專利名稱：：含1,2,3-噻二唑環(huán)并具有抗乙肝病毒活性的丙烯酰胺類化合物的制作方法含1,2,3-噻二唑環(huán)并具有抗乙肝病毒活性的丙烯酰胺類化合物
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，特別涉及一種具有抗乙肝病毒活性的含1,2，3-噻二唑環(huán)的丙烯酰胺化合物。
背景技術(shù)：
：乙型肝炎病毒(HepatitisBVirus;HBV)是一個相當(dāng)大的公眾健康問題，因為此病毒有引起急性和慢性感染的能力。慢性HBV感染可導(dǎo)致肝硬化和原發(fā)性肝細(xì)胞癌。盡管乙肝病毒疫苗已經(jīng)問世多年，然而目前還沒有能成功的控制慢性HBV感染的有效治療手段。全世界仍有3億人口感染HBV，中國現(xiàn)作為世界第一的乙肝大國約有1.2億人攜帶乙肝病毒，其中慢性乙肝病人3000萬，他們無法從現(xiàn)有的商品疫苗中受益?，F(xiàn)有的HBV治療手段功效還不夠，或者是有嚴(yán)重的毒副作用，如公認(rèn)有明確療效的干擾素僅有25%至40%的有效率，同時還有10%至40%的病人產(chǎn)生嚴(yán)重的副作用。核苷類似物如拉米夫定等，必須有相當(dāng)長的療程，又易發(fā)生特定的耐藥病毒變異，而且存在治療費用高昂的缺點。文獻(xiàn)中報道幾類具有強的抗培養(yǎng)液中的乙肝病毒的活性的非核苷類的丙烯酰胺類似物。特別是N-(N-苯甲酰基-L-苯丙氨?；?-O-乙?；?L-苯丙氨醇(梁光義等，CN02160309.X)和2-苯甲酰胺基-3-氯-3-苯基-丙烯酰胺(Perni,etal.，Bioorg.&Med.Chem.Lett"10,2687,2000)，它們具有類似的骨架結(jié)構(gòu)，對乙肝病毒具有強烈的抑制作用。本發(fā)明人曾報道了一系列(x-取代-I，2，3-噻二唑乙酰胺類化合物具有抗煙草花葉病毒活性(李正名等，CN01136684.2)和一定的抗乙肝病毒活性(Zhao,etal.,Bioorg.&Med.Chem.Lett.，16，6107，2006)。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種含l，2，3-噻二唑環(huán)并具有抗乙肝病毒活性的丙烯酰胺化合物。該類化合物是非核苷類化合物，具有制備簡單，成本低廉，抑制乙型肝炎病毒進(jìn)行DNA復(fù)制效果明顯等特點，制備藥物前景廣闊。本發(fā)明提供的含1,2,3-噻二唑環(huán)并具有抗乙肝病毒活性的丙烯酰胺化合物是具有如下通式(I)的化合物其中，X是氫或鹵素；Ri是氨基、l-6碳烷胺基、芳胺基、嗎啉基或哌啶基；R3是4-甲基-l，2,3-噻二唑-5-基時，R2是苯基、取代苯基；R2是4-甲基-l，2，3-噻二唑-5-基時，R3是苯基、取代苯基；苯環(huán)上的取代基為l-6碳烷基、l-6碳院氧基、l-6碳烷胺基、l-6碳垸硫基、鹵素、羥基、氰基、硝基、酯基、羧基，取代基數(shù)量為1~5。本發(fā)明化合物對乙型肝炎病毒進(jìn)行DNA復(fù)制和HBsAg、HbeAg有較好的抑制作用。本發(fā)明進(jìn)一步優(yōu)選X優(yōu)選鹵素；Ri優(yōu)選嗎啉基、哌啶基；R3是4-甲基-l,2，3-噻二唑-5-基時，R2優(yōu)選苯基、氯苯基、溴苯基；R2是4-甲基-l，2，3-噻二唑-5-基時，R3優(yōu)選苯基、氯苯基、溴苯基。。本發(fā)明化合物(I)制備路線如下(1)R3是4-甲基-l,2,3-噻二唑-5-基取代時:。。？&飛/"r2"Vb，&q'本發(fā)明化合物(I)具體制備方法經(jīng)以下步驟完成1)將N-(4-甲基-l，2,3-噻二唑-5-甲?；?甘氨酸、NaAc、苯甲醛和乙酸酐，摩爾比為1:1~2:1~2:1~5，在50-150°C的超聲波中反應(yīng)1~10小時，加入乙醇，濾出固體，所得固體重結(jié)晶，得到4-取代苯甲叉-2-(4-甲基-1,2,3-噻二唑-5-基)-5(4印-噁唑酮。2)上步得到的4-取代苯甲叉-2-(4-甲基-l,2，3-噻二唑-5-基)-5(4H)-噁唑酮和哌啶，摩爾比為1:12;在CHCl3中攪拌過夜，脫去溶劑后減壓柱層析，得產(chǎn)品N-(l-取代胺基甲酰基-2-苯基-乙烯基)-4-甲基-l,2,3-噻二唑-5-甲酰胺。3)上步得到的N-(l-取代胺基甲?；?2-苯基-乙烯基)-4-甲基-l,2，3-噻二唑-5-甲酰胺，在CHCl3中，-15-0匸下，加入等摩爾的液溴，攪拌1~10小時，加入CaC03攪拌過夜，減壓柱層析得目標(biāo)化合物(I)。(2)R2是4-甲基-l,2,3-噻二唑-5-基取代時:本發(fā)明化合物(I)的具體制備方法經(jīng)以下步驟完成.-1)馬尿酸、4-甲基-l,2，3-噻二唑-5-甲醛、無水NaAc和醋酸酐，摩爾比為1:12:12:卜5，在95-100。C保持卜10h，降溫到80。C后，加入3ml乙醇，冷卻，過濾，用乙醇和水洗滌，得磚紅色固體，4-(4-甲基-l,2,3-噻二唑-5-甲叉基)-2-苯基-5(411)-噁唑酮。2)上步得到的4-(4-甲基-l,2，3-噻二唑-5-甲叉基)-2-苯基-5(4H)-噁唑酮，在CHCl3中，-5-10'(:下，緩慢滴加取代胺的CHCl3溶液，摩爾比為1:12，攪拌反應(yīng)卜10h，減壓蒸除溶劑，干燥得產(chǎn)品N-(l-取代胺基甲?；?2-(4-甲基-l，2,3-噻二唑-5-基)-乙烯基)-苯甲酰胺。3)1.9611111101上步得到的]^(1-取代胺基甲?；?2-(4-甲基-1，2,3-噻二唑-5-基)-乙烯基)苯甲酰胺，在CHCl3中，-15-0卩下，加入等摩爾的液溴，攪拌1~10小時，加入CaC03攪拌過夜，減壓柱層析得目標(biāo)化合物(I)。本發(fā)明提供的結(jié)構(gòu)式(I)化合物是具有抗乙肝病毒活性的化合物，在抗乙型肝炎病毒復(fù)制的檢驗中顯示出相當(dāng)高的活性。本發(fā)明化合物進(jìn)一步可用于制造治療或預(yù)防HBV的藥物。具體實施方式實施例1N-(l-取代胺基甲?；?2-氯(溴)-2-取代苯基-乙烯基)-4-甲基-l,2,3-噻二唑-5-甲酰胺(1)4-苯甲叉-2-(4-甲基-1,2,3-噻二唑-5-基)-5(4H)-噁唑酮的合成將8.00gC0.038mo1)的N-(4-甲基-l,2,3-噻二唑-5-甲酰基)甘氨酸、3.28g(0.040mol)的NaAc研細(xì)加入100ml錐形瓶中，一次性加入0.040mol的苯甲醛和12.72gC0.120mo1)的乙酸酐，在70°C的超聲波中反應(yīng)2小時，加入16ml乙醇搖晃均勻冷凍過夜。次日濾出固體，用300ml氯仿溶解，用20mlX5的蒸餾水洗滌，將有機層低壓蒸除溶劑，所得固體重結(jié)晶得產(chǎn)品5.794g，產(chǎn)率53.7%，熔點167國169。C，iHNMR(S):3.169(s,3H,4-methyl國thiadiazole),7.416(s，1H,-CH=)，7.515-8.170(m,5H,Ph)(2)N-(l-取代胺基甲?；?2-苯基-乙烯基)-4-甲基-l，2,3-噻二唑-5-甲酰胺的合成在25ml的錐形瓶中依次加入2.2mmol4-取代苯甲叉-2-(4-甲基-l，2，3-噻二唑-5陽基)-5(411)-噁唑酮，10mlCHCl3和0.196g(2.3mmo1)哌啶，攪拌過夜。次日脫去溶劑后用石油醚乙酸乙酯(5:1)減壓柱層析，得產(chǎn)品。同樣方法可以合成本發(fā)明其它中間體。其物化數(shù)據(jù)和核磁數(shù)據(jù)見表1和表2。表l:中間體的物化數(shù)據(jù)<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>表2:中間體的核磁數(shù)據(jù)<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>(3)N-(l-取代胺基甲?；?2-鹵代-2-苯基-乙烯基)-4-甲基-l,2,3-噻二唑-5-甲酰胺的合成在25ml錐形瓶中加入溶于15mlCHC13的1.4mmol^(1-取代胺基甲?；?2-苯基-乙烯基)-4-甲基-l,2，3-噻二唑-5-甲酰胺，在冰鹽浴下攪拌，然后加入液溴0.225g(1.4mmol、0.072ml)，室溫攪拌3小時，加入0.07g(0.7mmol)CaC03室溫攪拌過夜，減壓柱層析得產(chǎn)品。同樣方法，可以合成本發(fā)明的其它化合物。其物化數(shù)據(jù)和核磁數(shù)據(jù)見表3和表4。表3式I化合物的物化數(shù)據(jù)(R3是4-甲基-l,2，3-噻二唑-5-基時)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>實施例2:N-(l-取代胺基甲?；?2-氯(溴or氫)-2-(5-取代-4-甲基-l,2，3-噻二唑)-乙烯基)-苯甲酰胺的合成(1)4-(4-甲基-l，2，3-噻二唑-5-甲叉基)-2-苯基-5(4H)-噁唑酮的合成在50ml圓底燒瓶安裝上回流冷凝管、干燥管，一次性加入3.358g(0.01787mol)馬尿酸、2.323g(0.01787mol)4-甲基-l，2，3-噻二唑-5-甲醛、1.538g(0.01787mol)無水NaAc和5.474g(0.05361mol)醋酸酐。加熱到95-100。C保持2h。然后降溫到80。C后，一次性加入3ml乙醇，冷卻，過濾出沉淀，用10ml冰乙醇洗滌2次，5ml熱水洗滌3次，得磚紅色固體，干燥稱重得2.812g，產(chǎn)率57%，熔點233-235。C，'HNMR(S):2.903(s，3H，4-methyl-thiadiazole)，7.399(s,1H，隱CH-),7.567-8.299(m,5H，Ph)。(2)N-(l-取代胺基甲酰基-2-(4-甲基-l,2,3-噻二唑-5-基)-乙烯基)-苯甲酰胺的合成在50ml的錐形瓶中加入1.4gC0.00512mo1)4-(4-甲基-l，2，3-噻二唑-5-甲叉基)-2-苯基-5(4H)-噁唑酮和20mlCHCl3，在冰浴冷卻下，緩慢滴加10mlCHCl3和0.00563mol取代胺的混合物，加完后室溫，攪拌反應(yīng)1.5h，靜置過夜。減壓蒸除溶劑，干燥得產(chǎn)品。同樣方法可以合成本發(fā)明其它中間體。其物化數(shù)據(jù)和核磁數(shù)據(jù)見表5和表6。表5:中間體的物化數(shù)據(jù)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>酰胺的合成在25ml的錐形瓶中加入1.96mmolN-(l-取代胺基甲?；?2-(4-甲基-l,2,3-噻二唑-5-基)-乙烯基)-苯甲酰胺和20mlCHC13，在冰鹽浴攪拌下一次性加入0.32g(2mmol、0.1ml)Br2，攪拌0.5h，加入O.lg(lmmol)CaC03過夜攪拌，減壓蒸除溶劑，減壓柱層析，用甲醇重結(jié)晶得產(chǎn)品。同樣方法，可以合成本發(fā)明的其它化合物。其物化數(shù)據(jù)和核磁數(shù)據(jù)見表7和表8。表7:式I化合物的物化數(shù)據(jù)(R2是4-甲基-l,2,3-噻二唑-5-基，R3是苯環(huán)時)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>實施例3抗乙肝病毒活性測試材料及方法1.細(xì)胞株2.2.15細(xì)胞(乙型肝炎病毒)。2.樣品處理樣品臨用前溶于DMSO配成適當(dāng)濃度，檢測時用培養(yǎng)液作3倍稀釋，共s個稀釋度。3.陽性對照藥拉米夫定(3TC)，由葛蘭素威康公司生產(chǎn)。4.主要試劑乙肝病毒e抗原及s抗原放免檢測試劑盒，北京北方生物技術(shù)研究所提供；a32PdCTP，中國福瑞生物工程有限公司提供；5.測試方法2.2.15細(xì)胞種96孔培養(yǎng)板，36小時后按以上稀釋度分別加入樣品及陽性對照藥，同時設(shè)細(xì)胞對照孔，加藥后96小時后分別更換含不同稀釋濃度樣品的培養(yǎng)液，于加藥后第8天分別收集細(xì)胞上清及2.2.15細(xì)胞，采用RIA法檢測細(xì)胞上清中HBsAg、HBeAg的分泌量，點雜交的方法檢測細(xì)胞中HBVDNA復(fù)制程度，分別計算ICs。及SI。測試結(jié)果及結(jié)論見表9。表9抗乙型肝炎病毒測試結(jié)果樣品編號TC50^g/ml)HBsAgHBeAgDNA復(fù)制ic50(pg/ml)SIic50(jig/ml)SIic50(|ig/ml)SI1-1111.11-一一---1-486.23-一--10.48.291-517.81--一-3.594.961-664.15--12.265.23--1-16231.12------1-11192.45----9.0021.381-12333.33----30.5110.921-1386.23-一----1-14577.35----3TC961.50----14.8064.97注(l)表中"-"表示樣品在最大無毒劑量無抗病毒活性。(2)TC5():對細(xì)胞半數(shù)有毒濃度；IC5():對病毒半數(shù)抑制濃度；SI:選擇指數(shù)，SI=TC5Q/IC50。10權(quán)利要求1、一種含1，2，3-噻二唑環(huán)并具有抗乙肝病毒活性的丙烯酰胺化合物，其特征在于它是具有如下通式(I)的化合物id="icf0001"file="S2008100528125C00011.gif"wi="18"he="29"top="57"left="105"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="no"/>其中，X是氫或鹵素；R1是氨基、1-6碳烷胺基、芳胺基、嗎啉基或哌啶基；R3是4-甲基-1，2，3-噻二唑-5-基時，R2是苯基、取代苯基；R2是4-甲基-1，2，3-噻二唑-5-基時，R3是苯基、取代苯基；苯環(huán)上的取代基為1-6碳烷基、1-6碳烷氧基、1-6碳烷胺基、1-6碳烷硫基、鹵素、羥基、氰基、硝基、酯基、羧基，取代基數(shù)量為1～5。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于所述的通式(I)的化合物屮X優(yōu)選卣素；Ri優(yōu)選嗎啉基、哌啶基；R3是4-甲基-l，2,3-噻二唑-5-基時，R2優(yōu)選苯基、氯苯基、溴苯基；R2是4-甲基-l,2,3-噻二唑-5-基時，R3優(yōu)選苯基、氯苯基、溴苯基。3、權(quán)利要求1所述的含1,2,3-噻二唑環(huán)并具有抗乙肝病毒活性的丙烯酰胺化合物的應(yīng)用，其特征在于對乙型肝炎病毒進(jìn)行DNA復(fù)制和HBsAg、HBeAg的抑制作用，并將其用作制備乙肝病治療的藥物。全文摘要本發(fā)明涉及含1，2，3-噻二唑環(huán)并具有抗乙肝病毒活性的丙烯酰胺化合物及其應(yīng)用，它是如右結(jié)構(gòu)式為(I)的化合物，其中X是氫或鹵素；R₁是氨基、1-6碳烷基胺基、芳胺基、嗎啉基或哌啶基；R₃是4-甲基-1，2，3-噻二唑-5-基時，R₂是苯基、取代苯基；R₂是4-甲基-1，2，3-噻二唑-5-基時，R₃是苯基、取代苯基。本發(fā)明提供的化合物是具有抗乙肝病毒活性的化合物，在抗乙型肝炎病毒復(fù)制的檢驗中顯示出相當(dāng)高的活性。本發(fā)明化合物進(jìn)一步可用于制造治療和/或預(yù)防乙型肝炎的藥物。文檔編號A61K31/4523GK101260091SQ20081005281公開日2008年9月10日申請日期2008年4月18日優(yōu)先權(quán)日2008年4月18日發(fā)明者劉征驍,李正名,李玉新,趙衛(wèi)光申請人:南開大學(xué)