專利名稱：：固體創(chuàng)傷敷料的生產(chǎn)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及用于處理哺乳動物患者(例如人)的受傷組織的固體敷料的生產(chǎn)方法，并且涉及由此生產(chǎn)的敷料和中間產(chǎn)品。
背景技術(shù)：
：可用于在就醫(yī)前護(hù)理以止血的材料和方法(紗布敷料、定向壓力、和止血器)令人遺憾地在過去2000年沒有顯著的變化。參見L.Zimmerman等人，GreatIdeasintheHistoryofSurgery(SanFrancisco,Calif.:NormanPublishing;1993)，31。即4吏對于經(jīng)過訓(xùn)練的人來說，他們也不是同樣有效的，可達(dá)到的位置發(fā)生大量出血或致命失血并不罕見。參見J,M.Rocko等人，J.Trauma22:635(1982)。得自越南的死亡率數(shù)據(jù)顯示，10%的戰(zhàn)爭死亡是由于未受控制的極度失血。參見SAS/STATUsersGuide,4thed.(Cary，N.C.:SASInstituteInc;1990)。在越南戰(zhàn)爭(VietnamWar)期間由于出血所致死亡中有最多三分之一可以使用有效的野外失血控制方法來阻止。參見SAS/STATUsersGuide,4thed.(Cary，N.C.:SASInstituteInc;1990)。盡管平民創(chuàng)傷死亡率統(tǒng)計(jì)沒有提供由于極端失血而致就醫(yī)前死亡的確切數(shù)字，但是案例和軼事報(bào)告顯示為同樣的情況。參見J.M.Rocko等人。這些數(shù)據(jù)顯示，可以通過在就醫(yī)前使用簡單的和有效的失血控制方法實(shí)現(xiàn)存活的大幅度增加?，F(xiàn)在正在使用許多已經(jīng)開發(fā)用于克服常規(guī)的紗布繃帶的缺陷的較新的止血劑。這些止血劑包括以下微孑L性聚糖粒子(Tra畫DEX⑧，MedaforInc.,Minneapolis,MN);沸石(QuikClot,Z-MedicaCorp，Wallington，CT);乙?；木跱-乙酰基氨基葡萄糖(RapidDeploymentHemostat(RDH)，MarinePolymerTechnologies,Danvers，MA);脫乙酰殼多糖(HemConbandage,HemConMedicalTechnologiesinc.,PortlandOR);液體血纖蛋白密封劑(TisseelVH，Baxter,Deerfield，EL)人纖維蛋白原和馬屬膠原上的凝血酶(TachoComb-S，HafslundNycomedPharma，Linz，Austria);微分散的氧化纖維素(m.doc，AlltracelGroup,Dublin,Ireland);培酸丙酉旨(Hemostatin，AnalyticalControlSystemsInc.,Fishers,EN);e-氨基已酸和凝血酶(Heraarrestpatch,ClarionPharmaceuticals,Inc);純化牛真皮膠原(Avitene片材(無紡織物幅片或AviteneMicrofibrillarCollagenHemostat(MCH)，DavoL，Inc.，Cranston,RI);再生纖維素的受控氧化(Surgicel,EdiiconInc.,Somerville,NJ)5具有乙基纖維素涂層的硫酸鋁(SorbastaceMicrocaps，Hemostace，LLC,NewOrleans,LA);微孔性的形成水凝膠的聚丙烯酰胺(BioHemostat，Hemodyne，Inc.,RichmondVA);和重組的活化因子VII(NovoSeve禱，NovoNordiskIn"，Princeton,NJ)。這些試劑在用于外傷損傷的動物模型中和/或用于野外時(shí)取得了不同程度的成功。這種試劑之一是以商品名TraumaDEX銷售的基于淀粉的止血劑。這種產(chǎn)品包括被直接傾倒在傷口中或傷口上的微孔性聚糖粒子。所述粒子似乎是通過從傷口中的血液和血漿吸收水而引起凝血因子和血小板積聚和富集來發(fā)揮其止血作用。然而，在致命的腹股溝傷口模型的兩項(xiàng)研究中，這種試劑沒有表現(xiàn)出有意義的優(yōu)于標(biāo)準(zhǔn)紗布敷料的益處。參見McManus等人，BusinessBriefing:EmergencyMedicalReview2005，pp.76-79(目前可以在www.touchbriefings.com/pdf/1334/Wedmore.pdf的網(wǎng)址在線得到)。另一種基于粒子的試劑是QuickClot粉末，用于直接傾倒在傷口中或傷口上的沸石顆粒狀止血劑。沸石粒子似乎也是通過液體吸收引起凝血因子和血小板的積聚和富集來發(fā)揮其止血作用。盡管這種試劑已經(jīng)成功地用于某些動物研究，但是仍有關(guān)于由粒子吸收液體時(shí)放熱過程的擔(dān)心。一些研究表明，這種反應(yīng)在體外產(chǎn)生超過143'C的溫度和在體內(nèi)產(chǎn)生超過501C溫度，這足以引起三度燒傷。參見McManus等人，BusinessBriefing:EmergencyMedicalReview2005，at77。還已經(jīng)觀察到QuikClot的放熱反應(yīng)引起臨床重要性未知的肉眼的和組織學(xué)的改變。Acheson等人，J,Trauma59:865-874(2005)。與這些基于凈立子的試劑不同，RapidDeploymentHemostat看起來似乎是通過紅細(xì)胞聚集、血小板活化、凝血級聯(lián)活化和局部血管收縮來發(fā)揮其止血作用。RapidDeploymentHemostatM是由聚N-乙酰氨基葡萄糖組成的來源于藻類的敷料。盡管原始的敷料設(shè)計(jì)是有效減少小的出血，但是為了在主動脈和肝臟損傷的豬模型中減少失血需要增力口紗布襯墊。參見McManus等人，BusinessBriefing:EmergencyMedicalReview2005，at78。另一種衍生自聚N-乙?；被咸烟堑姆罅鲜荋emConChitosanBandage,其據(jù)稱是設(shè)計(jì)用于優(yōu)化脫乙酰殼多糖在傷口位置的粘膜粘著劑表面密度和結(jié)構(gòu)完整性的冷凍干燥的脫乙酰殼多糖敷料。HemConChitosanBandage顯然是主要通過對傷口的粘著來發(fā)揮其止血作用，盡管有證據(jù)建議其還可以增強(qiáng)血小板作用以及將紅細(xì)胞并入到在傷口上形成的凝塊中。這種繃帶在幾個(gè)動脈出血的動物模型中表現(xiàn)出改善的止血和較少失血，但是在不同繃帶之間觀察到顯著的變化性，包括由于不充分粘著于傷口而失敗的一些。參見McManus等人，BusinessBriefing:EmergencyMedicalReview2005，at79。液體血纖蛋白密封劑，例如TisseelVH，數(shù)年來被用作用于失血控制的手術(shù)室附屬設(shè)備。參見J.L.Garza等人，J.Trauma30:512-513(1990);H.B.Kram等人,J.Trauma30:97-101(1990);M.G.Ochsner等人，J.Trauma30:884-887(1990);T.L.Matthew等人，Ann.Thorac.Surg.50:40-44(1990);H.Jakob等人，J.Vase.Surg.，1:171-180(1984)。用于止血的組織膠水的第一次出現(xiàn)回溯到1909。參見CurrentTrendsinSurgicalTissueAdhesives:ProceedingsoftheFirstInternationalSymposiumonSurgicalAdhesives，M.J.MacPhee等人,eds.(Lancaster,Pa.:TechnomicPublishingCo;1995)。液體血纖蛋白密封劑典型地由纖維蛋白原和凝血酶組成，但是還可以包含因子Xin/XIIIa，作為纖維蛋白原純化的副產(chǎn)物或作為添加的組分(因此在某些應(yīng)用中，不必需在血纖蛋白密封劑中存在有因子XIII/因子XIIIa，因?yàn)閮?nèi)源性地存在有足夠的因子XlII/XIIIa或其它轉(zhuǎn)氨酶來誘導(dǎo)纖維蛋白形成)。然而，作為液體，這些血幹蛋白密封劑尚未被證明可用于在野外處理創(chuàng)傷性損傷。具有膠原載體的干燥纖維蛋白原-凝血酶敷料(例如TachoComb，TachoCombHandTachoSilavailablefromHafslundNycomedPha函，Linz，Austria)也在許多歐洲國家中用于手術(shù)室應(yīng)用。參見U，Schiele等人，Clin.Materials9:169-177(1992)。盡管這些纖維蛋白原-凝血酶敷料不需要液體血纖蛋白密封劑所需的預(yù)先混合，但是它們用于野外應(yīng)用的實(shí)用性受到4°C的儲存條件和需要在應(yīng)用于傷口之前用鹽水溶液預(yù)潤濕的限制。這些敷料對于高壓、大量出血不是很有效。參見Sondeen等人，J.Trauma54:280-285(2003)。用于處理受傷組織的千燥纖維蛋白原/凝血酶敷料還可以得自美國紅十字會(AmericanRedCross,ARC)如美國專利6,762,336中公開的，這種特定的敷料由襯墊材料和多個(gè)層組成，所述多個(gè)層的最外側(cè)的兩個(gè)層包含纖維蛋白原(但是不含凝血酶)，而內(nèi)層包含凝血酶和氯化鈣(但是不含纖維蛋白原)。盡管這種敷料已經(jīng)能夠在幾個(gè)失血的動物模型中表現(xiàn)出巨大的成功，但是該繃帶是脆弱的、不可彎曲的，并且在處理時(shí)有分裂的傾向。參見McManus等人，BusinessBriefing:EmergencyMedicalReview2005，at78.;Kheirabadi等人，J.Trauma59:25-35(2005)。還提出了其它基于纖維蛋白原/凝血酶的敷料。例如，美國專利4，683，142公開了用于封閉和修復(fù)傷口的再吸收性片材，其由包含凝結(jié)蛋白(例如纖維蛋白素原和凝血酶)的糖蛋白基質(zhì)(例如膠原)組成.美國專利5，702，715公開了由纖維蛋白原和凝血酶的單獨(dú)的層組成的增強(qiáng)的生物學(xué)密封劑，所述纖維蛋白原和凝血酶的單獨(dú)的層中的至少之一還包含增強(qiáng)填料，例如PEG、PVP、BSA、甘露糖醇、FICOLL、右旋糖酐、肌醇或氯酸鈉。美國專利6,056,970公開了由生物可吸收的聚合物(例如透明質(zhì)酸或羧甲基纖維素)組成的敷料和由粉末的凝血酶和/或粉末的纖維蛋白原組成的止血組合物。美國專利7,189,410公開了由襯墊材料組成的繃帶，在所述襯墊材料上具有(i)纖維蛋白原粒子；(n)凝血酶粒子；和(iii)氯化鉤。美國專利申請公布US2006/0155234Al公開了由襯墊材料和多個(gè)纖維蛋白原層組成的敷料，所述多個(gè)纖維蛋白原層在它們之間具有離散的凝血酶區(qū)域。到目前為止，這些敷料中沒有一種被批準(zhǔn)使用或者可購得。另外，制備纖維蛋白原/凝血酶固體敷料的過去的努力總是受到恰好是使它們成為用于處理傷口的合乎需要的成分的性質(zhì)的阻礙，所述性質(zhì)即它們在含水條件下迅速地反應(yīng)以形成纖維蛋白的固有的能力。因子XIII的存在導(dǎo)致混合物引起纖維蛋白Ia進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為交聯(lián)的纖維蛋白II。對于人的總的凝結(jié)過程如圖1中所示。如其中所述的，纖維蛋白原到纖維蛋白I的轉(zhuǎn)化包括分別從纖維蛋白原的oc和卩鏈裂解兩個(gè)小的肽(A和B)。這些小的肽難以直接檢測和監(jiān)控；然而，可以通過凝膠電泳監(jiān)測由這種裂解產(chǎn)生的ct和e鏈的分子量的減小。同樣地，纖維蛋白I到交聯(lián)的纖維蛋白II的轉(zhuǎn)化可以通過在凝膠上的纖維蛋白原的Y鏈單體消失(其隨著在因子XIII對Y鏈單體的作用下轉(zhuǎn)化為Y-Y二聚物)來跟蹤。為了避免過早的反應(yīng)，生產(chǎn)纖維蛋白原/凝血酶固體敷料的先前的努力強(qiáng)調(diào)盡可能地將纖維蛋白原和凝血酶組分分開，以免它們在使用敷料之前形成太多的纖維蛋白。例如，得自HafslundNycomedPharma具有膠原載體的纖維蛋白原-凝血酶敷料(例如TachoComb、TachoCombH和TachoSi1)是通過將纖維蛋白原和凝血酶粒子懸浮在非水液體中、然后將懸浮液噴涂在膠原基質(zhì)上制備的。與含水環(huán)境相反，使用非水環(huán)境意在阻止纖維蛋白原和凝血酶之間的過度的相互作用。已經(jīng)提出了這一過程的替代方案，其每一個(gè)都是設(shè)計(jì)用于盡可能單獨(dú)地保持纖維蛋白原和凝血酶。例如，在美國專利7，l89，410中公開的纖維蛋白原/凝血酶固體敷料是如下制備的將粉末的纖維蛋白原和粉末的凝血酶在沒有任何溶劑的情況下混合，然后將干燥的粉末混合物施用于襯墊材料的粘性側(cè)面。在美國專利6，762，336和美國專利申請公布US2006/0155234Al中公開的纖維蛋白原/凝血酶固體敷料包含單獨(dú)的和離散的纖維蛋白原或凝血酶層，各自為基本上不含另一組分。然而，這些方法尚未完全成功。為了適當(dāng)?shù)仄鹱饔茫诶w維蛋白原/凝血酶的固體敷料必須滿足幾個(gè)標(biāo)準(zhǔn)。首先，纖維蛋白原和凝血酶必須成功地相互作用，以形成凝塊，并且這種凝塊越能粘附于傷口，則敷料的效果越好。大體上，敷料必需具有高度的完整性，因?yàn)橛捎诹芽p、剝落等引起的活性成分損失最終會導(dǎo)致性能降低并且得到差的使用者接受性。已有報(bào)道說，已知的纖維蛋白原/凝血酶固體敷料缺乏這些特征中的一種或多種。13此外，敷料必須是同質(zhì)的，因?yàn)榉罅系乃袇^(qū)域必須同樣起作用，以便保證其成功應(yīng)用。敷料還必須迅速地水合而無需顯著的或者專門的努力。相對平整的敷料通常是優(yōu)選的，如有可能要避免巻曲或不規(guī)則的非平面的結(jié)構(gòu)(這些傾向于與有效的應(yīng)用相抵觸，并且在有些情況下可以導(dǎo)致差的性能)。撓曲性是非常優(yōu)選的另一個(gè)特征，既能改善性能又能增加實(shí)際上可以處理的傷口的幾何形狀和位置的數(shù)目。盡管已知的纖維蛋白原/凝血酶固體敷料在水合時(shí)可能是柔軟的，但是它們在水合之前沒有足夠的水分含量以便為柔軟的。參見例如，Sondeen等人，J.Trauma54:280—285(2003));Holcomb等人，J.Trauma,55518-526;McManus&Wedmore，EmergencyMedicineReview,pp76-79，2005。在使用前存在于敷料中的纖維蛋白(特別是不溶性的交聯(lián)的纖維蛋白II)的量必須是相對小的。這個(gè)后一特征由于幾個(gè)原因而是重要的。首先，在生產(chǎn)過程中不溶性血纖維蛋白的存在通常產(chǎn)生質(zhì)量差的敷料，其可能表現(xiàn)出降低的完整性、缺乏均質(zhì)性和難以水合/水合緩慢。這些結(jié)果通?？梢杂杀绢I(lǐng)域技術(shù)人員視覺上檢測。例如，在基于纖維蛋白原/凝血酶的固體敷料中的預(yù)先形成特別地，粗糙的或凹凸不平的外觀經(jīng)常暗示在生產(chǎn)過程中形成了顯著量的纖維蛋白并且有可能妨礙未來的性能。在固體敷料表面上的堅(jiān)固的、光滑的&有光澤的"片狀物"也是纖維蛋白傾向于在使用過程中緩慢(甚至阻斷)水合的跡象。固體敷料的過度的向上巻曲是在生產(chǎn)過程中形成了顯著量的纖維蛋白的另一個(gè)跡象。在添加水或水溶液時(shí)，具有過度的纖維蛋白含量的敷料緩慢水合并且經(jīng)常需要液體的強(qiáng)力的施用，有時(shí)需要對表面進(jìn)行機(jī)械穿透，以便引發(fā)水合。此外，在水合之后，具有大量預(yù)先形成的纖維蛋白的敷料通常具有混色斑紋和明顯非均質(zhì)的外觀。的量，例如在美國專利申請公布US2006/0155234Al中描述的方法。根據(jù)這個(gè)試驗(yàn)，纖維蛋白原y鏈到交聯(lián)的y-y二聚物的轉(zhuǎn)化用作纖維蛋白存在的指示(轉(zhuǎn)化為y-y二聚物的y鏈的比例是產(chǎn)生的纖維蛋白的量的量度)。其它試驗(yàn)可以評價(jià)纖維蛋白原的其它組分鏈的變化，例如Aoc鏈轉(zhuǎn)化為游離的a鏈和纖維蛋白肽A,或者BP鏈轉(zhuǎn)化為游離的0鏈和血纖維蛋白肽B。這些改變可以如美國專利申請公布US2006/0155234Al中描述的y轉(zhuǎn)化為y-y的類似方式通過凝膠電泳來監(jiān)控。有趣的是，在美國專利申請公布US2006/0155234Al中報(bào)告了較高水平的y-y二聚化(最高10%)，顯示這些敷料在使用前包括顯著量的纖維蛋白。這個(gè)觀察結(jié)果可以解釋在這些敷料中的一些中觀察到的分層和/或裂縫問題。水合通常在幾秒內(nèi)^成，并且只;要將水(或某些水溶液)施加在敷料上。這種溶液可以是血液或來自使用該敷料的損傷位置的另一種體液，或者其可以來自某些外部來源，例如在敷料處于待處理傷口上時(shí)對其施加的鹽水或其它生理學(xué)可接受的含水溶液。較長的水合時(shí)間，即通常大于5秒時(shí)，會妨礙敷料的性能，因?yàn)榉罅峡赡軙魇Щ蛎撀涞揭后w中，所述溶液在形成充分交聯(lián)的纖維蛋白之前持續(xù)為自由流動的。已知持續(xù)出血的可能致命的后果，在使用過程中敷料水合的任何延遲都是非常不合乎需要的。另外，具有過多纖維蛋白含量的敷料的性能通常是差的，如在本文中描述的EVPA和粘著試驗(yàn)以及在體內(nèi)試驗(yàn)和臨床應(yīng)用期間中的評分降低所反映的。因此，本領(lǐng)域中仍需要可用于處置受傷組織的固體敷料，特別是用于在野外由于創(chuàng)傷性損傷所致的受傷組織。
發(fā)明內(nèi)容因此，本發(fā)明的目的是提供可以處置受傷的哺乳動物組織的固體敷料的生產(chǎn)方法，特別是用于處理由于創(chuàng)傷性損傷所致的受傷組織。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供用于處理受傷的哺乳動物組織(特別是人的組織)的固體敷料，以及用于生產(chǎn)這種敷料的中間產(chǎn)品。本發(fā)明的其它目的、特征和優(yōu)點(diǎn)可以在隨后的發(fā)明詳述中闡述，并且部分是從該說明書顯而易見的和/或可以通過實(shí)踐本發(fā)明來學(xué)習(xí)。這些目的和優(yōu)點(diǎn)通過本說明書中描述的方法和組合物來實(shí)現(xiàn)和達(dá)到，并且特別地在隨后的權(quán)利要求中指出。根據(jù)這些和其它目的，本發(fā)明的第一實(shí)施方案涉及用于處理哺乳動物的受傷組織的固體敷料的生產(chǎn)方法，包括(a)在抑制纖維組分和纖維蛋白原活化劑的液體含水混合物；(b)降低所述含水混合物的溫度以形成凍結(jié)的含水混合物；和(c)降低所迷凍結(jié)的含水混合物的水分含量，以生產(chǎn)具有止血劑層的固體敷料，所述止血劑層實(shí)質(zhì)上由纖維蛋白原組分和纖維蛋白原活化劑組成。本發(fā)明的其它實(shí)施方案涉及通過這種方法生產(chǎn)的固體敷料和在這個(gè)工藝過程中生產(chǎn)的中間產(chǎn)品。應(yīng)該理解，前述的一般說明和隨后的發(fā)明詳述只是示例性的和說明性的，并且意在提供對本文要求保護(hù)的本發(fā)明的進(jìn)一步說明，而非限制。附圖簡述圖2是用于本文中所述的離體豬動脈切開術(shù)試驗(yàn)的裝備的簡圖。圖3A-3C是表示實(shí)施例l得到的結(jié)果的圖。圖4A和圖4B是描述對在實(shí)施例6-12中制備的敷料進(jìn)行EVPA和粘著試驗(yàn)的結(jié)果的圖。圖5A和5B是實(shí)施例13中所示的在-80C儲存的凍結(jié)組合物的性能特征的圖。圖6A-6D和7A-7B表示在實(shí)施例20、21和22中所實(shí)現(xiàn)的發(fā)明詳述除非另有說明，本文中所用的所有技術(shù)和科學(xué)名詞具有與本發(fā)明所屬
技術(shù)領(lǐng)域：
技術(shù)人員通常理解的相同的含義。本文中提及的所有專利和出版物都被并入作為參考。如本文中使用的，使用單數(shù)的冠詞例如"一"、"一個(gè)"、和"該"意在部排除該冠詞的客體的復(fù)數(shù)形式，除非上下文明顯地和清楚地限定不是這樣。本文中使用的"患者，，是指需要醫(yī)療護(hù)理和/或治療的人或動物個(gè)體。本文中使用的"創(chuàng)傷"是指導(dǎo)致從循環(huán)系統(tǒng)損失血液和/或從患者身體損失任何其它液體的對患者的任何組織的任何損害。組織可以是內(nèi)部組織例如器官或血管，或者是外部組織例如皮膚。血液的損失可以是來自內(nèi)部例如來自破裂的器官，或者來自外部例如來自撕裂。創(chuàng)傷可以在軟組織例如器官中，或者在硬組織例如骨中。損壞可以是由任何試劑或來源引起的，包括創(chuàng)傷性損傷、感染或外科手術(shù)。本文中使用的"可吸收材料"是指這樣的的材料，其在哺乳動物體內(nèi)自然分解和/或通過哺乳動物身體分解為被消耗或清除的組分，使得不顯著地干擾創(chuàng)傷愈合和/或組織再生，并且不引起任何顯著的代謝紊亂。本文中使用的"穩(wěn)定性"是指決定材料活性和/或功能的那些特征的保持。本文中使用的"適合的"是指不會不利地影響敷料或其任何組分的穩(wěn)定性的材料。本文中使用的"粘合劑"是指改善敷料的止血劑層的組分的粘著和/或內(nèi)聚的化合物或化合物的混合物。本文中使用的"增溶劑，，是指改善一種或多種蛋白質(zhì)在含水溶劑中的溶出的化合物或化合物的混合物。17本文中使用的"填料"是指為敷料的止血劑層提供容積(bulk)和/或多孔性的化合物或化合物的混合物。本文中使用的"脫模劑"是指促進(jìn)敷料從生產(chǎn)模具取出的化合物或化合物的混合物。本文中使用的"發(fā)泡劑"是指在適合的條件下水合時(shí)產(chǎn)生氣體的化合物或化合物的混合物。本文中使用的"固體"是指在將敷料置于剛性表面上、朝向創(chuàng)傷的面向下、然后室溫靜置24小時(shí)時(shí)，敷料的形狀或形式不會顯著改變。本文中使用的"凍結(jié)"意思是指該組合物在被置于剛性表面、創(chuàng)傷面向下、然后在-40X:靜置24小時(shí)時(shí)組合物的形狀或形式基本上不會改變，但是在被置于剛性表面、朝向創(chuàng)傷的面向下、然后在室溫靜置24小時(shí)時(shí)形狀或形式該組合物會顯著變化。因此，在本發(fā)明的上下文中，"固體"敷料不同于"凍結(jié)"的，并且"凍結(jié)"的組合物或混合物不同于"固體"的。本發(fā)明的第一優(yōu)選實(shí)施方案涉及用于處理哺乳動物的受傷組織的固體敷料的生產(chǎn)方法，包括(a)在抑制纖維蛋白原組分被纖維活化劑的液體含水混合物；(b)降低所述含水混合物的溫度以形成凍結(jié)的含水混合物；和(c)降低所述凍結(jié)的含水混合物的水分含量，以生產(chǎn)具有止血劑層的固體敷料，所述止血劑層實(shí)質(zhì)上由纖維蛋白原組分和纖維蛋白原活化劑組成。如本文中使用的，"實(shí)質(zhì)上由…組成"是指在打算使用固體敷料處理受傷組織時(shí)，纖維蛋白原組分和纖維蛋白原活化劑是固體敷料的止血劑層的必需和必要的成分。因此，對于特定的應(yīng)用，止血其它成分，但是這些其它成分對于在正常情況下的預(yù)定的功能不是需要的，即，將敷料在預(yù)定應(yīng)用條件下應(yīng)用于組織時(shí)，這些其它成分對以減少血液和/或液體從正常的受傷組織流出不是必需的。然而，如果在特定的情況中的使用條件不是正常的，例如患者是患有因子XIII缺陷的血友病患者，則可以向止血劑層添加適當(dāng)?shù)牧硗饨M分例如因子Xlll/XIIIa或一些其它的轉(zhuǎn)氨酶，而不背離本發(fā)明的精神實(shí)質(zhì)。同樣地，本發(fā)明的固體敷料可以包含一個(gè)或多個(gè)這些止血劑層以及一個(gè)或多個(gè)其它層例如一個(gè)或多個(gè)支撐層(例如襯墊材料或內(nèi)部支撐材料)和防粘層。本發(fā)明的其它優(yōu)選實(shí)施方案涉及處理哺乳動物的受傷組織的方法，包括為受傷的組織放置本發(fā)明的固體敷料并且對敷料施加充分的壓力，其持續(xù)時(shí)間足以形成足夠的纖維蛋白以減少血液和/或其它液體從傷口的損失。其它優(yōu)選實(shí)施方案涉及實(shí)質(zhì)上由纖維蛋白原組分、纖維蛋白原活化劑和水的混合物組成的組合物，其中這些組合物在降低的溫度下穩(wěn)定至少24小時(shí)。這些包括凍結(jié)的組合物和液體組合物。這種組合物對于制備本發(fā)明的固體敷料的止血劑層特別有用，但是也可以使用它們本身來處理受傷的組織。根據(jù)本發(fā)明的某些實(shí)施方案，固體敷料的止血劑層形成或澆鑄為整體的。根據(jù)這些實(shí)施方案，可以通過在混合下將纖維蛋白原組分的水溶液和纖維蛋白原活化劑的水溶液引入到適合的容器例如模具等中來形成止血劑層。然后將得到的含水混合物冷卻，以形成纖維蛋白原組分和纖維蛋白原活化劑的凍結(jié)的含水混合物。根據(jù)本發(fā)明的某些其它實(shí)施方案，止血劑層從單一來源形成，例如包含纖維蛋白原和纖維蛋白原活化劑的混合物的水溶液。根據(jù)這些實(shí)施方案，可以如下形成止血劑層將纖維蛋白原組分和纖維蛋白原活化劑的液體含水混合物引入到適合的容器例如模具等中，然混合物。優(yōu)選地，在本發(fā)明的這些實(shí)施方案中的每一個(gè)，止血劑層優(yōu)選自始至終是實(shí)質(zhì)上均質(zhì)的。根據(jù)本發(fā)明的某些優(yōu)選實(shí)施方案，固體敷料是使用模具生產(chǎn)的。根據(jù)這些實(shí)施方案，固體敷料還可以任選地另外包括除了止血劑層和支撐層之外的防粘層。如本文中使用的，"防粘層"是指包含一種或多種試劑("脫模劑)"的層，所述試劑促進(jìn)或有助于固體敷料從已經(jīng)在其中生產(chǎn)固體敷料的模具中取出。優(yōu)選的這種試劑是蔗糖，但是其它適合的脫模劑包括明膠、透明質(zhì)酸酶及其衍生物(例如透明質(zhì)酸)、甘露糖醇、山梨糖醇和葡萄糖。優(yōu)選在引入纖維蛋白原組分和纖維蛋白原活化劑的液體含水混合物或溶液之前將這種防粘層布置或形成在模具中?；蛘?，在止血劑層中可以包含一種或多種的這種脫模劑。根據(jù)這些實(shí)施方案，可以在將液體含水混合物引入到模具中之前或者引入過程中將脫模劑引入到液體含水混合物中。還可以在形成液體含水混合物之前或形成過程中將脫模劑引入到纖維蛋白原組分的溶液和/或纖維蛋白原活化劑的溶液中。任何適合的容器中進(jìn)行混合。根據(jù)某些優(yōu)選實(shí)施方案，用于混合的容器是隨后在其中凍結(jié)液體含水混合物的模具。根據(jù)這種實(shí)施方案，同到模具中，從而使兩種溶液混合。或者，可以在容器中制備纖維蛋白原組分和纖維蛋白原活化劑的單獨(dú)的液體水溶液，然后引入到模具中。給定模具的大小和幾何形狀可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)要生產(chǎn)的固體敷料的期望大小和形狀憑經(jīng)驗(yàn)決定。用于模具的適合的材料包括但不限于聚合物例如聚氯乙烯(PVC)、二醇改性的聚對苯二甲酸乙二醇酯和聚乙烯。其它適合的材料包括金屬例如不銹鋼、紙、紙板和防水的紙或紙板。模具還可以由迅速溶解的材料制成，所述材料在保存模具的溫度是固體的，和/或由能夠凍干為固態(tài)的材料制成。根據(jù)本發(fā)明的方法，形成纖維蛋白原組分和纖維蛋白原活化劑的液體含水混合物在充分低的溫度進(jìn)行，以便抑制纖維蛋白原組分被纖維蛋白原活化劑活化。纖維蛋白原組分被纖維蛋白原活化劑活化可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知或可用的任何適合的方法來測定。例如，從纖維蛋白原的表面狀況的偏差來視覺上進(jìn)行檢測。固體敷料表面上的堅(jiān)固的、光滑的和有光澤的"片材"，與邊緣的過度巻曲一樣，也是纖維蛋白的跡象。此外，在水合之后，具有大量纖維蛋白的敷料通常具有混色斑紋和明顯非均質(zhì)的外觀。優(yōu)選地，纖維蛋白原組分的活化可以通過各種生物化學(xué)試驗(yàn)來評價(jià)，例如在美國專利申請公布US2006/0155234Al中描述的方法。根據(jù)這個(gè)試驗(yàn)，纖維蛋白原y鏈到交聯(lián)的y-y二聚物的轉(zhuǎn)化可以用作纖維蛋白原組分被纖維蛋白原活化劑活化的指示(轉(zhuǎn)化為y-y二聚物的y鏈的比例與活化的纖維蛋白原的量有關(guān))。化，例如Act鏈轉(zhuǎn)化為游離的oc鏈和纖維蛋白肽A，或者B0鏈轉(zhuǎn)化為游離的P鏈和血纖維蛋白肽B。這些改變可以如美國專利申請公布US2006/0155234Al中描述的y轉(zhuǎn)化為y-y的類似方式通過凝膠電泳來監(jiān)控?？蓹z測的y-y二聚物，盡管在某些情況中敷料包含最多9。/。的y-y二聚物、甚至最多38%的y-y二聚物可能也是可接受的。類似地，優(yōu)選的液體含水混合物可以包含最多60。/。的游離cc鏈，并且仍令人滿意地起作用。特別優(yōu)選的含水混合物包含低于60。/。的游離的oc鏈，更優(yōu)選低于50%,甚至更優(yōu)選低于40%、低于30%、低于20%或低于10%的游離的oc鏈。根據(jù)某些優(yōu)選實(shí)施方案，在液體含水混合物保持在適合的溫度(優(yōu)選在4"C±2匸或低于4°C土2。C)時(shí)，這些值隨時(shí)間不發(fā)生顯著變化。維蛋白原活化劑活化。優(yōu)選地，這個(gè)溫度為2x:到8'C或低于2t:到8x:，更優(yōu)選為4"c土2x:?？梢允褂萌魏芜m合的方法來實(shí)現(xiàn)用于制備液體含水混合物所需的溫度。根據(jù)某些優(yōu)選實(shí)施方案，通過將容器或模具置于溫度等于或低于所需溫度的環(huán)境中而將其冷卻到所需溫度。優(yōu)選地，將容器或模具冷卻到實(shí)質(zhì)上低于制備液體含水混合物所需溫度的溫度。根據(jù)特別優(yōu)選的實(shí)施方案，通過將容器或模具置于溫度為約-8(TC的環(huán)境中維持充分的時(shí)間來將其冷卻。根據(jù)其它實(shí)施方案，在制備液體含水混合物之前將纖維蛋白原組分的水溶液和纖維蛋白原活化劑的水溶液冷卻到期望的溫度。這種冷卻可以通過任何適合的方法實(shí)現(xiàn)，例如將包含水溶液的容器置于冰上。在已經(jīng)制備了液體含水混合物之后，可以將其儲存在適合的溫度下，或者可以將其直接使用來制備本發(fā)明的凍結(jié)的含水混合物。優(yōu)選地，直接使用液體含水混合物來制備凍結(jié)的含水混合物。根據(jù)本發(fā)明的某些優(yōu)選實(shí)施方案，隨后將液體含水混合物物的溫度。這種凍結(jié)的含水混合物可以直接使用，或者可以將其儲存在適合的溫度下。將液體含水混合物冷卻到所需溫度。例如，可以將液體含水混合物引入到已經(jīng)被冷卻到足夠引起液體含水混合物凍結(jié)的溫度的第二容器或模具中。或者，可以將容器或模具中的液體含水混合物置于具有足以引起液體含水混合物凍結(jié)的溫度的環(huán)境。這種環(huán)境可以包括例如設(shè)置為預(yù)定溫度的冷卻器，例如-5°C、10°C、-15°C、-20匸、-25匸、-30'C、-40°C、-5(TC或-8(TC?？梢詫⒛＞卟贾脼槭沟闷湟粋€(gè)或多個(gè)表面與已經(jīng)被和/或正在被冷卻到所需溫度的表面密切接觸?；蛘撸梢詫后w水溶液的模具或容器直接放置在干冰(-78X:)上，或者放置在適合的冷水浴中，例如干冰/丙酮、干冰/液氮或單獨(dú)的液氮。還可以將模具或容器置于由液氮蒸發(fā)產(chǎn)生的氮?dú)饬骰蚱渌m合的低溫學(xué)的氣體冷卻劑物流中。在這種情況中，可能期望氣態(tài)的物流接觸待冷卻模具的單個(gè)側(cè)面。在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，可以將這種物流導(dǎo)向到待冷卻對象的兩個(gè)或更多個(gè)側(cè)面上。使用本發(fā)明的方法制備的優(yōu)選的凍結(jié)液體含水混合物通常不含可檢測的Y-Y二聚物，盡管在某些情況中混合物包含最多9%的Y-Y二聚物、甚至最多38%的Y-Y二聚物可能也是可接受的。類似地，優(yōu)選的凍結(jié)含水混合物可以包含最多57。/。的游離oc鏈，并且仍令人滿意地起作用。特別優(yōu)選的凍結(jié)含水混合物包含低于57%的游離的ct鏈，更優(yōu)選低于46%,甚至更優(yōu)選低于46%、低于31%、低于20%、低于16°/?；虻陀?0y。的游離的cc鏈。根據(jù)某些優(yōu)選實(shí)施方案，這些值隨時(shí)間不發(fā)生顯著變化。凍結(jié)的含水混合物可以儲存或者直接使用，用于制備固體敷料或用于處理受傷組織。本發(fā)明的某些實(shí)施方案涉及這些凍結(jié)的含水混合物，并且涉及它們用于制備固體敷料或用于治療受傷組織的用途。優(yōu)選地，在用于制備固體敷料時(shí)，使凍結(jié)的含水混合物經(jīng)過例如凍干或冷凍干燥的過程，使水分含量降低到期望水平，即，降低到其中敷料是固體而非凍結(jié)的水平，并且因此在豎立、朝向傷口的表面向下、在室溫下24小時(shí)時(shí)形狀或形式不會顯著變化。還可以采用實(shí)現(xiàn)相同結(jié)果的類似方法，例如干燥、噴涂干燥、真空干燥和玻璃化。如本文中使用的，"水分含量"是指敷料中可自由利用的水分的量。"可自由利用的"是指水沒有與敷料的一種或多種非液體組分結(jié)合或絡(luò)合。本文中所述的水分含量是指通過實(shí)質(zhì)上與FDA批準(zhǔn)的改進(jìn)的卡爾費(fèi)希爾法類似的方法(Meyer和Boyd，AnalyticalChem.，May等人，J.Biol.Standardization,CentersforBiologiesEvaluationandResearch,FDA，DocketNo.89D-0140，83-93;1990)或者通過近紅外光語學(xué)測定的水平。冷凍干燥的適當(dāng)條件以形成固體敷料，所述條件包括(但不限于)其溫31:215-219,195910:249-259，198223度和持續(xù)時(shí)間。這種條件取決于例如凍結(jié)含水混合物的水分含量、期望的固體敷料水分含量、其中進(jìn)行該過程的環(huán)境和使用的設(shè)備。通過本發(fā)明的方法生產(chǎn)的固體敷料也是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案。這種敷料包含充分的纖維蛋白原組分和充分的纖維蛋白原活化劑，以便在被施用于受傷組織時(shí)在有或者沒有另外的水合的情況下形成纖維蛋白凝塊。這種敷料不含不合需要的量的纖維蛋白，無論其是否是交聯(lián)的。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以基于以下情況憑經(jīng)驗(yàn)決定特定量的纖維蛋白是否是不合需要的固體敷料的預(yù)定性能，諸如外觀質(zhì)量、柔韌性、水合時(shí)間等；以及其預(yù)定的用途(例如設(shè)計(jì)用于滲出傷口的敷料可以容忍比設(shè)計(jì)用于動脈傷口的敷料更大量的纖維蛋白)。存在于給定敷料中的纖維蛋白的量可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知和可利用的任何適合的方法來測定。例如，可以觀察與均質(zhì)表面外觀的偏差來視覺上檢測特定敷料中的纖維蛋白的量。固體敷料的表面上的堅(jiān)固的、光滑的和有光澤的"片材"，與邊緣的過度巻曲一樣，也是纖維蛋白的跡象。此外，在水合之后，具有大量纖維蛋白的敷料通常具有混色斑紋和明顯非均質(zhì)的外觀?；蛘?，纖維蛋白的量還可以通過各種生物化學(xué)試驗(yàn)來評價(jià)，例如在美國專利申請公布US2006/0155234Al中描述的方法。根據(jù)這個(gè)試驗(yàn)，纖維蛋白原Y鏈到交聯(lián)的Y-Y二聚物的轉(zhuǎn)化用作纖維蛋白存在的指示(轉(zhuǎn)化為Y-Y二聚物的Y鏈的比例是產(chǎn)生的纖維蛋白的量的量度)?；?，例如Act鏈轉(zhuǎn)化為游離的ot鏈和纖維蛋白肽A，或者BP鏈轉(zhuǎn)化為游離的P鏈和血纖維蛋白肽B。這些改變可以如美國專利申請公布US2006/0155234Al中描述的Y轉(zhuǎn)化為Y-Y的類似方式通過凝膠電泳來監(jiān)控。的y-y二聚物，盡管在某些情況中混合物包含最多9。/。的y-Y二聚物、甚至最多38%的y-y二聚物可能也是可接受的。類似地，優(yōu)選的凍結(jié)含水混合物可以包含最多57。/。的游離ct鏈，并且仍令人滿意地起作用。特別優(yōu)選的凍結(jié)含水混合物包含低于57。/。的游離的oc鏈，更優(yōu)選低于46%，甚至更優(yōu)選低于46%、低于31%、低于20%、低于16%或低于10%的游離的oc鏈。根椐某些優(yōu)選實(shí)施方案，固體敷料的止血劑層還可以包含粘合劑，以便促進(jìn)或改善各層之間和/或?qū)訉θ魏沃螌拥恼持＿m合的粘合劑的說明性實(shí)例包括但不限于蔗糖、甘露糖醇、山梨糖醇、明膠、透明質(zhì)酸酶及其衍生物例如透明質(zhì)酸、麥芽糖、聚維酮、淀粉、脫乙酰殼多糖及其衍生物、和纖維素衍生物例如羧甲基纖維素，以及其兩種或更多種的混合物。這種粘合劑可以被引入到纖維蛋白原組分和纖維蛋白原活化劑的含水混合物中，或者可以在混合之前引入到纖維蛋白原組分的水溶液中和/或纖維蛋白原活化劑的水溶液中。固體敷料的止血劑層還可以任選地包含一種或多種適合的填料，例如蔗糖、乳糖、麥芽糖、絲制品、纖維蛋白、膠原、白蛋白、聚山梨酯(Tween)、殼多糖、脫乙酰殼多糖及其衍生物例如NOCC-脫乙酰殼多糖、海藻酸及其鹽、纖維素及其衍生物、蛋白多糖、透明質(zhì)酸酶及其衍生物例如透明質(zhì)酸、羥基乙酸聚合物、乳酸聚合物、羥基乙酸/乳酸共聚物、及其兩種或更多種的混合物。這種填料可以被引入到纖維蛋白原組分和纖維蛋白原活化劑的含水混合物中，或者可以在混合之前引入到纖維蛋白原組分的水溶液中和/或纖維蛋白原活化劑的水溶液中。固體敷料的止血劑層還可以任選地包含一種或多種適合的增溶劑，例如蔗糖、右旋糖、甘露糖、海藻糖、甘露糖醇、山梨糖醇、白蛋白、透明質(zhì)酸酶及其衍生物例如透明質(zhì)酸、山梨酸酯、聚山梨酯(Tween)、山梨聚糖(SPAN)、及其兩種或更多種的混合物。這種增中，或者可以在混合之前引入到纖維蛋白原組分的水溶液中和/或纖維蛋白原活化劑的水溶液中。固體敷料的止血劑層還可以任選地包含一種或多種適合的起泡劑，例如生理學(xué)可接受的酸(例如檸檬酸或乙酸)和生理學(xué)適合的堿(例如碳酸氫鈉或碳酸釣)的混合物。其它適合的起泡劑包括但不限于包含加壓氣體的干燥粒子，例如包含二氧化碳(參見，例如，美國專利3，012，893)或其它生理學(xué)可接受的氣體(例如氮?dú)饣驓鍤?、和藥理學(xué)可接受的過氧化物的糖粒子。這種發(fā)泡劑可以被引入到纖維蛋白原組分和纖維蛋白原活化劑的含水混合物中，或者可以在混合之前引入固體敷料的止血劑層還可以任選地包含適合的鈣離子來源，例如氯化4丐，和/或纖維蛋白交聯(lián)劑例如轉(zhuǎn)氨酶(例如因子VlII/XIIIa)或戊二醛。這種鉤離子和/或纖維蛋白交聯(lián)劑的來源可以被引入到纖維蛋白原組分和纖維蛋白原活化劑的含水混合物中，或者可以在混合之前引入到纖維蛋白原組分的水溶液中和/或纖維蛋白原活化劑的水溶液中。特定的固體敷料的適合的水分含量可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)其預(yù)定的應(yīng)用憑經(jīng)驗(yàn)決定。例如，在本發(fā)明的某些實(shí)施方案中，較高的水分含量與更柔軟的固體敷料相關(guān)。因此，在設(shè)計(jì)用于肢端的傷口的固體敷料中，優(yōu)選水分含量最低為6%，甚至是6%-44%的范圍內(nèi)。同樣地，在本發(fā)明的其它些實(shí)施方案中，較低的水分含量與更剛性的固體敷料相關(guān)。因此，在設(shè)計(jì)用于平整傷口(例如腹部或胸部的傷口)的固體敷料中，優(yōu)選水分含量為低于6%，甚至更優(yōu)選為1%-6%的范圍內(nèi)。因此，固體敷料的適合的水分含量的說明性實(shí)例包括但不限于以下(每個(gè)值為±0.9%):低于53%、低于44%、低于28%、低于24%、低于16%、低于12%、低于6%、低于5%、低于4%、低于3%、低于2.5%、低于2%、低于1.4%、0-12%(不含端值)、0-6%、0-4%、0-3°/。、0-2%、0-1%、1-16%、1-11%、1-8%、1-6%、1-4%、1-3%、1-2%、和2-4%。固體敷料的止血劑層中的纖維蛋白原組分可以是已知的和本領(lǐng)域技術(shù)人員可得到的任何適合的纖維蛋白原。纖維蛋白原組分還可以是纖維蛋白原的功能衍生物或代謝物，例如纖維蛋白原oc、P和/或y鏈、可溶性纖維蛋白i或纖維蛋白n、或其兩種或更多種的混合物。用于特定應(yīng)用的具體的纖維蛋白原(或功能衍生物或代謝物)可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員憑經(jīng)驗(yàn)選擇。如本文中使用的，術(shù)語"纖維蛋白原"意思是包括纖維蛋白原和少量的因子XIII/因子XlIIa、或一些其它這種轉(zhuǎn)氨酶的混合物。本領(lǐng)域技術(shù)人員通常認(rèn)為這種少量是在根據(jù)目前原中發(fā)現(xiàn)的量，并且可以是任何量，典型地為0.1-20單位/mL。優(yōu)選地，作為固體敷料的纖維蛋白原組分使用的纖維蛋白原是適合于引入到哺乳動物中的純化的纖維蛋白原。典型地，這種纖維蛋白原是包括因子XlII/XIIIa并且已經(jīng)被純化到適當(dāng)水平并且病毒滅活的人血漿蛋白的混合物的一部分。用于制備固體敷料的優(yōu)選的纖維蛋白原水溶液包含約37.5mg/mL的纖維蛋白原，pH為約7.4±0.1,盡管5.5-8.5的pH范圍是可接受的。作為纖維蛋白原組分使用的適合的纖維蛋白原已經(jīng)在本領(lǐng)域中有所描述，例如美國專利5，716，645，并且類似的材料是市售的，例如得自例如Sigma-Aldrich、EnzymeResearchLaboratories、HaematologicTechnologies和Aniara。優(yōu)選地，纖維蛋白原組分以每平方厘米固體敷料為約1.5-約13.0mg(±0.9mg)纖維蛋白原的量存在，更優(yōu)選為約3.0-約13.0mg/cm2。然而，取決于固體敷料的特定應(yīng)用，可以采用更大或更小的量。例如，根據(jù)其中需要增加粘著的某些實(shí)施方案，纖維蛋白原組分以每平方厘米固體敷料為約ll.O-約13.Omg(士O.9mg)的量存在。同樣地，根據(jù)設(shè)計(jì)用于處理包含低壓血管的某些實(shí)施方案，可以使用纖維蛋白原組分的較低水平。本領(lǐng)域技術(shù)人員已知將纖維蛋白原轉(zhuǎn)化為纖維蛋白的任何物質(zhì)或物質(zhì)的混合物。適合的纖維蛋白原活化劑的說明性實(shí)例包括但不限于以下凝血酶，例如人凝血酶或牛凝血酶，和凝血酶原，例如人凝血酶原或凝血酶原復(fù)合物濃縮物(凝血因子II、VII、IX和X的混合物)；蛇毒，例如巴曲酶、爬蟲凝血酶(巴曲酶和因子XIIIa的混合物)、巴西矛頭腹蛇酶(bothrombin)、蛇毒類凝血酶(calobin)、fibrozyme、和從巴西矛頭蝮Cffo^r^w力rarscy^w)的毒液分離的酶；和這些中的任何兩種或更多種的混合物。參見例如，Dascombe等人，Thromb.Haemost.78:947-51(1997);Hahn等人，J.Biochem.(Tokyo)119:835-43(1996);Fortova等人，J.Chromatogr.S.Biomed.Appl.694:49-53(1997);和Andriao-Escarso等人，Toxicon.35:1043-52(1997)。優(yōu)選地，纖維蛋白原活化劑是凝血酶。更優(yōu)選地，纖維蛋白原活化劑是哺乳動物凝血酶，盡管在適當(dāng)?shù)那闆r中也可使用鳥和/或魚的凝血酶。盡管可以在固體敷料中使用任何適合的哺乳動物凝血酶，但是對于固體敷料的預(yù)定使用來說，用于止血劑層的凝血酶優(yōu)選是已經(jīng)充分純化的并且病毒滅活的人血漿蛋白質(zhì)的凍干混合物。適合的凝血酶可以得自商業(yè)來源例如Sigma-Aldrich、EnzymeResearchLaboratories、HaematologicTechnologies和BiomolInternational用于制備固體敷料的特別優(yōu)選的凝血酶水溶液包含效價(jià)為約10-2000±50國際單位/mL的凝血酶，更優(yōu)選效價(jià)為約25±2.5國際單位/mL。其它組分可以包括白蛋白(通常為約0.1mg/mL)和甘氨酸(通常為約100mM±0.1mM)。這個(gè)特別優(yōu)選的凝血酶水溶液的pH通常為6.5-7.8，優(yōu)選為7.4±0.1，盡管5.5-8.5的pH范圍也是可以接受的。除了止血劑層之外，固體敷料可以任選地另外包括一個(gè)或多個(gè)支撐層。如本文中使用的，"支撐層"是指維持或改善固體敷料的結(jié)構(gòu)完整性和/或在將這種敷料應(yīng)用于受傷組織時(shí)維持或改善形成的纖維蛋白凝塊的結(jié)構(gòu)完整性的材料。根據(jù)本發(fā)明的某些優(yōu)選實(shí)施方案，所述支撐層在與被應(yīng)用于受傷組織的側(cè)面的相對側(cè)面上包括襯墊材料。這種襯墊材料可以借助生理學(xué)可接受的粘合劑附著，或者可以是自粘著的(例如通過具有足夠的表面靜電荷)。優(yōu)選地，在引入纖維蛋白原組分和纖維蛋白原活化劑的液體含水混合物或溶液之前將襯墊材料置于模具或容器中?？梢灾皩⑸韺W(xué)可接受的粘合劑置于襯墊材料上。襯墊材料可以包括一種或多種可再吸收材料或一種或多種不可再吸收材料或其混合物。優(yōu)選地，襯墊材料是單純的可再吸收材料?？梢詫⒈绢I(lǐng)域技術(shù)人員已知和可得到的任何適合的可再吸收材料用于本發(fā)明。例如，可再吸收材料可以是蛋白質(zhì)物質(zhì)，例如絲制品、纖維蛋白、角蛋白、膠原和/或明膠?；蛘?，可再吸收材料可以是碳水化合物物質(zhì)，例如藻酸鹽、殼多糖、纖維素、蛋白多糖(例如聚N-乙?；被咸烟?、透明質(zhì)酸酶及其衍生物(例如透明質(zhì)酸)、羥基乙酸聚合物、乳酸聚合物、或幾基乙酸/乳酸共聚物?？稍傥詹牧线€可以包括蛋白質(zhì)物質(zhì)的混合物或碳水化合物物質(zhì)的混合物或蛋白質(zhì)物質(zhì)與碳水化合物物質(zhì)的混合物。具體的可再吸收材料可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)固體敷料的預(yù)定應(yīng)用憑經(jīng)驗(yàn)選擇。根據(jù)本發(fā)明的某些優(yōu)選實(shí)施方案，可再吸收材料是碳水化合物物質(zhì)。特別優(yōu)選的可再吸收材料的說明性實(shí)例包括但不限于在商品名Vicryl(—種羥基乙酸/乳酸共聚物)和DEXON(—種羥基乙酸聚合物)下銷售的材料?？梢允褂帽绢I(lǐng)域技術(shù)人員已知和可得到的任何適合的不可再吸收材料作為襯墊材料。適合的不可再吸收材料的說明性實(shí)例包括但不限于塑料、硅氧烷聚合物、紙和紙制品、乳膠、紗布等等。根據(jù)其它優(yōu)選實(shí)施方案，支撐層包括內(nèi)部的支撐材料。這在某些實(shí)施方案中其可以位于兩個(gè)相鄰的止血劑層之間。優(yōu)選地，在程中將內(nèi)部的支撐材料置于模具或容器中與襯墊材料中的情況一樣，內(nèi)部的支撐材料可以是可再吸收材料或不可再吸收材料，或其混合物，例如兩種或更多種可再吸收材料的混合物或兩種或更多種不可再吸收材料的混合物或者可再吸收材料和不可再吸收材料的混合物。根據(jù)其它優(yōu)選實(shí)施方案，支撐層可以包括在敷料的面向傷口的側(cè)面(即，要被應(yīng)用于受傷組織的側(cè)面)上的正面支撐材料。與襯墊材料和內(nèi)部的支撐材料中的情況一樣，正面支撐材料可以是可再吸收材料或不可再吸收材料，或其混合物，例如兩種或更多種可再吸收材料的混合物或兩種或更多種不可再吸收材料的混合物可能是可再吸收材料和不可再吸收材料的混合物。根據(jù)其它優(yōu)選實(shí)施方案，固體敷料在止血劑層之外還包括襯墊材料和內(nèi)部的支撐材料其二者，也就是說，固體敷料包括除止血劑層之外的兩個(gè)支撐層。根據(jù)其它優(yōu)選實(shí)施方案，固體敷料包括除止血劑層之外的正面支撐材料和內(nèi)部的支撐材料其二者。根據(jù)其它優(yōu)選實(shí)施方案，固體敷料包括除止血劑層之外的襯墊材料、正面支撐材料和內(nèi)部的支撐材料。本發(fā)明的敷料的各個(gè)層可以借助本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的和可以使用的任何適合的方法彼此附著。例如，可以對襯墊材料(在存在時(shí))施加生理學(xué)可接受的密封劑，并且隨后將止血劑層附著于其上面。在本發(fā)明的某些實(shí)施方案中，生理學(xué)可接受的密封劑的剪切強(qiáng)度和/或結(jié)構(gòu)使得襯墊材料可以從在將敷料施用于受傷組織之后由止血劑層形成的纖維蛋白凝塊分離。在其它實(shí)施方案中，生理學(xué)可接受的密封劑的剪切強(qiáng)度和/或結(jié)構(gòu)使得襯塾材料可以從在將敷料施用于受傷組織之后由止血劑層形成的纖維蛋白凝塊分離。纖維蛋白原活化劑可以得自本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的和可利用的任何適當(dāng)?shù)膩碓?，包括但不限于以下得自商業(yè)的供應(yīng)商，例如Sigma-Aldrich和EnzymeResearchLaboratories;通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的和可利用的任何方法從人或哺乳動物血漿提取和純化；得自由包含根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)重組DNA技術(shù)引入的表達(dá)人或哺乳動物血漿蛋白質(zhì)的基因的血漿或重組的組織培養(yǎng)物、病毒、酵母菌、細(xì)菌等衍生的上層清液或糊狀物；和/或得自包含已經(jīng)根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)轉(zhuǎn)基因技術(shù)引入的并且表達(dá)所需纖維蛋白原和/或所需纖維蛋白原活化劑的基因的轉(zhuǎn)基因哺乳動物(例如山羊、綿羊、牛)的體液(例如血液、奶、淋巴、尿等)。根據(jù)本發(fā)明的某些優(yōu)選實(shí)施方案，纖維蛋白原是哺乳動物纖維蛋白原，例如牛族動物的纖維蛋白原、豬科動物的纖維蛋白原、綿羊的纖維蛋白原、馬屬的纖維蛋白原、山羊的纖維蛋白原、貓科動物的纖維蛋白原、犬科動物的纖維蛋白原、鼠科動物的纖維蛋白原或者人類的纖維蛋白原。根據(jù)其它實(shí)施方案，纖維蛋白原是鳥的纖維蛋白原或魚的纖維蛋白原。根據(jù)任何這些實(shí)施方案，纖維蛋白原可以是重組生產(chǎn)的纖維蛋白原或轉(zhuǎn)基因的纖維蛋白原。根據(jù)本發(fā)明的某些優(yōu)選實(shí)施方案，纖維蛋白原活化劑是哺乳動物的凝血酶，例如，牛族動物的凝血酶、豬科動物的凝血酶、綿羊的凝血酶、馬屬的凝血酶、山羊的凝血酶、貓科動物的凝血酶、犬科動物的凝血酶、鼠科動物的凝血酶和人類的凝血酶。根據(jù)其它實(shí)施方案，凝血酶是鳥的凝血酶或魚的凝血酶。根據(jù)任何這些實(shí)施方案，凝血酶可以是重組生產(chǎn)的凝血酶或轉(zhuǎn)基因的凝血酶。作為一般的建議，在固體敷料中使用的纖維蛋白原和/或質(zhì)的最佳:力和穩(wěn)定性的二度。優(yōu)選地，纖維蛋白原和^或纖維蛋白原活化劑已經(jīng)經(jīng)過多重的純化步驟，例如沉淀、濃集、滲濾和親和色鐠法(優(yōu)選免疫親和色譜法)，以便除去在固體敷料的生產(chǎn)、儲存和/或使用過程中引起纖維蛋白原和/或纖維蛋白原活化劑破碎、活化和/或降解的物質(zhì)。優(yōu)選通過純化除去的這種物質(zhì)的說明性實(shí)例包括蛋白質(zhì)污染物，例如間-ct胰蛋白酶抑制物和前-oc胰蛋白酶抑制劑；非蛋白質(zhì)污染物，例如脂質(zhì)；和蛋白質(zhì)和非蛋白質(zhì)污染物的混合物，例如脂蛋白。優(yōu)選對在固體敷料中使用的纖維蛋白原活化劑的量進(jìn)行選擇，以便優(yōu)化其效力和穩(wěn)定性。同樣地，對于固體敷料的特定應(yīng)用的適合的濃度可以由相關(guān)領(lǐng)域技術(shù)人員憑經(jīng)驗(yàn)決定。根據(jù)本發(fā)明的某些優(yōu)選實(shí)施方案，在纖維蛋白原活化劑是人類的凝血酶時(shí)，采用的人凝血酶的量為2.50單位/mg纖維蛋白原組分和0.025單位/mg纖維蛋白原之間(所有數(shù)值是±0.001)。其它優(yōu)選實(shí)施方案涉及其中凝血酶的量為0.250單位/mg纖維蛋白原到0.062單位/mg纖維蛋白原的類似的固體敷料，以及其中凝血酶的量為0.125單位/mg纖維蛋白原到0.080單位/mg纖維蛋白原的固體敷料。在使用固體敷料過程中，優(yōu)選纖維蛋白原和纖維蛋白原活化劑在將敷料應(yīng)用于受傷組織時(shí)被從出血性傷口流出的患者的內(nèi)源流體活化?；蛘撸谄渲袕氖軅M織流出的流體不足以提供蛋白質(zhì)層的充分水合的情況中，纖維蛋白原組分和/或凝血酶可以在將敷料應(yīng)用于受傷組織之前或過程中通過適合的、生理學(xué)可接受的液體活化，所述液體任選地包含任何必需的輔因子和/或酶。在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，止血劑層還可以包含一種或多種增補(bǔ)劑，例如生長因子、藥物、多克隆和單克隆抗體和其它化合物。這種增補(bǔ)劑的說明性實(shí)例包括但不限于以下纖維蛋白溶解抑制劑，例如抑肽酶(aprotonin)、氨甲環(huán)酸和s-氨基己酸；抗生素，例如四環(huán)素和環(huán)丙沙星、阿莫西林、和甲硝唑；抗凝血劑，例如活化的蛋白C、肝素、前列環(huán)素、前列腺素(特別是(PGI2)、白細(xì)胞三烯、抗凝血酶III、ADP酶、和血纖維蛋白溶解酶原活化劑；甾體類，例如地塞米松和用于抑制炎癥的前列環(huán)素、前列腺素、白細(xì)胞三烯和/或細(xì)胞分裂素的抑制劑；心血管藥物，例如釣通道阻斷劑、血管擴(kuò)張劑和血管收縮劑；趨化物；局部麻醉劑，例如布比卡因；和抗增殖藥/抗瘤藥例如5-氟尿嘧啶(5-FU)、紫杉酚和/或泰索帝；抗病毒藥，例如丙氧鳥普(gangcyclovir)、齊多夫定、金剛烷胺、阿糖腺苷、利巴韋林(ribaravin)、曲氟尿苷、阿昔洛韋、二脫氧尿苷、和病毒組分或基因產(chǎn)物的抗體；細(xì)胞因子，例如ct-或或Y-干擾素、a-或p-32腫瘤壞死因子、和白細(xì)胞介素；集落刺激因子；紅細(xì)胞生成素；抗真菌劑，例如大扶康、酮康唑和制霉菌素；驅(qū)寄生蟲劑，例如噴他脒；抗炎劑，例如cc-l-抗-胰蛋白酶和ct-l-抗凝乳蛋白酶；麻醉劑，例如布比卡因；鎮(zhèn)痛藥；防腐劑；激素；維生素和其它營養(yǎng)增補(bǔ)劑；糖蛋白；粘連蛋白；肽和蛋白質(zhì)；碳水化合物(簡單的和/或復(fù)雜的碳水化合物)；蛋白多糖；抗血管生成素；抗原；脂質(zhì)或脂質(zhì)體；寡核苷酸(有義和/或反義DNA和/或RNA);和基因治療劑。在本發(fā)明的其它實(shí)施方案中，如果存在，襯墊層和/或內(nèi)部的支撐層可以包含一種或多種增補(bǔ)劑。根據(jù)本發(fā)明的某些優(yōu)選實(shí)施方案，治療性增補(bǔ)劑以大于其在纖維蛋白中的溶解度極限的量存在。以下實(shí)施例只是說明性的，并不打算正如隨后的權(quán)利要求定義的本發(fā)明的范圍。對于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說顯而易見的是，可以對本發(fā)明的方法進(jìn)行各種修飾和改變而不脫離本發(fā)明的精神實(shí)質(zhì)和范圍。因此，本發(fā)明意在涵蓋本發(fā)明的修飾和變體，條件是它們落入隨后的權(quán)利要求及其等價(jià)物范圍內(nèi)。具體實(shí)施方案實(shí)施例通過離體的豬動脈切開術(shù)(EVPA)性能試驗(yàn)測定敷料密封受損血管的能力，所述性能試驗(yàn)第一次描述在美國專利6,762，336中。EVPA性能試驗(yàn)評價(jià)敷料阻止流體流過豬動脈中的孔的能力。盡管在美國專利6，762，336中描述的方法已經(jīng)被證明可用于評價(jià)止血敷料，但是它沒能精確地復(fù)制體內(nèi)成功所需的條件。更具體地，在美國專利6，762，336中公開的方法需要在37匸進(jìn)行試驗(yàn)，而在實(shí)際情況中，傷口溫度典型地低于該溫度。這個(gè)降低的溫度可以顯著地減少纖維蛋白形成的速率及其在創(chuàng)傷患者中的止血效力。參見例如，Acheson等人，J.Trauma59:865-874(2005)。美國專利6，762，336中的試驗(yàn)還沒有要求敷料對損傷組織的高度粘著。因此，通過這種試驗(yàn)不能檢測其中形成了纖維蛋白但是敷料沒能緊緊地附著于組織的失敗模式。另外，在治療某些創(chuàng)傷患者的情況中，可能超過在該方法中所用的壓力(200mHg)。總的說來，其結(jié)果是，必須進(jìn)行典型地涉及小動物(例如大鼠和兔)的許多的動物試驗(yàn)，以便在大的動物、現(xiàn)實(shí)的創(chuàng)傷研究和在臨床環(huán)境中正確地預(yù)測敷料性能。為了使開發(fā)本發(fā)明所需的時(shí)間量和動物研究數(shù)最小化，開發(fā)了改進(jìn)的離體試驗(yàn)方法。為此，對進(jìn)行敷料試驗(yàn)的基礎(chǔ)條件進(jìn)行改變，并且試驗(yàn)參數(shù)的嚴(yán)重程度增加到包括在較低溫度(即29-33。C對37。C,代表了現(xiàn)實(shí)的傷口溫度的實(shí)際生理學(xué)攻擊的試驗(yàn)(Acheson等人，J.Trauma59:865-874(2005))、更高的壓力(即250mmHg對200inmHg)、更長的試驗(yàn)時(shí)間(3分鐘對2分鐘)和更大尺寸的動脈損傷(美國專利6，762，336使用18號針刺扎，而修正的方法使用2.8mm到4mmx6mm的刺孔)進(jìn)行試驗(yàn)。另外，開發(fā)新的試驗(yàn)來直接測量敷料對損傷組織的粘著。這兩個(gè)試驗(yàn)都表現(xiàn)出改進(jìn)的嚴(yán)格性，因此能夠優(yōu)于先前的離體試驗(yàn)并且效力上可以代替許多體內(nèi)試驗(yàn)。以下是用于以下實(shí)施例中的縮寫的列表CFB:完整的纖維蛋白原緩沖液(100mM氯化鈉，1.lmM氯化鉤，10mMTris，10mM檸檬酸鈉，1.5%蔗糖，人血清白蛋白(80mg/g的總蛋白)和TVeen80(動物來源的)15mg/g總蛋白)CTB:完全凝血酶緩沖液(150mM氯化鈉、40mM氯化鉤、10raMTris和lOOniML-賴氨酸，外加100ng/ml的HSA)ERL:EnzymeResearchLaboratoriesEVPA:離體豬動脈切開術(shù)FD:本發(fā)明的止血敷料HSA:人血清白蛋白HD:在美國專利6,762,336中公開的"夾層，，血纖蛋白密封劑止血敷料IFB:不完全纖維蛋白原緩沖液。；不含HSA和Tween的CFBPETG:乙二醇改性的聚對苯二甲酸乙二醇酯PPG:聚丙烯pvc:聚氯乙烯TRIS:三羥甲基氨基甲烷(2-氨基-2-羥甲基-l，3-丙二醇)實(shí)施例1切取村墊材料(DEX0N)并且置于每個(gè)PETG2.4X2.4cm模具中。將25微升的2。/。蔗糖移液到襯墊材料的四個(gè)角中的每一個(gè)的頂部。在完成之后，將模具置于-80。C的冷卻器中至少60分鐘。在CFB中配制纖維蛋白原(EnzymeResearchLaboratories)。纖維蛋白原的最終的pH為7.4±0.1。將纖維蛋白原濃度調(diào)節(jié)到37.5、31.7、25.9、20.16、14.4、8.64、和4.3mg/ml。在將2ml的纖維蛋白原遞送到模具中時(shí)，這會產(chǎn)生13、11、9、7、5、3或1.5mg/cm2的纖維蛋白原劑量。在制備之后，在使用前將纖維蛋白原置于冰上。在CTB中配制凝血酶。凝血酶的最終的pH為7.4±0.1。調(diào)節(jié)凝血酶的濃度使得在如下所述與纖維蛋白原溶液混合時(shí)，組合物會產(chǎn)生包含0.1單位/mg纖維蛋白原的溶液。在制備之后，在使用前將凝血酶置于冰上。在分配之前，纖維蛋白原和凝血酶的溫度為4t:土2x:。將模具從-80匸冷卻器中取出并且置于銅板上，銅板位于干水的上面。為重復(fù)移液器填充纖維蛋白原，第二重復(fù)移液器填充凝血酶。同時(shí)將2ml的纖維蛋白原和300微升的凝血酶分配到每個(gè)模具中。在為模具填充試劑之后，將它們凍結(jié)，然后返回到-8(TC冷卻器中，維持至少2小時(shí)。然后將凍結(jié)的敷料置于預(yù)先冷卻的GenesisTM冷凍干燥器(Virus,Gardiner,NY)中。將小室密封并且使溫度平衡。然后將小室抽空并將敷料通過一級和二級的干燥周期凍干。將敷料從冷凍干燥器取出，密封在箔袋中并且在試驗(yàn)前在室溫下儲存。隨后，對敷料進(jìn)行EVPA、粘著和重量試驗(yàn)的評價(jià)。結(jié)果在以下表中給出并且用圖表表示在圖3A-3C中。組別EVPA通過/總數(shù)剝離試驗(yàn)粘著粘著的標(biāo)準(zhǔn)差重量保持(平均)(g)重量保持標(biāo)準(zhǔn)差13mg/cm26/64.00.0198.012.6llmg/cra26/63.80.416348.59mg/cm25/63.00.08820.07mg/cm26/63.20.49317.67mg/cm25/63.00.094.78.25mg/cm25/52.80.47634.23mg/cm25/52.40.54827.41.5mg/cm20/60.10.24.711.4實(shí)施例2如下生產(chǎn)單塊的敷料切取襯墊材料并且置于每個(gè)PETG2.4X2.4cm模具中。將25微升的2%蔗糖移液到襯墊材料的四個(gè)角中的每一個(gè)的頂部。在完成之后，將模具置于-80。C的冷卻器中至少60分鐘。對于所有的敷料，在CFB中配制ERL纖維蛋白原，批號3114。纖維蛋白原的最終的pH為7.4±0.1。將纖維蛋白原濃度調(diào)節(jié)到37.5mg/ml。在制備之后，在使用前將纖維蛋白原置于冰上。在CTB中配制凝血酶。凝血酶的最終的pH為7.4±0.1。將凝血酶調(diào)節(jié)為遞送O.l單位/mg的纖維蛋白原或25單位/ml凝血酶。在制備之后，在使用前將凝血酶置于水上。在分配之前的纖維蛋白原和凝血酶的溫度為4TC士2。C。將模具從-80。C冷卻器冷卻器取出并且置于在冷卻器上預(yù)冷的銅板上。為重復(fù)移液器填充纖維蛋白原，第二重復(fù)移液器填充凝血酶。同時(shí)將2ml的纖維蛋白原和300微升的凝血酶分配到每個(gè)模具中。在為模具填充試劑之后，將它們返回到-80匸冷卻器中，維持至少2小時(shí)，然后置于冷凍干燥器中。然后如上所述將敷料凍干。在完成之后，將敷料儲存在包含5克干燥劑的低水分傳遞蕩袋中。使用與上述相同的材料如前所述i生產(chǎn)三層敷料。隨后將36敷料在100%相對濕度和37。C條件下放置不同的時(shí)間，以便使其相對的水分含量增加到期望的水平。對敷料進(jìn)行視覺上的評價(jià)并且評價(jià)其手感和其它物理性質(zhì)。在這種評價(jià)之后，對每個(gè)敷料的樣本進(jìn)行試驗(yàn)，以測定它們的水分含量。對其余的敷料進(jìn)行EVPA、粘著和重量保持試驗(yàn)的性能試驗(yàn)。結(jié)果試驗(yàn)的結(jié)果在以下表中給出表i:本發(fā)明的固體敷料的性能數(shù)據(jù)<table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage38</column></row><table>n/d雜色并且凹凸不平表4:三層敷料的完整性和手感特征<table>tableseeoriginaldocumentpage38</column></row><table>嚴(yán)重的雜色和凹凸不平結(jié)論該單塊敷料在非常高的水分水平能夠充分地起作用。發(fā)現(xiàn)差不多28%的水分保持完全的功能性。在水分含量升高到44%時(shí)，敷料仍能起作用，然而它們的一些活性有所降低。更高的水分水平也可以保持一些功能。原始的敷料在2，5%的水分含量時(shí)不是柔軟的，但是在水合之后具有其它所有所需性質(zhì)，包括外觀、平整表面、完整性、快速和不復(fù)雜的水合和光滑的外觀。一旦水分含量增加到5.8%，單塊敷料變得柔軟，但是仍保持其功能性和合乎需要的特征。它們保持其柔軟性，沒有巻曲或損失其完整性或者看起來在水合之前形成過多的纖維蛋白。這與三層敷料形成對照，所述三層敷料在添加水分時(shí)開始喪失其合乎需要的特征，并且在水分增加到33%時(shí)完全地喪失。實(shí)施例3對于使用襯墊的敷料，切取襯墊材料并且置于每個(gè)PETG2.4X2.4cm模具中。將25微升的2%蔗糖移液到襯墊材料的四個(gè)角中的每一個(gè)的頂部。在完成之后，將模具置于-80t:的冷卻器中至少60分鐘。對于沒有襯墊材料的敷料，將PETG2.4X2.4cm模具置于-80'C冷卻器中至少60分鐘。對于所有的敷料，在CFB中配制ERL纖維蛋白原，批號3114。纖維蛋白原的最終的pH為7.4±0.1。將纖維蛋白原濃度調(diào)節(jié)到37.5mg/ml。在制備之后，在使用前將纖維蛋白原置于冰上。在CTB中配制凝血酶。凝血酶的最終的pH為7.4±0.1。將凝血酶調(diào)節(jié)為遞送0.1單位/mg的纖維蛋白原或25單位/ml凝血酶。在制備之后，在使用前將凝血酶置于水上。在分配之前，纖維蛋白原和凝血酶的溫度為4'C土2X:。將模具從-80匸冷卻器中取出并且置于銅板上，銅板位于干冰的上面。為重復(fù)移液器填充纖維蛋白原，第二重復(fù)移液器填充凝血酶。同時(shí)將2ml的纖維蛋白原和300微升的凝血酶分配到每個(gè)模具中。在為模具填充試劑之后，將它們返回到-8(TC冷卻器中，維持至少2小時(shí)，然后置于冷凍干燥器中。然后如下所迷將敷料凍干。在EVPA試驗(yàn)中對兩個(gè)組進(jìn)行性能試驗(yàn)。另外，還在粘著和重量保持試驗(yàn)中試驗(yàn)具有襯墊的組。結(jié)果組別EVPA通過/總數(shù)剝離試驗(yàn)粘著粘著的標(biāo)準(zhǔn)差重量保持(平均)(g)重量保持標(biāo)準(zhǔn)差襯墊6/63.70.515337.3無襯墊9/12結(jié)論用襯墊材料配制的敷料很好地起作用，所有的敷料都通過了EVPA試驗(yàn)，并且具有高的粘著和重量保持?jǐn)?shù)值。沒有襯墊材料的敷料在EVPA試驗(yàn)中不那么十分有效，然而令人驚訝的是它們的75%通過了EVPA試驗(yàn)。沒有襯墊，未能進(jìn)行其它試驗(yàn)。不使用襯墊制成的敷料成功地通過EVPA試驗(yàn)顯示，這些敷料在處理動脈損傷方面是有效的，在處理靜脈和小血管損傷方面甚至是更有效。實(shí)施例4對于所有的敷料，在CFB中配制ERL纖維蛋白原，批號3130。纖維蛋白原的最終的pH為7.4土0.1。將纖維蛋白原濃度調(diào)節(jié)到37.5mg/ml。在制備之后，在使用前將纖維蛋白原置于冰上。在CTB中配制凝血酶。凝血酶的最終的pH為7.4±0.1。將凝血酶調(diào)節(jié)為遞送0.1單位/mg的纖維蛋白原或25單位/ml凝血酶。對于內(nèi)部分散有撕碎的Vicryl網(wǎng)狀物的組，將這種支撐材料切割為大約lmmxlmm的碎片并且在填充模具之前分散在凝血酶溶液內(nèi)。在制備之后，在使用前將凝血酶置于水上。在分配之前，纖維蛋白原和凝血酶的溫度為4°C±2°C。使用Luer鎖緊套口終止端被去掉的由10mL或3mL聚丙烯40注射器(BectonDickinson)制成的圓柱狀才莫具。將活塞分別抽出到6mL和2mL標(biāo)記處。對于利用襯墊的敷料，切取支撐材料并且置于每個(gè)模具中并且向下按壓，直到其與活塞鄰接。在制備之后，將模具直立放置并用干冰包圍，在頂部留有暴露的開口。將lml纖維蛋白原和0.15mL凝血酶(內(nèi)部分散有或沒有襯墊材料)分配到lOmL模具中，將1ml纖維蛋白原和0.15mL凝血酶(內(nèi)部分散有或沒有襯墊材料)分配到3mL模具中，使其凍結(jié)5分鐘。然后將模具置于-8(TC冷卻器中，維持至少2小時(shí)，之后置于冷凍干燥器中并且如上所述凍干。在從冷凍干燥器取出之后，將兩個(gè)組都在改進(jìn)的EVPA試驗(yàn)中進(jìn)行性能試驗(yàn)。簡而言之，塑料泡沫模型在動脈上滑動。這個(gè)覆蓋物其中具有一個(gè)孔，與動脈和周圍組織中的孔相對應(yīng)。向敷料的表面添加溫?zé)岬柠}水并且將模具立即穿過泡沫中的孔傳遞到動脈表面。然后按下活塞并且用手保持3分鐘，之后將模具撤回并繼續(xù)按壓活塞。這時(shí)，為動脈加壓并且繼續(xù)如前所述進(jìn)行試驗(yàn)。結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage41</column></row><table>結(jié)論不包括襯墊或DEX0N網(wǎng)狀物襯墊的敷料很好地起作用，全部都通過250mmHg的EVPA試驗(yàn)。在整個(gè)組合物中分散有支撐材料時(shí)，敷料也很好地起作用，大尺寸(lOmL模具)敷料保持完整的250mmHg壓力，而較小的敷料保持150ramHg的壓力。這表明支撐材料的使用是可選的，并且其位置可以隨意地在敷料的'襯墊，上，或者是分散在整個(gè)組合物中。實(shí)施例5如下生產(chǎn)在敷料的"背面"(即，傷口不朝向傷口的側(cè)面)上有支撐材料的敷料首先切取網(wǎng)狀物支撐材料并將其放置在每個(gè)PETG10X10cm模具中。將25微升的2%蔗糖移液到襯墊材料的四個(gè)角中的每一個(gè)的頂部。在完成之后，將模具置于-80t:的冷卻器中至少60分鐘。對于在敷料的"正面"(即，朝向傷口的側(cè)面)上有支撐材料的敷料，在模具中沒有任何支撐材料的情況下生產(chǎn)這些敷料。在將纖維蛋白原和凝血酶分配在模具(參見以下)之后立即將支撐網(wǎng)狀物置于敷料的頂上，并且在其凍結(jié)之前將其輕輕地按壓到表面中。在所有其它方面，敷料的生產(chǎn)如下所述。對于所有的敷料，在CFB中配制ERL纖維蛋白原，批號3114。纖維蛋白原的最終的pH為7.4±0.1。將纖維蛋白原濃度調(diào)節(jié)到37.5mg/ml。在制備之后，在使用前將纖維蛋白原置于水上。在CTB中配制凝血酶。凝血酶的最終的pH為7.4±0.1。將凝血酶調(diào)節(jié)為遞送0.1單位/mg的纖維蛋白原或25單位/ml凝血酶。在制備之后，在使用前將凝血酶置于水上。將凝血酶調(diào)節(jié)為遞送0.1單位/mg的纖維蛋白原或25單位/ml凝血酶。在制備之后，在使用前將凝血酶置于冰上。在分配之前，纖維蛋白原和凝血酶的溫度為4°C士2。C。將模具從-80。C冷卻器中取出并且皇于被放置在干冰上的鋁板上。鋁板具有在中間鉆成的0.25英寸孔，并且連接有接頭，以便一段管子可以連接于真空源。將模具在鋁板中的孔上方居中并且打開真空。真空有兩個(gè)作用阻止模具移動和保持其相對于鋁板為平整的。將35毫升的纖維蛋白原和5.25毫升的凝血酶置于50ml試管中，反轉(zhuǎn)三次并且傾倒在模具中。在如上所述填充模具并且施加支撐材料之后，將它們返回到-8ox:冷卻器中，維持至少2小時(shí)，然后置于冷凍千燥器中。然后如前所述將敷料凍干。在EVPA試驗(yàn)中對兩個(gè)組進(jìn)行性能試驗(yàn)。另外，還在粘著和重量保持試驗(yàn)中試驗(yàn)具有襯墊的組。結(jié)果支撐材料(網(wǎng)狀物)取向<table>tableseeoriginaldocumentpage43</column></row><table>結(jié)論使用任何取向的襯墊材料配制的敷料都很好地起作用，所有的敷料都通過了EVPA試驗(yàn)，并且具有高的粘著和重量保持?jǐn)?shù)值。這表明支撐材料可以隨意地在敷料的'背面，上，或者是在組合物的'正面'。實(shí)施例6將村墊材料(DEXON)置于PETG2.4X2.4cm模具中。將25微升的2%蔗糖移液到襯墊材料的四個(gè)角中的每一個(gè)的頂部。在完成之后，將模具置于-80t:的冷卻器中至少60分鐘。在CFB中配制纖維蛋白原(EnzymeResearchLaboratories(ERL)，批號3114)。使用CFB將纖維蛋白原濃度調(diào)節(jié)到37.5mg/ml。纖維蛋白原的最終的pH為7.4±0.1。在制備之后，在使用之前將纖維蛋白原置于冰上。在CTB中配制凝血酶。凝血酶的最終的pH為7.4±0.1。用CTB調(diào)節(jié)凝血酶濃度以產(chǎn)生12.5單位/mg的纖維蛋白原(在混合時(shí))，其相當(dāng)于混合前的3120單位/ml的凝血酶。在制備之后，在使用前將凝血酶置于水上。在分配之前，纖維蛋白原和凝血酶的溫度為4X:土2。C。將模具從-8ox:冷卻器中取出并且置于被放置在干水上預(yù)冷的銅板上。為重復(fù)移液器填充纖維蛋白原，第二重復(fù)移液器填充凝血酶。同時(shí)將2ml的纖維蛋白原和300微升的凝血酶分配到每個(gè)模具中。在為模具填充試劑之后，將它們返回到-80。C冷卻器中，維持至少2小時(shí)，然后置于冷凍干燥器中。然后如下所述將它們凍千并且如下所述使用EVPA和粘著試驗(yàn)進(jìn)行性能試驗(yàn)。這些結(jié)果表示在圖4A和4B中。實(shí)施例7將襯墊材料置于每個(gè)1.5X1.5cmPVC模具中。將15微升的2%蔗糖移液到襯墊材料的四個(gè)角中的每一個(gè)的頂部。將第二片PETG塑料配合在1.5X1.5模具的頂部并且固定就位。這樣形成了封閉式模具。然后將模具置于-80'C的冷卻器中至少60分鐘。在CFB中配制纖維蛋白原(ERL，批號3100)。使用CFB將纖維蛋白原濃度調(diào)節(jié)到37.5mg/ml。纖維蛋白原的最終的pH為7.4±0.1。在制備之后，在使用之前將纖維蛋白原置于水上。在CTB中配制凝血酶。凝血酶的最終的pH為7.4±0.1。使用CTB調(diào)節(jié)凝血酶濃度，以便遞送以下量2.5、0.25、0.1、0.05、0.025、0.016、0.0125和0.01單位/mg的纖維蛋白原(在混合時(shí))，其相當(dāng)于在混合前的624、62.4、25、12.5、6.24、3.99、3.12、和2.5單位/ml凝血酶。在制備之后，在使用前將凝血酶置于水上。在分配之前，纖維蛋白原和凝血酶的溫度為4'C土2。C。然后將模具從-80。C冷卻器中取出并且置于在干水上預(yù)冷卻的鋁板上。使用18號針在模具的頂部打3個(gè)孔。一個(gè)孔用于注射纖維蛋白原，第二個(gè)用于注射凝血酶，第三個(gè)孔用作通風(fēng)孔，以便釋放從模具內(nèi)部置換出來的空氣。然后為移液器填充纖維蛋白原，為第二移液器填充凝血酶。通過這些移液器將0.78ml纖維蛋白原和0.17ml的凝血酶同時(shí)注射到每個(gè)模具中。在填充之后，將模具在液氮池的頂部放置30秒，然后返回到-80。C冷卻器中至少2小時(shí)，之后置于冷凍干燥44器中。然后如下所述將它們凍干并且如下所述使用EVPA和粘著試驗(yàn)進(jìn)行性能試驗(yàn)。這些結(jié)果表示在圖4A和4B中。實(shí)施例8將襯墊材料置于2.4X2.4cmPVC模具中。將25微升的2%蔗糖移液到襯墊材料的四個(gè)角中的每一個(gè)的頂部。在完成之后，將模具置于-80。C的冷卻器中至少60分鐘。在CFB中配制纖維蛋白原(ERL，批號3100)。使用CTB將纖維蛋白原濃度調(diào)節(jié)到37.5mg/ml。纖維蛋白原的最終的pH為7.4±0.1。在制備之后，在使用之前將纖維蛋白原置于水上。在CTB中配制凝血酶。凝血酶的最終的pH為7.4±0.1。使用CTB調(diào)節(jié)凝血酶濃度，以便遞送以下量0.125、0.025、0.0125、0.00625和0.0031單位/mg的纖維蛋白原(在混合時(shí))，其相當(dāng)于在混合前的31.2、6.24、3.12、1.56和0.78單位/ml凝血酶。在制備之后，在使用前將凝血酶置于冰上。在分配之前，纖維蛋白原和凝血酶的溫度為4。C土2。C。將模具從-80。C冷卻器中取出并且置于在干冰上預(yù)冷卻的鋁板上。為裝配有18號針的3ml注射器填充2ml的纖維蛋白原，和為配有22號針的1ml的第二注射器填充0.3ml凝血酶。將兩個(gè)注射器的內(nèi)容物同時(shí)分配到每個(gè)模具中。在填充之后，將模具在液氮的頂部放置30秒，然后返回到-80。C冷卻器中至少2小時(shí)，之后置于冷凍干燥器中。然后如下所述將它們凍干并且如下所述使用EVPA和粘著試驗(yàn)進(jìn)行性能試驗(yàn)。這些結(jié)果表示在圖4A和4B中。實(shí)施例9將襯墊材料置于2.4X2.4cmPVC模具中。將25微升的2%蔗糖移液到襯墊材料的四個(gè)角中的每一個(gè)的頂部。在完成之后，將模具置于-80T的冷卻器中至少60分鐘。將包含3克纖維蛋白原(SigmaLot#F-3879)的小瓶從-2(TC冷卻器中取出并且在4T放置18小時(shí)。然后將瓶子從冷卻器取出并且使其回溫到室溫，維持60分鐘。向瓶子中加入60ml的37X:的水并且將其在37X:混合15分鐘。在處于溶45液中之后，將纖維蛋白原在室溫下相對于不完全纖維蛋白原緩沖液(IFB，為不含HSA和Tween的CFB)透析4小時(shí)。在四小時(shí)結(jié)束時(shí)，加入HSA到80mg/g總蛋白的濃度，和加入Tween80(動物來源的)到15mg/g總蛋白的濃度。纖維蛋白原的最終的pH為7.4±0.1。使用CFB將纖維蛋白原濃度調(diào)節(jié)到37.5mg/ml。在制備之后，在使用前將纖維蛋白原置于冰上。在CTB中配制凝血酶。凝血酶的最終的pH為7.4±0.1。使用CTB調(diào)節(jié)凝血酶濃度以便遞送以下量2.5、0.25、0.125、0.083和0.0625單位/mg的纖維蛋白原(在混合時(shí))，其相當(dāng)于在混合前的624、62.4、31.2、20.8和15.6單位/ml凝血酶。在制備之后，在使用前將凝血酶置于冰上。在分配之前，纖維蛋白原和凝血酶的溫度為4'C土2。C。將模具從-80。C冷卻器中取出并且置于在干水上預(yù)冷卻的鋁板上。為裝配有18號針的3ml注射器填充2ml的纖維蛋白原，和為配有22號針的1ml的第二注射器填充0.3ml凝血酶。將兩個(gè)注射器的內(nèi)容物同時(shí)分配到每個(gè)模具中。在填充之后，將模具在液氮的頂部放置30秒，然后返回到-80匸冷卻器中至少2小時(shí)，之后置于冷凍干燥器中。然后如下所述將它們凍干并且如下所述使用EVPA和粘著試驗(yàn)進(jìn)行性能試驗(yàn)。這些結(jié)果表示在圖4A和4B中。實(shí)施例10將襯墊材料置于2.4X2.4cmPVC模具中。將25微升的2%蔗糖移液到襯墊材料的四個(gè)角中的每一個(gè)的頂部。切取第二片的PETG塑料，以便安裝在模具的頂部并且通過位于模具的每個(gè)端部的夾子固定就位，產(chǎn)生封閉式模具。在完成之后，將模具置于-80匸的冷卻器中至少60分鐘。在CFB中配制纖維蛋白原(ERL，批號3060)。纖維蛋白原的最終的pH為7.4±0.1。使用CFB將纖維蛋白原濃度調(diào)節(jié)到37.5mg/ml。在制備之后，在使用前將纖維蛋白原置于冰上。在CTB中配制凝血酶。凝血酶的最終的pH為7.4±0.1。使用CTB調(diào)節(jié)凝血酶濃度以便遞送以下量2.5、0.25、0.125、0.083和0.062單位/mg的纖維蛋白原(在混合之后)，其相當(dāng)于在混合之前的624、62.4、31.2、20.8和15.6單位/ml凝血酶。在制備之后，在使用前將凝血酶置于水上。在分配之前，纖維蛋白原和凝血酶的溫度為4°C土2。C。將模具從-80'C冷卻器中取出并且置于在干冰上預(yù)冷卻的鋁板上。為裝配有18號針的3ml注射器填充2ml的纖維蛋白原，和為配有22號針的1ml的第二注射器填充0.3ml凝血酶。將兩個(gè)注射器的內(nèi)容物同時(shí)分配到每個(gè)模具中。在填充之后，將模具在液氮的頂部放置30秒，然后返回到-80"C冷卻器中至少2小時(shí)，之后置于冷凍干燥器中。然后如下所述將它們凍干并且如下所述使用EVPA和粘著試驗(yàn)進(jìn)行性能試驗(yàn)。這些結(jié)果表示在圖4A和4B中。實(shí)施例11將襯墊材料置于2.4X2.4cmPVC模具中。將25微升的2%蔗糖移液到襯墊材料的四個(gè)角中的每一個(gè)的頂部。切取第二片的PETG塑料，以便安裝在2.4X2.4模具的頂部并且通過利用位于模具的每個(gè)端部的夾子固定就位，產(chǎn)生封閉式模具。然后將模具置于-80。C的冷卻器中至少60分鐘。將包含3克纖維蛋白原(SigmaLot#F-3879)的小瓶從-20。C冷卻器中取出并且在4'C放置18小時(shí)。然后將瓶子從冷卻器取出并且使其回溫到室溫，維持60分鐘。向瓶子中加入60ral的37。C的水并且將其在37。C混合15分鐘。在處于溶液中之后，將纖維蛋白原相對于IFB透析。在四小時(shí)結(jié)束時(shí)，加入HSA到80mg/g總蛋白的濃度，和加入Tween80(動物來源的)到15mg/g總蛋白的濃度。纖維蛋白原的最終的pH為7.4±0.1。使用CFB將纖維蛋白原濃度調(diào)節(jié)到37.5mg/ml。在制備之后，在使用前將纖維蛋白原置于水上。在CTB中配制凝血酶。凝血酶的最終的pH為7.4±0.1。調(diào)節(jié)凝血酶濃度以便遞送以下量2.5、0.25、0.125、0.1和0.083單位/mg的纖維蛋白原(在混合時(shí))，其相當(dāng)于在混合之前的624、62.4、31.2、24.96和20.79單位/ml凝血酶。在制備之后，在使用前將凝血酶置于水上。在分配之前，纖維蛋白原和凝血酶的溫度為4'C±2匸。然后將模具從-80匸冷卻器中取出并且置于在干冰上預(yù)冷卻的鋁板上。為裝配有1847號針的3ml注射器填充2ml的纖維蛋白原，和為配有22號針的1ml的第二注射器填充0.3ml凝血酶。將兩個(gè)注射器的內(nèi)容物同時(shí)分配到每個(gè)模具中。在填充之后，將模具在液氮的頂部放置30秒，然后返回到-80C冷卻器中至少2小時(shí)，之后置于冷凍干燥器中。然后如下所述將它們凍干并且如下所述使用EVPA和粘著試驗(yàn)進(jìn)行性能試驗(yàn)。這些結(jié)果表示在圖4A和4B中。實(shí)施例12將襯墊材料置于2.4X2.4cmPVC模具中。將25微升的2%蔗糖移液到襯墊材料的四個(gè)角中的每一個(gè)的頂部。切取第二片的PETG塑料，以便安裝在模具的頂部并且通過利用位于模具的每個(gè)端部的夾子固定就位，產(chǎn)生封閉式模具。在完成之后，將模具置于-8(TC的冷卻器中至少60分鐘。將包含3克纖維蛋白原(Sigma，批號F-3879)的小瓶從-2(TC冷卻器中取出并且在4。C放置18小時(shí)。然后使瓶子回溫到室溫，維持60分鐘。向瓶子中加入60ml的37X:的水并且將其在37。C混合20分鐘。在處于溶液中之后，將纖維蛋白原相對于IFB透析。在四小時(shí)結(jié)束時(shí)，加入人血清白蛋白(HSA)到80mg/g總蛋白的濃度，和加入Tween80(動物來源的)到15mg/g總蛋白的濃度。纖維蛋白原的最終的pH為7.4土0.1。使用CFB將纖維蛋白原濃度調(diào)節(jié)到37.5mg/ml。在制備之后，在使用前將纖維蛋白原置于水上。在CTB中配制凝血酶。凝血酶的最終的pH為7.4±0.1。調(diào)節(jié)凝血酶濃度以便遞送以下量2.5、0.25、0.125、0.08和0.06單位/mg的纖維蛋白原(在混合之后)，其相當(dāng)于在混合之前的624、62.4、31.2、20.8和15.6單位/ml凝血酶。在制備之后，在使用前將凝血酶置于水上。在分配之前，纖維蛋白原和凝血酶的溫度為4X:士2匸。將模具從-80。C冷卻器中取出并且置于在干冰上預(yù)冷卻的鋁板上。為裝配有l(wèi)8號針的3ml注射器填充2ml的纖維蛋白原，和為配有22號針的1ml的第二注射器填充0.3ml凝血酶。將兩個(gè)注射器的內(nèi)容物同時(shí)分配到每個(gè)模具中。在填充之后，將模具在液氮的頂部放置30秒，然后返回到-80iC冷卻器中至少2小時(shí)，之后置于冷凍干燥器中。然后如下所述將它們凍千并且如下所述使用EVPA和粘著試驗(yàn)進(jìn)行性能試驗(yàn)。三層(夾層)敷料使用在美國專利6,762,336中所述的方法，使用與生產(chǎn)上述單塊敷料的纖維蛋白原和凝血酶的相同來源生產(chǎn)三層敷料。結(jié)果EVPA和粘著試驗(yàn)的結(jié)果分別表示在圖4A和4B中。結(jié)論(實(shí)施例6-12):使用2.5到0.025凝血酶單位/mg的纖維蛋白原生產(chǎn)的敷料在兩個(gè)試驗(yàn)中都是有效的，而具有更大或更小的凝血酶與纖維蛋白原比例的那些無效。在2.5到0.05凝血酶單位/mg纖維蛋白原的范圍觀察到顯著更大的活性。在0.25到0.062凝血酶單位/mg纖維蛋白原的范圍內(nèi)觀察到大大改善的性能，而在O.125到0.08凝血酶單位/mg纖維蛋白原的范圍內(nèi)觀察到最佳的性能。這與使用美國專利6,762,336中所述方法生產(chǎn)的敷料形成對比，所述使用美國專利6，762，336中所述方法生產(chǎn)的敷料在12.5凝血酶單位/mg纖維蛋白原時(shí)得到全部的性能，在凝血酶濃度降低到低于12.5凝血酶單位/mg纖維蛋白原時(shí)產(chǎn)生不可接受的性能，在1.4凝血酶單位/mg纖維蛋白原時(shí)實(shí)質(zhì)上沒有保留任何活性。在性能的極限和最佳水平的兩方面的這種差異在已知如下的情況下是更加深刻的，即，美國專利6,762,336的三層敷料的性能隨使用降低量的凝血酶而降低而本文中所述的敷料在這個(gè)范圍內(nèi)表現(xiàn)出增加的活性。實(shí)施例1349切取襯墊材料并且置于每個(gè)PETG2.4X2.4cm模具中。將25微升的2%蔗糖移液到襯墊材料的四個(gè)角中的每一個(gè)的頂部。在完成之后，將模具置于-80。C的冷卻器中至少60分鐘。在CFB中配制EnzymeResearchLaboratories(ERL)纖維蛋白原，批號3114。纖維蛋白原的最終的pH為7.4±0.1。將纖維蛋白原濃度調(diào)節(jié)到37.5mg/ml。在制備之后，在使用前將纖維蛋白原置于冰上。在CTB中配制凝血酶。凝血酶的最終的pH為7.4±0.1。用CTB將凝血酶調(diào)節(jié)為遞送0,1單位/mg的纖維蛋白原或25單位/ml凝血酶。在制備之后，在使用前將凝血酶置于冰上。在分配之前，纖維蛋白原和凝血酶的溫度為4t:±2。C。將模具從-80。C冷卻器中取出并且置于被放置在干水上的鋁板上。為重復(fù)移液器填充纖維蛋白原，第二重復(fù)移液器填充凝血酶。同時(shí)將2ml的纖維蛋白原和300微升的凝血酶分配到每個(gè)模具中。在為模具填充試劑之后，將它們返回到-8(TC冷卻器中，維持至少2小時(shí)，然后置于冷凍干燥器中。將一組敷料在第Q天冷凍干燥，而其余的敷料在-80X:凍結(jié)保存。將第二組敷料在第7天冷凍干燥并將第三組敷料在第十四天冷凍干燥。在所有的敷料已經(jīng)冷凍干燥之后，使用本文中所述的EVPA、粘著、和重量試驗(yàn)對它們進(jìn)行試驗(yàn)。結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage50</column></row><table>這些結(jié)果還圖解表示在圖5A和5B中。結(jié)論充分混合的凍結(jié)的纖維蛋白原和凝血酶的組合物在7和14天保持穩(wěn)定和有作用，性能沒有明顯的退化。預(yù)期更長的儲存時(shí)間產(chǎn)生類似的結(jié)果。實(shí)施例14切取襯墊材料并且置于每個(gè)PETG2.4X2.4cm模具中。將25微升的2。/。蔗糖移液到襯墊材料的四個(gè)角中的每一個(gè)的頂部。在完成之后，將模具置于-80'C的冷卻器中至少60分鐘。第l組敷料(不含白蛋白，不含Tween80):在100mM氯化鈉、l.lmM氯化鉤、lOmMTris、10mM檸檬酸鈉、和1.5%蔗糖中配制EnzymeResearchLaboratories(ERL)纖維蛋白原，批號3130。纖維蛋白原的最終的pH為7.4±0.1。將纖維蛋白原濃度調(diào)節(jié)到37.5mg/ml。第2組敷料(不含白蛋白，含Tween80):在lOOmM氯化鈉、l.lmM氯化鉤、10mMTris、lOmM檸檬酸鈉、和1.5°/。蔗糖中配制ERL纖維蛋白原。加入Tween80(動物來源的)到15mg/g總蛋白。纖維蛋白原的最終的pH為7.4±0.1。將纖維蛋白原濃度調(diào)節(jié)到37.5mg/ml。第3組敷料(含白蛋白，不含Tween80):在lOOmM氯化鈉、LlmM氯化4丐、lOraMTris、10mM檸檬酸鈉、和1.5°/。蔗糖中配制ERL纖維蛋白原。加入HSA到80mg/g總蛋白。纖維蛋白原的最終的pH為7.4±0.1。將纖維蛋白原濃度調(diào)節(jié)到37.5mg/ml。第4組敷料(含白蛋白，含Tween80):在100mM氯化鈉、l.lmM氯化鉤、10mMTris、10mM檸檬酸鈉、和1.5%蔗糖(纖維蛋白原完全緩沖液)中配制ERL纖維蛋白原。另外，加入HSA到80mg/g總蛋白和加入Tween80(動物來源的)到15mg/g總蛋白。纖維蛋白原的最終的pH為7.4±0.1。將纖維蛋白原濃度調(diào)節(jié)到37.5mg/ml。在制備之后，在使用前將纖維蛋白原溶液置于冰上。在150mM氯化鈉、40mM氯化4丐、10mMTris和100mML-賴氨酸中配制凝血酶，外加100pg/ml的HSA。凝血酶的最終的pH為517.4±0.1。將凝血酶調(diào)節(jié)為遞送0.1單位/mg的纖維蛋白原或25單位/ml凝血酶。在制備之后，在使用前將凝血酶溶液置于水上。在分配之前，纖維蛋白原和凝血酶的溫度為4iC土2t:。將模具從-80。C冷卻器中取出并且置于放置在干水上的鋁板上。為重復(fù)移液器填充纖維蛋白原溶液，第二重復(fù)移液器填充凝血酶溶液。同時(shí)將2ml的纖維蛋白原溶液和300微升的凝血酶溶液分配到每個(gè)模具中。在為模具填充試劑之后，將它們返回到-80iC冷卻器中，維持至少2小時(shí)，然后置于冷凍干燥器中。結(jié)果制劑EVPA#通過/總計(jì)粘著粘著標(biāo)準(zhǔn)差重量保持(平均)(g)重量保持標(biāo)準(zhǔn)差一Alb-Tween0/60.81.024.026.3-Alb+Tween3/63.30.8114.7復(fù)8+Alb-TweenV61.71.045.039.9+Alb十Tween5/63.50.5131.332.0結(jié)論結(jié)果表明，加入白蛋白改善敷料性能。加入Tween甚至進(jìn)一步改善性能。二者的組合產(chǎn)生最好的性能。實(shí)施例15模具由一對鋁板組成，所述鋁板由3/16"Plexiglas的塑料間隔物分開，塑料間隔物具有在其中切割的1"xl"的正方形切口。在使用中，切口的開口側(cè)面指向垂直安裝的板-間隔物-板"夾層，，的頂部，所述板-間隔物-板的"夾層"合起來形成用于敷料的模具。通過將模具浸漬在干冰丸中預(yù)先冷卻，頂部略處于干冰的上面。然后切取襯墊材料并且置于每個(gè)模具中。在CFB中配制ERL纖維蛋白原。纖維蛋白原的最終的pH為7.4±0.1。調(diào)節(jié)纖維蛋白原濃度以生產(chǎn)在最終產(chǎn)品中具有13mg/ci^纖維蛋白原的敷料。在CTB中配制凝血酶。凝血酶的最終的pH為7.4士0.1。將凝血酶調(diào)節(jié)為在最終的敷料中遞送0.1單位/mg的纖維蛋白原。將纖維蛋白原和凝血酶冷卻到期望的溫度(2、4、6和8。C)并且混合在預(yù)先冷卻的15mL錐形管中并且使用高速渦流混合5秒，之后分配到模具中。然后使用血清學(xué)移液器將纖維蛋白原-凝血酶混合物移液到模具中。結(jié)果纖維蛋白原和凝血酶的起始溫度性能試驗(yàn)生物化學(xué)表征EVPA(通過/試驗(yàn))粘著(平均)轉(zhuǎn)化為游離a鏈的。/。Aa轉(zhuǎn)化為Y-Y二聚物的Y鏈的百分比25/54.051045/54.038065/53.857084/44.0440結(jié)論制造了包括38-57%游離a鏈并且不含y-Y二聚物的功能性敷料。實(shí)施例16模具由用3/16"Plexiglas的塑料間隔物分開的一對鋁板或鋼板組成，所述塑料間隔物具有在其中切割的1"x1"正方形切口。在使用中，切口的開口側(cè)面指向垂直安裝的板-間隔物-板"夾層"的頂部，所述板-間隔物-板"夾層"一起形成用于敷料的模具。在一些組中，使用薄的塑料(PVC)襯里提供用于模型冷卻板的產(chǎn)品接觸面。將模具預(yù)先冷卻到期望的溫度，切取襯墊材料并且放置在每個(gè)模具中。在CFB中配制ERL纖維蛋白原。纖維蛋白原的最終的pH為7.4±0.1。調(diào)節(jié)纖維蛋白原濃度以生產(chǎn)在最終產(chǎn)品中具有13mg/cm2纖維蛋白原的敷料。在CTB中配制凝血酶。凝血酶的最終的pH為7.4±0.1。將凝血酶調(diào)節(jié)為在最終的敷料中遞送0.1單位/mg的纖維蛋白原。將纖維蛋白原和凝血酶分配到模具中。在為模具填充試劑之后，將它們凍結(jié)，然后保持在-8(TC,然后置于冷凍干燥器中。然后如上所述將敷料凍干。在完成之后，將敷料儲存在包含5克干燥劑的低水分傳遞箔袋中。隨后，如前所述對敷料進(jìn)行EVPA、粘著試驗(yàn)方面的性能評價(jià)。通過如上所述的凝膠電泳試驗(yàn)對所生產(chǎn)的敷料進(jìn)行生物化學(xué)表征。結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage54</column></row><table>結(jié)論生產(chǎn)的敷料通過全部的性能試驗(yàn)。游離的ot鏈的百分比為46-56%,而在任何敷料中都沒有可檢測的Y-Y二聚物。實(shí)施例17模具由一對鋁板組成，所述鋁板由3/16"Plexiglas的塑料間隔物分開，塑料間隔物具有在其中切割的1"xl"的正方形切口。在使用中，切口的開口側(cè)面指向垂直安裝的板-間隔物-板"夾層"的頂部，所述板-間隔物-板的"夾層"合起來形成用于敷料的模具。通過將模具浸漬在干冰丸中預(yù)先冷卻，頂部略處于干冰的上面。然后切取襯墊材料并且置于每個(gè)模具中。在CFB中配制ERL纖維蛋白原。纖維蛋白原的最終的pH為7.4±0.1。調(diào)節(jié)纖維蛋白原濃度以生產(chǎn)在最終產(chǎn)品中具有13mg/cii^纖維蛋白原的敷料。在CTB中配制凝血酶。凝血酶的最終的pH為7.4±0.1。將凝血酶調(diào)節(jié)為在最終的敷料中遞送0.1單位/mg的纖維蛋白原。將纖維蛋白原和凝血酶保持在水上，并且進(jìn)行如下操作加入到預(yù)先冷卻的15mL錐形管中并且使用高速渦流混合5秒，并且隨后使用血清學(xué)移液器移液到模具中；或者加載在用于分配纖維蛋白原的60mL注射器和用于分配凝血酶的3mL注射器中，將注射器置于線性注射器泵中，并且使用管子將每個(gè)注射器連接于T形連接件的相對末端。然后啟動泵并且使用連接件的底部將纖維蛋白原-凝血酶混合物分配到模具中。在為模具填充試劑之后，將它們凍結(jié)，然后保持在-80°C，然后置于冷凍干燥器中。然后如上所述將敷料凍干。在完成之后，將敷料儲存在包含5克干燥劑的低水分傳遞箔袋中。隨后，如前所述對敷料進(jìn)行EVPA、粘著試驗(yàn)方面的性能評價(jià)。通過如上所述的凝膠電泳試驗(yàn)對所生產(chǎn)的敷料進(jìn)行生物化學(xué)表征。結(jié)果混合方法性能試驗(yàn)生物化學(xué)表征EVPA#通過/總數(shù)粘著評分(平均土標(biāo)準(zhǔn)差)重量保持(平均土標(biāo)準(zhǔn)差)轉(zhuǎn)化為游離cc鏈的y。Aa轉(zhuǎn)化為Y-Y二聚物的y鏈的百分比T形接頭0/20.0±0.00.0±0.010055渦流0/100.01005855結(jié)論生產(chǎn)的敷料在全部的性能試驗(yàn)中都失敗了。這些敷料中的游離ct水平為100%，顯示原來的纖維蛋白原完全轉(zhuǎn)化為纖維蛋白Ia。Y-y二聚物水平為55-58%。在用于混合纖維蛋白原和凝血酶的不同方法之間沒有差異。實(shí)施例18切取襯墊材料并且置于每個(gè)1.5X1.5cmPVC模具中。將15微升的2%篇糖移液到襯墊材料的四個(gè)角中的每一個(gè)的頂部。在完成之后，將模具置于-80r的冷卻器中至少60分鐘。在CFB中配制纖維蛋白原(ERL，批號3112)。纖維蛋白原的最終的pH為7.4±0.1。將纖維蛋白原濃度調(diào)節(jié)到37.5mg/ml。在制備之后，在使用前將纖維蛋白原置于冰上。在CTB中配制凝血酶。凝血酶的最終的pH為7.4±0.1。將凝血酶調(diào)節(jié)為遞送以下量0.1單位/mg的纖維蛋白原或25.Q單位/ml凝血酶。在制備之后，在使用前將凝血酶置于水上。在分配之前，纖維蛋白原和凝血酶的溫度為4°C士2。C。將模具從-8(TC冷卻器中取出并且置于放置在干水上的鋁板上。將2.4ml的纖維蛋白原移液到12X75mm、預(yù)先冷卻的管中，隨后添加360|i1的凝血酶。將管渦旋3秒，取出897ji1的等分試樣并且移液到模具中。生產(chǎn)六個(gè)時(shí)間點(diǎn)(25秒、1、2、3、5、和8分鐘)和一個(gè)對照敷料。對照敷料沒有進(jìn)行預(yù)先混合，將780ji1的纖維蛋白原和117ju1的凝血酶同時(shí)移液到在干水上的模具中。在為每個(gè)模具填充試劑之后，將它們返回到-8(TC冷卻器中，維持至少2小時(shí)，然后置于冷凍干燥器中。56結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage57</column></row><table>nt:未進(jìn)行試驗(yàn)結(jié)論生產(chǎn)了游離oc水平為0-42%的完全功能性的敷料實(shí)施例19切取襯墊材料并且置于每個(gè)PETG2.4X2.4cm模具中。將25微升的2%蔗糖移液到村墊材料的四個(gè)角中的每一個(gè)的頂部。在完成之后，將模具置于-80。C的冷卻器中至少60分鐘。在CTB中配制凝血酶。凝血酶的最終的pH為7.4±0.1。將凝血酶調(diào)節(jié)為遞送0.1單位/mg的纖維蛋白原或25單位/ml凝血酶。在制備之后，在使用前將凝血酶置于水上。在分配之前，纖維蛋白原和凝血酶的溫度為4匸±2匸。將模具從80。C冷卻器中取出并將幾個(gè)組置于鋼冷凍干燥器架子上。架子溫度如下-10°C、-20。C、-30"C、和-40。C并且將模具置于架子上30分鐘，以便進(jìn)行平衡。為裝配有18號針的3ml注射器填充2ml的纖維蛋白原，和為配有22號針的1ml的第二注射器填充0.3ml凝血酶。將兩個(gè)注射器的內(nèi)容物同時(shí)分配到每個(gè)模具中。在為模具填充試劑之后，將它們在冷凍千燥器內(nèi)部在設(shè)定溫度下保持30分鐘。之后將它們返回到-8(TC冷卻器中，維持至少2小時(shí)，之后如前所述冷凍干燥。另外，通過放置在被置于干水上面的鋁板上生產(chǎn)2組敷料。為裝配有18號針的3ml注射器填充2di1的纖維蛋白原，和為配有22號針的1ml的第二注射器填充0.3ml凝血酶。將兩個(gè)注射器的內(nèi)容物同時(shí)分配到每個(gè)模具中。在為模具填充試劑之后，將它們在干冰上保持5分鐘，或者將它們置于液氮上30秒。之后將它們返回到-80'C冷卻器中，維持至少2小時(shí)，之后如前所述冷凍干燥。對凍干的敷料進(jìn)行EVPA、粘著和重量試驗(yàn)方面的性能試驗(yàn)。另外，使用所述的凝膠電泳試驗(yàn)對它們進(jìn)行分析。結(jié)果凍結(jié)溫度性能試驗(yàn)生物化學(xué)表征EVPA#通過/總數(shù)剝離試驗(yàn)粘著(i標(biāo)準(zhǔn)差)重量保持(平均)(g)轉(zhuǎn)化為游離a鏈的y。Aa轉(zhuǎn)化為Y-Y二聚物的Y鏈的百分比-IO2/50.1+0.26.0+12.5330-202/40.0±0.00±0190-304/51.3+1.268±39.2110-403/51.5+1.274±77.8160干水(-78°)4/51.8+1.350±47.1110干水(-78C)和液體N2(-1965/52.8±0.8126±39.610058結(jié)論生產(chǎn)的敷料具有10%-33%的游離(x鏈水平，并且沒有可檢測到的Y-Y二聚物。性能與游離oc鏈的水平以及與凍結(jié)溫度反相關(guān)。實(shí)施例20在CFB中配制濃度為35mg纖維蛋白原/ml的人纖維蛋白原(Sigma,St.Louis),在CTB中配制87.5U/ml的牛凝血酶(Sigma,St.Louis)。調(diào)節(jié)緩沖液的pH以便適合每個(gè)孔的目標(biāo)pH。纖維蛋白原和凝血酶的pH范圍都是5.5-8.5,增量為0.5單位。使用兩個(gè)試驗(yàn)溫度，4。C和24。C。該實(shí)驗(yàn)在平底96孔ELISA板(Nalgene，WR)中進(jìn)行。將100jul的纖維蛋白原移液到96孔板的每個(gè)孔中(3.5mg/孔)，隨后添加100ju1的凝血酶(8.75U/孔)。參見以下的板的設(shè)置。將板培養(yǎng)10分鐘，之后進(jìn)行評價(jià)。通過倒置來檢測凝塊形成和粘著、以及檢測不透明性來評價(jià)凝塊形成和結(jié)構(gòu)。板的設(shè)置纖維蛋白原pH5.56.06.57.07.58.08.5凝血酶pH5.56.06.57.07.58.08.5結(jié)果室溫的板59在所有孔中都形成了凝塊。pH5.5和6.0的纖維蛋白原在凝血酶的所有pH范圍都具有非常不透明的凝塊。pH6.5的纖維蛋白原在使用pH5.5-7.Q的凝血酶時(shí)具有不透明的凝塊。在凝血酶超過pH7.5時(shí)，凝塊是透明的。pH水平為7.O和更高的纖維蛋白原在凝血酶的所有pH水平形成透明的凝塊。結(jié)果表示在圖6A中。4匸板在所有孔中都形成了凝塊。pH5.5和6.0的纖維蛋白原在凝血酶的所有pH范圍都具有非常不透明的凝塊。pH6.5的纖維蛋白原在使用pH5.5-7.0的凝血酶時(shí)具有不透明的凝塊。在凝血酶超過pH7.5時(shí)，凝塊是透明的。pH水平為7.G和更高的纖維蛋白原在凝血酶的所有pH水平形成透明的凝塊。結(jié)果表示在圖6B中。粘著通過將板倒置在紙巾上并且輕輕地敲打板的背面來測定凝塊的粘著。在30秒之后將板取出并且將凝塊保留在板中看作是粘著的，而凝塊落在紙巾上看作是未粘著的.觀察結(jié)果盡管凝塊在它們的不透明性方面有所不同，但是使用pH5.5和6.0的纖維蛋白原形成的凝塊缺乏粘著性。在凝血酶pH為5.5-7.0時(shí)，pH6.5的纖維蛋白原也是這樣。一旦纖維蛋白原pH為7.O或更大，在試驗(yàn)的所有凝血酶pH范圍都形成了粘性的凝塊。對于室溫和4。C的板來說，情況都是這樣。結(jié)論從這些結(jié)果測定了敷料優(yōu)選具有為pH7.0或更大的纖維蛋白原，但是凝血酶的pH可以從5.5到8.5變化。實(shí)施例21在改進(jìn)的CFB(不含氯化釣)中配制濃度為35mg纖維蛋白原/ml的人纖維蛋白原(Sigma,St.Louis)，在改進(jìn)的CTB(不含氯化鈣)中配制87.5U/ml的牛凝血酶(Sigma，St.Louis)。調(diào)節(jié)緩沖液的pH以^更適合每個(gè)孔的目標(biāo)pH。纖維蛋白原和凝血酶的pH范圍都是5.5-8.5，增量為0.5單位。使用兩個(gè)試驗(yàn)溫度，4'C和24匸。該實(shí)驗(yàn)在平底96孔ELISA板(Nalgene，VWR)中進(jìn)行。將100jal的纖維蛋白原移液到96孔板的每個(gè)孔中(3.5mg/孔)，隨后添加100ju1的凝血酶(8.75U/孔)。參見以下的板的設(shè)置。將板培養(yǎng)10分鐘，之后進(jìn)行評價(jià)。通過倒置來檢測凝塊形成和粘著、以及檢測不透明性來評價(jià)凝塊形成和結(jié)構(gòu)。板的設(shè)置<table>tableseeoriginaldocumentpage61</column></row><table>結(jié)果室溫的板在所有孔中都形成了凝塊。pH5.5和6.0的纖維蛋白原在凝血酶的所有pH范圍都具有非常不透明的凝塊。pH6.5的纖維蛋白原在使用pH5.5-8.5的凝血酶時(shí)的凝塊不是不透明的，這與先前的結(jié)果不同。使用pH超過7.5的凝血酶時(shí)，凝塊是透明的。pH水平為6.5和更高的纖維蛋白原在凝血酶的所有PH水平都形成凝塊。結(jié)果表示在圖6C中。4匸的板在所有孔中都形成了凝塊。pH5.5和6.0的纖維蛋白原在凝血酶的所有pH范圍都具有非常不透明的凝塊。pH6.5的纖維蛋白原在使用pH5.5-7.0的凝血酶時(shí)具有不透明的凝塊。在凝血酶超過pH7.5時(shí)，凝塊是透明的。pH水平為7.G和更高的纖維蛋白原在凝血酶的所有pH水平都形成凝塊。結(jié)果表示在圖6D中。粘著通過將板倒置在紙巾上并且輕輕地敲打板的背面來測定凝塊的粘著。在30秒之后將板取出并且將凝塊保留在板中看作是粘著的，而凝塊落在紙巾上看作是不粘著的。觀察結(jié)果盡管凝塊在它們的不透明性方面有所不同，但是使用pH5.5和6.0的纖維蛋白原形成的凝塊缺乏粘著性。一旦纖維蛋白原的pH為6.5或更大，則在試驗(yàn)的所有凝血酶pH范圍都形成粘性的凝塊。對于室溫和4C的板來說，情況都是這樣。這些結(jié)果與其中在緩沖液不含CaC12時(shí)pH6,5的纖維蛋白原形成粘性凝塊的先前結(jié)果不同。結(jié)論從這些結(jié)果確定了在沒有CaCu的存在下，敷料的纖維蛋白原的pH應(yīng)該是6.5或更大，但是凝血酶的pH可以從至少5.5到8.5變化。62實(shí)施例22在CFB中配制濃度為35mg纖維蛋白原/ml的人纖維蛋白原(Sigma，St.Louis)。在CTB中配制87.5U/ml的牛凝血酶(Sigma,St.Louis)。調(diào)節(jié)緩沖液的pH以便適合每個(gè)孔的目標(biāo)pH。在一次性的2.4X2.4cm組織學(xué)模具中生產(chǎn)敷料?？晌盏拇鍓|材料。注射器(2.Oml)。在干水上垂直、雙向冷凍。將村墊材料置于每個(gè)2.4X2.4cmPVC模具中。將15微升的2%蔗糖移液到襯墊材料的四個(gè)角中的每一個(gè)的頂部。將第二片PETG塑料配合在1.5X1.5模具的頂部并且固定就位。這樣形成了封閉式模具。然后將模具置于-80'C的冷卻器中至少60分鐘。在CFB中配制纖維蛋白原(Sigma)。使用CFB將纖維蛋白原濃度調(diào)節(jié)到37.5mg/ml。如下所示調(diào)節(jié)纖維蛋白原的最終的pH。在制備之后，在使用前將纖維蛋白原置于冰上。在CTB中配制凝血酶。如下所示調(diào)節(jié)凝血酶的最終的pH。使用CTB調(diào)節(jié)凝血酶濃度，以便遞送0.1單位/mg的纖維蛋白原(在混合時(shí))，其相當(dāng)于混合前的25單位/ml凝血酶。在制備之后，在使用前將凝血酶置于冰上。在分配之前，纖維蛋白原和凝血酶的溫度為4°C±2。C。然后將模具從-80。C冷卻器中取出并且置于在干冰上預(yù)冷卻的鋁板之間。使用18號針在模具的頂部打3個(gè)孔。一個(gè)孔用于注射纖維蛋白原，第二個(gè)孔用于注射凝血酶。這些孔位于模具的相對末端，而第三個(gè)孔位于模具頂部的中心，用作排氣口以便釋放從模具內(nèi)部置換出來的空氣。然后分別為兩個(gè)3ml注射器填充2.Oml纖維蛋白原和凝血酶。然后通過模具端部的兩個(gè)孔將它們同時(shí)注射到模具中。在為模具填充試劑之后，將模具用干冰丸覆蓋并且使其凍結(jié)2分鐘，之后將它們返回到-8(TC冷卻器中至少兩個(gè)小時(shí)，之后放置在冷凍干燥器中。然后如下所述將它們凍干。生產(chǎn)敷料的組合63<table>tableseeoriginaldocumentpage64</column></row><table>評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)對敷料評價(jià)其外觀。通過生產(chǎn)基于纖維蛋白密封劑的敷料的廣泛實(shí)驗(yàn)確定了似乎是由大量粉末材料制成的敷料表現(xiàn)較差。類似地，在敷料中預(yù)先形成的纖維蛋白的視覺檢測結(jié)果與性能反相關(guān)，因?yàn)檫@表示敷料具有差的粘著性。還容易地評價(jià)了水合的容易程度和速率，預(yù)測以均勻的方式容易地和快速地水合的敷料具有好的敷料性能。最后，形成由密集的和均勻的纖維蛋白組成的凝塊的能力對于好的性能也是需要的，并且可以視覺上進(jìn)行評價(jià)。對所有的敷料進(jìn)行視覺上的評價(jià)。另外，將敷料l-4和6用2ml的37。C水水合，并且視覺上評價(jià)水合速度、形成凝塊的能力、和它們的隨后的粘著性。結(jié)果冷凍干燥后的外觀通過目視標(biāo)準(zhǔn)容易地評價(jià)所有的敷料(參見圖7A和7B)。敷料1和2相對于其它敷料是非常粉末化的。粉末的敷料的相對比例隨著纖維蛋白原pH的增加而降低。敷料1和2具有一些預(yù)先形成的纖維蛋白，其可以在以下圖中看見，為密集的白色混色斑紋區(qū)域，而敷料3、4和6具有大量的預(yù)先形成的纖維蛋白并且溶解緩慢。相比之下，敷料編號5具有高的完整性并且沒有視覺可檢測到的預(yù)先形成的纖維蛋白。這些結(jié)果總結(jié)在下表中。<table>tableseeoriginaldocumentpage65</column></row><table>結(jié)論敷料特征在上表中給出。所有的敷料都在pH范圍的所有部分形成凝塊。纖維蛋白原pH為5.5-6.O和凝血酶為6.0-6.5的那些在水合前具有最小的完整性。它們還在水合之前形成少量的纖維蛋白。纖維蛋白原pH為6.5-7.0和凝血酶pH為8.0-7.0的那些具有更大的完整性，但是在水合形成前更多的纖維蛋白。使用8.0-8.5的纖維蛋白原和7.5的凝血酶制成的敷料具有好的完整性，但是表現(xiàn)出水合前形成的大量纖維蛋白并且難以水合。相比之下，在纖維蛋白原和凝血酶都是pH7.0時(shí)，得到的敷料具有優(yōu)異的完整性和較小量的預(yù)先形成的纖維蛋白。使用pH7.5的纖維蛋白原和pH7.O的凝血酶的組合得到最佳的敷料。實(shí)施例23切取襯墊材料(DEXON)并且置于每個(gè)1.5X1.5cmPVC模具中。將15微升的2。/。蔗糖移液到村墊材料的四個(gè)角中的每一個(gè)的頂部。切取第二片的PETG塑料，以便安裝在1.5X1.5模具的頂部并且通過添加位于模具的每個(gè)端部的夾子固定就位。這樣將模具封閉。在完成之后，將模具置于-80X:的冷卻器中至少60分鐘。在CFB中配制纖維蛋白原(批號3100)。纖維蛋白原的最終的pH為7.4士0.1。用CFB將纖維蛋白原濃度調(diào)節(jié)到37.5mg/ml。在制備之后，在使用前將纖維蛋白原置于冰上。在CTB中配制凝血酶。凝血酶的最終的pH為7.4±0.1。用CTB將凝血酶調(diào)節(jié)為遞送0.1單位/mg的纖維蛋白原或25單位/ml凝血酶。在制備之后，在使用前將凝血酶置于水上。00219]在分配之前，纖維蛋白原和凝血酶的溫度為4°C±2°C。將模具從-80。C冷卻器中取出并且置于直立(垂直)位置的兩個(gè)鋁板之間，然后放置在干水上。使用18號針在模具的頂部打3個(gè)孔。一個(gè)孔用作纖維蛋白原的入口，第二個(gè)孔用來作凝血酶的入口，第三個(gè)孔用于釋放模具中的任何空氣。為一個(gè)移液器填充纖維蛋白原，第二個(gè)移液器填充凝血酶。將0.78ml的纖維蛋白原和0.17ml的凝血酶同時(shí)分配到每個(gè)模具中。在為每個(gè)模具填充試劑之后，將模具在液氮的頂部放置30秒，然后返回到-80。C冷卻器中至少2小時(shí)，之后置于冷凍干燥器中并且如前所述凍干。結(jié)果組別EVPA#通過/總數(shù)粘著試驗(yàn)評分(平均±標(biāo)準(zhǔn)差)封閉的/直立的5/53.4+0.5結(jié)論從這些結(jié)果確定了使用7.3-7.5的總的pH生產(chǎn)的敷料產(chǎn)生優(yōu)異的性能。實(shí)施例24對于使用襯墊的敷料，切取襯墊材料并且置于每個(gè)PETG662.4X2.4cffl模具中。將25微升的2%蔗糖移液到襯墊材料的四個(gè)角中的每一個(gè)的頂部。在完成之后，將模具置于-80。C的冷卻器中至少60分鐘。在CFB中配制纖維蛋白原(批號3114)。纖維蛋白原的最終的pH為7.4±0.1。將纖維蛋白原濃度調(diào)節(jié)到37.5mg/ml。在制備之后，在使用前將纖維蛋白原置于水上。在CTB中配制凝血酶。凝血酶的最終的pH為7.4±0.1。將凝血酶調(diào)節(jié)為遞送0.1單位/mg的纖維蛋白原或25單位/ml凝血酶。在制備之后，在使用前將凝血酶置于水上。在分配之前的纖維蛋白原和凝血酶的溫度為4°C土2。C。將模具從-80'C冷卻器取出并且置于被放置在干水上的銅板上。為重復(fù)移液器填充纖維蛋白原，第二重復(fù)移液器填充凝血酶。同時(shí)將2ml的纖維蛋白原和300微升的凝血酶分配到每個(gè)模具中。在為模具填充試劑之后，將它們返回到-8(TC冷卻器中，維持至少2小時(shí)，然后置于冷凍干燥器中。然后如所述將敷料凍干。結(jié)果組別EVPA#通過/總數(shù)剝離試驗(yàn)粘著粘著標(biāo)準(zhǔn)差重量保持(平均)(g)重量保持標(biāo)準(zhǔn)差開放的/水平的6/63.70.515337.3實(shí)施例25將襯墊材料置于每個(gè)1.5X1.5cmPVC模具中。將15微升的2%蔗糖移液到襯墊材料的四個(gè)角中的每一個(gè)的頂部。將第二片PETG塑料配合在1.5X1.5模具的頂部并且固定就位。這樣形成了封閉式模具。然后將模具置于-80'C的冷卻器中至少60分鐘。在CFB中配制纖維蛋白原(ERL，批號3100)。使用CFB將纖維蛋白原濃度調(diào)節(jié)到37.5mg/ml。纖維蛋白原的最終的pH為7.4±0.1。在制備之后，在使用之前將纖維蛋白原置于水上。67在CTB中配制凝血酶。凝血酶的最終的pH為"7.4±0.1。用CTB調(diào)節(jié)凝血酶濃度以便遞送0.1單位/mg的纖維蛋白原(在混合時(shí))，其相當(dāng)于混合前的25單位/ml的凝血酶。在制備之后，在使用前將凝血酶置于水上。在分配之前，纖維蛋白原和凝血酶的溫度為4。C±2。C。將模具從-80C冷卻器中取出并且置于在干冰上預(yù)冷卻的鋁板上。使用18號針在模具的頂部打3個(gè)孔。一個(gè)孔用于注射纖維蛋白原，第二個(gè)用于注射凝血酶，第三個(gè)孔用作通風(fēng)孔，以便釋放從模具內(nèi)部置換出來的空氣。然后為移液器填充纖維蛋白原，為第二移液器填充凝血酶。通過這些移液器將0.78ml纖維蛋白原和0.17ml的凝血酶同時(shí)注射到每個(gè)模具中。在填充之后，將模具在液氮池的頂部放置30秒，然后返回到-80。C冷卻器中至少2小時(shí)，之后置于冷凍干燥器中。然后如所述將它們凍干。結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage68</column></row><table>實(shí)施例26對于所有的敷料，在CFB中配制ERL纖維蛋白原，批號3130。纖維蛋白原的最終的pH為7.4土0.1。將纖維蛋白原濃度調(diào)節(jié)到37.5mg/ml。在制備之后，在使用前將纖維蛋白原置于水上。在CTB中配制凝血酶。凝血酶的最終的pH為7.4±0.1。將凝血酶調(diào)節(jié)為遞送O.l單位/mg的纖維蛋白原或25單位/ml凝血酶。對于內(nèi)部分散有撕碎的Vicryl網(wǎng)狀物的組，將這種支撐材料切割為大約lmmxlmm的碎片并且在填充模具之前分散在凝血酶溶液內(nèi)。在制備之后，在使用前將凝血酶置于水上。在分配之前，纖維蛋白原和凝血酶的溫度為4'C土2。C。使用Luer鎖緊套口終止端被去掉的由lOmL或3mL聚丙烯注射器(BectonDickinson)制成的圓柱狀模具。將活塞分別抽出到6mL和2mL標(biāo)記處。對于利用襯墊的敷料，切取支撐材料并且置于每個(gè)模具中并且向下按壓，直到其與活塞鄰接。在制備之后，將模具直立放置并用干冰包圍，在頂部留有暴露的開口。將1ml纖維蛋白原和0.15mL凝血酶(內(nèi)部分散有或沒有襯墊材料)分配到10raL模具中，將lml纖維蛋白原和0.15邁L凝血酶(內(nèi)部分散有或沒有襯墊材料)分配到3mL模具中，使其凍結(jié)5分鐘。然后將模具置于-80'C冷卻器中，維持至少2小時(shí)，之后置于冷凍干燥器中并且如所述凍干。結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage69</column></row><table>結(jié)論生產(chǎn)的敷料通過了用于生產(chǎn)條件的EVPA。實(shí)施例27將襯墊材料置于每個(gè)1.5X1.5cmPVC模具中。將15微升的2%蔗糖移液到襯墊材料的四個(gè)角中的每一個(gè)的頂部。將第二片PETG塑料配合在1.5X1.5模具的頂部并且固定就位。這樣形成了封閉式模具。然后將模具置于-80X:的冷卻器中至少60分鐘。在CFB中配制纖維蛋白原(ERL，批號3100)。使用CFB將纖維蛋白原濃度調(diào)節(jié)到37.5mg/ml。纖維蛋白原的最終的pH為7.4±0.1。在制備之后，在使用之前將纖維蛋白原置于水上。在CTB中配制凝血酶。凝血酶的最終的pH為7.4±0.1。用CTB調(diào)節(jié)凝血酶濃度以便遞送0.1單位/mg的纖維蛋白原(在混合時(shí))，其相當(dāng)于混合前的25單位/ml的凝血酶。在制備之后，在使用前將凝血酶置于冰上。在分配之前，纖維蛋白原和凝血酶的溫度為4°C±2。C。將模具從-80。C冷卻器中取出并且置于在干冰上預(yù)冷卻的鋁板上。使用18號針在模具的頂部打3個(gè)孔。一個(gè)孔用于注射纖維蛋白原，第二個(gè)用于注射凝血酶，第三個(gè)孔用作通風(fēng)孔，以便釋放從模具內(nèi)部置換出來的空氣。然后為移液器填充纖維蛋白原，為第二移液器填充凝血酶。通過這些移液器將0.78ml纖維蛋白原和0.17ml的凝血酶同時(shí)注射到每個(gè)模具中。在填充之后，將模具在液氮池的頂部放置30秒，然后返回到-80。C冷卻器中至少2小時(shí)，之后置于冷凍干燥器中。然后如所述將它們凍干。結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage70</column></row><table>實(shí)施例28對于使用襯墊的敷料，切取襯墊材料并且置于每個(gè)PETG2.4X2.4cm模具中。將25微升的2%蔗糖移液到襯墊材料的四個(gè)角中的每一個(gè)的頂部。在完成之后，將模具置于-80'C的冷卻器中至少60分鐘。在CFB中配制ERL纖維蛋白原(批號3114)。纖維蛋白原的最終的pH為7.4±0.1。將纖維蛋白原濃度調(diào)節(jié)到37.5mg/ml。在制備之后，在使用前將纖維蛋白原置于水上。在CTB中配制凝血酶。凝血酶的最終的pH為7.4±0.1。將凝血酶調(diào)節(jié)為遞送0.1單位/mg的纖維蛋白原或25單位/ml凝血酶。在制備之后，在使用前將凝血酶置于水上。在分配之前，纖維蛋白原和凝血酶的溫度為4。C土2。C。將模具從-80。C冷卻器中取出并且置于銅板上，銅板位于干冰的上面。為重復(fù)移液器填充纖維蛋白原，第二重復(fù)移液器填充凝血酶。同時(shí)將2ml的纖維蛋白原和300微升的凝血酶分配到每個(gè)模具中。在為模具填充試劑之后，將它們返回到-80r冷卻器中，維持至少2小時(shí)，然后置于冷凍干燥器中。然后如所述將敷料凍干。結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage71</column></row><table>實(shí)施例29將襯墊材料置于2.4X2.4cmPVC模具中。將25微升的2%蔗糖移液到襯墊材料的四個(gè)角中的每一個(gè)的頂部。在完成之后，將模具置于-80'C的冷卻器中至少60分鐘。在CFB中配制纖維蛋白原(ERL,批號3100)。使用CFB將纖維蛋白原濃度調(diào)節(jié)到37.5mg/ml。纖維蛋白原的最終的pH為7.4±0.1。在制備之后，在使用之前將纖維蛋白原置于冰上。在CTB中配制凝血酶。凝血酶的最終的pH為7.4±0.1。將凝血酶調(diào)節(jié)為遞送0，1單位/fflg的纖維蛋白原或25單位/ml凝血酶。在制備之后，在使用前將凝血酶置于冰上。在分配之前，纖維蛋白原和凝血酶的溫度為4。C土2。C。將模具從-80。C冷卻器中取出并且置于在干冰上預(yù)冷卻的鋁板上。為裝配有18號針的3ml注射器填充2ml的纖維蛋白原，和為配有22號針的1ml的第二注射器填充0.3ml凝血酶。將兩個(gè)注射器的內(nèi)容物同時(shí)分配到每個(gè)模具中。在填充之后，將模具在液氮的頂部放置30秒，然后返回到-80。C冷卻器中至少2小時(shí)，之后置于冷凍干燥器中。然后如所述將它們凍干。結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage72</column></row><table>實(shí)施例30切取襯墊材料并且置于每個(gè)PETG10X10cm模具中。將50微升的2%蔗糖移液到襯墊材料的四個(gè)角中的每一個(gè)的頂部。在完成之后，將模具置于-8(TC的冷卻器中至少60分鐘。在CFB中配制ERL纖維蛋白原(批號3114)。纖維蛋白原的最終的pH為7.4±0.1。將纖維蛋白原濃度調(diào)節(jié)到37.5mg/ml。在制備之后，在使用前將纖維蛋白原置于水上。在CTB中配制凝血酶。凝血酶的最終的pH為7.4±0.1。將凝血酶調(diào)節(jié)為遞送0.1單位/mg的纖維蛋白原或25單位/ml凝血酶。在制備之后，在使用前將凝血酶置于水上。將凝血酶調(diào)節(jié)為遞送0.1單位/mg的*維蛋白原或25單位/ml凝血酶。在制備之后，在使用前將凝血酶置于水上。在分配之前，纖維蛋白原和凝血酶的溫度為4'C土2。C。將模具從-80。C冷卻器中取出并且置于鋁板上，鋁板位于干冰的上面。鋁板具有在中間鉆成的0.25英寸孔，并且連接有接頭，以便一段管子可以連接于真空源。將模具在鋁板中的孔上方居中并且打開真空。真空有兩個(gè)作用阻止模具移動和保持其相對于鋁板為平整的。將35毫升的纖維蛋白原和5.25毫升的凝血酶置于50ml試管中，反轉(zhuǎn)三次并且傾倒在模具中。在如上所述填充模具并且施加支撐材料之后，將它們返回到-80lC冷卻器中，維持至少2小時(shí)，然后置于冷凍干燥器中。然后如所述將敷料凍干。結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage73</column></row><table>實(shí)施例31切取襯墊材料并且置于每個(gè)1.5X1.5cmPVC模具中。將15微升的2%蔗糖移液到襯墊材料的四個(gè)角中的每一個(gè)的頂部。將模具置于-80'C的冷卻器中至少60分鐘。在CFB中配制ERL纖維蛋白原(批號2890)。纖維蛋白原的最終的pH為7.4±0.1。將纖維蛋白原濃度調(diào)節(jié)到37.5mg/ml。在制備之后，在使用前將纖維蛋白原置于冰上。在CTB中配制凝血酶。凝血酶的最終的pH為7.4±0.1。將凝血酶調(diào)節(jié)為遞送0.1單位/mg的纖維蛋白原或25單位/ml凝血酶。在制備之后，在使用前將凝血酶置于水上。將凝血酶調(diào)節(jié)為遞送0.1單位/mg的纖維蛋白原或25單位/ml凝血酶。在分配之前，纖維蛋白原和凝血酶的溫度為4。C土2。C。將模具從-80。C冷卻器中取出并且置于放置在干水上的鋁板上。根據(jù)廠商的說明書將得自IJFisner的兩個(gè)自動分配系統(tǒng)組合。為一個(gè)注射器填充纖維蛋白原，第二個(gè)注射器填充凝血酶。同時(shí)，將O.78ml的纖維蛋白原和0.17ml的凝血酶分配到每個(gè)模具中。在填充之后，將模具在液氮的頂部放置30秒，然后返回到-80C冷卻器中至少2小時(shí)，之后置于冷凍干燥器中。結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage74</column></row><table>結(jié)論使用許多種填充技術(shù)生產(chǎn)的敷料都通過對它們進(jìn)行的試接受的混合。實(shí)施例32切取襯墊材料并且置于每個(gè)PETG2,4X2.4cm模具中。將25微升的2。/。蔗糖移液到襯墊材料的四個(gè)角中的每一個(gè)的頂部。在完成之后，將模具置于-80。C的冷卻器中至少60分鐘。在CFB中配制纖維蛋白原ERL(批號3114)。纖維蛋白原的最終的pH為7.4±0.1。將纖維蛋白原濃度調(diào)節(jié)到37.5mg/ml。在制備之后，在使用前將纖維蛋白原置于水上。在CTB中配制凝血酶。凝血酶的最終的pH為7.4±0.1。將凝血酶調(diào)節(jié)為遞送0.1單位/mg的纖維蛋白原或25單位/ml凝血酶。在制備之后，在使用前將凝血酶置于冰上。在分配之前，纖維蛋白原和凝血酶的溫度為4t:土2x:。將模具從-80。C冷卻器中取出并且置于銅板上，銅板位于干水的上面。為重復(fù)移液器填充纖維蛋白原，第二重復(fù)移液器填充凝血酶。同時(shí)將2ml的纖維蛋白原和300微升的凝血酶分配到每個(gè)模具中。在為模具填充試劑之后，將它們返回到-80t:冷卻器中，維持至少2小時(shí)，然后置于冷凍干燥器中。然后如所述將敷料凍干。結(jié)果組別EVPA#通過/總數(shù)剝離試驗(yàn)粘著粘著標(biāo)準(zhǔn)差重量保持(平均)(g)重量保持標(biāo)準(zhǔn)差單向的6/63.70.515337.3實(shí)施例33將襯墊材料置于每個(gè)1.5X1.5cmPVC模具中。將15微升的2。/。蔗糖移液到襯墊材料的四個(gè)角中的每一個(gè)的頂部。將第二片PETG塑料配合在1.5X1.5模具的頂部并且固定就位。這樣形成了封閉式模具。然后將模具置于-80'C的冷卻器中至少60分鐘。在CFB中配制纖維蛋白原(ERL,批號3100)。使用CFB將纖維蛋白原濃度調(diào)節(jié)到37.5mg/ml。纖維蛋白原的最終的pH為7.4±0.1。在制備之后，在使用之前將纖維蛋白原置于冰上。在CTB中配制凝血酶。凝血酶的最終的pH為7.4±0.1。用CTB調(diào)節(jié)凝血酶濃度以便遞送0.1單位/mg的纖維蛋白原(在混合時(shí))，其相當(dāng)于混合前的25單位/ml的凝血酶。在制備之后，在使用前將凝血酶置于水上。在分配之前，纖維蛋白原和凝血酶的溫度為4。C土2。C。將模具從-8(TC冷卻器中取出并且置于在干冰上預(yù)冷卻的鋁板上。使用18號針在模具的頂部打3個(gè)孔。一個(gè)孔用于注射纖維蛋白原，第二個(gè)用于注射凝血酶，第三個(gè)孔用作通風(fēng)孔，以便釋放從模具內(nèi)部置換出來的空氣。然后為移液器填充纖維蛋白原，為第二移液器填充凝血酶。通過這些移液器將0.78ml纖維蛋白原和0.17ml的凝血酶同時(shí)注射到每個(gè)模具中。在填充之后，將模具在液氮池的頂部放置30秒，然后返回到-80匸冷卻器中至少2小時(shí)，之后置于冷凍干燥器中。然后如所述將它們凍千。結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage76</column></row><table>實(shí)施例34在CFB中配制ERL纖維蛋白原(批號3130)。纖維蛋白原的最終的pH為7.4±0.1。將纖維蛋白原濃度調(diào)節(jié)到37.5mg/ml。在制備之后，在使用前將纖維蛋白原置于冰上。在CTB中配制凝血酶。凝血酶的最終的pH為7.4±0.1。將凝血酶調(diào)節(jié)為遞送0.1單位/mg的纖維蛋白原或25單位/ml凝血酶。對于內(nèi)部分散有撕碎的Vicryl網(wǎng)狀物的組，將這種支撐材料切割為大約lmmxl匪的碎片并且在填充模具之前分散在凝血酶溶液內(nèi)。在制備之后，在使用前將凝血酶置于水上。在分配之前，纖維蛋白原和凝血酶的溫度為4'C士2。C。使用Luer鎖緊套口終止端被去掉的由lOmL或3mL聚丙烯注射器(BectonDickinson)制成的圓柱狀模具。將活塞分別抽出到6mL和2inL標(biāo)記處。對于利用襯墊的敷料，切取支撐材料并且置于每個(gè)模具中并且向下按壓，直到其與活塞鄰接。在制備之后，將模具直立放置并用干水包圍，在頂部留有暴露的開口。將1ml纖維蛋白原和0.15mL凝血酶(內(nèi)部分散有或沒有襯墊材料)分配到lOmL模具中，將lml纖維蛋白原和0.15mL凝血酶(內(nèi)部分散有或沒有襯墊材料)分配到3mL模具中，使其凍結(jié)5分鐘。然后將模具置于-8(TC冷卻器中，維持至少2小時(shí)，之后置于冷凍干燥器中并且如所述凍干。結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage77</column></row><table>結(jié)論進(jìn)行的試驗(yàn)?？梢栽诟鞣N條件下將纖維蛋白原和凝血酶合并為液體并凍結(jié)。實(shí)施例35將襯墊材料置于每個(gè)1.5X1.5cmPVC模具中。將15微升的2%蔗糖移液到襯墊材料的四個(gè)角中的每一個(gè)的頂部。將第二片PETG塑料配合在1.5X1.5模具的頂部并且固定就位。這樣形成了封閉式模具。然后將模具置于-80T的冷卻器中至少60分鐘。在CFB中配制纖維蛋白原(ERL,批號3100)。使用CFB將纖維蛋白原濃度調(diào)節(jié)到37.5mg/ml。纖維蛋白原的最終的pH為7.4±0.1。在制備之后，在使用之前將纖維蛋白原置于水上。在CTB中配制凝血酶。凝血酶的最終的pH為7.4±0.1。用CTB調(diào)節(jié)凝血酶濃度以便遞送0.1單位/mg的纖維蛋白原(在混合時(shí))，其相當(dāng)于混合前的25單位/ml的凝血酶。在制備之后，在使用前將凝血酶置于冰上。在分配之前，纖維蛋白原和凝血酶的溫度為4。C士2。C。將模具從-80°C冷卻器中取出并且置于在干水上預(yù)冷卻的鋁板上。使用18號針在模具的頂部打3個(gè)孔。一個(gè)孔用于注射纖維蛋白原，第二個(gè)用于注射凝血酶，第三個(gè)孔用作通風(fēng)孔，以便釋放從模具內(nèi)部置換出來的空氣。然后為移液器填充纖維蛋白原，為第二移液器填充凝血酶。通過這些移液器將0.78ffll纖維蛋白原和0.17ml的凝血酶同時(shí)注射到每個(gè)模具中。在填充之后，將模具在液氮池的頂部放置30秒，然后返回到-80。C冷卻器中至少2小時(shí)，之后置于冷凍干燥器中。然后如所述將它們凍干。結(jié)果組別EVPA剝離試驗(yàn)粘著外觀#通過/總數(shù)粘著標(biāo)準(zhǔn)差1.5X1.5cm5/53.40.5光滑的，可接受的實(shí)施例36切取襯墊材料并且置于每個(gè)PETG2.4X2.4cm模具中。將25微升的2%蔗糖移液到襯墊材料的四個(gè)角中的每一個(gè)的頂部。在完成之后，將模具置于-8(TC的冷卻器中至少60分鐘。在CFB中配制ERL纖維蛋白原(批號3114)。纖維蛋白原的最終的pH為7.4±0.1。將纖維蛋白原濃度調(diào)節(jié)到37.5mg/ml。在制備之后，在使用前將纖維蛋白原置于水上。在CTB中配制凝血酶。凝血酶的最終的pH為7.4±0.1。將凝血酶調(diào)節(jié)為遞送0.1單位/mg的纖維蛋白原或25單位/ml凝血酶。在制備之后，在使用前將凝血酶置于水上。在分配之前，纖維蛋白原和凝血酶的溫度為4匸士2。C。將模具從-80。C冷卻器中取出并且置于銅板上，銅板位于干冰的上面。為重復(fù)移液器填充纖維蛋白原，第二重復(fù)移液器填充凝血酶。同時(shí)將2ml的纖維蛋白原和300微升的凝血酶分配到每個(gè)模具中。在為模具填充試劑之后，將它們返回到-80。C冷卻器中，維持至少2小時(shí)，然后置于冷凍干燥器中。然后如所述將敷料凍干。結(jié)果組別EVPA#通過/總數(shù)剝離試驗(yàn)粘著粘著標(biāo)準(zhǔn)差重量保持(平均)(g)重量保持標(biāo)準(zhǔn)差外觀2.4X2.4cm6/63.70.515337.3光滑的，可接受的78實(shí)施例37切取襯墊材料并且置于每個(gè)PETG10X10cm模具中。將50微升的2%蔗糖移液到襯墊材料的四個(gè)角中的每一個(gè)的頂部。在完成之后，將模具置于-8(TC的冷卻器中至少60分鐘。在CFB中配制ERL纖維蛋白原(批號3114)。纖維蛋白原的最終的pH為7.4±0.1。將纖維蛋白原濃度調(diào)節(jié)到37.5mg/ml。在制備之后，在使用前將纖維蛋白原置于冰上。在CTB中配制凝血酶。凝血酶的最終的pH為7.4±0.1。將凝血酶調(diào)節(jié)為遞送0.1單位/mg的纖維蛋白原或25單位/ml凝血酶。在制備之后，在使用前將凝血酶置于水上。將凝血酶調(diào)節(jié)為遞送0.1單位/mg的纖維蛋白原或25單位/ml凝血酶。在制備之后，在使用前將凝血酶置于冰上。在分配之前，纖維蛋白原和凝血酶的溫度為4。C±2°C。將模具從-80。C冷卻器中取出并且置于被放置在干冰上的鋁板上。鋁板具有在中間鉆成的0.25英寸孔，并且連接有接頭，以便一段管子可以連接于真空源。將模具在鋁板中的孔上方居中并且打開真空。真空有兩個(gè)作用阻止模具移動和保持其相對于鋁板為平整的。將35毫升的纖維蛋白原和5.25毫升的凝血酶置于50ml試管中，反轉(zhuǎn)三次并且傾倒在模具中。在如上所述填充模具并且施加支撐材料之后，將它們返回到-80。C冷卻器中，維持至少2小時(shí)，然后置于冷凍干燥器中。然后如所述將敷料凍干。結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage79</column></row><table>實(shí)施例38切取襯墊材料并且置于每個(gè)PETG3.7X2.4cm模具中。將25微升的2%蔗糖移液到襯墊材料的四個(gè)角中的每一個(gè)的頂部。在完成之后，將模具置于-80'C的冷卻器中至少60分鐘。在CFB中配制纖維蛋白原(ERL，批號3100)。纖維蛋白原的最終的pH為7.4土0.1。將纖維蛋白原濃度調(diào)節(jié)到37.5mg/ml。在制備之后，在使用前將纖維蛋白原置于冰上。在CTB中配制凝血酶。凝血酶的最終的pH為7.4±0.1。將凝血酶調(diào)節(jié)為遞送0.1單位/mg的纖維蛋白原或25單位/ml凝血酶。在制備之后，在使用前將凝血酶置于冰上。在分配之前，纖維蛋白原和凝血酶的溫度為4r±2°C。將模具從-80t:冷卻器中取出并且置于放置在干水上的鋁板上。為一個(gè)移液器填充纖維蛋白原，第二個(gè)移液器填充凝血酶。將3.linl的纖維蛋白原和0.465ml的凝血酶同時(shí)分配到每個(gè)模具中。在每個(gè)模具都填充之后，將模具在液氮的頂部放置30秒，然后返回到-80。C冷卻器中至少2小時(shí)，之后置于冷凍干燥器中。然后如所述將敷料凍干。結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage80</column></row><table>實(shí)施例39切取襯墊材料并且置于圓形的63.6cm2模具中。將50微升的2%蔗糖移液到襯墊材料上面。在完成之后，將模具置于-8ox:的冷卻器中至少60分鐘。在CFB中配制纖維蛋白原(ERL，批號3100)。纖維蛋白原的最終的pH為7.4±0.1。將纖維蛋白原濃度調(diào)節(jié)到37.5mg/ml。在制備之后，在使用前將纖維蛋白原置于冰上。在CTB中配制凝血酶。凝血酶的最終的pH為7.4±0.1。將凝血酶調(diào)節(jié)為遞送0.1單位/mg的纖維蛋白原或25單位/ml凝血酶。在制備之后，在使用前將凝血酶置于水上。在分配之前，纖維蛋白原和凝血酶的溫度為4°C±2°C。將模具從-80。C冷卻器中取出并且置于被放置在干冰上的鋁板上。將22毫升的纖維蛋白原和3.3毫升的凝血酶置于50ml試管中，反轉(zhuǎn)三次并且傾倒在模具中。在填充模具之后，將模具在液氮的頂部放置30秒，然后返回到-80。C冷卻器中至少2小時(shí)，之后置于冷凍干燥器中。然后如所述將敷料凍干。結(jié)果組別外觀63.6cm2光滑的，可接受的實(shí)施例40切取襯墊材料并且置于圓形的63.6cm'模具中。將50微升的2%蔗糖移液到襯墊材料上面。在完成之后，將模具置于-80r的冷卻器中至少60分鐘。在CFB中配制纖維蛋白原(ERL，批號3100)。纖維蛋白原的最終的pH為7.4±0.1。將纖維蛋白原濃度調(diào)節(jié)到37.5mg/ml。在制備之后，在使用前將纖維蛋白原置于冰上。在CTB中配制凝血酶。凝血酶的最終的pH為7.4±0.1。將凝血酶調(diào)節(jié)為遞送0.1單位/mg的纖維蛋白原:或25單位/ml凝血酶。在制備之后，在使用前將凝血酶置于水上。在分配之前，纖維蛋白原和凝血酶的溫度為4TC土2r。將模具從-80。C冷卻器中取出并且置于被放置在千水上的鋁板上。對于5.2X5.6cm模具，將10.1毫升的纖維蛋白原和1.5毫升的凝血酶置于50ml試管中，反轉(zhuǎn)三次并且傾倒在模具中。13.0X8.Ocm的模具接收36ml的纖維蛋白原和5.4ml的凝血酶。7.0X3.Ocm的模具接收7.3ml的纖維蛋白原和l.lml的凝血酶。在為模具填充試劑之后，將它們返回到-80'C冷卻器中，維持至少2小時(shí)，然后置于冷凍干燥器中。然后如所述將敷料凍干。結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage82</column></row><table>實(shí)施例41切取襯墊材料并且置于圓形的63.6^2模具中。將50微升的2%蔗糖移液到襯墊材料上面。在完成之后，將模具置于-8(TC的冷卻器中至少60分鐘。在CFB中配制ERL纖維蛋白原(批號3112)。纖維蛋白原的最終的pH為7.4±0.1。將纖維蛋白原濃度調(diào)節(jié)到37.5mg/ml。在制備之后，在使用前將纖維蛋白原置于冰上。在CTB中配制凝血酶。凝血酶的最終的pH為7.4±0.1。將凝血酶調(diào)節(jié)為遞送0.1單位/mg的纖維蛋白原或25單位/ml凝血酶。在制備之后，在使用前將凝血酶置于冰上。在分配之前，纖維蛋白原和凝血酶的溫度為4°C±2t:。將模具從-8ox:冷卻器中取出并且置于被放置在干冰上的鋁板上。對于5.5X6.Ocm模具，將11.5毫升的纖維蛋白原和1.73毫升的凝血酶置于50ml試管中，反轉(zhuǎn)三次并且傾倒在模具中。10.0X8.Ocm的模具接收27.7ml的纖維蛋白原和4.16ml的凝血酶。12.0X8.Ocm的模具接收37.4ml的纖維蛋白原和5.62ml的凝血酶。在為每個(gè)模具填充試劑之后，將它返回到-80'C冷卻器中，維持至少2小時(shí)，然后置于冷凍干燥器中。結(jié)果組別外觀5.5X6.Ocm光滑的，可接受的10.0X8.Ocm光滑的，可接受的12.0X9.Ocm光滑的，可接受的結(jié)論敷料可以生產(chǎn)為從小(2.25cm"到大(108cm"的不同尺寸。生產(chǎn)的所有敷料都通過了它們的各個(gè)試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)。只要控制試劑的混合和凍結(jié)的時(shí)間和溫度，敷料可以生產(chǎn)為任何合理的、有用的和可接受的尺寸。實(shí)施例42將襯墊材料置于每個(gè)1.5X1.5cmPVC模具中。將15微升的2%蔗糖移液到襯墊材料的四個(gè)角中的每一個(gè)的頂部。將第二片PETG塑料配合在l.5X1.5模具的頂部并且固定就位。這樣形成了封閉式模具。然后將模具置于-80t:的冷卻器中至少60分鐘。在CFB中配制纖維蛋白原(ERL，批號3100)。使用CFB將纖維蛋白原濃度調(diào)節(jié)到37.5mg/ml。纖維蛋白原的最終的pH為7.4士0.1。在制備之后，在使用之前將纖維蛋白原置于冰上。在CTB中配制凝血酶。凝血酶的最終的pH為7.4±0.1。用CTB調(diào)節(jié)凝血酶濃度以便遞送0.1單位/mg的纖維蛋白原(在混合時(shí))，其相當(dāng)于混合前的25單位/ml的凝血酶。在制備之后，在使用前將凝血酶置于水上。在分配之前，纖維蛋白原和凝血酶的溫度為4°C±2°C。將模具從-8ox:冷卻器中取出并且置于在干冰上預(yù)冷卻的鋁板上。使用18號針在模具的頂部打3個(gè)孔。一個(gè)孔用于注射纖維蛋白原，第二個(gè)83用于注射凝血酶，第三個(gè)孔用作通風(fēng)孔，以便釋放從模具內(nèi)部置換出來的空氣。然后為移液器填充纖維蛋白原，為第二移液器填充凝血酶。通過這些移液器將0.78ral纖維蛋白原和0.17ml的凝血酶同時(shí)注射到每個(gè)模具中。在填充之后，將模具在液氮池的頂部放置30秒，然后返回到-80t:冷卻器中至少2小時(shí)，之后置于冷凍千燥器中。然后如所述將它們凍干。結(jié)果組別EYPA#通過/總數(shù)剝離試驗(yàn)粘著粘著標(biāo)準(zhǔn)差PVC5/53.40.5實(shí)施例43對于使用村墊的敷料，切取襯墊材料并且置于每個(gè)PETG2.4X2.4cm模具中。將25微升的2%蔗糖移液到襯墊材料的四個(gè)角中的每一個(gè)的頂部。在完成之后，將模具置于-8(TC的冷卻器中至少60分鐘。在CFB中配制ERL纖維蛋白原(批號3114)。纖維蛋白原的最終的pH為7.4±0.1。將纖維蛋白原濃度調(diào)節(jié)到37.5mg/ml。在制備之后，在使用前將纖維蛋白原置于冰上。在CTB中配制凝血酶。凝血酶的最終的pH為7.4±0.1。將凝血酶調(diào)節(jié)為遞送0.1單位/mg的纖維蛋白原或25單位/ml凝血酶。在制備之后，在使用前將凝血酶置于冰上。在分配之前，纖維蛋白原和凝血酶的溫度為4。C土2。C。將模具從-80t:冷卻器中取出并且置于銅板上，銅板位于干冰的上面。為重復(fù)移液器填充纖維蛋白原，第二重復(fù)移液器填充凝血酶。同時(shí)將2ml的纖維蛋白原和300微升的凝血酶分配到每個(gè)模具中。在為模具填充試劑之后，將它們返回到-80X:冷卻器中，維持至少2小時(shí)，然后置于冷凍干燥器中。然后如所述將敷料凍干。結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage85</column></row><table>實(shí)施例44切取襯墊材料并且置于每個(gè)2.4X2.4cm不銹鋼模具中。將25微升的2%蔗糖移液到襯墊材料的四個(gè)角中的每一個(gè)的頂部。在完成之后，將模具置于-80t:的冷卻器中至少60分鐘。在CFB中配制纖維蛋白原(ERL,批號3100)。使用CFB將纖維蛋白原濃度調(diào)節(jié)到37.5mg/ml。纖維蛋白原的最終的pH為7.4±0.1。在制備之后，在使用之前將纖維蛋白原置于水上。在CTB中配制凝血酶。凝血酶的最終的pH為7.4±0.1。用CTB調(diào)節(jié)凝血酶濃度以便遞送0.1單位/mg的纖維蛋白原(在混合時(shí))，其相當(dāng)于混合前的25單位/ml的凝血酶。在制備之后，在使用前將凝血酶置于冰上。在分配之前，纖維蛋白原和凝血酶的溫度為4。C土2X:。將模具從-80。C冷卻器中取出并且置于在干冰上預(yù)冷卻的鋁板上。然后為移液器填充纖維蛋白原，為第二移液器填充凝血酶。通過這些移液器將2.Oml纖維蛋白原和0.3ml的凝血酶同時(shí)注射到每個(gè)模具中。在為模具填充試劑之后，將它們返回到-8(TC冷卻器中，維持至少2小時(shí)，然后置于冷凍干燥器中。然后如所述將敷料凍干。結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage85</column></row><table>實(shí)施例45在CFB中配制ERL纖維蛋白原(批號3130)。纖維蛋白原的最終的pH為7.4±0.1。將纖維蛋白原濃度調(diào)節(jié)到37.5mg/ml。在制備之后，在使用前將纖維蛋白原置于水上。在CTB中配制凝血酶。凝血酶的最終的pH為7.4±0.1。將凝血酶調(diào)節(jié)為遞送0.1單位/mg的纖維蛋白原或25單位/ml凝血酶。對于內(nèi)部分散有撕碎的Vicryl網(wǎng)狀物的組，將這種支撐材料切割為大約l咖xlmm的碎片并且在填充模具之前分散在凝血酶溶液內(nèi)。在制備之后，在使用前將凝血酶置于冰上。在分配之前，纖維蛋白原和凝血酶的溫度為4X:土2匸。使用Luer鎖緊套口終止端被去掉的由10mL或3mL聚丙烯注射器(BectonDickinson)制成的圓柱狀才莫具。將活塞分別抽出到6mL和2mL標(biāo)記處。對于利用襯墊的敷料，切取支撐材料并且置于每個(gè)模具中并且向下按壓，直到其與活塞鄰接。在制備之后，將模具直立放置并用干冰包圍，在頂部留有暴露的開口。將1ml纖維蛋白原和0.15mL凝血酶(內(nèi)部分散有或沒有襯墊材料)分配到10mL模具中，將1ml纖維蛋白原和0.15mL凝血酶(內(nèi)部分散有或沒有襯墊材料)分配到3raL模具中，使其凍結(jié)5分鐘。然后將模具置于-80C冷卻器中，維持至少2小時(shí)，之后置于冷凍干燥器中并且如所述凍干。結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage86</column></row><table>可以使用各種塑料或金屬作為模具支撐物來生產(chǎn)敷料。所有這些敷料都通過了它們的試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)。實(shí)施例46切取襯墊材料并且置于每個(gè)PETG10X10cm模具中。將50微升的2%蔗糖移液到襯墊材料的四個(gè)角中的每一個(gè)的頂部。在完成之后，將模具置于-80'C的冷卻器中至少60分鐘。在CFB中配制ERL纖維蛋白原(批號3114)。纖維蛋白原的最終的pH為7.4±0.1。將纖維蛋白原濃度調(diào)節(jié)到37.5mg/ml。在制備之后，在使用前將纖維蛋白原置于冰上。在CTB中配制凝血酶。凝血酶的最終的pH為7.4±0.1。將凝血酶調(diào)節(jié)為遞送O.l單位/mg的纖維蛋白原或25單位/ml凝血酶。在制備之后，在使用前將凝血酶置于冰上。將凝血酶調(diào)節(jié)為遞送0.1單位/mg的纖維蛋白原或25單位/ml凝血酶。在制備之后，在使用前將凝血酶置于冰上。在分配之前，纖維蛋白原和凝血酶的溫度為4'C土2。C。將模具從-80。C冷卻器中取出并且置于被放置在干水上的鋁板上。鋁板具有在中間鉆成的0.25英寸孔，并且連接有接頭，以便一段管子可以連接于真空源。將模具在鋁板中的孔上方居中并且打開真空。真空有兩個(gè)作用阻止模具移動和保持其相對于鋁板為平整的。將35毫升的纖維蛋白原和5.25毫升的凝血酶置于50ml試管中，反轉(zhuǎn)三次并且傾倒在模具中。在如上所述填充模具并且施加支撐材料之后，將它們返回到-80。C冷卻器中，維持至少2小時(shí)，然后置于冷凍干燥器中。然后如所述將敷料凍干。結(jié)果組別EVPA#通過/總數(shù)剝離試驗(yàn)粘著粘著標(biāo)準(zhǔn)差重量保持(平均)(g)重量保持標(biāo)準(zhǔn)差有孔的鋁6/63.80.416331.587實(shí)施例47將襯墊材料置于每個(gè)1.5X1.5cmPVC模具中。將15微升的2。/。蔗糖移液到襯墊材料的四個(gè)角中的每一個(gè)的頂部。將第二片PETG塑料配合在1.5X1.5模具的頂部并且固定就位。這樣形成了封閉式模具。然后將模具置于-80'C的冷卻器中至少60分鐘。在CFB中配制纖維蛋白原(ERL，批號3100)。使用CFB將纖維蛋白原濃度調(diào)節(jié)到37,5mg/ml。纖維蛋白原的最終的pH為7.4士0.1。在制備之后，在使用之前將纖維蛋白原置于水上。在CTB中配制凝血酶。凝血酶的最終的pH為7.4±0.1。用CTB調(diào)節(jié)凝血酶濃度以便遞送0.1單位/mg的纖維蛋白原(在混合時(shí))，其相當(dāng)于混合前的25單位/ml的凝血酶。在制備之后，在使用前將凝血酶置于冰上。在分配之前，纖維蛋白原和凝血酶的溫度為4X:土2。C。將模具從-80。C冷卻器中取出并且置于在干水上預(yù)冷卻的鋁板上。使用18號針在模具的頂部打3個(gè)孔。一個(gè)孔用于注射纖維蛋白原，第二個(gè)用于注射凝血酶，第三個(gè)孔用作通風(fēng)孔，以便釋放從模具內(nèi)部置換出來的空氣。然后為移液器填充纖維蛋白原，為第二移液器填充凝血酶。通過這些移液器將0.78ml纖維蛋白原和0.17ml的凝血酶同時(shí)注射到每個(gè)模具中。在填充之后，將模具在液氮池的頂部放置30秒，然后返回到-8(TC冷卻器中至少2小時(shí)，之后置于冷凍干燥器中。然后如所述將它們凍干。結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage88</column></row><table>實(shí)施例48切取襯墊材料并且置于每個(gè)PETG2.4X2.4cm模具中。將25微升的20/。庶糖移液到襯墊材料的四個(gè)角中的每一個(gè)的頂部。在完成之后，將模具置于-8(TC的冷卻器中至少60分鐘。在CFB中配制ERL纖維蛋白原(批號3114)。纖維蛋白原的最終的pH為7.4±0.1。將纖維蛋白原濃度調(diào)節(jié)到37.5mg/ml。在制備之后，在使用前將纖維蛋白原置于冰上。在CTB中配制凝血酶。凝血酶的最終的pH為7.4±0.1。將凝血酶調(diào)節(jié)為遞送0.1單位/mg的纖維蛋白原或25單位/ml凝血酶。在制備之后，在使用前將凝血酶置于水上。在分配之前，纖維蛋白原和凝血酶的溫度為4。C土2。C。將模具從-80。C冷卻器中取出并且置于銅板上，銅板位于干冰的上面。為重復(fù)移液器填充纖維蛋白原，第二重復(fù)移液器填充凝血酶。同時(shí)將2ml的纖維蛋白原和300微升的凝血酶分配到每個(gè)模具中。在為模具填充試劑之后，將它們返回到-80X:冷卻器中，維持至少2小時(shí)，然后置于冷凍干燥器中。然后如所述將敷料凍干。結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage89</column></row><table>實(shí)施例49切取襯墊材料并且置于每個(gè)PETG2.4X2.4cm模具中。將25微升的2%蔗糖移液到襯墊材料的四個(gè)角中的每一個(gè)的頂部。在完成之后，將模具置于-80'C的冷卻器中至少60分鐘。在CFB中配制ERL纖維蛋白原(批號3130)。纖維蛋白原的最終的pH為7.4±0.1。將纖維蛋白原濃度調(diào)節(jié)到37.5mg/ml。在制備之后，在使用前將纖維蛋白原置于水上。在CTB中配制凝血酶。凝血酶的最終的pH為7.4±0.1。將凝血酶調(diào)節(jié)為遞送0.1單位/mg的纖維蛋白原或25單位/ml凝血酶。在制備之后，在使用前將凝血酶置于冰上。在分配之前，纖維蛋白原和凝血酶的溫度為4。C士2。C。將模具從-80'C冷卻器中取出并且放置在溫度設(shè)置為-50X:的鋼冷凍干燥器架子上。將模具在架子上保持30分鐘，使得模具溫度平衡到-501C。在30分鐘之后，為重復(fù)移液器填充纖維蛋白原，第二重復(fù)移液器填充凝血酶。同時(shí)將2ml的纖維蛋白原和300微升的凝血酶分配到每個(gè)模具中。在為模具填充試劑之后，將它們在-50'C的冷凍干燥器內(nèi)部保持30分鐘。之后使它們返回到-80r冷卻器中，維持24小時(shí)，之后冷凍干燥。結(jié)果組別EVPA#通過/總數(shù)剝離試驗(yàn)粘著粘著標(biāo)準(zhǔn)差重量保持(平均)(g)重量保持標(biāo)準(zhǔn)差鋼5/53.40.510611小結(jié)組別EVPA#通過/總數(shù)剝離試驗(yàn)粘著粘著標(biāo)準(zhǔn)差重量保持(平均)(g)重量保持標(biāo)準(zhǔn)差有孔的鋁6/63.80.416331.5鋁5/53.40.5銅6/63.70.515337.3鋼5/53.40.510611結(jié)論過所有試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)。預(yù)期其它金屬或者可以以相應(yīng)速率傳熱的類似材料會產(chǎn)生類似的結(jié)果。實(shí)施例50切取襯墊材料并且置于每個(gè)PETG2.4X2.4cm模具中。將25微升的2%蔗糖移液到襯墊材料的四個(gè)角中的每一個(gè)的頂部。在完成之后，將模具置于-80X:的冷卻器中至少60分鐘。在CFB中配制ERL纖維蛋白原(批號3114)。纖維蛋白原的最終的pH為7.4±0.1。將纖維蛋白原濃度調(diào)節(jié)到37.5mg/ml。在制備之后，在使用前將纖維蛋白原置于水上。在CTB中配制凝血酶。凝血酶的最終的pH為7.4±0.1。將凝血酶調(diào)節(jié)為遞送0.1單位/mg的纖維蛋白原或"單位/ml凝血酶。在制備之后，在使用前將凝血酶置于冰上。在分配之前，纖維蛋白原和凝血酶的溫度為4X:土2C。將模具從-80'C冷卻器中取出并且置于銅板上，銅板位于干冰的上面。為重復(fù)移液器填充纖維蛋白原，第二重復(fù)移液器填充凝血酶。同時(shí)將2ml的纖維蛋白原和300微升的凝血酶分配到每個(gè)模具中。在為模具填充試劑之后，將它們返回到-80iC冷卻器中，維持至少2小時(shí)，然后置于冷凍干燥器中。然后如所述將敷料凍干。結(jié)果組別EVPA#通過/總數(shù)剝離試驗(yàn)粘著粘著標(biāo)準(zhǔn)差重量保持(平均)(g)重量保持標(biāo)準(zhǔn)差干冰6/63.70.515337.3實(shí)施例51將襯墊材料置于每個(gè)1.5X1.5cmPVC模具中。將15微升的2%蔗糖移液到襯墊材料的四個(gè)角中的每一個(gè)的頂部。將第二片PETG塑料配合在1.5X1.5模具的頂部并且固定就位。這樣形成了封閉式模具。然后將模具置于-8(TC的冷卻器中至少60分鐘。在CFB中配制纖維蛋白原(ERL，批號31(J0)。使用CFB將纖維蛋白原濃度調(diào)節(jié)到37.5mg/ml。纖維蛋白原的最終的pH為7.4土0.1。在制備之后，在使用之前將纖維蛋白原置于冰上。在CTB中配制凝血酶。凝血酶的最終的pH為7.4±0.1。用CTB調(diào)節(jié)凝血酶濃度以便遞送0.1單位/mg的纖維蛋白原(在混合時(shí))，其相當(dāng)于混合前的25單位/ml的凝血酶。在制備之后，在使用前將凝血酶置于水上。在分配之前，纖維蛋白原和凝血酶的溫度為4r土2。C。將模具從-8O'C冷卻器中取出并且置于在干水上預(yù)冷卻的鋁板上。使用9118號針在模具的頂部打3個(gè)孔。一個(gè)孔用于注射纖維蛋白原，第二個(gè)用于注射凝血酶，第三個(gè)孔用作通風(fēng)孔，以便釋放從模具內(nèi)部置換出來的空氣。然后為移液器填充纖維蛋白原，為第二移液器填充凝血酶。通過這些移液器將0.78ml纖維蛋白原和0.17ml的凝血酶同時(shí)注射到每個(gè)模具中。在填充之后，將模具在液氮池的頂部放置30秒，然后返回到-80"C冷卻器中至少2小時(shí)，之后置于冷凍干燥器中。然后如下所述將它們凍干，并且如所述使用EVPA和粘著試驗(yàn)進(jìn)行性能試驗(yàn)。結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage92</column></row><table>實(shí)施例52將襯墊材料置于每個(gè)1.5X1.5cmPVC模具中。將15微升的2%蔗糖移液到襯墊材料的四個(gè)角中的每一個(gè)的頂部。然后將模具置于-8(TC的冷卻器中至少60分鐘。將包含3克纖維蛋白原(SigmaLot#F-3879)的小瓶從-20'C冷卻器中取出并且在4'C放置18小時(shí)。然后將瓶子從冷卻器取出并且4吏其回溫到室溫，維持60分鐘。向瓶子中加入60ml的37。C的水并且將其在37。C混合15分鐘。在處于溶液中之后，將纖維蛋白原相對于IFB透析。在四小時(shí)結(jié)束時(shí)，加入HSA到80mg/g總蛋白的濃度，和加入Tween80(動物來源的)到15mg/g總蛋白的濃度。纖維蛋白原的最終的pH為7.4±0.1。使用CFB將纖維蛋白原濃度調(diào)節(jié)到37.5mg/ml。在制備之后，在使用前將纖維蛋白原置于冰上。在CTB中配制凝血酶。凝血酶的最終的pH為7.4±0.1。調(diào)節(jié)凝血酶濃度以便遞送0.1單位/mg的纖維蛋白原(在混合時(shí))，其相應(yīng)于混合前的25單位/ml的凝血酶。在制備之后，在使用前將凝血酶置于水上。在分配之前，纖維蛋白原和凝血酶的溫度為4。C土2。C。將模具從-8ox:冷卻器中取出并且置于在干冰上預(yù)冷卻的鋁板上。為裝配有18號針的3ml注射器填充2ml的纖維蛋白原，和為配有22號針的1ml的第二注射器填充0.3ml凝血酶。將兩個(gè)注射器的內(nèi)容物同時(shí)分配到每個(gè)模具中。在填充之后，將模具在液氮的頂部放置30秒，然后返回到-80r冷卻器中至少2小時(shí)，之后置于冷凍干燥器中。然后如所述將它們凍干。結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage93</column></row><table>實(shí)施例53切取襯墊材料并且置于每個(gè)PETG2.4X2.4cm模具中。將25微升的2。/。蔗糖移液到襯墊材料的四個(gè)角中的每一個(gè)的頂部。在完成之后，將模具置于-8(TC的冷卻器中至少60分鐘。在CFB中配制ERL纖維蛋白原(批號3130)。纖維蛋白原的最終的pH為7.4±0.1。將纖維蛋白原濃度調(diào)節(jié)到37.5mg/ml。在制備之后，在使用前將纖維蛋白原置于水上。在CTB中配制凝血酶。凝血酶的最終的pH為7.4±0.1。將凝血酶調(diào)節(jié)為遞送0.1單位/mg的纖維蛋白原或25單位/ml凝血酶。在制備之后，在使用前將凝血酶置于冰上。在分配之前，纖維蛋白原和凝血酶的溫度為4。C士2。C。將模具從-80。C冷卻器中取出并且置于在小的氮凍結(jié)通道內(nèi)的鋁支撐物上。將液氮泵送入通道的前部，然后在那里液氮從液體變?yōu)闅怏w。其進(jìn)入通道時(shí)的這種物態(tài)和壓力的變化推動氣體向上斜向上升并且允許其流過模具及流出通道。在添加纖維蛋白原或凝血酶之前將通道和模具用液氮?dú)怏w冷卻5分鐘。在5分鐘之后，為重復(fù)移液器填充纖維蛋白原，第二重復(fù)移液器填充凝血酶。使支撐模具的鋁支撐物滑到凍結(jié)通道外。將2ml的纖維蛋白原和300微升的凝血酶同時(shí)分配到每個(gè)模具中。在為模具填充試劑之后，將它們返回到凍結(jié)通道內(nèi)。然后打開液氮并且使其開動3分鐘。之后將敷料返回到-80C冷卻器中，維持至少2小時(shí)，之后冷凍干燥。結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage94</column></row><table>實(shí)施例54切取襯墊材料并且置于每個(gè)PETG2.4X2.4cm模具中。將25微升的2%蔗糖移液到襯墊材料的四個(gè)角中的每一個(gè)的頂部。在完成之后，將模具置于-80'C的冷卻器中至少60分鐘。在CFB中配制ERL纖維蛋白原(批號3130)。纖維蛋白原的最終的pH為7.4±0.1。將纖維蛋白原濃度調(diào)節(jié)到37.5mg/ml。在制備之后，在使用前將纖維蛋白原置于水上。在CTB中配制凝血酶。凝血酶的最終的pH為7.4±0.1。將凝血酶調(diào)節(jié)為遞送0.1單位/mg的纖維蛋白原或25單位/ml凝血酶。在制備之后，在使用前將凝血酶置于冰上。在分配之前，纖維蛋白原和凝血酶的溫度為4X:土2。C。將模具從80。C冷卻器中取出并置于鋼冷凍干燥器架子上。架子溫度如下-5。C、-10。C、—15。C、-20°C、-25X3、-30°C、-40°C和-50°C。在每個(gè)溫度，將模具在架子上放置30分鐘，以進(jìn)行平衡。在30分鐘之后，為重復(fù)移液器填充纖維蛋白原，第二重復(fù)移液器填充凝血酶。同時(shí)將2ml的纖維蛋白原和300微升的凝血酶分配到每個(gè)模具中。在為模具填充試劑之后，將它們在冷凍干燥器內(nèi)部在設(shè)定溫度下保持30分鐘。之后使它們返回到-80iC冷卻器中，維持24小時(shí)，之后冷凍干。結(jié)<table>tableseeoriginaldocumentpage95</column></row><table>實(shí)施例55切取襯墊材料并且置于每個(gè)PETG2.4X2.4cm模具中。將25微升的2。/。蔗糖移液到襯墊材料的四個(gè)角中的每一個(gè)的頂部。在完成之后，將模具置于-sox:的冷卻器中至少60分鐘。在CFB中配制ERL纖維蛋白原(批號3112)。纖維蛋白原的最終的pH為7.4±0.1。將纖維蛋白原濃度調(diào)節(jié)到37.5mg/ml。在制備之后，在使用前將纖維蛋白原置于冰上。在CTB中配制凝血酶。凝血酶的最終的pH為7.4±0.1。將凝血酶調(diào)節(jié)為遞送0.1單位/mg的纖維蛋白原或25單位/ml凝血酶。在制備之后，在使用前將凝血酶置于水上。在分配之前，纖維蛋白原和凝血酶的溫度為4'C土2匸。將模具從80。C冷卻器中取出并置于鋼冷凍干燥器的架子上。架子溫度如下-IOX:、-2Q。C、-30X:、和-4Q。C。在每個(gè)溫度，將模具在架子上放置30分鐘，以進(jìn)行平衡。為裝配有18號針的3ml注射器填充2ml的纖維蛋白原，和為配有22號針的1ml的第二注射器填充0.3ml凝血酶。將兩個(gè)注射器的內(nèi)容物同時(shí)分配到每個(gè)模具中。在為模具填充試劑之后，將它們在冷凍干燥器內(nèi)部在設(shè)定溫度下保持30分鐘。之后將它們返回到-80。C冷卻器中，維持至少2小時(shí)，之后冷凍干燥。另外，通過放置在單獨(dú)地置于干水頂部或者隨后再在液氮上放置30秒的鋁板上來生產(chǎn)一組敷料。為裝配有18號針的3ml注射器填充2ml的纖維蛋白原，和為配有22號針的1ml的第二注射器填充O.3ml凝血酶。將兩個(gè)注射器的內(nèi)容物同時(shí)分配到每個(gè)模具中。在為模具填充試劑之后，將它們在干水上保持5分鐘，或者將它們置于液氮上30秒。之后將它們返回到-8(TC冷卻器中，維持至少2小時(shí)，之后冷凍干燥。<table>tableseeoriginaldocumentpage96</column></row><table>小結(jié)<table>tableseeoriginaldocumentpage96</column></row><table>-5t:硅氧烷冷卻劑-ioic5/52.20.880.020.5硅氧烷冷卻劑-iox:2/50.10.26.012.5硅氧烷冷卻劑-15匸5/51.40.562.013.4硅氧烷冷卻刑-20匸3/52.00.772.018.2硅氧烷冷卻劑-20x:2/40.00.000珪氧烷冷卻劑-25D5/52.51.58241.0硅氧烷冷卻劑-30r5/52.80.48822.4硅氧烷冷卻劑-30x:4/51.31.26839.2硅氧烷冷卻劑-40X:4/52.81.110854.8硅氧烷冷卻劑-40匸3/51.51.27477.8硅氧烷冷卻劑-50x:5/53.40.510611.0實(shí)施例56切取襯墊材料并且置于每個(gè)PETG2.4X2.4cm模具中。將25微升的2。/。蔗糖移液到襯墊材料的四個(gè)角中的每一個(gè)的頂部。在完成之后，將模具置于-80。C的冷卻器中至少60分鐘。在CFB中配制纖維蛋白原(ERL，批號3150)。使用CFB將纖維蛋白原濃度調(diào)節(jié)到37,5mg/ml。纖維蛋白原的最終的pH為7.4±0.1。在制備之后，在使用之前將纖維蛋白原置于冰上。在CTB中配制凝血酶。凝血酶的最終的pH為7.4±0.1。用CTB將凝血酶濃度調(diào)節(jié)為遞送0.l單位/mg的纖維蛋白原或25單位/ml凝血酶。在分配之前，纖維蛋白原和凝血酶的溫度為4°C±2X:。然后從-80。C冷卻器中取出三個(gè)模具并且置于在干冰上預(yù)冷卻的鋁板上。為重復(fù)移液器填充纖維蛋白原，第二重復(fù)移液器填充凝血酶。同時(shí)將2ml的纖維蛋白原和300微升的凝血酶分配到每個(gè)模具中。在為模具填充試劑之后，將它們返回到-8(TC冷卻器中，維持至少2小時(shí)，然后置于冷凍干燥器中。這是用于實(shí)驗(yàn)的"對照"過程。將其余的模具從-80。C取出并且放置在實(shí)驗(yàn)室工作臺上，使其平衡到室溫(25。C±5。C)。為重復(fù)移液器填充纖維蛋白原，第二重復(fù)移液器填充凝血酶。同時(shí)將2ml的纖維蛋白原和300微升的凝血酶分配到模具中。使模具在室溫下保持以下時(shí)間(1、5、10和15分鐘)。在每個(gè)時(shí)間點(diǎn)結(jié)束時(shí)，將模具在鋁板上放置5分鐘，所述鋁板是在干冰上預(yù)先冷卻的。在5分鐘結(jié)束時(shí)，將模具返回到-8(TC冷卻器中，維持至少2小時(shí)，然后置于冷凍干燥器中。然后將它們凍干并且如所述試驗(yàn)它們的性能和生物化學(xué)特性。結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage98</column></row><table>結(jié)論使用包含31%游離oc鏈和不含Y-Y二聚物的對照方法生產(chǎn)了完全的功能性敷料在改變所述方法以允許混合的纖維蛋白原和凝血酶在室溫放置l分鐘時(shí)看見類似的結(jié)果。在將反應(yīng)物混合和保持5分鐘時(shí)，它們的性能仍是可接受的，盡管有些降低，在這些敷料中檢測到9°/。的y-y二聚物水平。進(jìn)一步增加該時(shí)間到IO分鐘引起不可接受的在EVPA試驗(yàn)中的活性損失并且游離ct鏈的量增加和高水平的y-Y二聚物(39。/。)。增加保持時(shí)間到15分鐘引起粘著和保持任何重量的能力二者都有損失。EVPA性能試驗(yàn)i殳備和備件聯(lián)機(jī)高壓傳感器(AshcroftDuralife或等效物)蠕動泵(PharmaciaBiotech，ModelP-I或等效物)伏特計(jì)(CraftsmanProfessionalModel82324或等效物)裝備有用于記錄壓力或電壓信息的軟件的電腦'具有附著物的Tygon管(各種尺寸)水浴(BaxterDurabath或等效物)，預(yù)設(shè)為37°C保溫室(VWR，Model1400G或等效物)，預(yù)設(shè)為37°C用于監(jiān)控水浴和烘箱溫度的溫度計(jì)各種鑷子、止血鉗、和剪刀lOcc.和20cc.注射器，在中心鉆成大約0.6cm的孔和通過注射器和活塞兩者的較小鉆孔。鉆入到注射器的末端中的這個(gè)孔用于保持活塞縮回和固定。0形圏(10和13號)用于配合lOcc和20cc注射器的塑料套(長度大約3.5cm)具有端部的P-1000Pipetman具有初生兒尺寸袖帶和氣囊的血壓計(jì)用于控制泵以保持所需壓力分布的可編程序邏輯控制器(PLC)(任選地，如果需要可以使用手動控制)。1.材料和化學(xué)品豬的降主動脈(Pel-FreezBiologicals，Catalog#59402-2或等效物)氰基丙烯酸酯膠水(Vetbond，3M或等效物)18號針0.9%鹽水，保持在37。C紅色食用色素血管穿孔器，2.8mm或其它尺寸塑料巻2.動脈的清潔和儲存1.在使用前將動脈在-20^C儲存2.在&0浴中37t:將動脈解凍。3.從動脈的外表面清理脂肪和結(jié)締組織。4.將動脈切為5cm的段。5.可以將動脈再冷凍到-2(TC并且儲存?zhèn)溆谩?.用于試驗(yàn)的動脈制備物1.將動脈內(nèi)翻外，使得光滑的內(nèi)部壁朝向外。2.使13號O形圏在20cc注射器上展開，或使10號O形圏在10cc注射器上展開，在一個(gè)側(cè)面上鉆成大約0.6cm(0.25in)的孔。3.將動脈拉到注射器上，注意不要撕破動脈或產(chǎn)生太松的配合。動脈應(yīng)該貼合地配合在注射器上。將相同大小的另一個(gè)0形圏滑動到注射器的底部上。4.小心地拉動兩個(gè)0形圏到動脈的兩端上。O形圏的距離應(yīng)該至少3.5cm。5.使用某些手術(shù)剪的刀刃，輕柔地刮削動脈的表面以便使動脈的表面變粗糙。6.使用18號針在注射器柱體中的孔的位置上戳一個(gè)通過動脈的孔(參見上述說明)7.將活體檢查穿孔器的末端插入通過動脈中的孔。按下穿孔器的活塞以便在動脈中產(chǎn)生空心孔。重復(fù)幾次以便確保孔是空心的并且沒有結(jié)締組織。8.用側(cè)枝動脈對孔進(jìn)行修補(bǔ)。通常，這是通過從膠乳手套切取補(bǔ)丁并且用氰基丙烯酸酯膠水將其粘合在孔上來進(jìn)行的。使膠水固化至少IO分鐘。9.將動脈放置在溫?zé)岬?、加濕的容器中并且置于保溫室中。使動脈溫?zé)嶂辽?0分鐘。4.溶液和設(shè)備準(zhǔn)備1.目視檢查水浴和保溫室保持在29-33°C。2.確保在泵的容器中有足夠的0.9%鹽水以便完成一天的試驗(yàn)。如果需要，則添加更多的鹽水。3.將0.9%鹽水和其中加入幾滴紅色食用色素的0.9%鹽水加入到水浴的容器中，使得在進(jìn)行試驗(yàn)之前將溶液溫?zé)帷?.通過用KimWipes加襯里在保溫室中準(zhǔn)備用于溫?zé)釀用}的容器并且加入少量的水以保持動脈濕潤。5.檢查管子是否有氣泡。如果發(fā)生氣泡，打開泵并且允許0.9%鹽水流動，直到除去所有的氣泡。5.敷料的施用1.打開止血敷料小袋并且取出止血敷料2.將止血敷料以網(wǎng)狀物襯墊側(cè)面向上放置在動脈中的孔上。3.用適合于待試驗(yàn)制品的量的鹽水慢慢地潤濕止血敷料。說明標(biāo)準(zhǔn)(13-15mg/cm2纖維蛋白原)2.4x2.4cm止血敷料應(yīng)該用800ja1鹽水或其它血液代用品潤濕?？梢愿鶕?jù)要進(jìn)行的特定的實(shí)驗(yàn)的要求調(diào)節(jié)使用的鹽水的量；然而，任何改變都應(yīng)該記錄在收集數(shù)據(jù)用表中。說明滴加溫?zé)岬?9-33"C的0.9%鹽水或其它血液代用品來潤濕止血敷料，注意保持鹽水從邊緣流入在潤濕特性方面的與陽性對照的任何明顯的差異都應(yīng)該記錄在收集數(shù)據(jù)用表上。4.輕柔地將塑料套放置在止血敷料上，注意使其平放在O形圏之間。輕輕地按壓以確保就位。5.用塑料巻包裹動脈和止血敷料6.用血壓袖帶纏繞，注意使氣囊與止血敷料鄰接。7.給氣嚢打氣到100-120mmHg，并且監(jiān)控壓力，如果壓力降低到低于100mmHg，則再次為其打氣。將壓力保持5分鐘。說明時(shí)間和壓力可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)的要求改變，從標(biāo)準(zhǔn)條件的任何變化都應(yīng)該記錄在收集數(shù)據(jù)用表上。8.在聚合之后，小心地將動脈解巻并且記錄止血敷料的狀況。與陽性對照的任何變化都應(yīng)該記錄在收集數(shù)據(jù)用表上。排除標(biāo)準(zhǔn)網(wǎng)狀物襯墊必須保持在動脈中的孔上。如果其在聚合過程中有所移動，并且不能完全地覆蓋孔，則必須將該止血敷料排除。試驗(yàn)方法1.試驗(yàn)設(shè)備組裝的簡圖試驗(yàn)設(shè)備的組裝表示在圖2中?？梢岳靡恍┝硗獾奈幢硎镜牟考碜x取(壓力計(jì))或控制系統(tǒng)內(nèi)部的壓力2.設(shè)備和動脈組件用溫?zé)岬?7X:的紅色0.9%鹽水填充動脈和注射器，注意使注射器和動脈內(nèi)的氣泡量減到最少。在最高處開口的情況下注滿動脈可以幫助減少氣泡。將動脈和注射器連接于試驗(yàn)裝置，確保管中的氣泡盡可能少。應(yīng)該校準(zhǔn)蠕動泵，使其遞送大約3ml/min。如果可用，PLC應(yīng)該根椐對于待試驗(yàn)制品的適合情況確定的預(yù)定的壓力范圍和保持時(shí)間操作。如果手動控制，則通過手動打開和關(guān)閉泵來遵循壓力/時(shí)間特征，同時(shí)參照借助系統(tǒng)的一個(gè)或多個(gè)壓力讀數(shù)部件讀取的系統(tǒng)壓力。在試驗(yàn)結(jié)束后，對止血敷料進(jìn)行對動脈的粘著和動脈孔中栓塞的形成方面的主觀評價(jià)。與陽性對照的任何變化都應(yīng)該記錄在收集數(shù)據(jù)用表上。成功標(biāo)準(zhǔn)能夠經(jīng)受壓力3分鐘的止血敷料被認(rèn)為是通過了試驗(yàn)。在止血敷料成功地通過試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)該立即停止數(shù)據(jù)收集，以便在試驗(yàn)結(jié)束時(shí)產(chǎn)生的動脈中壓力的自然降低不會被包括在圖中。如果操作者沒能停止數(shù)據(jù)收集，可以將這些點(diǎn)從數(shù)據(jù)文件中刪除，以避免將試驗(yàn)后發(fā)生的自然的壓力下降與實(shí)際的敷料失敗相混淆。從施用止血敷料到完成的整個(gè)試驗(yàn)期間必須落入預(yù)定的標(biāo)準(zhǔn)。達(dá)到的最大壓力應(yīng)該記錄在收集數(shù)據(jù)用表上。說明在一個(gè)步驟中的典型的攻擊是250mmHg,3分鐘，但是可以根據(jù)待試驗(yàn)的制品改變。對標(biāo)準(zhǔn)方法的改變應(yīng)該記錄在收集數(shù)據(jù)用表上。失敗標(biāo)準(zhǔn)在試驗(yàn)過程中的任一點(diǎn)開始泄漏鹽水的止血敷料被認(rèn)為是在試驗(yàn)中失敗。說明由動脈膨脹引起構(gòu)造失敗可以忽略并且繼續(xù)試驗(yàn)或再起動試驗(yàn)(只要總的試驗(yàn)時(shí)間沒有落在確定的極限之外即可)。在發(fā)生滲漏時(shí)，應(yīng)該使壓力降低到20mmHg,之后停止數(shù)據(jù)收集，以便在圖上容易地觀察到失敗。發(fā)生滲漏的壓力應(yīng)該記錄在收集數(shù)據(jù)用表上。如果在實(shí)驗(yàn)中間由于設(shè)備故障停止了數(shù)椐收集，則可以以5秒間隔手工收集數(shù)據(jù)，直到試驗(yàn)結(jié)束或止血敷料失敗，無論那一個(gè)先發(fā)生。應(yīng)該將數(shù)據(jù)點(diǎn)記錄在收集數(shù)據(jù)用表的背面，明顯地標(biāo)記，并且手工輸入到數(shù)據(jù)表中。排除標(biāo)準(zhǔn)如果總的試驗(yàn)時(shí)間超過了該方法所允許的最大時(shí)間，無論原因如何，得到的結(jié)果必須排除。如果有由于側(cè)枝動脈不能通過修補(bǔ)或手指壓力固定而產(chǎn)生的泄漏，則得到的結(jié)果必須排除。如果由于0形圏泄漏導(dǎo)致試驗(yàn)失敗，則得到的結(jié)果必須排除。如果網(wǎng)狀物襯墊沒有完全地覆蓋動脈中的孔，則得到的結(jié)果必須排除。粘著性能試驗(yàn)1.設(shè)備和備件止血鉗、豬的動脈和止血敷料(通常在EVPA試驗(yàn)完成之后，盡管其對于進(jìn)行粘著試驗(yàn)不是必需進(jìn)行的)I.動脈+敷料的準(zhǔn)備在沒有完成EVPA試驗(yàn)的情況下施用敷料之后，敷料準(zhǔn)備用于粘著試驗(yàn)和重量極限試驗(yàn)(如果適用)。在施用敷料和隨后的EVPA分析之后，然后將動脈和注射器系統(tǒng)慢慢地從泵斷開，使得溶液不會四處噴射。將來自EVPA試驗(yàn)的溫?zé)岬募t色鹽水溶液保留在注射器中，直到粘著試驗(yàn)和重量極限試驗(yàn)(如果適用)完成。粘著試驗(yàn)的性能1.在準(zhǔn)備動脈和敷料(經(jīng)過或未經(jīng)過EVPA分析)之后，輕輕地提起網(wǎng)狀物的一個(gè)角并且對該角連接已知質(zhì)量的止血鉗。說明如果FD在EVPA試驗(yàn)性能過程中形成了通道泄漏，則在止血敷料的對面進(jìn)行粘著試驗(yàn)，以便得到的對總的粘著的更精確的評價(jià)。2.輕輕地放開止血鉗，注意不要使止血鉗跌落或扭曲。轉(zhuǎn)動注射地剝離敷料。這通常在10秒內(nèi)進(jìn)行。在止血鉗停止剝離敷料之后，根據(jù)以下標(biāo)準(zhǔn)為繃帶的粘著打分敷料性能評分粘著的量490+%375-90%250-75%1-50%0.5只有栓塞保持止血鉗0沒有粘著排除標(biāo)準(zhǔn)網(wǎng)狀物襯墊必須保持在動脈中的孔上。如果其在聚合過程中有所移動，并且不能完全地覆蓋孔，則必須將該止血敷料排除。成功標(biāo)準(zhǔn)粘著評分為3的敷料被認(rèn)為是通過該試驗(yàn)。失敗標(biāo)準(zhǔn)如果在施加之后或者在進(jìn)行EVPA試驗(yàn)之前敷料沒有粘著于動脈，則其打分為0并且粘著試驗(yàn)失敗。如果敷料得到<2的評分，則認(rèn)為敷料在粘著試驗(yàn)中失敗。重量保持性能試驗(yàn)在"粘著試驗(yàn)"的最初打分之后，然后可以以遞增的方式為止血鉗增加重量，直到網(wǎng)狀物襯墊被完全地從動脈拉下來。然后記錄敷料保持的最大重量，作為敷料可以保持附著于動脈的重量的測量105值。水分試驗(yàn)將所有部件打開并且在使用前使其達(dá)到工作溫度。運(yùn)行乳糖和水作為標(biāo)準(zhǔn)樣品和用于校準(zhǔn)儀器。在機(jī)器成功地校準(zhǔn)之后，如下準(zhǔn)備樣本。將重量為至少30mg的敷料碎片置于小瓶中并且蓋上蓋子。將小瓶按照編號順序置于774烘箱樣本處理器中，將一個(gè)空的有蓋小瓶置于該環(huán)境空間(conditioningspace)中。然后使機(jī)器運(yùn)行，以試驗(yàn)對照和樣本中的水分含量(殘留水分)。SDS-PAGE凝膠電泳將每種敷料切割為四分之一，每個(gè)部分約50mg，并且將一個(gè)部分放置在15mL錐形管中。為了產(chǎn)生對照(即，時(shí)間0)，加入1.0mL的0kudaDissolvingSolution(10M尿素、0.1%十二烷基硫酸鈉、0.1。/。p-巰基乙醇)。對于其余3個(gè)碎片，加入80iaL的0.9%鹽水以便潤濕敷料。然后將碎片在37。C培養(yǎng)2、5、和10分鐘或者所需的時(shí)間。為了在期望的時(shí)間停止反應(yīng)，加入l.0mL的OkudaDissolvingsolution。然后將樣品在室溫下培養(yǎng)過夜，然后在70C培養(yǎng)30分鐘。為了準(zhǔn)備用于加載在凝膠上的樣品，將先前溶解在OkudaDissolvingSolution中的樣品加入到樣品緩沖液中，使得20iaL的等分試樣包含10yg。然后將1jliL的0.1M二硫蘇糖醇加入到每個(gè)樣1品中。然后將20|u1的每種稀釋樣品加載在10個(gè)孔的1.0mm厚的8%Tris-甘氨酸凝膠(Invitrogen)上。然后使凝膠在140V運(yùn)行，直到染料前沿到達(dá)凝膠的末端。然后將其取出并且在振動平臺上的考馬斯藍(lán)著色劑(在ddH20中含50%v/v曱醇、0.25%w/v考馬斯亮藍(lán)、10%w/v乙酸)中放置至少1小時(shí)。然后將凝膠轉(zhuǎn)移到振動平臺上的脫色溶液(25%曱醇、10%乙酸、65%ddH20)+，直到背景幾乎是無色的。在脫色之后，對凝膠進(jìn)行掃描，并且通過Scion密度試驗(yàn)軟件分析Y-Y二聚物i脊帶和Act和BP旙帶，以便測定發(fā)生的轉(zhuǎn)化的量。權(quán)利要求1.用于處理哺乳動物的受傷組織的固體敷料的生產(chǎn)方法，包括(a)在抑制纖維蛋白原組分被纖維蛋白原活化劑活化的充分低的溫度形成所述纖維蛋白原組分和所述纖維蛋白原活化劑的液體含水混合物；(b)降低所述含水混合物的溫度以形成凍結(jié)的含水混合物；和(c)降低所述凍結(jié)的含水混合物的水分含量，以生產(chǎn)具有止血劑層的固體敷料，所述止血劑層實(shí)質(zhì)上由所述纖維蛋白原組分和所述纖維蛋白原活化劑組成。2.權(quán)利要求1的方法，其中所述固體敷料另外包括至少一個(gè)支撐層。3.權(quán)利要求2的方法，其中所述支撐層包括襯墊材料。4.權(quán)利要求3的方法，其中所述支撐層包括內(nèi)部的支撐材料。5.權(quán)利要求3的方法，其中所述支撐層包括可再吸收的材料。6.權(quán)利要求3的方法，其中所述支撐層包括不可再吸收的材料。7.權(quán)利要求6的方法，其中所述不可再吸收材料選自硅氧烷聚合物、紙、紗布、塑料、金屬、和膠乳。8.權(quán)利要求3的方法，其中所述固體敷料另外包括在所述止血劑層和所述襯墊層之間的至少一種生理學(xué)可接受的密封劑。9.權(quán)利要求5的方法，其中所述可再吸收的材料選自蛋白質(zhì)材料和碳水化合物物質(zhì)。10.權(quán)利要求9的方法，其中所述蛋白質(zhì)材料是選自角蛋白、絲制品、纖維蛋白、膠原和明膠的至少一種物質(zhì)。11.權(quán)利要求9的方法，其中所述碳水化合物物質(zhì)選自海藻酸及其鹽、殼多糖、脫乙酰殼多糖、纖維素、N-乙?；被咸烟恰⒌鞍锥嗵?、透明質(zhì)酸酶、透明質(zhì)酸、羥基乙酸聚合物、乳酸聚合物、羥基乙酸/乳酸共聚物、及其兩種或更多種的混合物。12.權(quán)利要求l的方法，其中所述止血劑層還包含纖維蛋白交聯(lián)劑和/或釣離子源。13.權(quán)利要求l的方法，其中所述止血劑層還包含以下的一種或多種至少一種填料、至少一種增溶劑、至少一種發(fā)泡劑、和至少一種脫模劑。14.權(quán)利要求13的方法，其中所迷填料選自蔗糖、乳糖、麥芽糖、角蛋白、絲制品、纖維蛋白、膠原、明膠、白蛋白、聚山梨酯、殼多糖、脫乙酰殼多糖、海藻酸及其鹽、纖維素、蛋白多糖、透明質(zhì)酸酶、透明質(zhì)酸、羥基乙酸聚合物、乳酸聚合物、羥基乙酸/乳酸共聚物、及其兩種或更多種的混合物。15.權(quán)利要求13的方法，其中所述增溶劑選自蔗糖、乳糖、麥芽糖、右旋糖、甘露糖、海藻糖、甘露糖醇、山梨糖醇、白蛋白、透明質(zhì)酸酶、透明質(zhì)酸、山梨酸酯、聚山梨酯、及其兩種或更多種的混合物。16.權(quán)利要求13的方法，其中所迷脫模劑選自明膠、透明質(zhì)酸酶、透明質(zhì)酸、甘露糖醇、山梨糖醇、聚山梨酯、山梨聚糖、乳糖、麥芽糖、海藻糖、山梨酸酯、葡萄糖、及其兩種或更多種的混合物。17.權(quán)利要求13的方法，其中所述發(fā)泡劑選自如下的混合物碳酸氫鈉/檸檬酸、碳酸氫鈉/乙酸、碳酸鈣/檸檬酸、和碳酸鈣/乙酸、和碳水化合物夾帶的加壓的惰性氣體。18.權(quán)利要求l的方法，其中所述止血劑層還包含至少一種治療性增補(bǔ)劑，所述治療性增補(bǔ)劑選自抗生素、抗凝劑、甾體、心血管藥物、生長因子、抗體(多克隆和單克隆的)、趨化物、麻醉劑、抗增殖劑/抗腫瘤劑、抗病毒藥、細(xì)胞因子、集落刺激因子、抗真菌劑、驅(qū)寄生蟲劑、抗炎藥、防腐劑、激素、維生素、糖蛋白、粘連蛋白、肽、蛋白質(zhì)、碳水化合物、蛋白多糖、抗血管生成素、抗原、核苷、脂質(zhì)、脂質(zhì)體、纖維蛋白溶解抑制劑、和基因治療劑。19.權(quán)利要求18的方法，其中所述治療性增補(bǔ)劑以等于或大于其在纖維蛋白中的溶解度極限的量存在。20.權(quán)利要求2的方法，其中所述止血劑層另外包含有效改善所述止血劑層對所述支撐層的粘著的量的至少一種密封劑。21.權(quán)利要求20的方法，其中所述密封劑選自蔗糖、甘露糖醇、山梨糖醇、明膠、透明質(zhì)酸酶、透明質(zhì)酸、麥芽糖、聚維酮、脫乙酰殼多糖和羧甲基纖維素。22.權(quán)利要求l的方法，其中所述止血劑層的全層實(shí)質(zhì)上是均質(zhì)的。23.權(quán)利要求l的方法，其中所述止血劑層是單塊的。24.權(quán)利要求1的方法，其中所述凍結(jié)的含水混合物在(c)中凍干。25.權(quán)利要求l的方法，其中所述水分含量最小為6%。26.權(quán)利要求l的方法，其中所述水分含量低于6%。27.權(quán)利要求l的方法，其中所述纖維蛋白原組分是哺乳動物的纖維蛋白原。28.權(quán)利要求27的方法，其中所述哺乳動物纖維蛋白原選自牛族動物的纖維蛋白原、豬科動物的纖維蛋白原、綿羊的纖維蛋白原、馬屬的纖維蛋白原、山羊的纖維蛋白原、貓科動物的纖維蛋白原、犬科動物的纖維蛋白原、鼠科動物的纖維蛋白原或者人類的纖維蛋白原。29.權(quán)利要求l的方法，其中所述纖維蛋白原組分選自人纖維蛋白原、人纖維蛋白I、人纖維蛋白II、人纖維蛋白原cc鏈、人纖維蛋白原P鏈、人纖維蛋白原y鏈、及其兩種或更多種的混合物。30.權(quán)利要求28或29的方法，其中所述纖維蛋白原選自重組產(chǎn)生的纖維蛋白原和轉(zhuǎn)基因的纖維蛋白原。31.權(quán)利要求1的方法，其中所述纖維蛋白原活化劑選自凝血酶、凝血酶原、蛇毒、及其任何兩種或更多種的混合物。32.權(quán)利要求31的方法，，其中所述凝血酶是哺乳動物的凝血酶。33.權(quán)利要求32的方法，其中所述哺乳動物的凝血酶選自牛族動物的凝血酶、豬科動物的凝血酶、綿羊的凝血酶、馬屬的凝血酶、山羊的凝血酶、貓科動物的凝血酶、犬科動物的凝血酶、鼠科動物的凝血酶和人類的凝血酶。34.權(quán)利要求32的固體敷料，其中所述凝血酶選自重組生產(chǎn)的凝血酶和轉(zhuǎn)基因的凝血酶。35.處理哺乳動物的受傷組織的方法，包括為所述受傷的組織放置通過權(quán)利要求1的方法制備的固體敷料并且對所述敷料施加充分的壓力，其持續(xù)時(shí)間足以形成足夠的纖維蛋白以減少從所述受傷的組織損失血液和/或其它液體。36.權(quán)利要求1的方法制備的用于處理哺乳動物的受傷組織的固體敷料。37.根據(jù)權(quán)利要求1的(a)和(b)制備的凍結(jié)的含水混合物。38.根據(jù)權(quán)利要求1的(a)制備的液體的含水混合物。39.通過權(quán)利要求1的方法制備的用于處理哺乳動物的受傷組織的固體敷料，其另外包括低于57。/。的游離纖維蛋白原a-鏈。40.通過權(quán)利要求1的方法制備的用于處理哺乳動物的受傷組織的固體敷料，另外實(shí)質(zhì)上不包括游離纖維蛋白原oc-鏈。41.通過權(quán)利要求1的方法制備的用于處理哺乳動物的受傷組織的固體敷料，另外實(shí)質(zhì)上不包括纖維蛋白Ia。42.通過權(quán)利要求1的方法制備的用于處理哺乳動物的受傷組織的固體敷料，另外實(shí)質(zhì)上不包括纖維蛋白原鏈Y二聚物。43.通過權(quán)利要求1的方法制備的用于處理哺乳動物的受傷組織的固體敷料，另外包括低于9y。的纖維蛋白原鏈Y二聚物。44.權(quán)利要求2的方法，其中所述支撐層包括正面支撐材料。45.權(quán)利要求l的方法，其中所述溫度降低到-10'C到-196匸。46.權(quán)利要求l的方法，其中在降低所述溫度的同時(shí)，所述液體含水混合物在水平方向或垂直方向凍結(jié)。47.通過權(quán)利要求1的方法制備的用于處理哺乳動物的受傷組織的固體敷料，另外包括至多9。/。的纖維蛋白原鏈Y二聚物和至多57%的游離纖維蛋白原oc鏈。全文摘要公開了用于處理哺乳動物患者(例如人)的受傷組織的固體敷料的制備方法，所述固體敷料包括實(shí)質(zhì)上由纖維蛋白原組分和纖維蛋白原活化劑組成的止血劑層。還公開了使用這些敷料和可用于制備這些敷料的止血劑層或用于處理哺乳動物的受傷組織的凍結(jié)的和液體的組合物處理受傷組織的方法。文檔編號A61F13/00GK101516302SQ200780035280公開日2009年8月26日申請日期2007年8月6日優(yōu)先權(quán)日2006年8月4日發(fā)明者D·伯爾,M·馬科皮申請人:Stb救生技術(shù)公司