專利名稱：：病毒感染的脂質(zhì)體治療的制作方法病毒感染的脂質(zhì)體治療相關(guān)申請(qǐng)本申請(qǐng)要求由Dwek等人于2006年8月2日提交的美國臨時(shí)申請(qǐng)60/834，797和由Dwek等人于2006年9月22日提交的美國臨時(shí)申請(qǐng)60/846，344的優(yōu)先權(quán)，兩篇文獻(xiàn)全文并入本文作為參考。
技術(shù)領(lǐng)域：
本申請(qǐng)總地涉及用于治療病毒感染的方法和組合物，更具體地說，涉及使用脂質(zhì)體來治療病毒感染的方法和組合物。技術(shù)背景乙費(fèi)"關(guān)'病善-乙型肝炎病毒(HBV，HepB)是包括可導(dǎo)致一些患者死亡的肝纖維化、肝硬化、炎性肝病和肝癌在內(nèi)的急性和慢性肝病的致病因素，例如，參見，Joklik，WolfgangK.，Virology,第三版，Appleton&Unge，Norwalk，Conn.，1988(ISBN0-8385-9462-X)。盡管獲得了有效的疫苗，但是全世界超過280，000，000人，即，占世界人口的5%，仍然長(zhǎng)期感染上病毒，例如，參見Locarnini，S.A.，爭(zhēng)乂,AntiviralChemistry&Chemotherapy(1996)7(2):53-64。這種疫苗對(duì)于已經(jīng)感染上病毒的人沒有治療價(jià)值。在歐洲和北美洲，人口的0.1%到1%發(fā)生感染。據(jù)估計(jì)，獲得感染的個(gè)體的15%到20%從HBV感染發(fā)展為肝硬化或另外的長(zhǎng)期喪失勞動(dòng)能力(chronicdisability),—旦形成肝硬化，發(fā)病率和死亡率相當(dāng)大，具有約5年的患者生存時(shí)間，例如，參見Blume，H.，E.，等人，AdvancedDrugDeliveryReviews(1995)17:321-331。丙費(fèi)/^乂病#。全世界大約170，000，000人，即，占世界人口的3%，例如，參見WHO,J.Viral.Hepat.1999;6:35-47，和在美國大約400萬人感染上丙型肝炎病毒(HCV，HepC)。急性感染上HCV的個(gè)體的約80%變成慢性感染。因此，HCV是慢性肝炎的主要致病因素。一旦發(fā)生慢性感染，如果不經(jīng)治療病毒幾乎不被清除。在罕見病例中，HCV感染引起臨床急性疾病和甚至是肝功能衰竭。慢性HCV感染可因個(gè)體之間的差異而顯著不同，其中一些個(gè)體會(huì)'限患臨床非顯著性的或極微的肝疾病，并且從不發(fā)展成并發(fā)癥，而其它個(gè)體會(huì)罹患臨床顯著的慢性肝炎并且可能接著發(fā)展成肝硬化。感染HCV并確實(shí)發(fā)展為肝硬化的個(gè)體的約20%會(huì)發(fā)展為晚期肝病并且具有增加的發(fā)展為原發(fā)性肝癌的風(fēng)險(xiǎn)?？共《舅幬锢绺蓴_素，其單獨(dú)或與利巴韋林聯(lián)合使用，在高達(dá)80%的患者中是有效的。(DiBisceglie，A.M，和Hoofnagle:J.H.2002，Hepatology36，S121-S127)，但是許多患者對(duì)這種聯(lián)合治療形式不耐受。爭(zhēng)^#遂度厚;##。牛病毒性腹竭病毒(BVDV)分布于全世界范圍內(nèi)并且在大多數(shù)牛群中普遍存在。BVDV也通常被用作HCV的組織培養(yǎng)代用品。有兩種BVDV的病毒生物型非致細(xì)胞病變型(ncp)和致細(xì)胞病變型(cp)。病毒生物型的分類基于培養(yǎng)細(xì)胞中的致細(xì)胞病變作用并且與毒力無關(guān)。NcpBVDV在牛中是常見的，而cp生物型相對(duì)少見，并且在病毒基因組中發(fā)生特異性突變后從ncp株產(chǎn)生。在組織培養(yǎng)中用cpBVDV林感染細(xì)胞以在細(xì)胞單層上形成凋亡細(xì)胞集簇(斑塊)為特征，可在顯微鏡下容易地監(jiān)控這一特征。人類^瘦缺潛病毒。人類免疫缺陷病毒(HIV)是獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)和相關(guān)病癥的致病因素。至少有截然不同的兩類HIV:HIV-l和HIV-2。另外，大量的遺傳異質(zhì)性存在于每種這些類型的群體中。因?yàn)锳IDS流行病的發(fā)病，大約2000萬人已死亡，并且據(jù)估計(jì)，超過4000萬人目前仍攜帶HIV-1/AIDS，在全世界內(nèi)每天有14OOO人被感染。已經(jīng)開發(fā)了多種抗病毒治療劑和診斷手段，使得至少對(duì)于獲得所述手段的那些人而言已經(jīng)大大地改善了數(shù)量和生活質(zhì)量。這些藥物中大多數(shù)干擾病毒蛋白質(zhì)或諸如逆轉(zhuǎn)錄和蛋白酶活性的過程。不幸地是，這些療法未能消除感染，許多療法的不需要的作用是嚴(yán)重的，對(duì)于目前應(yīng)用的每種抗病毒類型都存在耐藥性HIV林。#-7"差應(yīng)真野^##^B-DNJ入AB-DNJ，又稱N-丁基-l，5-二脫氧-l，5-亞氨基-D-葡糖醇，抑制由ER葡糖苷酶I和II參與的過程，并且已經(jīng)顯示通過引起人類免疫缺陷病毒(HIV)和肝炎病毒特別是諸如乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、牛病毒性腹瀉病毒等等病毒的糖蛋白的錯(cuò)折疊和/或ER-滯留而發(fā)揮有效的抗病毒作用。描述了合成AB-DNJ和其它N-取代的脫氧野尻霉素衍生物的方法，例如，在美國專利5，622，972，4,246,345，4,266,0254，405，714和4，806，650中。討論了^B-DNJ的抗病毒效果，例如在美國專利6,465,487;6,545,021;6，689，759;6,809,083中涉及肝炎病毒，和在美國專利4,849,430中涉及HIV病毒。葡糖苷酶抑制劑如AB-DNJ已顯示在細(xì)胞培養(yǎng)中和在使用旱獺動(dòng)物模型中都有效地治療HBV感染，例如，參見T.Block,X.Lu，A.S.Mehta，B.S.Blu邁berg，B.Ten賺t，M.Ebling，B.Korba，D.M.Lansky，G.S.Jacob和R.A.Dwek，NatMed.1998May;4(5):610-4。AB-DNJ抑制HBV粒子的分泌并引起HBVDM的胞內(nèi)滯留。DNJ已顯示是對(duì)抗BVDV(—種用于HCV的細(xì)胞培養(yǎng)模型)的強(qiáng)抗病毒物質(zhì)，例如，參見Branza-NichitaN，DurantelD，Carrouee-DurantelS，DwekRA，ZitzmannN.，JVirol.2001Apr;75(8):3527-36;Durantel，D.，爭(zhēng)乂，/.P7ro/.，2001,75，8987-8998;N.Zitzmann，爭(zhēng)乂，PNAS，1999，96，11878-11882。使用W-DNJ進(jìn)行治療導(dǎo)致病毒后代的感染性降低，對(duì)被分泌的病毒的實(shí)際數(shù)量的影響較少。AB-DNJ已顯示是抗HIV的抗病毒劑；治療導(dǎo)致對(duì)從HIV感染細(xì)胞釋放的病毒粒子數(shù)的影響較低，然而，被釋放的感染性病毒的量被大大降低，例如，參見P.B.Fischer,M.Collin,等人(1995)，/.r/ro/.69(9):5791-7;P.B.Fischer,G,B.Karlsson，T.Butters,R.Dwek和F.Piatt，/.r/roA70(1996a)，pp.7143-7152，P.B.Fischer,G.B.Karlsson，R.Dwek和F.Piatt，./.Wro/.70(1996b)，pp.7153-7160。在HIV-1感染患者中進(jìn)行了牽涉；mb-dnj的臨床試驗(yàn)，結(jié)果表明抗病毒活性所需的濃度太高并且在患者中產(chǎn)生嚴(yán)重的副作用，例如，參見FischlM.A.，ResnickL.，CoombsR.,KremerA.B.，PottageJ.C.Jr，F(xiàn)assR，J.，F(xiàn)ifeK.H.，PowderlyW.G.，CollierA.C.，AspinallR丄，爭(zhēng)乂，J.Acquir.Immune.Defic.Syndr.1994Feb;7(2):139-47。目前不存在對(duì)抗加-DNJ治療的突變HIV林。Wf冷^浙f以及葡「潛茅凝/#//。由葡糖苷酶抑制顯示的抗病毒效果被認(rèn)為是病毒糖蛋白在ER內(nèi)的錯(cuò)折疊或滯留的結(jié)果，主要通過阻斷進(jìn)入鈣聯(lián)接蛋白/肌鉀網(wǎng)蛋白循環(huán)進(jìn)行。在將三葡糖基化低聚糖(Glc3Man9GlcNAc2)轉(zhuǎn)移到生長(zhǎng)多肽鏈中的Asn-X-Ser/Thr共有序列之后，必要的是可以發(fā)生三個(gè)a-連接的葡萄糖殘基在進(jìn)一步加工成為成熟碳水化合物單位之前被釋放。另外，兩個(gè)靠外側(cè)的葡萄糖殘基必需經(jīng)過修整以被允許進(jìn)入鉀聯(lián)接蛋白/肌鉀網(wǎng)蛋白循環(huán)用于適當(dāng)折疊，例如，參見Bergeron,J.J.爭(zhēng)乂，TrendsBiochem.Sci.，1994，19，124-128;Peterson,J.R.等人，Mol.Biol.Cell,1995，6，1173-1184。初步加工受位于ER的具有內(nèi)腔取向的催化結(jié)構(gòu)域的內(nèi)在膜(integralmembrane)酶(葡糖苷酶I)的影響，該酶特異性裂解al-2連接的葡萄糖殘基；接著是葡糖苷酶II發(fā)揮作用，該酶II釋放al-3連接的葡萄糖組分中的兩個(gè)。/糸。脂質(zhì)體可以直接遞送水溶性化合物到細(xì)胞內(nèi)，繞過作為分子屏障的細(xì)胞膜。pH敏感脂質(zhì)體制劑可包含將磷脂酰乙醇胺(PE)或其衍生物(例如D0PE)與含有酸性基團(tuán)的化合物(其在中性pH下可作為穩(wěn)定劑)的組合。膽固醇半琥珀酸酯(CHEMS)與其它的體內(nèi)兩性分子穩(wěn)定劑相比可以是良好的穩(wěn)定化分子，因?yàn)槠淠懝檀蓟x予包含PE的小泡以更高的穩(wěn)定性。通過脂質(zhì)體介導(dǎo)的遞送的體內(nèi)效力可強(qiáng)烈地依賴于與可以影響其藥代動(dòng)力學(xué)和生物分布的血清組分(調(diào)理素)的相互作用。pH敏感脂質(zhì)體可以迅速地從血液循環(huán)中被清除，積聚在肝和脾內(nèi)，然而脂質(zhì)與共價(jià)連接的聚乙二醇(PEG)的內(nèi)含物可以通過穩(wěn)定DOPE:CHEMS脂質(zhì)體上的凈負(fù)電荷來克服由網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)(RES)進(jìn)行的清除。DOPE-CHEMS和DOPE-CHEMS-PEG-PE脂質(zhì)體及其制備方法描述在例如V.A.Slepushkin，S.Simoes，P.Dazin，M.S.Newman,L.S.Guo和M.C.P.deLima,J,Biol.Chem.272(1997)2382-2388;以及S.Simoes，V.Slepushkin,N.Duzgunes和M.C.PedrosodeLima,Biomembranes1515(2001)23-37中，兩篇文獻(xiàn)全文并入本文作為參考。包封在D0PE-CHEMS中的^B-DNJ(摩爾比為6:4)的遞送公開在美國專利申請(qǐng)US2003/0124160中。發(fā)明概述—個(gè)實(shí)施方案提供了治療病毒感染的方法，該方法包括對(duì)有此需要的宿主給藥組合物，該組合物包括(a)包舍DOPE和CHEMS脂質(zhì)的脂質(zhì)體，和(b)包封在脂質(zhì)體內(nèi)的一種或多種治療劑，其中病毒感染是ER膜出芽病毒感染或質(zhì)膜出芽病毒感染；其中一種或多種治療劑包括N-丁基脫氧野尻霉素(AB-DNJ)，并且其中所述給藥導(dǎo)致遞送一種或多種治療劑進(jìn)入感染有引發(fā)感染的病毒的細(xì)胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)以及將脂質(zhì)體的一種或多種脂質(zhì)并入細(xì)胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜內(nèi)。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案提供了治療病毒感染的方法，該方法包括對(duì)有此需要的宿主給藥組合物，該組合物包括(a)包含DOPE、CHEMS和PEG-PE脂質(zhì)的脂質(zhì)體，和(b)包封在脂質(zhì)體內(nèi)的一種或多種治療劑。該一種或多種治療劑可包括A-丁基脫氧野尻霉素d麗)。又一個(gè)實(shí)施方案提供了一種方法，該方法包括對(duì)有此需要的宿主給藥組合物，該組合物包括(a)pH敏感脂質(zhì)體，和(b)包封在脂質(zhì)體內(nèi)的抗原，其中給藥導(dǎo)致由抗原遞呈細(xì)胞的主要組織相容性分子1類進(jìn)行的抗原遞呈增加。又一個(gè)實(shí)施方案提供了治療HIV感染的方法，該方法包括對(duì)有此需要的宿主給藥組合物，該組合物包括與gpl20/gp41復(fù)合物靶向部分結(jié)合的脂質(zhì)體。又一個(gè)實(shí)施方案提供了一種組合物，該組合物包括包含D0PE、CHEMS和PEG-PE脂質(zhì)的脂質(zhì)體和包封在脂質(zhì)體內(nèi)的至少一種治療劑如N-丁基脫氧野尻霉素(yVB-DNJ)。又一個(gè)實(shí)施方案提供了一種組合物，該組合物包括pH敏感脂質(zhì)體和包封在脂質(zhì)體內(nèi)的抗原。又一個(gè)實(shí)施方案提供了一種組合物，該組合物包括與gP120/gp41復(fù)合物靶向部分結(jié)合的脂質(zhì)體。另一個(gè)實(shí)施方案提供了治療或預(yù)防病毒感染的方法，該方法包括對(duì)有此需要的宿主給藥組合物，該組合物包括(a)包含PI脂質(zhì)的脂質(zhì)體，和(b)包封在脂質(zhì)體內(nèi)的至少一種抗病毒治療劑，其中所述接觸導(dǎo)致遞送至少一種治療劑進(jìn)入感染有引發(fā)感染的病毒的細(xì)胞的ER腔內(nèi)，以及將脂質(zhì)體的一種或多種脂質(zhì)并入細(xì)胞的ER膜內(nèi)。又一個(gè)實(shí)施方案提供了一種組合物，該組合物包括包含PI脂質(zhì)的脂質(zhì)體以及包封在脂質(zhì)體內(nèi)的至少一種抗病毒治療劑。又一個(gè)實(shí)施方案提供了治療病毒感染的方法，該方法包括對(duì)有此需要的宿主給藥組合物，該組合物包括(a)包含PI脂質(zhì)的脂質(zhì)體，和(b)嵌入脂質(zhì)體的脂質(zhì)層內(nèi)的至少一種抗病毒蛋白，其中所述接觸導(dǎo)致將脂質(zhì)體的一種或多種脂質(zhì)并入感染有引發(fā)感染的病毒的細(xì)胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜內(nèi)。又一個(gè)實(shí)施方案提供了一種組合物，該組合物包括(a)包含PI脂質(zhì)的脂質(zhì)體，和(b)嵌入脂質(zhì)體的脂質(zhì)層內(nèi)的至少一種抗病毒蛋白o(hù)又一個(gè)實(shí)施方案提供了一種組合物，該組合物包括包含PI脂質(zhì)的脂質(zhì)體以及包封在脂質(zhì)體內(nèi)的至少一種治療劑。又一個(gè)實(shí)施方案提供了治療或預(yù)防生理學(xué)病況的方法，該方法包括對(duì)有此需要的受試者給藥組合物，該組合物包括包含PI脂質(zhì)的脂質(zhì)體以及包封在脂質(zhì)體內(nèi)的至少一種治療劑。又一個(gè)實(shí)施方案提供了一種組合物，該組合物包括包含PI脂質(zhì)的脂質(zhì)體以及嵌入脂質(zhì)體的脂質(zhì)雙分子層內(nèi)的至少一種蛋白質(zhì)。又一個(gè)實(shí)施方案提供了治療或預(yù)防生理學(xué)病況的方法，該方法包括對(duì)有此需要的受試者給藥組合物，該組合物包括包含PI脂質(zhì)的脂質(zhì)體以及嵌入脂質(zhì)體的脂質(zhì)雙分子層內(nèi)的至少一種蛋白質(zhì)。圖l表示在經(jīng)由DCPP-Rh脂質(zhì)體遞送后去淬滅的鈣黃綠素和熒光標(biāo)記脂質(zhì)(Rh-PE)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(ER)定位。圖2表示在CH0和MDBK細(xì)胞中DCPP脂質(zhì)體的毒性。包封PBS的DCPP脂質(zhì)體以最終脂質(zhì)濃度為0-500pM被加入到CHO細(xì)胞中，以0-150juM的濃度被加入到MDBK細(xì)胞中。細(xì)胞和脂質(zhì)體進(jìn)行培養(yǎng)5天，然后通過錐蟲藍(lán)染色測(cè)量細(xì)胞生存率。結(jié)果用與未處理的對(duì)照相比的活細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)表示。圖3是表示在包封有脫氧野尻霉素(DNJ)、薩丁基脫氧野尻霉素(^B-DNJ)和f壬基脫氧野尻霉素(M-DNJ)化合物的條件下在CHO細(xì)胞中DCPP-Rh脂質(zhì)體的攝取和細(xì)胞內(nèi)鈣黃綠素去淬滅的圖表。制備了包封有在兩種不同濃度下的每個(gè)化合物的DCPP-Rh脂質(zhì)體。通過并入細(xì)胞膜內(nèi)的Rh-PE測(cè)量的脂質(zhì)體攝取以及作為細(xì)胞內(nèi)釋放量度的鈣黃綠素去淬滅在用脂質(zhì)體進(jìn)行5分鐘脈沖然后在新鮮的培養(yǎng)基中進(jìn)行30分鐘追蹤后進(jìn)行測(cè)定。圖4表示包含各種DNJ分子的DCPP脂質(zhì)體的pH敏感性。圖5是表示在用AB-DNJ治療后BVDV分泌的圖表游離遞送相對(duì)于用DCPP脂質(zhì)體介導(dǎo)的遞送。在用以游離形式或經(jīng)由脂質(zhì)體以最終脂質(zhì)濃度為50)tiM被加入到培養(yǎng)基中的AB-DNJ治療期間從被感染的MDBK細(xì)胞分泌的BVDV粒子，在3天培養(yǎng)后通過實(shí)時(shí)PCR測(cè)定。表示。15產(chǎn)生的ncpBVDV粒子的感染性，通過與原初MDBK細(xì)胞培養(yǎng)3天進(jìn)行測(cè)量。使用DAPI復(fù)染色作為對(duì)照通過存在于MDBK細(xì)胞中的非結(jié)構(gòu)BVDV蛋白的免疫熒光染色檢測(cè)被感染細(xì)胞。得自BVDV分泌的數(shù)據(jù)(圖2)用于最終百分感染性的歸一化計(jì)算。圖7表示AB-DNJ針對(duì)cpBVDV的抗病毒效果游離遞送相對(duì)于用DC脂質(zhì)體介導(dǎo)的遞送。感染有cpBVDV的MDBK細(xì)胞在存在游離的或包含在DC脂質(zhì)體內(nèi)的AB-DNJ的條件下生長(zhǎng)3天。包含被分泌的病毒的上清液用于感染原初MDBK。在3天后，在顯微鏡下計(jì)數(shù)得到的斑塊(收率測(cè)定)。圖8表示在DNJ存在的條件下對(duì)表達(dá)的HIV包膜蛋白gpl20的聚糖加工的抑制游離遞送相對(duì)于用DCPP脂質(zhì)體介導(dǎo)的遞送。表達(dá)可溶形式的gpl20的CHO細(xì)胞與iVB-DNJ培養(yǎng)，^B-DNJ以游離形式或經(jīng)由脂質(zhì)體以最終脂質(zhì)濃度微100nM被加入到培養(yǎng)基中。通過由ER葡糖苷酶進(jìn)行的葡萄糖修整的抑制測(cè)定的朋-DNJ活性的測(cè)量如下進(jìn)行在捕獲法ELISA中單克隆抗體2G12和b12與用AB-DNJ處理的gpl20的結(jié)合。[OO39]圖9(A-C)表示游離的旭-DNJ對(duì)八個(gè)單獨(dú)的HIV-1初次分離物的抗病毒效果。圖M表示用不同濃度的AB-DNJ處理四周的八個(gè)分離物的平均pM分泌。誤差棒顯示對(duì)于每種治療在分離物之間的標(biāo)準(zhǔn)偏差確定。圖9B顯示在用Q-lmM濃度的游離的AB-DNJ進(jìn)行初步處理后每個(gè)初次分離物的分泌。圖9C表示在三周處理后個(gè)別的初次分離物對(duì)AB-DNJ的敏感性。所有值用未處理的對(duì)照的百分?jǐn)?shù)表示，并且數(shù)據(jù)表示從兩個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的三個(gè)重復(fù)樣品獲得的平均值。關(guān)于每種處理的近似IC50和IC90通過圖表中的灰色(點(diǎn)狀)線表示。圖10A-H提供的數(shù)據(jù)顯示脂質(zhì)體如何增加^-DNJ針對(duì)八個(gè)HIV-1的初次分離物的抗病毒活性。感染有每個(gè)分離物的PBMC(用圖表A到H表示)用包封有各種濃度的AB-DNJ的脂質(zhì)體(L)處理四周。用在培養(yǎng)基中的500nM的游離AB-DNJ(F)的處理作為關(guān)于抗病毒活性的參考被顯示。圖例指出對(duì)于每種處理Afi-DNJ的最終濃度。所有值用未處理的對(duì)照的百分?jǐn)?shù)表示，并且數(shù)據(jù)表示從兩個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的三個(gè)重復(fù)樣品獲得的平均值。圖11表示由感染有大量HIV-1分離物的細(xì)胞進(jìn)行的sCD4-脂質(zhì)體和免疫脂質(zhì)體的攝取。sCD4-脂質(zhì)體和MAb-脂質(zhì)體結(jié)合物與感染有九個(gè)不同的初次分離物(括號(hào)內(nèi)為進(jìn)化枝)的PBMCs培養(yǎng)。增加的攝取通過在培養(yǎng)之后在細(xì)胞中的熒光脂質(zhì)的增加來測(cè)量。所有值被歸一化到"非感染的僅有脂質(zhì)體"的對(duì)照，并且數(shù)據(jù)代表從一個(gè)實(shí)驗(yàn)的三個(gè)重復(fù)值獲得的平均±標(biāo)準(zhǔn)誤差。對(duì)于每個(gè)感染使用一系列單向方差分析然后是在此之后的Tukey試驗(yàn)以檢驗(yàn)在不同靶分子的有效性之間的差異，檢測(cè)相對(duì)攝取數(shù)據(jù)。在脂質(zhì)體結(jié)合物和僅有脂質(zhì)體對(duì)照之間的攝取的顯著差異(P<0.OOOl)用星號(hào)表示。'圖12A-H表示包封3B-DNJ的sCD4-脂質(zhì)體的強(qiáng)力的協(xié)同抗病毒活性。感染有每個(gè)分離物的PBMC(用圖表A到H表示)用包封有各種濃度的AB-DNJ的sCD4-脂質(zhì)體(CD4-L)處理四周。用在培養(yǎng)基中的500^M的游離W-DNJ(F)的處理作為關(guān)于抗病毒活性的參考被顯示。圖例指出對(duì)于每種處理AB-DNJ的最終濃度。所有值用未處理的對(duì)照的百分?jǐn)?shù)表示，并且數(shù)據(jù)表示從一個(gè)實(shí)驗(yàn)的三個(gè)重復(fù)樣品獲得的平均值。圖13A-E表示在用各種脂質(zhì)體制劑脈沖15分鐘后在MDBK細(xì)胞內(nèi)的羅丹明標(biāo)記PE的典型的熒光圖像。特別地，圖13A表示DOPE:CHEMS:Rh-PE(6:4:0.1)的數(shù)據(jù)；圖13B表示DOPC:CHEMS:Rh-PE(6:4:0.1)的數(shù)據(jù)；圖13C表示DOPE:CHEMS:PI:Rh-PE(6:4:1:0.1)的數(shù)據(jù)；圖13D表示DOPE:CHEMS:PI:Rh-PE(6:4:2:0.1)的數(shù)據(jù)和圖13E表示DOPE:CHEMS:PI:Rh-PE(6:4:3:0.1)的數(shù)據(jù)。在時(shí)間點(diǎn)0、1、2、5、24和48小時(shí)觀察每種脂質(zhì)體制劑的Rh-PE的細(xì)胞內(nèi)定位。使用DAPI復(fù)染色來目測(cè)所有細(xì)胞。圖14表示使用各種包含Rh標(biāo)記的PE的脂質(zhì)體制劑處理被cp-BVDV-感染的MDBK細(xì)胞和未被感染的MDBK細(xì)胞并且在培養(yǎng)3天后測(cè)量Rh-PE脂質(zhì)的分泌的效果。在用相同脂質(zhì)體組合物處理的被感染細(xì)胞和未被感染細(xì)胞之間的Rh-PE分泌的增加是由于包含Rh-PE脂質(zhì)的病毒粒子的分泌所導(dǎo)致，該病毒粒子從ER膜出芽。發(fā)明詳述除非另外說明，否則"一，，或"一種"表示"一種或多種"。術(shù)語的定義本文使用的術(shù)語"病毒感染"是指這樣的患病狀態(tài)，其中病毒侵入健康的細(xì)胞，使用細(xì)胞的再生機(jī)構(gòu)進(jìn)行繁殖或復(fù)制并最終使細(xì)胞裂解導(dǎo)致細(xì)胞死亡，釋放病毒粒子并通過新產(chǎn)生的后代病毒感染其它細(xì)胞。某些病毒的潛伏性感染也是可能的病毒感染結(jié)果。本文使用的術(shù)語"治療或預(yù)防病毒感染"是指抑制特定病毒的復(fù)制，抑制病毒傳播，或防止病毒在其宿主中自我創(chuàng)建，和改善或緩解由病毒感染引起的疾病的癥狀。如果病毒負(fù)荷下降、死亡率和/或發(fā)病率降低，則該治療被認(rèn)為具有治療性。術(shù)語"治療劑"是指任何試劑，如分子或化合物，其可幫助治療生理學(xué)病況，諸如病毒感染或由其引起的疾病。本文使用的術(shù)語"協(xié)同效應(yīng)"是指聯(lián)合效果，其比任何一種或多種單個(gè)治療劑的加合效果更有效。本文使用的協(xié)同效應(yīng)是指使用較低量(劑量)的任一單一療法(eithersingletherapy)來治療或預(yù)防生理學(xué)病況如病毒感染或由其引起的疾病的能力。更低劑量可導(dǎo)致治療的毒性更低而效力不降低。另外，協(xié)同效應(yīng)可導(dǎo)致效力改善，例如抗病毒活性的改善。最后，對(duì)于病毒感染，協(xié)同效應(yīng)可導(dǎo)致避免或降低病毒針對(duì)單個(gè)治療劑或單個(gè)療法的抗性的改善。脂質(zhì)體可被定義為是包括球形雙分子層構(gòu)造的脂質(zhì)的有機(jī)化合物。本文論述的脂質(zhì)體可包括由以下縮寫表示的一種或多種18脂質(zhì)CHEMS表示膽固醇半琥珀酸酯脂質(zhì)。DOPE表示二油酰磷脂酰乙醇胺脂質(zhì)。DOPC表示二油酰磷脂酰膽堿脂質(zhì)。PE表示磷脂酰乙醇胺脂質(zhì)。PEG-PE表示聚乙二醇(2000)-二硬脂?；字Ｒ掖及分|(zhì)。Rh-PE表示麗絲胺羅丹明(lissaminerhodamine)B-磷脂酰乙廠，胺脂質(zhì)。MCC-PE表示1，2-二油?；?S77"甘油-3-磷脂乙醇胺-N-[4-(對(duì)-馬來酰亞胺基甲基)環(huán)己烷-甲酰胺]脂質(zhì)。PI表示磷脂酰肌醇脂質(zhì)。術(shù)語"胞內(nèi)遞送"是指被包封的物質(zhì)從脂質(zhì)體遞送進(jìn)入任何胞內(nèi)隔室內(nèi)。IC50或IC90(抑制濃度50或90)是指為實(shí)現(xiàn)病毒感染分別降低50%或90%所使用的治療劑的濃度。DC脂質(zhì)體是指包括摩爾比為6:3的DOPE和CHEMS脂質(zhì)的脂質(zhì)體。DCPP脂質(zhì)體是指包括摩爾比為6:4:0.3的DOPE、C匪S和PEG-PE脂質(zhì)的脂質(zhì)體。PBMC表示外周血單核細(xì)胞。sCD4表示可溶性CD4分子。"可溶性CD4"或"，，或"D1D2"是指CD4分子或其片段，其位于含水溶液中并且其通過改變HIVEnv的構(gòu)造可模仿天然的膜錨定CD4的活性，這可由本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所理解?？扇苄訡D4的一個(gè)實(shí)例是例如在Salzwedel等人.J.Virol.74:326333，2000中描述的雙結(jié)構(gòu)域可溶性CD4(sC/M或D1D2)。MAb表示單克隆抗體。DNJ表示脫氧野尻霉素。W-DNJ表示f丁基脫氧野尻霉素。M-DNJ表示舲壬基脫氧野尻霉素。BVDV表示牛病毒性腹瀉病毒。HBV表示乙型肝炎病毒。HCV表示丙型肝炎病毒。HIV表示人類免疫缺陷病毒。Ncp表示非致細(xì)胞病變型。Cp表示致細(xì)胞病變型。ER表示內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。CHO表示中國倉鼠卵巢細(xì)胞MDBK表示Madin-Darby牛腎細(xì)胞。PCR表示聚合酶鏈反應(yīng)。FOS表示游離的低聚糖。HPLC表示高效液相色鐠法。PHA表示植物血細(xì)胞凝集素。FBS表示胎牛血清。TCID50表示50%組織培養(yǎng)感染劑量。ELISA表示酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定。IgG表示免疫球蛋白(immunoglobuline)。DAPI表示4'，6-二脒基-2-苯基吲哚。PBS表示磷酸鹽緩沖鹽水。病毒感染的脂質(zhì)體治療本發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)接觸細(xì)胞時(shí)，包含DOPE、CHEMS和/或PEG-PE脂質(zhì)的pH敏感脂質(zhì)體，諸如DC脂質(zhì)體或DCPP脂質(zhì)體，內(nèi)的材料直接進(jìn)入細(xì)胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(ER)，即，ER腔。脂質(zhì)體的一種或多種脂質(zhì)還可以并入細(xì)胞的ER膜內(nèi)。這一發(fā)現(xiàn)可提供關(guān)于病毒感染(對(duì)于該病毒感染，病毒需要從ER膜出芽，諸如HBV、HCV和BVDV感染)的治療的主要推斷性結(jié)論因?yàn)橹|(zhì)體的脂質(zhì)并入感染有病毒的細(xì)胞的ER膜可以改變出芽病毒粒子的被膜，并因此降低感染性。本發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)了N-丁基脫氧野尻霉素(AB-DNJ)包封在DCPP脂質(zhì)體內(nèi)，與其它脫氧野尻霉素化合物如脫氧野尻霉素(DNJ)或N-壬基脫氧野尻霉素(M-DNJ)的DCPP包封相比，可以提供增加的細(xì)胞內(nèi)遞送。這種AB-DNJ的增加的細(xì)胞內(nèi)遞送可以導(dǎo)致AB-DNJ的體內(nèi)活性增強(qiáng)。另外，本發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了包括D0PE、CHEMS和/或PEG-PE脂質(zhì)的脂質(zhì)體，諸如DCPP脂質(zhì)體，自身可具有抗病毒效果，即，與包封在脂質(zhì)體內(nèi)的任何治療劑無關(guān)，并且DCPP脂質(zhì)體和包封在脂質(zhì)體內(nèi)的治療劑諸如^B-DNJ針對(duì)病毒可以協(xié)同起作用。因此，一個(gè)實(shí)施方案是治療ER膜病毒出芽感染即病毒出芽可發(fā)生在ER膜處的病毒感染諸如HBV、HCV或BVDV感染。該方法可包括使感染有引發(fā)感染的病毒的細(xì)胞接觸組合物，在該組合物中，AB-DNJ被包封在包含DOPE和CHEMS脂質(zhì)的脂質(zhì)體內(nèi)。這種接觸可提供協(xié)同治療，導(dǎo)致遞送脂質(zhì)體的一種或多種脂質(zhì)到被接觸細(xì)胞的ER膜，改變?cè)撃亩档妥哟《镜母腥拘裕约巴ㄟ^釋放被包封的^B-DNJ直接進(jìn)入細(xì)胞的ER腔內(nèi)實(shí)現(xiàn)協(xié)同治療。另一個(gè)實(shí)施方案是通過使感染有引發(fā)感染的病毒的細(xì)胞接觸組合物來治療病毒感染的方法，該組合物包含l)包含D0PE、CHEMS和PEG-PE脂質(zhì)的脂質(zhì)體，和2)包封在脂質(zhì)體內(nèi)的治療劑。病毒感染可以是，例如，HCV，HBV，BVDV，HIV，莫洛尼鼠科白血病病毒，鼠科肝炎病毒，1型和2型單純皰滲病毒，巨細(xì)胞病毒，辛德畢斯病毒，西門利克森林病毒，皰滲性口腔炎病毒，甲型流感病毒，麻滲病毒，登革熱病毒或日本腦炎病毒，諸如在R.A.Dwek，爭(zhēng)入，Nat.Rev.DrugDiscov.2002Jan;1(1):65-75中公開的。在一些實(shí)施方案中，包封在脂質(zhì)體內(nèi)的治療劑可以是oc-葡糖苷酶抑制劑。在一些實(shí)施方案中，ct-葡糖苷酶抑制劑可以是ERa-葡糖苷酶抑制劑。通常，任何依賴于與釣聯(lián)接蛋白和/或肌鉤網(wǎng)蛋白相互作用用于其病毒被膜糖蛋白的適當(dāng)折疊的病毒可以作為ERa-葡糖苷酶抑制劑的靶標(biāo)。a-葡糖苷酶抑制劑可以是這樣的試劑，與不存在該試劑的條件下的a-葡糖苷酶的酶活性相比，該試劑抑制宿主a-葡糖苷酶的酶活性至少約10%，至少約15%,至少約20%，至少約25%，至少約30%,至少約35%,至少約40%，至少約50°/。，至少約60°/。，至少約70°/。，至少約80%，或至少約90%，或更高。術(shù)語"a-葡糖苷酶抑制劑"包括天然存在的和合成的抑制宿主a-葡糖苷酶活性的試劑。適當(dāng)?shù)腶-葡糖苷酶抑制劑包括但不限于脫氧野尻霉素和N-取代的脫氧野尻霉素，諸如以下的式II的化合物及其可藥用鹽其中R!選自被取代的或未被取代的烷基，被取代的或未被取代的環(huán)烷基，被取代的或未被取代的芳基，或被取代的或未被取代的氧雜坑基，選自但不限于芳基烷基，環(huán)烷基烷基，支鏈或直鏈的烷基，和氧雜烷基；并且其中W、X、Y和Z各自獨(dú)立地選自氫，烷?；减；蚲代烷酰基。在一些的這種實(shí)施方案中，Rl選自乙基，丙基，異丙基，丁基，異丁基，叔丁基，戊基，新戊基，異戊基，己基，-(CH2)20(CH2)5CH3，-(CH2)20(CH2)6CH3,-(CH2)6OCH2CH3，~-(CH2)2OCH2CH2CH3。在其它的這種實(shí)施方案中，R!為丁基，并且W，X，Y和Z都為氫。在一些實(shí)施方案中，式II的化合物選自但不限于N-(正己基-)-l，5-二脫氧-1，5-亞氨基-D-葡萄糖醇；N-(正庚基-)-l，5-二脫氧-1，5-亞氨基-D-葡萄糖醇；N-(正辛基-)-1，5-二脫氧-1，5-亞氨基-D-葡萄糖醇；N-(正辛基-)-l，5-二脫氧-l，5-亞氨基-D-葡萄糖醇，四丁酸酯；N-(正壬基-)-1，5-二脫氧-l，5-亞氨基-D-葡萄糖醇，四丁酸酯；N-(正癸基-)-l，5-二脫氧-1，5-亞氨基-0-葡萄糖醇，四丁酸酯；N-(正十一烷基-)-l，5-二脫氧-l，5-亞氨基-D-葡萄糖醇，四丁酸酯；N-(正壬基-)-l，5-二脫氧-l，5-亞氨基-D-葡萄糖醇；N-(正癸基-)-l，5-二脫氧-l，5-亞氨基-0-葡萄糖醇；壯(正十一烷基-)-l，5-二脫氧-1，5-亞氨基-D-葡萄糖醇；N-(正十二烷基-)-1，5-二脫氧-1，5-亞氨基-D-葡萄糖醇；N-(2-乙基己基)-l，5-二脫氧-l，5-亞氨基-D-葡萄糖醇；N-(4-乙基己基)-1，5-二脫氧-1，5-亞氨基-D-葡萄糖醇;N-(5-甲基己基)-l，5-二脫氧-l，5-亞氨基-D-葡萄糖醇；N-(3-丙基己基)-l，5-二脫氧-l，5-亞氨基-D-葡萄糖醇；N-(l-戊基戊基己基)-l，5-二脫氧-l，5-亞氨基-D-葡萄糖醇;N-(l-丁基丁基)-l，5-二脫氧-l，5-亞氨基-D-葡萄糖醇；N-(7-甲基辛基-)-l，5-二脫氧-l，5-亞氨基-D-葡萄糖醇；N-(8-甲基壬基)-1，5-二脫氧-l，5-亞氨基-D-葡萄糖醇；N-(9-甲基癸基)-1,5-二脫氧-l，5-亞氨基-D-葡萄糖醇；N-(lO-甲基十一烷基)-l，5-二脫氧-l，5-亞氨基-D-葡萄糖醇；N-(6-環(huán)己基己基-)-l，5-二脫氧-l，5-亞氨基-D-葡萄糖醇;N-(4-環(huán)己基丁基)-l，5-二脫氧-1，5-亞氨基-D-葡萄糖醇；N-(2-環(huán)己基乙基)-l，5-二脫氧-l，5-亞氨基-D-葡萄糖醇；N-(l-環(huán)己基甲基)-1，5-二脫氧-l，5-亞氨基-D-葡萄糖醇；N-(l-苯基甲基)-1，5-二脫氧-1,5-亞氨基-D-葡萄糖醇；N-(3-苯基丙基)-l，5-二脫氧-l，5-亞氨基-D-葡萄糖醇；N-(3-(4-甲基)-苯基丙基)-1，5-二脫氧-1，5-亞氨基-D-葡萄糖醇；N-(6-苯基己基)-1，5-二脫氧-l，5-亞氨基-D-葡萄糖醇；N-(正壬基-)-1，5-二脫氧-1，5-亞氨基-D-葡萄糖醇，四丁酸酯；N-(正癸基-)-l，5-二脫氧-1，5-亞氨基-D-葡萄糖醇，四丁酸酯；N-(正H"—烷基-)-1，5-二脫氧-1，5-亞氨基-D-葡萄糖醇，四丁酸酯；N-(正十二烷基-)-1,5-二脫氧-l，5-亞氨基-D-葡萄糖醇，四丁酸酯；N-(2-乙基己基)-l，5-二脫氧-1，5-亞氨基-D-葡萄糖醇，四丁酸酯；N-(4-乙基己基)-1，5-二脫氧-l，5-亞氨基-D-葡萄糖醇，四丁酸酯；N-(5-甲基己基)-l，5-二脫氧-1，5-亞氨基-D-葡萄糖醇，四丁酸酯；N-(3-丙基己基)-1，5-二脫氧-l，5-亞氨基-D-葡萄糖醇，四丁酸酯；N-(l-戊基戊基己基)-l，5-二脫氧-l，5-亞氨基-D-葡萄糖醇，四丁酸酯；N-(l-丁基丁基)-1，5-二脫氧-l，5-亞氨基-D-葡萄糖醇，四丁酸酯；N-(7-甲基辛基-)-l,5-二脫氧-l，5-亞氨基-D-葡萄糖醇，四丁酸酯；N-(8-曱基壬基)-l，5-二脫氧-1，5-亞氨基-D-葡萄糖醇，四丁酸酯；N-(9-甲基癸基)-l，5-二脫氧-l，5-亞氨基-D-葡萄糖醇，四丁酸酯；N-(10-甲基十一烷基)-1，5-二脫氧-1，5-亞氨基-D-葡萄糖醇，四丁酸酯；N-(6-環(huán)己基己基-)-l，5-二脫氧-l,5-亞氨基-D-葡萄糖醇，四丁酸酯；N-(4-環(huán)己基丁基)-1，5-二脫氧-1，5-亞氨基-D-葡萄糖醇，四丁酸酯；N-(2-環(huán)己基乙基)-1，5-二脫氧-1，5-亞氨基-D-葡萄糖醇，四丁酸酯；N-(l-環(huán)己基曱基)-l,5-二脫氧-1,5-亞氨基-D-葡萄糖醇，四丁酸酯；N-(l-苯基甲基)-l，5-二脫氧-l，5-亞氨基-D-葡萄糖醇，四丁酸酯；N-(3-苯基丙基)-l，5-二脫氧-l，5-亞氨基-D-葡萄糖醇，四丁酸酯；N-(3-(4-甲基)-苯基丙基)-l，5-二脫氧-l,5-亞氨基-D-葡萄糖醇，四丁酸酯；N-(6-苯基己基)-l，5-二脫氧-1,5-亞氨基-D-葡萄糖醇，四丁酸酯；其可藥用鹽；和它們中任何兩種或更多種的混合物。適當(dāng)?shù)腶-葡糖苷酶抑制劑還包括N-氧雜烷基化脫氧野尻霉素，諸如在US專利4,639,436中描迷的N-羥基乙基DNJ(米格列醇(Miglitol)或Glyset)。適當(dāng)?shù)腶-葡糖普酶抑制劑還包括栗精胺和栗精胺衍生物，諸如在美國專利申請(qǐng)2006/0194835中公開的式(I)的化合物及其可藥用鹽，包括6-0-丁?；蹙?西戈斯韋(celgosivir))，以及在PCT公報(bào)W001054692中公開的式II的化合物及其可藥用鹽。在一些實(shí)施方案中，a-葡糖苷酶抑制劑可以為阿卡波糖(0-4，6-二脫氧-4-[[(1S，4R，5S，6S)-4，5，6-三羥基-3-(羥基甲基)-2-環(huán)己烯-l-基]氨基]-a-D-吡喃葡萄糖基-(1—4)-0-—-D-吡喃葡萄糖基-(1—4)-D-葡萄糖)，或Precose⑧。阿卡波糖公開在美國專利4，904，769中。在一些實(shí)施方案中，a-葡糖苷酶抑制劑可以為高度純化形式的阿卡波糖(例如，參見美國專利4,904,769)。在一些實(shí)施方案中，包封在脂質(zhì)體內(nèi)的治療劑可以是離子通道抑制劑。在一些實(shí)施方案中，離子通道抑制劑可以是抑制HCVp7蛋白質(zhì)活性的試劑。離子通道抑制劑及其鑒定方法在美國專利公報(bào)2004/0110795中詳述。適當(dāng)?shù)碾x子通道抑制劑包括式I的化合物及其可藥用鹽，包括N-(7-氧雜-壬基)-l，5，6-三脫氧-l,5-亞氨基-D-半乳糖醇(N-7-氧雜-壬基6-MeDGJ或UT231B)和N-10-氧雜十一烷基(undecul)-6-MeDGJ。適當(dāng)?shù)碾x子通道抑制劑還包括但不限于N-壬基脫氧野尻霉素，N-壬基半乳糖脫氧野尻霉素(deoxynogalactonojirimycin)和N-氧雜壬基半乳糖脫氧野屍霉素(deoxynogalactonojirimycin)。在一些實(shí)施方案中，包封在脂質(zhì)體內(nèi)的治療劑可包括亞氨基糖。適當(dāng)?shù)膩啺被前ㄌ烊淮嬖诘膩啺被呛秃铣傻膩啺被?。在一些?shí)施方案中，亞氨基糖可以是脫氧野尻霉素或N-取代的脫氧野尻霉素衍生物。適當(dāng)?shù)腘-取代的脫氧野尻霉素衍生物的實(shí)例包括但不限于本申請(qǐng)的式II的化合物，美國專利6，545，021的式I的化合物，以及N-氧雜烷基化脫氧野尻霉素，諸如在美國專利4，639，436中描述的N-羥基乙基DNJ(米格列醇或Glyset)。在一些實(shí)施方案中，亞氨基糖可以是栗精胺或栗精胺衍生物。適當(dāng)?shù)睦蹙费苌锇ǖ幌抻谠诿绹鴮＠暾?qǐng)2006/0194835中公開的式(I)的化合物及其可藥用鹽，以及在PCT公報(bào)W001054692中公開的式II的化合物及其可藥用鹽。在一些實(shí)施方案中，亞氨基糖可以是半乳糖脫氧野尻霉素(nogalactojirimycin)或其N-取代的衍生物，諸如在PCT公報(bào)WO99/24401和WO01/10429中公開的那些。適當(dāng)?shù)腘-取代的半乳糖脫氧野足霉素(deoxynogalactojirimycin)衍生物的實(shí)例包括但不限于N-烷基化半乳糖脫氧野足霹素(deoxynogalactojirimycin)(N-烷基-1，5-二脫氧-l，5-亞氨基-D-半乳糖醇)，諸如N-壬基半乳糖脫氧野尻霉素，和N-氧雜-烷基化半乳糖脫氧野尻霉素(N-氧雜-烷基-l，5-二脫氧-1，5-亞氨基-D-半乳糖醇)，諸如N-7-氧雜壬基半乳糖脫氧野尻霉素。在一些實(shí)施方案中，亞氨基糖可以是N-取代的1，5，6-三脫氧-1，5-亞氨基-D-半乳糖醇(N-取代的MeDGJ),包括但不限于以下的式I化合物z^CH3其中R選自被取代的或未被取代的烷基，被取代的或未被取代的環(huán)烷基，被取代的或未被取代的雜環(huán)基，或被取代的或未被取代的氧雜烷基。在一些實(shí)施方案中，被取代的或未被取代的烷基和/或被取代的或未被取代的氧雜烷基包含1到16個(gè)碳原子或4到12個(gè)碳原子或8到10個(gè)碳原子。在一些實(shí)施方案中，被取代的或未被取代的烷基和/或被取代的或未被取代的氧雜烷基包括1到4個(gè)氧原子，并且在其它實(shí)施方案中包括1到2個(gè)氧原子。在其它的實(shí)施方案包括1到16個(gè)碳原子和1到4個(gè)氧原子。因此，在一些實(shí)施方案中，R選自但不限于-(CH2)6OCH3，-(CH2)6OCH2CH3，-(CH2)60(CH2)2CH3,-(CH2)60(CH2)3CH3，-(CH2)20(CH2)5CH3，-(CH2)20(CH2)6CH3和-(CH2)20(CH2)7CH3。N-取代的MeDGJs例如公開在PCT公報(bào)W001/10429中。在一些實(shí)施方案中，包封在脂質(zhì)體內(nèi)的治療劑可包括下面式VIII的含氮化合物或其可藥用鹽<formula>formulaseeoriginaldocumentpage26</formula>其中R12為烷基諸如C「C2?；駽「C6或C7-C12或C8-C16并且還可包含1到5個(gè)或1到3個(gè)或1到2個(gè)氧，1112可以是被氧雜取代的烷基衍生物。被氧雜取代的烷基衍生物的實(shí)例包括3-氧雜壬基，3-氧雜癸基，7-氧雜壬基和7-氧雜癸基。R2為氫，r為羧基或d-C4烷氧羰基，或者W和113—起為<formula>formulaseeoriginaldocumentpage27</formula>—(c)n—或一(cxY)n—，其中n為3或4，每個(gè)X獨(dú)立地為氫，羥基，基，羧基，d-C4烷基羧基，d-C4烷基，d-C4烷氧基，d-C4羥基烷基，d-C6酰氧基，或芳酰氧基，并且每個(gè)Y獨(dú)立地為氫，幾基，氨基，羧基，d-C,烷基羧基，d-C4烷基，d-C4烷氧基，d-C4幾基烷基，d-C6酰氧基，芳酰氧基，或被刪除(即，不存在)；R4為氫或缺失(即，不存在)；和R5為氫，羥基，氨基，被取代的氨基，羧基，烷氧羰基，氨基羰基，烷基，芳基，芳烷基，烷氧基，幾基烷基，酰氧基，或芳酰氧基，或者113和115—起形成苯基并且114缺失(即，不存在)。在一些實(shí)施方案中，含氮化合物具有下式結(jié)構(gòu)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage27</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage28</formula>或其中R^IT各自獨(dú)立地選自氫，羥基，氨基，羧基，d-C4烷基羧基，d-C4烷基，C「C4烷氧基，C廠C4羥基烷基，C〗-C4酰氧基，和芳酰氧基；并且R"為氫或d-C6烷基。含氮化合物可以為N-烷基化哌啶，N-氧雜-烷基化哌啶，N-烷基化吡咯烷，N-氧雜-烷基化吡咯烷，N-烷基化苯基胺，N-氧雜-烷基化苯基胺，N-烷基化吡咬，N-氧雜-烷基化吡啶，N-烷基化吡咯，N-氧雜-烷基化吡咯，N-烷基化氨基酸，或N-氧雜-烷基化氨基酸。在某些實(shí)施方案中，N-烷基化哌啶，N-氧雜-烷基化哌啶，N-烷基化吡咯烷，或N-氧雜-烷基化吡咯烷化合物可以為亞氨基糖。例如，在一些實(shí)施方案中，含氮化合物可以為具有下式結(jié)構(gòu)的N-烷基-l，5-二脫氧-l，5-亞氨基-D-半乳糖醇(N-烷基-DGJ)或N-氧雜-烷基-l，5-二脫氧-l，5-亞氨基-D-半乳糖醇(N-氧雜-烷基一DGJ):或具有下式結(jié)構(gòu)的N-烷基-l，5，6-三脫氧-l，5-亞氨基-D-半乳糖醇(N-烷基-MeDGJ)或N-氧雜-烷基-1，5,6-三脫氧-1，5-亞氨基-D-半乳糖醇(N-氧雜-烷基-MeDGJ):R12本文中使用的基團(tuán)具有以下特征，除非另外規(guī)定碳原子數(shù)。烷基具有1到20個(gè)碳原子并且是直鏈或支鏈的、被取代的或未被取代的。烷氧基具有1到16個(gè)碳原子并且是直鏈或支鏈的、被取代的或未被取代的。烷氧羰基是具有2到16個(gè)碳原子的酯基。烯基氧基具有2到16個(gè)碳原子、1到6個(gè)雙鍵并且是直鏈或支鏈的、被取代的或未被取代的。炔基氧基具有2到16個(gè)碳原子、1到3個(gè)三鍵并且是直鏈或支鏈的、被取代的或未被取代的。芳基具有6到14個(gè)碳原子(例如苯基)并且是被取代的或未被取代的。芳烷基氧基(如芐基氧基)和芳酰氧基(如苯甲?；趸?具有7到15個(gè)碳原子并且是被取代的或未被取代的。氨基可以為伯、仲、叔或季氨基(即被取代的氨基)。氨基羰基是具有1到32個(gè)碳原子的酰氨基(如被取代的酰氨基)。被取代的基團(tuán)可包括選自以下的取代基鹵素，羥基，Cw。烷基，C2—1D烯^w，C卜IQ醜>^，或Cl—10^(^i>^0N-烷基化氨基酸可以為N-烷基化的天然存在的氨基酸，諸如N-烷基化的氨基酸。天然存在的氨基酸是20個(gè)常見a-氨基酸(Gly，Ala，Val，Leu,Ile，Ser,Thr，Asp，Asn，Lys，Glu，Gln，Arg，His,Phe，Cys，Trp，Tyr,Met和Pro)和作為天然產(chǎn)物的其它氨基酸如正亮氨酸，乙基甘氨酸，鳥氨酸，甲基丁烯基-甲基蘇氨酸和苯基甘氨酸之一。氨基酸側(cè)鏈(如RO的實(shí)例包括H(甘氨酸)，甲基(丙氨酸)，-CH2C(0)NH2(天門冬酰胺)，-CH廣SH(半胱氨酸)和-CH(0H)CH3(蘇氨酸)。N-烷基化化合物可以通過氨基(或亞氨基)化合物的還原烷基化制備。例如，氨基或亞氨基化合物可以與還原劑(如氰基硼氫化鈉)一起暴露于醛下以將胺進(jìn)行N-烷基化。類似地，N-氧雜-烷基化化合物可以通過氨基(或亞氨基)化合物的還原烷基化制備。例如，氨基或亞氨基化合物可以與還原劑(如氰基硼氫化鈉)一起暴露于氧雜-醛下以將胺進(jìn)行N-氧雜-烷基化。含氮化合物可包括一個(gè)或多個(gè)保護(hù)基。各種保護(hù)基是公知的。通常，保護(hù)基的種類不是決定性的，條件是該保護(hù)基在化合物其它位置上隨后進(jìn)行的任何反應(yīng)的條件下是穩(wěn)定的并且在適當(dāng)時(shí)間點(diǎn)被除去而不會(huì)不利地影響分子的其余部分。另外，保護(hù)基可在完成大體的合成轉(zhuǎn)化之后替代另外的保護(hù)基。很顯然，當(dāng)化合物與本文公開的化合物的唯一區(qū)別僅在于該公開的化合物的一個(gè)或多個(gè)保護(hù)基已被不同的保護(hù)基替代時(shí)，則該化合物處在本發(fā)明的范圍內(nèi)。另外的實(shí)例和條件參見Greene，戶rofe"/^//。rg3/7/cC力e邊/"r/，(IstEd.，1981，Greene&Wuts，2ndEd.，1991)。含氮化合物可以通過例如結(jié)晶法或色譜法進(jìn)行純化?；衔锟舍娪昧Ⅲw特異性的氨基或亞氨基化合物作為原料被立體特異性合成。在制備長(zhǎng)鏈N-烷基化化合物中用作原料的氨基和亞氨基化合物是市售的(Sigma,St.Louis,MO;CambridgeResearchBiochemicals,Norwich,Cheshire,UnitedKingdom;TorontoResearchChemicals,Ontario,Canada),或者可通過已知的合成方法制備。例如，化合物可以是N-烷基化的亞氨基糖化合物或其被氧雜取代的衍生物。亞氨基糖可以為例如脫氧半乳糖野尻霉素(deoxygalactonojirmycin，DGJ),1-甲基-脫氧半乳糖野屁霉素(MeDGJ)，脫氧野尻霉素(DNJ)，altrostatin,2凡5A-二羥基甲基-3凡4A-二羥基吡咯烷(DMDP),或其衍生物、對(duì)映體或立體異構(gòu)體。許多亞氨基糖化合物的合成已被描述。例如，合成DNJ衍生物的方法是已知的并且例如描述在以下文獻(xiàn)中美國專利Nos.5，622,972，5，401，645,5,200,523，5，043，273，4,994,572,4,246,345，4，266，025,4,405,714和4，806，650。合成其它亞氨基糖衍生物的方法是已知的并且例如描述在以下文獻(xiàn)中美國專利Nos.4，861，892,4,894,388，4,910,310，4，996，329，5,011,929，5,013,842，5，017,704，5,580,884，5,286,877,和5，100，797以及PCT公才艮W001/10429。2i，5A-二羥基甲基-3A4A-二羥基吡咯烷(DMDP)的立體特異性合成由Fleet&Smith(re&aAef/ro"Ze".26:1469-1472，1985)描述。被接觸細(xì)胞可以是得自哺乳動(dòng)物諸如人的細(xì)胞。在有些情況下，使被感染細(xì)胞接觸脂質(zhì)體組合物可通過給藥該組合物至包含被感染細(xì)胞的受試者來進(jìn)行。受試者可以是哺乳動(dòng)物，諸如人。在一些實(shí)施方案中，脂質(zhì)體組合物可以通過靜脈內(nèi)注射給藥。然而在一些實(shí)施方案中，脂質(zhì)體組合物可以通過除靜脈內(nèi)注射途徑之外的非腸道途徑給藥，諸如腹膜內(nèi)，皮下，皮內(nèi)，表皮內(nèi)，肌肉內(nèi)或經(jīng)皮途徑。然而在一些實(shí)施方案中，脂質(zhì)體組合物可以通過粘膜表面諸如眼、鼻內(nèi)、肺、腸、直腸和泌尿道的表面給藥。脂質(zhì)體組合物的給藥途徑例如公開在A.S.Ulrich,BiophysicalAspectsofUsingLiposomesasDeliveryVehicles,BioscienceReports,第22巻，第2期，Apr2002,129-150中。治療劑諸如yVB-DNJ經(jīng)由脂質(zhì)體遞送進(jìn)入ER腔，與非脂質(zhì)體方法相比，可以降低抑制ER-葡糖苷酶所需的治療劑的有效量。例如，對(duì)于AB-DNJ，IC90減少了至少100，或減少了至少500,和減少了至少1000，或減少了至少5000，或減少了至少10000,或減少了至少50000或減少了至少100000。這種AB-DNJ的有效抗病毒量的減少可導(dǎo)致在哺乳動(dòng)物特別是人中被給藥的旭-DNJ的最終濃度比毒性水平低一個(gè)或多個(gè)數(shù)量級(jí)。在有些情況下，包含治療劑諸如旭-DNJ的脂質(zhì)體組合物可與一種或多種另外的治療劑諸如抗病毒藥組合接觸被感染細(xì)胞。在有些情況下，這種另外的治療劑可與AB-DNJ共同被包封在脂質(zhì)體內(nèi)。然而在有些情況下，使用這種另外的治療劑接觸被感染細(xì)胞可以是給藥另外的治療劑至包含細(xì)胞的受試者的結(jié)果。另外的治療劑的給藥可以通過附加治療劑至組合物來進(jìn)行。然而在有些情況下，另外的治療劑的給藥可與給藥包含旭-DNJ的脂質(zhì)體組合物分開進(jìn)行。這種分開給藥可以經(jīng)由一定的給藥途徑來進(jìn)行，該給藥途徑可與脂質(zhì)體組合物所用的給藥途徑相同或不同。聯(lián)合治療不僅降低抗病毒活性所需試劑的有效劑量，從而降低其毒性，而且還因?yàn)橥ㄟ^多重機(jī)制攻擊病毒可改善絕對(duì)的抗病毒效果。例如，DCPP脂質(zhì)體的脂質(zhì)和^B-DNJ可以l)在病毒的被膜處起作用，其中使用包含旭-DNJ的脂質(zhì)體的治療可以通過外來脂質(zhì)的加入而改變被膜組成2)通過病毒糖蛋白的錯(cuò)折疊起作用，從而降低感染性。因此，與一種或多種具有的靼標(biāo)或作用機(jī)制不同于AB-DNJ的試劑組合使用的包封^B-DNJ的脂質(zhì)體可以提供加合效果或協(xié)同效果。另外，聯(lián)合治療可以提供規(guī)避或降低病毒抵抗力的發(fā)展的機(jī)會(huì)的手段?？膳c包含AB-DNJ的脂質(zhì)體聯(lián)合使用的特定的另外的治療劑可根據(jù)被治療的病毒感染的不同而異。例如，對(duì)于肝炎感染，諸如HBV、HCV或BVDV感染，這種治療劑可以為核苷類或核苷酸類抗病毒劑和/或免疫刺激劑/免疫調(diào)節(jié)劑?？膳cAB-DNJ聯(lián)合使用用于治療肝炎的多種核苷類藥劑、核苷酸類藥劑和免疫刺激劑/免疫調(diào)節(jié)劑在于2004年2月10日授權(quán)給Jacob等人的美國專利No.6，689，759中舉例說明。例如，對(duì)于丙型肝炎感染的治療，AB-DNJ可與作為核苷類藥劑的l-b-D-呋喃核糖基-lH-l，2，4-三唑-3-甲酰胺(利巴韋林)以及作為免疫刺激劑/免疫調(diào)節(jié)劑的干擾素如干擾素a聯(lián)合被包封在脂質(zhì)體內(nèi)。使用利巴韋林和/或干擾素治療肝炎感染例如在美國專利Nos.6，172，046;6,177,074;6,299,872;6,387,365;6,472,373;6，524，570和6，824，768中被討論。對(duì)于治療HIV感染，可與包含AB-DNJ的脂質(zhì)體聯(lián)合使用的治療劑可以為抗HIV劑，其可以為例如核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶(RT)抑制劑，諸如(-)-2'-脫氧-3'-硫代胞苷-5'-三磷酸酯(3TC);(-)-順式-5-氟-1-[2-(羥基-甲基)-[1，3-氧硫雜環(huán)戊烷-5-基]胞嘧啶(FTC);3，-疊氮基-3，-脫氧胸苷(AZT)和二脫氧-肌普(ddl);非核苷類RT抑制劑，諸如Nll-環(huán)丙基-4-甲基-5，11-二氫-6H-二吡啶并[3，2-b:2，3，-e]-[l，4]二氮雜卓-6-酮(奈韋拉平)，蛋白酶抑制劑或其組合?？笻IV治療劑可用于兩聯(lián)組合或三聯(lián)組合，諸如AZT、DDI和奈韋拉平組合。與gpl20/gP41靶向部分結(jié)合的脂質(zhì)本發(fā)明還提供了包括與gpl20/gp41靶向部分結(jié)合的脂質(zhì)體的組合物以及通過使感染有HIV感染的細(xì)胞接觸這種組合物來治療HIV感染的方法。gpl20/gp41靶向部分可包括sCD4分子或單克隆抗體，諸如IgG2F5或IgGbl2抗體。在一些實(shí)施方案中，脂質(zhì)體可包括DOPE和CHEMS脂質(zhì)。在一些實(shí)施方案中，脂質(zhì)體可進(jìn)一步包括PEG-PE脂質(zhì)。在一些實(shí)施方案中，脂質(zhì)體可進(jìn)一步包括MCC-PE脂質(zhì)。對(duì)于HIV感染的治療，該組合物可進(jìn)一步包括包封在脂質(zhì)體內(nèi)的另外的治療劑，諸如AB-DNJ。包含PI脂質(zhì)的脂質(zhì)體本發(fā)明人還已發(fā)現(xiàn)包括磷脂酰肌醇(PI)脂質(zhì)的脂質(zhì)體，諸如pH敏感脂質(zhì)體，與不含PI脂質(zhì)的脂質(zhì)體相比，可更有效地靶向細(xì)胞的ER膜。另外，包含PI脂質(zhì)的脂質(zhì)體可增加經(jīng)由脂質(zhì)體被遞送有一種或多種脂質(zhì)的細(xì)胞的生命期。因此，在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種組合物，其包括包含PI脂質(zhì)的脂質(zhì)體和包封在脂質(zhì)體內(nèi)的至少一種治療劑諸如抗病毒治療劑，以及提供了用于靶向遞送的方法，該方法包括給藥這種組合物至受試者，受試者可以是哺乳動(dòng)物，諸如人。這種靶向遞送方法可用于治療或預(yù)防受生理學(xué)病況影響的受試者中的生理學(xué)病況，諸如病毒感染或由其引起的疾病。本發(fā)明人進(jìn)一步相信將至少一種抗病毒蛋白并入ER靼向脂質(zhì)體內(nèi)可協(xié)同地降低病毒感染性，原因有l(wèi))直接遞送脂質(zhì)體的脂質(zhì)進(jìn)入ER膜內(nèi)，使得當(dāng)ER膜被并入病毒被膜內(nèi)時(shí)可降低病毒感染性，和2)直接遞送至少一種抗病毒蛋白進(jìn)入ER膜，ER膜可被并入出芽粒子的病毒被膜內(nèi)并獨(dú)立地降低感染性。至少一種治療劑諸如抗病毒治療劑被包封在脂質(zhì)體內(nèi)可提供另外的協(xié)同效果，原因?yàn)?)直接33遞送治療劑進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)隔室諸如ER腔內(nèi)。因此，在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種組合物，其包括包含PI脂質(zhì)的脂質(zhì)體和嵌入脂質(zhì)體的脂質(zhì)雙分子層內(nèi)的至少一種蛋白質(zhì)諸如抗病毒蛋白，以及提供了用于靶向遞送的方法，該方法包括給藥這種組合物至受試者，受試者可以是哺乳動(dòng)物，諸如人。這種粑向遞送方法可用于治療或預(yù)防受生理學(xué)病況影響的受試者中的生理學(xué)病況，諸如病毒感染或由其引起的疾病。然而在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種組合物，其包括包含PI脂質(zhì)的脂質(zhì)體、包封在脂質(zhì)體內(nèi)的至少一種治療劑諸如抗病毒組合物、以及嵌入脂質(zhì)體的脂質(zhì)雙分子層內(nèi)的至少一種蛋白質(zhì)諸如抗病毒蛋白，以及提供了用于靼向遞送的方法，該方法包括給藥這種組合物至受試者，受試者可以是哺乳動(dòng)物，諸如人。病毒感染可以為例如ER膜出芽病毒感染，即，病毒出芽發(fā)生在ER膜處的病毒感染，諸如HBV、HCV或BVDV感染，或?yàn)橘|(zhì)膜出芽病毒感染，即，病毒出芽發(fā)生在質(zhì)膜處的病毒感染，諸如HIV包含PI脂質(zhì)的脂質(zhì)體可進(jìn)一步包含一種或多種脂質(zhì)諸如D0PE、CHEMS和/或PEG-PE脂質(zhì)。脂質(zhì)體內(nèi)的PI脂質(zhì)的摩爾濃度可為約3%到約60%，或約5%到約50%,或約10%到約30%。在一些實(shí)施方案中，包封在包含PI脂質(zhì)的脂質(zhì)體內(nèi)的治療劑可以是a-葡糖苷酶抑制劑，諸如上面討論的的a-葡糖苷酶抑制劑中的任一種。在一些實(shí)施方案中，包封在包含PI脂質(zhì)的脂質(zhì)體內(nèi)的治療劑可以是上面討論的離子通道活性抑制劑。在一些實(shí)施方案中，包封在包含PI脂質(zhì)的脂質(zhì)體內(nèi)的治療劑可以是亞氨基糖，諸如上面討論的亞氨基糖中的任一種。在一些實(shí)施方案中，包封在包含PI脂質(zhì)的脂質(zhì)體內(nèi)的治療劑可以是式VIII的含氮化合物。在一些實(shí)施方案中，嵌入包含PI脂質(zhì)的脂質(zhì)體內(nèi)的34蛋白質(zhì)可以是抗病毒蛋白。適當(dāng)?shù)目共《镜鞍装ǖ幌抻谝阎c病毒被膜蛋白結(jié)合的病毒受體和/或病毒被膜蛋白的突變形式和/或已知干涉病毒被膜相互作用的蛋白質(zhì)。例如，對(duì)于HIV感染，抗病毒蛋白可以是CD4蛋白。對(duì)于HCV、BVDV或HBV感染，抗病毒蛋白可以是其各自的病毒被膜蛋白之一諸如關(guān)于HCV/BVDV的El或E2蛋白的突變形式。本發(fā)明進(jìn)一步通過以下實(shí)施例進(jìn)行舉例說明，然而決不限于以下實(shí)施例。脂質(zhì)體制備所有實(shí)驗(yàn)中使用的脂質(zhì)體如下被制備將脂質(zhì)的氯仿溶液置于玻璃管內(nèi)，在氮?dú)夥障抡舭l(fā)溶劑，然后減壓真空離心。脂質(zhì)膜(IO微摩爾的總脂質(zhì))通過在1mlPBS緩沖液，pH7.4(有或者沒有藥物和/或80mM鈣黃綠素，在PBS中)在室溫下渦流1小時(shí)進(jìn)行水合。所得的多層小泡在浴型聲波儀中超聲處理15分鐘，然后擠壓通過80納米孔徑的聚碳酸酯過濾器21次。包封濃度的優(yōu)化將熒光分子鈣黃綠素以80mM濃度包封在DCPP脂質(zhì)體內(nèi)，在該濃度下，其熒光自我淬滅。鉀黃綠素從脂質(zhì)體的滲漏及其在周圍介質(zhì)中的稀釋導(dǎo)致去淬滅(dequenching)和可測(cè)量的/可觀察的熒光的增加。通過在MES-緩沖鹽水(pH7.4)中稀釋最終的包含鉀黃綠素的脂質(zhì)體制劑到0.5pM的最終磷脂濃度計(jì)算包封％，以及在加入TritonX-100到0.1%的最終濃度之前和之后在入ex-490nm和入em-520認(rèn)下測(cè)量鈣黃綠素。在添加清潔劑之后的熒光差作為脂質(zhì)體內(nèi)的包封％,并用于評(píng)價(jià)DNJ-化合物的量以確定每個(gè)實(shí)驗(yàn)中化合物的最終濃度。脂質(zhì)包封進(jìn)入ER膜脂質(zhì)體能遞送被包封的材料直接進(jìn)入ER腔內(nèi)，同時(shí)脂質(zhì)被并入ER膜內(nèi)。初步證據(jù)來自具有熒光標(biāo)記的標(biāo)記脂質(zhì)體，其中與PE結(jié)合的羅丹明(Rh-PE)被并入DCPP脂質(zhì)體內(nèi)(1°/。的摩爾含量)，以便脂質(zhì)內(nèi)容物是摩爾比為6:4:0.3:0.1的DOPE:CHEMS:PEG-PE:Rh-PE(DCPP-Rh)。MDBK細(xì)胞用Rh-PE-標(biāo)記的并包含鈣黃綠素的pH敏感脂質(zhì)體脈沖(pulsed)30分鐘。除去未吸附的脂質(zhì)體并且進(jìn)一步追蹤細(xì)胞3小時(shí)。在追蹤時(shí)段的末期，細(xì)胞與ER-跟蹤器(ER標(biāo)記物)溫育30分鐘，洗涂并目測(cè)。圖1中所示的合并圖顯示了鈣黃綠素、Rh標(biāo)記脂質(zhì)和ER跟蹤器的共同定位。基于此，可得出結(jié)論在與ER膜初始融合步驟后，脂質(zhì)體遞送其含水內(nèi)容物到ER，所述初始融合步驟由ER-跟蹤器、并入ER膜內(nèi)的染料對(duì)脂質(zhì)體脂質(zhì)共同定位顯示。脂質(zhì)體毒性脂質(zhì)體的毒性在兩個(gè)不同的細(xì)胞系中進(jìn)行測(cè)量中國倉鼠卵巢(CHO)細(xì)胞和Madin-Darby牛腎(MDBK)細(xì)胞。將細(xì)胞接種在6孔板中到超過80%的匯合，將包封PBS的DCPP脂質(zhì)體以對(duì)于CHO細(xì)胞為0-500pM的最終脂質(zhì)濃度范圍和對(duì)于MDBK細(xì)胞為0-150pM的最終脂質(zhì)濃度范圍加入到介質(zhì)中。使細(xì)胞和脂質(zhì)體在37。C下放置溫育5天，然后收獲細(xì)胞，并在用錐蟲藍(lán)染色后進(jìn)行計(jì)數(shù)。結(jié)果表示為與未經(jīng)處理的對(duì)照(在X軸上-100。/。)相比，在被處理樣品中存在的活細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)，并且結(jié)果是得自三個(gè)單獨(dú)實(shí)驗(yàn)的重復(fù)實(shí)驗(yàn)值的平均值土S.D.。結(jié)果在圖2中示出，其中在CHO細(xì)胞中的細(xì)胞毒性在存在150iiM脂質(zhì)濃度的條件下溫育后逐漸顯出。MDBK細(xì)胞似乎對(duì)DCPP脂質(zhì)體更敏感，并在脂質(zhì)濃度大于75pM下顯示嚴(yán)重的細(xì)胞毒性。亞氨基糖從DCPP脂質(zhì)體的釋放在所有使用CHO細(xì)胞和MDBK細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)中，添加DCPP脂質(zhì)體至最終脂質(zhì)濃度分別為100pM和50(二者都為>95%的細(xì)胞存活率)。在以下實(shí)施例中，旭-DNJ的丁基鏈表現(xiàn)為直接引起被包封材料從DCPP脂質(zhì)體的胞內(nèi)釋放漸增。當(dāng)被包封在DCPP脂質(zhì)體內(nèi)時(shí)，不同的DNJ化合物對(duì)細(xì)胞攝取和細(xì)胞內(nèi)釋放的影響通過如前所述的在80-mM鈣黃綠素中稀釋化合物以及將Rh-PE并入脂質(zhì)體膜內(nèi)測(cè)量，最終的脂質(zhì)體組成為DOPE:C隨S:PEG-PE:Rh-PE(DCPP-Rh，6:4:0.3:0,1)。單獨(dú)的包封鉀黃綠素的脂質(zhì)體，IO，MDNJ，l-mMDNJ，lO-pMAB-DNJ，l-mMi\B-DNJ，NN-DNJ或1-mMNN-DNJ與CHO細(xì)胞溫育45分鐘，然后除去脂質(zhì)體，將細(xì)胞用1xPBS洗滌兩次。然后在熒光計(jì)中分析細(xì)胞以測(cè)量鈣黃綠素去淬滅Uex-490nm和入e,520nm)和羅丹明熒光U6X-584nm和1-612nm)。數(shù)據(jù)代表從四個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的一式三份的實(shí)驗(yàn)值獲得的平均值±S.D.，其中平均羅丹明熒光值反映脂質(zhì)體的結(jié)合和攝取，以及平均鈣黃綠素?zé)晒夥从橙玖系募?xì)胞內(nèi)去淬滅(即，染料從脂質(zhì)體釋放進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)隔室)。結(jié)果表示為，與釣黃綠素/PBS-單獨(dú)的脂質(zhì)體對(duì)照(在x軸上-100%)相比，與包含DNJ的脂質(zhì)體溫育后測(cè)量的熒光、如圖3所示，DNJ和NN-DNJ二者對(duì)鈞黃綠素去淬滅的量都沒有影響，并因此對(duì)細(xì)胞內(nèi)釋放沒有影響。然而，AB-DNJ在去淬滅的鈣黃綠素中顯示濃度依賴性增加，其中10jliM和1mM的制劑分別導(dǎo)致約1.8倍和2.3倍增加。計(jì)算的鉀黃綠素對(duì)羅丹明焚光的比作為每個(gè)與細(xì)胞結(jié)合的脂質(zhì)體中釋放的含水標(biāo)記物的量的量度，并代表細(xì)胞內(nèi)遞送效率。計(jì)算的關(guān)于每個(gè)被包封材料的效率列于表1中。結(jié)果顯示10pM和1mM的包含W-DNJ的脂質(zhì)體增加從DCPP脂質(zhì)體的細(xì)胞內(nèi)遞送效率分別為約2倍和3倍。37表1.通過得自圖4的去淬滅鈣黃綠素和Rh-PE并入的熒光測(cè)量而測(cè)定的從DCPP脂質(zhì)體的細(xì)胞內(nèi)釋放的效率。<table>tableseeoriginaldocumentpage38</column></row><table>盡管本發(fā)明不受其操作理論的約束，但是W-MJ的丁基鏈促進(jìn)被包封材料從DCPP脂質(zhì)體的細(xì)胞內(nèi)遞送的增加所依賴的機(jī)制有可能是通過將丁基鏈嵌入脂質(zhì)雙分子層內(nèi)而使脂質(zhì)體不穩(wěn)定所致。NN-DNJ的9碳烷基鏈還可將其自身嵌入脂質(zhì)體的脂質(zhì)雙分子層內(nèi)；然而，在這一長(zhǎng)度下，該分子實(shí)際上可能使雙層結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，如所提供的結(jié)果所暗示的。盡管NN-DNJ脂質(zhì)體導(dǎo)致細(xì)胞攝取增加，但是釋放的鈣黃綠素的量保持為可與對(duì)照比較，表明脂質(zhì)體穩(wěn)定性在細(xì)胞內(nèi)增加。DCPP脂質(zhì)體的穩(wěn)定性在以下實(shí)施例中，^-DNJ和NN-DNJ的烷基鏈經(jīng)顯示通過使DCPP脂質(zhì)體在更低pH條件下更穩(wěn)定而改變DCPP脂質(zhì)體的性質(zhì)。結(jié)果在圖4中示出，在圖4中在僅有鈣黃綠素的脂質(zhì)體和DNJ被包封的脂質(zhì)體之間沒有觀察到穩(wěn)定性差異。然而，觀察到^B-DNJ和NN-DNJ脂質(zhì)體的pH敏感性顯著降低，表明由于烷基鏈導(dǎo)致在低pH下穩(wěn)定性增加。盡管^B-DNJ和NN-DNJ二者都在體外賦予DCPP脂質(zhì)體以更大的穩(wěn)定性，實(shí)際上在體內(nèi)僅NN-DNJ抑制鈣黃綠素遞送(如圖4和表1中觀察到的)，突出了不同于pH敏感性的因素的存在該因素影響或控制細(xì)胞內(nèi)負(fù)荷釋放的過程?；趫D3、圖4和表1的發(fā)現(xiàn)，可得出結(jié)論當(dāng)被包封在脂質(zhì)體內(nèi)時(shí)，不僅是DNJ分子上烷基鏈的存在，而且是DNJ分子上烷基鏈的長(zhǎng)度，可以影響脂質(zhì)體的性質(zhì)。這些觀察很可能是由于烷基鏈嵌入脂質(zhì)體的脂質(zhì)雙分子層內(nèi)并有效地改變脂質(zhì)組成所導(dǎo)致。盡管在這些研究中僅使用了4碳鏈(AB-DNJ)和9碳鏈(NN-DNJ)，似乎仿佛更短的鏈可在體內(nèi)使脂質(zhì)體不穩(wěn)定以增加負(fù)荷分子的細(xì)胞內(nèi)釋放，而更長(zhǎng)的鏈可使相同的脂質(zhì)組成穩(wěn)定從而使釋放受抑。通過y\B-DNJ包封在DCPP脂質(zhì)體內(nèi)減少BVDV分泌在以下實(shí)施例中，包封在DCPP脂質(zhì)體內(nèi)的AB-DNJ經(jīng)顯示減少BVDV粒子從MDBK細(xì)胞的分泌。被并入DC和DCPP脂質(zhì)體內(nèi)的^-DNJ的組合抗病毒效果已經(jīng)在感染有BVDV的cp林或ncp林的MDBK細(xì)胞中有顯示。在采用BVDV的ncp抹的第一研究中，將AB-DNJ以游離形式加入到培養(yǎng)基中，以便最終濃度為O到750nM。在單獨(dú)的培養(yǎng)中，加入A6-DNJDCPP脂質(zhì)體以便最終脂質(zhì)濃度為50pM且最終y\B-DNJ濃度為0到750nM。在6孔板內(nèi)一式兩份進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。在培養(yǎng)3天后測(cè)量分泌的BVDV病毒粒子的量。通過對(duì)從500jil的上清液中提取的病毒RNA進(jìn)行定量PCR(實(shí)時(shí)PCR)進(jìn)行病毒分泌分析。實(shí)時(shí)PCR使用針39對(duì)ncpBVDVMA的引物，其中正向引物序列為TAGGGCAAACCATCTGGAAG且反向引物序列為ACTTGGAGCTACAGGCCTCA。結(jié)果表示為，與未經(jīng)處理的對(duì)照(在x軸上-100°/。)相比，存在于被處理樣品中的RNA拷貝的百分?jǐn)?shù)。圖5表示游離的旭-DNJ和在DCPP脂質(zhì)體內(nèi)的AB-DNJ對(duì)ncpBVDV的分泌的影響的結(jié)果。使用最終濃度為750nM的^B-DNJ，在脂質(zhì)體介導(dǎo)的遞送條件下，分泌的病毒粒子的數(shù)目降低了2倍，并且在游離遞送下無影響?？蛇M(jìn)一步優(yōu)化試驗(yàn)以降低病毒分泌，甚至進(jìn)一步通過增加脂質(zhì)體或者被包封AB-DNJ的濃度。盡管本發(fā)明不受其操作理論的約束，但是BVDV分泌受到抑制所憑借的機(jī)制可能是由于ER內(nèi)葡糖苷酶抑制所導(dǎo)致的病毒糖蛋白諸如El和E2的潴留所致。BVDV感染性在以下實(shí)施例中，空的DCPP脂質(zhì)體以及包封^B-DNJ的DCPP脂質(zhì)體，經(jīng)顯示降低MDBK細(xì)胞的BVDV粒子的感染性。DCPP脂質(zhì)體和旭-DNJ也顯示協(xié)同起作用。使用從先前實(shí)驗(yàn)(包含分泌的BVDV的500pl的上清液)收集的BVDV病毒粒子，通過與原初MDBK細(xì)胞溫育3天然后進(jìn)行免疫熒光染色以鑒定被感染細(xì)胞中BVDV蛋白質(zhì)來測(cè)定分泌的經(jīng)AB-DNJ處理的BVDV的感染性。細(xì)胞在感染后使用抗BVDVNS2-NS3單克隆抗體染色，然后使用FITC標(biāo)記第二抗體染色。使用6孔板一式兩份進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。通過以非結(jié)構(gòu)BVDV蛋白質(zhì)的存在所識(shí)別的被感染細(xì)胞數(shù)目除以通過細(xì)胞核的DAPI染色所確定的總細(xì)胞計(jì)數(shù)來計(jì)算病毒感染性、還將結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)化，從而說明每個(gè)樣品中病毒滴度的降低或增加(來自BVDV分泌實(shí)驗(yàn)的結(jié)果)。圖6表示游離的^B-DNJ和在DCPP脂質(zhì)體內(nèi)的AB-DNJ對(duì)ncpBVDV的感染性的影響的結(jié)果。這些結(jié)果顯示了未經(jīng)處理的BVDV、以及用高達(dá)750nM最終濃度的游離^B-DNJ處理的BVDV產(chǎn)生病毒后代，其能夠感染約20%的原初MDBK細(xì)胞。然而，與750nM的經(jīng)由DCPP脂質(zhì)體遞送的旭-DNJ溫育的被感染細(xì)胞顯著降低病毒后代的感染性(不到1%的原初細(xì)胞被感染)。令人驚訝地是，所有的用DCPP脂質(zhì)體(有或者沒有被包封的溜-DNJ)處理的被感染MDBK細(xì)胞使被病毒后代感染的細(xì)胞數(shù)降低了約7%。因此，僅包封lxPBS的DCPP脂質(zhì)體與未經(jīng)處理的病毒相比使BVDV感染性降低了幾乎3倍，然而，與750nMAB-DNJ組合時(shí)，抗病毒效果增加到高于對(duì)照20倍。在750nM的相同濃度下以游離形式被加入到培養(yǎng)基中的W-DNJ幾乎不具有影響?？蛇M(jìn)一步優(yōu)化試驗(yàn)以通過增加脂質(zhì)體或者被包封DNJ的濃度完全消除病毒感染性。盡管本發(fā)明不受其操作理論的約束，但是病毒感染性受使用包封有DNJ的DCPP脂質(zhì)體處理的影響所憑借的機(jī)制可以是被并入ER膜內(nèi)的DCPP脂質(zhì)以及抗病毒劑AB-DNJ被直接靶向遞送到其作用部位導(dǎo)致活性增強(qiáng)和病毒糖蛋白的錯(cuò)折疊的組合效果。結(jié)果是，用這些脂質(zhì)體處理的病毒后代在其病毒被膜內(nèi)除了病毒糖蛋白之外還可存在DCPP脂質(zhì)，所述病毒糖蛋白由于在ER中缺乏聚糖加工而是有缺陷的。用脂質(zhì)體包封的AB-DNJ的抗病毒效果還試驗(yàn)了包含在脂質(zhì)體內(nèi)的^B-DNJ對(duì)抗cpBVDV的抗病毒效果，使用收率減少(yieldreduction)試驗(yàn)，該方法利用能夠在被感染細(xì)胞的單層上形成斑塊的cp林。圖7表示游離的W-DNJ相對(duì)于用DC脂質(zhì)體包封的yVB-DNJ對(duì)感染性cpBVDV的分泌的影響。感染有cpBVDV的MDBK細(xì)胞用游離的vVB-DNJ或用DC脂質(zhì)體包封的AB-DNJ處理3天，以便最終的W-DNJ濃度為0到500pM且總脂質(zhì)濃度為100|iM。然后取得上清液并用于在六孔板內(nèi)感染新鮮的MDBK單層。3天后在顯微鏡下計(jì)數(shù)斑塊(斑塊法)，并且結(jié)果用作為用不含藥物的上清液進(jìn)行感染(-100%)(x軸)所得的斑塊數(shù)的百分?jǐn)?shù)表示。y軸表示在斑塊法中使用的游離的AB-DNJ的濃度或包含在DC脂質(zhì)體內(nèi)的AB-DNJ的濃度。IC5Q在曲線的底部被標(biāo)明。結(jié)果顯示了被包含在DC脂質(zhì)體內(nèi)的AB-DNJ導(dǎo)致對(duì)感染性BVDV的分泌的抑制高8倍(IC50為20pM,與游離藥物IC50為175pM相比)。可通過將iVB-DNJ并入DCPP脂質(zhì)體內(nèi)優(yōu)化在cpBVDV上進(jìn)行的試驗(yàn)，^-DNJ在細(xì)胞培養(yǎng)基中更穩(wěn)定并因此具有改善的抗病毒效果。通過游離低聚糖分析測(cè)量的被DCPP包封的DNJ的增加的活性對(duì)在游離的i\B-DNJ或被DCPP脂質(zhì)體包封的W-DNJ存在的條件下產(chǎn)生的游離低聚糖(FOS)進(jìn)行表征并用作葡糖苷酶抑制的細(xì)胞標(biāo)記物以測(cè)量由細(xì)胞內(nèi)遞送所致的藥物活性的增強(qiáng)。已經(jīng)表明FOS通過細(xì)胞溶質(zhì)肽N-聚糖酶(PNGase)對(duì)從ER輸出的錯(cuò)折疊糖蛋白的作用而產(chǎn)生，用于經(jīng)由ER膜內(nèi)包含Sec61的通道的蛋白水解酶降解。存在于FOS中的聚糖的鑒定揭示了蛋白質(zhì)折疊在什么階段被阻止。在該實(shí)驗(yàn)中，糖基化FOS的分布用作被怖-DNJ葡糖苷酶抑制的量度，其中GlClMann-FOS和Glc2Mann-FOS形式是葡糖苷酶II抑制的結(jié)果，并且Glc3Mann-FOS是葡糖苷酶I抑制的結(jié)果。CHO細(xì)胞在抗病毒濃度為0,5niM的游離順-DNJ存在的條件下進(jìn)行溫育，或與100^M的用DCPP脂質(zhì)體包封的AB-DNJ在最終濃度為0-"nM下進(jìn)行溫育。細(xì)胞放置培養(yǎng)5天并使用如Mellor爭(zhēng)入(2004).BiochemJ.2004August1;381(Pt3):861-866所述的標(biāo)準(zhǔn)化到500的總蛋白的細(xì)胞勻漿進(jìn)行FOS的分離。在用2-氨基苯甲酰胺標(biāo)記低聚糖后通過正相HPLC檢測(cè)F0S。對(duì)FOS的組成進(jìn)一步表征并通過用包括內(nèi)切糖普酶H、刀豆a-甘露糖苷酶和a-葡糖苷酶I和II的糖苷酶進(jìn)行消化來測(cè)定。計(jì)算每個(gè)樣品的非葡萄糖基化的和葡萄糖基化的低聚甘露糖FOS的百分?jǐn)?shù)(由Mann-FOS、GlClMann-F0S、Glc2Mann-F0S和Glc3MarifF0S表示)，并且結(jié)果如表2所示。結(jié)果代表四個(gè)單獨(dú)的實(shí)驗(yàn)的平均值士S.D.。表2.在CH0細(xì)胞中在游離的^B-DNJ或通過DCPP脂質(zhì)體遞送的AB-DNJ存在的條件下產(chǎn)生的FOS的分布。AB-麗樣品總F0S的分—卩(％±S.D.)Glc。MannGlc2MannGlc3Man未經(jīng)處理78.8±4.316.0±2.43.4±0.51.8±0.20.5mM游離的11.9±1.99.5±0.931.7±4.546.9±4.8PBS，在脂質(zhì)體中81.2±6.415.2±4.82.9±1.80.7±0.50.75pM,在脂質(zhì)體中70.7±5.418.7±3.77.7±1.12.9±0.97.5pM,在脂質(zhì)體中70.4±4.217.7±1.38.3±2,13.6±1.375pM，在脂質(zhì)體中51.7±4.738.6±4.15.3±1.84.4±2.80.75nM,在脂質(zhì)體中20.4±2.766.9±5.17.4±3.35.3±2.97.5nM，在脂質(zhì)體中12.7±2.650.0±4.828.6±2.78.7±1.775nM,在脂質(zhì)體中13.2±4.17.9±2.826.6±4.552.3±6.2在抗病毒濃度為0.5mM的游離AB-DNJ存在的條件下進(jìn)行溫育的CHO細(xì)胞主要產(chǎn)生FOS的三葡萄糖基化形式，表明在此濃度下葡糖苷酶I的抑制。這可暗示出葡糖苷酶I的抑制決定著先前報(bào)導(dǎo)的DNJ對(duì)HIV的抗病毒效果。在DNJ濃度增加的條件下從用脂質(zhì)體處理的樣品中分離的FOS揭示了葡萄糖基化FOS的分布從主要為GldMan-FOS向Glc3Man-FOS逐漸移動(dòng)，分別伴有葡糖苷酶II和I的抑制。當(dāng)經(jīng)由DCPP脂質(zhì)體遞送時(shí)，用最終濃度為750nM溜-DNJ處理的樣品顯示了與對(duì)于在0.5mM下進(jìn)行游離培養(yǎng)的葡糖苷酶I的抑制相當(dāng)?shù)乃剑凳居捎诩?xì)胞內(nèi)遞送所致的抗病毒活性增強(qiáng)約600到700倍。盡管本發(fā)明不受其操作理論的約束，但是實(shí)現(xiàn)旭-DNJ活性增加所憑借的機(jī)制可通過直接遞送該抗病毒劑至其作用部位(即ER腔)進(jìn)行。直接ER遞送可允許抗病毒劑繞過血漿和ER膜二者，它們二者當(dāng)旭-DNJ以游離方式被加入到周圍介質(zhì)中時(shí)可充當(dāng)屏障。當(dāng)AB-DNJ用于包封時(shí)所觀察到的細(xì)胞內(nèi)遞送水平的增加還可促進(jìn)由于43旭-DNJ在ER腔內(nèi)的濃度高于其它化合物所致的活性的增強(qiáng)。通過2G12抗體結(jié)合測(cè)定的用DCPP包封的旭-DNJ的活性增加在以下實(shí)施例中，在游離的AB-DNJ或用DCPP脂質(zhì)體包封的旭-DNJ存在的條件下，在CHO細(xì)胞中表達(dá)后，通過測(cè)量對(duì)HIV被膜蛋白gpl20的聚糖加工的抑制而測(cè)定旭-DNJ的活性。表達(dá)可溶形式的HIVgpl20的CH0細(xì)胞在培養(yǎng)基中的濃度為0-5mM的游離AB-DNJ存在的條件下或最終濃度為0到750nM的用脂質(zhì)體包封的朋-DNJ存在的條件下進(jìn)行培養(yǎng)。將細(xì)胞放置培養(yǎng)5天，然后收集包含被處理的gpl20的細(xì)胞上清液。為了測(cè)量在AB-DNJ(游離的或在脂質(zhì)體內(nèi))存在的條件下對(duì)表達(dá)的gpl20的聚糖加工的抑制，通過捕獲ELISA測(cè)定MAb2G12的結(jié)合。2G12識(shí)別gpl20的富含碳水化合物的表面上的甘露糖殘基集簇，在AB-DNJ存在的條件下結(jié)合的喪失歸因于在形成表位的低聚甘露糖聚糖上的葡萄糖的潴留。然而，結(jié)合親合力的喪失還可歸因于蛋白質(zhì)的錯(cuò)折疊，并且為了區(qū)別這兩種可能性，還測(cè)量了所有樣品對(duì)中和MAb,bl2的親和力。bl2抗體識(shí)別構(gòu)象敏感表位-CD4結(jié)合位點(diǎn)，其不與2G12的重疊。位于細(xì)胞上清液內(nèi)的可溶gpl20被捕獲在采用D7324抗體(結(jié)合gpl20的C5結(jié)構(gòu)域)的ELISA板中并用10jag/ml的2G12或bl2處理。兩種抗體對(duì)用AB-DNJ處理的樣品的結(jié)合與對(duì)未經(jīng)處理的gpl20的結(jié)合相關(guān)，其中數(shù)據(jù)用結(jié)合°/。表示并且代表從四個(gè)單獨(dú)的實(shí)驗(yàn)進(jìn)行一式三份實(shí)驗(yàn)獲得的平均值±S.D.。圖8顯示了在培養(yǎng)基中用0.5niM游離^B-DNJ處理后與2G12的gpl20結(jié)合喪失(1.2±0.1%結(jié)合)，同時(shí)保持與b12的結(jié)合為100%。通過脂質(zhì)體介導(dǎo)的最終濃度為7.5nM的；\B-DNJ的遞送導(dǎo)致與2G12的結(jié)合為9.8±4.8%，對(duì)b12結(jié)合無顯著影響(96.3±3.2%),顯示了由于細(xì)胞內(nèi)遞送所致的IC90有60，000到70，000倍增強(qiáng)。免疫增強(qiáng)肽的脂質(zhì)體遞送本發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)了通過使抗原呈遞細(xì)胞接觸組合物可以增加由主要組織相容性分子1類進(jìn)行的呈遞，所述組合物包含pH44敏感脂質(zhì)體如包含D0PE、CHEMS和/或PEG-PE脂質(zhì)的脂質(zhì)體以及包封在脂質(zhì)體內(nèi)的抗原諸如免疫增強(qiáng)肽。這種接觸可以是給藥該組合物至包含抗原呈遞細(xì)胞的受試者的結(jié)果。組合物給藥至受試者可用于給受試者接種。免疫增強(qiáng)肽的實(shí)例可以為酪氨酸酶肽-YMDGTMSQV，其被發(fā)現(xiàn)是由在表達(dá)全長(zhǎng)酪氨酸酶的細(xì)胞上的主要組織相容性分子1類HLA-A0201所呈遞。其是由對(duì)應(yīng)于酪氨酸酶氨基酸369-377并包含N-連接的糖基化位點(diǎn)6的酪氨酸酶肽YMNGTMSQV產(chǎn)生的轉(zhuǎn)化肽。盡管本發(fā)明不受其操作理論的約束，但是轉(zhuǎn)化肽可能出現(xiàn)，這是由于從細(xì)胞溶質(zhì)中通過酶肽N-聚糖酶的去糖基化的結(jié)果所致。N-聚糖酶肽與將肽轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)入ER內(nèi)的抗原加工相關(guān)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(TAP)結(jié)合。YMDGTMSQV肽被包封進(jìn)入DCPP脂質(zhì)體使肽的ER遞送降低了一個(gè)數(shù)量級(jí)。使用游離的AB-DNJ和用脂質(zhì)體包封的^B-DNJ治療被HIV-1感染的PBMCs。使用植物血細(xì)胞凝集素(PHA)活化的外周血單核細(xì)胞(PBMCs)作為指示劑細(xì)胞并測(cè)定作為終點(diǎn)的p24抗原生成來評(píng)價(jià)由AB-DNJ實(shí)現(xiàn)的得自被感染人的HIV-1初次分離物的清除率。從四個(gè)正常的(未感染)供體中分離了PBMCs，混合并用PHA(5ng/ml)刺激48小時(shí)，然后用PHA+白細(xì)胞介素-2(40U/ml)在RPMI1640培養(yǎng)基中刺激72小時(shí)，該RPMI1640medium包含10%的熱失活胎牛血清(FBS)，100U的青霉素/ml，100jig的鏈霉素/ml，和2mML-谷氨酰胺。所有的實(shí)驗(yàn)在96孔微量滴定板中進(jìn)行。為了感染細(xì)胞，向每孔加入100pl的PHA活化的PBMCs(5x105/ml)，然后加入等體積的包含100的50。/。組織培養(yǎng)感染劑量(TCID50)的初次分離原液。在過夜培養(yǎng)后，細(xì)胞用組織培養(yǎng)基洗滌三次，最后被重懸在包含適當(dāng)?shù)闹|(zhì)體治療劑或游離AB-DNJ的培養(yǎng)基中。第7天，使用約10-30°/。的包含被分泌的HIV-1病毒粒子的培養(yǎng)基體積感染原初PBMCs用于第二輪感染和治療(轉(zhuǎn)移的體積經(jīng)過計(jì)算為該分離物的未經(jīng)治療的對(duì)照以TCID50-IOO感染原初細(xì)胞所必需的體積)。在4周內(nèi)進(jìn)行多輪原初細(xì)胞的治療和感染，并且在每個(gè)時(shí)間點(diǎn)分離包含被分泌的病毒粒子的細(xì)胞上清液并在捕獲ELISAs中用于測(cè)定p24濃度(分泌的量度)。另外，在整個(gè)治療期間在每個(gè)時(shí)間點(diǎn)分離的上清液用于感染原初細(xì)胞(TCID50=IOO)達(dá)二周，沒有進(jìn)一步的處理，這便于觀察病毒活性的反彈。用8個(gè)初次分離物(列于表3中)感染的PBMCs在游離A6-DNJ(濃度為0-1mM)或用脂質(zhì)體包封的iVB-DNJ(0-3.75^M，最終脂質(zhì)濃度為50pM)存在的條件下進(jìn)行培養(yǎng)。表3.在試驗(yàn)中使用的HIV-1初次分離物的列表，包括進(jìn)化枝鑒定和向性。<table>tableseeoriginaldocumentpage46</column></row><table>從用游離^B-DNJ處理的PBMCs獲得的結(jié)果證實(shí)了抗HIV-1的抗病毒濃度為500pM。這是在四周處理內(nèi)在所有分離物中清除病毒活性的最低濃度(圖9a)。所有分離物顯示病毒活性至少有90%降低(IC90)，暗示了y\B-DNJ能有效地靶向于大范圍的HIV-1。游離旭-DNJ對(duì)病毒分泌的效果可從第一周處理后獲得的p24量度來確定。在最高濃度的AB-DNJ下，在培養(yǎng)基中為1mM的游離的；VB-DNJ，大多數(shù)分離物作出病毒分泌有約30-40%降低的反應(yīng)(圖9b)。特別感興趣的是，三個(gè)進(jìn)化枝b分離物89.6，JR-FL和92HT599,其中分泌降低了50%，并且在89.6的情況中，降低了75°/。。93IN101,作為進(jìn)化枝c分離物，也具有50%的分泌降低。AB-DNJ對(duì)不同的初次分離物的抗病毒活性的程度(藥物敏感性)從三個(gè)輪的處理后從p24量度來評(píng)價(jià)。在該點(diǎn)，觀察了每個(gè)分離物的p24分泌的連續(xù)曲線，并因此可計(jì)算IC50和IC90。供試的8個(gè)分離物的數(shù)據(jù)如圖9c所示，其中6個(gè)分離物的IC50和IC90經(jīng)計(jì)算分別為400pM和500pM，以及兩個(gè)分離物的IC50和IC90分別為250pM和375pM。兩個(gè)顯示對(duì)AB-DNJ處理最敏感的分離物89.6和93BR3020也是被包括在這些試驗(yàn)中的已知顯示雙向性(dualtropism)的僅有的分離物，而其它6個(gè)分離物為R5或者X4(單)向性。在同樣的8個(gè)分離物中測(cè)量了被包封在DOPE:CHEMS:PEG-PE脂質(zhì)體內(nèi)的AB-DNJ的抗病毒活性，以測(cè)定在細(xì)胞內(nèi)遞送條件下的增強(qiáng)的活性。圖10顯示在供試的8個(gè)不同的分離物(曲線A-H)中使用最終濃度為0-3.75的W-DNJ處理4周內(nèi)p24分泌的水平。當(dāng)將病毒減少與使用500^M游離W-DNJ的結(jié)果相比時(shí)，所有的分離物顯示在3，75-37.5nM的最終W-DNJ濃度的條件下具有類似的抗病毒活性模式，有約104-105倍的增強(qiáng)。另外，在不同分離物中存在對(duì)使用^B-DNJ脂質(zhì)體進(jìn)行治療的敏感性的差異，因?yàn)槌怂幬锩舾行灾獯嬖谛碌淖兞浚缰|(zhì)體攝取速率和細(xì)胞內(nèi)遞送效率。使用sCD4-脂質(zhì)體和免疫脂質(zhì)體靶向于被HIV-l感染的PBMCs使用可溶性CD4分子(sCD4)和若干已知與gpl20/gp41復(fù)合物結(jié)合的單克隆抗體在9個(gè)不同的初次分離物中評(píng)價(jià)了通過使脂質(zhì)體靶向于在被HIV-l感染的細(xì)胞的表面上表達(dá)的gpl20/gp41復(fù)合物進(jìn)行的細(xì)胞攝取的增加。sCD4-脂質(zhì)體結(jié)合物如下生成首先將sCD4的伯胺與N-琥珀酰亞胺基-S-乙?；虼狨テ鸹瘜W(xué)反應(yīng)以得到被保護(hù)的巰基，然后通過使用鹽酸羥胺進(jìn)行脫乙?；饔眠M(jìn)行脫保護(hù)。免疫脂質(zhì)體如下制備首先用2-巰基乙醇胺還原IgG分子，該2-巰基乙醇胺試劑特異性還原在兩個(gè)重鏈之間的絞鏈區(qū)內(nèi)的二硫鍵，得到兩個(gè)各自包含游離巰基的半個(gè)IgG分子。脂質(zhì)體的制備如前所述，然而，將包含馬來酰亞胺基的PE脂質(zhì)(MCC-PE)并入雙分子層內(nèi)以便最終的脂質(zhì)體組成為DOPE:CHEMS:PEG-PE:MCC-PE:Rh-PE(摩爾比為476:4:0.3:0.3:0.1)。未被保護(hù)的sCD4分子和被還原的IgG分子與脂質(zhì)體在室溫下放置溫育過夜。使用空間排阻色i普法將脂質(zhì)體從游離的sCD4或IgG純化出來。將熒光標(biāo)記脂質(zhì)(Rh-PE)并入脂質(zhì)體雙分子層內(nèi)，并在溫育后從在細(xì)胞中檢測(cè)到的熒光的增加計(jì)算增加的胞吞作用。如前所述將PBMCs純化、培養(yǎng)和在96孔微量滴定板中進(jìn)行感染。將PBMCs與初次分離物(TCIC50-100)放置溫育5天，然后細(xì)胞用組織培養(yǎng)基洗滌三次，并最終重懸在包含適當(dāng)?shù)闹|(zhì)體治療劑(最終脂質(zhì)濃度為50pM)的培養(yǎng)基中。24小時(shí)溫育后，分離PBMCs，用200plPBS洗滌兩次，并重懸在50pl的含1°/。(vol/vol)Empigen的PBS中。在入ex-520nm和人em-590nm下測(cè)量熒光。在研究中引入6個(gè)單獨(dú)的單克隆抗體IgGsb6、b12、2G12、2F5、X5和4E10，然而，b6和4E10不能結(jié)合脂質(zhì)體，因?yàn)樗鼈兌家鹬|(zhì)聚集。圖11表示使用包封有1mMDNJ的sCD4-脂質(zhì)體和bl2免疫脂質(zhì)體、2G12免疫脂質(zhì)體、2F5免疫脂質(zhì)體和X5免疫脂質(zhì)體獲得的結(jié)果，該結(jié)果用相對(duì)于對(duì)照的脂質(zhì)體攝取的百分?jǐn)?shù)表示。對(duì)于每個(gè)感染，在靶分子和作為唯一對(duì)照的脂質(zhì)體之間的攝取有顯著差異(P<0.0001)。與sCD4結(jié)合的脂質(zhì)體能靶向供試的所有9個(gè)分離物并導(dǎo)致相對(duì)于作為唯一對(duì)照的脂質(zhì)體細(xì)胞攝取顯著增加。2F5免疫脂質(zhì)體和b12免疫脂質(zhì)體在分別用5個(gè)和6個(gè)不同的初次分離物感染的PBMCs中能增加脂質(zhì)體攝取。2G12免疫脂質(zhì)體和X5免疫脂質(zhì)體不乾向于供試的任何初次分離物，并且沒有靶分子通過非特異性相互作用引起顯著的脂質(zhì)體攝取。因此，sCD4-脂質(zhì)體可能是用于使脂質(zhì)體靶向于被HIV感染的細(xì)胞的最好的分子。不僅sCD4成功地靼向于大范圍的HIV-1初次分離物，而且sCD4便于經(jīng)由受體介導(dǎo)的胞吞作用增加在被感染細(xì)胞中脂質(zhì)體的攝取。使用被sCD4-脂質(zhì)體包封的AB-DNJ治療HIV-1PBMCs因?yàn)閟CD4-脂質(zhì)體經(jīng)顯示具有最寬泛的靶向能力，因此該脂質(zhì)體制劑用于p24分泌試驗(yàn)中，以將AB-DNJ的抗病毒活性與使用棵脂質(zhì)體或游離遞送所觀察到的抗病毒活性比較。使用最終AB-DNJ濃度為0-375nM進(jìn)行了包括相同組的8個(gè)初次分離物的試驗(yàn)。結(jié)果如圖12所示，其中sCD4-脂質(zhì)體經(jīng)顯示提供了另外的中和能力，以便所有的sCD4-脂質(zhì)體治療，甚至是不包含遡-DNJ那些sCD4-脂質(zhì)體處理，完全中和每個(gè)初次分離物(曲線A-H)。HIV-1病毒活性的反彈表4總結(jié)了表示在撤除所有的朋-DNJ處理后病毒活性反彈的數(shù)據(jù)。在所有的情況下，當(dāng)病毒活性被降低至O(或接近于0)時(shí)，當(dāng)撤除處理達(dá)兩周時(shí)不發(fā)生反彈。表4.使用在培養(yǎng)基中以游離方式、在脂質(zhì)體內(nèi)或在sCD4-脂質(zhì)體內(nèi)遞送的y\6-DNJ處理4周內(nèi)，從被HIV-1感染的PBMCs中獲得的所有的平均p24分泌數(shù)據(jù)。為了測(cè)量病毒活性的反彈(-rb)，在測(cè)量p24分泌之前撤除處理達(dá)兩周。p24分泌％W-而第1第1第2第2第3第3第4第4處理(uM)周周-rb周周-rb周周-rb周周-rbHIV-1分離^吻UG92021游離0100100100100100100100100游離250901108310188917785游離500859856622327819游離1000617221195300脂質(zhì)體09297859782918195脂質(zhì)體0.00037579101766938413544脂質(zhì)體0.0037561804357112229脂質(zhì)體0.03754455314551225脂質(zhì)體0.3754047510100脂質(zhì)體3.752641000001sCD4-脂質(zhì)0761520D10049體sCD4-脂質(zhì)體sCD4-脂質(zhì)體sCD4-脂質(zhì)體sCD4-脂質(zhì)體離離離離脂質(zhì)體脂質(zhì)體脂質(zhì)體脂質(zhì)體脂質(zhì)體脂質(zhì)體sCD4-脂質(zhì)體sCD4-脂質(zhì)體sCD4-脂質(zhì)體sCD4-脂質(zhì)體sCD4-脂質(zhì)體游離游離0.00037559223210000.0037517131001000.037524110000000.37518160000007:UG920460100100100100100100100100250919911592919479895007975394310150010006464152131000103104951031029997960.00037578977782627859670.00375588257311123850.037540643436711110.37524271400003.75229010000074295310000.00037543224000000.0037516121100000.037521140001000.3751515000000:HT9259901001001001001001001001002509993849988958188游游游游50<table>tableseeoriginaldocumentpage51</column></row><table>64276537132031910100100100100988179703635168252110938993928583473335551212243242171000840054522213140013200710042001001001001001071041051016475249445695520010000000001001001001005473596620001000911018892425731271021000000100000001010000000000000001001001001008997939154021100sCD4-脂質(zhì)體sCD4-脂質(zhì)體sCD4-脂質(zhì)體0.003750.03750.375HIV-1分離物89.6sCD4-脂質(zhì)體sCD4-脂質(zhì)體sCD4-脂質(zhì)體sCD4-脂質(zhì)體sCD4-脂質(zhì)體00.0003750.003750.03750.375HIV-l分離物JR-FL00.0003750.003750.03750.3753.75離離離離游游游游離離離離游游游游體體體體體體旨旨旨旨旨旨<table>tableseeoriginaldocumentpage53</column></row><table>體sCD4-脂質(zhì)體0.37523HIV-1分離物97USNG30游離0100100100100100100100100游離250961121021091009795101游離500748245198731游離10004653930000脂質(zhì)體0939998104971019395脂質(zhì)體0.0003758393807977816277脂質(zhì)體0.00375475832462832132脂質(zhì)體0.0375483611991163脂質(zhì)體0.3753413110000脂質(zhì)體3.752011000000sCD4-脂質(zhì)體07355261515410sCD4-脂質(zhì)體0,0003754114593100sCD4-脂質(zhì)體0,00375208000100sCD4-脂質(zhì)體0.0375173000000SCD4-脂質(zhì)體0.375234100000將磷脂酰肌醇并入DOPE:CHEMS脂質(zhì)體內(nèi)將從牛肝細(xì)胞純化得到的磷脂酰肌醇(PI)以最終的摩爾濃度為10-30%并入先前進(jìn)行試驗(yàn)的脂質(zhì)體組成DOPE:CHEMS:Rh-PE中。DOPC:CHEMS:Rh-PE脂質(zhì)體作為陰性對(duì)照被包含在該研究中。脂質(zhì)體的制備如前所述。將MDBK細(xì)胞生長(zhǎng)至50%匯合，然后培養(yǎng)基被交換并用包含最終脂質(zhì)濃度為100的脂質(zhì)體的新鮮培養(yǎng)基替換。在15分鐘培養(yǎng)后，除去脂質(zhì)體，細(xì)胞在PBS中洗滌兩次。細(xì)胞在新鮮的培養(yǎng)基中培養(yǎng)0、1、2、5、24或48小時(shí)，然后54將細(xì)胞固定的2.5%多聚甲醛中并在熒光顯微鏡下目測(cè)。在目測(cè)分析前用DAPI將細(xì)胞染色。圖13顯示了典型的熒光圖像，在每個(gè)脂質(zhì)體制劑用MDBK細(xì)胞進(jìn)行15分鐘脈沖后的時(shí)間點(diǎn)0、1、2、5、"和48小時(shí)取得圖像。結(jié)果顯示包含最終濃度為10到30%的PI脂質(zhì)的脂質(zhì)體在細(xì)胞內(nèi)具有增加的生命期，這意味著經(jīng)由這種方法被遞送的脂質(zhì)更有效地保留在細(xì)胞內(nèi)，或者說，更少地被有效降解。在DOPE:CHEMS:Rh-PE脂質(zhì)體與MDBK細(xì)胞培養(yǎng)后取得的熒光圖像顯示了這些脂質(zhì)主要在5小時(shí)到24小時(shí)之間的某時(shí)發(fā)生降解，并且在48小時(shí)前完全降解。在48小時(shí)后，包含PI的脂質(zhì)體在被處理細(xì)胞中仍然很明顯，并且觀察到更加彌散的Rh-PE圖形。這一結(jié)果表明了在該時(shí)間點(diǎn)大多數(shù)脂質(zhì)被并入細(xì)胞膜內(nèi)并且不再濃集在小泡中(點(diǎn)狀的熒光圖形)。將DOPE:CHEMS脂質(zhì)體并入ER-出芽病毒粒子的被膜內(nèi)為了研究脂質(zhì)體是否能與細(xì)胞膜如ER融合，使用包含Rh-PE的脂質(zhì)體來監(jiān)控被從ER膜出芽的病毒粒子的攝入。將持續(xù)地感染有致細(xì)胞病變BVDV(NADL，MOI=0.01)的MDBK細(xì)胞和原初(未被感染的)MDBK在DOPE:CHEMS:Rh-PE、DOPE:CHEMS:PI:Rh-PE或DOPC:CHEMS:Rh-PE脂質(zhì)體存在的條件下在最終脂質(zhì)濃度為50juM下培養(yǎng)兩天。培養(yǎng)后，除去包含脂質(zhì)體的培養(yǎng)基，細(xì)胞在PBS中洗滌兩次，然后添加新鮮的培養(yǎng)基，并將細(xì)胞另外培養(yǎng)三天。三天后，取得每組被處理細(xì)胞(被感染以及未被感染)的上清液樣品，并使用設(shè)定在入m=550nm和入e=590nm下的熒光分光計(jì)進(jìn)行熒光測(cè)量。一式三份進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果表示為三次讀數(shù)的平均值。與用相同脂質(zhì)體制劑處理的未被感染的細(xì)胞相比，在被感染細(xì)胞的上清液中的熒光的任何增加是由于在其被膜內(nèi)包含Rh-PE脂質(zhì)的病毒粒子的分泌所致。圖14顯示了使用三個(gè)不同的脂質(zhì)組成獲得的結(jié)果，并且這些數(shù)據(jù)表明包含DOPE(PE)的脂質(zhì)體能并入ER膜內(nèi)，并隨后并入出芽的病毒被膜。得自用DOPE脂質(zhì)體處理的被感染細(xì)胞的上清液全部顯示了與未被感染細(xì)胞相比有熒光的顯著增55加。用作陰性對(duì)照的包含DOPC(PC)的脂質(zhì)體(不靶向于ER)在被感染樣品和未被感染樣品之間沒有顯示熒光差異。令人驚訝的并且根據(jù)圖13中的數(shù)據(jù)，包含作為脂質(zhì)組成的一部分的10-30%PI的脂質(zhì)體能以相對(duì)于不含PI的脂質(zhì)體幾乎為5倍的更有效方式并入病毒被膜內(nèi)。這表明PI引起脂質(zhì)體被ER膜攝取的增加。該結(jié)果可提供對(duì)于治療從ER出芽的病毒如BVDV、HCV和HBV的治療的推斷性結(jié)論。在開發(fā)使用ER靼向脂質(zhì)體的抗病毒療法中的下一步可以是將抗病毒蛋白并入脂質(zhì)體的脂質(zhì)雙分子層內(nèi)用于遞送進(jìn)入ER膜內(nèi)?？共《镜鞍装ǖ幌抻谝阎c病毒被膜蛋白結(jié)合的受體和/或病毒被膜蛋白的突變形式和/或已知干擾病毒被膜相互作用的蛋白質(zhì)。將抗病毒蛋白并入包封有抗病毒藥物的ER耙向脂質(zhì)體制劑中可以提供三種單獨(dú)的抗病毒策略的組合，三種策略可協(xié)同地起作用以降低病毒感染性l-直接遞送脂質(zhì)進(jìn)入ER膜內(nèi)，當(dāng)ER膜被并入病毒被膜時(shí)將降低病毒感染性，2-直接遞送蛋白質(zhì)進(jìn)入ER膜內(nèi)，ER膜將被并入出芽粒子的病毒被膜內(nèi)并降低感染性，3-直接遞送抗病毒藥進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)隔室內(nèi)。盡管上文說明了具體的優(yōu)選方案，但是顯然本發(fā)明不限于這些方案。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可對(duì)所公開的實(shí)施方案作出多種修改，并且這些修改處在本發(fā)明的范圍內(nèi)。本說明書中引述的所有的公開、專利申請(qǐng)和專利全文并入本文作為參考。5權(quán)利要求1.治療病毒感染的方法，該方法包括給藥組合物至有此需要的宿主，該組合物包括(a)包含DOPE和CHEMS脂質(zhì)的脂質(zhì)體，和(b)包封在脂質(zhì)體內(nèi)的一種或多種化合物，其中病毒感染是ER膜出芽病毒感染或質(zhì)膜出芽病毒感染；其中一種或多種化合物包括N-丁基脫氧野尻霉素(NB-DNJ)，且其中所述給藥導(dǎo)致遞送一種或多種化合物進(jìn)入感染有引發(fā)感染的病毒的細(xì)胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)以及導(dǎo)致將脂質(zhì)體的一種或多種脂質(zhì)并入細(xì)胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜內(nèi)。2.權(quán)利要求1的方法，其中感染是ER膜出芽病毒感染。3.權(quán)利要求2的方法，其中感染是HBV、HCV或BVDV感染。4.權(quán)利要求l的方法，其中感染是質(zhì)膜出芽病毒感染。5.權(quán)利要求4的方法，其中感染是HIV感染。6.權(quán)利要求1的方法，其中脂質(zhì)體是DC脂質(zhì)體。7.權(quán)利要求l的方法，其中脂質(zhì)體進(jìn)一步包含PEG-PE脂質(zhì)。8.權(quán)利要求7的方法，其中脂質(zhì)體是DCPP脂質(zhì)體。9.權(quán)利要求l的方法，其中脂質(zhì)體進(jìn)一步包含PI脂質(zhì)。10.權(quán)利要求9的方法，其中脂質(zhì)體內(nèi)PI脂質(zhì)的摩爾濃度為5到50%。11.權(quán)利要求10的方法，其中脂質(zhì)體內(nèi)PI脂質(zhì)的摩爾濃度為10到30%。12.權(quán)利要求l的方法，其中一種或多種化合物進(jìn)一步包含核苷類/核苷酸類抗病毒藥，免疫刺激劑/免疫調(diào)節(jié)劑，或其組合。13.權(quán)利要求12的方法，其中核苷類/核苷酸類抗病毒藥是利巴韋林且免疫刺激劑/免疫調(diào)節(jié)劑是干擾素a。14.權(quán)利要求l的方法，其中一種或多種化合物進(jìn)一步包含至少一種抗HIV化合物。15.權(quán)利要求1的方法，其中宿主是人。16.治療病毒感染的方法，該方法包括給藥組合物至有此需要的宿主，該組合物包括(a)包含D0PE、CHEMS和PEG-PE脂質(zhì)的脂質(zhì)體，和(b)包封在脂質(zhì)體內(nèi)的一種或多種化合物，其中一種或多種化合物包括N-丁基脫氧野尻霉素UB-DNJ)。17.權(quán)利要求16的方法，其中病毒是肝炎病毒。18.權(quán)利要求17的方法，其中病毒是乙型肝炎病毒。19.權(quán)利要求17的方法，其中病毒是丙型肝炎病毒。20.權(quán)利要求17的方法，其中病毒是BVDV病毒。21,權(quán)利要求20的方法，其中病毒是BVDV病毒的ncp株。22.權(quán)利要求20的方法，其中病毒是BVDV病毒的cp林。23.權(quán)利要求18的方法，其中一種或多種化合物進(jìn)一步包含核苷類/核苷酸類抗病毒藥，免疫刺激劑/免疫調(diào)節(jié)劑，或其組合。24.權(quán)利要求23的方法，其中核苷類/核苷酸類抗病毒藥是利巴韋林且免疫刺激劑/免疫調(diào)節(jié)劑是干擾素。25.權(quán)利要求18的方法，其中病毒是HIV病毒。26.權(quán)利要求25的方法，其中HIV病毒選自:92UG037,92RW021,JR-FL，92HT599,89.6，93IN101,97USNG30,92UG021,92UG046和93BR020初次HIV-1分離物。27.權(quán)利要求25的方法，其中一種或多種化合物進(jìn)一步包含一種或多種抗HIV藥。28.權(quán)利要求18的方法，其中宿主是人。29.—種方法，包括給藥組合物至有此需要的宿主，該組合物包括(a)pH敏感脂質(zhì)體，和(b)包封在脂質(zhì)體內(nèi)的抗原，其中給藥導(dǎo)致通過抗原遞呈細(xì)胞的主要組織相容性分子1類進(jìn)行的抗原遞呈增加。30.權(quán)利要求29的方法，其中抗原是免疫增強(qiáng)肽。31.權(quán)利要求30的方法，其中肽是YMDGTMSQV肽。32.權(quán)利要求29的方法，其中所述脂質(zhì)體包含DOPE和CHEMS。33.權(quán)利要求32的方法，其中所述脂質(zhì)體進(jìn)一步包含PEG-PE脂質(zhì)。34，權(quán)利要求29的方法，其中宿主是人。35.治療HIV感染的方法，該方法包括給藥組合物至有此需要的宿主，該組合物包含與gpl20/gp41復(fù)合物靶向部分結(jié)合的脂質(zhì)體。36.權(quán)利要求35的方法，其中靶向部分包括sCD4分子。37.權(quán)利要求35的方法，其中靶向部分包括單克隆抗體。38.權(quán)利要求37的方法，其中抗體是IgG2F5或IgGb12抗體。39.權(quán)利要求35的方法，其中HIV感染由選自以下的HIV-1初次分離物引起92UG037,92RW021,JR-FL,92HT599,89.6,93IN101,97USNG30,92UG021,92UG046和93BR020初次HIV-1分離物。40.權(quán)利要求35的方法，其中脂質(zhì)體包含DOPE和CHEMS脂質(zhì)。41.權(quán)利要求40的方法，其中脂質(zhì)體進(jìn)一步包含PEG-PE脂質(zhì)。42.權(quán)利要求40的方法，其中脂質(zhì)體進(jìn)一步包含MCC-PE脂質(zhì)。43.權(quán)利要求40的方法，其中脂質(zhì)體進(jìn)一步包含PI脂質(zhì)。44.權(quán)利要求35的方法，其中組合物進(jìn)一步包含包封在脂質(zhì)體內(nèi)的a葡糖苷酶抑制劑。45.權(quán)利要求44的方法，其中抑制劑包括AB-DNJ。46.權(quán)利要求35的方法，其中宿主是人。47.—種組合物，其包括包含DOPE、CHEMS和PEG-PE脂質(zhì)的脂質(zhì)體,和包封在脂質(zhì)體內(nèi)的^-丁基脫氧野尻霉素(W-DNJ)。48.權(quán)利要求47的組合物，其中脂質(zhì)體是DCPP脂質(zhì)體。49.權(quán)利要求47的組合物，進(jìn)一步包含核苷類/核苷酸類抗病毒藥，免疫刺激劑/免疫調(diào)節(jié)劑，或其組合。50.權(quán)利要求49的組合物，其中核苷類/核苷酸類抗病毒藥是利巴韋林且免疫刺激劑/免疫調(diào)節(jié)劑是千擾素。51.權(quán)利要求47的組合物，進(jìn)一步包含一種或多種抗HIV藥。52.—種組合物，其包括pH敏感脂質(zhì)體和包封在脂質(zhì)體內(nèi)的抗原。53.權(quán)利要求52的組合物，其中抗原包括免疫增強(qiáng)肽。54.權(quán)利要求52的組合物，其中脂質(zhì)體包含DOPE和CHEMS脂質(zhì)。55.權(quán)利要求54的組合物，其中脂質(zhì)體進(jìn)一步包含PEG-PE脂質(zhì)。56.權(quán)利要求54的組合物，其中脂質(zhì)體進(jìn)一步包含PI脂質(zhì)。57.—種組合物，其包括與gpl20/gp41復(fù)合物靼向部分結(jié)合的脂質(zhì)體。58.權(quán)利要求57的組合物，其中靶向部分包括sCD4分子。59.權(quán)利要求57的組合物，其中靶向部分包括單克隆抗體。60.權(quán)利要求57的組合物，其中脂質(zhì)體包含DOPE和CHEMS脂質(zhì)。61.權(quán)利要求60的組合物，其中脂質(zhì)體進(jìn)一步包含PEG-PE脂質(zhì)。62.權(quán)利要求60的組合物，其中脂質(zhì)體進(jìn)一步包含MCC-PE脂質(zhì)。63.權(quán)利要求60的組合物，其中脂質(zhì)體進(jìn)一步包含PI脂質(zhì)。64.權(quán)利要求63的組合物，其中脂質(zhì)體內(nèi)PI脂質(zhì)的摩爾濃度為約IO闊約30%。65.權(quán)利要求57的組合物，進(jìn)一步包含包封在脂質(zhì)體內(nèi)的a-葡糖苷酶抑制劑。66.權(quán)利要求65的組合物，其中a-葡糖苷酶抑制劑包括W-DNJ。67.治療病毒感染的方法，該方法包括給藥組合物至有此需要的宿主，該組合物包括(a)包含PI脂質(zhì)的脂質(zhì)體，和(b)包封在脂質(zhì)體內(nèi)的至少一種抗病毒化合物，其中病毒感染是ER膜病毒出芽感染；且其中所述接觸導(dǎo)致遞送至少一種化合物進(jìn)入感染有引發(fā)感染的病毒的細(xì)胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)以及導(dǎo)致將脂質(zhì)體的一種或多種脂質(zhì)并入細(xì)胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜內(nèi)。68.權(quán)利要求67的方法，其中脂質(zhì)體進(jìn)一步包含DOPE和CHEMS脂質(zhì)。69.權(quán)利要求67的方法，其中脂質(zhì)體內(nèi)PI脂質(zhì)的摩爾濃度為5到50%。70.權(quán)利要求69的方法，其中脂質(zhì)體內(nèi)PI脂質(zhì)的摩爾濃度為10到30%。71.權(quán)利要求67的方法，其中至少一種抗病毒化合物包括a-葡糖苷酶抑制劑。72.權(quán)利要求71的方法，其中a-葡糖苷酶抑制劑包括W-DNJ。73.權(quán)利要求67的方法，其中宿主是人。74.—種組合物，其包括包含PI脂質(zhì)的脂質(zhì)體，和包封在脂質(zhì)體內(nèi)的至少一種抗病毒化合物。75.權(quán)利要求74的組合物，其中脂質(zhì)體進(jìn)一步包含DOPE和CHEMS脂質(zhì)。76.權(quán)利要求74的組合物，其中脂質(zhì)體內(nèi)PI脂質(zhì)的摩爾濃度為5到50%。77.權(quán)利要求76的組合物，其中脂質(zhì)體內(nèi)PI脂質(zhì)的摩爾濃度為10到30%。78.權(quán)利要求74的組合物，其中至少一種抗病毒化合物包括a-葡糖苷酶抑制劑。79.權(quán)利要求78的組合物，其中a-葡糖苷酶抑制劑包括iVB-DNJ。80.治療病毒感染的方法，該方法包括給藥組合物至有此需要的宿主，該組合物包括(a)包含PI脂質(zhì)的脂質(zhì)體，和(b)嵌入脂質(zhì)體的脂質(zhì)層內(nèi)的至少一種抗病毒蛋白，其中所述接觸導(dǎo)致將脂質(zhì)體的一種或多種脂質(zhì)并入感染有引發(fā)感染的病毒的細(xì)胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜內(nèi)。81.權(quán)利要求80的方法，其中脂質(zhì)體進(jìn)一步包含DOPE和CHEMS脂質(zhì)。82.權(quán)利要求81的方法，其中脂質(zhì)體進(jìn)一步包含PEG-PE脂質(zhì)。83.權(quán)利要求80的方法，其中脂質(zhì)體內(nèi)PI脂質(zhì)的摩爾濃度為5到50%。84.權(quán)利要求83的方法，其中脂質(zhì)體內(nèi)PI脂質(zhì)的摩爾濃度為10到30%。85.權(quán)利要求80的方法，其中組合物進(jìn)一步包括(c)包封在脂質(zhì)體內(nèi)的至少一種抗病毒化合物并且其中所述接觸導(dǎo)致遞送至少一種化合物進(jìn)入細(xì)胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)。86.權(quán)利要求85的方法，其中至少一種抗病毒化合物包括a-葡糖苷酶抑制劑。87.權(quán)利要求86的方法，其中a-葡糖苷酶抑制劑包括W-DNJ。88.權(quán)利要求80的方法，其中至少一種抗病毒蛋白選自病毒受體，病毒被膜蛋白的突變形式和干擾病毒被膜相互作用的蛋白質(zhì)。89.權(quán)利要求80的方法，其中病毒感染是ER膜出芽病毒感染。90.權(quán)利要求89的方法，其中ER出芽病毒感染是HBV、HCV或BVDV感染。91.權(quán)利要求80的方法，其中感染是質(zhì)膜出芽感染。92.權(quán)利要求91的方法，其中質(zhì)膜出芽感染是HIV感染。93.權(quán)利要求80的方法，其中宿主是人。94.一種組合物，其包括(a)包含PI脂質(zhì)的脂質(zhì)體，和(b)嵌入脂質(zhì)體的脂質(zhì)層內(nèi)的至少一種抗病毒蛋白。95.權(quán)利要求94的組合物，其中脂質(zhì)體進(jìn)一步包含DOPE和CHEMS脂質(zhì)。96.權(quán)利要求95的組合物，其中脂質(zhì)體進(jìn)一步包含PEG-PE脂質(zhì)。97.權(quán)利要求94的組合物，其中脂質(zhì)體內(nèi)PI脂質(zhì)的摩爾濃度為5到50%。98.權(quán)利要求97的組合物，其中脂質(zhì)體內(nèi)PI脂質(zhì)的摩爾濃度為10到30%。99.權(quán)利要求94的組合物，其中組合物進(jìn)一步包含(c)包封在脂質(zhì)體內(nèi)的至少一種抗病毒化合物。100.權(quán)利要求99的組合物，其中至少一種抗病毒化合物包括a-葡糖苷酶抑制劑。101.權(quán)利要求100的組合物，其中a-葡糖苷酶抑制劑包括102.權(quán)利要求94的組合物，其中至少一種抗病毒蛋白選自病毒受體，病毒被膜蛋白的突變形式和干擾病毒被膜相互作用的蛋白質(zhì)。103.—種組合物，其包括包含PI脂質(zhì)的脂質(zhì)體，和包封在脂質(zhì)體內(nèi)的至少一種治療劑。104.治療或預(yù)防生理學(xué)病況的方法，該方法包括給藥組合物至有此需要的受試者，該組合物包括包含PI脂質(zhì)的脂質(zhì)體和包封在脂質(zhì)體內(nèi)的至少一種治療劑。105.—種組合物，其包括包含PI脂質(zhì)的脂質(zhì)體，和嵌入脂質(zhì)體的脂質(zhì)雙分子層內(nèi)的至少一種蛋白質(zhì)。106.治療或預(yù)防生理學(xué)病況的方法，該方法包括給藥組合物至有此需要的受試者，該組合物包括包含PI脂質(zhì)的脂質(zhì)體和嵌入脂質(zhì)體的脂質(zhì)雙分子層內(nèi)的至少一種蛋白。全文摘要通過遞送pH敏感脂質(zhì)體直接進(jìn)入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(ER)膜可以治療病毒感染例如乙型肝炎(HBV)感染、丙型肝炎(HCV)感染和牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)感染。兩種示例性的脂質(zhì)體制劑是DOPE/CHEMS(DC脂質(zhì)體)和DOPE/CHEMS/PEG-PE(DCPP脂質(zhì)體)。DC和DCPP脂質(zhì)體可優(yōu)化N-丁基脫氧野尻霉素(NB-DNJ)的細(xì)胞內(nèi)遞送，并因此增加該亞氨基糖的體內(nèi)活性幾個(gè)數(shù)量級(jí)，并可用于與其它的治療劑例如干擾素和/或利巴韋林聯(lián)合使用。優(yōu)化的NB-DNJ直接釋放進(jìn)入ER內(nèi)還可用于其中NB-DNJ已知是有效的抗病毒劑的其它病毒如人類免疫缺陷病毒(HIV)的治療。文檔編號(hào)A61K38/08GK101557813SQ200780035259公開日2009年10月14日申請(qǐng)日期2007年8月2日優(yōu)先權(quán)日2006年8月2日發(fā)明者C·斯坎倫,N·尼奇塔-布蘭扎,N·齊茲曼,P·魯?shù)?R·A·德維克,S·佩特蘭斯庫,S·波洛克申請(qǐng)人:聯(lián)合治療公司