專利名稱：一種從化妝品中提取dna的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種提取DNA的方法，特別涉及一種從化妝品中提取用于化妝品中所含成分檢測的模板DNA的方法。
背景技術：
可傳播性海綿狀腦病(Transmissible spongiform encephalopathies，TSE)是一類侵襲人類及多種動物中樞神經(jīng)系統(tǒng)的退行性腦病，潛伏期長，100％致死率，并可在同種動物間傳播。自1730年首次報道羊搔癢病以來，目前已經(jīng)在人類以及20余種動物中發(fā)現(xiàn)有自然發(fā)生或感染的TSE，其中包括人類的克-雅氏病(Creutzfeldt-Jacob disease，CJD)、FFI(fatal familial insomnia)、Kuru、GSS(Gerstmann-Straussler-Scheinker)以及動物的羊scrapie、牛的BSE、騾和麋鹿的CWD、貂的TME、貓的FSE等。
具有美白、祛斑、抗皺、抗衰老作用的化妝品中大多含有從牛、羊的腦及神經(jīng)組織、內臟、胎盤和血液中提取的成分，如果制成這些成分的原料來自于感染BSE的臨床前期的牛，或是組織在取材時遭到了污染，或是加工過程中不能夠很好地滅活感染因子，那么這些污染了BSE感染因子的化妝品在長期的使用中理論上仍具有危險性。
為防止瘋牛病通過化妝品傳入我國，保障我國人民身體健康和生命安全，我國頒布了一系列法律條文禁止進口和銷售含有發(fā)生“瘋牛病”國家或地區(qū)牛、羊的腦及神經(jīng)組織、內臟、胎盤和血液(含提取物)等動物源性原料成份(簡稱“牛羊動物源性原料成份”)的化妝品。
雖然目前國際國內均沒有檢測化妝品中牛羊動物源性原料成份的方法，但采用分子生物學手段檢測化妝品中的牛羊源性成分從理論上講是較為行之有效的方法。而使用分子生物學手段檢測化妝品中的牛羊源性成分首先需要從化妝品中提取出適合檢測的DNA作為PCR反應的模板。但由于化妝品特殊的加工工藝和復雜的成分組份，使DNA的提取在質量和數(shù)量上都具有相當?shù)碾y度。目前常規(guī)的DNA提取方法因提取效率、提取質量等原因均不能滿足于化妝品中DNA提取的要求，因此，研究開發(fā)針對化妝品中DNA提取的方法是利用分子生物學手段檢測化妝品牛羊源性成分的關鍵所在。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的在于提供一種從化妝品中提取DNA的方法，該方法能從多種性狀的化妝品中有效提取DNA，為分子生物學手段進行化妝品中牛羊源性成分的檢測提供了基礎。
化妝品種類眾多、性狀多樣，有液狀、膏狀及固態(tài)等不同性狀的樣品。本發(fā)明建立的化妝品中提取DNA的方法能夠有效提取出多種性狀的化妝品中的DNA，適用范圍廣、簡便快速、特異性強、效率高，所提DNA適合于化妝品中牛羊源性成分的PCR檢測。
本發(fā)明的目的是這樣實現(xiàn)的一種從化妝品中提取DNA的方法，包括如下步驟1)取膏狀或固體的化妝品樣品放入研缽中，或取液體化妝品樣品放入管中，加入約1-3倍體積的pH 8.0-8.5的核酸裂解液，約1-3倍于化妝品體積的甲醇水溶液或四氫呋喃醇水溶液，并加入蛋白酶至終濃度約為0.1-1mg/ml，充分研磨直至完全溶解成液狀或稀糊狀；其中，甲醇水溶液為甲醇∶水＝(60-80)∶(20-40)，四氫呋喃醇水溶液為甲醇∶四氫呋喃∶水＝(36-60)∶(75-125)∶(60-100)，上述比例均為體積比；2)置60℃～65℃溫箱中溫浴，使其充分溶解混勻后冷卻至室溫；3)將步驟2)的溶液用等體積的氯仿∶異戊醇溶液提取DNA，吸取上清液；4)用異丙醇或無水己醇沉淀；5)洗滌得到的沉淀物，然后干燥沉淀；6)加入去離子水溶解沉淀；在本發(fā)明的實施方式中，步驟1)中的核酸裂解液可以是本領域常規(guī)的核酸裂解液，優(yōu)選為10mmol/L Tris-HCl，400mmol/L NaCl，2mmol/L Na2EDTA和2％ SDS，pH8.0-8.5。
在本發(fā)明另一優(yōu)選實施方式中，步驟1)中的甲醇水溶液為甲醇∶水＝(70-60)∶(30-40)；更優(yōu)選為甲醇∶水＝70∶30。
在本發(fā)明另一優(yōu)選實施方式中，步驟1)中的四氫呋喃醇水溶液為甲醇∶四氫呋喃∶水＝(50-60)∶(100-125)∶(80-100)；更優(yōu)選為甲醇∶四氫呋喃∶水＝60∶125∶100。
本發(fā)明方法中，所述的蛋白酶用于降解化妝品中的蛋白質，該蛋白酶優(yōu)選蛋白酶K、鏈霉蛋白酶、胃蛋白酶或蛋白酶BP，更優(yōu)選為蛋白酶K(proteinaseK)。
進一步優(yōu)選在步驟2)之后加入步驟2)所得溶液1/3-1/5體積的5-7.5mol/L的NH4Ac或KAc溶液，劇烈震蕩30-60s，放置冰上5-10min，室溫下離心，吸取澄清的液體至一新管中。
采用PCR擴增來檢測本發(fā)明上述的方法是否從化妝品中提取到了DNA。
線粒體DNA細胞色素b基因(Cytb)是在動物中廣泛存在的基因(Avise JC，1986，Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci.312(1154)325-42)，而葉綠體核酮糖1，5-二磷酸羧化酶/加氧酶大亞基基因(rbcL)是在植物中廣泛存在的基因(Nadot S，et al.，1995，Mol Phylogenet Evol.4(3)257-82)，通常采用檢測這兩個基因的存在與否來證明樣品中是否含有動植物成分。本發(fā)明人根據(jù)位于這兩個基因片段的中間區(qū)域序列來設計引物，經(jīng)PCR擴增，如果PCR得到了相應的擴增片段，則說明本發(fā)明的DNA提取方法能從化妝品中有效提取DNA。
PCR擴增使用引物、反應體系及擴增條件如表1，2，3所述。
表1 動、植物成分PCR擴增引物序列

表2 PCR擴增反應體系

表3 PCR擴增反應條件



圖1A醇水溶液法提取的化妝品DNA植物成分的PCR擴增結果其中1.分子量Marker；2.陽性對照(大豆DNA)；3.美加凈人參防皺霜；4.空白對照圖1B醇水溶液法提取的化妝品DNA動物成分的PCR擴增結果其中1.分子量Marker；2.陽性對照(牛肉DNA)；3.美加凈人參防皺霜；4.空白對照圖2A呋喃醇水溶液法提取的化妝品DNA植物成分的PCR擴增結果其中1.分子量Marker；2.陽性對照(大豆DNA)；3.山莓草本精華洗發(fā)露；4.空白對照圖2B呋喃醇水溶液法提取的化妝品DNA動物成分的PCR擴增結果其中1.分子量Marker；2.陽性對照(牛肉DNA)；3.山莓草本精華洗發(fā)露；4.空白對照
具體實施例方式
實施例11)稱取1g美加凈人參防皺霜放入干凈的研缽中，加入3倍化妝品體積的pH 8.2的核酸裂解液(10mmol/L Tris-HCl，400mmol/L NaCl，2mmol/LNa2EDTA，2％ SDS)，3倍于化妝品體積的甲醇水溶液(70∶30)及5mg/ml蛋白酶K至終濃度為0.5mg/ml，充分研磨直至完全溶解成液狀或稀糊狀，確保其內無塊狀物質。
2)置65℃溫箱中溫浴2h，期間每隔10min輕輕顛倒混勻數(shù)一次，確保其充分溶解混勻。
3)取出冷卻至室溫。加入1/3體積的5mol/L NH4Ac溶液，劇烈震蕩30s，冰上放置10min，室溫下12000rpm離心10min，吸取較澄清的水相至一新的Eppendorf管中。
4)加入與步驟3)所得的液體等體積的氯仿∶異戊醇(24∶1)溶液，振蕩混勻，室溫下12000rpm離心10min，小心吸取上清液至一新的1.5ml Eppendorf管中。
5)加入體積量是上述步驟4)所得液體2.5倍的冰預冷的無水乙醇，上下顛倒混勻后-20℃靜置過夜。室溫下12000rpm，離心20min，棄上清，留沉淀。
6)加入500μl冰預冷的70％乙醇洗滌沉淀，室溫下12000rpm離心10min，棄上清，除去殘留的乙醇，干燥沉淀。
7)加入50μl去離子水溶解沉淀，得到含DNA的溶液。
取10μl上述方法獲得的DNA溶液進行植物成分的擴增檢測。采用引物Plant159進行PCR擴增，反應體系及反應條件見表2和3。擴增產(chǎn)物進行電泳分析，見圖1A。陽性對照采用Wizrad Genomic DNA Purification試劑盒(Promega公司)方法提取的大豆DNA，經(jīng)引物Plant159在相同反應體系和條件下進行PCR擴增。空白對照為采用引物Plant159進行相同反應體系和條件的PCR擴增，但是以雙蒸水作為加入的模板。電泳結果顯示，本發(fā)明的DNA提取方法能從化妝品中有效地提取出植物源性DNA。
取10μl上述方法獲得的DNA溶液進行動物成分的擴增檢測。采用引物Anm138進行PCR擴增，反應體系及反應條件見表2和3。擴增產(chǎn)物進行電泳分析，見圖1B。陽性對照采用Wizrad Genomic DNA Purification試劑盒(Promega公司)方法提取的牛肉DNA，經(jīng)引物Anm138進行相同反應體系和條件的PCR擴增?？瞻讓φ諡椴捎靡顰nm138進行相同反應體系和條件的PCR擴增，但是以雙蒸水作為加入的模板。電泳結果顯示，本發(fā)明的DNA提取方法能從化妝品中有效地提取出動物源性DNA。
實施例21)量取1.2ml液體山莓草本精華洗發(fā)露(取樣前搖勻)放入兩個Eppendorf管中，分別加入1倍體積的pH 8.0的核酸裂解液(2％(w/v)CTAB，100mmol/LTris-HCl(pH8.0)，1.4mol/L NaCl，20mmol/L Na2EDTA)，1倍體積的四氫呋喃溶液(甲醇∶四氫呋喃∶水＝60∶125∶100)和1/10體積的鏈霉蛋白酶(5mg/ml)至酶終濃度為1mg/ml，充分混勻。
2)置60℃溫箱中溫浴1h，期間每隔10min輕輕顛倒混勻數(shù)一次，確保其充分混合。
3)加入與步驟2)所得的液體等體積的氯仿∶異戊醇(24∶1)溶液，振蕩混勻，室溫下12000rpm離心10min，小心吸取上清液至一新的1.5ml Eppendorf管中。
4)加入0.8倍體積冰預冷的異丙醇，上下顛倒混勻后4℃靜置過夜。室溫下12000rpm，離心20min，棄上清，留沉淀。
5)加入500μl冰預冷的70％乙醇洗滌沉淀，室溫下12000rpm離心10min，棄上清，除去殘留的乙醇，干燥沉淀。
6)加入30μl去離子水溶解沉淀，得到含DNA的溶液。
取10μl上述方法獲得的DNA溶液進行植物成分的擴增檢測。采用引物Plant159進行PCR擴增，反應體系及反應條件見表2和3。擴增產(chǎn)物進行電泳分析，見圖2A。陽性對照采用Wizrad Genomic DNA Purification試劑盒(Promega公司)方法提取的大豆DNA，經(jīng)引物Plant159進行相同反應體系和條件的PCR擴增。空白對照為采用引物Plant159進行相同反應體系和條件的PCR擴增，但是以雙蒸水作為加入的模板。電泳結果顯示，本發(fā)明的DNA提取方法能從化妝品中有效地提取出植物源性DNA。
取10μl上述方法獲得的DNA溶液進行動物成分的擴增檢測。采用引物Anm138進行PCR擴增，反應體系及反應條件見表2和3。擴增產(chǎn)物進行電泳分析，見圖2B。陽性對照采用Wizrad Genomic DNA Purification試劑盒(Promega公司)方法提取的牛肉DNA，經(jīng)引物Anm138進行相同反應體系和條件的PCR擴增。空白對照為采用引物Anm138進行相同反應體系和條件的PCR擴增，但是以雙蒸水作為加入的模板。電泳結果顯示，本發(fā)明的DNA提取方法能從化妝品中有效地提取出動物源性DNA。
實施例31)稱取1g膠狀茶樹油洗面奶放入干凈的研缽中，加入2倍體積的pH 8.5的核酸裂解液(10mmol/L Tris-HCl，400mmol/L NaCl，2mmol/L Na2EDTA，2％ SDS)，2倍體積的四氫呋喃溶液(甲醇∶四氫呋喃∶水＝36∶80∶95)及5mg/ml的胃蛋白酶至酶的終濃度為0.1mg/ml，充分研磨直至完全溶解成液狀或稀糊狀，確保其內無塊狀物質。
2)置65℃溫箱中溫浴1.5h，期間每隔10min輕輕顛倒混勻數(shù)一次，確保其充分溶解混勻。
3)取出冷卻至室溫。加入1/5體積的7.5mol/L KAc溶液，震蕩60s，冰上放置5min，室溫下12000rpm離心10min，吸取較澄清的水相至一新的Eppendorf管中。
4)同實施例1。
5)加入2倍體積冰預冷的無水乙醇，上下顛倒混勻后-20℃靜置過夜。室溫下12000rpm，離心20min，棄上清，留沉淀。
6)同實施例1。
7)加入20μl去離子水溶解沉淀，4℃保存。
PCR檢測，證明了上述方法能有效提取出洗面奶中的DNA成分。
實施例41)稱取1g美潤護手霜放入干凈的研缽中，加入3倍于護手霜體積的pH8.5的核酸裂解液(2％(w/v)CTAB，100mmol/L Tris-HCl(pH8.0)，1.4mol/LNaCl，20mmol/L Na2EDTA)，3倍體積的四氫呋喃溶液(甲醇∶四氫呋喃∶水＝40∶125∶60)及5mg/ml的蛋白酶BP至酶的終濃度為0.3mg/ml，充分研磨直至完全溶解成液狀或稀糊狀，確保其內無塊狀物質。
2)置62℃溫箱中溫浴1h，期間每隔10min輕輕顛倒混勻數(shù)一次，確保其充分溶解混勻。
3)加入與步驟2)所得的液體等體積的氯仿∶異戊醇(24∶1)溶液，振蕩混勻，室溫下12000rpm離心10min，小心吸取上清液至一新的1.5ml Eppendorf管中。
4)加入2倍體積冰預冷的無水乙醇，上下顛倒混勻后-20℃靜置過夜。室溫下12000rpm，離心20min，棄上清，留沉淀。
5)加入500μl冰預冷的70％乙醇洗滌沉淀，室溫下12000rpm離心10min，棄上清，除去殘留的乙醇，干燥沉淀。
6)加入20μl去離子水溶解沉淀，4℃保存。
PCR檢測，證明了上述方法能有效提取出護手霜中的DNA成分。
實施例51)稱取2ml牛奶沐浴露放入Eppendorf管中，加入2倍牛奶沐浴露體積的pH 8.2的核酸裂解液(10mmol/L Tris-HCl，400mmol/L NaCl，2mmol/LNa2EDTA，2％ SDS)，2倍于牛奶沐浴露體積的甲醇水溶液(甲醇∶水＝60∶40)及5mg/ml的蛋白酶K至酶的終濃度為1mg/ml，充分研磨直至完全溶解成液狀或稀糊狀。
2)置60℃溫箱中溫浴2h，期間每隔10min輕輕顛倒混勻數(shù)一次，確保其充分溶解混勻。
3)取出冷卻至室溫。加入1/3體積的6mol/L KAc溶液，劇烈震蕩30s，冰上放置10min，室溫下12000rpm離心10min，吸取較澄清的水相至一新的Eppendorf管中。
4)加入與步驟3)所得的液體等體積的氯仿∶異戊醇(24∶1)溶液，振蕩混勻，室溫下12000rpm離心10min，小心吸取上清液至一新的1.5ml Eppendorf管中。
5)加入等體積冰預冷的異丙醇，上下顛倒混勻后4℃靜置過夜。室溫下12000rpm，離心20min，棄上清，留沉淀。
6)加入500μl冰預冷的70％乙醇洗滌沉淀，室溫下12000rpm離心10min，棄上清，除去殘留的乙醇，干燥沉淀。
7)加入50μl去離子水溶解沉淀，得到含DNA的溶液。
PCR檢測，證明了上述方法能有效提取出牛奶沐浴露中的DNA成分。
實施例61)稱取1g的綿羊酯日霜放入Eppendorf管中，加入2倍化妝品體積的pH 8.2的核酸裂解液(10mmol/L Tris-HCl，400mmol/L NaCl，2mmol/LNa2EDTA，2％ SDS)，2倍化妝品體積的甲醇水溶液(甲醇∶水＝80∶20)及5mg/ml的蛋白酶K至酶的終濃度為1mg/ml，充分研磨直至完全溶解成液狀或稀糊狀，確保其內無塊狀物質。
2)置60℃溫箱中溫浴2h，期間每隔10min輕輕顛倒混勻數(shù)一次，確保其充分溶解混勻。
3)加入與步驟2)所得的液體等體積的氯仿∶異戊醇(24∶1)溶液，振蕩混勻，室溫下12000rpm離心10min，小心吸取上清液至一新的1.5ml Eppendorf管中。
4)加入0.8倍體積冰預冷的異丙醇，上下顛倒混勻后4℃靜置過夜。室溫下12000rpm，離心20min，棄上清，留沉淀。
5)加入500μl冰預冷的70％乙醇洗滌沉淀，室溫下12000rpm離心10min，棄上清，除去殘留的乙醇，干燥沉淀。
6)加入50μl去離子水溶解沉淀，得到含DNA的溶液。
PCR檢測，證明了上述方法能有效提取出綿羊酯日霜中的DNA成分。
實施例71)稱取1g美潤護手霜放入干凈的研缽中，加入3倍于護手霜體積的pH8.5的核酸裂解液(2％(w/v)CTAB，100mmol/L Tris-HCl(pH8.0)，1.4mol/LNaCl，20mmol/L Na2EDTA)，2倍體積的四氫呋喃溶液(甲醇∶四氫呋喃∶水＝36∶125∶100)及5mg/ml的蛋白酶BP至酶的終濃度為0.3mg/ml，充分研磨直至完全溶解成液狀或稀糊狀，確保其內無塊狀物質。
2)置62℃溫箱中溫浴1h，期間每隔10min輕輕顛倒混勻數(shù)一次，確保其充分溶解混勻。
3)加入與步驟2)所得的液體等體積的氯仿∶異戊醇(24∶1)溶液，振蕩混勻，室溫下12000rpm離心10min，小心吸取上清液至一新的1.5ml Eppendorf管中。
4)加入2倍體積冰預冷的無水乙醇，上下顛倒混勻后-20℃靜置過夜。室溫下12000rpm，離心20min，棄上清，留沉淀。
5)加入500μl冰預冷的70％乙醇洗滌沉淀，室溫下12000rpm離心10min，棄上清，除去殘留的乙醇，干燥沉淀。
6)加入20μl去離子水溶解沉淀，4℃保存。
PCR檢測，證明了上述方法能有效提取出護手霜中的DNA成分。
實施例81)量取1.2ml液體山莓草本精華洗發(fā)露(取樣前搖勻)放入兩個Eppendorf管中，分別加入1倍體積的pH 8.0的核酸裂解液(10mmol/L Tris-HCl，400mmol/L NaCl，2mmol/L Na2EDTA，2％ SDS)，1倍體積的四氫呋喃溶液(甲醇∶四氫呋喃∶水＝60∶75∶60)和蛋白酶K(5mg/ml)至酶終濃度為1mg/ml，充分混勻。
2)置60℃溫箱中溫浴1h，期間每隔10min輕輕顛倒混勻數(shù)一次，確保其充分混合。
3)加入與步驟2)所得的液體等體積的氯仿∶異戊醇(24∶1)溶液，振蕩混勻，室溫下12000rpm離心10min，小心吸取上清液至一新的1.5ml Eppendorf管中。
4)加入0.8倍體積冰預冷的異丙醇，上下顛倒混勻后4℃靜置過夜。室溫下12000rpm，離心20min，棄上清，留沉淀。
5)加入500μl冰預冷的70％乙醇洗滌沉淀，室溫下12000rpm離心10min，棄上清，除去殘留的乙醇，干燥沉淀。
6)加入30μl去離子水溶解沉淀，得到含DNA的溶液。
PCR檢測，證明了上述方法能有效提取出洗發(fā)露中的DNA成分。
實施例91)量取1.2ml液體山莓草本精華洗發(fā)露(取樣前搖勻)放入兩個Eppendorf管中，分別加入1倍體積的pH 8.0的核酸裂解液(2％(w/v)CTAB，100mmol/LTris-HCl(pH8.0)，1.4mol/L NaCl，20mmol/L Na2EDTA)，1倍體積的四氫呋喃溶液(甲醇∶四氫呋喃∶水＝60∶75∶98)和鏈霉蛋白酶(5mg/ml)至酶終濃度為1mg/ml，充分混勻。
2)置60℃溫箱中溫浴1h，期間每隔10min輕輕顛倒混勻數(shù)一次，確保其充分混合。
3)取出冷卻至室溫。加入1/5體積的7.5mol/L KAc溶液，震蕩60s，冰上放置5min，室溫下12000rpm離心10min，吸取較澄清的水相至一新的Eppendorf管中。
4)加入等體積的氯仿∶異戊醇(24∶1)溶液，振蕩混勻，室溫下12000rpm離心10min，小心吸取上清液至一新的1.5ml Eppendorf管中。
5)加入0.8倍體積冰預冷的異丙醇，上下顛倒混勻后4℃靜置過夜。室溫下12000rpm，離心20min，棄上清，留沉淀。
6)加入500μl冰預冷的70％乙醇洗滌沉淀，室溫下12000rpm離心10min，棄上清，除去殘留的乙醇，干燥沉淀。
7)加入20μl去離子水溶解沉淀，得到含DNA的溶液。
PCR檢測，證明了上述方法能有效提取出洗發(fā)露中的DNA成分。
權利要求
1.一種從化妝品中提取DNA的方法，包括如下步驟1)取膏狀或固體的化妝品樣品放入研缽中，或取液體化妝品樣品放入管中，加入1-3倍體積的pH8.0-8.5的核酸裂解液，1-3倍于化妝品體積的甲醇水溶液或四氫呋喃醇水溶液，并加入蛋白酶至終濃度為0.1-1mg/ml，充分研磨直至完全溶解成液狀或稀糊狀；其中，甲醇水溶液為甲醇∶水＝(60-80)∶(20-40)，四氫呋喃醇水溶液為甲醇∶四氫呋喃∶水＝(36-60)∶(75-125)∶(60-100)，上述比例均為體積比；2)置60℃～65℃溫箱中溫浴，使其充分溶解混勻后冷卻至室溫；3)將步驟2)的溶液用等體積的氯仿-異戊醇溶液抽提蛋白等雜質，吸取上清液；4)用異丙醇或無水乙醇沉淀；5)洗滌得到的沉淀物，然后干燥沉淀；6)加入去離子水溶解沉淀。
2.根據(jù)權利要求1所述的從化妝品中提取DNA的方法，其特征在于，步驟1)中的核酸裂解液為10mmol/L Tris-HCl，400mmol/L NaCl，2mmol/LNa2EDTA和2％SDS，pH值為8.0-8.5。
3.根據(jù)權利要求1所述的從化妝品中提取DNA的方法，其特征在于，步驟1)中的甲醇水溶液為甲醇∶水＝(70-60)∶(30-40)。
4.根據(jù)權利要求3所述的從化妝品中提取DNA的方法，其特征在于，步驟1)中的甲醇水溶液為甲醇∶水＝70∶30。
5.根據(jù)權利要求1所述的從化妝品中提取DNA的方法，其特征在于，步驟1)中的四氫呋喃醇水溶液為甲醇∶四氫呋喃∶水＝(50-60)∶(1 00-125)∶(80-100)。
6.根據(jù)權利要求1所述的從化妝品中提取DNA的方法，其特征在于，步驟1)中的四氫呋喃醇水溶液為甲醇∶四氫呋喃∶水＝60∶125∶100。
7.根據(jù)權利要求1所述的從化妝品中提取DNA的方法，其特征在于，步驟1)中的蛋白酶為蛋白酶K、鏈霉蛋白酶、胃蛋白酶或蛋白酶BP。
8.根據(jù)權利要求1所述的從化妝品中提取DNA的方法，其特征在于，在步驟2)之后進一步加入1/3-1/5體積的5-7.5mol/L的NH4Ac或KAc溶液，劇烈震蕩30-60s，放置冰上5-10min，室溫下離心，吸取澄清的液體至一新管中。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種從化妝品中提取DNA的方法。該方法通過往化妝品樣品中加入核酸裂解液、甲醇水溶液或四氫呋喃醇水溶液及蛋白酶，充分研磨混合物至液狀或稀糊狀，然后使其溫浴，抽提蛋白等雜質，將上清液沉淀，干燥沉淀物，然后加入去離子水溶解沉淀。本發(fā)明建立的化妝品中提取DNA的方法能夠有效提取出多種性狀的化妝品中的DNA，適用范圍廣、簡便快速、特異性強、效率高，所提DNA適合在檢測化妝品中所含成分的PCR擴增中作為模板。
文檔編號C12P19/34GK1904060SQ20051008791
公開日2007年1月31日 申請日期2005年7月29日 優(yōu)先權日2005年7月29日
發(fā)明者陳穎, 錢增敏, 王晶, 王媛, 吳亞君, 徐寶梁 申請人:中國檢驗檢疫科學研究院食品安全研究所