專利名稱：：從生物流體中去除傳染性海綿狀腦病病原體的正交方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本公開內(nèi)容涉及生物流體及其純化方法。更具體地說，本公開內(nèi)容涉及從生物流體中正交去除傳染性海綿狀腦病病原體的方法。站旦冃足傳染性海綿狀腦病(TSEs)也叫朊病毒病，是一類罕見的退行性腦病，其特征在于使腦部呈現(xiàn)出"海綿狀"外觀的微小空洞。Creutzfeldt-Jakob病(CJD)是最著名的人TSEs。這是一種罕見的癡呆，每年在每一百萬人中有約一人感染。其它人TSEs包括庫魯病，致命性家族性失眠癥(FFI)禾BGerstmann-Straussler-Scheinker病(GSS)。庫魯病發(fā)生在新幾內(nèi)亞巴布亞島的與世隔絕部落的人中，現(xiàn)在幾乎已經(jīng)消失。FFI和GSS是極罕見的遺傳性疾病，全世界僅有少數(shù)家族患有此病。被稱為變異型CJD(vCJD)的新型CJD在1996年有描述，現(xiàn)已在英國及數(shù)個其它歐洲國家中出現(xiàn)。vCJD的始發(fā)癥狀與經(jīng)典CJD不同，該病癥通常發(fā)生在年輕的患者中。雖然TSEs的癥狀不同，但它們都通常包括人格改變，精神問題，如抑郁，缺乏協(xié)調(diào)，和/或不穩(wěn)定步態(tài)。患者還可能經(jīng)歷被稱作肌陣攣的無意識急跳運動，感覺異常，失眠，意識錯亂，或記憶問題。在疾病后期，患者有嚴(yán)重的精神損害，并失去行動或說話的能力。TSEs傾向于進展迅速，通常在數(shù)月至數(shù)年內(nèi)導(dǎo)致死亡。研究顯示，vCJD可能起因于人類攝取了患有被叫作牛海綿狀腦病(BSE)，也叫作"瘋牛病"的TSE病的牛的牛肉。其它在動物中發(fā)現(xiàn)的TSEs包括感染綿羊和山羊的瘙癢??；感染麋鹿和鹿的慢性消耗性疾??；和傳染性水貂腦病。在少數(shù)稀有情況下，TSEs發(fā)生在其它動物，如動物園動物中。也有證據(jù)顯示，TSE可以經(jīng)輸血傳播，然而，從感染到癥狀出現(xiàn)的時間可能很長。例如，人可能在感染5-20年之后出現(xiàn)癥狀。許多國家為預(yù)防TSE爆發(fā)采取了不同措施。美國食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)禁止給反芻動物喂食動物蛋白，并對1980年以來在法國，葡萄牙和/或愛爾蘭生活10年以上的人們的捐贈實施禁令。1980-1996年在英國生活6個月以上的人們已經(jīng)被禁止在美國，加拿大，新西蘭和澳大利亞供血。在美國，F(xiàn)DA成立了處理這一主題的TSE咨詢委員會。此外，F(xiàn)DA還頒布了許多對醫(yī)藥產(chǎn)品中存在的TSE病原體進行管理的文件。朊病毒病，如TSEs伴有正常細胞Prpe向其同種型耐蛋白酶性病原性朊蛋白(Prpse)的轉(zhuǎn)變。PrpSe被認為是導(dǎo)致TSE的病原體。感染TSE的風(fēng)險取決于對象對TSE病原體的有效暴露。有效暴露是三個主要變量的函數(shù)被污染材料中的傳染原的量；暴露途徑；和具體的屏蔽效應(yīng)。例如，腸胃外暴露途徑在實現(xiàn)感染方面比通過消化道暴露更有效。因此，對于源于動物并用于人類的腸胃外用藥物，更嚴(yán)格地采取了現(xiàn)有的去除PrpSe，也叫去除TSE病原體的方法。類似措施也被建議用于來源于人類組織的藥物。從包括血紅蛋白的血液制品中去除TSE病原體的一個挑戰(zhàn)是血紅蛋白易于降解。血紅蛋白是一種獨特的高度不穩(wěn)定的分子，易于在純化過程中被破壞。這種四聚血紅素蛋白可以容易地離解成不穩(wěn)定的二聚體和氧化；從而失去血液代用品的主要目的，即其運輸氧的能力。無細胞血紅蛋白的自發(fā)性自氧化產(chǎn)生超氧陰離子。氧化速率被氫離子(低pH)增大。超氧陰離子起催化劑的作用，促進血紅蛋白的進一步自氧化，同時自發(fā)或經(jīng)酶歧化成過氧化氫。過氧化氫與亞鐵-血紅蛋白或鐵-血紅蛋白反應(yīng)，產(chǎn)生高鐵-血紅蛋白(ferryl-hemoglobin)。高鐵-血紅蛋白起自由基的作用，以與羥基自由基一樣的程度引發(fā)脂質(zhì)過氧化。紅細胞外的血紅蛋白氧化反應(yīng)由于該環(huán)境中不含有使血紅素維持在其功能性還原亞鐵形式所需要的酶和非酶抗氧化系統(tǒng)，因此難以控制。因此，不可逆性血紅素氧化是基于血紅蛋白的血液代用品的開發(fā)者的一個難題。牛和人源性血紅蛋白溶液要成為有效的攜氧血漿增容劑，必須滿足許多要求。除無毒，無免疫原性和無熱原性，貯藏期長，攜氧能力良好，以及膠體滲透壓和粘度與血漿相似外，這些產(chǎn)品還應(yīng)該無病原體，如TSE。盡管從血紅蛋白溶液中去除其它病原體(例如，微生物)可以用如滅菌/超濾的技術(shù)，然后經(jīng)鑒別培養(yǎng)來有效實現(xiàn)，但生產(chǎn)工藝的TSE清除率必須經(jīng)過驗證。朊病毒蛋白(例如，PrPSe)對常用滅活方法非常耐受。其在蒸煮甚至高壓滅菌及暴露于高濃度酸或堿；對于純化包括血紅蛋白的流體而言攻擊性太強的條件后仍可以存活。例如，僅有的用于去除含血紅蛋白溶液中的TSE病原體的制藥工藝方法以柱色譜技術(shù)為基礎(chǔ)。根據(jù)FDA的要求，能夠從血液制品，尤其是血紅蛋白溶液中去除5logs的TSE病原體的方法似乎是可取的。然而，在這樣的方法中，不同步驟的log去除率只有當(dāng)清除步驟為正交關(guān)系(即，通過獨立的機制去除病原體)時才認為可以累加。因此，存在著對降低含血紅蛋白溶液中的病原性朊病毒蛋白的正交方法的需求。發(fā)明概述本文公開了一種方法，其包括使包含血紅蛋白和至少一種病原體的生物流體與第一過濾器接觸，產(chǎn)生第一濾液；使第一濾液與納米過濾裝置接觸，產(chǎn)生第二濾液；使第二濾液與色譜材料接觸，分離洗脫級分；使洗脫級分與疏水溶劑接觸，產(chǎn)生疏水相和親水相；以及分離親水相，其中生物流體包括等于或小于約65kDa的目的組分。本文還公開了一種方法，其包括使包含高分子量組分和至少一種病原體的生物流體與第一過濾器接觸，產(chǎn)生第一濾液；使第一濾液與親水膜接觸，產(chǎn)生第二濾液；使第二濾液與色譜材料接觸，分離洗脫級分；使洗脫級分與疏水溶劑接觸，產(chǎn)生疏水相和親水相；以及分離親水相，其中高分子量組分具有大于約65kDa的分子量。本文還公開了一種方法，7其包括使包含血紅蛋白和至少一種病原體的生物流體經(jīng)歷至少兩個過濾步驟，從而降低與生物流體相關(guān)的病原體的量。本文進一步公開了一種方法，其包括通過將包括多個過濾步驟的正交分離方法用于人和/動物源性血紅蛋白溶液，除去該血紅蛋白溶液中的傳染性海綿狀腦病病原體。為了詳細描述本公開內(nèi)容的實施方案，現(xiàn)在將參照附圖，在附圖中圖1是用于降低生物流體中的TSE病原體水平的方法的流程圖。圖2是包括納米過濾裝置，離子交換膜色譜和疏水溶劑的正交多步程序降低血紅蛋白溶液中的TSE病原體的效率的圖示。結(jié)果表示為各個純化程序的LogH)降低量和整個多步方法的累計Log1Q降低量。發(fā)明詳述本文公開了用于從生物流體中正交去除病原體，如去除被認為是傳染性海綿狀腦病(TSE)的病原體，以下簡稱TSE病原體的方法。本文中，生物流體是指任何具有源自天然源的組分，合成制備的組分，或其組合的可以向生物體給藥以治療病癥的流體。在一實施方案中，生物流體是含血紅蛋白溶液，其也可以稱作包括血紅蛋白的組合物或溶液。在一實施方案中，TSE病原體是朊病毒，或者是病原性朊病毒(Prpse)。朊病毒是蛋白質(zhì)性感染顆粒的簡稱，其可以在機體細胞中發(fā)現(xiàn)的無害蛋白的正常形式，和導(dǎo)致疾病的感染性形式存在。在一實施方案中，TSE病原體可以用本文所公開的正交方法從含血紅蛋白溶液中去除，本文所用術(shù)語正交是指該方法包括兩個以上步驟，其中各步驟通過獨立的機制導(dǎo)致了組分(例如，TSE病原體)的去除和/或滅活。例如，本文所述正交方法可以包括利用組分(例如，TSE病原體)的不同理化性質(zhì)來實現(xiàn)所述組分的去除或清除的步驟。在一實施方案中，為了實現(xiàn)從生物流體中去除TSE病原體，本方法包括色譜技術(shù)，化學(xué)處理和納米過濾。例如，正交多步程序可以包括高親和力朊病毒降低過濾器，納米過濾裝置，親水膜，離子交換膜色譜和疏水溶劑。在一實施方案中，去除TSE病原體的方法可以由使用者按任何順序進行，或者，去除TSE病原體的方法可以按本文所公開的順序進行。去除TSE病原體(即，去除Prpse)后所得的生物流體可適用于治療需要施予生物流體，如含血紅蛋白溶液的哺乳動物病癥。圖1中圖示了從樣品200中去除TSE病原體的方法的實施方案。在一實施方案中，樣品包括生物流體，如含血紅蛋白溶液。含血紅蛋白溶液可以包括人和動物(例如，反芻動物，如牛)源性血紅蛋白。在一實施方案中，含血紅蛋白溶液是得自全血的含無細胞血紅蛋白溶液。下文中用到的含無細胞血紅蛋白溶液的pH除非另有說明，約為血紅蛋白的pl(等電點)，或者為約6.6至約7.2，或者為約7.8至約8.2。在施用本文所公開的方法之前，溶液可以與一氧化碳接觸，以將游離血紅蛋白轉(zhuǎn)化為一氧化碳的形式。一氧化碳形式是指結(jié)合了一氧化碳的血紅蛋白。樣品可以與一氧化碳接觸足以使樣品中的一氧化碳達到飽和的時間。本領(lǐng)域技術(shù)人員將了解到，達到飽和量一氧化碳所需要的時間取決于多種因素，如樣品溶液的組份和一氧化碳源，并且可以調(diào)節(jié)到以實現(xiàn)使用者所預(yù)期的結(jié)果。盡管不希望受到理論的限制，但血紅蛋白的一氧化碳形式比脫氧血紅蛋白(即，未結(jié)合氧的血紅蛋白)或氧血紅蛋白(即，結(jié)合了氧的血紅蛋白)更穩(wěn)定。在一實施方案中，樣品是包括一氧化碳血紅蛋白的生物流體。這樣的樣品可以采用如框10，20，40和50中所述的方法。在一實施方案中，施用本公開方法后得到的最終組合物具有分子量小于約65kDa的目的組分(即，使用者所預(yù)期的組分)。參照圖1，方法200可以從使樣品與框IO高流速親和朊病毒降低過濾器接觸開始。這樣的高流速親和朊病毒降低過濾器可以包括一種或多種與惰性膜結(jié)合的降血小板和/或降白細胞劑組成，所述惰性膜包含例如聚合物材料，如聚對苯二甲酸丁二酯(PBT)，聚乙烯，聚對苯二甲酸乙二酯(PET)等。過濾器可以允許流體，例如但不限于生物流體以等于或小于約25分鐘，或者，等于或小于約20分鐘內(nèi)約500至約1000mL的速率快速流過(即，高流速)。這樣的過濾器在美國專利No.6,945,411中有描述，其以全文引入本文作為參考。適宜的高流速親和朊病毒降低過濾器的例子有PALLLEUKOTRAP親和朊病毒降低過濾系統(tǒng)；這是一種可以購自PallCorporation(AnnArbor，MI48103-9019，U.S.A.)的全血采集，過濾和忙藏系統(tǒng)。盡管不希望受到理論的限制，但高流速親和朊病毒降低過濾器可以選擇性地去除含PrpSe白細胞。因此，框IO提供了伴隨白細胞的TSE病原體的降低，過濾器可以制成與俘獲這些受染白細胞相應(yīng)的大小。這種過濾可以稱之為白細胞過濾(leukofiltration)。從紅細胞中提取血紅蛋白，以獲得起始材料無細胞血紅蛋白通常用破壞細胞組分的技術(shù)來進行。例如，可以通過低滲溶胞從紅細胞懸浮液中提取血紅蛋白。低滲溶胞可以使含PrpSe的白細胞破裂，從而向含血紅蛋白溶液中釋放出TSE病原體(即，PrPSe)。白細胞過濾，或通過過濾(例如，用高流速朊病毒親和過濾器)去除白細胞的方法會降低使PrpSe從白細胞轉(zhuǎn)移至游離血紅蛋白溶液的可能性。如生物測定法和Western印跡分析法所測定的那樣，使樣品與高流速親和朊病毒降低過濾器接觸可以導(dǎo)致樣品(例如，含血紅蛋白溶液)中等于或大于約ilog,或者約40%至約60%(0.4-0.6對數(shù)減少)，或者約0.7至約1.9logs,或者約2至約3.7logs的TSE病原體的去除。經(jīng)高流速朊病毒親和過濾器處理后的樣品(例如，含血紅蛋白溶液)在下文中稱之為濾過樣品。濾過樣品包括濾液或未被高流速朊病毒親和降低過濾器截留的樣品部分。再次參照圖1，方法200接著進行到框20，濾過樣品與第二過濾裝置接觸。過濾作為去除TSE的手段的潛在效率基于這樣的事實，即，TSE病原體(即，PrPSe)可以質(zhì)量高至約1000kDa的罕見絲狀形態(tài)的形式存在。第二過濾裝置可以包括納米過濾裝置，例如，中空纖維過濾器或包括尺寸選擇性多孔膜的圓盤。這種納米過濾裝置可以由如醋酸纖維素，二醋酸纖維素，三醋酸纖維素，聚砜等的聚合物材料組成。過濾器可以允許流體，例如但不限于生物流體以約100mL至約500mL流體/分鐘的速率快速通過。在一實施方案中，第二過濾裝置具有約64.5kDa，或約65kDa，或約75kDa的截留分子量(意味著分子量等于或大于該特定量的分子被過濾器俘獲，而分子量較小的分子則不被過濾器截留)。在一實施方案中，過濾器的截留分子量剛好稍大于血紅蛋白分子(例如，64.5kDa)，這樣便使得血紅蛋白不被過濾器截留，但較大的分子，如TSE病原體(例如，病原性朊病毒)則被過濾器俘獲。適宜的納米過濾裝置的例子包括但不限于可購自MinntechCorporation,Minneapolis,MN55447,U.S.A.的HEMOCOR高性能血液濃縮器HPH400,HPH700，HPH1000或HPH1400;其可以作為單一過濾單元使用，或者以結(jié)合的方式使用以增加過濾面積。在一實施方案中，這些納米過濾裝置導(dǎo)致了分子量等于或大于約65kDa，或等于或大于約75kDa的TSE病原體的進一步降低。經(jīng)第二過濾裝置過濾的濾過樣品的TSE病原體的量與濾過樣品相比降低了等于或大于約1log,或約1至約3.2logs,或約3.3至約3.7logs,或約3.8至約4.5logs，并被稱為分級的濾過樣品(sizedfilteredsample)。分級的濾過樣品包括濾液或未被過濾裝置截留的濾過樣品的材料。在一實施方案中，如本文所述經(jīng)過過濾裝置過濾的樣品對于初始生物流體而言是稀釋的。稀釋樣品由于其可含有大量液體，因此可能不便于處理。另外，許多生物組分(例如，血紅蛋白，蛋白質(zhì)，等)在稀釋溶液中保持低濃度時顯示出穩(wěn)定性降低。在一實施方案中，通過本文所公開的方法產(chǎn)生的溶液可以按照特定技術(shù)進行濃縮，以得到更濃的樣品。適于濃縮這些樣品的技術(shù)是已知的。例如，可以通過在樣品與納米過濾裝置接觸后將樣品引入截留分子量為約10kDa，或約40kDa，或約50kDa的透析器中，濃縮濾過樣品，使樣品得到濃縮?；蛘撸锪黧w可以按照本公開方法中的各個步驟進行濃縮。樣品的起始濃度和最終濃度將取決于所用裝置的類型。因此，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以將樣品的最終濃度調(diào)節(jié)成使用者所預(yù)期的值。再參照圖1，用于降低樣品中的TSE病原體的方法然后進行到框40，分級的濾過樣品與色譜材料或膜，例如，離子交換膜接觸。在一實施方案中，色譜膜起到進一步降低樣品中的TSE病原體(例如，PrPSe)水平的作用。在一實施方案中，色譜膜包括強陰離子交換劑。在其它實施方案中，色譜材料包括陰離子交換盤(anionexchangedisc)，或陰離子交換囊(anionexchangecapsule)，或陰離子交換模塊(anionexchangemodule)。適用于本公開內(nèi)容的色譜材料的例子包括但不限于形式為ASTRODISC色譜單元，MUSTANGQ—次性囊和MUSTANGQ模塊，孔徑為約0.8nm，膜床體積為約0.18mL至約1000mL，或大于約1000mL的MUSTANGQ強陰離子交換膜。MUSTANGQ膜可以購自PallCorporation.(AnnArbor,MI48103-卯19，U.S.A.)。包括MUSTANGQ強陰離子交換劑的膜的使用可以提供預(yù)期的低蛋白結(jié)合特性，寬的化學(xué)和溫度耐受性，以及高流速的優(yōu)點。例如，改性MUSTANGQ膜可以在允許高百分比蛋白，例如血紅蛋白通過的同時降低TSE病原體水平。與色譜膜接觸過的分級的濾過樣品與濾過樣品相比，其TSE病原體的量降低了等于或大于約llog,或約3.8至約4.3logs,或約1至約3.7logs,或約4.3至約5logs,并被稱之為經(jīng)的色譜的分級的濾過樣品。經(jīng)的色譜的分級的濾過樣品包括組合物的洗脫級分，這樣樣品便包括未附著在陰離子交換劑上的材料。再參照圖1，方法然后進行到框50，經(jīng)的色譜的分級的濾過樣品與疏水溶劑接觸。在與疏水溶劑接觸之前，樣品的pH可以增加至約8.0，或約7.8，或約8.2。盡管不希望受到理論的限制，但增加經(jīng)的色譜的分級的濾過樣品(即，包括血紅蛋白)的pH將使血紅蛋白分子去質(zhì)子化，從而產(chǎn)生帶負電荷的分子，促進血紅蛋白向親水相分配。在一實施方案中，經(jīng)的色譜的分級的濾過樣品與疏水溶劑接觸，攪拌，然后使其形成至少兩相(例如，疏水相和親水相)，這樣，樣品的至少一個組分變成與疏水相結(jié)合，樣品的至少一個組分仍保持與親水相結(jié)合。疏水溶劑可以是任何與色譜處理過的樣品的組分相容的疏水溶劑；或者疏水溶劑包括氯仿，甲苯或其組合物。盡管不希望受到理論的限制，但TSE病原體(例如，PrPSe)的聚集形式在疏水溶劑中溶解度增加，因此可以優(yōu)先分配入疏水溶劑，從而進一步降低了樣品中存在的量。此外，TSE病原體向疏水溶劑的分配可以導(dǎo)致TSE病原體的降解。因此，生物流體與疏水溶劑的接觸降低了TSE病原體的存在和感染性。在一實施方案中，框50還可以包括將與疏水溶劑接觸的色譜處理過的樣品進行離心，或高速超離心。離心的使用是為了促進色譜處理過的樣品向疏水相和親水相的分配。利用技術(shù)，如離心分離樣品的方法和設(shè)備是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的。在一實施方案中，隨后可以在本文公開方法的后續(xù)步驟中使用的經(jīng)的色譜的分級的濾過樣品的親水相與色譜處理過的樣品相比，其TSE病原體的量降低了等于或大于約1log，或約0.8至約1.2logs,或約0.1至約0.7logs,或約1.3至約3.5logs,并被稱之為已處理樣品。在一實施方案中，方法然后可以允許進一步處理已處理樣品，以使樣品處于適合引入生物體，例如，向患者給藥的狀態(tài)?；蛘撸瑯悠?例如，人或動物源性血紅蛋白)可以在基于游離血紅蛋白的血液代用品的生產(chǎn)中進一步加工后使用。在另一實施方案中，生物流體包括血漿或血清。血漿樣品包括其級分，如白蛋白，凝固因子，免疫球蛋白或其組合物。對這樣的樣品可以進行框10，30，40和50中所述方法。在一實施方案中，將血漿或血清用本公開方法處理后得到的最終組合物具有分子量大于約65kDa，并且等于或小于150kDa的目的組分(g卩，使用者所預(yù)期的組分)。參照圖1，降低樣品中的TSE病原體水平的方法可以從框10開始，包括適用于具有高分子量組分，如免疫球蛋白(150kDa)的生物流體的高流速親和朊病毒降低過濾系統(tǒng)。本文中的高分子量是指分子量大于約65kDa，包括所述高分子量組分的生物流體被稱作高分子量樣品(HMWS)。適用于從HMWS中去除TSE病原體的高流速朊病毒降低過濾器的例子包括但不限于可購自PallCorporation的LEUKOTRAPSCRC過濾系統(tǒng)。從這些HMWS中分離紅細胞，血小板和白細胞需要侵入性技術(shù)，如離心力，其可以破壞含PrpSe白細胞，將TSE病原體(即，PrPSe)引入樣品。HMWS與本文所述類型的高流速朊病毒降低過濾器接觸時，目的組分組分可仍保持在溶液中(例如，IgG)，而TSE病原體則被過濾器俘獲。通過濾器去除的溶液含有可以隨后處理的目的組分，該樣品在下文中稱為濾過HMWS。濾過HMWS與HMSW相比，其TSE病原體的量降低了等于或大于約llog，或約0.7至約1.91ogs，或約2至約3.71ogs。參照圖1，方法然后可以進行至框30，濾過HMWS可與親水膜接觸。親水膜可以起到進一步降低HMWS中的TSE病原體(例如，PrpSe)水平的作用。在一實施方案中，膜包括聚偏氟乙烯(PVDF)或改性PVDF。包括PVDF的膜的使用可以提供預(yù)期的低蛋白結(jié)合特性，寬的化學(xué)和溫度耐受性，以及高速率的優(yōu)點。例如，改性PVDF膜可以在允許高百分比的蛋白，例如血紅蛋白通過的條件下降低TSE病原體水平。適用于本公開內(nèi)容的親水PVDF膜的例子包括但不限于可購自PallCorporation的ULTIPORGradeDV50濾膜。適宜的PVDF膜的例子在美國專利No.5,736,051中公開，其以全文引入本文作為參考。與親水膜接觸過的濾過HMWS樣品，以下稱已處理HMWS與濾過HMWS相比，其TSE病原體的量降低了等于或大于約1log,或約3.3至約3.7logs,或約1至約3.2logs,或約3.8至約4.51ogs。然后通過親水膜的濾液在本文所公開的方法的后續(xù)步驟(例如，框40和/或50)中使用。在一實施方案中，如本文前述含血紅蛋白溶液那樣，己處理HMSW然后與陰離子交換劑(例如，框40)接觸，接著與疏水溶劑(例如，框50)接觸。在HMSW與陰離子交換劑接觸(例如，框40)后，樣14品的TSE病原體的量與未經(jīng)陰離子交換劑處理的HMSW相比，降低了等于或大于約1log,或約3.8至約4.3logs,或約1至約3.7logs,或約4.3至約5logs。HMSW與疏水溶劑(例如，框50)接觸后，樣品的TSE病原體的量與未經(jīng)疏水溶劑處理的HMSW相比，降低了等于或大于1log，或約0.8至約1.2logs,或約0.1至約0.7logs,或約1.3至約3.51ogs。如前所述，方法然后可以允許進一步處理已處理樣品，以使樣品處于適合引入生物體，例如，向患者給藥的狀態(tài)?；蛘?，樣品可以未經(jīng)進一步處理而使用。在一實施方案中，方法進一步包括在樣品用本公開方法處理之前，期間或之后測定樣品中的TSE病原體水平。例如，在樣品與納米過濾裝置，圖1框20接觸之前，分析至少部分樣品中TSE病原體(例如，PrPSe)的存在?；蛘撸跇悠放c陰離子交換膜，圖1框40接觸之后，分析至少部分樣品中TSE病原體的存在。或者，在樣品與疏水溶劑，圖l框50接觸之后，分析至少部分樣品中TSE病原體的存在。在一些實施方案中，方法進一步包括在本公開方法的每一步之后分析至少部分樣品中TSE病原體的存在。對TSE病原體的存在的分析可以是定性的，定量的，或定性及定量的。這些分析是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的，可包括，例如，Western印跡分析，ELISA，動物感染性測定或其組合。在一實施方案中，經(jīng)本文所公開的TSE病原體去除方法處理過的樣品(例如，已分配色譜處理樣品)可除去樣品中存在的等于或大于約5logs，或等于或大于約61ogs，或等于或大于約71ogs的TSE病原體。在一實施方案中，經(jīng)本文所公開的方法處理過的樣品可能具有不可檢出水平的TSE病原體，其中檢測方法包括ELISA，動物感染性測定或其組合。對包括感染量的一種或多種TSE病原體的樣品施用本文所公開的方法后，存在的TSE病原體的量的降低足以導(dǎo)致該樣品失去感染性。本文所述方法可以手工進行，自動進行，或者可以手工和自動方法組合進行。在一實施方案中，用于實施本文所述方法的裝置可以手15動控制，自動化控制或手動與自動組合控制。在一實施方案中，方法通過能執(zhí)行本文所公開方法的計算機化設(shè)備實施，其中本文所述方法在通用計算機或其它有處理器，用戶界面，微處理器，存儲器和其它相關(guān)硬件及操作軟件的計算機化部件上用軟件實施例。實施本方法的軟件可以存儲在有形介質(zhì)中，和/或存在于存儲器，例如，計算機上。同樣，軟件的輸入和/或輸出，例如，組分的量，比較和結(jié)果可以存儲在有形介質(zhì)，計算機存儲器，硬拷貝，如紙質(zhì)打印輸出，或其它存儲設(shè)備上。本文所公開的方法是PrpSe清除平臺，其包括各自依賴于不同物理原理和針對PrpSe的典型特性的單獨清除步驟。本文所公開的方法包括通過去除白細胞降低PrpSe;用納米過濾器過濾PrpSe,用陰離子膜吸附劑吸附PrpSe和用疏水溶劑滅活PrPSe。實施例上文已經(jīng)對實施方案進行了概括性描述，以下實施例作為具體實施方案列出，以證明其實施和優(yōu)點。應(yīng)該了解的是，實施例的列出是為了進行說明，其不希望以任何方式限制權(quán)利要求的范圍。實施例1通過納米過濾純化牛血紅蛋白溶液和通過PrPSt:抗原捕獲酶免疫分析(EIA)和體內(nèi)分析驗證朊病毒去除方法本實施例中所用瘙癢病病原體為已經(jīng)得到鑒定并被廣泛接受為TSE感染性的代用標(biāo)記倉鼠263K毒株。所用瘙癢病制劑為10%倉鼠腦勻漿，以下列稀釋度進行加樣實驗前10Q，10"，l(T2，l(T3，l(T4，l(T5，l(T6禾Bl(T7，經(jīng)超聲，在10,000rpm離心10分鐘，經(jīng)孔徑為0.45和0.22pm的級聯(lián)過濾器過濾處理。牛血獲自多個健康供體或者按照美國FDA的指導(dǎo)原則飼養(yǎng)的單個動物。在無菌條件下從頸外靜脈穿刺抽取血液。從一個動物獲取約2L血液，收集在4個500mL的含有75mLACD抗凝劑(TheMetrixCompany,Dubuque,IA52002,U.S.A.)的抽真空無菌無熱原瓶中。不同動物的血液不相混合。在運輸至血液代用品生產(chǎn)廠的過程中，將瓶放置在凝膠冰(gelice)上。然后血液通過LEUKOTRAP將紅細胞與白細胞分離，通過離心將紅細胞與血小板和血漿分離。這個步驟降低了非血紅素蛋白及其它最后必須從其中純化血紅蛋白的物質(zhì)的載量。所有白細胞的去除同時也除去了與這些細胞相關(guān)的任何病毒，如巨細胞病毒，人免疫缺陷病毒等。此外，白細胞的完全去除還清除了趨向存在于這些細胞中的TSE病原體?？赡軘y帶病毒和TSE病原體的白細胞的去除用PALLLEUKOTRAP親和朊病毒降低過濾系統(tǒng)(PallCorporation,EastHills,NY11548,U.S.A.)降低。根據(jù)制造商的說明，降低朊病毒PrpSe的性能為2.9±0.7log。按照制造商的說明書，純化在捐贈后8小時內(nèi)用全血進行，或者用在4。C放置過夜的血液進行，體積為450mL/過濾器，血液溫度在4-22'C的范圍內(nèi)。然后，在15'C以約170xg的速度離心20分鐘，在無菌，無熱原塑料容器(FenwalLaboratories,Deerfield，IL60015,U.S.A.)中采用標(biāo)準(zhǔn)血庫程序，在無菌條件下用等滲鹽水溶液(體積比為1:4的紅細胞:鹽水；760xg，4°C，10分鐘)連續(xù)5次洗滌，5次離心，將紅細胞從血小板和血漿中純化出來。為了證明沒有白細胞和血小板，用Coulter細胞計數(shù)器進行細胞計數(shù)，并通過常規(guī)化學(xué)方法，如分光光度法驗證懸浮液中沒有蛋白質(zhì)。用孔徑為0.45nm的高流速過濾模塊通過低滲透析-超濾從紅細胞中提取血紅蛋白。為了使血紅蛋白分離過程中的蛋白水解降至最低，該程序在4。C，用輕微低滲的介質(zhì)(240-260mOsmkg)在小于10p.s.i的跨膜壓下進行。提取得到的血紅蛋白用0.2pm的過濾器，如PdlSSUPORDCF囊過濾器(PallCo卬oration)過濾，經(jīng)一氧化碳飽和后轉(zhuǎn)變?yōu)橐谎趸夹问?，貯藏在4。C的FENWAL轉(zhuǎn)移包(transferpacks)中。本實施例中，約500mL添加有10%倉鼠腦勻漿的濃度為60±10g/L的牛血紅蛋白在pH6.8士0.2的TRIS緩沖液中的溶液用市場上可以買到的帶有可選配管的HEMOCORHPH1400(MinntechCorporation)高效血液濃縮器進行納米過濾。這種基于聚砜的中空纖維透析膜具有20.9cm的有效纖維長度，1.31r^的膜過濾面積，86mL的預(yù)充量和65kDa的平均截留分子量。過濾在300mL/min的速率，30kPa的跨膜壓下于2小時內(nèi)完成。收集透析液，用市場上可以買到的帶有可選配管的基于聚砜的低通量透析器OPTIFLUX(F認niusMedicalCare,Lexington,MA02420,U.S.A.)濃縮至幾乎為55±8g/L的初始Hb水平。這種裝置具有1.5m2的表面積，83mL的預(yù)充量和10kDa的平均截留分子量。根據(jù)制造商的說明書，程序在約1小時內(nèi)完成，濃縮產(chǎn)物與透析前樣品一起用牛海綿狀腦病-瘙癢病抗原測試酶免疫測定試劑盒(IDEXXLaboratories,Inc.,Westbrook,Maine04092,U.S.A.)測量朊病毒蛋白水平，所述試劑盒能識別PrPSe?；蛘撸鶕?jù)制造商的說明書，用蛋白酶處理后，樣品用SPI-BIO酶免疫測定試劑盒(CaymanChemicalCo.,AnnArbor,MI48108,U.S.A.)測試，所述試劑盒使用了兩種抗來自受染倉鼠腦的變性羊瘙癢相關(guān)原纖維制劑(SAFs)的抗體。所有實驗重復(fù)3次，用公式RT=log10(樣品初始體積xPrpSe初始濃度)/(過濾后的樣品體積xPrpSe最終濃度)計算對數(shù)減縮系數(shù)(RF)，表示Prpse的清除率。結(jié)果表明，在血紅蛋白與中空纖維表面積的比為400mL/m2時，HEMOCORHPH1400在2小時后濾過了大于90%的血紅蛋白，如表1所示，納米過濾可以使PrpSe水平平均降低3.47±0.14lOgSc表1<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>還通過體內(nèi)測定評價了濾液(1)添加了瘙癢病病原體，但未經(jīng)過納米過濾的牛血紅蛋白溶液和(2)添加了Prpse，并且經(jīng)過納米過濾的牛血紅蛋白溶液，兩種樣品均在以下稀釋度10Q，10"，l(T2，l(T3，l(T4，l(T5，10"和10-7進行評價。體內(nèi)測定瘙癢病感染性涉及向倉鼠(約6-8周齡斷奶倉鼠)腦內(nèi)(i.e.)接種等份感興趣的溶液。添加了未純化血紅蛋白溶液和添加了純化血紅蛋白溶液的各稀釋組各分配5只倉鼠(每個稀釋度5只動物，每次滴定7個稀釋度)。對照倉鼠僅接種血紅蛋白。每天觀察動物，共觀察200天，并監(jiān)測瘙癢病感染的典型臨床體征(共濟失調(diào)，慢性消耗性和神經(jīng)學(xué)特征，如循環(huán)游走)和存活率。200天的觀察期的選擇基于這樣的事實，即，牛朊病毒向轉(zhuǎn)基因小鼠的傳染表現(xiàn)出約200天的潛伏期。因此，200天后，通過過量麻醉處死所有存活動物，用電子顯微鏡觀察其腦部的瘙癢病感染的特征性小管，瘙癢病相關(guān)原纖維。死亡動物和因瘙癢病感染的臨床體征而結(jié)束生命的動物的腦部也通過電子顯微鏡觀察SAF。存活率和SAF陽性率見表2。結(jié)果顯示，添加了未純化牛血紅蛋白的制劑具有約10VmL的瘙癢病感染性滴度。納米過濾后，瘙癢病感染性降低了約1035。這些結(jié)果與通過ELIA研究得到的結(jié)果一致。因此，單獨的納米過濾不能完全清除PrpSe的感染性，稀釋度為1()G和10"的組中一些動物沒有存活。此外，結(jié)果還顯示，當(dāng)瘙癢病感染性滴度為約10"mL時，納米過濾，即使通過孔徑約65kDa的中空纖維也不能作為獨立的用于從血紅蛋白溶液中完全清除PrpSe的方法。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>實施例2通過陰離子交換膜色譜純化牛血紅蛋白溶液和通過PrPSe抗原捕獲酶免疫測定法(EIA)驗證朊病毒去除方法本實施例中使用的瘙癢病病原體也是倉鼠263K毒株。所用瘙癢病制劑為10%倉鼠腦勻漿，以下列稀釋度進行加樣實驗前10°,10"，l(T2，10-3,l(T4，IO-5，l(T6和10-7，經(jīng)超聲，在10，000rpm離心IO分鐘，經(jīng)孔徑為0.45和0.22pm的級聯(lián)過濾器過濾處理。本實施例中，如實施例1中方法制備的100mL添有10%倉鼠腦勻漿的濃度為60±10g/L的牛血紅蛋白在pH6.8±2的TRIS緩沖液中的溶液用市場上可以買到的配有MUSTANGQ膜的PallACRODISC單元(PallCorporation,AnnArbor,MI48103-9019,U.S.A.)進行陰離子交換膜色譜分離?？讖?.8的MUSTANGQ聚醚砜膜是有效結(jié)合質(zhì)粒DNA，帶負電荷蛋白質(zhì)和病毒顆粒的強陰離子交換劑。每20mL血紅蛋白用一個一次性PallACRODISC單元進行色譜分離。進行色譜法前，ACRODISC單元先用4mL1MNaOH，然后用4mL1MNaCl預(yù)處理，再用pH6.8±0.2的20mMTRIS緩沖液平衡。一氧化碳形式的加樣血紅蛋白溶液(pH6.8±0.2)以4mL/min的流量進行色譜分離。pH6.8時，血紅蛋白不帶電荷。消除血紅蛋白的電荷是為了預(yù)防其與已經(jīng)pH6.8±0.2的20mMTRIS緩沖液平衡的強陰離子交換膜的結(jié)合。同時本色譜方法不希望影響DNA和病毒顆粒與該膜的結(jié)合。用獨立的ACRODISC單元完成5次色譜運行后，將收集的級分合并在一起，測定最終體積。根據(jù)制造商的說明書，用牛海綿狀腦病-瘙癢病抗原測試酶免疫測定試劑盒(IDEXXLaboratories,Inc.,Westbrook，Maine04092,U.S.A.)測量如下稀釋度的色譜分離前及色譜分離后樣品的朊病毒蛋白水平10°，10"，l(T2，l(T3，l(T4，l(T5，icy6和l(T7，所述試劑盒識別PrPSe。另外，根據(jù)制造商的說明書，用蛋白酶處理后，樣品用SPI-BIO酶免疫測定試劑盒(CaymanChemicalCo.,AnnArbor，MI48108，U.S.A.)測試，所述試劑盒使用了兩種抗來自受染倉鼠腦的變性SAFs制劑的抗體。所有實驗重復(fù)3次。用公式RT=log10(樣品初始體積xPrpSe初始濃度)/(過濾后的樣品體積xPrpSe最終濃度)計算對數(shù)減縮系數(shù)(RF)，表示Prpse的清除率。結(jié)果表明，血紅蛋白與交換劑膜表面積的比為約5mL/cm2時，與MUSTANGQ膜陰離子交換劑接觸的樣品未顯示出血紅蛋白水平降低。然而，如表3所示，MUSTANGQ的陰離子交換膜色譜能使樣品中的Prpse水平降低4.01±0.24logs。表3LogK)縮減系數(shù)No.l操作3.81No.2操作3.94No.3操作4.27最小值3.81最大值4.27范圍0.46中間值3.94均值4.01標(biāo)準(zhǔn)誤差0.14方差0.06標(biāo)準(zhǔn)偏差0.24變異系數(shù)5.92實施例3通過疏水溶劑純化牛血紅蛋白溶液和通過PrPSe抗原捕獲酶免疫測定法(EIA)驗證朊病毒去除方法本實施例中使用的瘙癢病病原體也是倉鼠263K毒株。所用瘙癢病制劑為10%倉鼠腦勻漿，以下列稀釋度進行加樣實驗之前10Q，IO'1，l(T2，IO-3，l(T4，10-5，10-6和l(T7，經(jīng)超聲，在10,000rpm離心10分鐘，經(jīng)孔徑為0.45和0.22pm的級聯(lián)過濾器過濾處理。本實施例中，如實施例1中方法制備的200mL添有10%倉鼠腦勻漿的濃度為60±10g/L的一氧化碳形式牛血紅蛋白在pH8.0±2的TRIS緩沖液中的溶液用氯仿(色譜級，F(xiàn)isherScientific)進行疏水溶劑處理。22按以下方法進行一系列3次先用氯仿處理，后用Sorvall離心機(型號RC5C，帶SS-34轉(zhuǎn)子)離心的步驟(1)將與氯仿以15:1的體積比混合的血紅蛋白渦旋15分鐘，然后在4°C以760xg的速度離心30分鐘；(2)將上清液倒入第二系列支管中，與氯仿以16:l的體積比混合，渦旋10分鐘，在4。C以1,600xg的速度離心15分鐘，再以3,800xg的速度離心15分鐘；(3)將上清液移入第三系列支管中，不加氯仿，在4。C以48,400xg的速度離心90分鐘。第三次離心后，向血紅蛋白溶液中吹氮氣，以除去剩余的微量氯仿，然后吹入一氧化碳，以確保其完全轉(zhuǎn)化為一氧化碳形式。根據(jù)制造商的說明書，用牛海綿狀腦病-瘙癢病抗原測試酶免疫測定試劑盒(IDEXXLaboratories,Inc.,Westbrook,Maine04092,U.S.A.)測量如下稀釋度的氯仿處理前及氯仿處理后樣品的朊病毒蛋白水平100，10"，l(T2，l(T3，l(T4，IO-5，If)-6和IO-7，所述試劑盒識別PrP"。另外，用蛋白酶處理后，根據(jù)制造商的說明書，樣品用SPI-BIO酶免疫測定試齊U盒(CaymanChemicalCo.，AnnArbor，MI48108，U.S.A.)測試，所述試劑盒使用了兩種抗來自受染倉鼠腦的變性SAFs制劑的抗體。所有實驗重復(fù)3次。用公式RT=log10(樣品初始體積xPrpSe初始濃度)/(過濾后的樣品體積xPrpSe最終濃度)計算對數(shù)減縮系數(shù)(RF)，表示Prpse的清除率。如表4所示，氯仿處理使Prpse水平降低1.15±0.14logs。該數(shù)據(jù)表明，可以將氯仿處理看作是從Prpse純化血紅蛋白溶液的滅活步驟。23表4<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>實施例4通過納米過濾，陰離子交換膜色譜和疏水溶劑純化牛血紅蛋白溶液以及通過體內(nèi)測定驗證朊病毒去除方法本實施例中使用的瘙癢病病原體也是倉鼠263K毒株。所用瘙癢病制劑為10%倉鼠腦勻漿，以下列稀釋度進行加樣實驗前10Q，10—、l(T2，l(T3，10"，l(T5，10-6和l(T7，經(jīng)超聲，在10,000rpm離心10分鐘，經(jīng)孔徑為0.45和0.22|im的級聯(lián)過濾器過濾處理。通過體內(nèi)測定評價的溶液是(1)添加了瘙癢病病原體，但未經(jīng)過朊病毒純化過程的稀釋度為10°，10"，l(T2，10—3，l(T4，l(T5，10-6和10—7的牛血紅蛋白溶液，及(2)添加了瘙癢病病原體，并且經(jīng)過基于納米過濾，陰離子交換膜色譜和疏水處理的級聯(lián)朊病毒純化過程的稀釋度為100，10"，l(T2，IO-3，10-4，l(T5，10-6和10-7的牛血紅蛋白溶液。本實施例的起始材料是按實施例1中方法制備，并如前述方法加樣的一氧化碳形式的牛血紅蛋白溶液。TSE純化過程包括分別如實施例1，2和3中所述的(1)納米過濾，(2)陰離子交換膜色譜及(3)氯仿的疏水溶劑處理。為了使納米過濾和陰離子膜交換裝置對血紅蛋白的吸附保持在較低水平，將血紅蛋白溶解在消除其電荷，從而消除其靜電作用的緩沖系統(tǒng)中。這樣的緩沖系統(tǒng)在實施例1和2中有描述。此外，為了保護血紅素免受氧化，將血紅素氧完全用一氧化碳代替，從而形成對氧化攻擊高度耐受的一氧化碳血紅蛋白。通過評價血紅蛋白濃度校正樣品體積的任何改變。純化前樣品的平均血紅蛋白濃度為約60±10g/L，純化后為約55±8g/L。體內(nèi)測定瘙癢病感染性涉及向倉鼠(約6-8周齡斷奶倉鼠)腦內(nèi)(i.e.)接種等份感興趣的溶液。添加了未純化血紅蛋白溶液和添加了純化血紅蛋白溶液的各稀釋組各分配5只倉鼠(每個稀釋度5只動物，每次滴定7個稀釋度)。對照倉鼠僅接種血紅蛋白。每天觀察動物，共觀察200天，并監(jiān)測瘙癢病感染的典型臨床體征(共濟失調(diào)，慢性消耗性和神經(jīng)學(xué)特征，如循環(huán)游走)和存活率。200天后，通過過量麻醉處死所有存活動物，用電子顯微鏡觀察其腦部的瘙癢病感染的特征性小管(瘙癢病相關(guān)原纖維因子-SAF)。死亡動物和因瘙癢病感染的臨床體征而結(jié)束生命的動物的腦部也通過電子顯微鏡觀察SAF。存活率和SAF陽性率見表5。結(jié)果顯示，加樣未純化牛血紅蛋白制劑的瘙癢病感染性滴度為約105/mL。經(jīng)過瘙癢病病原體的多步純化程序后的加樣牛血紅蛋白樣品未檢出瘙癢病感染性。僅接種血紅蛋白的動物未觀察到任何臨床及形態(tài)學(xué)變化。這些數(shù)據(jù)表明，通過連續(xù)逐步采用納米過濾，陰離子交換膜色譜和疏水溶劑處理對牛血紅蛋白溶液進行TSE病原體的純化可以有效消除瘙癢病感染性。這種清除PrpSe的多步牛血紅蛋白純化程序被認為是正交的，因為其包含去除(納米過濾和陰離子交換膜色譜)及滅活(疏水溶劑)TSE病原體的元素。表5不同稀釋度的死亡動物數(shù)/符合瘙癢病病理的動物數(shù)樣品/稀釋度10。10110210-310-410510-7純化前5/55/54/55/51/20/10/00/0純化后0/00/00/00/00/00/00/00/0未添加血紅蛋白的對照0/00/00/00/00/00/00/00/0盡管已經(jīng)顯示和描述了實施方案，但本領(lǐng)域技術(shù)人員可以在不偏離本發(fā)明的精神和教導(dǎo)的條件下對其進行修改。本文所述實施方案只是示例性的，其并不希望是限制性的。許多變更和修改都是可能的，并且都在本公開內(nèi)容的范圍內(nèi)。在明確規(guī)定數(shù)字范圍或限度的地方，這些表達范圍或限度應(yīng)被理解為包括如落入該明確規(guī)定的范圍或限度內(nèi)的量值的累接(iterative)范圍或限度(例如，約1至約10包括2，3，4等；大于0.10包括0.11，0.12，0.13等)。對于權(quán)利要求的任何元素，術(shù)語"任選"的使用意指該主題元素是需要的，或者是不需要的。兩種選擇都在權(quán)利要求的范圍內(nèi)。較寬的術(shù)語，如包括，包含，具有等的使用應(yīng)被理解成為較窄的術(shù)語，如由......組成，主要由......組成，基本上由......組成等提供支持。因此，保護范圍不受上述說明的限制，而只受所附權(quán)利要求書的限制，所述范圍包括權(quán)利要求主題的所有等同體。每項權(quán)利要求都作為本發(fā)明的實施方案并入說明書中。因此，權(quán)利要求是對本發(fā)明的進一步描述及對本發(fā)明實施方案的補充。本文中對參考文獻的討論并不是承認該參考文獻為本發(fā)明的現(xiàn)有技術(shù)，尤其是任何出版日期在本申26請的優(yōu)先權(quán)日之后的參考文獻。在為本文所述內(nèi)容補充提供例示性的程序或其它方面細節(jié)的意義上，本文引用的所有專利，專利申請和出版物的公開內(nèi)容因此引入本文作為參考。權(quán)利要求1.一種方法，包括使含有血紅蛋白和至少一種病原體的生物流體與第一過濾器接觸，產(chǎn)生第一濾液；使第一濾液與納米過濾裝置接觸，產(chǎn)生第二濾液；使第二濾液與色譜材料接觸，并分離洗脫的級分；使洗脫的級分與疏水溶劑接觸，產(chǎn)生疏水相和親水相；以及分離親水相，其中生物流體包括等于或小于約65kDa的目的組分。2.權(quán)利要求1的方法，還包括與第一過濾器接觸之前，將含有血紅蛋白的生物流體用一氧化碳飽和。3.權(quán)利要求l的方法，其中生物流體含有人源性血紅蛋白，動物源性血紅蛋白，或其組合物。4.權(quán)利要求l的方法，其中病原體包括蛋白質(zhì)性朊病毒，傳染性海綿狀腦病病原體，或其組合物。5.權(quán)利要求1的方法，其中第一過濾器包括高流速親和朊病毒降低過濾器。6.權(quán)利要求5的方法，其中過濾器具有等于或小于約25分鐘內(nèi)約500ml至約1000ml的流速。7.權(quán)利要求l的方法，其中第一濾液中的病原體的量與生物流體中的病原體的量相比降低了等于或大于約1對數(shù)。8.權(quán)利要求1的方法，其中納米過濾裝置包括中空纖維過濾器或圓盤。9.權(quán)利要求8的方法，其中納米過濾裝置具有約65kDa.的截留分子量。10.權(quán)利要求1的方法，其中第二濾液中的病原體的量與第一濾液中的病原體的量相比降低了等于或大于約1對數(shù)。11.權(quán)利要求l的方法，其中色譜材料包括強陰離子交換劑。12.權(quán)利要求1的方法，其中洗脫的級分中的病原體的量與第二濾液中的病原體的量相比降低了等于或大于約1對數(shù)。13.權(quán)利要求1的方法，其中疏水溶劑包括氯仿，甲苯，或其組合物。14.權(quán)利要求1的方法，其中親水相中病原體的量與生物流體中病原體的量相比降低了等于或大于約5對數(shù)。15.權(quán)利要求1的方法，其中親水相無傳染性。16.權(quán)利要求l的方法，還包括測定病原體的量。17.權(quán)利要求16的方法，其中組合物中病原體的量的測定通過Western印跡分析，ELISA，動物感染性測定，或其組合進行。18.—種方法，包括使含有高分子量組分和至少一種病原體的生物流體與第一過濾器接觸，產(chǎn)生第一濾液；使第一濾液與親水膜接觸，產(chǎn)生第二濾液；使第二濾液與色譜材料接觸，并分離洗脫的級分；使洗脫的級分與疏水溶劑接觸，產(chǎn)生疏水相和親水相；以及分離親水相，其中高分子量組分具有大于約65kDa的分子量。19.權(quán)利要求18的方法，其中親水膜包含聚偏氟乙烯。20.—種方法，包括使含有血紅蛋白和至少一種病原體的生物流體進行至少兩個過濾步驟，從而降低與生物流體相關(guān)的病原體的量。21.權(quán)利要求20的方法，其中病原體包括傳染性海綿狀腦病病原體，病原體的量的降低等于或大于約5對數(shù)。22.—種方法，包括通過將人和/動物源性血紅蛋白溶液進行包括多個過濾步驟的正交分離方法，除去該血紅蛋白溶液中的傳染性海綿狀腦病病原體。全文摘要本申請?zhí)峁┝艘环N方法，包括使包含血紅蛋白和至少一種病原體的生物流體與第一過濾器接觸，產(chǎn)生第一濾液；使第一濾液與納米過濾裝置接觸，產(chǎn)生第二濾液；使第二濾液與色譜材料接觸，分離洗脫級分；使洗脫級分與疏水溶劑接觸，產(chǎn)生疏水相和親水相；以及分離親水相，其中生物流體包括等于或小于約65kDa的目的組分。本申請還提供了一種方法，包括使包含高分子量組分和至少一種病原體的生物流體與第一過濾器接觸，產(chǎn)生第一濾液；使第一濾液與親水膜接觸，產(chǎn)生第二濾液；使第二濾液與色譜材料接觸，分離洗脫級分；使洗脫級分與疏水溶劑接觸，產(chǎn)生疏水相和親水相；以及分離親水相，其中高分子量組分具有大于約65kDa的分子量。本申請還提供了一種方法，包括使包含血紅蛋白和至少一種病原體的生物流體經(jīng)歷至少兩個過濾步驟，從而降低與生物流體相關(guān)的病原體的量。本申請還提供了一種方法，包括通過將包括多個過濾步驟的正交分離方法用于人和/動物來源的血紅蛋白溶液，除去該血紅蛋白溶液中的傳染性海綿狀腦病病原體。文檔編號A61L2/00GK101588822SQ200780048822公開日2009年11月25日申請日期2007年12月27日優(yōu)先權(quán)日2006年12月29日發(fā)明者格雷斯·西莫尼,約翰·F·莫勒,讓·S·西莫尼申請人:德克薩斯理工大學(xué)