǎng)春花植株中長(zhǎng)春花總生物堿和雜 質(zhì)間的極性不同，合成了--種兼具i^7jC作用和偶極作用的大 L吸附樹脂，該樹脂 保持了傳統(tǒng)大孔吸Wm脂的剛性骨架，因而有良好的^ffl強(qiáng)度，同時(shí)調(diào)控樹It^架中的敵ic作用和偶極作用， S5iW脂在吸附過程中疏水和偶極的協(xié)同作用，提高了吸附樹脂對(duì)長(zhǎng)春堿、長(zhǎng)春質(zhì)堿、文多靈和其它雜質(zhì)的吸附選擇性，從而利用低濃度的乙醇水溶激m除去雜質(zhì)、高濃度的乙醇7K溶^^M 獲得長(zhǎng)春花總生物堿。本發(fā)明以長(zhǎng)春花全草為原料，以酸水為提取溶劑，im過"吸附~~脫附" 一步簡(jiǎn)單工藝，即可從長(zhǎng)春皿取液中分離純化得到高純度的長(zhǎng)春花總生物MJi取物。產(chǎn)品中長(zhǎng) 、長(zhǎng)春質(zhì)繊文多^H種生物堿的總賴可達(dá)15 30%。本發(fā)明工藝簡(jiǎn)單，不f頓毒性有機(jī)溶齊U,投資^*低，易于:oik化大頓。 ^!ffe例l、吸Pf粥脂的制備在常溫下，將聚乙烯^#解于水中，配 量分?jǐn)?shù)為0.5%的水溶液4508，于1000ml三口瓶 中水浴加熱至4(TC;以24g丙烯酸甲酯和36g 二乙烯苯的混含吻為總S^單體，以60g甲苯和30g 長(zhǎng)^g的混^/作混合致孔劑，以0.60g偶氮二異丁腈為引發(fā)劑，混合均勻后加AH口瓶中，開 始離，調(diào)節(jié)油珠尺寸在0.3-1.0111111之間，經(jīng)懸浮聚合，以l。C/min的升^ilS緩漫升驢70。C 反應(yīng)4小時(shí)，再繼續(xù)升溫至85。C反應(yīng)6小時(shí)，停止反應(yīng)，靜置魏溫，經(jīng)過濾、洗滌鵬后，制 備出所需的吸附樹脂。實(shí)施例2在常溫下，將聚乙烯,解于水中，配^M量分?jǐn)?shù)為l。/。的水溶液450g，于1000ml三口瓶中 水浴加熱至40。C;以30g丙烯酸甲酯和45g 二乙烯苯的混^tl為總反應(yīng)單體，以50g甲苯和25g 長(zhǎng)^g的混激作混鋪吼劑，以0.85g偶t異丁腈為引發(fā)劑，混合均勻后加AH口瓶中，開始,，調(diào)節(jié)油珠尺寸在03-1.0mm之間，經(jīng)懸浮聚合，以rC/min的升^lg緩t新魅70°C 鵬4小時(shí)，M續(xù)升^85。C鵬6小時(shí)，停止反應(yīng)，靜SMS溫，^31濾、洗滌處aig，制 備出所需的吸附樹脂。 魏例3在常溫下，將聚乙烯,解于水中，K^量分?jǐn)?shù)為1.5。/。的水溶液4.5kg，于10L三口瓶中水 浴加熱至4(TC;以0.35kg丙烯酸甲酯和0.35kg二乙烯苯的混^/為總反應(yīng)單體，以0.50kg甲苯 和0.25kg液獵的混^t/做混賴吼劑，以0.008kg偶m^異丁腈為引發(fā)劑，混合均勻后加AH口 瓶中，開始,，調(diào)節(jié)油珠尺寸在0.3-1.0111111之間，經(jīng)懸浮聚合，以rC/min的升^g緩t驕溫 至7(TC鵬4小時(shí)，再繼續(xù)升MM85'C反應(yīng)6小時(shí)，停ib&應(yīng)，靜BM^溫，敏濾、洗滌處理 后，制備出所需的吸W爛脂。實(shí)施例4、吸PMW脂的自取20g長(zhǎng)春花草粉，溶于100ml 1。/Q的硫^7jC溶液60。C加熱回流2小時(shí)，提取鵬離心、過^lt尋 澄清水溶液。將得到的水溶mA^"，吸Pf嫩脂的樹脂柱(柱長(zhǎng)30cm^內(nèi)徑18mm， ^W濕樹 月旨40ml)，吸附皿lBV/h，吸附^jg， 7JC中性，先后用40% (v/v)和80% (v/v)乙醇水 溶液洗脫，流速0,5BV/h ，收集80%乙 時(shí)的解析液，Mffi蒸餾，真空千燥即得固#$1取物。 經(jīng)Waters484高效液相色譜儀檢測(cè)，長(zhǎng)春花總生物堿的離可達(dá)24.5%。鄉(xiāng)例5取50g長(zhǎng)春花草粉，溶于20011110.5%的硫^7_1<:溶液60匸加熱回流3小時(shí)，提取,離心、過濾 f驟清水溶液。^t導(dǎo)到的水溶MA^U^&樹脂的樹脂柱(柱長(zhǎng)30cnu內(nèi)徑18mm， ^t濕樹脂 40ml),吸附鵬0,5BV/h，吸附^5Ug， 7JC中性，先后用40% (v/v)和80% (v/v)乙醇水 溶液洗脫，流速0.58￥/11, ,80%乙0 時(shí)的解析液，Mffi蒸餾，真空千燥即得固,取物。 經(jīng)Watere484高$夂液相色譜儀檢測(cè)，長(zhǎng)春花類總生物堿的，可達(dá)25.2%。實(shí)施例6取250g長(zhǎng)春花草粉，溶于1000ml 1.5。/。的硫^zK溶液60。C加熱回流2小時(shí)，提取,離心、過 ^t清7jC溶液。將得到的水溶MA^J^樹脂的樹脂柱(柱長(zhǎng)40cn^內(nèi)徑40mm， ^W濕樹 月旨400ml)，吸附皿lBV/h，吸附^jg，水,中性，先后用40% (v/v)和80% (v/v)乙醇 水溶液 ， ,^0.5BV/h ，收集80%乙酔 時(shí)的|^斤液，m蒸餾，真空千噪即得固#^取 物。經(jīng)Waters484高發(fā)液相色譜儀檢測(cè)，長(zhǎng)春花類總生物堿的,可達(dá)25.3%。實(shí)施例7取350g長(zhǎng)春花草粉，溶于1500ml 1。/。的硫^7jC溶液60。C加熱回流2小時(shí),提取^^圣離心、過濾 f^f清7K溶液。將得到的7jC溶MA^W戰(zhàn)樹脂的樹脂柱(柱長(zhǎng)40ci^內(nèi)徑40mm，裝有濕樹脂 400ml)，吸附速度1.5BV/h，吸附^后，水、^M中性，先后用40% (v/v)和80% (v/v)乙醇水 溶液洗脫，流速0.58￥/11 ，隨80%乙醇洗脫時(shí)的解析液，Mffi蒸餾，真空千燥即得固,取物。 經(jīng)Waters484高效液相色譜儀檢測(cè)，長(zhǎng)春花類總生物堿的，可達(dá)24.8%。
權(quán)利要求
1. 一種兼具疏水作用和偶極作用的吸附樹脂的制備方法，其特征在于，通過以下步驟實(shí)現(xiàn)第一、常溫下，將分散劑聚乙烯醇溶解于水中，配成質(zhì)量濃度為0.5％-2％的水相；第二、由丙烯酸甲酯和二乙烯苯組成聚合反應(yīng)的單體相，其中丙烯酸甲酯的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為單體相總質(zhì)量的30～50％，余量為二乙烯苯；同時(shí)取質(zhì)量比為2∶1的甲苯和長(zhǎng)鏈烷烴作混合致孔劑，致孔劑總量為單體相總質(zhì)量的100％～150％，以偶氮二異丁腈作引發(fā)劑，其用量為單體相總質(zhì)量的1～3％，將上述組分混合均勻后配成油相；第三、反應(yīng)開始前，先將水相倒入三口瓶中，并加熱至30-50℃后，將油相加入三口瓶中，水相和油相的體積比為3∶1；開動(dòng)攪拌，由慢到快調(diào)節(jié)攪拌速度，至油滴尺寸在0.3-1.0mm后開始升溫，先至60-80℃反應(yīng)2-6小時(shí)，再繼續(xù)升溫至85℃反應(yīng)6小時(shí)，停止反應(yīng)，靜置至室溫，最后經(jīng)過濾、洗滌處理得到所需吸附樹脂。
2、 根據(jù)權(quán)利要求lff^方法制備的吸附樹脂的鵬，用于從長(zhǎng)春花全株中制備高離長(zhǎng)春花 總生物堿，具體步驟如下第一步、將長(zhǎng)春花草粉溶于0.5°/".5%的硫^7jC溶液中，其中長(zhǎng)春花，和硫酸水溶液的質(zhì) 量比為1:3-1:7， 60。C回流2 3小時(shí)，重復(fù)提取2-3次；第二步、將J^il取M;濾，離A滯到澄清水溶液，以此澄清水溶液作上柱液；第三步、將權(quán)利要求1所述方法制備的吸附樹脂裝入吸附柱中，吸附柱直徑與柱長(zhǎng)比為 1:5-1:20;室溫下，將上柱液以0.5 1.5BV/小時(shí)的、^iM^月,及Pf做；第四步、水洗樹脂吸附輕流出液為中性，分別用#^百^*為40~50%， 7(^80%的乙, 水溶液，^m，將70~80%的 液 、 M千燥即得高i艘的長(zhǎng)春花總生物堿。
3、 根據(jù)權(quán)利要求2臓的鵬，辦征在^P燥制得的固體中長(zhǎng)春花總生物堿的質(zhì)量百始 S!i5U 15~30% 。
全文摘要
一種兼具疏水和偶極協(xié)同作用的吸附樹脂制備方法及在長(zhǎng)春花總生物堿純化中的應(yīng)用。本發(fā)明是將聚乙烯醇溶解于水中配成水相；以丙烯酸甲酯和二乙烯苯組成聚合反應(yīng)的單體，取質(zhì)量比為2∶1的甲苯和長(zhǎng)鏈烷烴作混合致孔劑，以偶氮二異丁腈作引發(fā)劑，配成油相；按水相和油相體積比為3∶1混合，加熱，經(jīng)聚合反應(yīng)制得所需的吸附樹脂。將該吸附樹脂裝入吸附柱中，將長(zhǎng)春花草粉溶于硫酸水溶液中得到的澄清水溶液經(jīng)吸附柱吸附，再用乙醇-水溶液分步洗脫，用低濃度的乙醇水溶液除去雜質(zhì)、高濃度的乙醇水溶液洗脫獲得長(zhǎng)春花總生物堿固體，長(zhǎng)春花總生物堿的質(zhì)量百分含量可達(dá)到15～30％。本發(fā)明工藝簡(jiǎn)單，不使用毒性有機(jī)溶劑，投資成本低，易于工業(yè)化大生成。
文檔編號(hào)A61K36/24GK101264443SQ200810052878
公開日2008年9月17日 申請(qǐng)日期2008年4月25日 優(yōu)先權(quán)日2008年4月25日
發(fā)明者施榮富, 李立坤, 王春紅 申請(qǐng)人:南開大學(xué)